專利名稱：一種中藥制劑在制備治療和預(yù)防婦科疾病藥物上的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥制劑在制備治療和預(yù)防婦科疾病藥物上的用途，特別是在治療乳腺增生病/癥、子宮肌瘤以及防治乳腺癌上的藥物上的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
乳腺增生病又稱“乳腺結(jié)構(gòu)不良”，在病理上表現(xiàn)為小葉導(dǎo)管和腺泡增多，間質(zhì)結(jié)締組織增生等而形成一系列病理改變，導(dǎo)致乳腺內(nèi)部供血變化。為成年婦女常見多發(fā)病，近年認為，乳腺增生病是乳腺癌發(fā)病的重要因素之一，尤其是乳腺增生病非典型增生階段，為乳腺癌的癌前病變。目前，治療乳腺增生的中醫(yī)中藥有乳僻消、乳塊消、乳安片、百消丹、逍遙丸、小金丹等。西藥有5％碘化鉀、溴隱停、丹那唑。但中藥存在著服藥周期長，效果不佳的缺陷，西藥的副作用較大。
子宮肌瘤(uterine myoma)醫(yī)學上被稱為子宮平滑肌瘤，是女性生殖器官中最常見的良性腫瘤，也是人體中常見的腫瘤之一。子宮肌瘤主要由子宮平滑肌細胞增生而形成。其中有少量結(jié)締組織纖維僅作為一種支持組織而存在。子宮肌瘤的臨床表現(xiàn)常隨肌瘤生長的部位，大小，生長速度，有無繼發(fā)變性及合并癥等而異?，F(xiàn)有的中藥的服藥期長，療效慢，治療子宮肌瘤的藥物主要是西藥。雖然有若干項中國專利申請涉及治療子宮肌瘤的中藥制劑，但市場上使用較多的僅有修正藥業(yè)、吉林首席藥業(yè)等生產(chǎn)的婦康片。
乳腺癌(mammary carcinoma)是人類最常見的一種惡性腫瘤，也是女性主要惡性腫瘤之一。女性的乳房組織與女性的內(nèi)分泌、雌激素有直接關(guān)連。男性患乳腺癌的機會只有女性患者的百分之一。女性乳房的發(fā)育是受雌激素的影響。已經(jīng)證實雌酮與雌二醇對乳腺癌有影響。乳房的惡性腫瘤絕大多數(shù)系源于乳腺的上皮組織(乳癌)，少數(shù)可源自乳房的各種非上皮組織(各種肉瘤)，偶可見到混合性的癌肉瘤。研究表明，絕經(jīng)前和絕經(jīng)后雌激素是刺激發(fā)生乳腺癌的明顯因素。此外，遺傳因素、飲食因素、外界理化因素以及某些乳房良性疾病與乳癌的發(fā)生有一定關(guān)系。
研究表明，本發(fā)明所述的乳腺增生病/癥、子宮肌瘤以及乳腺癌產(chǎn)生的原因之一在于體內(nèi)的雌激素代謝紊亂，長期受雌激素的刺激有關(guān)。乳腺增生患者由于雌激素絕對或相對分泌過多，孕激素相對減少，致使雌激素長期刺激乳腺組織，導(dǎo)致正常乳腺組織過度增生而復(fù)舊不全，因而發(fā)生乳腺增生病。另有研究表明，如果婦女長期服用雌激素，導(dǎo)致體內(nèi)雌激素的水平較高，則由激素所造成的乳腺癌的危險上升了48％。子宮肌瘤是女性生殖器官中最常見的良性腫瘤，亦稱子宮平滑肌瘤。一般認為，長期大量持續(xù)的雌激素刺激，是子宮肌瘤的主要病因。
CN02129413.5、CN01127576.6分別公開了一種催乳中藥制劑，臨床研究結(jié)果表明，該藥對產(chǎn)后氣血虛弱所致的缺乳、少乳有顯著的臨床療效，能明顯增加產(chǎn)婦乳汁分泌量，本發(fā)明的研究人員在大量實驗的基礎(chǔ)上認為該藥在治療乳腺增生病/癥、子宮肌瘤以及防治乳腺癌上的具有顯著的效果，有鑒于此，提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種中藥制劑在制備治療和預(yù)防婦科疾病藥物上的用途，特別是在治療乳腺增生病/癥、子宮肌瘤以及防治乳腺癌上的藥物上的應(yīng)用。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為CN02129413.5、的全部內(nèi)容被引入本發(fā)明，本發(fā)明所述的中藥制劑及其制備方法和該專利完全相同，因此在以下是對該專利的簡要敘述。
在本發(fā)明中，所述的“中藥制劑”是指由CN02129413.5、CN01127576.6公開內(nèi)容所公開的，包括其原料種類、配方比例、制備工藝以及其所公開的優(yōu)選范圍所界定的最終產(chǎn)品。具體為CN02129413.5、CN01127576.6的發(fā)明目的在于提供一種催乳藥物制劑，該藥物配方科學、合理，安全性好、療效高、療程短(3-4天)。具有益氣養(yǎng)血，通絡(luò)下乳之功效，能夠降低體內(nèi)對乳汁分泌起抑制作用的雌二醇(E2)水平，提高體內(nèi)促進乳汁分泌的泌乳素(PRL)的水平，PRL/E2比值增高，因而療效顯著。
CN02129413.5、CN01127576.6專利申請為了實現(xiàn)其發(fā)明目的，采用的技術(shù)方案為包括如下中藥成分黃芪100-487重量份黨參100-487重量份白術(shù)50-196重量份當歸50-196重量份川芎49-146重量份，柴胡49-146重量份王不留行(炒)60-146重量份漏蘆50-146重量份萱草根49-100重量份本發(fā)明的上述成分經(jīng)浸泡、水提、濾過及濃縮后，得到浸膏。
上述浸膏加入常用藥物輔料制備為藥用的各種固體制劑。
具體地說，CN02129413.5中公開的中藥組成為黃芪146-487重量份黨參146-487重量份白術(shù)98-196重量份當歸98-196重量份川芎49-146重量份。
柴胡49-146重量份王不留行(炒)73-146重量份漏蘆82-146重量份萱草根49-98重量份。
其具體的制備工藝為其中本發(fā)明的藥物還包括480重量份調(diào)味劑，以及420重量份賦形劑，以制備顆粒劑、片劑、口服液、膠囊等可藥用劑型。
其中的重量份可以是錢、克、千克、公斤、噸等計量單位。
其中的調(diào)味劑為蔗糖、葡萄糖、果糖或甜味劑，賦形劑為淀粉、糊精、或適合本發(fā)明的其他賦形劑。
該催乳藥物的制備方法為將上述處方量的各味中藥加7-15倍水浸泡2-20小時后，加熱煮沸1-3小時，濾出藥液；藥渣加5-10倍水，加熱煮沸0.5---2小時，濾出藥液；藥渣再加4-8倍水，加熱煮沸0.5---2小時，合并3次水提取液濾過。
將濾過的上述水提取液濾過后減壓濃縮至80℃時相對密度1.1---1.5g/ml的浸膏，冷卻至室溫備用。
取經(jīng)粉碎后過80目篩的調(diào)味劑、過120目篩的賦形劑，置攪拌機內(nèi)混勻，在攪拌下加入上述浸膏，繼續(xù)攪拌成適宜軟材，經(jīng)14目篩制粒，顆粒于60-70℃通風干燥，干燥粒經(jīng)12目篩整粒后，以40目篩篩去微量細粉，得顆粒，分裝即可。
相對于1公斤原料藥材，優(yōu)選加入10公斤水浸泡12小時后，加熱煮沸2小時，濾出藥液；藥渣加8公斤水，加熱煮沸1小時，濾出藥液；藥渣再加6公斤水，加熱煮沸1小時，合并3次水提取液，濾過后減壓濃縮至80℃時相對密度1.30-1.35g/ml的浸膏約300g。其中濾過采用中藥制備中常規(guī)的方法及設(shè)備。
