專利名稱：：一種中藥及其制劑的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及山香圓葉及含山香圓葉制劑的質(zhì)量控制方法，尤其是以沒(méi)食子酸、芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷、芹菜素-7-0-6-D-葡萄糖苷及芹菜素等為質(zhì)量控制指標(biāo)的質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
：山香圓葉為省沽油科植物山香圓TurpiniaargutaSeem.的新鮮或干燥葉，在江西、福建、廣西、廣東、湖南、臺(tái)灣等省均有分布，具有清熱泄火，利咽消腫的功效，臨床用于咽炎、急性扁桃體炎、咽喉腫痛的治療。山香圓葉作為治療喉部急性疾病的草藥在江西省安遠(yuǎn)縣民間應(yīng)用有悠久的歷史，對(duì)咽喉、口腔等疾病具有顯著的療效，專利(申請(qǐng)?zhí)?00610200362.0)表明其有治療病毒性感冒的作用，專利(申請(qǐng)?zhí)?007102005917)表明其提取物具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗突變、抗腫瘤、抗血栓、抗動(dòng)脈硬化、肝臟保護(hù)、抗乙肝病毒、抗抑郁、神經(jīng)元保護(hù)及免疫調(diào)節(jié)等作用。經(jīng)檢索國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局藥品基礎(chǔ)數(shù)據(jù)庫(kù)，已上市產(chǎn)品有山香圓片、山香圓顆粒、山香圓含片等，已上市的山香圓葉制劑(如山香圓顆粒、山香圓片等)質(zhì)量控制方法多采用以山香圓葉對(duì)照藥材薄層色譜鑒別的質(zhì)量控制方法(中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)，中藥成方制劑第十七冊(cè)18;中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)，中藥成方制劑第十一冊(cè)18)，另有對(duì)其熊果酸含量測(cè)定和薄層色譜鑒別及以蘆丁為對(duì)照的分光光度法測(cè)定總黃酮含量(毛友昌等，薄層掃描法測(cè)定山香圓葉中熊果酸的含量，現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，1997，14(3):7;羅憲堂等，UV法測(cè)定山香圓葉中黃酮類成分含量，中醫(yī)藥研究，2002，18(5):48)，上述方法均難以綜合反應(yīng)和控制藥材及制劑質(zhì)量，單采用熊果酸成分控制藥材及制劑質(zhì)量缺陷為，熊果酸含量很低，專屬性不夠，且這些已上市的制劑中，提取工藝為水提或稀乙醇醇沉提取工藝，熊果酸等脂溶性成分提取率很低，不能真實(shí)反映藥材及制劑的質(zhì)量，也就難以保證藥物的安全、有效和質(zhì)量可控，且中藥藥效為多成分綜合協(xié)同作用的結(jié)果，控制單一成分質(zhì)量指標(biāo)不能全面體現(xiàn)臨床藥理作用效果；采用對(duì)照藥材的質(zhì)量控制方法只能進(jìn)行定性，而不能精確定量，在復(fù)方制劑中由于成分復(fù)雜而方法應(yīng)用受限；分光光度法測(cè)定總黃酮的方法存在假陽(yáng)性結(jié)果，成分干擾大，沒(méi)有專屬性山香圓葉一般于夏、秋二季葉茂盛時(shí)采收，但實(shí)際由于受短期利益等的影響，很多沒(méi)有到合適采收季節(jié)的藥材被提前采收，或被摻入其他葉雜質(zhì)，這對(duì)藥物的安全性、有效性造成影響；另外，由于藥物制備工藝的影響，如制備工藝的具體參數(shù)缺陷，即使采用了某些中間體質(zhì)量指標(biāo)檢測(cè)，但由于質(zhì)量控制指標(biāo)的不全面及不完善，仍會(huì)造成藥效成分含量降低等而影響藥物的安全性、有效性。所以一個(gè)能綜合反應(yīng)藥材及制劑質(zhì)量的質(zhì)量控制方法，即一個(gè)穩(wěn)定可靠的能綜合反映藥物安全、有效的質(zhì)量控制指標(biāo)，具有很重要的意義。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于一種山香圓葉及含山香園的制劑的質(zhì)量控制方法，該方法可綜合反映和控制藥材及制劑的質(zhì)量。本發(fā)明的質(zhì)量控制方法含以沒(méi)食子酸、芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷、芹菜素-7-o-e-D-葡萄糖苷、芹菜素、木犀草素-7-o-e-葡萄糖苷、鄰苯三酚、香草酸、對(duì)羥基肉桂酸、a-呋喃甲酸等成分為質(zhì)量控制指標(biāo)的質(zhì)量控制方法，含以上述具體質(zhì)量控制指標(biāo)的定量控制方法、定性鑒別方法及以指紋圖譜定性和定量的質(zhì)量控制方法。定性及定量方法，如薄層色譜(TLC)鑒別方法，紫外分光光度鑒別法，高效液相(HPLC)含量測(cè)定方法，指紋圖譜質(zhì)量控制方法等，優(yōu)選HPLC法，可以選用紫外型檢測(cè)器，也可以為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，或HPLC-MS連用檢測(cè)等方法，具體以達(dá)到上述成分良好的分離和測(cè)定為宜，比較簡(jiǎn)便可行的方法可以為HPLC法，選用紫外型檢測(cè)器或蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。到目前為止，以沒(méi)食子酸、芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷、芹菜素-7-o-e-D-葡萄糖苷、芹菜素、木犀草素-7-o-e-葡萄糖苷、鄰苯三酚、香草酸、對(duì)羥基肉桂酸、a-呋喃甲酸等為質(zhì)量控制指標(biāo)的山香圓葉及含山香園的制劑的質(zhì)量控制方法未見(jiàn)報(bào)道。芹菜素具有抗炎、抗氧化、抗病毒、抑制腫瘤、抗血栓抗動(dòng)脈硬化、抗抑郁、神經(jīng)元保護(hù)、免疫調(diào)節(jié)等多方面作用(孫斌，等.芹菜素的藥理作用研究進(jìn)展.中藥材，2004，27(7):531;劉嬋，等.芹菜素對(duì)中樞神經(jīng)作用的研究進(jìn)展.國(guó)外醫(yī)學(xué)神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)分冊(cè).2005，32(3):264;歷強(qiáng)，等.芹菜素抑制腫瘤作用的研究進(jìn)展.陜西醫(yī)學(xué)雜志，2003，32(5):439;PatelD，ShuklaS，GuptaS.Apigeninandcancerchemoprevention:progress,potentialandpromise(review).IntJOncol.2007Jan;30(1):233-45.);芹菜素-7-0-{3-D-葡萄糖苷具有保肝作用(ZhengQS，SunXL，XuB，LiG，SongM.Mechanismsofapigenin-7-glucosideasahepatoprotectiveagent.BiomedEnvironSci.2005Feb;18(1):65-70.);芹菜素-7-0-{3-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-0-{3-新橙皮糖苷、齊菜素-7-o-2'-e-鼠李糖基蕓香糖苷等成分具有相同的齊菜素苷元，藥理作用與齊菜素類似，但理化性質(zhì)與芹菜素比較更有優(yōu)越性，如具有更好的水溶性；沒(méi)食子酸具有抗炎、抗氧化、抗突變、抗腫瘤、抗病毒、肝臟保護(hù)和抗乙肝病毒等的藥理活性(李肖玲，等.