專利名稱：：丹參酮ⅱa靜脈乳劑在治療腦部疾病中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及丹參酮IIA靜脈乳劑在治療腦部疾病中的應(yīng)用，屬醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：乃參酮IIA(tanshinoneIIA)是中藥丹參(SalviamiltiorrhizaBunge)的主要有效成分，也是中國(guó)藥典2005年版一部收載的丹參藥材的指標(biāo)成分。丹參酮IIA具有廣泛的藥理活性，如保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞、抗心肌缺血、改善血液代謝、抗氧化、降低自由基水平、抗動(dòng)脈粥樣硬化、預(yù)防心絞痛與心肌梗塞等，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)丹參酮nA還具有保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞與抗腫瘤作用。丹參酮IIA為脂溶性成分，水中難溶，因此難以將其直接制備成可供臨床使用的注射液。20世紀(jì)70年代末錢名堃等人將其化學(xué)結(jié)構(gòu)改造成水溶性的丹參酮nA磺酸鈉(圖1)，解決了其水中難溶的問(wèn)題。此后上海制藥-廠將其研制成注射液，臨床上用于冠心病、心絞痛的輔助治療已近30年，與復(fù)方丹參注射液療效相似。在2002年丹參酮IIA磺酸鈉注射液i地標(biāo)升為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，2005年收入全國(guó)醫(yī)保目錄乙類(命名為丹參酮IIA注射劑，實(shí)應(yīng)為丹參酮IIA磺酸鈉注射液)，至今仍在應(yīng)用。顯而易見(jiàn)，丹參酮IIA磺酸鈉的臨床療效源自丹參酮IIA所具有的藥理活性。O丹參酮IIA:R=H丹參酮IIA磺酸鈉R=S03Na圖1丹參酮IIA與丹參酮I1A磺酸鈉的化學(xué)結(jié)構(gòu)式然而丹參酮IIA磺酸鈉注射液的穩(wěn)定性較差，熱壓滅菌后降解產(chǎn)物明顯增加，易導(dǎo)致不良反應(yīng)的發(fā)生，嚴(yán)重影響了該藥品使用的安全性和有效性。另一方面，特別應(yīng)值得注意的是丹參酮IIA磺酸鈉在化學(xué)結(jié)構(gòu)上并非丹參酮IIA的鹽形式。發(fā)明人經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，丹參酮IIA分子化學(xué)耦聯(lián)磺酸基團(tuán)改造成丹參酮IIA磺酸鈉后，由于磺酸基團(tuán)具有強(qiáng)吸電子性，不但嚴(yán)重影響了乃參酮IIA分子自身原有的抗氧化能力，從而顯著減弱了丹參酮IIA的藥理活性；而且丹參酮IIA磺酸鈉的極性較丹參酮IIA相比顯著增大，難以透過(guò)血腦屏障(BBB)，使其在腦部疾病的治療應(yīng)用方面受到限制。由此可見(jiàn)，丹參酮IIA磺酸鈉并非丹參酮IIA最理想的給藥形式。發(fā)明人經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，丹參酮IIA口服吸收差、首過(guò)效應(yīng)嚴(yán)重、生物利用度極低(23%);結(jié)合其適用于腦缺血等急癥治療的實(shí)際及其脂溶性特點(diǎn)，將其溶解于注射用油中，經(jīng)磷脂乳化分散.制備成亞微乳注射液，不僅可解決其水中難溶與靜脈注射的可行性問(wèn)題，而且可直接地利用丹參酮IIA的藥理活性充分發(fā)揮療效。據(jù)此，發(fā)明人優(yōu)選了丹參酮IIA靜脈乳劑的處方與制備工藝，于本發(fā)明前申請(qǐng)了藥用組合物專利(申請(qǐng)?zhí)朇N200610005271.1)。