專利名稱：：治療男性不育癥的中藥組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種中藥組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法，尤其涉及一種治療男性不育癥的中藥組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法，屬于中藥
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：男性不育不是單一的特異性疾病,而是由多種病因?qū)е碌哪行陨称?，包括?nèi)外生殖器和性腺軸不同水平的異常，最終表現(xiàn)為生育力下降或喪失的綜合病癥。正因為如此，對于男性不育癥不可能用一種特效的藥物或方法治愈各種不同病因所致的男性不育癥。目前在臨床有一定療效的治療方法有內(nèi)分泌治療、生殖道炎癥的治療、免疫治療、外科治療、人工授精，尚有許多原因不明，診斷不明確的男性不育癥，此種情況的治療方法歸納有激素、抗生素、甲狀腺素、維生素、微量元素、氨基酸等藥物，同時輔以勸告病人避免煙酒，防止精神緊張、過度疲勞以及保持正常營養(yǎng)和規(guī)律的生活習(xí)慣等，但多療效不肯定。中醫(yī)對男性不育早有認(rèn)識，中醫(yī)藥療效較西醫(yī)顯著，且副作用很少。中醫(yī)認(rèn)為腎主藏精，為生殖之本，故治療以補腎為主，積累了不少經(jīng)驗。清代葉天士對男性不育的認(rèn)識十分深刻，"疾病之關(guān)于胎孕者，男子則在精，女子則在血，無非不足而然。凡男子之不足，則有精滑、精清、精冷，或臨事不堅，或流而不射，或夢遺頻數(shù)，或便濁淋瀝?；蚝门?，以致陰虛，陰虛則腰腎痛憊?；蚝媚酗L(fēng)，以致陽極，陽極則亢而亡陰?；蜻^于強固，強固則勝敗不洽。或素患陰疝，陰疝則肝腎乖離。此外或以陽衰，陽衰則多寒?；蛞躁幪摚幪搫t多熱，是皆男子之病，不得盡諉之婦人也。倘得其源而醫(yī)治之，則事無不濟矣。"他從性功能障礙到精液過稀，從射精無力到生殖系統(tǒng)炎癥，從性生活過度導(dǎo)致腎虛到疝氣。對于男性不育癥來說，如無特殊病癥，中醫(yī)強調(diào)補腎。因腎主藏精，腎虧則精關(guān)不固，常表現(xiàn)為遺精、滑精或早泄。腎虧必致氣血兩虧，故男子不育的中醫(yī)治法不外乎補腎、兩益氣血。發(fā)揮中醫(yī)藥之特長，提供一種有效治療男性不育癥的中藥組合物在目前是非常必要的。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種用于治療男性不育癥的中藥組合物；本發(fā)明的目的還在于提供一種該中藥組合物的制備方法；本發(fā)明的目的還在于提供該中藥組合物的質(zhì)量控制方法。本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的本發(fā)明所述的治療男性不育癥的中藥組合物是由如下重量比的原料藥制成枸杞子1575重量份沙苑子2060重量份覆盆子1040重量份五味子18重量份車前子(鹽炒)415重量份本發(fā)明所述中藥組合物原料藥優(yōu)選配比可以為枸杞子56重量份沙苑子25重量份覆盆子20重量份五味子5重量份車前子(鹽炒)7重量份本發(fā)明所述的治療男性不育癥的中藥組合物可由如下重量比的原料藥制成枸杞子1575重量份菟絲子2060重量份覆盆子1040重量份五味子18重量份車前子(鹽炒)415重量份本發(fā)明所述中藥組合物原料優(yōu)選配比為枸杞子4065重量份菟絲子(炒)2030重量份覆盆子1530重量份五味子(蒸)47重量份車前子(鹽炒)59重量份本發(fā)明所述中藥組合物原料藥優(yōu)選配比還可以為枸杞子56重量份菟絲子(炒)25重量份覆盆子20重量份五味子(蒸)5重量份車前子(鹽炒)7重量份男性不育癥多由腎氣不足，陰精虧損所致。本發(fā)明藥物組合物處方中枸杞子、沙苑子補腎精，壯陽道，助精神；覆盆子養(yǎng)真陰，固精關(guān)，起陽痿；五味子補腎水，益肺氣，止遺泄；車前子利小便，《名醫(yī)別錄》稱其能"養(yǎng)肝強陰益精"，與上述藥物相配，補中寓瀉，補而不膩。全方共奏補腎益精之功，適用于腎虛腰痛，尿后余瀝，遺精早泄，陽痿不育。本發(fā)明所述的組合物可按常規(guī)工藝加入輔料制成片劑、膠囊劑、滴丸劑等臨床可接受的劑型；所述輔料包括溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐劑、著色劑、粘合劑、潤滑劑、基質(zhì)等。本發(fā)明所述的中藥組合物丸劑的制備方法為以上五味，采用超微粉碎技術(shù)，粉碎成微粉，混勻；90-110重量份蜂蜜在116-118。C時，煉制密度為1.37，即得煉蜜；每100重量份粉末加煉蜜35-50重量份及100-160重量份的水，泛丸，60-80。C干燥812小時，即得。本發(fā)明藥物組合物質(zhì)量控制方法包括如下鑒別方法和/或含量測定中的一種或幾種鑒別(1)取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材34g，研細(xì)，加乙醚4060ml，超聲處理1530分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯lml使溶解，作為供試品溶液。另取枸杞子對照藥材l2g，研碎，加乙醚2030ml，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取上述二種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(3060°C)-甲酸乙酉旨-甲酸(1525:1525:0.10.5)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。(2)取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材78g，研細(xì)，加石油醚(3060°C)2535ml，超聲處理2040分鐘，濾過，棄去石油醚液，藥渣揮盡石油醚，加甲醇3040ml超聲處理1530分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇56ml使之分散，取上清液作為供試品溶液。另取菟絲子對照藥材2g，研細(xì)，同法制備成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取上述二種溶液各2ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(812:46:35)為展開劑，展開，取出，晾干，噴1%三氯化鋁乙醇溶液，涼干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。(3)取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材34g，研細(xì)，加乙醚4060ml，超聲處理1530分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加三氯甲垸3050ml，超聲處理1525分鐘，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘渣加乙酸乙酯lml使溶解，作為供試品溶液。另取五味子甲素對照品，加乙酸乙酯制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液10u1，對照品溶液2u1，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(3060°C)-甲酸乙酯-甲酸(1020:37:12)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。