沒(méi)食子酸生物學(xué)作用的研究進(jìn)展.中國(guó)藥師，2004，7(10):767)，木犀草素-7-O-{3-葡萄糖苷具有緩解心肌痙攣、抗腫瘤、抗疲勞、抗氧化、降血脂等作用(專利公開(kāi)號(hào)CN1419912A)，上述成分的抗炎、抗氧化、抗病毒作用均與山香圓葉及其制劑(如山香圓片、山香圓顆粒)的功能主治相關(guān)，并與專利(申請(qǐng)?zhí)?007102005917)的提取物所聲明的作用相關(guān)，可見(jiàn)以沒(méi)食子酸、芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷、芹菜素-7-0-6-0-葡萄糖苷及芹菜素等作為質(zhì)量控制指標(biāo)，更合理，且上述成分含量較高，檢測(cè)方便。綜合山香圓葉及其制劑的各成分含量及成分的藥理活性，優(yōu)選以沒(méi)食子酸、齊菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷、芹菜素-7-0-6-D-葡萄糖苷、芹菜素等為質(zhì)量控制指標(biāo)的質(zhì)量控制方法，其中以芹菜素為指標(biāo)的質(zhì)量控制方法，含芹菜素的苷(如芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷、芹菜素-7-0-e-D-葡萄糖苷)水解成為苷元芹菜素的質(zhì)量控制方法，水解可以為酸水解或酶水解，如供試樣品的乙醇溶液，加等體積2mol/L鹽酸溶液，在N2環(huán)境中加熱水解得芹菜素苷元；或供試樣品的pH5.0乙酸鹽緩沖液，加入e-葡萄糖苷酶或苦杏仁酶，37。C放置，水解得到芹菜素苷元。本發(fā)明是可以通過(guò)以下方式實(shí)現(xiàn)，包括但不僅限于一、供試品溶液的制備方法可以用甲醇，乙醇、丙酮等極性溶劑直接提取的方法，溶劑也可以用它們的水溶液，提取方法可以為超聲、回流、靜置浸泡等，也可以用水提取液(或濃縮液)直接用乙酸乙酯、正丁醇萃取提取的方法，由于被測(cè)指標(biāo)為均為有機(jī)酚酸類，萃取的水溶液要求在酸性條件下，如用酸調(diào)節(jié)pH在4.5以下，乙酸乙酯、正丁醇萃取液繼續(xù)回收溶劑，殘?jiān)蛹状既芙饧吹?。具體的提取方法根據(jù)具體情況及劑型而不同，如對(duì)于液體制劑，調(diào)節(jié)pH到4，用適量正丁醇直接振搖提取更為簡(jiǎn)單方便，而對(duì)于藥材及固體制劑，可以采用水提取(冷浸或回流等)成水提取液，然后采用液體制劑相同的方法制備，而更簡(jiǎn)單方便為溶劑直接提取，如采用甲醇、乙醇、丙酮、及含水溶劑提取(回流、冷浸等)的方法，為盡量富集有效成分并減少雜質(zhì)干擾，一個(gè)更優(yōu)化的方法為取藥材或制劑粉末適量，置索氏提取器中，加石油醚適量，回流提取l小時(shí)，棄去石油醚提取液，并揮去藥材或制劑粉末的剩余石油醚，加甲醇，回流提取l小時(shí)，取甲醇提取液，濃縮，即得?；驂A溶液提取，如0.01%0.1%的氫氧化鈉溶液、0.5%碳酸鈉溶液浸泡提取，提取液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至4，然后用乙酸乙酯或正丁醇振搖萃??；或采用大孔吸附樹(shù)脂或聚酰胺柱精制，即藥材或制劑提取水溶液(或酸水溶液)，緩緩?fù)ㄟ^(guò)大孔吸附樹(shù)脂或聚酰胺柱，用水洗脫，棄去水洗脫液，繼續(xù)用醇水溶液洗脫，也可以為其它極性溶劑的水溶液洗脫，如丙酮的水溶液，比較經(jīng)濟(jì)為醇水溶液，醇水溶液濃度根據(jù)不同的大孔吸附樹(shù)脂或聚酰胺柱有所不同，一般可以為20%90%的乙醇溶液，以上述指標(biāo)成分洗脫完全為宜，收集洗脫液，回收溶劑，殘?jiān)蛹状既芙?，即得。上述所述的供試品溶液制備具體操作方法，舉例如下，所述例子只是更直觀地說(shuō)明供試品的制備方法，包括但不僅限于1、山香圓葉粉末lg或制劑適量(約相當(dāng)于藥材lg)，加石油醚索氏提取l小時(shí)，棄去石油醚，殘?jiān)鼡]去石油醚，加甲醇適量，回流提取l小時(shí)，取甲醇液，濃縮至2ml，即得。石油醚也可以用氯仿、乙醚等小極性、非極性溶劑代替。2、山香圓葉粉末lg或制劑適量(約相當(dāng)于藥材lg)，加水30ml，回流煎煮l小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濾液濃縮至10ml，稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至34，水飽和正丁醇萃取26次，每次10ml，合并正丁醇液，回收，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，即得。3、山香圓葉粉末lg或制劑適量(約相當(dāng)于藥材lg)，加稀乙醇30ml，超聲提取30分鐘，濾過(guò)，濾液回收乙醇，殘?jiān)蛹状?ml使溶解。4、如3所述的稀乙醇提取液，濃縮，殘?jiān)铀?ml使溶解，稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至34，水飽和乙酸乙酯萃取26次，每次10ml，合并乙酸乙酯液，回收，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，艮口得。5、山香圓葉粉末lg或制劑適量(約相當(dāng)于藥材lg)，力叫.05。/。氫氧化鈉溶液30ml靜置過(guò)夜，濾過(guò)，稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至34，濃縮至10ml，水飽和正丁醇萃取26次，每次10ml，合并正丁醇液，回收，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，即得。6、山香圓葉粉末lg或制劑適量(約相當(dāng)于藥材lg)，加甲醇超聲提取30分鐘，濾過(guò)，即得。7、如2得到的水提取濃縮液，與苯乙烯型大孔樹(shù)脂拌勻，加入苯乙烯型大孔樹(shù)脂柱(①2.5X12)，水洗脫除去雜質(zhì)，60%乙醇洗脫并收集合并洗脫液，濃縮，殘?jiān)蛹状?ml使溶解。苯乙烯型大孔樹(shù)脂如D101型大孔吸附樹(shù)脂，AB-8型大孔吸附樹(shù)脂等。8、如7，苯乙烯型大孔樹(shù)脂換為聚酰胺。9、如l所述的供試品乙醇溶液，加等體積2mol/L鹽酸溶液，在充N2環(huán)境中加熱回流3小時(shí)，減壓回收乙醇，用水飽和乙酸乙酯或正丁醇萃取26次，每次10ml，合并乙酸乙酯或正丁醇液，回收，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，即得。二、沒(méi)食子酸定性鑒別以沒(méi)食子酸為定性質(zhì)量控制指標(biāo)，可以為TLC鑒別方法，HPLC鑒別方法等，以能達(dá)到良好分離并鑒別出沒(méi)食子酸為宜。方法包括但不僅限于1、取供試品溶液、沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液(取沒(méi)食子酸對(duì)照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液)各2ul，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以36%醋酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，涼干，噴以0.5%三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。