專利名稱：一種治療肝損害的藥物及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種治療由肝炎及其它肝毒因素造成肝損害 的藥物及制備方法。
背景技術(shù)：
據(jù)世界衛(wèi)生組織公布的數(shù)據(jù)，全世界有2億多人攜帶乙肝病毒，受到病毒性 肝損害的影響；此外藥物的肝損害作用也相當(dāng)嚴(yán)重，如大多數(shù)抗癌藥物和抗結(jié)核 藥物都有相當(dāng)強(qiáng)的肝毒效應(yīng)；第三飲酒過(guò)量、環(huán)境污染、農(nóng)藥殘留以及不適當(dāng)使 用合成食品添加劑造成的肝損害也日益突出。
臨床上治療肝損害所使用的天然藥物有肌苷、甘草酸、水飛薊素等，近年來(lái) 國(guó)內(nèi)外開展了中藥胡黃連保肝、利膽、抗病毒研究，發(fā)現(xiàn)胡黃連中的胡黃連環(huán)烯 醚萜苷的保肝作用是目前臨床用量最大的保肝藥物水飛薊素保肝作用的4 6 倍。但目前國(guó)內(nèi)外從胡黃連中提取、分離胡黃連苷多采用合成的大孔樹脂為吸附 劑的分離工藝如國(guó)內(nèi)專利02111626. 1、 02113737.4、 02125544. X均采用101 型大孔樹脂、苯乙烯型大孔樹脂、丙烯腈型大孔樹脂等作為吸附劑。由于大孔樹 脂在合成過(guò)程中須加入苯、甲苯類的致孔劑，使得大孔樹脂骨架殘留物如苯、甲 苯、二甲苯、苯乙烯、二乙烯基苯等有機(jī)殘留物引入藥物提取、分離物中，產(chǎn)生 對(duì)人的神經(jīng)系統(tǒng)、骨骼等毒性又稱"二次污染"。而要消除"二次污染"則工藝 復(fù)雜成本較高。
本發(fā)明的目的就是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，不用大孔樹脂工藝，避免大孔樹脂 骨架殘留物產(chǎn)生的毒性。提供一種治療肝損害更加高效、低毒、環(huán)保的藥物制劑 及制備方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的 本發(fā)明的原料藥可通過(guò)如下方法制備
(a) 將胡黃連干燥根莖粗粉用10 30倍乙醇回流提取三次，每次1 3小時(shí)， 合并濾液，濾液回收乙醇至稀膏；
(b) 向稀膏中加入1/2 1/5量的層析硅膠拌勻、干燥；
(c) 取層析硅膠用氯仿一 甲醇(20:1)上柱后將(b)中樣品加于頂端，氯仿_甲
醇(20:1 2:1)洗脫；洗脫過(guò)程中收集胡黃連總苷含量超過(guò)50%的組分，合并回收 溶劑，得干膏、粉碎成細(xì)粉即得胡黃連總苷原料藥。
(d) 胡黃連總苷原料藥中加入制備不同劑型所需的輔料后以常規(guī)的制劑方 法制備成不同劑型，如軟膠囊劑、膠囊劑、片劑、顆粒劑、滴丸劑等。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
取含胡黃連苷II12g的原料藥加入聚乙二醇200 400至320 350g研磨均
勻，微熱溶解，減壓除氣，得軟膠囊內(nèi)容物；
取明膠1份，加水0.92份及甘油0.35份，75 85"C保溫待用； 取膠液與內(nèi)容物液上軟膠囊機(jī)壓制成軟膠囊，再經(jīng)定型、干燥、洗丸、干燥、
包裝得制劑(O. 35g/粒)。
實(shí)施例2