本發(fā)明是在上述發(fā)明的基礎(chǔ)上，通過(guò)動(dòng)物體內(nèi)分布及藥效學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)與丹參酮IIA磺酸鈉注射液相比，丹參酮IIA靜脈乳劑極易透過(guò)血腦屏障，可在更低劑量下達(dá)到治療腦部疾病的效果。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及丹參酮IIA靜脈乳劑在治療腦部疾病中的應(yīng)用。所述的腦部疾病包括缺血性腦血管疾病、出血性腦血管疾病、腦腫瘤。發(fā)明人經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)在體內(nèi)分布研究中，丹參酮IIA靜脈乳劑極易透過(guò)血腦屏障進(jìn)入腦組織，具有腦趨向分布特性；在藥效學(xué)研究中，丹參酮IIA靜脈乳劑對(duì)缺rfll性腦損傷、出血性腦損傷均具有顯著的治療作用；在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，丹參酮IIA靜脈乳劑對(duì)腦腫瘤細(xì)胞株具有明顯的抑制和殺傷作用。丹參酮1IA靜脈乳劑在治療腦部疾病中的藥效明顯優(yōu)于同劑量(摩爾量)的丹參酮IIA磺酸鈉注射液。參照《中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法》(陳奇主編，人民衛(wèi)生出版社出版)一書(shū)中第205頁(yè)所載"實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與人用藥量的換算"及靜脈脂肪乳劑的常規(guī)用量，發(fā)明人根據(jù)動(dòng)物i式驗(yàn)結(jié)果推算出了丹參酮IIA靜脈乳劑的臨床人用劑量，并將其作為權(quán)利要求的一部分。以下通過(guò)實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將其理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。其中試驗(yàn)例2和實(shí)施例14所述的丹參酮IIA靜脈乳劑均為試驗(yàn)例1所制得。試驗(yàn)例1丹參酮IIA靜脈乳劑的制備將12g注射用磷脂、3g帕洛沙姆188及22g注射用甘油溶解分散于700ml預(yù)熱至80°C的注射用水中，制備成均勻分散的水相；另取1000mg丹參酮IIA及300rng油酸加入200g預(yù)熱至8(TC的注射用油中，溶解完全后得油相；將油相緩慢加入高速攪拌(IOOOO轉(zhuǎn)/分鐘)的水相中，保持?jǐn)嚢?0分鐘，制備得橙黃色初乳；將初乳加注射用水至l(XX)ml，置高壓乳勻機(jī)內(nèi)勻化3次(5O150MPa)，充氮灌裝，滅菌，即得丹參酮IIA靜脈乳劑。試驗(yàn)例2丹參酮IIA靜脈乳劑與丹參酮IIA磺酸鈉注射液在動(dòng)物體內(nèi)的分布研究昆明種小鼠84只(體重1822g，雌雄各半)，隨機(jī)分為2組丹參酮nA靜脈乳劑組、丹參酮nA磺酸鈉注射液組(經(jīng)適當(dāng)稀釋后給藥，上海第一生化藥業(yè)有限公司牛產(chǎn)，下同)。按組別尾靜脈注射給藥，分別于給藥后5、15、30、60、120、240、480分鐘每組各取6只，取血、處死、取腦稱重，加等量生理鹽水勻漿，HPLC法測(cè)定血中及腦組織中藥物含量，結(jié)果見(jiàn)表1。表1丹參酮IIA靜脈乳劑與丹參酮IIA磺酸鈉注射液在小鼠體內(nèi)的分布<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>—:未檢出與丹參酮IIA磺酸鈉組比較"<0.05"P<0.01結(jié)果表明在本實(shí)驗(yàn)條件下，丹參酮IIA靜脈乳劑的生物利用度和腦靶向性明顯優(yōu)于同劑量(摩爾量)的丹參酮IIA磺酸鈉注射液。