CN02129413.5優(yōu)選的制備方法是將上述九味藥組成的1公斤原料藥材，加入10公斤水浸泡12小時后，加熱煮沸2小時，濾出藥液；藥渣加8公斤水，加熱煮沸1小時，濾出藥液；藥渣再加6公斤水，加熱煮沸1小時，合并3次水提取液。濾過后減壓濃縮至80℃時相對密度1.30-1.35g/ml的浸膏約300g。
取經(jīng)粉碎后過80目篩的480g調(diào)味劑、過120目篩的420g賦形劑，置攪拌機內(nèi)混勻，在攪拌下加入上述浸膏，繼續(xù)攪拌成適宜軟材，經(jīng)14目篩制粒，顆粒于60-70℃通風干燥，干燥粒經(jīng)12目篩整粒后，以40目篩篩去微量細粉，得1000克顆粒，分裝即可。
上述浸膏可以按照常規(guī)中藥制劑的制備方法制成顆粒劑、膠囊。
CN01127576.6中公開的中藥組成為每1000g制劑由以下組分制成黃芪100g-200g、黨參100g-180g、白術(shù)50g-130g、當歸100g-180g、川芎60g-120g、柴胡50g-130g、王不留行60g-120g、漏蘆50g-130g、萱草根50g-100g。優(yōu)選每1000g制劑由以下組分制成黃芪135g-160g、黨參135g-160g、白術(shù)90g-105g、當歸135g-160g、川芎90g-105g、柴胡90g-105g、王不留行90g-105g、漏蘆90g-105g、萱草根70g-80g。
其制備方法為上述藥物清洗、除雜質(zhì)后，加水8Kg-12Kg浸泡12小時后，加熱煮沸2小時，濾出藥液；藥渣加水6Kg-10Kg，加熱煮沸1小時，濾出藥液；藥渣再加水5Kg·8Kg，加熱煮沸1小時，濾出藥液；合并三次濾出的藥液減壓濃縮至相對密度1.30-1.35的浸膏，冷卻至室溫；取經(jīng)粉碎后過80目篩的糖粉400g-600g，過120目篩的糊精300g-500g，置攪拌機內(nèi)混勻，在攪拌下加入浸膏，繼續(xù)攪拌成軟材，經(jīng)14目篩制粒，顆粒于60-70℃通風干燥，干燥粒經(jīng)12目篩整粒后，以40目篩篩去微量細粉，制得1000g顆粒。
兩個專利中優(yōu)選的組成均為黃芪146重量份黨參146重量份白術(shù)98重量份當歸146重量份川芎98重量份柴胡98重量份王不留行(炒)98重量份漏蘆98重量份萱草根73重量份。
除上述方法外，CN02129413.5所述的顆粒狀催乳藥物也可以通過現(xiàn)有技術(shù)的其他方法，如噴霧干燥法制備，具體地說，向水提取液中加入調(diào)味劑和賦形劑，經(jīng)過噴霧干燥得到顆粒制劑，噴霧干燥法采用的工藝參數(shù)可以參照現(xiàn)有技術(shù)的中藥噴霧干燥制備顆粒的方法。
上述組成及制備方法得到的產(chǎn)品，都在本發(fā)明的用途所包括的范圍內(nèi)。
本發(fā)明的有益效果在于通過實驗研究，發(fā)現(xiàn)了本發(fā)明中藥制劑還可用于制備治療乳腺增生病/癥、子宮肌瘤以及防治乳腺癌的藥物，而且該中藥制劑療效顯著，并且對人體無毒無害，無副作用，服用方便。
具體實施例方式
下面是本發(fā)明各種中藥制劑的制備方法，所得制劑通用名為催乳顆粒、催乳膠囊、口服液、催乳片及乳欣片等。
CN02129413.5的實施例1將黃芪146克，黨參195克，白術(shù)196克，當歸98克，川芎90克，柴胡49克，王不留行(炒)90克，漏蘆87克，萱草根49克加水7公斤浸泡20小時后，加熱煮沸3小時，濾出藥液；藥渣加水7公斤，加熱煮沸0.5小時，濾出藥液；藥渣再加水4公斤，加熱煮沸2小時，合并3次水提取液，濾過后減壓濃縮至80℃時相對密度1.10g/ml的浸膏，冷卻至室溫備用。
取經(jīng)粉碎后過80目篩的蔗糖粉480g，過120目篩的糊精420g，置攪拌機內(nèi)混勻，在攪拌下加入上述浸膏，繼續(xù)攪拌成適宜軟材，經(jīng)14目篩制粒，顆粒于60-70℃通風干燥，干燥粒經(jīng)12目篩整粒后，以40目篩篩去微量細粉(可加入下批軟材中循環(huán)使用)，得顆粒，分裝即可。
CN02129413.5的實施例2將黃芪250克，黨參146克，白術(shù)120克，當歸120克，川芎49克，柴胡60克，王不留行(炒)73克，漏蘆102克，萱草根80克加水6.5公斤浸泡10小時后，加熱煮沸2小時，濾出藥液；藥渣加水3.25公斤，加熱煮沸3小時，濾出藥液；藥渣再加水3.9公斤，加熱煮沸1小時，合并3次水提取液，濾過后減壓濃縮至80℃時相對密度1.30g/ml的浸膏，冷卻至室溫備用。
參照實施例1的方法，按照常規(guī)方法制備0.25克/粒的膠囊制劑。
CN02129413.5的實施例3將黃芪166克，黨參300克，白術(shù)98克，當歸140克，川芎146克，柴胡100克，王不留行(炒)110克，漏蘆82克，萱草根60克加水15公斤浸泡2小時后，加熱煮沸2.5小時，濾出藥液；藥渣加水10公斤，加熱煮沸1小時，濾出藥液；藥渣再加水8.5公斤，加熱煮沸0.5小時，合并3次水提取液，濾過后減壓濃縮至80℃時相對密度1.50g/ml的浸膏，冷卻至室溫備用。
將浸膏加1000克水溶解，并加入葡萄糖480克，淀粉420克混合，采用噴霧干燥的方法得到顆粒狀本發(fā)明的催乳顆粒。
CN02129413.5的實施例4將黃芪300克，黨參200克，白術(shù)110克，當歸160克，川芎110克，柴胡146克，王不留行(炒)130克，漏蘆120克，萱草根98克加水18公斤浸泡15小時后，加熱煮沸1小時，濾出藥液；藥渣加水12公斤，加熱煮沸1.5小時，濾出藥液；藥渣再加水10公斤，加熱煮沸1.5小時，合并3次水提取液。
濾過后減壓濃縮至80℃時相對密度1.250g/ml的浸膏，冷卻至室溫備用。
參照實施例2的方法制為膠囊。
CN02129413.5的實施例5將黃芪487克，黨參400克，白術(shù)150克，當歸196克，川芎60克，柴胡120克，王不留行(炒)146克，漏蘆130克，萱草根70克加水21公斤浸泡8小時后，加熱煮沸1.5小時，濾出藥液；藥渣加水10.5公斤，加熱煮沸1.5小時，濾出藥液；藥渣再加水8.8公斤，加熱煮沸1.5小時，合并3次水提取液。
濾過后減壓濃縮至80℃時相對密度1.30g/ml的浸膏，冷卻至室溫備用。
取經(jīng)粉碎后過80目篩的480g蔗糖、過120目篩的420g糊精，置攪拌機內(nèi)混勻，在攪拌下加入上述浸膏，繼續(xù)攪拌成適宜軟材，經(jīng)14目篩制粒，顆粒于65℃通風干燥，干燥粒經(jīng)12目篩整粒后，以40目篩篩去微量細粉，得顆粒，分裝即可。
CN02129413.5的實施例6將黃芪400克，黨參487克，白術(shù)130克，當歸100克，川芎100克，柴胡100克，王不留行(炒)85克，漏蘆146克，萱草根55克加水18公斤浸泡15小時后，加熱煮沸3小時，濾出藥液；藥渣加水10.5公斤，加熱煮沸1小時，濾出藥液；藥渣再加水8.8公斤，加熱煮沸1小時，合并3次水提取液。
濾過后減壓濃縮至80℃時相對密度1.40g/ml的浸膏，冷卻至室溫備用。
