專利名稱：一種治療胃脘痛的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，特別是涉及一種治療胃脘痛的中藥 復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法。
技術(shù)背景中藥復(fù)方制劑由于所含組分復(fù)雜，而且不同成分之間會(huì)互相影響，很難準(zhǔn)確地對(duì)終 產(chǎn)品的質(zhì)量進(jìn)行控制，現(xiàn)有方法往往存在結(jié)果不穩(wěn)定、不精確、靈敏度低等問題，進(jìn)而 影響產(chǎn)品的質(zhì)量。近年來(lái)由于延胡索臨床用藥量不斷增加，國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)需求量持續(xù)加太,加之延胡索 本身產(chǎn)量不高，市場(chǎng)上有許多混雜品及偽劣品，如夏天無(wú)一一罌粟科植物伏生紫堇 Corydalis decumbens (Thunb. ) Pers.的干燥塊莖；齒瓣延胡索——罌粟科植物齒瓣 延胡索C.turschaninovii Bess的干燥塊莖等等，均含延胡索乙素，且顯微特征接近， 但現(xiàn)有鑒別方法專屬性不夠強(qiáng)。肉桂甘溫助陽(yáng)以補(bǔ)虛，辛熱散寒以止痛。由于肉桂俗名桂皮，使用中常見誤將調(diào)味 用的桂庫(kù)做肉桂藥用，兩者均含有桂皮醛，顯微特征接近，且外觀相近，極易混淆。肉 桂為樟嵙植物肉桂Cinnamom咖cassia Presl的干燥樹皮；桂皮為同屬植物天竺桂 C. japonicumSieb、陰香C. chingii Metc.等的樹皮，不做藥用，但現(xiàn)有鑒別方法專屬性 不夠強(qiáng)。因此有必要尋找專屬性強(qiáng)、色譜特征明顯、陰性對(duì)照無(wú)干擾、靈敏度高的可行 的鑒別方法。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于提供一種治療胃脘痛的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法。 本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明所述的中藥復(fù)方制劑是由如下重量份的原料藥組成肉桂85-115重量份 延胡索65-85重量份牡蠣65-85重量份 小茴香30-45重量份砂仁20-30重量份 高良姜10-15重量份 白芍120-160重量份炙甘草85-115重量份。本發(fā)明中藥復(fù)方制劑原料藥優(yōu)選如下重量份-肉桂100重量份 延胡索75重量份 牡蠣75重量份小茴香37. 5重量份 砂仁25重量份 髙良姜12. 5重量份白芍140重量份 炎甘草100重量份。取上述原料藥，按常規(guī)工藝，加入常規(guī)輔料制備成臨床可接受的任何一種劑型，如:散劑、膠囊劑、片劑、顆粒劑、丸劑、或緩釋制劑、控釋制劑等。本發(fā)明中藥復(fù)方片劑的制備方法為以上八味，白芍、炙甘草加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮 成稠膏；其余肉桂等六味粉碎成細(xì)粉，與上述稠膏混勻，干燥，粉碎成細(xì)粉，加入適量 輔料，混勻，制粒，壓制成片劑。每片重0.3g、 0.6g。 口服， 一次1.2g，一日3次， 日服用劑量3. 6g。本發(fā)明中藥復(fù)方不同制劑的日服用劑量或使用劑量是確定的，不同制劑的日服用劑 量或使用劑量中含相當(dāng)生藥材量相同。本發(fā)明質(zhì)量控制方法即以日用劑量為單位來(lái)稱取 檢測(cè)制劑。本發(fā)明所述中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法包括如下鑒別方法中的一種或幾種-A. 取本發(fā)明中藥復(fù)方制劑日用劑量的25/18，研細(xì)，加濃氨溶液2ml與乙醚30ml， 浸漬1小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖糽ml使溶解，作為供試品溶液； 另取延胡索對(duì)照藥材0.62g，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取延胡索乙素對(duì)照品，加乙醇制 成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VI B)試驗(yàn)， 吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液各10ul、對(duì)照品溶液2ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層 板上，以體積比為2: 1.5—2的60 90。C石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干， 置碘蒸氣中熏，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜 相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；B. 取本發(fā)明中藥復(fù)方制劑日用劑量的25/18,研細(xì)，加60 9(TC石油醚30ml，冷浸 l小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液蒸至lml，作為供試品溶液；另取肉桂對(duì)照藥材0.85g， 同法制成對(duì)照藥材溶液；再取桂皮醛對(duì)照品，加乙醇制成每lml含lul的溶液，作為對(duì) 照品溶液；照薄層色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶 液各10ul、對(duì)照品溶液5nl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為15—20: 3 的60 9(TC石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液； 供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在于對(duì)照品色譜 相應(yīng)的位置上，顯相同的橙紅色斑點(diǎn)；C. 取本發(fā)明中藥復(fù)方制劑日用劑量的10/3，研細(xì)，加乙醚40ml，冷浸1小時(shí)，時(shí) 時(shí)振搖，濾過，藥渣加甲醇30ml，加熱回流1小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml 使溶解，用正丁醇振搖提取2次，每次20ml (必要時(shí)離心)，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)铀?0ml溶解，離心，取上清液置于已處理好的重量規(guī)格為360mg的SEP-PAKCw小柱上， 用水和甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，濃縮至lml,作為供試品溶液；另取甘草對(duì)照藥材 0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供 試品溶液10ul、對(duì)照藥材溶液3ul，分別點(diǎn)于同一硅膠GF^薄層板上，以體積比為40 一50: 3—5: 12—20: 8 —12的正丁醇-濃氨水(即"濃氨溶液")-水-乙醇為展開劑，展 開，取出，晾干，置254nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的 位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。上述A鑒別方法優(yōu)選體積比為2: 1.7的60 9(TC石油醚-乙酸乙酯為展開劑；B鑒 別方法優(yōu)選體積比為17: 3的60 90'C石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開時(shí)濕度優(yōu)先控制 在45% 65%范圍內(nèi)；C鑒別方法優(yōu)選體積比為50: 4: 16: 10的正丁醇-濃氨水-水-乙醇 為展開劑，展開時(shí)溫度優(yōu)選20—30。C。所述鑒別方法A或B中硅膠G薄層板是市售的常規(guī)硅膠薄層板或以硅膠G為固定相，以 0. 2 0. 5%羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑制成規(guī)格100X200咖，厚度0. 25 0. 30,的手 鋪硅膠G薄層板；鑒別方法C中硅膠GF254薄層板是市售的常規(guī)硅膠薄層板或以硅膠G F254為固定相，以0.2 0.5X羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑制成規(guī)格100X200mm,厚度 0. 25 0. 30mm的手鋪硅膠G F254薄層板。本發(fā)明所述中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法還包括如下含量測(cè)定方法 照高效液相色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VI D)測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八 垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為28: 72甲醇-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm; 理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500，芍藥苷峰與相鄰峰的分離度應(yīng)符合要求(即符 合中國(guó)藥典要求，分離度應(yīng)不小于1.5);取8(TC干燥至恒重的芍藥苷對(duì)照品10mg,精密 稱定，置10ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取lml置50ml量瓶中， 加流動(dòng)相至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液；取本發(fā)明中藥復(fù)方制劑日用劑量的5/3，研細(xì)， 取細(xì)粉約日用劑量的5/18，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加25X乙醇50ml，密塞，稱定 重量，超聲(功率160W，頻率50Hz)處理30分鐘，放至室溫，稱定重量，用25%乙醇 補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心，精密吸取上清液lml，加水10ml，置于已處理好的重量 規(guī)格為360mg的SEP-PAKCw小柱上，用10ml水洗脫，再用10%甲醇2ml洗脫，棄去上述 洗脫液，繼用60%甲醇10ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用60%甲醇溶解并移至2ml量瓶 內(nèi)，加60%甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液 各10nl，注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算，即得；本發(fā)明中藥復(fù)方制劑日服用劑量的1/6 含白芍按芍藥苷(C23H280u)計(jì)，不得少于0.45mg?