實(shí)施例1丹參酮IIA靜脈乳劑對(duì)大鼠腦缺血/再灌注損傷的治療作用SD大鼠24只(體重190230g，雌雄各半)，隨機(jī)分為4組(偽手術(shù)組、模型組、丹參酮IIA靜脈乳劑組、丹參酮IIA磺酸鈉注射液組)，參照Longa法制作右側(cè)大腦中動(dòng)脈栓塞(MiddleCerebralArteryOcclusion,MCAO)模型。缺血2小時(shí)后，將尼龍線輕輕拔出并縫合皮下筋膜及皮膚，即為再灌注模型，再灌注時(shí)間為24小時(shí)。偽手術(shù)組除不插尼龍線阻塞血管外，其他操作與其他三組相同。缺血1小時(shí)后，按組別尾靜脈注射給藥一次，之后每隔12小時(shí)再給藥一次，共給藥3次。末次給藥30分鐘后觀察大鼠神經(jīng)行為并參考文獻(xiàn)進(jìn)行評(píng)分無(wú)異常0分；豎毛、輕度運(yùn)動(dòng)低下0.5分；前肢屈曲、運(yùn)動(dòng)障礙l分；運(yùn)動(dòng)不協(xié)調(diào)、旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)2分；偏癱、不能站立和行走3分；痙攣、昏睡4分；死亡5分。再灌注24小時(shí)后斷頭取腦，將腦組織沿冠狀面切成厚度基本相同的5片，固定、染色，用Premier3.1MEGAPIXELSTS-3給每個(gè)組的腦片照相，再通過(guò)Imagepro-plus4.5軟件測(cè)量梗死面積，按下式計(jì)算梗死百分比，結(jié)果見(jiàn)表2。蒼白區(qū)面積梗死百分比(％)蒼白區(qū)面積+非蒼白區(qū)面積5:100%表2丹參酮IlA靜脈乳劑對(duì)大鼠腦缺血/再灌注的保護(hù)作用組別給藥量神經(jīng)行為分值梗死百分比(％)偽手術(shù)組模型組丹參酮IIA靜脈乳劑組丹參酮IIA磺酸鈉組1.0ml/kg(生理鹽水)1.0ml/kg(生理鹽水)1.0ml/kg(1.0mg/kg)1.0ml/kg(1.4mg/kg)O.OO士O.OO2.67±0.370.38±0.342.43±0.805.88±1.9219.43±5.357.6U3.8918.65±5.56與偽手術(shù)組比較"P〈0.01與模型組比較*<0.01與丹參酮IIA磺酸鈉組比較"P〈0.01結(jié)果表明在本實(shí)驗(yàn)中，丹參酮IlA靜脈乳劑對(duì)大鼠腦缺血/再灌注損傷具有明顯的治療作用，且明顯優(yōu)于同劑量(摩爾量)的丹參酮IIA磺酸鈉注射液。實(shí)施例2丹參酮IIA靜脈乳劑對(duì)大鼠缺血性腦損傷的保護(hù)作用Wistar大鼠40只(體重220280g，雌雄各半)，隨機(jī)分為四組(偽手術(shù)組、模型組、丹參酮IIA靜脈乳劑組、丹參酮IIA磺酸鈉注射液組)，按組別每天尾靜脈注射給藥一次，連續(xù)3天，第3次給藥30min后造模，大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉30mg/kg麻醉，剝離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，置手術(shù)線，尾靜脈注射伊文思蘭50mg/kg，除偽手術(shù)組外其他大鼠均于5分鐘后結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈，結(jié)扎3小時(shí)后斷頭取腦，稱重，浸泡于10毫升甲酰胺中，于45'C恒溫箱中溫育72小時(shí)，取溫育液，用分光光度計(jì)于620納米處測(cè)定吸收度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算腦內(nèi)伊文思蘭含量，結(jié)果見(jiàn)表3。