2、取供試品溶液、沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液(取沒(méi)食子酸對(duì)照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液)各2U1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-乙酸乙酉^甲醇-甲酸(3:6:1:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，涼干，噴以三氯化鐵試液，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。3、取供試品溶液、沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液(取沒(méi)食子酸對(duì)照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液。)各2U1，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿-乙酸乙酉^甲酸(6:4:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，涼干，在紫外254nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。上述方法中，達(dá)到相同鑒別目的展開(kāi)劑可以不同，如l展開(kāi)劑可以為稀乙醇、95%乙醇等，2展開(kāi)劑可以為甲苯-乙酸乙酉g-甲酸(6:3:1)、氯仿-乙酸乙酯-甲酸(5:5:1)等，3展開(kāi)劑可以為石油醚(60-90)。C-乙酸乙酯-冰醋酸-濃鹽酸(35:10:5:0.1)等。4、芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷、芹菜素-7-0-6-D-葡萄糖苷及芹菜素的鑒別方法芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷、芹菜素-7-o-e-D-葡萄糖苷及芹菜素均為黃酮類化合物，鑒別方法條件可以為衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)ll冊(cè)山香圓片(WS3-B-2085-96)或衛(wèi)生部藥品17冊(cè)山香圓顆粒(WS3-B-3139-98)項(xiàng)下鑒別方法。供試品溶液優(yōu)選上述供試品溶液制備方法7、8的溶液，也可以將供試品進(jìn)一步水解，使芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷、芹菜素-7-0-6-D-葡萄糖苷水解成苷元芹菜素。另取芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷、芹菜素-7-0-{3-D-葡萄糖苷及(或)芹菜素對(duì)照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各2ul，分別點(diǎn)于同一用0.5X氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(6:3:1:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)?；蛉∩鲜龉┰嚻啡芤骸?duì)照品溶液各2ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5.3:3:1:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。三、定量測(cè)定方法1、沒(méi)食子酸定量測(cè)定方法優(yōu)選HPLC法，當(dāng)然也可以用其它可行的定量測(cè)定方法，如定性鑒別項(xiàng)下l的色譜斑點(diǎn)在入二615nm進(jìn)行TLC掃描測(cè)定，或2項(xiàng)下在入二530進(jìn)行TLC掃描測(cè)定，或3項(xiàng)下入R=370nm，入S二280進(jìn)行TLC掃描測(cè)定；或高效毛細(xì)管電泳法(祝馨怡，等.高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定紅景天中沒(méi)食子酸的含量，中草藥，2005(3):443);流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法(謝強(qiáng)，等.流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法測(cè)定沒(méi)食子酸，分析試驗(yàn)室，2005(4):70)等；TLC掃描法操作繁瑣，受影響因素較多，精密度和穩(wěn)定性不如HPLC法好，優(yōu)選HPLC法進(jìn)行沒(méi)食子酸的含量測(cè)定。波長(zhǎng)選擇取沒(méi)食子酸適量，加甲醇溶解，于200400nm掃描測(cè)定，可見(jiàn)在216nm、269nm左右均有最大吸收，理論上只要有吸收就可以作為其檢測(cè)波長(zhǎng)，檢測(cè)波長(zhǎng)在遠(yuǎn)紫外區(qū)(<220nm)時(shí)，由于很多雜質(zhì)也有吸收而可能雜質(zhì)測(cè)定，所以優(yōu)選近紫外區(qū)，又由于芹菜素-7-0-新橙皮糖苷在269nm附近也有最大吸收，所以可選擇檢測(cè)波長(zhǎng)269nm。也可以選擇蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。流動(dòng)相可以為有機(jī)溶劑-水、(有機(jī)溶劑-酸水)-酸水系統(tǒng)，包括但不僅限于甲醇-水(或酸水)、乙腈-水(或酸水)、甲醇-乙腈-水(或酸水)、甲醇-四氫呋喃-水(或酸水)等系統(tǒng)，其種類及其配比以能使供試品中沒(méi)食子酸達(dá)到良好分離檢測(cè)效果為宜，所述的酸水指pH值小于正常水的pH的水，如磷酸、冰醋酸的水溶液，也可以為緩沖液、酸和堿的混合液等，如含O.1%三乙胺的0.1%磷酸水溶液，優(yōu)選有機(jī)溶劑-酸水系統(tǒng)，如乙腈-o.1%磷酸溶液、甲醇-0.05%磷酸溶液、甲醇-0.2%冰醋酸溶液等。流動(dòng)相配比如甲醇-0.05%磷酸溶液(5:95)、乙腈-0.05%磷酸溶液(4:95)，均可以達(dá)到良好的檢測(cè)效果。檢測(cè)柱溫可以為室溫，較優(yōu)選溫度25'C-35'C。固定相以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑或苯基鍵合硅膠為填充劑等等，以能達(dá)到質(zhì)量控制指標(biāo)良好分離為宜。色譜條件可以為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.05%磷酸溶液(4:96)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)269nm，柱溫20。C4(TC。供試品溶液可以直接為上述供試品溶液的制備方法所得或用相同溶劑稀釋后得到的供試品溶液，優(yōu)選供試品溶液制備方法為方法l、2、4、7、8，方法2、4正丁醇或乙酸乙酯溶劑萃取次數(shù)以46次較好，對(duì)于最后的供試品溶液的溶解溶劑，可以為提取溶劑，優(yōu)選用流動(dòng)相溶劑。沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液的制備取沒(méi)食子酸對(duì)照品，加流動(dòng)相制成每lml含50yg的溶液，即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。上述方法只是更好地說(shuō)明具體檢測(cè)方法，實(shí)際測(cè)定不受上述列舉方法限制，以可以達(dá)到良好分離和檢測(cè)為宜。2、芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷、芹菜素-7-0-6-D-葡萄糖苷及芹菜素芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷、芹菜素-7-0-6-D-葡萄糖苷及芹菜素的測(cè)定方法很多，可以為TLC掃描法，毛細(xì)管區(qū)帶電泳法(王月伶，等.毛細(xì)管區(qū)帶電泳法測(cè)定芹菜素木犀草素和異槲皮甙，理化檢驗(yàn)化學(xué)分冊(cè)，2005(8):544)、流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法(劉澤敏，等.流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法測(cè)定芹菜素，西南師范大學(xué)學(xué)報(bào)自然科學(xué)版，2006(3):89)、HPLC法等，優(yōu)選采用HPLC法測(cè)定。波長(zhǎng)選擇取芹菜素-7-0-新橙皮糖苷適量，加甲醇溶解，于200400nm掃描測(cè)定，可見(jiàn)在214nm、268nm、334nm左右均有最大吸收，理論上只要有吸收就可以作為其檢測(cè)波長(zhǎng)，檢測(cè)波長(zhǎng)在遠(yuǎn)紫外區(qū)(<220nm)時(shí)，由于很多雜質(zhì)也有吸收而可能雜質(zhì)測(cè)定，所以優(yōu)選近紫外區(qū)，芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷、芹菜素-7-0-e-D-葡萄糖苷與芹菜素-7-0-新橙皮糖苷具有相同的苷元-齊菜素，只是取代的糖不同，可選擇檢測(cè)波長(zhǎng)269nm。流動(dòng)相可以為上述沒(méi)食子酸高效液相測(cè)定項(xiàng)下任一有機(jī)溶劑-水(或酸水)系統(tǒng)，其種類及其配比以能使供試品中芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷、芹菜素-7-o-e-D-葡萄糖苷及芹菜素達(dá)到良好分離檢測(cè)效果為宜，如乙腈-O.1%磷酸溶液(15:85)、甲醇-O.3%冰醋酸溶液(30:70)，在一定條件下，還可以達(dá)到同時(shí)測(cè)定沒(méi)食子酸的目的，見(jiàn)指紋圖譜質(zhì)量控制方法部分。檢測(cè)柱溫可以為室溫，較優(yōu)選溫度25'C-35'C。固定相以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑或苯基鍵合硅膠為填充劑等。色譜條件可以為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.05%磷酸溶液(4:96)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)269nm，柱溫30°C。供試品溶液可以直接為上述供試品溶液的制備方法所得或用相同溶劑稀釋后得到的供試品溶液，優(yōu)選供試品溶液制備方法為方法l、2、4、7、8，方法2、4正丁醇或乙酸乙酯溶劑萃取次數(shù)以4-6次較好，對(duì)于最后的供試品溶液的溶解溶劑，可以為提取溶劑，優(yōu)選用流動(dòng)相溶劑。也可以將供試品進(jìn)一步水解，使芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷、芹菜素-7-o-e-D-葡萄糖苷等成分水解成苷元芹菜素而統(tǒng)一測(cè)芹菜素含量。對(duì)照品溶液的制備取芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷、芹菜素-7-0-e-D-葡萄糖苷及芹菜素對(duì)照品，加流動(dòng)相制成每lml含50yg的溶液，即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。上述方法只是更好地說(shuō)明檢測(cè)方法，實(shí)際可以不受上述列舉方法限制，以可以達(dá)到良好分離和檢測(cè)為宜。四、指紋圖譜質(zhì)量控制方法指紋圖譜是某種中藥材或制劑中共有的成分在一定檢測(cè)條件下所具有的明顯區(qū)別特征的色譜或光譜圖譜，指紋圖譜可以對(duì)藥材或制劑進(jìn)行同時(shí)定性和定量，可以有效控制藥材或制劑質(zhì)量，是中藥現(xiàn)代化關(guān)鍵技術(shù)之一，對(duì)有效控制藥材和制劑質(zhì)量，保證制劑安全、有效、質(zhì)量穩(wěn)定有非常重要的意義。指紋圖譜技術(shù)含以沒(méi)食子酸、鄰苯三酚、芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷、芹菜素-7-o-e-D-葡萄糖苷、芹菜素、木犀草素-7-o-e-葡萄糖苷、香草酸、對(duì)羥基肉桂酸、a-呋喃甲酸等成分為指標(biāo)，方法可以為TLC法、HPLC法、HPLOMS法、毛細(xì)管區(qū)帶電泳法等。優(yōu)選采用HPLC法，以沒(méi)食子酸、芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷、芹菜素-7-o-e-D-葡萄糖苷及芹菜素為對(duì)照，該方法也可以用于藥材及制劑中沒(méi)食子酸、芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷、芹菜素-7-0-6-D-葡萄糖苷及芹菜素的鑒別和含量測(cè)定。流動(dòng)相采用梯度洗脫，系統(tǒng)可以同上述定量測(cè)定方法，優(yōu)選乙腈-酸水系統(tǒng)，如乙腈-0.1%磷酸溶液。供試品溶液的制備可以為上述供試品制備任一方法，優(yōu)選的方法為供試品溶液的制備方法2、4，方法2、4正丁醇或乙酸乙酯溶劑萃取次數(shù)以4-6次較好，對(duì)于最后的供試品溶液的溶解溶劑，可以為提取溶劑，優(yōu)選用流動(dòng)相溶劑(初始梯度)。也可以將供試品進(jìn)一步酸水解，使芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷、芹菜素-7-0-6-D-葡萄糖苷水解成苷元芹菜素而統(tǒng)一測(cè)芹菜素含量。檢測(cè)波長(zhǎng)可以為210360nm，優(yōu)選269nm;檢測(cè)柱溫可以為室溫，較優(yōu)選溫度25。C35。C。對(duì)照品溶液的制備取沒(méi)食子酸、芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷、芹菜素-7-O-6-D-葡萄糖苷、芹菜素對(duì)照品，分別加流動(dòng)相制成每lml含50yg的溶液，即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。對(duì)采自江西、湖南、福建、廣東、廣西等地的14批山香圓葉進(jìn)行測(cè)定，并測(cè)定山香圓顆粒、山香圓片指紋圖譜，參見(jiàn)實(shí)施例12、實(shí)施例13，表明不同產(chǎn)地山香圓葉指紋圖譜具有較大相似性，但含量略有差別，同時(shí)表明山香圓葉指紋圖譜與制劑的指紋圖譜具有相似性。