(4)取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材34g，研細(xì)，加4060mL石油醚，索氏提取23h脫脂，殘渣揮干石油醚,加4060mL甲醇回流提取24h,濾過，濾液濃縮至l2mL,作為供試品溶液；另取覆盆子對照藥材，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各5pL，分別點于同一硅膠G板上以醋酸乙酯-甲醇-水(47:12:12)為展開劑，展開，取出，晾干，噴0.5y。AlCl3甲醇溶液，置紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。(5)取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材l2g，研細(xì)，加甲醇1530ml，浸泡24h，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇l2ml使溶解，作為供試品溶液。取車前子對照藥材l2g,甲醇1030ml，加熱回流提取O.51.5h，濾過，濾液揮干，殘渣加l2ml甲醇溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗,吸取供試品溶液、對照藥材溶液各20pl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-氨水(1020:12:0.51)為展開劑,展開,取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，iocrc加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點。含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版附錄VID)測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水-醋酸(65:40:0.1)為流動相；檢測波長為254nm。對照品溶液的制備取五味子乙素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含30wg的溶液，即得。供試品溶液的制備取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材34g，研細(xì)，精密稱取約46g，置索氏提取器中，加正己烷適量，浸泡過夜，于8085'C回流提取58小時，提取液低溫蒸干，殘渣加甲醇微熱使溶解，移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各515W，注入液相色譜儀，測定，即得。本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材0.5lg含五味子以五味子乙素(C23H2806)計，不得少于0.050.08mg。本發(fā)明藥物組合物質(zhì)量控制方法優(yōu)選如下鑒別方法和/或含量測定中的一種或幾種鑒別(1)取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材3.6g，研細(xì)，加乙醚50ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯lml使溶解，作為供試品溶液。另取枸杞子對照藥材lg，研碎，加乙醚20ml，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取上述二種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(306(TC)-甲酸乙酯-甲酸(20:20:0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。(2)取本品10g，研細(xì)，加石油醚(3060°C)30ml，超聲處理30分鐘，濾過，棄去石油醚液，藥渣揮盡石油醚，加甲醇30ml超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇5ml使之分散，取上清液作為供試品溶液。另取菟絲子對照藥材2g，研細(xì)，同法制備成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取上述二種溶液各2nl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10:5:4)為展開劑，展開，取出，晾干，噴1%三氯化鋁乙醇溶液，涼干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。(3)取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材3.6g，研細(xì)，加乙醚50ml，超聲處瑝20分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加三氯甲烷40ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘渣加乙酸乙酯lml使溶解，作為供試品溶液。另取五味子甲素對照品，加乙酸乙酯制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液10ul，對照品溶液2iil，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(3060°C)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254raO下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。(4)取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材3.6g,研細(xì)，加50mL石油醚，索氏提取2.5h脫脂,殘渣揮干石油醚，加50mL甲醇回流提取3h，濾過，濾液濃縮至2raL,作為供試品溶液；另取覆盆子對照藥材，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗,吸取上述兩種溶液各5uL,分別點于同一硅膠G板上以醋酸乙酯-甲醇-水(5:1:l),展開，取出，晾干，噴0.5免AlCl3甲醇溶液，置紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。(5)取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材1.8g，研細(xì)，加甲醇20ml，浸泡3h,濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解,作為供試品溶液。取車前子對照藥材lg，甲醇20ml，加熱回流提取lh，濾過,濾液揮干，殘渣加lml甲醇溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗,吸取供試品溶液10u1、對照藥材溶液20u1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-氨水(15:1.5:0.5)為展開抓展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，IO(TC加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點。含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版附錄VID)測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水-醋酸(65:40:0.1)為流動相；檢測波長為254nm。對照品溶液的制備取五味子乙素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含30ng的溶液，即得。