采用實施例1的方法制為顆粒。
CN02129413.5的實施例7將黃芪146克，黨參300克，白術(shù)196克，當歸120克，川芎49克，加水18公斤浸泡8小時后，加熱煮沸1.5小時，濾出藥液；藥渣加水10.6公斤，加熱煮沸0.5小時，濾出藥液；藥渣再加水8.8公斤，加熱煮沸2小時，合并3次水提取液。
減壓濃縮至80℃時相對密度1.150g/ml的浸膏，冷卻至室溫備用。
參照實施例1的方法制備為顆粒制劑。
CN02129413.5的實施例8將黃芪487克，黨參146克，白術(shù)120克，當歸98克，川芎100克，加水9.5公斤浸泡12小時后，加熱煮沸2小時，濾出藥液；藥渣加水7.6公斤，加熱煮沸1小時，濾出藥液；藥渣再加水5.7公斤，加熱煮沸1小時，合并3次水提取液。
濾過后減壓濃縮至80℃時相對密度1.20g/ml的浸膏，冷卻至室溫備用。
取經(jīng)粉碎后過80目篩的480g蔗糖、過120目篩的420g淀粉，置攪拌機內(nèi)混勻，在攪拌下加入上述浸膏，繼續(xù)攪拌成適宜軟材，經(jīng)14目篩制粒，顆粒于70℃通風干燥，干燥粒經(jīng)12目篩整粒后，以40目篩篩去微量細粉，得顆粒，分裝即可。
CN02129413.5的實施例9將黃芪400克，黨參487克，白術(shù)98克，當歸196克，川芎146克，加水13公斤浸泡12小時后，加熱煮沸2小時，濾出藥液；藥渣加水10公斤，加熱煮沸1小時，濾出藥液；藥渣再加水8公斤，加熱煮沸1小時，合并3次水提取液。
濾過后減壓濃縮至80℃時相對密度1.33g/ml的浸膏，冷卻至室溫備用。
參照實施例9的方法制備顆粒，分裝即可。
CN02129413.5的實施例10將黃芪160克，黨參200克，白術(shù)100克，當歸100克，川芎90克，柴胡60克，王不留行(炒)100克加水8公斤浸泡12小時后，加熱煮沸2小時，濾出藥液；藥渣加水6.5公斤，加熱煮沸1小時，濾出藥液；藥渣再加水4.8公斤，加熱煮沸1小時，合并3次水提取液。
濾過后減壓濃縮至80℃時相對密度1.35g/ml的浸膏，冷卻至室溫備用。
參照實施例9的方法制備顆粒，分裝即可。
CN02129413.5的實施例11將黃芪146克、黨參146克、白術(shù)98克、當歸146克、川芎98克、柴胡98克、王不留行(炒)98克、漏蘆98克、萱草根73克加入10公斤水浸泡12小時后，加熱煮沸2小時，濾出藥液；藥渣加8公斤水，加熱煮沸1小時，濾出藥液；藥渣再加6公斤水，加熱煮沸1小時，合并3次水提取液。濾過后減壓濃縮至80℃時相對密度1.30-1.35g/ml的浸膏約300g。
取經(jīng)粉碎后過80目篩的480g蔗糖、過120目篩的420g糊精，置攪拌機內(nèi)混勻，在攪拌下加入上述浸膏，繼續(xù)攪拌成適宜軟材，經(jīng)14目篩制粒，顆粒于60-70℃通風干燥，干燥粒經(jīng)12目篩整粒后，以40目篩篩去微量細粉，得1000g顆粒，分裝50包即可。
實施例12實施例11得到的浸膏3-10重量份加入稀釋劑或吸收劑1-10重量份、崩解劑4-16重量份、潤滑劑0.1-1重量份，按照片劑的常規(guī)制備方法壓片。
實施例13-15以下為CN01127576.6的實施例1-4 下面以表中實施例三的組分為例，詳細說明本發(fā)明藥物的制備方法將組分中各藥材清洗、除雜后，加水10Kg浸泡12小時后，加熱煮沸2小時，濾出藥液；藥渣加水8Kg，加熱煮沸1小時，濾出藥液；藥渣再加水6Kg，加熱煮沸1小時，濾出藥液；合并三次濾出的藥液經(jīng)薄膜濃縮器進行預(yù)濃縮后再減壓濃縮至相對密度130-135(80℃測)的浸膏，通過控制浸膏相對密度，使制劑的有效成份含量保持穩(wěn)定，浸膏冷卻至室溫；取經(jīng)粉碎后過80目篩的糖粉480g，過120目篩的糊精420g，置攪拌機內(nèi)混勻，在攪拌下加入浸膏，繼續(xù)攪拌成軟材，經(jīng)14目篩制粒，顆粒于60-70℃通風于燥，干燥粒經(jīng)12目篩整粒后，以40目篩篩去微量細粉，制得1000g催乳顆粒。
實驗例1鼠乳腺增生研究本實驗例為本發(fā)明顆粒制劑治療大鼠乳腺增生病/癥的實驗研究。
本研究通過對中藥本發(fā)明中藥治療大鼠乳腺增生病/癥(模型)療效進行研究，為臨床治療應(yīng)用提供科學依據(jù)。將模型大鼠50只，分為本發(fā)明中藥治療組(高、中、低3個劑量組)、陽性對照藥乳塊消治療組和模型空白對照組，每組10只，與陰性空白對照組，正常大鼠10只；血清激素測定雌二醇、泌乳素、孕酮水平；病理學檢察本發(fā)明中藥治療組與模型空白對照組在乳腺小葉數(shù)、乳腺腺泡數(shù)、腺泡腔直徑等指標的變化情況；比較本發(fā)明中藥各治療組與乳塊消治療組的療效差異。
結(jié)果表明，本發(fā)明中藥治療后對血清激素水平有一定調(diào)節(jié)作用，乳腺小葉數(shù)、乳腺腺泡數(shù)、腺泡腔直徑等指標經(jīng)用本發(fā)明中藥治療后療效顯著(P＜0.01)，本發(fā)明中藥治療組療效優(yōu)于乳塊消治療組(P＜0.01)。即本發(fā)明中藥治療大鼠乳腺增生病/癥療效顯著，且優(yōu)于乳塊消。
1、目的研究中藥本發(fā)明中藥治療大鼠乳腺增生病/癥的效果，為臨床治療乳腺增生病的應(yīng)用提供科學的依據(jù)。
2、材料2.1藥物2.1.1實驗用藥本發(fā)明實施例11所制得的產(chǎn)品2.12陽性對照藥乳塊消，片劑，每片0.35g，北京中醫(yī)藥大學藥廠生產(chǎn)2.13大鼠乳腺增生病/癥模型制備用藥苯甲酸雌二醇0.2mg/ml；黃體酮20mg/ml，上海通用藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)。
2.2動物選擇雌性成年未孕Wistar大鼠，體重180-200g，共80只，山東大學實驗動物中心提供。
2.3試劑盒雌二醇、孕酮、泌乳素(雙抗法)放免測定試劑盒，天津德普生物技術(shù)和醫(yī)學產(chǎn)品有限公司生產(chǎn)。
2.4病理診斷儀器萊卡切片機、脫水機，Olympus顯微鏡，萊卡攝像及圖像處理系統(tǒng)。
3、實驗方法3.1乳腺增生病/癥動物模型的制備根據(jù)《實驗動物的疾病模型》文中(P392，1997，天津科技譯文出版公司)大鼠乳腺增生病模型制備。
雌性Wistar大鼠70只，肌肉注射苯甲酸雌二醇0.5mg/kg體重，每天1次，連續(xù)25天；繼而改用肌肉注射黃體酮4mg/kg體重，每天1次，連續(xù)5天。
3.2分組與給藥將確診為乳腺增生病/癥的大鼠于停止給予黃體酮24小時后隨機分為6組，每組10只。本發(fā)明中藥治療組給藥劑量分別為1.6g/kg·天、0.8g/kg·天、0.4g/kg·天(相當于生藥13.7、6.8、3.4g/kg·天，其中0.8g/kg·天相當于催乳顆粒給藥量70g/kg·天)；陽性對照組乳塊消，3.0g/kg·天；模型空白對照組灌服等容量輔料混懸液；以及陰性空白對照組正常大鼠10只，灌服等容量輔料混懸液。本發(fā)明中藥片及乳塊消片粉碎后用蒸餾水制成混懸液灌服，連續(xù)灌胃給藥2周。