取含胡黃連苷II12g的原料藥，加入淀粉162g，微粉硅膠16g，制成顆粒作 成1000粒膠囊(0.2g/粒)。 實(shí)施例3
取含胡黃連苷ni2g的原料藥，加入微粉硅膠6g，羧甲淀粉鈉182g制粒、 壓片，制成1000片(0.2g/片)。 實(shí)施例4
取含胡黃連苷II12g的原料藥，加入蔗糖粉和糊精制粒、干燥、整粒制得顆 粒劑1000g，分裝成2g/包。
以上各實(shí)例中每粒(片、包)中含胡黃連苷II12mg，治療肝損害成人服用量 為2次/日，24mg 48rag/次。 胡黃連總苷藥理毒理研究
藥效學(xué)試驗(yàn)研究表明，胡黃連環(huán)烯醚萜總苷在8. 8-35. Omg/kg劑量范圍內(nèi)， 連續(xù)灌胃給藥7天，對(duì)四氯化碳、乙醇及撲熱息痛引起的小鼠急性肝損傷具有明 顯的保護(hù)作用；在6.3-25.0mg/kg劑量下，連續(xù)灌胃給藥45天，能夠明顯拮抗四 氯化碳引起的大鼠慢性肝損傷，減少其肝臟中羥輔氮酸含量，改善肝臟功能，減輕 大鼠肝纖維化病變程度；在50. 0-100. Omg/kg劑量下，十二指腸單次給藥后30-60
分鐘，能夠明顯增加麻醉大鼠膽汁分泌量；在2.5-10.0mg/kg劑量下，能夠提高小 鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能。
一般藥理研究試驗(yàn)結(jié)果表明，胡黃連總苷100.0mg/kg、 50.0mg/kg、 25. Omg/kg十二指腸給藥對(duì)麻醉犬血壓、呼吸、心電圖等各項(xiàng)指標(biāo)與空白，照組 比較均無(wú)明顯差異。灌胃給藥600. Omg/kg、 300. Omg/kg及150. Omg/kg對(duì)小鼠自 主活動(dòng)次數(shù)無(wú)明顯影響。小鼠急性毒性試驗(yàn)表明，胡黃連總苷一次性灌胃給藥 5.0g/kg,對(duì)動(dòng)物無(wú)明顯毒性作用，給藥后動(dòng)物健康，體重增長(zhǎng)良好，其灌胃給 藥LD.w〉5.0g/kg。 一次性腹腔注射給藥，測(cè)得胡黃連總苷的LDs。為2.63g/kg， 其95%的可信限為2. 42 2. 85g/kg。
大鼠和犬長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)，連續(xù)給藥180天，通過(guò)對(duì)動(dòng)物一般情況觀察、病 理組織學(xué)、血液學(xué)及血液生化學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)的檢査，證實(shí)大鼠和犬長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)大 劑量組(大鼠800.0 mg/kg、犬400.0 mg/kg)動(dòng)物在給藥過(guò)程中出現(xiàn)階段性 進(jìn)食量減少、體重增長(zhǎng)緩慢等中毒癥狀，而隨給藥時(shí)間的延長(zhǎng)，動(dòng)物逐漸耐受并 自行恢復(fù)。各給藥組與對(duì)照組比較，其血液學(xué)、血生化檢測(cè)、臟器系數(shù)和^理組 織學(xué)檢査均無(wú)顯著差異。試驗(yàn)認(rèn)為，連續(xù)給藥180天，胡黃連總苷800. Omg/kg 對(duì)于大鼠是可逆性中毒劑量，400.0mg/kg為安全劑量；犬可逆性中毒劑量是 400.0mg/kg，安全劑量是200.(kg/kg。其中毒靶器官可能是胃腸道。 l.主要藥效學(xué)試驗(yàn)研究(20)