，F(xiàn)有技術(shù)中延胡索乙素的鑒別采用三氯甲垸為提取溶劑，其毒性較大，而本發(fā)明用 乙醚作為提取溶劑浸漬1小時(shí)，以此代替三氯甲烷的提取，降低了毒性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明 此前處理方法可行。現(xiàn)有技術(shù)中的展開劑為正己烷-三氯甲烷-甲醇(10: 6: 1),其中也使用了毒性較大的三氯甲烷。本發(fā)明采用石油醚(60 9(TC)-乙酸乙酯(2: 1.7)為展開 劑，用碘熏后在紫外光燈(365nm)下檢視，實(shí)驗(yàn)結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì) 照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，色譜特征明顯；陰性對(duì)照無(wú)干擾，靈敏度高，表明本發(fā)明方法可行。在甘草薄層色譜鑒別的質(zhì)量研究中，由于本發(fā)明藥材組分較多，對(duì)色譜干擾較大，所以將供試品溶液經(jīng)d8預(yù)處理小柱凈化處理，以此減少其他組分和輔料的干擾；將供試 品溶液點(diǎn)樣于硅膠GF瀏薄層板上，以正丁醇-濃氨水_水-乙醇(50: 4: 16: 10)為展開 劑，置紫外光燈(254nm)下檢視，結(jié)果供試品色譜中斑點(diǎn)清晰，背景干擾小。實(shí)驗(yàn)結(jié)果 表明本發(fā)明方法可行。在本發(fā)明肉桂鑒別試驗(yàn)中，增加了肉桂對(duì)照藥材，以增強(qiáng)鑒別的專屬性。下述實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例用于進(jìn)一步說明但不限于本發(fā)明。 實(shí)驗(yàn)例1 延胡索中延胡索乙素的薄層鑒別1. 樣品點(diǎn)樣量的選擇按說明書技術(shù)方案所述方法制備延胡索對(duì)照藥材溶液，分別取此溶液1、 2、 3、 4、 5、 10、 15、 20、 25、 30!il，點(diǎn)于同一自制手鋪硅膠G薄層板(固定相為硅膠G,青島海洋 化工廠制造，批號(hào)20050124,黏合劑為0.2%羧甲基纖維素鈉溶液，規(guī)格200X200咖，厚 度0. 25 0. 30mm)上，以石油醚(60 90'C)-乙酸乙酯(2: 1.7)為展開劑，展開，取出， 晾干，置碘蒸氣中熏，置紫外光燈(365nm)下檢視。結(jié)果在對(duì)照藥材色譜中，點(diǎn)樣量為 lOul時(shí)斑點(diǎn)清晰可見，故樣品點(diǎn)樣量確定為10yl。(見圖l)2. 專屬性試驗(yàn)根據(jù)說明書所載技術(shù)方案配制不含延胡索的陰性樣品，取供試品5g、陰性樣品4. 3g、 對(duì)照藥材0.625g、對(duì)照品按說明書所述的方法分別配制成供試品溶液、陰性對(duì)照溶液、 對(duì)照藥材溶液、對(duì)照品溶液。分別取供試品溶液、陰性對(duì)照溶液、對(duì)照藥材溶液各10 u 1， 對(duì)照品溶液2ul，點(diǎn)于同一自制手鋪硅膠G薄層板(固定相為硅膠G，青島海洋化工廠 制造，批號(hào)20050124，黏合劑為0. 2%羧甲基纖維素鈉溶液，規(guī)格100X200mm，厚度0. 25 0.30咖)上，以石油醚(60 90。C)-乙酸乙酯(2: 1.7)為展開劑，展開，取出，晾干， 置碘蒸氣中熏，置紫外光燈(365nm)下檢視。結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì)照 品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；陰性對(duì)照品色譜在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上無(wú)相應(yīng)的斑點(diǎn)，說明陰性對(duì)照無(wú)干擾。(見圖2)3. 檢測(cè)靈敏度試驗(yàn)取延胡索乙素對(duì)照品，加乙醇稀釋制成每lml含2. 5、 1. 5、 1. 0、 0. 5、 0. 25、 0. 05mg 的溶液，吸取上述專屬性試驗(yàn)所述的各溶液2ul，分別點(diǎn)于同一自制手鋪硅膠G薄層板 上(固定相為硅膠G，青島海洋化工廠制造，批號(hào)20050124，黏合劑為0.2%羧甲基纖維 素鈉溶液，規(guī)格100X200咖，厚度0. 25 0. 30ram),以石油醚(60 90。C)-乙酸乙酯(2: 1.7)為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸氣中熏，置紫外光燈(365nrn)下檢視。結(jié)果 在對(duì)照品色譜中，對(duì)照品濃度》0.5mg/nil斑點(diǎn)清晰。(見圖3)4. 耐用性試驗(yàn)4.1薄層板選擇采用自制手鋪硅膠G薄層板(固定相為硅膠G,青島海洋化工廠制 造，批號(hào)20050124，黏合劑為0.2%羧甲基纖維素鈉溶液，規(guī)格100X200ram，厚度0. 25 0.30mm)、青島海洋化工廠出品的預(yù)制硅膠G薄層板(規(guī)格100X200ram,厚度0. 20 0.25mm，批號(hào)060306)點(diǎn)樣。結(jié)果自制手鋪硅膠G薄層板優(yōu)于預(yù)制硅膠G薄層板，斑 點(diǎn)分離度好。(見圖2、 4)4.2展開溫度的考察取三批供試品溶液、對(duì)照藥材、延胡索乙素對(duì)照品、陰性對(duì)照 溶液點(diǎn)于自制手鋪硅膠G薄層板(固定相為硅膠G，青島海洋化工廠制造，批號(hào)20050124, 黏合劑為0.2%羧甲基纖維素鈉溶液，規(guī)格100X200ram，厚度0. 25 0. 30mm)上，分置于 溫度為4 10°C、室溫條件下展開。結(jié)果表明在7 3(TC范圍內(nèi)試驗(yàn)，對(duì)鑒別無(wú)影響(室 溫見圖2、低溫見圖5)4.3展開濕度的考察取三批供試品溶液、對(duì)照藥材、延胡索乙素對(duì)照品、陰性對(duì)照 溶液點(diǎn)于自制手鋪硅膠G薄層板(固定相為硅膠G，青島海洋化工廠制造，批號(hào)20050124， 黏合劑為0.296羧甲基纖維素鈉溶液，規(guī)格100X200鵬，厚度0. 25 0. 30mm)，分置于濕 度為75%、 30%條件下展開。結(jié)果表明在相對(duì)濕度30 75%之間試驗(yàn)，對(duì)鑒別無(wú)明顯影 響。(低濕見圖6、高濕見圖7) 實(shí)驗(yàn)例2 肉桂中桂皮醛的薄層鑒別1.專屬性試驗(yàn)根據(jù)說明書所載技術(shù)方案配制不含肉桂的陰性樣品，取陰性樣品3.87g、對(duì)照藥材 0.85g、供試品5g、對(duì)照品25ul，按說明書所載技術(shù)方案的方法分別配制成陰性對(duì)照溶 液、對(duì)照藥材瀋液、供試品溶液、對(duì)照品溶液。分別取陰性對(duì)照溶液、對(duì)照藥材溶液、 供試品溶液各lOy l,對(duì)照品溶液5n l，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上(規(guī)格100X200咖， 厚度0. 20 0. 25ran，批號(hào)051212,青島海洋化工廠)，以石油醚(60 90t:)-乙酸乙酯(17:3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液。結(jié)果供試品色譜中，在與 對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同的橙紅色斑點(diǎn)；陰性對(duì)照品色譜在與對(duì)照藥 材及對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上無(wú)相應(yīng)的斑點(diǎn)，說明陰性對(duì)照無(wú)干擾。(見圖8)2. 檢測(cè)靈敏度試驗(yàn)取桂皮醛對(duì)照品，加乙醇稀釋制成每lml含O. 1、 0.2、 0.6、 1.0、 1.4、 2ul的溶 液，吸取上述專屬性試驗(yàn)中各溶液5 u 1 ，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上(規(guī)格100X 200mm, 厚度0. 20 0. 25mm，批號(hào)051212，青島海洋化工廠)，以石油醚(60 9(TC)-乙酸乙酯(17: 3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液。結(jié)果在對(duì)照品色譜中，對(duì) 照品濃度》0.2ixl/ml斑點(diǎn)清晰。(見圖9)3. 耐用性試驗(yàn)3.1薄層板選擇采用青島海洋化工廠出品的預(yù)制硅膠G薄層板(規(guī)格100X200rara， 厚度0. 20 0. 25咖，批號(hào)060306)、自制手鋪硅膠G薄層板(固定相為硅膠G，青島海洋 化工廠制造，批號(hào)20050124,黏合劑為0.2%羧甲基纖維素鈉溶液，規(guī)格100X200mm，厚 度0. 25 0. 30mm)點(diǎn)樣。結(jié)果兩種硅膠G薄層板的供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相 應(yīng)位置上，均顯相同的橙紅色斑點(diǎn)，但是自制板中未見除主斑點(diǎn)外的其它斑點(diǎn)，而預(yù)制 板中主斑點(diǎn)清晰，其它斑點(diǎn)亦可分辨，說明預(yù)制板的分離度好。(見圖IO、 11)3.2展開溫度的考察取三批供試品溶液、對(duì)照藥材、桂皮醛對(duì)照品、陰性對(duì)照溶液 點(diǎn)于青島海洋化工廠出品的預(yù)制硅膠G薄層板上(規(guī)格100X200mm，厚度0. 20 0. 25mm， 批號(hào)060306)，分置于溫度為4 1(TC、室溫條件下展開。結(jié)果在低溫與室溫的硅膠G 薄層板供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，均顯相同的橙紅色斑點(diǎn)，且主斑點(diǎn) 與其它斑點(diǎn)的分離度好，無(wú)拖尾，比移值也相當(dāng)，所以溫度對(duì)展開影響不大。(低溫見圖 11、室溫見圖12)3.3展開濕度的考察取三批供試品溶液、對(duì)照藥材、桂皮醛對(duì)照品、陰性對(duì)照溶液 點(diǎn)于青島海洋化工廠出品的預(yù)制硅膠G薄層板上(規(guī)格100X200mm，厚度0. 20 0. 25mm， 批號(hào)060306)，分置于濕度為75%、 20%條件下展開。結(jié)果RH20%、 75%條件下的供試品 色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，均顯相同的橙紅色斑點(diǎn)，低濕條件時(shí)主斑點(diǎn)稍有 拖尾，而高濕條件斑點(diǎn)拖尾嚴(yán)重，所以展開時(shí)應(yīng)控制濕度在45% 65%范圍內(nèi)，不宜過低 過高。