3.3療效觀察3.3.1血清激素水平檢測末次給藥24小時后，動物用戊巴比妥鈉麻醉后處死，采血制備血清；采用放免藥盒測血清雌二醇、泌乳素、孕酮水平。
3.3.2病理觀察末次給藥24小時后將動物用戊巴比妥鈉麻醉后處死，肉眼檢查乳房情況后，取每只動物第二對乳房活檢，20％福爾馬林固定，石蠟切片，HE染色，光鏡檢查，并對乳腺組織作圖像處理。
(1)模型組病理要求小葉明顯增大幾乎融合，間質(zhì)較少，腺泡明顯增多、增大、擴張，腺管變形呈多形性。乳腺導(dǎo)管管腔，腺泡腔擴張明顯，乳腺導(dǎo)管上皮細胞排列紊亂，上皮增生明顯可呈不規(guī)則狀突起，管腔中可見脫落的上皮細胞及其分泌物，小葉體積增大，分葉增多，小葉腺數(shù)平均5-8個葉，導(dǎo)管上皮細胞層數(shù)明顯增多，間質(zhì)纖維組織增生明顯。
(2)乳腺增生分級標準0級乳腺小葉不增生，腺體數(shù)量極少，腺胞不擴張，處于靜止期狀態(tài)。
I級乳腺小葉輕度增生，個別腺泡輕度增生或?qū)Ч茌p度擴張，腺泡及導(dǎo)管內(nèi)有少量分泌物存在。
II級乳腺小葉大部分增生，腺泡及導(dǎo)管內(nèi)分泌物較少，部分腺泡或?qū)Ч苋蕴幱谳p度擴張狀態(tài)但無明顯囊泡形成，腺泡上皮增生但無明顯乳頭狀突起。
III級乳腺小葉明顯增生，數(shù)量增加，腺泡或?qū)Ч芴幱跇O度擴張狀態(tài)，部分呈囊泡狀，腺管上皮增生，增生的上皮突入管腔呈乳頭狀，層次增多，腺泡內(nèi)及導(dǎo)管內(nèi)有分泌物存在。
(3)療效評定乳腺增生分級為I級(含I級)以下判為有效。
3.4數(shù)據(jù)分析根據(jù)治療結(jié)果，統(tǒng)計本發(fā)明中藥治療組、乳塊消治療組、模型組的血清激素水平、乳腺組織病理變化，并經(jīng)圖像處理系統(tǒng)計算腺體小葉數(shù)、腺泡數(shù)及腺泡泡腔直徑，比較本發(fā)明中藥治療組與模型空白對照組及與乳塊消治療組的療效，并作顯著性檢驗。
4、結(jié)果與討論4.1給藥后各組血清激素水平變化4.1.1血清雌二醇(E2)變化E2(125I)雙抗放免測定標準曲線，r＝0.9986，NSB/T(％)＝1.972％；模型空白對照組大鼠血清E2水平明顯低于其它各組，給予本發(fā)明實施例11中藥(中、低劑量組)治療后E2向正常方向恢復(fù)，但方差分析各組無明顯差異(表1)。此現(xiàn)象表明，在模型制備過程中給予大量雌孕激素造成動物體內(nèi)雌孕激素代謝紊亂，但給予適量本發(fā)明中藥治療后有一定調(diào)節(jié)作用。
4.1.2血清孕酮(PrG)變化孕酮(125I)雙抗放免測定其標準曲線，r＝0.9993，NSB/T(％)＝2.653％；模型空白對照組大鼠血清PrG水平明顯低于陰性空白對照組，亦明顯低于本發(fā)明所述的顆粒制劑、乳塊消各治療組；本發(fā)明中藥、乳塊消治療組PrG水平明顯低于陰性空白對照組(表1，P＜0.01)；本發(fā)明中藥治療組明顯調(diào)高血清PrG并似有劑量效應(yīng)關(guān)系趨勢。本發(fā)明中藥各劑量組高于乳塊消組F＜0.05)。
4.1.3血清泌乳素變化泌乳素(125I)雙抗放免測定標準曲線，r＝0.9985，NSB/T(％)＝2.666％；模型空白對照組泌乳素明顯高于其它各組(P＜0.01)，各治療組血清泌乳素水平高于陰性空白對照組(P＜0.01，表1)。
總之，因在模型制備過程中給大鼠注射了大量E2、PrG，造成大鼠內(nèi)分泌嚴重紊亂，給予本發(fā)明中藥治療后有一定調(diào)節(jié)作用，但變化不規(guī)律。
4.2乳腺病理改變4.2.1陰性空白對照組乳頭部被復(fù)鱗狀上皮，表面不平，乳腺管的開口部也被復(fù)鱗狀上皮。乳頭部的輸乳管被復(fù)柱狀上皮，有皺襞，間質(zhì)內(nèi)可見成束的平滑肌。乳腺小葉由小導(dǎo)管及腺泡組成，小葉清晰，小葉內(nèi)間質(zhì)疏松。導(dǎo)管上皮細胞排列規(guī)則，導(dǎo)管璧較薄，小葉體積較小、分葉少，小葉數(shù)多為1-3個葉，導(dǎo)管上皮細胞層數(shù)較少。
4.2.2模型空白對照組小葉明顯增大幾乎融合，間質(zhì)較少，腺泡明顯增多、增大，擴張、導(dǎo)管變形呈多形性。模型組乳腺導(dǎo)管管腔、腺泡腔擴張明顯，乳腺導(dǎo)管上皮細胞排列紊亂，上皮增生明顯可呈不規(guī)則狀突起，管腔中可見脫落的上皮細胞及其分泌物，小葉體積增大，分葉增多，小葉腺泡數(shù)平均5-8個，導(dǎo)管上皮細胞層數(shù)明顯增多，間質(zhì)纖維組織增生明顯。導(dǎo)管增生、腺泡增生、囊性增生和混合型出現(xiàn)率較高。
4.2.3本發(fā)明中藥治療組高劑量組大鼠乳腺小葉數(shù)及導(dǎo)管上皮細胞層數(shù)減少，與模型空白組比較明顯減輕，比乳塊消組抑制乳腺增生程度要強；中劑量組小葉數(shù)及導(dǎo)管上皮細胞層數(shù)減少，與模型空白組比較明顯減輕，比乳塊消組抑制乳腺增生程度更強；低劑量組小葉數(shù)及導(dǎo)管上皮細胞層數(shù)減少，與模型空白組比較明顯減輕，與乳塊消組比較有一定程度的減輕。
4.2.4乳塊消組小葉數(shù)及導(dǎo)管上皮細胞層數(shù)減少，與模型空白組比較有減輕作用。
將上述病理改變按乳腺增生分級標準計數(shù)(表2)及組織細胞變化經(jīng)圖像處理后(表3)表明，模型空白對照組大鼠乳腺增生明顯，大部分達III級增生，各治療組明顯比模型組減輕，本發(fā)明中藥中劑量組較乳塊消組亦明顯減輕(P＜0.05)；各治療組乳腺小葉數(shù)、腺泡數(shù)及腺泡腔直徑明顯比模型對照組減輕；按療效標準統(tǒng)計處理表明，本發(fā)明中藥各治療組療效皆在70％以上，且明顯優(yōu)于乳塊消組(表4)。
表1實驗各組給藥結(jié)束時大鼠血清激素水平變化(n＝10，±S)

表2大鼠乳腺病理增生分級

表3.實驗各組大鼠乳腺組織細胞變化

表4本發(fā)明中藥各治療組及乳塊消組療效比較

X2檢驗，4組間比較，P＜0.05；結(jié)論本發(fā)明中藥各劑量組療效無差異；本發(fā)明中藥各劑量組療效優(yōu)于乳塊消組。
實驗例2子宮肌瘤研究本實驗例為本發(fā)明所述中藥對治療子宮肌瘤的實驗研究。
1實驗材料動物雌性健康成年未孕豚鼠、體重350g～400g；健康Wistar大白鼠、體重180g～220g，雌雄兼用；昆明種小白鼠、體重18g～22g，雌雄各半；以上動物由中國藥品生物制品檢定所實驗動物中心提供。藥品與試劑本發(fā)明實施例8所制得的催乳產(chǎn)品，對照組桂枝茯苓丸(山西省臨汾中藥廠生產(chǎn)，批號040508)；苯甲酸雌二醇注射液(1mg/ml，上海第九制藥廠生產(chǎn)，批號040801)；黃體酮注射液(10mg/ml，天津氨基酸公司生產(chǎn)，批號041012)；阿斯匹林腸溶片(0.5g/片，天津中美史克制藥有限公司生產(chǎn)，批號041118)。