比較14批不同產(chǎn)地山香圓葉藥材、山香圓葉對(duì)照藥材(1230-0301，中國(guó)藥品生物制品檢定所)、山香圓顆粒(江西山香藥業(yè)有限公司)及山香圓片(江西山香藥業(yè)有向公司)指紋圖譜，可確定附圖l、附圖4為山香圓葉標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，附圖7可為山香圓葉制劑的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。如實(shí)施例12、13，山香圓葉藥材指紋圖譜中，比較14批不同產(chǎn)地山香圓藥材，可確定山香圓葉藥材至少含6個(gè)共有色譜峰，并含沒(méi)食子酸、芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷色譜峰，所述的6個(gè)藥材共有色譜峰如附圖1保留時(shí)間(min)為9.223(1，沒(méi)食子酸)、46.573(2)、48.607(3)、50.573(4)、55.940(5，芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷)、61.307(6，芹菜素-7-0-新橙皮糖苷)等；如附圖4保留時(shí)間為5.432(1，沒(méi)食子酸)、37.632(2)、40.898(3)、41.832(4)、49.765(5，齊菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷)、55.698(6，芹菜素-7-0-新橙皮糖苷)等。比較山香圓顆粒及山香圓片指紋圖譜，確定山香圓顆粒、山香圓片等制劑指紋圖譜至少含有35個(gè)共有色譜峰，并含沒(méi)食子酸、芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷色譜峰，所述的5個(gè)制劑共有色譜峰如附圖7保留時(shí)間為5.432(1，沒(méi)食子酸)、40.932(3)、41.865(4)、49.865(5，齊菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷)、55.765(6，芹菜素-7-0-新橙皮糖苷)等或至少含有沒(méi)食子酸、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷、芹菜素-7-0-新橙皮糖苷等3個(gè)共有色譜峰。比較山香圓葉藥材和制劑的指紋圖譜(如附圖7、附圖8)，可見(jiàn)制劑含有的峰，其5、6號(hào)峰(芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷、芹菜素-7-0-新橙皮糖苷)峰面積比與藥材的相似，也證明這兩成分相對(duì)比較穩(wěn)定，其成分及配比可作為進(jìn)一步的質(zhì)量控制指標(biāo)，而沒(méi)食子酸等其他成分含量及其組分與制劑的比較產(chǎn)生有一定變化，原因?yàn)橹苿┲扑庍^(guò)程中提取、濃縮、干燥、成型過(guò)程中化學(xué)成分產(chǎn)生變化，提示制藥過(guò)程中要盡可能采用先進(jìn)合理工藝而盡可能的保留藥效成分，如低溫提取(如滲漉提取)、減壓濃縮、包合工藝、噴霧干燥等。無(wú)論對(duì)于藥材或含藥材的制劑，其芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷、芹菜素-7-0-新橙皮糖苷含量比均可作為更進(jìn)一步的質(zhì)量控制指標(biāo)。用如實(shí)施例14的指紋圖譜質(zhì)量控制方法對(duì)采自江西、湖南、福建、廣東、廣西等地的14批山香圓葉、山香圓枝莖、山香圓根和山香圓顆粒、山香圓片中沒(méi)食子酸(A)、芹菜素-7-0-新橙皮糖苷(B)、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷(C)等成分進(jìn)行含量測(cè)定(結(jié)果見(jiàn)表4)可見(jiàn)，不同產(chǎn)地、不同批號(hào)的山香圓葉三種指標(biāo)成分含量有一定差別，而同一產(chǎn)地其部分含量有差異3倍以上，分析原因?yàn)椴墒占竟?jié)問(wèn)題。進(jìn)一步分析江西l-江西8山香圓葉樣品，即以山香圓葉對(duì)照藥材薄層色譜鑒別的質(zhì)量控制方法(中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)，中藥成方制劑第十七冊(cè))，結(jié)果表明該8種山香圓葉樣品均檢驗(yàn)合格，后3樣品對(duì)應(yīng)斑點(diǎn)不夠明顯，且有異于對(duì)照藥材的其他斑點(diǎn)。以上述熊果酸為質(zhì)控指標(biāo)的檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)，上述8樣品僅江西2、江西3、江西5樣品能明顯檢出熊果酸成分。山香圓枝莖及山香圓根上述三種成分含量明顯低于山香圓葉，同時(shí)表明該方法也可用于山香圓枝莖、根的質(zhì)量控制。對(duì)其制劑的分析結(jié)果表明，其制劑的上述三成分含量差異較大，且除這三指標(biāo)峰外的其它特征峰部分樣品不明顯，原因?yàn)榕c藥材有關(guān)，也和制備工藝有關(guān)，如山香圓顆粒3和山香圓片4樣品，其沒(méi)食子酸含量明顯偏低，而芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷含量正常，原因?yàn)闆](méi)食子酸熱穩(wěn)定性較差，而芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷熱穩(wěn)定性較好。為控制藥品質(zhì)量，保證安全有效，可定含量指標(biāo)為折算成山香圓葉以干品計(jì)，含沒(méi)食子酸不低于O.12%，芹菜素-7-0-新橙皮糖苷不低于0.16%，芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷不低于O.12%，制劑以藥效成分轉(zhuǎn)移率50%為限，折算成山香圓葉以干品計(jì)，含沒(méi)食子酸不低于0.06%、芹菜素-7-0-新橙皮糖苷不低于0.08%、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷不低于O.06%。具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例只是更具體地說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明并不限于以下實(shí)施例的內(nèi)容。實(shí)施例l:山香圓葉粉末lg或制劑適量(如山香圓降糖顆粒lg、山香圓片l片或約相當(dāng)于藥材lg的制劑)，加石油醚索氏提取l小時(shí)，棄去石油醚，殘?jiān)鼡]去石油醚，加甲醇適量，回流提取l小時(shí)，取甲醇液，濃縮至2ml，作為供試品溶液。另取沒(méi)食子酸對(duì)照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液各2ul，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以36%醋酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以0.5%三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。