(低濕見圖13、高濕見圖14) 實(shí)驗(yàn)例3 甘草的鑒別1.專屬性試驗(yàn)根據(jù)說明書所載技術(shù)方案配制不含甘草的陰性樣品，取供試品12g、陰性樣品9.3g、對(duì)照藥材0.5g按說明書所載技術(shù)方案的方法分別配制成供試品溶液、陰性對(duì)照溶液、對(duì) 照藥材溶液。分別取供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各10ul、對(duì)照藥材溶液3wl，分別點(diǎn) 于同一自制硅膠GF2S4薄層板上(規(guī)格100X200mm，厚度0. 25 0. 30mm，批號(hào)20031010， 青島海洋化工廠)，以正丁醇-濃氨水-水-乙醇(50: 4: 16: 10)為展開劑，展開，取出， 晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置 上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；陰性對(duì)照品色譜在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上無(wú)相應(yīng)的斑點(diǎn)， 說明陰性對(duì)照無(wú)干擾。(見圖16)2. 檢測(cè)靈敏度取甘草對(duì)照藥材O. 5g，按說明書技術(shù)方案所載.方法配制成對(duì)照藥材溶液，分別取此 溶液0.2、 0.5、 1、 2.5、 5、 lOnl,分別點(diǎn)于同一自制硅膠GF瀏薄層板上(規(guī)格100X 200咖，厚度0. 25 0. 30mra,批號(hào)20031010，青島海洋化工廠)，以正丁醇-濃氨水-水-乙醇(50: 4: 16: 10)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254咖)下檢視。 結(jié)果在對(duì)照藥材色譜圖中，點(diǎn)樣量》0.5ul范圍斑點(diǎn)可見，點(diǎn)樣量》10ul范圍斑點(diǎn)清 晰。(見圖15)3. 耐用性試驗(yàn)3.1薄層板選擇采用上海信誼華儀器廠出品的預(yù)制硅膠GF254薄層板(規(guī)格100X 200mm,厚度0. 20 0. 25mm，批號(hào)060221)、自制手鋪硅膠GF254薄層板(固定相為硅膠 GF254，青島海洋化工廠，批號(hào)20031010，黏合劑為0.2%羧甲基纖維素鈉溶液，規(guī)格100 X200rara，厚度0. 25 0. 30mm)點(diǎn)樣。結(jié)果兩種硅膠GF254薄層板的供試品色譜中，在 與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上，均顯相同顏色的斑點(diǎn)，但是自制板中斑點(diǎn)較預(yù)制板淸晰， 分離度好。(見圖16、 17)3.2展開溫度的考察取三批供試品溶液、對(duì)照藥材、陰性對(duì)照溶液點(diǎn)于自制硅膠 GF加薄層板上(固定相為硅膠GF254,青島海洋化工廠，批號(hào)20031010，黏合劑為0. 2%羧 甲基纖維素鈉溶液，規(guī)格100X200mm，厚度0. 25 0. 30咖)，分置于溫度為4 10卩、室 溫條件下展開。結(jié)果在低溫時(shí)供試品色譜的斑點(diǎn)模糊，分離度差，而室溫時(shí)供試品色 譜斑點(diǎn)清晰，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，所以展開時(shí)溫度控制 在20 30。C范圍內(nèi)。(低溫見圖18、室溫見圖16)3.3展開濕度的考察取三批供試品溶液、對(duì)照藥材、陰性對(duì)照溶液點(diǎn)于自制硅膠 GF瀏薄層板上(固定相為硅膠GF254,青島海洋化工廠，批號(hào)20031010，黏合劑為0. 2%羧 甲基纖維素鈉溶液，規(guī)格100X200咖，厚度0.25 0.30mm)，分置于濕度為75%、 20%條 件下展開。結(jié)果朋20%、 75%條件下的供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上，均顯相同顏色的斑點(diǎn)，分離度均較好，無(wú)拖尾。所以展開時(shí)濕度影響不大，在20%與75% 之間即可。(低濕見圖19、高濕見圖20) 實(shí)驗(yàn)例4 甘草鑒別方法的篩選實(shí)驗(yàn)1、 鑒別方法(薄層色譜法)取本品12g,研細(xì)，加乙醚40ml，冷浸1小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，藥渣加甲醇30ml，加 熱回流1小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用正丁醇振搖提取2次，每次 20ml (必要時(shí)離心)，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)铀?0ml溶解，離心，取上清液置于 已處理好的SEP-PAKCw(重量規(guī)格360mg)小柱上，用水和甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，濃 縮至lml,作為供試品溶液。另取甘草對(duì)照藥材0. 5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層 色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液10ul、對(duì)照藥材溶液3yl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以正丁醇-濃氨水-水-乙醇(50: 4: 16: 10)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254rnn)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色 譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。2、 色譜條件的選擇2.1、 參照《中國(guó)藥典》2000年版一部甘草浸膏的薄層鑒別方法。取本品6g,研細(xì)，加水40ral溶解，用正丁醇振搖提取3次，每次20ml (必要時(shí)離 心)，合并正丁醇液，用水洗滌3次，每次20ml，正丁醇液置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状?5ml使溶解，作為供試品溶液；另取甘草酸單銨鹽對(duì)照品，加甲醇制成每lml含2mg的溶 液，作為對(duì)照品溶液；另取甘草對(duì)照藥材0.5g,同法制成對(duì)照藥材溶液。另取缺甘草的 陰性對(duì)照品、甘草原藥材分別按上述方法配制成陰性對(duì)照溶液、甘草原藥材溶液。照薄 層色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各10iil，對(duì) 照藥材溶液、甘草原藥材溶液、對(duì)照品溶液各5pl，分別點(diǎn)于同一用1%氫氧化鈉溶液制 備的硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15: 1: 1: 2)為展開劑，展開， 取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105t:加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm) 下檢視。結(jié)果在供試品色譜中，甘草酸單銨鹽對(duì)照品可見非常淡的黃色熒光斑點(diǎn)，而且需 加熱30min以上，甘草原藥材及甘草對(duì)照藥材可見淡淡的甘草酸單銨鹽的黃色熒光斑點(diǎn)， 其他斑點(diǎn)均有拖尾，斑點(diǎn)不清楚；樣品拖尾非常嚴(yán)重，未見甘草酸銨鹽對(duì)照斑點(diǎn)；陰性 對(duì)照拖尾以至未見斑點(diǎn)，結(jié)果表明此方法不適用于本品。(見圖21)2.2、 自擬方法將供試品溶液經(jīng)C,s預(yù)處理小柱凈化處理(具體方法見l中所述)，以正丁醇-濃氨水-水-乙醇(50: 4: 16: 10)為展開劑，點(diǎn)樣于硅膠GF瀏薄層板上，結(jié)果經(jīng)Cw預(yù)處理小 柱凈化處理后(具體方法見1中所述)，大大消除了處方中其它組分和輔料對(duì)甘草鑒別的 干擾，供試品色譜中斑點(diǎn)清晰，背景干擾小，所以選用此方法鑒別。(見圖22) 3、甘草對(duì)照藥材梯度試驗(yàn)(薄層斑點(diǎn)與藥材量的關(guān)系)取按1所述方法配制的甘草對(duì)照藥材溶液(0.5g/ml) 0.2、 0.5、 1.0、 2.5、 5、 10 ul ，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，進(jìn)行梯度試驗(yàn)，以正丁醇-濃氨水-水-乙醇(50: 4: 16: 10)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視，結(jié)果在色譜 圖中，點(diǎn)樣量》0.5iil，即甘草量大于0. 25mg時(shí)斑點(diǎn)清晰(見圖23)。甘草對(duì)照點(diǎn)樣量(Pl)0.20.51.02.5510甘草對(duì)照藥材含量(mg)0. 100. 250. 501.252.55.0相當(dāng)于片劑甘草藥材含量(mg)0， 401. 02. 05. 01020結(jié)論在對(duì)照藥材色譜圖中，點(diǎn)樣量》0.5nl (片劑甘草藥材含量》 l.Omg)時(shí)可見斑點(diǎn)；點(diǎn)樣量》10iil (片劑甘草藥材含量》 20mg)斑點(diǎn)清晰。4、固相提取小拄的選擇4. 1 SEP-PAKCw使用前后的比較取本品12g,按照1中所述方法操做至"合并正丁醇液，蒸干"，殘?jiān)蛹状糽ml使 溶解，作為供試品溶液l;另取本品12g,按照1中所述方法制備供試品溶液、甘草對(duì)照 藥材溶液。分取上述三種溶液點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上(其中供試品溶液點(diǎn)2個(gè)點(diǎn))， 展開。結(jié)果色譜圖中，供試品溶液在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； 供試品溶液l拖尾嚴(yán)重，未見斑點(diǎn)。表明使用SEP-PAKCw比不使用效果好。(見圖24)4. 2固相提取小柱不同型號(hào)、品牌的比較取本品按照上述1中方法處理，但是固相提取小柱分別使用A: WATER S印-Pak Classic C18 (360mg，批號(hào)WAT051910)、 B: Agilent ZORBAX SPE C18 (100mg, lml)、 C: 津楊C18固相提取小柱(500mg， 3ml，批號(hào)730013)，得供試品溶液A、 B、 C。