2方法與結(jié)果2.1抗子宮平滑肌瘤樣增生作用的研究將60只豚鼠隨機分為空白對照組、模型組、桂枝茯苓丸組、乳欣高劑量組和低劑量組，每組12只動物。參照李氏法制作子宮平滑肌瘤樣增生模型。造模方法為肌內(nèi)注射苯甲酸雌二醇，0.2mg/只，每周3次，連續(xù)3個月后，加黃體酮1.5mg/只肌注，2次/周，連續(xù)1個月。在造模同時，模型組每日灌喂生理鹽水2ml/只，桂枝茯苓丸組每日灌喂桂枝茯苓丸1g/只(約相當于60kg體重成人常規(guī)用量的25倍)，催乳顆粒高劑量組和低劑量組，每日分別灌喂催乳顆粒1g/只、0.5g/只(約相當于60kg體重成人常規(guī)量的25倍、12.5倍)?？瞻讓φ战M常規(guī)飼養(yǎng)，并每日灌喂生理鹽水2ml。4個月后，所有動物稱重，擊頭處死，剖腹觀察子宮大體形態(tài)，沿子宮膀胱連接處剪取子宮，稱重，計算子宮系數(shù)(子宮重/100g體重)，量取子宮頸以上及分角子宮根部橫徑，然后固定于10％中性福爾馬林，子宮分角以上相同部位橫切取材0.3mm，石蠟包埋，HE染色，光鏡觀察子宮組織形態(tài)，每張切片選取5個部位在10×10倍鏡下顯微測微尺測量平滑肌厚度，取平均值。數(shù)據(jù)采用MINITABSOFTEARE統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析Q檢驗處理。結(jié)果如下
2.1.1催乳顆粒對子宮重量的影響見表5。模型組子宮重量增加，與對照組相比，有極顯著性差異(P＜0.01)，催乳顆粒高劑量組子宮重量較模型組顯著減輕(P＜0.05)，催乳顆粒低劑量組，桂枝茯苓丸組子宮較模型組有減輕趨勢，但統(tǒng)計分析無顯著差異(P＞0.05)。
表5子宮重量比較(x±s)

注**與對照組比較P＜0.01；*與模型組比較P＜0.05。下同。
2.1.2催乳顆粒對子宮橫徑變化的影響見表6。模型組兩處子宮橫徑較空白組增粗、差異有非常顯著意義(P＜0.01)，而治療組橫徑均小于模型組，差異有顯著意義(P＜0.05)。
表6子宮橫徑比較(cm，x±s)

2.1.3催乳顆粒對子宮組織形態(tài)學的影響鏡下觀察，造模組分角子宮根部平滑肌層明顯呈不均勻增厚，且平滑肌細胞排列系亂，其中有7只平滑肌排列呈卷云狀或編織狀，病變近似瘤樣增生；催乳顆粒高劑量組和低劑量組及桂枝茯苓丸組分角子宮平滑肌層薄于造模組，排列規(guī)整，催乳顆粒低劑量組和桂枝茯苓丸組分別有個別區(qū)域出現(xiàn)瘤樣增生病變。
2.1.4催乳顆粒、對子宮平滑肌厚度化影響見表7。模型組子宮平滑肌較空白對照組明顯增厚(P＜0.01)，桂枝茯苓丸和催乳顆粒高劑量組和低劑量組子宮平滑肌厚度較模型組薄(P＜0.05)。
表7子宮平滑肌厚度比較

觀察本發(fā)明中藥組催乳顆粒對雌、孕激素誘發(fā)的豚鼠子宮平滑肌瘤的作用。灌胃給藥，連續(xù)灌服120天，結(jié)果發(fā)現(xiàn)本發(fā)明中藥催乳顆粒組能抑制雌、孕激素誘發(fā)的豚鼠子宮平滑肌瘤樣增生、減輕增重子宮的重量及其平滑肌層增厚等病理現(xiàn)象。以低、中、高組劑量灌胃給藥具有基本相同的作用。
2.2止血作用的研究2.2.1催乳顆粒對小鼠斷尾出血的影響取小鼠60只，雌雄各半，隨機分為空白組(生理鹽水1ml/只)、桂枝茯苓丸組(10g/kg)、實施例8的催乳顆粒低、高劑量組(5g/kg、10g/kg)，每組15只。每日灌胃給藥1次，連續(xù)3天，于最后一次給藥后2小時，分別以利剪將小鼠尾尖0.5cm處橫斷，待血液自行流出時，每隔15sec用濾紙吸去血滴1次，直至血液自然停止，比較各組出血時間(見表20d)。結(jié)果表明與空白組相比較，催乳顆?？娠@著縮短小鼠尾出血時間(P＜0.05)，桂枝茯苓丸具有使小鼠出血時間縮短的趨勢，但差異不顯著(P＞0.05)。
2.2.2催乳顆粒對小鼠凝血的影響取小鼠60只，隨機分為4組，每組雌雄各半，分組及給藥同2.2.1；最后一次給藥2小時后，采用毛細血管法測凝血時間取長5cm，內(nèi)徑1mm玻管插入小鼠內(nèi)毗靜脈叢取血，滿后每隔15sec折斷玻管一段，檢查有無血凝絲出現(xiàn)，計算從采血到出現(xiàn)血凝絲時間，為凝血時間。比較各組凝血時間(見表8)。結(jié)果表明用藥組和對照組比較，凝血時間無顯著性差異。
表8催乳顆粒對出凝血時間的影響(min，x±s)

*與對照組比P＜0.05。
2.3抗炎作用的研究2.3.1催乳顆粒對二甲苯引起小鼠耳腫的影響方法與結(jié)果取小鼠50只，隨機分為5組(每組雌雄各半)，空白對照組(生理鹽水1ml/只)；阿斯匹林組(0.2g/kg)，桂枝茯苓丸組(10g/kg)，實施例8的乳欣組(5g/kg、10g/kg)，每日灌胃給藥1次，連續(xù)3日，最后1次給藥后30分鐘，將二甲苯滴于小鼠右耳背15鐘后處死動物，用5mm打孔器沿左右耳廓相同部位打孔取材，分別稱重，以兩耳片重差代表腫脹程度，比較各組腫脹程度并求出抑制率(MinitabSoftware統(tǒng)計軟件包進行單因素方差分析和Q檢驗)。結(jié)果見表9，用藥組與空白組比較，阿斯匹林、催乳顆粒高、低劑組均可使二甲苯所致的小鼠耳腫顯著減輕(P＞0.05)，桂枝茯苓丸組變化無顯著意義(P＜0.05)。
表9催乳顆粒對二甲苯引起小鼠耳腫的影響

本發(fā)明同時觀察了本發(fā)明中藥催乳顆粒(實施例12)對小鼠毛細血管通透性、對二甲苯誘發(fā)小鼠耳廓水腫以及對雞蛋清引起大鼠的足踞腫脹的影響。實驗結(jié)果表明，冶療本發(fā)明中藥催乳顆粒能降低小鼠毛細血管通透性，減少滲出；對二甲苯誘發(fā)的小鼠耳廓腫脹及蛋清導(dǎo)致的大鼠足踞腫脹均有明顯的抑制作用，本發(fā)明中藥的抗炎作用隨劑量加大而增強。
2.3對雌激素所致小鼠子宮增重的影響用sc雌二醇的方法，制備小鼠子宮增重模型。本發(fā)明實施例11的中藥催乳顆粒以低、中、高劑量給昆明種雌性小鼠ig(灌胃給藥)給藥，連續(xù)灌服10天，實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)冶療本發(fā)明中藥中劑量組(13.569生藥/kg)和高劑量組(27.129生藥/kg)小鼠的子宮系數(shù)比模型對照組明顯降低。表明冶療本發(fā)明中藥對雌激素引起的小鼠子宮增重有一定程度的抑制。
2.4對微循環(huán)的作用本實驗采用人鼠腸系膜微循環(huán)模型，觀察中藥制劑本發(fā)明中藥對微循環(huán)的影響。實驗結(jié)果表明，冶療本發(fā)明中藥低、中、高三劑量組用藥后，能明顯擴張腸系膜的細動脈和細靜脈口徑。對高分子右旋糖酥引起的微循環(huán)障礙，藥物有顯著的改善作用，促進血流速度，減少血細胞聚集、粘壁，防止血流淤滯。冶療本發(fā)明中藥對微循環(huán)的作用隨劑量加大而增強。
3、對脈鼠實驗性子宮平滑肌瘤的影響觀察冶療本發(fā)明中藥對雌、孕激素誘發(fā)的脈鼠子宮平滑肌瘤的作用。以低、中、高系列劑量灌胃給藥，連續(xù)灌服120天，結(jié)果發(fā)現(xiàn)各給藥組均不同程度地抑制雌、孕激素誘發(fā)的琢鼠子宮平滑肌瘤樣增生、減輕增重子宮的重量及其平滑肌層增厚等病理現(xiàn)象。