供試品溶液的制備取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材4g，研細(xì)，精密稱取約5g，置索氏提取器中，加正己垸適量，浸泡過夜，于8085'C回流提取6小時，提取液低溫蒸干，殘渣加甲醇微熱使溶解，移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各515W，注入液相色譜儀，測定，即得。本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材0.719g含五味子以五味子乙素(C23H2806)計，不得少于0.07mg。本發(fā)明所提供的中藥組合物的質(zhì)量控制方法，是通過大量具體創(chuàng)造性試驗篩選后得到，鑒別方法中通過對樣品處理方法的篩選，展開劑的選擇，使得鑒別專屬性很好，而且方法經(jīng)濟適用、結(jié)果快速，并且對不同的薄層板都能應(yīng)用。含量測定中進行了含量測定的方法學(xué)考察，表明該方法穩(wěn)定、準(zhǔn)確，可以很有效的對產(chǎn)品進行質(zhì)量控制，并且用該方法測定的產(chǎn)品要相比其他方法測定的產(chǎn)品在藥理效果上表現(xiàn)的更為穩(wěn)定。下述實驗例和實施例用于進一步說明但不限于本發(fā)明。試驗例l制備方法的研究1、粉碎細(xì)度試驗本發(fā)明藥物組合物在研究設(shè)計制備工藝時，對各味藥材的有效成分進行了分析，為了較好地保留藥物中的有效成分，將藥材直接粉碎入藥，制得丸劑。取枸杞子56g、沙苑子25g、覆盆子20g、五味子5g、車前子(鹽炒)7g共6份，分成兩組，分別采用不同制備方法制成丸劑，測定制劑中的五味子乙素的含量，結(jié)果見下表l:表1粉碎方法的選擇<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>從上表可以看出，藥物超微粉碎后其有效成份測得量顯著高于一般粉碎，說明超微粉碎能夠顯著提高藥物中有效成份的溶出度，這也是藥物療效得到顯著提高的主要原因。2.加水量試驗按處方量配置五份藥材，按工藝要求進行超微粉碎，分別分四組做實驗水蜜比例分別為2:1，2.5:1，3:1，3.5:1，分別以制丸粘度、丸劑外觀、烘干時間為指標(biāo)確定加水量。結(jié)果見表2，表2:加水量試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>以上結(jié)果表明水蜜比例為3:1，烘干時間為llh時，各項指標(biāo)較好，故生產(chǎn)中選用水蜜比例為3:1。試驗例2質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究1、枸杞子薄層鑒別(1)供試品溶液超聲提取時間的考察取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材3.6g，研細(xì)，加乙醚50ml，超聲處理，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯lml使溶解，作為供試品溶液。另取枸杞子對照藥材lg，研碎，加乙醚20ml，同法制成對照藥材溶液。吸取上述二種溶液各5pl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(306(TC)-甲酸乙酯-甲酸(20:20:0.l)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。比較供試品和對照藥材在薄層板上的顯色效果，結(jié)果見下表表3供試品溶液超聲提取時間的考察<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>從上表可以看出，超聲提取20min以上，所得供試品溶液與對照藥材溶液，展開后，在薄層板上相應(yīng)位置斑點顯色清晰，已經(jīng)符合試驗要求，故超聲提取20min。(2)展開劑的配比照薄層色譜法試驗，吸取上述二種溶液各5y1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(306(TC)-甲酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。比較不同配比展開劑下，供試品和對照藥材色譜中各斑點展開的效果，結(jié)果見下表表4展開劑的配比試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>從上表可以看出，展丌劑配比為20:20:0.1時，供試品與對照藥材色譜中各顯色斑點分離清楚，展開效果好，符合試驗要求。2、菟絲子的薄層鑒別供試品溶液的制備取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材7.2g，研細(xì)，加石油醚(306(TC)30ml，超聲處理30分鐘，濾過，棄去石油醚液，藥渣揮盡石油醚，加甲醇30ml超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇5ml使之分散，取上清液作為供試品溶液。對照藥材溶液的制備取菟絲子對照藥材2g，研細(xì)，同法制備成對照藥材溶液。展開劑的選擇試驗照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2yl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10:5:4)為展開劑，展開，取出，晾干，噴1%三氯化鋁乙醇溶液，涼干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。比較不同展開劑，供試品與對照藥材色譜中各斑點的展開效果，結(jié)果見下表表5展開劑的選擇試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>從上表可以看出，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10:5:4)為展開劑，展開效果好，且斑點顯色清晰，陰性無干擾，重現(xiàn)性好。3、五味子的薄層鑒別供試品溶液的制備方法一取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材3.6g,研細(xì)，加氯仿50ml，加熱回流0.5小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加氯仿lml使溶解，作為供試品溶液。方法二取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材3.6g，研細(xì)，置燒瓶中，加正己烷50ml，冷浸過夜，于8085'C回流提取2小時，濾過，濾液低溫蒸干，殘渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作為供試品溶液。方法三取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材3.6g，研細(xì)，加硅藻土5g，研勻，加乙醚50ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加三氯甲烷40ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘渣加乙酸乙酯lml使溶解，作為供試品溶液。對照品溶液的制備取五味子甲素對照品，加乙酸乙酯制成每lml含lmg的溶液，即得。照薄層色譜法(附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液10!il，對照品溶液2nl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(3060°C)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。比較供試品色譜與相應(yīng)對照品色譜位置，斑點展開的效果表6供試品溶液的制備方法試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>從上表可以看出，應(yīng)用方法三制備的供試品溶液展開效果好，陰性無干擾。