試驗(yàn)觀察了胡黃連總苷的保肝利膽作用及對(duì)小鼠免疫功能的影響。 1. 1胡黃連總苷對(duì)乙醇致小鼠急性肝損傷的影響-
取體重為22-24g的雌性小鼠60只，隨機(jī)分為6組正常對(duì)照組、模型對(duì) 照組、益肝靈陽(yáng)性對(duì)照(150.0mg/kg)組、胡黃連總苷大劑量(35.0mg/kg)組、 中劑量(17. 5mg/kg)組、小劑量(8. 8mg/kg)組。灌胃給藥，給藥容積0. 5ml/20g 體重，正常對(duì)照組及模型對(duì)照組給予等容積蒸餾水，連續(xù)給藥7天，于第6天給 藥后6小時(shí)，除正常對(duì)照組外，均灌胃給予55X乙醇15ml/kg，于末次給藥后24 小時(shí)，摘眼球取血(取血前禁食16小時(shí))，分離血清測(cè)定ALT、 AST，同時(shí)剖取 肝臟，計(jì)算肝臟指數(shù)。
結(jié)果表明，胡黃連總苷在8. 8-35. Omg/kg劑量下，能夠明顯抑制由乙醇所 致的血清ALT、 AST和肝指數(shù)的升高，說(shuō)明胡黃連總苷在本試驗(yàn)劑量范圍內(nèi)對(duì)乙 醇所致的急性肝損傷具有明顯的保護(hù)作用。
1. 2胡黃連總苷對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷的影響
取體重為18-22g的小鼠60只(雄性)，分組及給藥同上，連續(xù)給藥7天， 于第6天給藥后6小時(shí)，除正常對(duì)照組外，均腹腔注射給予0. 1%四氯化碳 10ml/kg，于末次給藥后24小時(shí)，摘眼球取血(取血前禁食16小時(shí))，分離血清 測(cè)定ALT、 AST，同時(shí)剖取肝臟，計(jì)算肝臟指數(shù)。
結(jié)果給予四氯化碳后，模型組小鼠血清ALT及AST水平明顯升高，肝指數(shù) 明顯增加，而胡黃連總苷在8.8-35.0mg/kg劑量范圍內(nèi)，其血清ALT、 AST水平 及肝指數(shù)均未明顯升高，與模型對(duì)照組比較差異顯著。說(shuō)明胡黃連總苷對(duì)四氯化 碳致小鼠急性肝損傷具有明顯保護(hù)作用。
1. 3.胡黃連總苷對(duì)撲熱息痛致小鼠急性肝損傷的影響
取體重為22-24g的小鼠60只(雌性)，分組及給藥同上，連續(xù)給藥7天， 于第6天給藥后6小時(shí)，除正常對(duì)照組外，均腹腔注射給予撲熱息痛150mg/kg， 于末次給藥后24小時(shí)，摘眼球取血(取血前禁食16小時(shí))，分離血清測(cè)定ALT、 AST，同時(shí)剖取肝臟，比較組間差異。
給予撲熱息痛后，模型組小鼠血清ALT及AST水平明顯升高，肝指數(shù)明顯 增加，而胡黃連總苷在8.8-35.0mg/kg劑量范圍內(nèi)，其血清ALT、 AST水平及肝 指數(shù)均未明顯升高，與模型對(duì)照組比較差異顯著。說(shuō)明胡黃連總苷對(duì)撲熱息痛致 小鼠急性肝損傷具有明顯保護(hù)作用。
1. 4.胡黃連總苷對(duì)四氯化碳致大鼠慢性肝損傷的影響