表3丹參酮IIA靜脈乳劑對(duì)腦缺血大鼠腦血管通透性的影響組別腦組織伊文思蘭含量(嗎/g)偽手術(shù)組模型組丹參酮IIA靜脈乳劑組丹參酮IIA磺酸鈉組1.0ml/kg(生理鹽水)1.0ml/kg(生理鹽水)1.0ml/kg(1.0mg/kg)1.0ml/kg(1.4mg/kg)3.47±1.015.67±0.86A3.66±0.97*.5.54±1.05與偽手術(shù)組比較^<0.05與模型組比較<0.05與丹參酮IIA磺酸鈉組比較'P〈0.05Wistar大鼠40只(體重220280g，雌雄各半)，分組、給藥及造模均同前，戊巴比妥鈉麻醉后，剝離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈(除偽手術(shù)組外)3小時(shí)，斷頭取腦，稱濕腦重，計(jì)算腦指數(shù)(腦指數(shù)=濕腦重><100/體重)。然后在110。C烤箱中烤至恒重，稱干腦重，按下式計(jì)算腦含水量，結(jié)果見(jiàn)表4。腦含水量(％)=濕腦重7=腦重x100%濕腦重表4丹參酮IIA靜脈乳劑對(duì)腦缺血大鼠腦指數(shù)及腦含水量的影響組別腦指數(shù)腦含水量(％)偽手術(shù)組模型組丹參酮IIA靜脈乳劑組丹參酮IIA磺酸鈉組1.0ml/kg(生理鹽水)1.0ml/kg(生理鹽水)1.0ml/kg(1.0mg/kg)1.0ml/kg(1.4mg/kg)0.6722±0.04990.7879±0.0777A0.6792±0.0471*'0.7775±0.060972.70±3.2478.34±1.95A73.71士2.8"77.92±2.87與偽手術(shù)組比較Ap〈0.05與模型組比較*<0.05與丹參酮IIA磺酸鈉組比較"P〈0.05結(jié)果表明在本實(shí)驗(yàn)中，丹參酮IIA靜脈乳劑能減輕大鼠腦缺血所致的血管通透性增加，緩解腦水腫，且明顯優(yōu)于同劑量(摩爾量)的丹參酮IIA磺酸鈉注射液。實(shí)施例3丹參酮IIA靜脈乳劑對(duì)大鼠出血性腦損傷的保護(hù)作用Wistar大鼠40只(體重290330g，雌雄各半)，隨機(jī)分為4組(偽手術(shù)組、模型組、丹參酮IIA靜脈乳劑組、丹參酮IIA磺酸鈉注射液組)，按組別每天尾靜脈注射給藥一次，連續(xù)3天，末次給藥30分鐘后，采用枕大池注入自體股動(dòng)脈血法制作蛛網(wǎng)膜下腔出血(SubarachnoidHemorrhage,SAH)模型。將HDL-500電腦超聲儀的912MHz探頭置于SAH大鼠枕大孔處，探測(cè)顱內(nèi)動(dòng)脈收縮期血流速度及舒張期血流速度，并計(jì)算出阻力指數(shù)(RI)，RI值高提示血管阻力高，亦反映血管痙攣的程度。經(jīng)斜坡開(kāi)骨窗暴露基底動(dòng)脈(BA)的全程，用顯微鏡測(cè)微尺及顯微攝影法測(cè)量基底動(dòng)脈的椎基底動(dòng)脈交匯處、腦橋中部和分叉處直徑，取其均值。結(jié)果見(jiàn)表5。表5丹參酮IIA靜脈乳劑對(duì)SAH大鼠腦血管阻力指數(shù)及基底動(dòng)脈直徑的影響組別給藥量阻力指數(shù)基底動(dòng)脈直徑(nm)術(shù)前術(shù)后24小時(shí)偽手術(shù)組模型組丹參酮IIA靜脈乳劑組丹參酮IIA磺酸鈉組1.0ml/kg(生理鹽水)1.0ml/kg(生理鹽水)1.0ml/kg(1.0mg/kg)1.0ml/kg(1.4mg/kg)0.56±0.050.84±0.08A0.62±0.07**0.8U0.06183.4±29.6178.3±19.5182.7士2.8177.2±27.8182.7±14.6122.6士19.8血67.3±35.4*'137.2±29.8與偽手術(shù)組比較Ap〈0.05與模型組比較，P〈0.05與丹參酮1IA磺酸鈉組比較'P〈0.05結(jié)果表明在本實(shí)驗(yàn)中，丹參酮IIA靜脈乳劑能減輕SAH大鼠腦血管阻力，預(yù)防出血性腦損傷所致的基底動(dòng)脈狹窄，防治蛛網(wǎng)膜下腔出血所致的腦血管痙攣，且明顯優(yōu)于同劑量(摩爾量)的丹參酮IIA磺酸鈉注射液。