故選擇方法三制備供試品溶液。4、覆盆子的薄層鑒別供試品溶液的制備:取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材3.6g,加50mL石油醚，索氏提取2.5h脫脂,殘渣揮干石油醚，加50mL甲醇回流提取3h，濾過，濾液濃縮至2mL，作為供試品溶液；對照藥材溶液的制備取覆盆子對照藥材，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液，分別點于同一硅膠G板上以醋酸乙酯-甲醇-水，展開，取出，晾干，噴0.5。/。AlCl3甲醇溶液,置紫外燈(365nm)下檢視。比較不同點樣量、不同展開劑配比下，供試品溶液與對照品溶液的展開效果，結(jié)果見下表表7展開劑配比及供試品點樣量的比較試驗<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>從上表可以看出，展開劑醋酸乙酯-甲醇-水的配比為5:l:l,點樣量為5ixi時，供試品和對照藥材色譜相應(yīng)位置顯相同顏色熒光斑點，且各斑點分離效果好，顯色清晰，陰性無干擾，符合試驗要求。5、車前子的薄層鑒別供試品溶液的制備取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材1.8g加甲醇20ml,浸泡3h,濾過，濾液蒸干,殘渣加甲醇lml使溶解,作為供試品溶液。對照藥材溶液的制備取車前子對照藥材lg，甲醇20ml，加熱回流提取lh，濾過，濾液揮干，殘渣加lml甲醇溶解,作為對照藥材溶液。吸取供試品溶液、對照藥材溶液各20u1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-氨水為展開劑，展開,取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，IO(TC加熱至斑點顯色清晰。比較不同配比展開劑，供試品與對照藥材在薄層色譜上的展開效果，結(jié)果見下表:表8展開劑配比的選擇試驗<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>從上表可以看出，以氯仿-甲醇-氨水15:i.5:o.5的比例為展開劑，展開效果最好，符合試驗要求，且重現(xiàn)性好，陰性無干擾。6、五味子乙素的含量測定檢測儀器島津公司SPD-10ATvp型高效液相色譜儀色譜柱迪瑪公司(ZorbaxC184.6X150mm，5陶)流動相乙腈-水-醋酸(65:40:0.1)檢測波長254nm流速1.000ml/min柱溫室溫對照品五味子乙素購于中國藥品生物制品檢定所批號110765-200205測定方法對照品溶液的制備取五味子乙素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含30ug的溶液，即得。供試品溶液的制備取按實施例2方法制備的丸劑相當(dāng)于原藥材4.5g粉碎，精密稱取約5g，精密加入50ml甲醇，稱取重量，超聲處理30分鐘，放冷，補足重量，搖勻，過濾，即得。陰性對照液的制備按實施例2方法制備缺五味子的空白樣品，制備陰性對照液。用微孔濾膜(0.45Mffl)過濾。分別精密吸取陰性對照液，對照品溶液與供試品溶液各5IOW,注入液相色譜儀，測定，即得。l.含量測定方法考察(1)穩(wěn)定性試驗取對照品溶液(34yg/ml)，分別于配制后0、2、4、6、12、24小時，<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>(2)線性關(guān)系考察取對照品溶液(35.52ug/ml)搖勻，分別精密吸取1、5、10、15、19W注入高效液相色譜儀，結(jié)果見下表，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，表明五味子乙素在0.03552Pg-0.67488yg間呈線性關(guān)系，其回歸方程為y二2E+06x+4938.3(r=0.9998)表IO線性關(guān)系考察結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>(3)精密度試驗精密對照品溶液，重復(fù)進樣5次，求得相對標(biāo)準(zhǔn)偏差〈2.5%，結(jié)果見下表:表ll精密度試驗結(jié)果^f[—…—2—3___4——上—峰面積580221575678565887572425570020RSD(%)0.9522(4)重現(xiàn)性試驗按正文方法，取同一批本發(fā)明藥物制劑5份，對每份進行測定，求得相對標(biāo)準(zhǔn)偏差〈2%，結(jié)果見下表表12重現(xiàn)性試驗結(jié)果次數(shù)1234—5含量(mg/g)0.1160.1150.1150.1170.112平均含量(mg/g)RSD(%)(5)回收率試驗精密稱取已知含量的同一批本發(fā)明藥物制劑2.5g再精密加入五味子乙素對照品(35.52ug/ml)8ml，按正文供試品溶液的制備方法操作，測定其含量，并計算其回收率，測定結(jié)果見下表表13回收率試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>2.測定結(jié)果表14三批含量測定結(jié)果(XU51.627<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>根據(jù)以上實驗結(jié)果，本發(fā)明藥物含量測定方法穩(wěn)定，符合要求。試驗例3藥效學(xué)研究1材料藥物與試劑本發(fā)明藥物I:按照實施例8制備的藥物制劑本發(fā)明藥物II:按照實施例2制備的藥物制劑本發(fā)明藥物III:按照實施例1制備的藥物制劑陽性對照藥物生精膠囊市售品戊巴比妥鈉以生理鹽水配制,供腹腔注射用，上?；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)站分裝。青霉素G鉀以注射用水配制,供腹腔注射用，華北制藥廠生產(chǎn)。氫化可的松琥珀酸鈉注射液天津市生藥制藥廠生產(chǎn)。丙酸睪丸酮試劑盒,天津得普DDC公司出口。動物SD大鼠(80100g)，昆明小鼠(2022g)，豚鼠(750850g)，均為雄性，由河南省實驗動物中心提供，。儀器痛閾測定儀(用于電刺激)，北京海淀電子醫(yī)療廠出品。Y放射免疫計數(shù)器，西安自動化研究所出品。2方法與結(jié)果2.1對去勢大鼠腎陽虛證的影響方法取48只雄性大鼠，以戊巴比妥鈉40rag/kg經(jīng)腹腔麻醉，消毒局部皮膚后，隨機選8只動物作空白對照(假手術(shù))組，余動物均切除雙側(cè)睪丸并肌注青霉素G鉀2萬Ukg—\第11天將去勢動物隨機分為5組，每組8只，并開始用藥,連續(xù)12天。即空白對照組(假手術(shù)組)、模型對照組:給予015%CMC2Nal0mlkg,g;陽性對照組(生精膠囊組)4.0g生藥kg—1;本發(fā)明藥物I、II、III組分別為2.8g生藥kg—'。末次用藥后1小時以Wa29E測定儀剌激動物陰莖局部，電流強度為4mA,觀察陰莖勃起潛伏期及持續(xù)時間。次日處死動物,取包皮腺、精液囊—前列腺及提肛肌稱重,并計算器官系數(shù)(mg/100g)。結(jié)果:見表15。表15五子衍宗濃縮丸對去勢大鼠腎陽虛證的影響(x土s，n=8)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>注與空白對照組相比AAP〈0.01;與模型對照組相比補<0.05,**P<0.01;與陽性對照組相比★P<0.05,01。陽性對照組及本發(fā)明藥物組的陰莖勃起潛伏期明顯短于模型組，勃起持續(xù)時間高于模型組(P〈0.05或0.01)，陽性對照組及本發(fā)明藥物組的附性器官系數(shù)(包皮腺、精液囊一前列腺及提肛肌)均明顯高于模型組(P〈0.05或0.01)，呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，本發(fā)明藥物組提肛肌的重量明顯高于陽性對照藥物組。