4、抗炎作用本實驗觀察了冶療本發(fā)明中藥對小鼠毛細血管通透性、對二甲苯誘發(fā)小鼠耳廓水腫以及對雞蛋清引起大鼠的足踞腫脹的影響。實驗結(jié)果表明，冶療本發(fā)明中藥能降低小鼠毛細血管通透性，減少滲出；對二甲苯誘發(fā)的小鼠耳廓腫脹及蛋清導(dǎo)致的大鼠足踞腫脹均有明顯的抑制作用，本發(fā)明中藥的抗炎作用隨劑量加大而增強。
5、對微循環(huán)的作用本實驗采用人鼠腸系膜微循環(huán)模型，觀察中藥制劑本發(fā)明中藥對微循環(huán)的影響。實驗結(jié)果表明，冶療本發(fā)明中藥低、中、高三劑量組用藥后，能明顯擴張腸系膜的細動脈和細靜脈口徑。對高分子右旋糖酥引起的微循環(huán)障礙，藥物有顯著的改善作用，促進血流速度，減少血細胞聚集、粘壁，防止血流淤滯。冶療本發(fā)明中藥對微循環(huán)的作用隨劑量加大而增強。
對本發(fā)明其它實施例的片劑以及其它劑型分別進行上述試驗，得到基本相似的結(jié)果。
實驗例3乳腺癌研究本實驗例通過研究本發(fā)明所述的中藥對人乳腺癌細胞株MCF27裸鼠移植瘤的抑制作用及其對細胞增殖的影響，從而驗證本發(fā)明所述中藥對治療或防治乳腺癌的作用。
1材料與方法1.1材料來源未交配雌性Balb/c-n/n裸小鼠，鼠齡4～6周，體重10-20g，共40只，購自中國藥品生物制品檢定所實驗動物中心；人乳腺癌細胞株MCF27購自武漢典型動物保藏中心；試驗用藥為本發(fā)明所述的中藥，按照實施例5的方式制備；多柔比星為陽性對照藥，由浙江海正制藥股份有限公司生產(chǎn)；丙二醇(分析純)為重慶東方試劑廠生產(chǎn)；抗Ki267單克隆抗體(鼠抗人，即用型)和SP試劑盒(通用型)購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。
1.2實驗方法1.2.1MCF27裸鼠移植瘤的復(fù)制 將MCF27細胞株培養(yǎng)于含10％小牛血清的RPM1 1640培養(yǎng)液中，并按16U/100mL加入精制胰島素。待傳代至足夠數(shù)量后，取對數(shù)生長期細胞用0.25％的胰酶消化成1.0×10-7mL-1的細胞懸液，于裸小鼠右側(cè)第1乳腺部位皮下注射，0.2mL/只。
1.2.2實驗分組 腫瘤細胞接種后28d，有36只可見接種部位移植瘤生長，4只未成瘤。將移植瘤接種成功的裸鼠隨機分組。I組(溶劑對照組)給予20％內(nèi)二醇，0.1mL/d，腹腔注射，1次/d，連續(xù)15d；II組(本發(fā)明實施例2所述中藥)給予本發(fā)明所述中藥50mg/(kg·d)溶于0.1mL20％丙二醇中，腹腔注射，1次/d，連用15d；III組(多柔比星組)給予多柔比星5.23mg/(kg·d)溶于0.1mL生理鹽水，腹腔注射，d1、d8、d15；給予20％丙二醇0.1mL/d，腹腔注射，1次/d，連用15d；IV組(聯(lián)合用藥組)給予多柔比星5.33mg/(kg·d)溶于0.1mL生理鹽水，腹腔注射，d1、d8、d15；給予本發(fā)明所述中藥50mg/(kg·d)溶于0.1mL 20％丙二醇中，腹腔注射，1次/d，連用15d。
1.2.3移植瘤生長情況及藥物抑瘤作用觀察 用藥前及用藥后每3d測量一次移植瘤最小徑(a)和最大徑(b)，計算移植瘤體積(V＝a2*b/2)，并據(jù)此繪制移植瘤生長曲線。藥物處理結(jié)束后1d，脫頸椎處死裸鼠，觀察記錄各組裸鼠乳腺包塊形態(tài)大小，將每個腫塊剝出稱重，計算抑瘤率。
抑瘤率(％)＝(1-實驗組瘤重/對照組瘤重)×100％1.2.4組織學及電鏡觀察 取新鮮的移植瘤組織，10％甲醛固定，石蠟包埋，切片(5μm)，HE染色。4℃4％戊二醛預(yù)固定，1％鋨酸固定，浸透包埋，半薄切片，光鏡定位，超薄切片，染色，以Hitachi2600透射電鏡觀察。
1.2.5免疫組化檢測Ki267的表達 按福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司提供的SP法進行免疫組化的檢測。結(jié)果判斷Ki267以細胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。判斷標準400倍鏡下5個視野中各計100個腫瘤細胞的陽性百分數(shù)，取其均值作為Ki267標記指數(shù)(Ki267 LI)。
1.3統(tǒng)計學方法采用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件包進行分析，各項數(shù)據(jù)均以x±s表示，用方差分析進行顯著性檢驗。
2結(jié)果2.1移植瘤生長情況接種MCF27乳腺瘤細胞株后10d，于接種處可見微小突起，以后逐漸明顯，40只裸鼠中有36只先后出現(xiàn)腫塊，接種成功率90％。接種28d后36只裸鼠移植瘤長徑長至0.8cm左右，再分組給予不同的藥物處理。藥物處理后，各組移植瘤繼續(xù)生長增大，但對照組移植瘤生長明顯快于其它3組(表10)。
表10移植瘤生長體積(mm3)

2.2藥物的抑瘤作用I組移植瘤質(zhì)量明顯高于II、III、IV組。II、III、IV組抑瘤率分別為36.46％、53.88％和41.49％。IV組抑瘤率高于II組抑瘤率，差異無顯著意義，P＞0.05，提示本發(fā)明所述中藥可抑制移植瘤的生長，但在此劑量水平及用藥時間上，聯(lián)合用藥無明顯協(xié)同作用(表11)。
表11各組裸鼠移植瘤質(zhì)量比較

(SPSS 10.AVONA分析，II、III、IV組與I組比較有顯著差異，P＜0.01，II、III、IV組之間無顯著性差異，P＞0.05)2.3移植瘤組織病理學觀察2.3.1巨檢 移植瘤呈圓形、橢圓形或分葉狀生長，質(zhì)地硬，切面灰白，大部分與周圍組織分界清楚。對照組可見胸壁浸潤，其中1只還發(fā)現(xiàn)腋窩腫大淋巴結(jié)1枚。
2.3.2光鏡 移植瘤細胞形狀不規(guī)則，大小不一，核大，濃染，核異形性明顯，可見病理性核分裂相，核質(zhì)比例明顯增大。各組內(nèi)均可見組織壞死區(qū)，對照組相對較少。對照組發(fā)現(xiàn)的腋窩腫大淋巴結(jié)經(jīng)病理證實為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌。
2.3.3電鏡 移植瘤細胞形態(tài)大小不一，核大不規(guī)則，核質(zhì)比例增大。對照組瘤細胞形態(tài)不規(guī)則，排列紊亂，核仁大，有的細胞可見2個核仁。本發(fā)明中藥組可見局灶性壞死區(qū)，核仁連集，常染色質(zhì)多，細胞器少，可見腺樣分化及內(nèi)包涵物，并可見凋亡現(xiàn)象。多柔比星組局灶性壞死區(qū)明顯，核仁大小不一，有的可見雙核仁，核仁邊集明顯，可見核膜破裂，部分粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體腫脹，細胞器部分崩解。