結(jié)果色譜 圖中，供試品溶液A、 B在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上，均顯相同顏色的斑點(diǎn)，但是供試 品溶液A的斑點(diǎn)比供試品溶液B斑點(diǎn)顏色深，而供試品溶液C未見斑點(diǎn)。說明固相提取 小柱A比B提取效果好，固相提取小柱C提取效果最差，所以選擇固相提取小柱A。(見 圖25)5、 甘草酸單銨鹽對(duì)照品、甘草對(duì)照藥材在鑒別中的意義取甘草對(duì)照藥材、甘草酸單銨鹽對(duì)照品、樣品、陰性對(duì)照品(缺甘草)9.3g加甘草 酸單銨鹽2mg,按照1中所述方法制備成對(duì)照藥材溶液、甘草酸單銨鹽對(duì)照品溶液、樣品 供試品溶液、陰性+甘草酸單銨鹽對(duì)照溶液進(jìn)行鑒別。結(jié)果在色譜圖中，樣品供試品溶液在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；對(duì)照藥材溶液、樣品供試品溶液、 陰性+甘草酸單銨鹽對(duì)照溶液在與甘草酸單銨鹽對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，均顯相同顏色的斑點(diǎn)，但是陰性+甘草酸單銨鹽對(duì)照溶液斑點(diǎn)與對(duì)照藥材的其他斑點(diǎn)沒有對(duì)應(yīng)，陰性+甘 草酸單銨鹽對(duì)照溶液與樣品供試品溶液的斑點(diǎn)不完全一致，說明本品鑒別試驗(yàn)中采用甘 草對(duì)照藥材比甘草酸單銨鹽對(duì)照品更具專屬性；對(duì)藥材鑒別有更現(xiàn)實(shí)的意義。說明本品 中含有甘草藥材。(見圖26)實(shí)驗(yàn)例5 延胡索薄層色譜鑒別1、 鑒別方法-取本品5g，研細(xì)，加濃氨試液2ml與乙醚30ml，浸漬1小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾 液蒸干，殘?jiān)右掖糽ml使溶解，作為供試品溶液。另取延胡索對(duì)照藥材0.625g，同法 制成對(duì)照藥材溶液。再取延胡索乙素對(duì)照品，加乙醇制成每lml含lrag的溶液，作為對(duì) 照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶 液各10yl、對(duì)照品溶液2iU，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60 90"C)-乙 酸乙酯(2: 1.7)為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸氣中熏，置紫外光燈(365nm) 下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光 斑點(diǎn)。2、 不同色譜條件的選擇2.1、 現(xiàn)有技術(shù)中延胡索的薄層色譜鑒別方法為取本品5g，研細(xì)，加濃氨試液2ml與三氯甲烷20ml，浸漬1小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過， 濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。另取延胡索乙素對(duì)照 品，加乙醇制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典一部附 錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液10!U、對(duì)照品溶液2ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上， 以正己烷-三氯甲烷-甲醇(10: 6: l)為展開劑，展開，取出，晾千，置碘蒸氣中熏，置 紫外光燈(365nm)下檢視。結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的 黃色熒光斑點(diǎn)(因?yàn)檫吘壭?yīng)，供試品中延胡索乙素的斑點(diǎn)比對(duì)照品的斑點(diǎn)略高)。(見 圖27)2.2、 自擬方法l取本品5g,研細(xì)，加濃氨試液2ml與乙醚30ml，浸漬1小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾 液蒸干，殘?jiān)右掖糽ral使溶解，作為供試品溶液；另取延胡索對(duì)照藥材0.625g,同法 制成對(duì)照藥材濬液；再取延胡索乙素對(duì)照品，加乙醇制成每lml含lmg的鄉(xiāng)液，作為對(duì) 照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液各10ixl、對(duì)照品溶液2iU，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60 90t:)-乙 酸乙酯(2: 1.7)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀試液。結(jié)果供試品色譜 中，在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙紅色斑點(diǎn)，但是色譜中斑點(diǎn) 小，特征較少，所以也不宜使用。(見圖28) 2.3、自擬方法2我們?cè)?. 2方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行改變，按1中的方法分別配制成供試品(5g)溶液(三 批)、延胡索乙素對(duì)照品溶液、對(duì)照藥材(0.625g)溶液、陰性對(duì)照溶液[陰性樣品(缺 元胡)4.3g]。分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60 90'C)-乙酸乙酯(2: 1.7) 為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸氣中熏，置紫外光燈(365nm)下檢視。結(jié)果供試 品色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；陰性對(duì)照 品色譜在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上無(wú)相應(yīng)的斑點(diǎn)，說明陰性對(duì)照無(wú)干擾。色 譜特征明顯，靈敏度高，所以選用此方法來(lái)鑒別延胡索(見圖29)3、延胡索乙素對(duì)照品、延胡索對(duì)照藥材在鑒別中的意義取缺延胡索陰性對(duì)照品4. 3g與延胡索乙素lmg置同一具塞三角瓶中，按照1中所述 方法制備成陰性+延胡索乙素對(duì)照溶液進(jìn)行鑒別。結(jié)果在色譜圖中，樣品供試品溶液、陰 性+延胡索乙素對(duì)照溶液在與延胡索乙素對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，均顯相同顏色的熒光斑 點(diǎn)；但是陰性+對(duì)照溶液與樣品供試品溶液的色譜不完全一致，說明本品鑒別試驗(yàn)中采用 延胡索對(duì)照藥材延胡索乙素對(duì)照品更具專屬性；對(duì)藥材鑒別有更現(xiàn)實(shí)的意義。說明本品 中含有延胡索藥材。(見圖30) 實(shí)驗(yàn)例6 肉桂薄層色譜鑒別1、 鑒別方法取本品5g,研細(xì)，加石油醚(60 9(TC)30ml，冷浸1小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液 蒸至約lml，作為供試品溶液。另取肉桂對(duì)照藥材0.85g,同法制成對(duì)照藥材溶液。再取 桂皮醛對(duì)照品，加乙醇制成每lml含liil的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中 國(guó)藥典一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液各10w 1、對(duì)照品溶液5y 1， 分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60 9(TC)-乙酸乙酯(17: 3)為展開劑，展開， 取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置 上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在于對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙紅色斑點(diǎn)。2、 桂皮醛對(duì)照品、肉桂對(duì)照藥材在鑒別中的意義2. 1取桂皮醛對(duì)照品、陰性(缺肉桂)對(duì)照品3.87g加桂皮醛對(duì)照品lu 1、供試品、 陰性對(duì)照品，按照1中所述方法制備并進(jìn)行鑒別。結(jié)果在色譜圖中，樣品供試品溶液、陰性+對(duì)照溶液在與桂皮醛對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，均顯相同的橙紅色斑點(diǎn)；但是陰性+ 對(duì)照溶液與樣品供試品溶液的色譜不完全一致。(見圖31)2. 2取肉桂對(duì)照藥材0. 85g，肉桂藥材0. 85g，桂皮對(duì)照藥材0.85g，桂皮藥材0. 85g， 桂枝藥材0. 85g，桂皮醛對(duì)照品25 P 1，供試品5g分別按照1中所述方法制備成肉桂對(duì) 照藥材溶液，肉桂藥材溶液，桂皮對(duì)照藥材溶液，桂皮藥材溶液，桂皮醛對(duì)照品溶液， 供試品溶液，點(diǎn)樣。結(jié)果在色譜圖中，肉桂對(duì)照藥材、桂皮對(duì)照藥材在與桂皮醛對(duì)照品 色譜相應(yīng)位置上，均顯相同的橙紅色斑點(diǎn)；而肉桂對(duì)照藥材斑點(diǎn)數(shù)目多于桂皮醛對(duì)照品； 肉桂對(duì)照藥材與桂皮對(duì)照藥材斑點(diǎn)不盡相同，可以區(qū)分鑒別；說明本品鑒別試驗(yàn)中采用 肉桂對(duì)照藥材較桂皮醛對(duì)照品更具專屬性；對(duì)藥材鑒別有更現(xiàn)實(shí)的意義。供試品中含有 肉桂藥材(見圖32)。