其中本發(fā)明藥物III對去勢大鼠腎陽虛證的影響最顯著，效果最好。2.2對腎陽虛小鼠生育能力的影響方法:取60只雄性小鼠，隨機分為6組，每組10只(分組及劑量見表2)。除空白對照組外,其余動物用氫化可的松0.5mlkg—'ip連續(xù)9日；在造模同時開始灌胃，連續(xù)12天。末次給藥后lh經(jīng)眼眶采血,按放免測定試劑盒說明，測血漿睪酮含量;并對各鼠睪丸、附睪稱重后,.將附睪放入盛有任氏液的平皿內(nèi)，研磨制成精子懸液,37'C水浴15min，按紅細(xì)胞計數(shù)法觀察記錄每g附睪所含精子數(shù),并將上述懸液滴于玻璃片上，光學(xué)顯微鏡下記錄200個精子中活動精子的百分率。結(jié)果:見表16。表16五子衍宗濃縮丸對陽虛小鼠生育能力的影響(x土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>注與空白組相比AP〈0.05，AAP〈0.01;與模型對照組相比沐P〈0.05，林P〈0.01;與陽性對照組相比女P〈0.05,01。陽性藥物對照組及本發(fā)明藥物組的血漿睪翻含量明顯高于模型組(P〈0.01);各用藥組的睪丸、附睪重量與模型組無明顯區(qū)別(P〉0.05);陽性藥物對照組及本發(fā)明藥物組的精子數(shù)目高于模型組(P〈0.01或0.05);本發(fā)明藥物組的精子活動能力明顯高于模型組(P〈0.01)。本發(fā)明藥物對陽虛小鼠血漿睪酮含量、精子數(shù)、精子活動能力等各項指標(biāo)的提高均顯著高于陽性對照藥物，尤其本發(fā)明藥物III的效果最好。3對雄性小鼠交配能力的影響取雄性昆明種小白鼠60只，隨機分為6組，每組10只。正常對照組蒸餾水灌胃(20ml/kg)，丙酸皋丸素組皮下注射給藥(〈0.025mg/只).生精膠囊組灌胃給藥4.0g/kg。本發(fā)明藥物I、II、III灌胃給藥2.8g/kg。以上各組，每日灌胃1次(丙酸肇丸素組為皮下注射給藥)，連續(xù)10d，第5d開始每只雄鼠與5只雌鼠同籠喂養(yǎng)，第6d給每只雌鼠皮下注射苯甲酸雌二醇(200Hg/kg)。同籠后次日開始每天上午檢査各組雌鼠陰道口或陰道內(nèi)有無白色物出現(xiàn)，有白色物者為出現(xiàn)陰栓，將其從籠中取出；計算陰栓出現(xiàn)率。結(jié)見下表17:表17振雄展勢丹對雄性小鼠交配能力的影晌<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>注與正常對照組相比水P〈0.05，林P〈0.01;與生精膠囊組相比女P〈0.05，女女P〈0.01。由上表可見，本發(fā)明藥物組和陽性藥物對照組(丙酸皋丸素組和生精膠囊組)與正常對照組比較均明顯地增強小鼠交配能力(P<0.01)，本發(fā)明藥物的作用顯著高于生精膠囊，其中本發(fā)明藥物m的效果最好。下述實施例均能夠?qū)崿F(xiàn)上述實驗例所述的效果實施例l枸杞子56g沙苑子25g覆盆子20g五味子5g車前子(鹽炒)7g稱取以上原料藥材，以上五味，采用超微粉碎技術(shù)，粉碎成微粉，混勻；90-110g蜂蜜在116-118。C時，煉制密度為1.37，即得煉蜜；每100g粉末加煉蜜40g及110g的水，泛丸，6(TC干燥11小時，制成100g，即得。(1)取本品5g，研細(xì)，加乙醚50ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯lml使溶解，作為供試品溶液。另取枸杞子對照藥材lg，研碎，加乙醚20ral，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取上述二種溶液各5pl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(306(TC)-甲酸乙酯-甲酸(20:20:0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。(2)取本品5g，研細(xì)，加硅藻土5g，研勻，加乙醚50ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加三氯甲垸40ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘渣加乙酸乙酯lml使溶解，作為供試品溶液。另取五味子甲素對照品，加乙酸乙酯制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液10ul，對照品溶液2ul，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(3060°C)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版附錄VID)測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水-醋酸(65:40:0.1)為流動相；檢測波長為254nm。對照品溶液的制備取五味子乙素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含30ug的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品粉碎，精密稱取約5g，置索氏提取器中，加正己烷適量，浸泡過夜，于8085'C回流提取6小時，提取液低溫蒸干，殘渣加甲醇微熱使溶解，移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各515ri，注入液相色譜儀，測定，即得。本品每克含五味子以五味子乙素(C23H2806)計，不得少于0.07mg。實施例2枸杞子56g菟絲子(炒)25g覆盆子20g五味子(蒸)5g車前子(鹽炒)7g稱取以上原料藥材，以上五味，采用超微粉碎技術(shù)，粉碎成微粉，混勻；90-110g蜂蜜在116-118。C時，煉制密度為1.37，即得煉蜜；每100g粉末加煉蜜40g及110g的水，泛丸，60。C干燥ll小時，制成100g，即得。(1)取本品5g，研細(xì)，加乙醚50ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯lml使溶解，作為供試品溶液。另取枸杞子對照藥材lg，研碎，加乙醚20ml，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取上述二種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(3060°C)-甲酸乙酯-甲酸(20:20:0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。(2)取本品10g，研細(xì)，加石油醚(3060°C)30ml,超聲處理30分鐘，濾過，棄去石油醚液，藥渣揮盡石油醚，加甲醇30ml超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇5ml使之分散，取上清液作為供試品溶液。另取菟絲子對照藥材2g，研細(xì)，同法制備成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取上述二種溶液各2yl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10:5:4)為展開劑，展開，取出，晾干，噴1%三氯化鋁乙醇溶液，涼干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。(3)取本品5g，研細(xì)，加硅藻土5g，研勻，加乙醚50ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加三氯甲垸40ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘渣加乙酸乙酯lml使溶解，作為供試品溶液。