專利名稱：：酪酸梭菌在制備預(yù)防和治療腸癌藥物組合物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及酪酸梭菌的藥物新用途，具體涉及酪酸梭菌在制備預(yù)防和治療腸癌藥物組合物中的應(yīng)用，其中所述酪酸梭菌作為主要藥物活性成份制成活菌制劑，屬于生物
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：近期研究表明，與大部分癌癥發(fā)病率逐年下降相反，世界上腸癌的發(fā)病率正以年均2%的速度上升，而上海的調(diào)査顯示，我國腸癌發(fā)病率的增速是世界平均水平的兩倍，達(dá)到年均4%。大腸癌已經(jīng)是癌癥中的首要?dú)⑹种?，每年?4萬人被確診。還有調(diào)査顯示，大腸癌的發(fā)病年齡趨于年輕化。大腸癌是威脅人們健康的惡性腫瘤之一，在世界范圍內(nèi)屬于4大常見惡性腫瘤之一，在發(fā)達(dá)國家大腸癌已成為死亡率位居第2位的惡性腫瘤，且大腸癌的發(fā)病率呈逐年升高趨勢。根據(jù)西方國家大腸癌的發(fā)病趨勢預(yù)測，每個活到70歲以上的人均有50%的概率發(fā)生大腸腫瘤(包括早期良性息肉，估計(jì)10%的良性息肉發(fā)展成癌)，每個人有6%的機(jī)會患大腸癌，對于婦女每17人中有1人可能患大腸癌，我國近年大腸癌有明顯上升趨勢，尤其經(jīng)濟(jì)較發(fā)達(dá)的沿海城市和東部地區(qū)，并且目前大腸癌在我國大部分地區(qū)已經(jīng)成為發(fā)病率上升最快的惡性腫瘤之一。大腸癌是我國常見腫瘤之一，占全國惡性腫瘤死因的第五位。因此，尋找能預(yù)防腸癌發(fā)生且沒有任何毒副作用的藥品、保健食品和飲品等迫在眉睫，如早期預(yù)防結(jié)或直腸息肉、血吸蟲病、細(xì)菌性痢疾、阿米巴、克羅恩病及潰瘍性結(jié)腸炎等易發(fā)展為腸癌的腸道慢性疾病癌變的治療藥物。大腸癌除晚期外，一般都要手術(shù)治療，手術(shù)后再配合放療、化療、免疫治療和中藥治療等。放療、化療、免疫治療雖然效果明顯，但副作用非常大，患者很難耐受，有的患者甚至死于副作用。中藥雖然副作用小，但效果不理想。本發(fā)明藥物組合物預(yù)防、治療或輔助治療腸癌療效顯著，尤其腸癌手術(shù)后輔助治療具有獨(dú)特的效果，且沒有任何副作用，可以長期應(yīng)用預(yù)防和治療腸癌，特申請此發(fā)明專利。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明人通過深入的基礎(chǔ)和臨床研究發(fā)明以酪酸梭菌為主要藥物活性成份制成藥物、保健食品或飲品，長期應(yīng)用可以有效預(yù)防和治療腸癌。預(yù)防結(jié)或直腸息肉、血吸蟲病、細(xì)菌性痢疾、阿米巴、克羅恩病及潰瘍性結(jié)腸炎等易發(fā)展為腸癌的腸道慢性疾病癌變；晚期不能手術(shù)的腸癌患者放、化時，同時應(yīng)用酪酸梭菌可以有效抑制腫瘤生長和延緩進(jìn)一步擴(kuò)散轉(zhuǎn)移，提高機(jī)體免疫力，緩解腹痛、腹瀉等癥狀，提高生活質(zhì)量，延長壽命；腸癌手術(shù)患者手術(shù)后應(yīng)用酪酸梭菌輔助治療，可以促進(jìn)手術(shù)創(chuàng)面的愈合、預(yù)防手術(shù)創(chuàng)面的感染和抗炎、預(yù)防腸癌復(fù)發(fā)和擴(kuò)散轉(zhuǎn)移、提高腸癌患者機(jī)體免疫力。由于酪酸梭菌屬于益生菌，沒有任何毒副作用，可以長期應(yīng)用。.通過研究發(fā)現(xiàn)酪酸梭菌預(yù)防和治療腸癌的作用機(jī)制主要為以下幾個方面1、分泌酪酸，調(diào)控基因表達(dá)酪酸梭菌進(jìn)入腸道后能分泌大量酪酸，酪酸是一種去乙?；?HDAC)抑制劑，主要通過改變組蛋白的乙?