圖1延胡索樣品點(diǎn)樣量選擇圖2.延胡索薄層鑒別專屬性試驗(yàn)(自制板，室溫) 圖3延胡索薄層鑒別檢測(cè)靈敏度試驗(yàn)(自制板) 圖4延胡索薄層鑒別(預(yù)制板，室溫) 圖5延胡索薄層鑒別(自制板，低溫) 圖6延胡索薄層鑒別(自制板，低濕度) 圖7延胡索薄層鑒別(自制板，高濕度) 圖8肉桂薄層鑒別專屬性試驗(yàn)(青島板) 圖9肉桂薄層鑒別檢測(cè)靈敏度試驗(yàn)圖10肉桂薄層鑒別(自制板，室溫)圖11肉桂薄層鑒別(預(yù)制板，室溫)圖l'2肉桂薄層鑒別(預(yù)制板，低溫)圖13肉桂薄層鑒別(預(yù)制板，低濕度)圖14肉桂薄層鑒別(預(yù)制板，高濕度)圖15甘草薄層鑒別檢測(cè)靈敏度試驗(yàn)圖16甘草薄層鑒別(自制板，室溫)圖17甘草薄層鑒別(預(yù)制板，室溫)圖18甘草薄層鑒別(自制板,低溫)圖19甘草薄層鑒別(自制板，低濕度)圖20甘草薄層鑒別(自制板，高濕度)圖21甘草薄層鑒別(色譜條件的選擇)-圖22甘草薄層鑒別(自擬方法)圖23甘草對(duì)照藥材梯度薄層色譜24甘草薄層鑒別(SEP-PAKU使用前后的比較)圖2'5甘草薄層鑒別(固相提取小柱不同型號(hào)、品牌的比較)圖26甘草薄層鑒別(甘草酸單銨鹽對(duì)照品、甘草對(duì)照藥材在鑒別中的意義)圖27延胡索薄層鑒別(現(xiàn)有衛(wèi)生部頒標(biāo)準(zhǔn)的方法)圖28延胡索薄層鑒別(自擬方法1)圖29延胡索薄層鑒別(自擬方法2)圖30延胡索薄層鑒別(延胡索乙素對(duì)照品、延胡索對(duì)照藥材在鑒別中的意義) 圖31肉桂薄層鑒別(桂皮醛對(duì)照品、肉桂對(duì)照藥材在鑒別中的意義) 圖32肉桂薄層鑒別(肉桂對(duì)照藥材、桂皮對(duì)照藥材、桂皮醛對(duì)照品的比較) 下述實(shí)施例均能實(shí)現(xiàn)上述實(shí)驗(yàn)例的效果。 具體實(shí)聘方式實(shí)施例l: 本發(fā)明片劑(小片)肉桂U5g 延胡索70g 牡蠣80g 小茴香35g 砂仁28g 高良姜12g白芍145g炙甘草90g以上八味，白芍、炙甘草加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮 成稠裔；其余肉桂等六味粉碎成細(xì)粉，與上述稠膏混勻，干燥，粉碎成細(xì)粉，加入適量 輔料，混勻，制粒，壓制成2000片，每片0.3g,即得?？诜?， 一次四片， 一日三次。 實(shí)施例2:本發(fā)明片劑(大片)肉桂100g延胡索75g砂仁25g小茴香37. 5g牡蠣75g高良姜12. 5g白芍140g甘草(炙)100g以上八味，白芍、炙甘草加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮 成稠膏；其余肉桂等六味粉碎成細(xì)粉，與上述稠膏混勻，干燥，粉碎成細(xì)粉，加入適量 輔料，混勻，制粒，壓制成片，每片0.6g，即得。口服， 一次二片， 一日三次。 實(shí)施例3:本發(fā)明顆粒劑肉桂85Kg 延胡索85Kg牡蠣65Kg小茴香45Kg 砂仁20Kg 高良姜15Kg白芍120Kg炙甘草115Kg。 按常規(guī)工藝加入適量輔料制備成顆粒劑。服用方法及日服用劑量開水沖服，每袋1.2克， 一次一袋， 一日三次。 實(shí)施例4: 本發(fā)明丸劑肉桂U5Kg延胡索65Kg牡蠣85Kg 小茴香30Kg砂仁30Kg 高良姜10Kg 白芍160Kg炙甘草85Kg。 按常規(guī)工藝加入適量輔料制備成丸劑。服用方法及日服用劑量口服，每袋1.2克， 一次一袋， 一日三次。 實(shí)施例5: 本發(fā)明膠囊劑肉桂90 Kg 延胡索80 Kg 牡蠣70 Kg 小茴香40 Kg砂仁22 Kg 高良姜14 Kg 白芍130 Kg 炙甘草110Kg。 按常規(guī)工藝加入適量輔料制備成膠囊劑。服用方法及日服用劑量口服，每粒0.3克， 一次四粒， 一日三次。 實(shí)施例6': 本發(fā)明控釋制劑肉桂110Kg 延胡索70Kg 牡蠣80Kg 小茴香35Kg 砂仁2服g 高良姜12Kg 白芍150Kg 炙甘草90Kg。 按常規(guī)工藝加入適量輔料制備成控釋制劑。服用方法及日服用劑量口服， 一日一到二次。同普通制劑日劑量。 實(shí)施例7: 本發(fā)明片劑的質(zhì)量控制方法鑒別A.取本發(fā)明片劑5g，研細(xì)，加濃氨溶液2ml與乙醚30ml，浸漬1小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖， 濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液。另取延胡索對(duì)照藥材0.62g， 同法制成對(duì)照藥材溶液。再取延胡索乙素對(duì)照品，加乙醇制成每lml含lmg的溶液，作 為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照藥 材溶液各lOu 1、對(duì)照品溶液2u l，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60 90'0-乙酸乙酯(2: 1.7)為展開劑，展開，取出，晾千，置碘蒸氣中熏，置紫外光燈(365nm) 下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光 斑點(diǎn)。B. 取本發(fā)明片劑5g，研細(xì)，加石油醚(60 90'C)30ml，冷浸1小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾 過，濾液蒸至約lml，作為供試品溶液。另取肉桂對(duì)照藥材0.85g,同法制成對(duì)照藥材溶 液。再取桂皮醛對(duì)照品，加乙醇制成每lml含lul的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色 譜法(中國(guó)藥典一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液各10nl、對(duì)照品溶 液5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60 9(TC)-乙酸乙酯(17: 3)為展開 劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相 應(yīng)的位軍上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在于對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的橙紅色斑點(diǎn)。C. 取本發(fā)明片劑12g，研細(xì)，加乙醚40ml，冷浸1小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，藥渣加 甲醇30ml，加熱回流l小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用正丁醇振搖提 取2次，每次20ral (必要時(shí)離心)，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)铀?0ml溶解，離心， 取上清液置于已處理好的SEP-PAKC,8(重量規(guī)格360mg)小柱上，用水和甲醇洗脫，收集甲 醇洗脫液，濃縮至lml，作為供試品溶液。另取甘草對(duì)照藥材0. 5g，同法制成對(duì)照藥材 溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液10ul、對(duì)照藥材 溶液3ul，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以正丁醇-濃氨水-水-乙醇(50: 4: 16: 10)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與 對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VI D)測(cè)定。 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水(28: 72)為 流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm;理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500，芍藥苷峰與相鄰 峰的分離度應(yīng)符合要求。對(duì)照品溶液的制備取80'C干燥至恒重的芍藥苷對(duì)照品約10mg,精密稱定，置10ml 量瓶中，'用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取lml置50ml量瓶中，加流動(dòng)相至刻 度，搖勻，即得。供試品溶液的制備取本發(fā)明片劑10片(每片重0. 6克)或20片(每片重0. 3克)， 精密稱定，研細(xì)，取細(xì)粉約lg,精密稱定，置具塞錐形瓶中，加25M乙醇50ml，密塞， 稱定重量，超聲(功率160W，頻率50Hz)處理30分鐘，放至室溫，稱定重量，用25% 乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心，精密吸取上清液lml，加水10ml，置于已處理好的 SEP-PAKU (重量規(guī)格360mg)小柱上，用10ml水洗脫，再用10%甲醇2ml洗脫，棄去上 述洗脫液，繼用60%甲醇10ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用60%甲醇錄解并移至2ml量 瓶?jī)?nèi)，加60%甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算，即得。本品每片含白芍按芍藥苷(C23H2S0 )計(jì)，大片(每片重0.6克)不得少于 0.45mg;小片(每片重0.3克)不得少于0.22mg。 實(shí)施例8: 本發(fā)明顆粒劑的質(zhì)量控制方法鑒別A. 取本發(fā)明顆粒劑日服用量的25/18，研細(xì)，加濃氨溶液2ral與乙醚30ml，浸漬1 小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖糽ml使溶解，作為供試品溶液。另取延 胡索對(duì)照藥材0.62g,同法制成對(duì)照藥材溶液。再取延胡索乙素對(duì)照品，加乙醇制成每 lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取 供試品溶液、對(duì)照藥材溶液各10ul、對(duì)照品溶液2ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上, 以石油醚(60 9(TC)-乙酸乙酯(2: 1.7)為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸氣中熏， 置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上， 顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。B. 取本發(fā)明顆粒劑日服用量的26/18，研細(xì)，加石油醚(60 9(TC)30ml，冷浸1小 時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液蒸至約lml，作為供試品溶液。另取肉桂對(duì)照藥材0.85g,同 法制成對(duì)照藥材溶液。再取桂皮醛對(duì)照品，加乙醇制成每lml含lul的溶液，作為對(duì)照 品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液 各10ul、對(duì)照品溶液5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60 9(TC)-乙酸 乙酯(17; 3)為展開劑，展開，取出，晾千，噴以二硝基苯肼乙醇試液。供試品色譜中， 在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在于對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上， 顯相同的橙紅色斑點(diǎn)。C. 