另取五味子甲素對照品，加乙酸乙酯制成每lml含lrag的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液10ul，對照品溶液2ul，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(3060°C)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版附錄VID)測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水-醋酸(65:40:0.1)為流動相；檢測波長為254nm。對照品溶液的制備取五味子乙素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含30ug的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品粉碎，精密稱取約5g，置索氏提取器中，加正己垸適量，浸泡過夜，于8085'C回流提取6小時，提取液低溫蒸千，殘渣加甲醇微熱使溶解，移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各515W，注入液相色譜儀，測定，即得。本品每克含五味子以五味子乙素(C23H2806)計，不得少于0.07mg。實施例3枸杞子15g菟絲子(炒)20g覆盆子10g五味子lg車前子(鹽炒)4g稱取以上原料藥材，以上五味，采用超微粉碎技術(shù)，粉碎成微粉，混勻；90-110g蜂蜜在116-118r時，煉制密度為1.37，即得煉蜜；每100g粉末加煉蜜40g及110g的水，泛丸，6(TC干燥11小時，即得。(1)取本品5g，研細(xì)，加乙醚50ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯lml使溶解，作為供試品溶液。另取枸杞子對照藥材lg，研碎，加乙醚20ml，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取上述二種溶液各5y1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(3060°C)-甲酸乙酯-甲酸(20:20:0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。(2)取本品10g，研細(xì)，加石油醚(3060°C)30ml，超聲處理30分鐘，濾過，棄去石油醚液，藥渣揮盡石油醚，加甲醇30ml超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇5ml使之分散，取上清液作為供試品溶液。另取菟絲子對照藥材2g，研細(xì)，同法制備成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取上述二種溶液各2ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10:5:4)為展開劑，展開，取出，晾干，噴1%三氯化鋁乙醇溶液，涼干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。(3)取本品5g，研細(xì)，加硅藻土5g，研勻，加乙醚50ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加三氯甲烷40ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘渣加乙酸乙酯lml使溶解，作為供試品溶液。另取五味子甲素對照品，加乙酸乙酯制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液10pl，對照品溶液2yl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(306(TC)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。(4)取本品粉末5g，加50mL石油醚，索氏提取2.5h脫脂，殘渣揮干石油醚，加50mL甲醇回流提取3h，濾過,濾液濃縮至2mL，作為供試品溶液；另取覆盆子對照藥材，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗,吸取上述兩種溶液各5!xL，分別點于同一硅膠G板上以醋酸乙酯-甲醇-水(5:1:1)，展開，取出，晾干，噴O.5%A1C13，甲醇溶液，置紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。(5)取本品內(nèi)容物1.5g加甲醇20ml，浸泡3h,濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為供試品溶液。取車前子對照藥材lg，甲醇20ml，加熱回流提取lh，濾過，濾液揮干，殘渣加lml甲醇溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液10y1、對照藥材溶液20u1,分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-氨水(15:1.5:0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，IO(TC加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點。實施例4枸杞子25g沙苑子25g覆盆子20g五味子5g車前子(鹽炒)7g稱取以上原料藥材，以上五味，采用超微粉碎技術(shù)，粉碎成微粉，混勻；90-110g蜂蜜在116-118'C時，煉制密度為1.37，即得煉蜜；每100g粉末加煉蜜40g及110g的水，泛丸，6CTC干燥11小時，即得。實施例5枸杞子75g菟絲子60g覆盆子40g五味子8g車前子(鹽炒)15g稱取以上原料藥材，采用超微粉碎技術(shù)，分別粉碎成微粉，混勻，與聚乙二醇4000按照重量比3:7的比例混合均勻，滴入冷卻的液體石蠟中，制得滴丸，即得。實施例6枸杞子56g菟絲子(炒)25g覆盆子20g五味子(蒸)5g車前子(鹽炒)7g稱取以上原料藥材，粉碎至80目，混勻，裝入膠囊，即得。實施例7枸杞子56g菟絲子(炒)25g覆盆子20g五味子(蒸)5g車前子(鹽炒)7g稱取以上原料藥材，粉碎至80目，混勻，用濃度為8%的淀粉漿制粒，干燥，整粒，壓片，包衣，制成350片，即得。實施例8枸杞子25g菟絲子(炒)25g覆盆子12.5g五味子(蒸)3.125g車前子(鹽炒)6.25g制法以上五味，粉碎成細(xì)粉，過篩，混勻；90-110g蜂蜜在116-118。C時，煉制密度為1.37，即得煉蜜；每100g粉末用煉蜜3550g加適量的水泛丸，干燥，制成100g，即得。性狀本品為棕褐色的水蜜丸；味甜、酸、微苦。鑒別(l)取本品，置顯微鏡下觀察種皮石細(xì)胞表面觀不規(guī)則多角形，壁厚，波狀彎曲，層紋清晰。種皮表皮石細(xì)胞淡黃棕色，表面觀類多角形，壁較厚，孔溝細(xì)密，胞腔含暗棕色物。種皮柵狀細(xì)胞2列，內(nèi)列較外列長，有光輝帶。種皮內(nèi)表皮細(xì)胞表面觀類長方形，壁稍波狀，以數(shù)個細(xì)胞為一組，略作鑲嵌狀排列。非腺毛單細(xì)胞，壁厚，木化，脫落后殘跡似石細(xì)胞狀。(2)取本品5g，研細(xì)，加乙醚50ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯lml使溶解，作為供試品溶液。另取枸杞子對照藥材lg，研碎，加乙醚20ml，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取上述二種溶液各5u1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(3060°C)-甲酸乙酯-甲酸(20:20:0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。