；潭葋砀淖?nèi)旧|(zhì)結(jié)構(gòu)，調(diào)控P"等多種基因的表達(dá)，終止腸癌細(xì)胞生長，誘導(dǎo)腸癌細(xì)胞成熟分化，誘導(dǎo)腸癌細(xì)胞凋亡，能有效預(yù)防癌變、防止腸癌復(fù)發(fā)和擴(kuò)散轉(zhuǎn)移。2、分泌酪酸，營養(yǎng)腸道，修復(fù)腸粘膜腸粘膜所需能量的70%來源于酪酸，酪酸是腸粘膜細(xì)胞的主要能量來源和營養(yǎng)物質(zhì)，能為腸提供代謝能量，促進(jìn)腸上皮細(xì)胞增殖與粘膜生長。同時，酪酸能刺激介導(dǎo)腸上皮細(xì)胞增殖和腸粘膜生長的胃腸激素的生成，如胃泌素、腸高糖素、酪酪肽等。從而促進(jìn)腸癌手術(shù)后創(chuàng)U的愈合，促進(jìn)慢性腸道疾病受損腸粘膜的修復(fù)減少癌變的發(fā)生。研究表明酪酸梭菌能明顯縮小潰瘍性結(jié)腸炎大鼠腸粘膜的潰瘍面積。3、產(chǎn)生激肽酶，溶解癌組織酪酸梭菌能產(chǎn)生激肽酶分解緩激肽，使癌組織內(nèi)的毛細(xì)血管循環(huán)破壞，從而使癌組織壞死，達(dá)到溶癌作用。4、抑制腸道有害菌，消除腸道毒素，預(yù)防術(shù)后感染酪酸梭菌能分泌酪酸菌素，抑制腸出血性大腸桿菌、痢疾志賀菌、傷寒沙門菌和金黃色葡萄球菌等腸道有害菌，消除產(chǎn)毒源，減少腸道氨、胺、吲哚、糞臭素等腸道毒素對腸道的進(jìn)一步損害，同時能夠預(yù)防腸癌術(shù)后傷口的感染及其他腸道感染。5、消除炎癥酪酸梭菌能下調(diào)IL-2、IL-8等致炎癥因子的過度表達(dá)，促進(jìn)炎癥或術(shù)后創(chuàng)口的愈合。6、提高機(jī)體免疫力酪酸梭菌能促進(jìn)單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的吞噬功能，增加血清溶血素的生成，升高白細(xì)胞等，提高機(jī)體免疫力，腸癌患者應(yīng)用酪酸梭菌可以提高機(jī)體免疫力，抑制癌細(xì)胞的生長和擴(kuò)散轉(zhuǎn)移，放化療導(dǎo)致機(jī)體免疫力下降，放化療時服用酪酸梭菌可以提高機(jī)體免疫力。7、恢復(fù)腸道菌群平衡，建立腸道生物屏障酪酸梭菌進(jìn)入腸道分泌酪酸菌素抑制有害菌，分解多糖為低聚糖促進(jìn)腸道有益菌生長，快速恢復(fù)腸道菌群平衡，建立牛物屏障，維護(hù)腸道健康，腸癌患者由于放化療等原因均存在腸道菌群失調(diào)。對于結(jié)或直腸息肉、血吸蟲病、細(xì)菌性痢疾、阿米巴、克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎等易發(fā)展為腸癌的腸道慢性病變，可以長期應(yīng)用酪酸梭菌制劑預(yù)防癌變的發(fā)生。許多腸癌患者都死丁-復(fù)發(fā)和擴(kuò)散轉(zhuǎn)移，對于腸癌患者，包括晚期不能手術(shù)或手術(shù)后的患者，均可長期應(yīng)用酪酸梭菌輔助治療，促進(jìn)手術(shù)創(chuàng)口愈合，抑制腸癌復(fù)發(fā)和擴(kuò)散轉(zhuǎn)移，防止或延緩腸癌進(jìn)一步發(fā)展惡化。本發(fā)明所述酪酸梭菌選自但不限于酪酸梭菌^7os紅i&'柳^&W'C鵬入CGMCC、保存編號0313.1。本發(fā)明所述的酪酸梭菌指活生物個體。本發(fā)明所述應(yīng)用是指將酪酸梭菌制劑通過口服、灌腸或注入癌組織內(nèi)等方式，用于預(yù)防和治療腸癌。本發(fā)明以酪酸梭菌為主要藥物活性成份制成的制劑，可以是單獨(dú)以酪酸梭齒為活性成份制成相關(guān)劑型，也可以與其他活性成份組合制成藥物組合物，提高治療效果。