取本發(fā)明顆粒劑日服用量的25/18，研細(xì)，加乙醚40ral，冷浸1小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖， 濾過，藥渣加甲醇30ml，加熱回流l小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用 正丁醇振搖提取2次，每次20ml (必要時(shí)離心)，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)铀?0ml 溶解，離心，取上清液置于已處理好的SEP-PAKd8(重量規(guī)格360mg)小柱上，用水和甲醇 洗脫，收集甲醇洗脫液，濃縮至lml，作為供試品溶液。另取甘草對(duì)照藥材0.5g，同法 制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液IO yl、對(duì)照藥材溶液3yl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF股薄層板上，以正丁醇-濃氨水-水-乙醇(50: 4: 16: 10)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。上述鑒別方法A和B中所述的硅膠G薄層板均采用以硅膠G為固定相，以0. 2%羧甲 基纖維素鈉溶液為黏合劑制成的規(guī)格100X200mm,厚度0. 25 0. 30mm的手鋪硅膠G薄層板。鑒別方法C中硅膠GF254薄層板是以硅膠G F254為固定相，以0. 4%羧甲基纖維素鈉 溶液為黏合劑制成規(guī)格100X200mm，厚度0. 25 0. 30mm的手鋪硅膠G F瀏薄層板。 實(shí)施例9: 本發(fā)明丸劑的質(zhì)量控制方法鑒別A. 取本發(fā)明丸劑日服用量的25/18，研細(xì)，加濃氨溶液2ml與乙醚30ral，浸漬1小 時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖糽ml使溶解，作為供試品溶液。另取延胡 索對(duì)照藥材0.62g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取延胡索乙素對(duì)照品，加乙醇制成每lml 含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供 試品溶液、對(duì)照藥材溶液各10nl、對(duì)照品溶液2nl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上， 以石油醚(60 9(TC)-乙酸乙酯(2: 1.7)為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸氣中熏， 置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上， 顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。B. 取本發(fā)明丸劑日服用量的25/18，研細(xì)，加石油醚(60 90。C)30ni1,冷浸1小時(shí)， 時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液蒸至約lml，作為供試品溶液。另取肉桂對(duì)照藥材0.85g，同法制 成對(duì)照藥材溶液。再取桂皮醛對(duì)照品，加乙醇制成每lml含liil的溶液，作為對(duì)照品溶 液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液各IO wl、對(duì)照品溶液5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60 9(TC)-乙酸乙酯 (17: 3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液。供試品色譜中，在與 對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在于對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相 同的橙紅色斑點(diǎn)。C. 取本發(fā)明丸劑日服用量的25/18，研細(xì)，加乙醚40ml，冷浸1小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖， 濾過，藥渣加甲醇30ml，加熱回流l小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用 正丁醇振搖提取2次，每次20ml (必要時(shí)離心)，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)铀?0ml 溶解，離心，取上清液置于已處理好的SEP-PAKCw(重量規(guī)格360mg)小柱上，用水和甲醇 洗脫，收集甲醇洗脫液，濃縮至lml，作為供試品溶液。另取甘草對(duì)照藥材0.5g，同法 制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液IO ul、對(duì)照藥材溶液3ul，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以正丁醇-濃氨水-水-乙醇(50: 4: 16: 10)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254mti)下檢視。供試 品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VI D)測(cè)定。 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水(28:72)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm;理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500，芍藥苷峰與 相鄰峰的分離度應(yīng)符合要求。對(duì)照品溶液的制備取8(TC干燥至恒重的芍藥苷對(duì)照品約10mg，精密稱定，置10ml 量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取lml置50ml量瓶中，加流動(dòng)相至刻 度，搖勻，即得。供試品溶液的制備取取本發(fā)明中藥復(fù)方丸劑日用劑量的5/3，研細(xì)，取細(xì)粉約曰用 劑量的5/18，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加25X乙醇50ml，密塞，稱定重量，超聲(功 率160W，頻率50Hz)處理30分鐘，放至室溫，稱定重量，用25%乙醇補(bǔ)足減失的重量， 搖勻，離心，精密吸取上清液lml，加水10ml，置于已處理好的SEP-PAKCw (重量規(guī)格 360mg)小柱上，用10ml水洗脫，再用1(m甲醇2ml洗脫，棄去上述洗脫液，繼用60%甲 醇10ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用6096甲醇溶解并移至2ml量瓶?jī)?nèi)，加60%甲醇至刻 度，搖勻，作為供試品溶液。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10iil，注入液相色譜儀，測(cè)定， 計(jì)算，即得。本品每日服用劑量的l/6含白芍按芍藥苷(C2晶80u)計(jì)，不得少于0.45mg。 實(shí)施例10: 本發(fā)明膠囊劑的質(zhì)量控制方法鑒別A. 取本發(fā)明膠囊劑日服用量的25/18，研細(xì)，加濃氨溶液2ml與乙醚30ml，浸漬1 小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖糽ml使溶解，作為供試品溶液。另取延 胡索對(duì)照藥材0.62g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取延胡索乙素對(duì)照品，加乙醇制成每 lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取 供試品溶液、對(duì)照藥材溶液各10nl、對(duì)照品溶液2ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上， 以石油醚(60 90。C)-乙酸乙酯(2: 1.7)為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸氣中熏， 置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上， 顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。B. 取本發(fā)明膠囊劑日服用量的25/18，研細(xì)，加石油醚(60 90t:)30m1,冷浸1小 時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液蒸至約lml，作為供試品溶液。另取肉桂對(duì)照藥材0.85g,同 法制成對(duì)照藥材溶液。再取桂皮醛對(duì)照品，加乙醇制成每lml含lul的溶液，作為對(duì)照 品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液 各10yl、對(duì)照品溶液5wl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60 90'C)-乙酸 乙酯(17:' 3)為展開劑，展開，濕度控制在45% 65%范圍內(nèi)，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相詞顏色的斑點(diǎn)；在 于對(duì)照^色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙紅色斑點(diǎn)。C.取本發(fā)明膠囊劑日服用量的25/18，研細(xì)，加乙醚40ml，冷浸1小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖， 濾過，藥渣加甲醇30ml，加熱回流l小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用 正丁醇振搖提取2次，每次20ml (必要時(shí)離心)，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)铀?0ml 溶解，離心，取上清液置于已處理好的SEP-PAKCw(重量規(guī)格360mg)小柱上，用水和甲醇 洗脫，收集甲醇洗脫液，濃縮至lml，作為供試品溶液。另取甘草對(duì)照藥材0.5g，同法 制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液IO Pl、對(duì)照藥材溶液3ul，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以正丁醇-濃氨水-水-乙醇 (50: 4: 16: IO)為展開劑,展開，展開溫度為20—30。