實(shí)施例2:山香圓葉粉末lg或制劑適量(如山香圓降糖顆粒lg山香圓片l片或約相當(dāng)于藥材lg的制劑)，加水30ml，回流1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濾液濃縮至10ml，稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至34，水飽和正丁醇萃取4次，每次10ml，合并正丁醇液，回收正丁醇液，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，作為供試品溶液。另取沒(méi)食子酸對(duì)照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液各2ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(3:6:1:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以三氯化鐵試液，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。實(shí)施例3:照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取實(shí)施例2項(xiàng)下供試品溶液、對(duì)照品溶液各2ul，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲酸(6:4:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，在紫外254nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。實(shí)施例4:取芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷對(duì)照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取實(shí)施例2項(xiàng)下供試品溶液、齊菜素對(duì)照品溶液各2ul，分別點(diǎn)于同一用0.5X氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(6:3:1:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。實(shí)施例5:山香圓葉粉末lg或制劑適量(如山香圓降糖顆粒lg山香圓片l片或約相當(dāng)于藥材lg的制劑)，加水30ml，回流1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，通過(guò)聚酰胺柱(①2.5X12)，5呢乙醇100ml緩緩洗脫，80。/。乙醇150ml洗脫，收集合并洗脫液，濃縮，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷對(duì)照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取實(shí)施例2項(xiàng)下供試品溶液、對(duì)照品溶液各2ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5.3:3:1:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。實(shí)施例6:照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005版一部附錄VID)測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-O.1%磷酸溶液(4:96)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)269nm。理論板數(shù)以沒(méi)食子酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2000，流速lml/min，柱溫室溫。采用AgilentIIOO型高效液相色譜儀，DAD檢測(cè)器，HypersilODS柱(4.0X250mm，5ym)。供試品溶液的制備取山香圓葉粉末0.5g或制劑適量(山香圓降糖顆粒0.3g、山香圓片半片或約相當(dāng)于藥材0.5g的制劑)，精密稱定，置索氏提取器中，加氯仿適量回流l小時(shí)，棄去氯仿液，殘?jiān)鼡]去氯仿，加甲醇適量，回流提取l小時(shí)，取甲醇液，轉(zhuǎn)移并定容至50ml量瓶中，作為供試品溶液。對(duì)照品溶液的制備取沒(méi)食子酸對(duì)照品，加甲醇制成每lml含50yg的溶液，作為對(duì)照品溶液。測(cè)定法精密吸取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得實(shí)施例7:照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005版一部附錄VID)測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-O.1%冰醋酸(5:95)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)220nm。理論板數(shù)以沒(méi)食子酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2000，流速lml/min，柱溫30。C。采用AgilentIIOO型高效液相色譜儀，DAD檢測(cè)器，HypersilODS柱(4.0X250mm，5ym)。供試品溶液的制備取山香圓葉粉末0.5g或制劑適量(山香圓降糖顆粒0.3g、山香圓片半片或約相當(dāng)于藥材0.5g的制劑)，精密稱定，加水30ml，回流1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濾液濃縮至約10ml，稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3-4，水飽和正丁醇萃取6次，每次10ml，合并正丁醇液，回收，殘?jiān)蛹状际谷芙?，轉(zhuǎn)移并定容至50ml量瓶中，作為供試品溶液。對(duì)照品溶液的制備取沒(méi)食子酸對(duì)照品，加甲醇制成每lml含50yg的溶液，作為對(duì)照品溶液。測(cè)定法精密吸取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得實(shí)施例8:同實(shí)施例6，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm。實(shí)施例9:同實(shí)施例7，檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm。實(shí)施例10:照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005版一部附錄VID)測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-O.1%磷酸溶液(15:85)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)270nm。理論板數(shù)以芹菜素-7-0-新橙皮糖苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000，流速lml/min，柱溫室溫。采用AgilentIIOO型高效液相色譜儀，DAD檢測(cè)器，HypersilODS柱(4.0X250mm，5ym)。