取體重為150-180g的雄性大鼠110只，除正常對(duì)照組(10只)夕卜，其余大 鼠均皮下注射25。/。四氯化碳2ml/kg，每周2次，連續(xù)給予12周建立慢性肝損傷 模型，將完成造模大鼠隨機(jī)分為以下五組模型對(duì)照組、益肝靈陽(yáng)性對(duì)照 (100.0mg/kg)組、胡黃連總苷大劑量(25.0mg/kg)組、中劑量(12.5i4/kg) 組、小劑量(6.3mg/kg)組，每組10-11只。灌胃給藥，給藥容積2.0ml/只， 正常對(duì)照組及模型對(duì)照組給予等容積蒸餾水，連續(xù)給藥45天，于末次給藥后24 小時(shí)，頸靜脈取血，分離血清測(cè)定ALT、 AST、 TP、 ALB、 A/G、 T-BIL，剖取肝臟 進(jìn)行如下檢測(cè)①稱重后計(jì)算肝臟指數(shù)；②取肝左葉同一位置肝組織0.5g，制 成肝勻漿，測(cè)羥脯氨酸含量；③截取肝左葉同一位置肝組織，固定于10%福爾馬
林溶液中，進(jìn)行病理組織學(xué)檢査。
結(jié)果表明，胡黃連總苷在6.3-25.0mg/kg劑量范圍內(nèi)，能夠明顯抑制血清 ALT、 AST水平及肝指數(shù)升高，減少肝組織中羥脯氨酸含量，明顯減輕肝臟組織
的纖維化，與模型對(duì)照組比較差異顯著。 1.5.胡黃連總苷的利膽作用
取大鼠50只，雄性，體重300 —350g，隨機(jī)分為5組，分別為胡黃連總苷 大劑量組(100.0mg/kg)、中劑量組(50.0mg/kg)、小劑量組(25. Omg/kg)、陽(yáng) 性對(duì)照利膽片組(2300mg/kg)及正常對(duì)照組，每組10只。大鼠在1%戊巴比妥 鈉40mg/kg腹腔注射麻醉下，仰臥固定于手術(shù)臺(tái)，沿腹正中線切開腹壁，找出十 二指腸，在降部腸系膜中找到膽管，將4號(hào)頭皮針向肝臟方向刺入膽總管，即可 見有淡黃綠色膽汁沿塑料管流出，用EP離心管收集膽汁，術(shù)后用鹽水紗布覆蓋 腹腔，穩(wěn)定20分鐘后，收集30min膽汁，作為給藥前的基礎(chǔ)值，然后各組分別 經(jīng)十二指腸一次性給于上述不同藥物，給藥體積為0.8ml/200g。正常對(duì)照組給 予等體積的蒸餾水，分別收集給藥后30、 60、 90、 120min內(nèi)膽汁流量。
試驗(yàn)結(jié)果表明，胡黃連總苷100.0mg/kg、50. 0mg/kg在給藥后30min及60min 可明顯增加大鼠膽汁流量，與對(duì)照組比較有顯著性差異。
1. 6.胡黃連總苷對(duì)正常小鼠碳粒廓清指數(shù)的影響
分別進(jìn)行了兩次試驗(yàn)，設(shè)胡黃連總苷劑量為2. 5—10. Omg/kg或 12.5—50.0mg/kg，同時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照組(阿膠補(bǔ)血口服液12.5ml/kg)及空白對(duì) 照組，每組10只。每日灌胃給藥一次，0.5ml/只，連續(xù)給藥7天。于末次給藥 后24小時(shí)，各小鼠經(jīng)尾靜脈注射印度墨汁O. lml/10g體重，于注射印度墨汁后 2分鐘(U和10分鐘(t》，分別從眼睚靜脈取血20ul，加入到盛有2ml雙蒸 水的試管內(nèi)搖勻，用722分光光度計(jì)在680nm處比色測(cè)定光密度0D值，計(jì)算廓 清指數(shù)(K值)及校正吞噬指數(shù)(a值)。K=(log 0D1-log 0D2) /(t2-1,) ， a = 體重/(肝重+脾重)XK"3。 .