(3)取本品10g，研細(xì)，加石油醚(3060°C)30ml，超聲處理30分鐘，濾過，棄去石油醚液，藥渣揮盡石油醚，加甲醇30ml超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇5ml使之分散，取上清液作為供試品溶液。另取菟絲子對照藥材2g，研細(xì)，同法制備成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取上述二種溶液各2ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10:5:4)為展開劑，展開，取出，晾干，噴1%三氯化鋁乙醇溶液，涼干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。(4)取本品5g，研細(xì)，加硅藻土5g，研勻，加乙醚50ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加三氯甲烷40ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘渣加乙酸乙酯lml使溶解，作為供試品溶液。另取五味子甲素對照品，加乙酸乙酯制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液10ul，對照品溶液2ul，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(3060°C)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。檢査應(yīng)符合丸劑項下有關(guān)的各項規(guī)定(附錄IA)。含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版附錄VID)測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水-醋酸(65:40:0.1)為流動相；檢測波長為254nm。對照品溶液的制備取五味子乙素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含30ixg的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品粉碎，精密稱取約5g，精密加入50ml甲醇，稱取重量，超聲處理30分鐘，放冷，補足重量，搖勻，過濾，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各515W，注入液相色譜儀，測定，即得。本品每克含五味子以五味子乙素(C23H2806)計，不得少于0.07mg。功能與主治補腎益精。用于腎虛腰痛，尿后余瀝，遺精早泄，陽痿不育。用法與用量口服。一次6g，一日2次。規(guī)格每100丸重10g忙藏密封。權(quán)利要求1、一種治療男性不育癥的中藥組合物，其特征在于是由如下重量比的原料藥制成枸杞子15～75重量份沙苑子20～60重量份覆盆子10～40重量份五味子1～8重量份車前子(鹽炒)4～15重量份2、如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物可由如下重量比的原料藥制成-枸杞子56重量份沙苑子25重量份覆盆子20重量份五味子5重量份車前子(鹽炒)7重量份3、如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物可由如下重量比的原料藥制成:枸杞子1575重量份菟絲子2060重量份覆盆子1040重量份五味子18重量份車前子(鹽炒)415重量份4、如權(quán)利要求3所述的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物可由如下重量比的原料藥制成:枸杞子4065重量份菟絲子(炒)2030重量份覆盆子1530重量份五味子(蒸)47重量份車前子(鹽炒)59重量份5、如權(quán)利要求4所述的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物可由如下重量比的原料藥制成:枸杞子56重量份菟絲子(炒)25重量份覆盆子20重量份五味子(蒸)5重量份車前子(鹽炒)7重量份6、如權(quán)利要求1-5任意一項所述的中藥組合物，其特征在于可按常規(guī)工藝加入輔料制成片劑、膠囊劑、丸劑、滴丸劑等臨床可接受的劑型；所述輔料包括溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐劑、著色劑、粘合劑、潤滑劑、基質(zhì)等。7、如權(quán)利要求6所述的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物丸劑的制備方法為以上五味，采用超微粉碎技術(shù)，粉碎成微粉，混勻；90-110重量份蜂蜜在116-118。C時，煉制密度為1.37，即得煉蜜；每100重量份粉末加煉蜜35-50重量份及100-160重量份的水，泛丸，60-80。C干燥812小時，即得。8、如權(quán)利要求1-5任意一項或7所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于該質(zhì)量控制方法包括如下鑒別方法和/或含量測定中的一種或幾種鑒別(1)取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材34g，研細(xì)，加乙醚4060ml，超聲處理1530分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯lml使溶解，作為供試品溶液。另取枸杞子對照藥材l2g，研碎，加乙醚2030ml，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取上述二種溶液各5pl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(3060°C)-甲酸乙酯-甲酸(1525:1525:0.10.5)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(2)取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材78g，研細(xì)，加石袖醚(3060°C)2535ml，超聲處理2040分鐘，濾過，棄去石油醚液，藥渣揮盡石油醚，加甲醇3040ml超聲處理1530分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇56ml使之分散，取上清液作為供試品溶液。另取菟絲子對照藥材2g，研細(xì)，同法制備成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取上述二種溶液各2y1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(812:46:35)為展開劑，展開，取出，晾干，噴1%三氯化鋁乙醇溶液，涼干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(3)取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材34g，研細(xì)，加乙醚4060ml，超聲處理1530分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加三氯甲垸3050ml，超聲處理1525分鐘，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘渣加乙酸乙酯lml使溶解，作為供試品溶液。