實(shí)施例4丹參酮IIA靜脈乳劑對(duì)人膠質(zhì)瘤的增殖抑制作用人膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251，常規(guī)培養(yǎng)于含10%新生牛血清，青霉素、鏈霉素各100U/ml的RPMI-1640(Gibco)培養(yǎng)基中，37°C、飽和濕度、5%C02條件下常規(guī)培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)細(xì)胞起始接種濃度為107/L，加入圓底細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)，每孔0.2ml，置于37°C、飽和濕度、5。/。C02條件下常規(guī)培養(yǎng)24小時(shí)后，棄培養(yǎng)上清液，用預(yù)熱至37。C的RPMI-1640沖洗1次。實(shí)驗(yàn)組加入丹參酮IIA靜脈乳劑至最終濃度為0.5mg/L、2.0mg/L、8.0mg/L，每個(gè)濃度做6個(gè)重復(fù)，對(duì)照組除不加丹參酮IIA靜脈乳劑外，其他條件完全一致。分別于培養(yǎng)24、48、72小時(shí)后，加入pH7.4PBS配制的5g/LMTT20^1/孔，再置37。C、飽和濕度、5%C02條件下4小時(shí)，取出、吸取上清液，加入DMSO0.2ml/L，混勻30分鐘后在酶聯(lián)檢測(cè)儀上570nm處測(cè)定吸收度A57Q，按下式計(jì)算丹參酮IIA靜脈乳劑對(duì)U251細(xì)胞的抑制率，結(jié)果見(jiàn)表6。抑制率(%)=八對(duì)照組二給藥組><100%A對(duì)照組表6丹參酮IIA靜脈乳劑對(duì)U251細(xì)胞增殖的抑制作用抑制率(％)給藥量-24小時(shí)48小時(shí)72小時(shí)0.5mg/L8.3±1.622.4±4.237.5±8.22.0mg/L16.4±3.539.2±8.443.1±8.68.0mg/L30.3±6.45.9±10.065.9±13.4結(jié)果表明在本實(shí)驗(yàn)中，丹參酮IIA靜脈乳劑能明顯抑制人膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251的增殖，并在一定范圍內(nèi)呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系。權(quán)利要求1.丹參酮IIA靜脈乳劑在治療腦部疾病中的應(yīng)用，其特征在于所述的腦部疾病包括缺血性腦血管疾病、出血性腦血管疾病、腦腫瘤；所述的丹參酮IIA靜脈乳劑是以式1所示的丹參酮IIA為有效成分，包含注射用油、乳化劑、注射用水及其它藥學(xué)上可接受的輔料所制成的供靜脈直接注射或經(jīng)其它注射液稀釋后經(jīng)靜脈輸注的乳劑。式12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于治療所述的缺血性腦血管疾病、出血性腦血管疾病的臨床用藥劑量為成人0.12毫克/公斤體重/天。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于治療所述的腦腫瘤的臨床用藥劑量為成人0.58毫克/公斤體重/天。全文摘要本發(fā)明涉及丹參酮IIA靜脈乳劑在治療腦部疾病中的應(yīng)用。將丹參酮IIA靜脈乳劑直接靜脈注射或經(jīng)其它注射液稀釋后經(jīng)靜脈輸注至患者體內(nèi)，能迅速透過(guò)血腦屏障，可用于治療缺血性腦血管疾病、出血性腦血管疾病、腦腫瘤。文檔編號(hào)A61K31/34GK101428013SQ200710050459公開(kāi)日2009年5月13日申請(qǐng)日期2007年11月9日優(yōu)先權(quán)日2007年11月9日發(fā)明者婷儲(chǔ),宇吳,臻梁,毛聲俊,輝金申請(qǐng)人:四川思達(dá)康藥業(yè)有限公司