結(jié)果表明，連續(xù)給藥7天，50 mg/kg劑量，胡黃連總苷對(duì)正常小鼠碳廓 清速率有一定的抑制作用(P〈0.05);在2.5-10mg/kg范圍內(nèi)則具有明顯提高作 用，說(shuō)明胡黃連總苷高劑量，對(duì)巨噬細(xì)胞的吞噬功能具有一定抑制作用，而低劑 量胡黃連總苷能夠明顯提高巨噬細(xì)胞的吞噬功能。
2. —般藥理研究(21)
試驗(yàn)選用雜種犬。觀察了不同劑量的胡黃連總苷十二指腸給藥對(duì)麻醉犬 血壓、呼吸、心電圖各項(xiàng)指標(biāo)及小鼠自主活動(dòng)的影響。結(jié)果表明胡黃連總苷 100.0mg/kg、 50. Omg/kg及25. Omg/kg三個(gè)劑量對(duì)麻醉犬血壓、呼吸及心電圖 各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)明顯影響。胡黃連總苷灌胃給藥600.0mg/kg、 300.0mg/kg及 150. Omg/kg對(duì)小鼠自主活動(dòng)次數(shù)無(wú)明顯影響。
3. 急性毒性試驗(yàn)(22)
試驗(yàn)選用昆明種小鼠。分別觀察了胡黃連總苷一次性灌胃和腹腔注射給藥對(duì) 小鼠產(chǎn)生的急性毒性作用。結(jié)果表明胡黃連總苷5.0g/kg劑量一次性灌胃，于給 藥即刻及14天的觀察期內(nèi)動(dòng)物均未出現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)，小鼠體重增長(zhǎng)良好，也 無(wú)動(dòng)物死亡。 一次性腹腔注射胡黃連總苷的LDs。為2.63g/kg，，其95%的可信限 為2. 42 2.85g/kg。
4. 長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)(23)
4.1胡黃連總苷大鼠長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)
試驗(yàn)選用800.0、 400.0、 200.0mg/kg三個(gè)劑量組，每日灌胃給藥1次，連 續(xù)給藥180天對(duì)Wistar大鼠產(chǎn)生的毒性作用。試驗(yàn)期間觀察大鼠的一般狀況， 定期稱量體重和進(jìn)食量，于給藥90天、給藥180天及停藥15天分別進(jìn)行血液學(xué) 及血液生化學(xué)檢測(cè)。在給藥180天每組各處死1/2動(dòng)物解剖主要臟器稱重、計(jì)算 臟器系數(shù)并進(jìn)行病理組織學(xué)檢査。于停藥后15天處死各組動(dòng)物進(jìn)行同上大體和 病理檢査，臟器系數(shù)計(jì)算。
在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中，大劑量組于給藥45天一90天期間，動(dòng)物一般狀況欠 佳，表現(xiàn)為輕度豎毛、倦怠、進(jìn)食量減少。于給藥60天及70天時(shí)大劑量組大 鼠體重與對(duì)照組比較有明顯差異(P<0.05)。至給藥90天以后大劑量組動(dòng)物一 般狀況改善，進(jìn)食量及體重增長(zhǎng)速度逐漸恢復(fù)，與對(duì)照組比較無(wú)明顯差異。其 它各組動(dòng)物一般狀況良好，與對(duì)照組比較無(wú)明顯差異。各劑量組動(dòng)物體重與給 藥前比較均有增加，血液學(xué)、血液生化學(xué)等各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)及臟器系數(shù)與對(duì)照組 比較均無(wú)明顯差異(P>0.05)。病理組織學(xué)檢査顯示，各組動(dòng)物心、肝、脾、肺、 腎等主要臟器與對(duì)照組比較未見明顯病理形態(tài)學(xué)改變。
綜合分析認(rèn)為，大鼠長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)中，800.0mg/kg是可逆性中毒劑量，其
中毒耙器官可能是胃腸道，但其作用隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)，動(dòng)物耐受且能自行 恢復(fù)。試驗(yàn)提示400. 0mg/kg為安全劑量。 4. 2胡黃連總苷犬長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)