2.4移植瘤組織Ki-67免疫組化檢測結(jié)果移植瘤組織中Ki-67陽性表達主要位于細胞核。對照組表達率高于本發(fā)明中藥組、多柔比星組及聯(lián)合用藥組，聯(lián)合用藥組低于單用本發(fā)明中藥組(表12)。
表12各組裸鼠移植瘤組織抗Ki-67免疫組化結(jié)果比較

(SPSS10.0AWONA分析，II、III、IV組與I組比較有顯著差異，P＜0.01，II、III組與IV之間比較有顯著差異，P＜0.01，II、III組之間無顯著性差異，P＞0.05。
3討論本實驗通過復(fù)制人乳腺癌細胞株MCF27裸鼠移植瘤，觀察本發(fā)明中藥的抗癌作用，對照組瘤重明顯高于本發(fā)明中藥組、多柔比星組多聯(lián)合用藥組，P＜0.01，表明本發(fā)明中藥及聯(lián)合用藥均可明顯抑制移植瘤的生長。本實驗用的MCF27細胞株不是耐多柔比星的細胞株，因此沒有體現(xiàn)出聯(lián)合用藥的協(xié)同作用。
盡管MCF27細胞株不是高侵襲性的細胞株，但我們?nèi)匀挥^察到對照組裸鼠有胸壁浸潤的現(xiàn)象，其中1只尚有腑窩腫大淋巴結(jié)，經(jīng)病理證實系淋能結(jié)轉(zhuǎn)移癌，而其他各藥組均未發(fā)現(xiàn)此現(xiàn)象，反映本發(fā)明所述中藥及聯(lián)合用藥對移植瘤生長、浸潤甚至轉(zhuǎn)移有抑制作用。Ki-67存在于細胞周期的G1后期、S、G2和M期，而不存在于靜止的G0期細胞，是應(yīng)用最廣泛的增殖標記之一。它在G1后期開始出現(xiàn)，在S期和G2期逐漸升高，M期達到高峰，有絲分裂結(jié)束后，迅速降解消失。Ki267指數(shù)與腫瘤良、惡性程度有關(guān)，與腫瘤的惡性程度呈正相關(guān)。而且Pierga等提出，Ki-67表達情況可用為鑒別良惡性腫瘤的一個指標，或作為判斷腫瘤侵襲能力的一種標志。本實驗結(jié)果Ki-67指數(shù)對照組最高，本發(fā)明中藥組次之，均高于聯(lián)合用藥組，P＜0.01，表明本發(fā)明所述中藥有抑制移植瘤細胞增殖的作用，而且可協(xié)同多柔比星提高其抗增殖作用。
本發(fā)明其它實施例的中藥制劑也具有基本的效果。
實驗例4毒理研究本實驗例涉及本發(fā)明藥物的毒理學研究。
以小鼠為受試動物，采用最大給藥劑量法，對中藥本發(fā)明中藥單次經(jīng)口灌胃給藥毒性進行觀察。本發(fā)明中藥給藥劑量30g/kg(相當于生藥256.2g/kg體重)，20只動物，雌雄各半；經(jīng)口灌胃給藥，給藥1天，上午、下午各1次，連續(xù)觀察14天。
給藥后對小鼠的一般癥狀、體重等進行觀察。本發(fā)明中藥給藥后30min內(nèi)、1-4h時及此后14天內(nèi)均未見明顯中毒癥狀，觀察14天后體重增加無降低。結(jié)果表明，本發(fā)明中藥單次給藥的最大給藥劑量大于30g/kg，本發(fā)明中藥用藥不會產(chǎn)生急性毒性反應(yīng)。
本發(fā)明中藥重復(fù)給藥毒性很低，大劑量給藥時可引起一過性肝功能、血清CHOL改變，血液學、血清生化指標無異常變化，大體解剖、臟器系數(shù)及病理組織學檢查未見異常。初步推定本發(fā)明中藥作用靶器官為肝臟，但改變屬可逆性。本發(fā)明中藥大鼠經(jīng)口給藥安全劑量在4-8g/kg，相當于人生藥給藥量為34.2-68.3g/kg，折算為人生藥用量的6-12倍。
綜上表明，本發(fā)明中藥用藥無急性毒性反應(yīng)，重復(fù)用藥安全。
本發(fā)明其它實施例的中藥制劑也具有基本的效果。
實驗例5穩(wěn)定性試驗本實驗例涉及本發(fā)明藥物的初步穩(wěn)定試驗。
1.方法取樣品置溫度37-40℃，相對濕度75％的恒溫恒濕箱中定期檢查各項指標進行加速試驗。
每月觀察一次，觀察外觀，崩解時間，并對成分進行鑒別和含量測定，連續(xù)觀察六個月。
2.結(jié)果本制劑中各項指標在六個月的加速試驗中結(jié)果如下外觀 無變化，崩解時間 31-40min，鑒別 陽性，黃芪甲苷含量 無明顯波動，阿魏酸含量 無明顯波動細菌總數(shù)個/克＜50，
霉菌總數(shù)個/克＜50，大腸桿菌活螨 未檢出3.結(jié)論本制劑經(jīng)加速穩(wěn)定性試驗六個月指標無明顯改變，上述結(jié)果說明本發(fā)明的藥物穩(wěn)定性良好。
本發(fā)明其它實施例的中藥制劑也具有基本的效果。
實驗例6乳腺增生病68例的臨床研究乳腺增生病是臨床最常見的乳房疾病之一，部分類型與乳腺癌的發(fā)生密切相關(guān)。本發(fā)明的中藥制劑用于治乳腺增生病具有健脾益氣、養(yǎng)血柔肝、活血通絡(luò)、軟堅散結(jié)的作用。現(xiàn)報告如下。
1資料與方法1.1診斷標準 自覺乳房脹痛，多有周期性脹痛特點，脹痛程度不一，一側(cè)或雙側(cè)乳房內(nèi)可捫及多個散在大小不等的結(jié)節(jié)狀腫塊，質(zhì)韌而不硬，邊界不清，但與皮膚和基底不相連，可推動，多數(shù)有輕壓痛。
1.2臨床資料 68例均為門診女性患者，年齡在16～65歲，平均36.5歲；病程最短2個月，最長20年，平均8.5年。多以雙乳多發(fā)性的乳腺結(jié)節(jié)、乳房脹痛等癥狀就診。
1.3治療方法 68例乳腺增生患者均口服本發(fā)明實施例6的催乳顆粒，1次1包，1日3次，飯后服用，經(jīng)期停服。1個月為1個療程，每月來院復(fù)診1次。
2治療效果2.1療效標準根據(jù)中華全國中醫(yī)學會外科學會乳腺病專題組制定的療效評定標準判定。治愈乳房結(jié)節(jié)消失，乳痛消失；顯效乳房結(jié)節(jié)變軟，直徑縮小1/2以上，乳痛消失；有效乳房結(jié)節(jié)變軟，直徑縮小不足1/2，乳痛減輕；無效乳房結(jié)節(jié)無縮小，乳痛無緩解。
2.2結(jié)果68例患者均遵醫(yī)囑服藥，未同時服用其他藥物。結(jié)果見表13。
表13療效與服用療程

從表13可看出服藥時間越長，療效越好，總有效率越高。這與中藥本身特點有關(guān)，雖起效慢，但能標本同治；療效與患者病程長短亦有關(guān)，病程較長者，相對療程亦長。在整個服藥期間，未見明顯不良反應(yīng)。
3討論乳腺增生以中青年女子多見，為婦女常見病、多發(fā)病，易惡變。它的發(fā)生與卵巢功能失調(diào)有密切關(guān)系，正常的乳腺組織隨著月經(jīng)周期性激素的變化(主要是雌激素及孕激素)周而復(fù)始地進行增生—復(fù)舊—增生的循環(huán)過程。若因各種原因，該生理過程被打亂，進而體內(nèi)內(nèi)分泌紊亂，卵巢功能失調(diào)，雌激素分泌過多，致使雌激素長期刺激乳腺組織，導(dǎo)致正常乳腺組織過度增生而復(fù)舊不全，因而發(fā)生乳腺增生病。本發(fā)明的催乳顆粒能夠通過健脾益氣、養(yǎng)血柔肝、活血通絡(luò)、軟堅散結(jié)，對乳腺增生有標本兼治之功效，未見明顯不良反應(yīng)。同時，還具有抗慢性增生性炎癥的作用，可抑制纖維結(jié)締組織增生，因而有消腫散結(jié)的作用。我們認為，催乳顆粒不失為一種可供乳腺增生患者選擇的較佳藥物。