本發(fā)明是以有效劑量的酪酸梭菌根據(jù)上面所述作為主要藥物活性成份，按照一定的制劑工藝，加入常規(guī)的賦性劑、調(diào)味劑、崩解劑、防腐劑、潤滑劑、濕潤劑、黏合劑、溶劑、增稠劑、增溶劑等藥物輔料，制成任何一種適合于臨床上使用的劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液體制劑、其他液體制劑或灌腸劑等臨床所需劑型。本發(fā)明所指有效劑量是指以酪酸梭菌根據(jù)上面所述作為主要藥物活性成份制成的最終同體活菌制劑包含的總活菌數(shù)不能低于lX105CFU/g，一般在IX107CFU/g以上，最高可達(dá)到1X10'tFU/g或lX1012CFU/g以上。本發(fā)明所指有效劑量是指以酪酸梭菌根據(jù)卜.面所述作為主要藥物活性成份制成的最終液體活菌制劑包含的總活菌數(shù)不能低于lX105CFU/mL，一般在IX107CFU/mL以上，最高可達(dá)到1X1012CFU/mL或1X1012CFU/mL以上。本發(fā)明優(yōu)選的制劑工藝為，先在液體培養(yǎng)基中接種菌種，進(jìn)行培養(yǎng)或多級擴(kuò)增培養(yǎng)，然后將液態(tài)培養(yǎng)物離心，收集濕菌泥，并將所述菌泥干燥、粉碎，得到干燥菌粉。將所得干燥菌粉與藥用載體混合，制成最終劑型。由于本發(fā)明首次公開了以酪酸梭菌為主要藥物活性成份在制備預(yù)防和治療腸癌藥物組合物中的應(yīng)用，因此，以酪酸梭菌作為藥物活性成份與輔料組合制成藥劑，只要是該藥劑用于預(yù)防和治療腸癌，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明的酪酸梭菌在制成任何一種劑型時，均具有預(yù)防和治療腸癌的作用。任何藥劑，如果其組份中含有酪酸梭菌成份制備成藥，在其包裝或說明書等標(biāo)識上或者在其他任何宣傳品上只要注明或提示具有預(yù)防和治療腸癌的作用，則落入本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。本發(fā)明的酪酸梭菌屬于益生菌。因此，也可以將酪酸梭菌制成保健食品或飲品。將酪酸梭菌制成的保健食品或飲品，如果在其包裝或說明書等標(biāo)識上或者在其他任何宣傳品上只要注明或提示具有預(yù)防和治療腸癌的作用，則落入本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。具體實(shí)施例方式藥物制備例說明以酪酸梭菌為藥物活性成分制成膠囊劑為例，說明制備方法。制備方法不只局限以下的方法，公知的方法均可以。藥物制備實(shí)施例1、酪酸梭菌活菌菌粉制備取酪酸梭菌活菌菌種管一支，溶于已滅菌裝有10ml生理鹽水和玻璃珠的100ml三角瓶中，活化10分鐘，用lml無菌吸管吸取lml菌懸液接種裝有50ml擴(kuò)增培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，置搖擺床內(nèi)37。C恒溫振蕩(190rpm)培養(yǎng)24小時，轉(zhuǎn)接裝有450ml擴(kuò)增培養(yǎng)基2500ml檔板三角瓶中，37"C恒溫振蕩培養(yǎng)24小時，鏡檢無雜菌后再轉(zhuǎn)接于裝有4.5L擴(kuò)增培養(yǎng)基的種子罐中，厭氧培養(yǎng)(充氣量3:1)24小時，鏡檢無雜菌后轉(zhuǎn)接有45L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，37。C厭氧培養(yǎng)24小時，鏡檢芽孢率達(dá)80%以上，停止培養(yǎng)。用連續(xù)離心機(jī)，12000rpm離心。收集濕菌泥，稱重，按l:1(w/v)添加適量脫脂奶粉等保護(hù)劑后，干燥，粉碎，常溫保存?zhèn)溆?。藥物制備?shí)施例2、酪酸梭菌活菌膠囊制備成份酪酸梭菌活菌菌粉微晶纖維素%(重量)20.00份40.00份葡萄糖40.00份將上述組份中13組中充分拌勻，然后利用常規(guī)灌裝膠囊技術(shù)按單位劑量制成膠囊。