試驗(yàn)選用Beagle犬。觀察了胡黃連總苷在400. 0、 200.0、 100. Omg/kg三 個(gè)劑量下，每日灌胃給藥l次，連續(xù)給藥180天對(duì)犬產(chǎn)生的毒性作用。實(shí)驗(yàn)期間 觀察犬的一般狀況，定期稱量體重，于給藥前、給藥60天、給藥120天、給藥 180天及停藥15天進(jìn)行血液學(xué)、凝血時(shí)間、血生化、大小便常規(guī)及心電圖(II 導(dǎo)聯(lián))檢測(cè)。在給藥180天各組處死一半動(dòng)物取主要臟器稱重、計(jì)算臟器系數(shù)并 進(jìn)行病理組織學(xué)檢査。于停藥后15天處死各組動(dòng)物同上進(jìn)行大體和病理檢査， 計(jì)算臟器系數(shù)，取胸骨柄做骨髓涂片鏡檢。
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，各劑量組犬出現(xiàn)反射性流涎癥狀。連續(xù)給藥180天，除大 劑量犬在給藥4周一10周時(shí)出現(xiàn)進(jìn)食量減少、體重增長(zhǎng)緩慢，8—10周時(shí)體重明 顯低于對(duì)照組外(P<0.05)，中、小給藥組犬進(jìn)食、活動(dòng)良好，未出現(xiàn)明顯異常 反應(yīng)。各給藥組血液學(xué)檢査、血生化學(xué)檢査、心電圖及臟器系數(shù)、骨髓涂片檢査 與對(duì)照組比較均無(wú)明顯差異(P〉0.05),病理組織檢査各組動(dòng)物心、肝、脾、肺、 腎、腦、胃、腸、腎上腺、卵巢、子宮、前列腺、睪丸、淋巴結(jié)、甲狀腺等臟器 與對(duì)照組比較亦未見明顯病理形態(tài)學(xué)改變。
綜合分析認(rèn)為，犬長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)中，胡黃連總苷中毒劑量是400.0n^/kg， 其中毒靶器官可能是胃腸道，但中毒作用是可復(fù)性的。安全劑量是200.0mg/kg。
權(quán)利要求
1、一種治療肝損害的藥物，其特征在于包括下列步驟(a)將胡黃連干燥根莖粗粉用10～30倍乙醇回流提取三次，每次1～3小時(shí)，合并濾液，濾液回收乙醇至稀膏；(b)向稀膏中加入1/2～1/5量的層析硅膠拌勻、干燥；.(c)取層析硅膠用氯仿-甲醇(20∶1)上柱后將(b)中樣品加于頂端，氯仿-甲醇(20∶1～2∶1)洗脫；洗脫過(guò)程中收集胡黃連總苷含量超過(guò)50％的組分，合并回收溶劑，得干膏、粉碎成細(xì)粉即得胡黃連總苷原料藥。(d)胡黃連總苷原料藥中加入制備不同劑型所需的輔料后以常規(guī)的制劑方法制備成不同劑型，如軟膠囊劑、膠囊劑、片劑、顆粒劑。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述軟膠囊的制備方法，其特征在于將胡黃連 總苷原料藥，加入輔料制成軟膠囊內(nèi)容物液，與明膠液一起，制成軟 膠囊劑。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述膠囊的制備方法，其特征在于將胡黃連總 苷原料藥，加入輔料制成顆粒，裝入膠囊殼，制成膠囊劑。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述片劑的制備方法，特征在于將胡黃連總苷 原料藥，加入輔料制成顆粒，壓片，制成片劑。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述顆粒劑的制備方法，特征在于將胡黃連總 苷原料藥，加入輔料制成顆粒劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療肝損害的藥物及制備方法，屬藥品技術(shù)領(lǐng)域。制備方法是將胡黃連用乙醇提取三次濃縮成稀膏，再經(jīng)柱層析洗脫分離、干燥得胡黃連總苷原料藥，加入輔料，制備成軟膠囊劑、膠囊劑、片劑、顆粒劑等。本發(fā)明治療肝損害效果好，使用方便。
文檔編號(hào)A61K36/718GK101167824SQ20071011306
公開日2008年4月30日 申請(qǐng)日期2007年10月16日 優(yōu)先權(quán)日2007年10月16日
發(fā)明者岱 孫, 張華英, 坤 王, 王名州 申請(qǐng)人:濟(jì)南康眾醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司