C，取出，晾干，置紫外光燈(254nm) 下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VI D)測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水(28: 72)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm;理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500，芍藥苷峰與 相鄰峰的分離度應(yīng)符合要求。對(duì)照品溶液的制備取80'C干燥至恒重的芍藥苷對(duì)照品約10mg，精密稱定，置10ml 量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取lml置50ml量瓶中，加流動(dòng)相至刻 度，搖勻，即得。供試品溶液的制備取取本發(fā)明中藥復(fù)方膠囊制劑日用劑量的5/3，研細(xì)，取細(xì)粉約 日用劑量的5/18,精密稱定，置具塞錐形瓶中，加25X乙醇50ml，密塞，稱定重量，超 聲(功率160W，頻率50Hz)處理30分鐘，放至室溫，稱定重量，用25%乙醇補(bǔ)足減失 的重量，.搖勻，離心，精密吸取上清液lml，加水10ml，置于已處理好的SEP-PAKC18 (重 量規(guī)格360mg)小柱上，用10ml水洗脫，再用10%甲醇2ml洗脫，棄去上述洗脫液，繼 用60%甲醇10ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用60先甲醇溶解并移至2nd量瓶?jī)?nèi)，加60% 甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10yl，注入液相色譜儀，測(cè)定， 計(jì)算，即得。本品每日用劑量的l/6含白芍按芍藥苷(C23H280u)計(jì)，不得少于0.45mg。
權(quán)利要求
1. 一種由肉桂85-115重量份、延胡索65-85重量份、牡蠣65-85重量份、小茴香30-45重量份、砂仁20-30重量份、高良姜10-15重量份、白芍120-160重量份、炙甘草85-115重量份組成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括如下鑒別中的一種或幾種A.取所述中藥復(fù)方制劑日用劑量的25/18，研細(xì)，加濃氨溶液2ml與乙醚30ml，浸漬1小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液；另取延胡索對(duì)照藥材0.62g，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取延胡索乙素對(duì)照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液各10μl、對(duì)照品溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為2∶1.5-2的60～90℃石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸氣中熏，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；B.取所述中藥復(fù)方制劑日用劑量的25/18，研細(xì)，加60～90℃石油醚30ml，冷浸1小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液蒸至1ml，作為供試品溶液；另取肉桂對(duì)照藥材0.85g，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取桂皮醛對(duì)照品，加乙醇制成每1ml含1μl的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液各10μl、對(duì)照品溶液5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為15-20∶3的60～90℃石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在于對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙紅色斑點(diǎn)；C.取所述中藥復(fù)方制劑日用劑量的10/3，研細(xì)，加乙醚40ml，冷浸1小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，藥渣加甲醇30ml，加熱回流1小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)铀?0ml溶解，離心，取上清液置于已處理好的重量規(guī)格為360mg的SEP-PAKC18小柱上，用水和甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，濃縮至1ml，作為供試品溶液；另取甘草對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液10μl、對(duì)照藥材溶液3μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以體積比為40-50∶3-5∶12-20∶8-12的正丁醇-濃氨水-水-乙醇為展開劑，展開，取出，晾干，置254nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
2 、如權(quán)利要求1所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于鑒別方法A釆用體積比為2: 1. 7 的60 9(TC石油醚-乙酸乙酯為展開劑；鑒別方法B采用體積比為17: 3的60 90'C石油醚-乙酸乙酯為展開劑；C鑒別方法采用體積比為50: 4: 16: 10的正丁醇-濃氨水-水-乙醇為展開劑。
3、 如權(quán)利要求1或2所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于鑒別方法B展開相對(duì)濕度 在45% 65%范圍內(nèi)；鑒別方法C展開溫度為20—30。C。
4、 如權(quán)利要求1或2所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述鑒別方法A或B中硅 膠G薄層板是市售的常規(guī)硅膠薄層板或以硅膠G為固定相，以0. 2 0. 5%羧甲基纖維素鈉 溶液為黏合劑制成規(guī)格100X200mm，厚度0. 25 0. 30mm的手鋪硅膠G薄層板；鑒別方法 C中硅膠GF254薄層板是市售的常規(guī)硅膠薄層板或以硅膠G F254為固定相，以0. 2 0. 5% 羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑制成規(guī)格100X200咖，厚度0. 25 0. 30mm的手鋪硅膠G F254薄層板。
5、 如權(quán)利要求3所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述鑒別方法A或B中硅膠G薄 層板是市售的常規(guī)硅膠薄層板或以硅膠G為固定相，以0. 2 0. 5%羧甲基纖維素鈉溶液為 黏合劑制成規(guī)格100X200腿，厚度0. 25 0. 30mm的手鋪硅膠G薄層板；鑒別方法C中硅 膠GF254薄層板是市售的常規(guī)硅膠薄層板或以硅膠G F254為固定相，以0.2~0.5%羧甲 基纖維素鈉溶液為黏合劑制成規(guī)格100X200mra，厚度0. 25 0. 30mra的手鋪硅膠G F254 薄層板。
6、 如權(quán)利要求l、 2或5所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法還包括如下含量 測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為 填充劑，以體積比為28: 72甲醇-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm;理論板數(shù)按芍藥苷峰 計(jì)算應(yīng)不低于1500,芍藥苷峰與相鄰峰的分離度應(yīng)符合要求；取80'C干燥至恒重的芍藥 苷對(duì)照品10mg,精密稱定，置10ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取 lml置50ml量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液；取所述中藥復(fù)方制劑日 用劑量的5/3，精密稱定，研細(xì)，取中藥復(fù)方制劑細(xì)粉約日用劑量的5/18,精密稱定， 置具塞錐形瓶中，加25X乙醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放至室溫， 稱定重章，用25%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心，精密吸取上清液lml，加水10ml， 置于已處理好的重量規(guī)格為360mg的SEP-PAKCw小柱上，用10ml水洗脫，再用10%甲醇 2ml洗脫，棄去上述洗脫液，繼用60%甲醇10ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用60%甲醇溶 解并移至2ml量瓶?jī)?nèi)，加60%甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10U1，注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算，即得；本發(fā)明中藥復(fù)方制劑日服用劑量的1/6含白芍按芍藥苷023仏80 計(jì)，不得少于0. 45mg。
7、 如權(quán)利要求3所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法還包括如下含量測(cè)定方法: 照高效液相色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VI D)測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為28: 72甲醇-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為 230nm;理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500，芍藥苷峰與相鄰峰的分離度應(yīng)符合要求; 取80'C干燥至恒重的芍藥苷對(duì)照品10mg，精密稱定，置10ml量瓶中，用甲醇溶解并稀 釋至刻度，搖勻，精密量取lml置50ml量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶 液；取所述中藥復(fù)方制劑日用劑量的5/3，研細(xì)，取細(xì)粉約日用劑量的5/18,精密稱定， 置具塞錐形瓶中，加25X乙醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放至室溫， 稱定重量，用25%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心，精密吸取上清液lml，加水10ml， 置于已處理好的重量規(guī)格為360mg的SEP-PAKU小柱上，用10ml水洗脫，再用10%甲醇 2ml洗脫，棄去上述洗脫液，繼用60%甲醇10ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用60%甲醇溶 解并移至2ml量瓶?jī)?nèi)，加60%甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；分別精密吸取對(duì)照品 溶液與供試品溶液各10ixl,注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算，即得；本發(fā)明中藥復(fù)方制劑日 服用劑量的1/6含白芍按芍藥苷(:2晶80 計(jì)，不得少于0. 45rag。