供試品溶液的制備取山香圓葉粉末0.5g或制劑適量(山香圓降糖顆粒0.3g、山香圓片半片或約相當(dāng)于藥材0.5g的制劑)，精密稱定，加水30ml，回流1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濾液濃縮至約10ml，稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3-4，水飽和正丁醇萃取6次，每次10ml，合并正丁醇液，回收，殘?jiān)蛹状际谷芙?，轉(zhuǎn)移并定容至50ml量瓶中，作為供試品溶液。對(duì)照品溶液的制備取芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷對(duì)照品，加甲醇制成每lml含50yg的溶液，作為對(duì)照品溶液。測(cè)定法精密吸取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得實(shí)施例ll:除檢測(cè)波長(zhǎng)為330nm外，其他同實(shí)施例IO。實(shí)施例12:指紋圖譜照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005版一部附錄VID)測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動(dòng)相A，0.P/。磷酸水溶液為流動(dòng)相B;按表l進(jìn)行梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm。理論板數(shù)按沒(méi)食子酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2000，流速lml/min，柱溫室溫。采用島津LC-10Atvp高效液相色譜儀，紫外檢測(cè)器，HypersilODS柱(4.0X250mm，5ym)。表l流動(dòng)相梯度洗脫分配表<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>供試品溶液的制備取山香圓葉粉末0.5g或制劑適量(LiU香圓降糖顆粒0.3g、山香圓片半片或約相當(dāng)于藥材0.5g的制劑)，精密稱定，加水30ml，回流1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濾液濃縮至約10ml，稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3-4，水飽和正丁醇萃取6次，每次10ml，合并正丁醇液，回收，殘?jiān)蛹状际谷芙猓D(zhuǎn)移并定容至量瓶中，作為供試品溶液。對(duì)照品溶液的制備取沒(méi)食子酸、芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷對(duì)照品，分別加甲醇制成每lml含25500yg的溶液，作為對(duì)照品溶液。測(cè)定法精密吸取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得色譜圖如附圖l、附圖2、附圖3。附圖l為山香圓葉藥材l(山香圓葉對(duì)照藥材，1230-0301，中國(guó)藥品生物制品檢定所)的HPLC指紋色譜圖譜；附圖2為沒(méi)食子酸的HPLC色譜圖；附圖3為芹菜素-7-0-新橙皮糖苷的HPLC色譜圖。實(shí)施例13:指紋圖譜照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005版一部附錄VID)測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動(dòng)相A，0.P/。磷酸水溶液為流動(dòng)相B;按表2進(jìn)行梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm。理論板數(shù)按沒(méi)食子酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2000，流速lml/min，柱溫室溫。采用島津LC-10Atvp高效液相色譜儀，紫外檢測(cè)器，HypersilODS柱(4.0X250mm，5ym)。表2流動(dòng)相梯度洗脫分配表時(shí)間(分鐘)流動(dòng)相A(%)流動(dòng)相B(%)07010—2590—75測(cè)定法精密吸取上述實(shí)荊g例12項(xiàng)下供試品溶液、對(duì)照品溶液各10yl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。色譜圖如附圖4、附圖5、附圖6、附圖7、附圖8。附圖4為山香圓葉藥材1(山香圓葉對(duì)照藥材，1230-0301，中國(guó)藥品生物制品檢定所)的HPLC指紋色譜圖譜；附圖5為山香圓葉藥材2的HPLC指紋色譜圖譜；附圖6為山香圓葉藥材6的HPLC指紋色譜圖譜；附圖7為山香圓顆粒(江西山香藥業(yè)有限公司)的HPLC指紋色譜圖。附圖8為山香圓片(江西山香藥業(yè)有限公司)的HPLC指紋色譜圖譜。實(shí)施例14:復(fù)方山香圓含片(見(jiàn)發(fā)明專利"一種防治病毒性感冒及咽喉疾病的中藥組合物及其制備方法"具體實(shí)施方式實(shí)施例l，發(fā)明專利申請(qǐng)申請(qǐng)?zhí)?00610200334.9)山香圓葉的質(zhì)量控制方法。1、取本品1片，研細(xì)，加熱水30ml使溶解，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至10ml，稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3.6，水飽和正丁醇萃取4次，每次10ml，合并正丁醇液，回收正丁醇液，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，作為供試品溶液。另取沒(méi)食子酸對(duì)照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液各2ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(3:6:1:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，涼干，噴以三氯化鐵試液，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。2、取本品1片，研細(xì)，加熱水30ml使溶解，放冷，濾過(guò)，通過(guò)聚酰胺柱(①2.5X12)，5。/。乙醇100ml緩緩洗脫，80。/。乙醇150ml洗脫，收集合并洗脫液，濃縮，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷對(duì)照品，分別加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各2yl，分別點(diǎn)于同一用O.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(6:3:1:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。3、照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005版一部附錄VID)測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動(dòng)相A，0.P/。