臨床試驗表明，本發(fā)明其它實施例的中藥制劑也具有基本的效果。
實驗例7子宮肌瘤的臨床研究對確診為子宮肌瘤(uterine myoma)的患者服用本發(fā)明的實施例13的催乳顆粒，月經(jīng)后第七天開始服用，每次一袋，每日3次，2-3周為一個療程，可以連續(xù)服用2-3個療程，其藥效較婦康片組提高25％。
臨床試驗表明，本發(fā)明器他實施例的中藥制劑也具有基本的效果。
實驗例8乳腺癌60例的臨床研究一、病例選擇60例病人，均經(jīng)各大醫(yī)院確診為乳腺癌患者，全部為女性，年齡最小者35歲，最大者66歲。
二、治療方法對確診為子宮肌瘤(uterine myoma)的患者服用本發(fā)明的實施例13的催乳顆粒，月經(jīng)后第七天開始服用，每次一袋，每日3次，2-3周為一個療程，可以連續(xù)服用2-3個療程。
三、療效標準臨床治愈腫瘤完全消失，維持時間在6個月至一年，無復(fù)發(fā)征象。
臨床顯效腫瘤縮小1/2以上，維持時間在1個月以上者。
臨床有效腫瘤縮小不足1/2，維持時間在1個月以上者。
臨床無效腫瘤無變化，或短期內(nèi)有效后又繼續(xù)增大者。
四、療效觀察結(jié)果
表14療效結(jié)果

從表14可以看出，本發(fā)明所述的催乳顆粒，劑量準確，標本兼治，療效獨特，并且對人體無毒無害，無副作用，服用方便，總有效率為78％。臨床試驗表明，本發(fā)明其它實施例的中藥制劑也具有基本的效果。
權(quán)利要求
1.一種中藥制劑在制備治療和預(yù)防婦科疾病藥物上的用途，所述中藥包括如下中藥成分黃芪100-487重量份黨參100-487重量份白術(shù)50-196重量份當歸50-196重量份川芎49-146重量份，柴胡49-146重量份王不留行(炒)60-146重量份漏蘆50-146重量份萱草根49-100重量份上述成分經(jīng)浸泡、水提、濾過及濃縮后，得到浸膏，在浸膏加入常用藥物輔料制備為藥用的各種固體及口服制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于所述中藥制劑在制備治療乳腺增生病/癥、子宮肌瘤以及防治乳腺癌上的藥物上的用途。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于中藥組成為黃芪146-487重量份黨參146-487重量份白術(shù)98-196重量份當歸98-196重量份川芎49-146重量份。柴胡49-146重量份王不留行(炒)73-146重量份漏蘆82-146重量份萱草根49-98重量份。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于中藥組成為黃芪100g-200g、黨參100g-180g、白術(shù)50g-130g、當歸100g-180g、川芎60g-120g、柴胡50g-130g、王不留行60g-120g、漏蘆50g-130g、萱草根50g-100g；優(yōu)選每1000g制劑由以下組分制成黃芪135g-160g、黨參135g-160g、白術(shù)90g-105g、當歸135g-160g、川芎90g-105g、柴胡90g-105g、王不留行90g-105g、漏蘆90g-105g、萱草根70g-80g。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的用途，其特征在于中藥組成為黃芪146重量份黨參146重量份白術(shù)98重量份當歸146重量份川芎98重量份柴胡98重量份王不留行(炒)98重量份漏蘆98重量份萱草根73重量份。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于中藥的制備工藝為將上述處方量的各味中藥加7-15倍水浸泡2-20小時后，加熱煮沸1--3小時，濾出藥液；藥渣加5-10倍水，加熱煮沸0.5---2小時，濾出藥液；藥渣再加4-8倍水，加熱煮沸0.5---2小時，合并3次水提取液濾過。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其特征在于中藥的制備工藝為加入10公斤水浸泡12小時后，加熱煮沸2小時，濾出藥液；藥渣加8公斤水，加熱煮沸1小時，濾出藥液；藥渣再加6公斤水，加熱煮沸1小時，合并3次水提取液，濾過后減壓濃縮至80℃時相對密度1.1---1.5g/ml的浸膏。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于中藥的制備工藝為上述藥物清洗、除雜質(zhì)后，加水8Kg-12Kg浸泡12小時后，加熱煮沸2小時，濾出藥液；藥渣加水6Kg-10Kg，加熱煮沸1小時，濾出藥液；藥渣再加水5Kg·8Kg，加熱煮沸1小時，濾出藥液；合并三次濾出的藥液減壓濃縮至相對密度1.30-1.35的浸膏，冷卻至室溫；取經(jīng)粉碎后過80目篩的糖粉400g-600g，過120目篩的糊精300g-500g，置攪拌機內(nèi)混勻，在攪拌下加入浸膏，繼續(xù)攪拌成軟材，經(jīng)14目篩制粒，顆粒于60-70℃通風干燥，干燥粒經(jīng)12目篩整粒后，以40目篩篩去微量細粉，制得1000g顆粒。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于還包括480重量份調(diào)味劑，以及420重量份賦形劑，以制備顆粒劑、片劑、口服液、膠囊等可藥用劑型。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于其中的調(diào)味劑為蔗糖、葡萄糖、果糖或甜味劑，賦形劑為淀粉、糊精、或適合本發(fā)明的其他賦形劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療乳腺增生病/癥、子宮肌瘤和防治乳腺癌的中藥制劑以及其用途。所述的中藥制劑是將黃芪100－487重量份、黨參100－487重量份、白術(shù)50－196重量份、當歸50－196重量份、川芎49－146重量份、柴胡49－146重量份、王不留行(炒)60－146重量份、漏蘆50－146重量份、萱草根49－100重量份經(jīng)浸泡、水提、濾過及濃縮后，得到浸膏，在浸膏加入常用藥物輔料制備為藥用的各種固體及口服制劑。本發(fā)明的中藥具有治療乳腺增生病/癥、子宮肌瘤以及防治乳腺癌的功效。
文檔編號A61K9/20GK101077384SQ20071010708
公開日2007年11月28日 申請日期2007年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月25日
發(fā)明者高尚先 申請人:高尚先