8、 如權(quán)利要求4所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法還包括如下含量測(cè)定 照高效液相色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VI D)測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑，以體積比為28: 72甲醇-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為 230nm;理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500，芍藥苷峰與相鄰峰的分離度應(yīng)符合要求； 取80'C干燥至恒重的芍藥苷對(duì)照品10mg，精密稱定，置10ml量瓶中，用甲醇溶解并稀 釋至刻度，搖勻，精密量取lml置50ml量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶 液；取所述中藥復(fù)方制劑日用劑量的5/3,研細(xì)，取細(xì)粉約日用劑量的5/18,精密稱定， 置具塞錐形瓶中，加25X乙醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放至室溫， 稱定重量,用25%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻,離心,精密吸取上清液lml,加水10ml,置于 已處理好的重量規(guī)格為360mg的SEP-PAKC,8小柱上，用10ml水洗脫，再用10%甲醇2ml 洗脫，棄去上述洗脫液，繼用60%甲醇10ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用60%甲醇溶解 并移至2ml量瓶?jī)?nèi)，加60%甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；分別精密吸取對(duì)照品溶 液與供試品溶液各10lU，注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算，即得；本發(fā)明中藥復(fù)方制劑曰 服用劑M的1/6含白芍按芍藥苷C23H2s0n計(jì)，不得少于0. 45mg。
9、 如權(quán)利要求1所述的中藥復(fù)方片劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括如下鑒別和/或含量測(cè)定 鑒別方法A. 取片劑5g，研細(xì)，加濃氨溶液2ml與乙醚30ml，浸漬1小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過， 濾液蒸干，殘?jiān)右掖糽ml使溶解，作為供試品溶液；另取延胡索對(duì)照藥材0.62g,同法 制成對(duì)照藥材溶液；再取延胡索乙素對(duì)照品，加乙醇制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì) 照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液各10ul、對(duì)照品溶液2 Pl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比為2: 1. 7的60 90'C石油醚-乙酸乙酯為 展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸氣中熏，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中， 在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；B. 取片劑5g，研細(xì)，加60 90'C石油醚30ml，冷浸1小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾 液蒸至約lml，作為供試品溶液；另取肉桂對(duì)照藥材0.85g，同法制成對(duì)照藥材溶液；再 取桂皮醛對(duì)照品，加乙醇制成每lml含liil的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試 驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液各10ul、對(duì)照品溶液5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以體積比為17: 3的60 90。C石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干， 噴以二硝基苯肼乙醇試液；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏 色的斑點(diǎn)；在于對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙紅色斑點(diǎn)；C. 取片劑12g，研細(xì)，加乙醚40ml，冷浸1小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過，藥渣加甲醇30ml， 加熱回流l小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用正丁醇振搖提取2次，每 次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)铀?0ml溶解，離心，取上清液置于已處理好的重 量規(guī)格360mg的SEP-PAKC,8小柱上，用水和甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，濃縮至lml， 作為供試品溶液；另取甘草對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)， 吸取供試品溶液10ul、對(duì)照藥材溶液3nl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以體積 比為50: 4: 16: 10的正丁醇-濃氨水-水-乙醇為展開劑，展開，取出，晾干，置254nm 紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；含量測(cè)定方法照高效液相色譜法測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為 填充劑，以體積比為28: 72的甲醇-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm;理論板數(shù)按芍藥苷 峰計(jì)算應(yīng)不低于1500，芍藥苷峰與相鄰峰的分離度應(yīng)符合要求；取80'C干燥至恒重的芍 藥苷對(duì)照品約10mg，精密稱定，置10ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密 量取lml置50ml量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液；取所述中藥復(fù)方制 劑日用劑量的5/3,研細(xì)，取細(xì)粉約日用劑量的5/18，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加25X乙醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放至室溫，稱定重量，用25%乙 醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心，精密吸取上清液lml，加水10ml，置于已處理好的重 量規(guī)格360mg的SEP-PAKU小柱上，用10ml水洗脫，再用10%甲醇2ml洗脫，棄去上述 洗脫液，繼用60%甲醇10ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用6(m甲醇溶解并移至2ml量瓶 內(nèi)，加60%甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液 各10ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算，即得；片劑每片含白芍按芍藥苷(^280 計(jì)， 每片0. 6克不得少于0. 45mg;每片0. 3克不得少于0. 22mg。
10、如權(quán)利要求9所述的中藥復(fù)方片劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該中藥復(fù)方片 劑是由如下方法制備的白芍、炙甘草加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過， 濾液濃縮成稠膏；其余肉桂等六味粉碎成細(xì)粉，與上述稠膏混勻，干燥，粉碎成細(xì)粉， 加入適量輔料，混勻，制粒，壓制成片，每片0.3g或0.6g。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種由肉桂、延胡索、牡蠣、小茴香、砂仁、高良姜、白芍等原料藥組成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法。該方法包括延胡索、肉桂、甘草的鑒別方法和白芍的含量測(cè)定方法。胡索鑒別方法以體積比為2∶1.7的60～90℃石油醚-乙酸乙酯為展開劑；肉桂鑒別方法以體積比為17∶3的60～90℃石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開時(shí)濕度優(yōu)先控制在45％～65％范圍內(nèi)；甘草鑒別方法以體積比為50∶4∶16∶10的正丁醇-濃氨水-水-乙醇為展開劑，展開時(shí)溫度優(yōu)選20-30℃。該鑒別方法色譜特征明顯；陰性對(duì)照無(wú)干擾，靈敏度高，專屬性強(qiáng)。
文檔編號(hào)A61K35/56GK101244230SQ200710063999
公開日2008年8月20日 申請(qǐng)日期2007年2月16日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月16日
發(fā)明者劉鐵薇, 梁勇軍, 謝錦桃, 琴 陸 申請(qǐng)人:深圳市中聯(lián)制藥有限公司