磷酸水溶液為流動(dòng)相B;按表3進(jìn)行梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm。理論板數(shù)按沒(méi)食子酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2000，流速lml/min，柱溫3CTC。表3流動(dòng)相梯度洗脫分配表時(shí)間(分鐘)流動(dòng)相A(%)流動(dòng)相B(%)0305—1595—85309015—2585—75供試品溶液的制備取本品1片，研細(xì)，加熱水30ml使溶解，放冷，濾過(guò)，濃縮至約10ml，稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3.6，水飽和正丁醇萃取6次，每次10ml，合并正丁醇液，回收，殘?jiān)蛹状际谷芙?，轉(zhuǎn)移并定容至量瓶中，作為供試品溶液。對(duì)照藥材溶液的制備取山香圓葉對(duì)照藥材(中國(guó)藥品生物制品檢定所)lg，同供試品溶液制備方法，同法制成對(duì)照藥材溶液。對(duì)照品溶液的制備取沒(méi)食子酸、芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷對(duì)照品，分別加甲醇制成每lml含50yg的溶液，作為對(duì)照品溶液。測(cè)定法精密吸取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液、對(duì)照藥材溶液各10ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，并計(jì)算沒(méi)食子酸、芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷含量，即得。本品指紋圖譜色譜圖與對(duì)照藥材色譜圖譜比較，至少含5個(gè)相應(yīng)色譜峰，含沒(méi)食子酸、芹菜素-7-0-新橙皮糖苷、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷色譜峰。用實(shí)施例14的指紋圖譜質(zhì)量控制方法對(duì)采自江西、湖南、福建、廣東、廣西等地的14批山香圓葉、山香圓枝莖、山香圓根和山香圓顆粒、山香圓片中沒(méi)食子酸(A)、芹菜素-7-O-新橙皮糖苷(B)、芹菜素-7-0-2'-鼠李糖基蕓香糖苷(C)等成分進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表4。表4山香圓葉及其制劑含量測(cè)定結(jié)果表<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>實(shí)施例15:取山香圓葉，加水煎煮2次，第一次30倍量2小時(shí)，第二次25倍量1.5小時(shí)，合并煎煮液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.081.18(8(TC熱測(cè))的清膏，加乙醇至含醇量為75%，攪拌，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇，減壓濃縮至l:0.81.6(W/V)，加水稀釋至藥材量的3倍(V/W)，稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至4，緩緩?fù)ㄟ^(guò)(約lBV/hr)2倍藥材量(W/W)的已處理好的AB-8大孔吸附樹(shù)脂柱，水洗脫3BV(約2BV/hr)，15。/。乙醇洗脫3BV(約2BV/hr)，65%乙醇洗脫，收集65%乙醇洗脫液，回收乙醇，減壓濃縮，噴霧干燥，得山香圓葉提取物。照實(shí)施例i4方法測(cè)定提取物含量，芹菜素-7-o-e-新橙皮糖苷、芹菜素-7-o-2'-e-鼠李糖基蕓香糖苷含量分別為5.46%、4.21%。本發(fā)明的山香圓葉及含山香園葉制劑的質(zhì)量控制方法，除來(lái)源于銳尖山香圓Turpiniaarguta(Lindl.)Seem.葉外，可以為其枝莖、根部位，山香圓葉也可以為省沽油科植物山香圓Turpiniaindochinensis的新鮮或干燥葉。還可以為來(lái)源于山香圓屬的其他種，包括銳尖山香圓(原變禾中)Turpiniaarguta(lindl.)Seem.var.arguta、長(zhǎng)柄亮口十山香圓TurpiniasimplicifoliaMerr.var.longipesC.Y.Wu、粗壯山香圓TurpiniarobustaCraib、大果山香圓Turpiniapomifera(Roxb.)DC.、大果山香圓(原變種)Turpiniapomifera(Roxb.)DC.var.pomifera、大軒山香圓TurpiniamacrospermaC.C.Huang、光山香圓Turpiniamontana(B1.)Kurzvar.glaberrima(Merr.)T.Z.Hsu、亮口十山香圓TurpiniasimplicifoliaMerr.、亮口十山香圓(原變禾中)TurpiniasimplicifoliaMerr.var.simplicifolia、卵口十山香圓TurpiniaovalifoliaElmer、絨毛銳尖山香圓Turpiniaarguta(Xindl.)Seem.var.pubescensT.Z.Hsu、三口十山香圓TurpiniaternataNakai、山麻風(fēng)樹(shù)Turpiniapomifera(Roxb.)DC.var.minorC.C.Huang、山香圓Turpiniamontana(Bl.)Kurz、山香圓(原變禾中)Turpiniamontana(Bl.)Kurzvar.montana、疏脈山香圓TurpiniaindochinensisMerr.、臺(tái)灣山香圓TurpiniaformosanaNakai、狹口十山香圓Turpiniamontana(Bl.)Kurzvar.stenophylla(Merr.etPerry)T.Z.Hsu、心口十山香圓TurpiniasubsessilifoliaC.Y.Wu、硬毛山香圓TurpiniaaffinisMerr.etPerry、越南山香圓Turpiniacochinchiiieiisis(Xour.)Merr.等。權(quán)利要求1.一種山香圓葉及含山香圓葉制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于以沒(méi)食子酸、芹菜素-7-O-新橙皮糖苷、芹菜素-7-O-2′-鼠李糖基蕓香糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷及芹菜素等為質(zhì)量控制指標(biāo)的質(zhì)量控制方法，含以上述具體質(zhì)量控制指標(biāo)的定量控制方法、定性鑒別方法及以指紋圖譜定性和定量的質(zhì)量控制方法。全文摘要本發(fā)明是山香園葉及含山香園葉制劑的質(zhì)量控制方法，即以沒(méi)食子酸、芹菜素-7-O-新橙皮糖苷、芹菜素-7-O-2′-鼠李糖基蕓香糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷及芹菜素等為質(zhì)量控制指標(biāo)的質(zhì)量控制方法，該方法可很好控制該藥材及含該藥材制劑的質(zhì)量，對(duì)保證藥物的安全、有效、質(zhì)量可控有積極意義。文檔編號(hào)A61K36/185GK101181319SQ20071020251公開(kāi)日2008年5月21日申請(qǐng)日期2007年11月14日優(yōu)先權(quán)日2006年11月16日發(fā)明者軍胡申請(qǐng)人:軍胡