療效觀察實(shí)驗(yàn)例1、酪酸梭菌預(yù)防腸癌的實(shí)驗(yàn)研究1、實(shí)驗(yàn)方法選體重為18-20g的雌性昆明種小鼠40只，隨機(jī)分為給藥組和對照組(每組20只)，實(shí)驗(yàn)時間為20周。致癌劑為1，2-二甲肼(symmetrical1，1-dimethylhydrazine，DMH)，為白色粉狀結(jié)晶，每次臨注射前以無菌生理鹽水配成0.4%溶液，并用NaHC03將其pH調(diào)至6.5。每周給小鼠腹腔注射DMH20mg/kg(即0.4^DMH溶液0.05ml/10g)一次，連續(xù)20周。于腹腔注射DMH1周后，飲水中添加右旋葡聚糖苷鈉(DSS)，濃度為20g/L，連續(xù)飲用7天。給藥組，腹腔注射DMH的同時，酪酸梭菌CGMCC0313-l制劑(107CFU/ml)灌胃，每次0.5mL，每天1次，連續(xù)20周。對照組，腹腔注射DMH的同時，生理鹽水灌胃，每次0.5mL，每天1次，連續(xù)20周。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)束的第20周后，用乙醚將小鼠麻醉致死后，打開腹腔，觀察腸道變化。結(jié)果表明對照組20只小鼠，大腸腸壁出現(xiàn)小結(jié)節(jié)，腸道皺褶減少或消失，腸道質(zhì)地堅(jiān)硬，100%生成了腸癌。給藥組，有8只小鼠大腸腸壁出現(xiàn)小結(jié)節(jié)，腸道皺褶減少或消失，腸道質(zhì)地堅(jiān)硬，40%生成了腸癌。3、討論本實(shí)驗(yàn)表明，酪酸梭菌能明顯預(yù)防潰瘍性結(jié)腸炎的癌變，預(yù)防率達(dá)到了60%，因此可以把酪酸梭菌制成相關(guān)劑型，用于預(yù)防腸癌，尤其用于預(yù)防結(jié)或直腸息肉、血吸蟲病、細(xì)菌性痢疾、阿米巴、克羅恩病及潰瘍性結(jié)腸炎等腸道慢性疾病發(fā)生癌變，維護(hù)人類腸道健康。大部分腸癌患者都死于手術(shù)后的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，因此酪酸梭菌也可以用于腸癌手術(shù)后預(yù)防復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，同時手術(shù)后服用酪酸梭菌制劑可以促進(jìn)傷口的愈合，可以抑制有害菌、抗炎預(yù)防感染，可以提高機(jī)體免疫力。療效觀察實(shí)驗(yàn)例2、酪酸梭菌治療腸癌的實(shí)驗(yàn)研究1、實(shí)驗(yàn)方法BALB/c小鼠20只，取動物皮下傳代的小鼠結(jié)腸癌C26瘤組織，以生理鹽水按l:3的比例稀釋成懸液，按0.2ml/只接種于小鼠腋窩皮下，然后將小鼠分為給藥組和對照組(每組10只)。給藥組分別在接種72小時、144小時后于瘤組織內(nèi)注射酪酸梭菌溶液(107CFU/ml)0.lmL/只。對照組分別在接種72小時、144小時后于瘤組織內(nèi)注射生理鹽水0.1mL/只。實(shí)驗(yàn)第12天測量各組動物的腫瘤體積，并按腫瘤體積計(jì)算抑瘤率。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>給藥組抑瘤率與對照組比較P〈0.013、討論實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，酪酸梭菌具有明顯的抗腸癌作用，晚期不能手術(shù)的腸癌患者或手術(shù)后的腸癌患者，均可應(yīng)用酪酸梭菌制劑進(jìn)行治療或輔助治療和預(yù)防復(fù)發(fā)和擴(kuò)散轉(zhuǎn)移。療效觀察實(shí)驗(yàn)例3、腸癌手術(shù)后患者服用口服酪酸梭菌活菌膠囊療效觀察劉XX，男，68歲，三年前出現(xiàn)便血、腹瀉、腹痛等癥狀，診斷為腸癌I期(Dukes'A)，行手術(shù)切除治療，術(shù)后持續(xù)腹痛。手術(shù)后l周開始服用口服酪酸梭菌活菌膠囊(420mg/粒，1.0X107CFU/g，青島東海藥業(yè)有限公司提供)，3粒/次，3次/天，服用第3天疼痛減輕，l周后疼痛消失。連續(xù)服用i年，至今已3年，未見腹痛、腹部不適、便血、腹瀉等癥狀出現(xiàn)，到醫(yī)院檢査未發(fā)現(xiàn)任何異常，腸癌未復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。本發(fā)明在實(shí)施過程中所使用的微生物菌種已分別于1997年7月28日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(北京市海淀區(qū)中關(guān)村北一條13號，中國科學(xué)院微生物研究所郵編100080)保藏，但本發(fā)明所述的酪酸梭菌并不局限于這種微生物菌株。分類命名酪酸梭菌C7os力i^/i咖k/tjrfcw邁，保存編號01313,1。上述微生物菌株經(jīng)該微生物中心檢測，檢測結(jié)果均為存活。權(quán)利要求1、酪酸梭菌在制備預(yù)防和治療腸癌藥物組合物中的應(yīng)用，其中所述酪酸梭菌作為主要藥物活性成份制成活菌制劑。2、按權(quán)利要求l所述應(yīng)用，其特征在于酪酸梭菌在制備預(yù)防腸道慢性疾病癌變藥物組合物中的應(yīng)用，腸道慢性疾病包括結(jié)或直腸息肉、血吸蟲病、細(xì)菌性痢疾、阿米巴、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎。3、按權(quán)利要求l所述應(yīng)用，其特征在于酪酸梭菌在制備輔助治療晚期腸癌藥物組合物中的應(yīng)用。4、按權(quán)利要求l所述應(yīng)用，其特征在于酪酸梭菌在制備腸癌手術(shù)后輔助治療藥物組合物中的應(yīng)用，包括促進(jìn)手術(shù)創(chuàng)面的愈合、預(yù)防手術(shù)創(chuàng)面的感染和抗炎、預(yù)防腸癌復(fù)發(fā)和擴(kuò)散轉(zhuǎn)移、提高腸癌患者機(jī)體免疫力。5、按權(quán)利要求1所述應(yīng)用，其特征在于酪酸梭菌包含酪酸梭菌CGMCC0313.1株。6、按權(quán)利要求l所述應(yīng)用，其特征在于將有效劑量的權(quán)利要求1所述的酪酸梭菌和藥學(xué)上可接受的不同載體制成片劑、膠囊劑、散劑、液體制劑、栓劑、灌腸劑。7、按權(quán)利要求l所述應(yīng)用，其特征在于酪酸梭菌活菌制劑口服給藥、肛門給藥或注入腫瘤組織內(nèi)。8、按權(quán)利要求l所述應(yīng)用，其特征在于藥物組合物包含藥品、保健食品、飲品。全文摘要本發(fā)明公開了酪酸梭菌的藥物新用途，具體涉及酪酸梭菌在制備預(yù)防和治療腸癌藥物組合物中的應(yīng)用，包括預(yù)防腸息肉、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎等慢性腸道疾病癌變、晚期不能手術(shù)腸癌的輔助治療、腸癌手術(shù)后的輔助治療等，酪酸梭菌選自但不限于酪酸梭菌(Clostridiumbutyricum)、CGMCC、保存編號0313.1。酪酸梭菌以活菌的形式和藥學(xué)上可接受的不同載體制成片劑、膠囊劑、散劑、液體制劑、栓劑、灌腸劑，酪酸梭菌可以通過口服、灌腸、注入瘤組織內(nèi)等方式長期應(yīng)用預(yù)防和治療腸癌，延長腸癌患者壽命，提高腸癌患者生活質(zhì)量。文檔編號A61P35/00GK101306020SQ20071010339公開日2008年11月19日申請日期2007年5月20日優(yōu)先權(quán)日2007年5月20日發(fā)明者崔云龍,李洪福申請人:青島東海藥業(yè)有限公司;北京東方百信生物技術(shù)有限公司