另取五味子甲素對照品，加乙酸乙酯制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液10ul，對照品溶液2yl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(306(TC)-甲酸乙酯-甲酸(1020:37:12)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；(4)取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材34g，研細(xì)，加4060mL石油醚，索氏提取23h脫脂，殘渣揮干石油醚，加4060mL甲醇回流提取24h,濾過，濾液濃縮至l2mL,作為供試品溶液；另取覆盆子對照藥材，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各5uL，分別點于同一硅膠G板上以醋酸乙酯-甲醇-水(47:12:12)，展開，取出，晾干，噴O.5%A1C13，甲醇溶液，置紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；(5)取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材l2g，研細(xì)，加甲醇1530ml，浸泡24h,濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇l2ml使溶解，作為供試品溶液。取車前子對照藥材l2g，甲醇1030ml，加熱回流提取O.51.5h，濾過,濾液揮干，殘渣加l2ml甲醇溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各20ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-氨水(1020:12:0.51)為展開亂展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，IOO'C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點；含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版附錄VID)測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水-醋酸(65:40:0.1)為流動相；檢測波長為254nm;對照品溶液的制備取五味子乙素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含30iig的溶液，即得；供試品溶液的制備取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材34g，研細(xì)，精密稱取約46g，置索氏提取器中，加正己烷適量，浸泡過夜，于8085°C回流提取58小時，提取液低溫蒸干，殘渣加甲醇微熱使溶解，移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各515W，注入液相色譜儀，測定，即得；本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材O.5lg含五味子以五味子乙素(C23H2806)計，不得少于0.050.08mg。9、如權(quán)利要求8所述中藥組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該質(zhì)量控制方法包括如下鑒別方法和/或含量測定中的一種或幾種鑒別(1)取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材3.6g，研細(xì)，加乙醚50ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯lml使溶解，作為供試品溶液。另取枸杞子對照藥材lg，研碎，加乙醚20ml，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取上述二種溶液各5yl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(306(TC)-甲酸乙酯-甲酸(20:20:0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(2)取本品10g，研細(xì)，加石油醚(3060°C)30ml，超聲處理30分鐘，濾過，棄去石油醚液，藥渣揮盡石油醚，加甲醇30ml超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇5ml使之分散，取上清液作為供試品溶液。另取菟絲子對照藥材2g，研細(xì)，同法制備成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取上述二種溶液各2yl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10:5:4)為展開劑，展開，取出，晾干，噴1%三氯化鋁乙醇溶液，涼干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(3)取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材3.6g，研細(xì)，加乙醚50ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加三氯甲烷40ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘渣加乙酸乙酯lml使溶解，作為供試品溶液。另取五味子甲素對照品，加乙酸乙酯制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液10ul，對照品溶液2ul，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(3060°C)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；(4)取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材3.6g,研細(xì)，加50mL石油醚，索氏提取2.5h脫脂，殘渣揮干石油醚，加50mL甲醇回流提取3h，濾過,濾液濃縮至2mL，作為供試品溶液；另取覆盆子對照藥材，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各5uL，分別點于同一硅膠G板上以醋酸乙酯-甲醇-水(5:1:l),展開,取出，晾干,噴O.5%A1C13,甲醇溶液，置紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；(5)取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材1.8g，研細(xì)，加甲醇20ml，浸泡3h，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為供試品溶液。取車前子對照藥材lg，甲醇20ml,加熱回流提取lh，濾過，濾液揮干，殘渣加lml甲醇溶解,作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液10y1、對照藥材溶液20u1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-氨水(15:1.5:0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，IO(TC加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點；含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版附錄VID)測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水-醋酸(65:40:0.1)為流動相；檢測波長為254nm;對照品溶液的制備取五味子乙素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含30ug的溶液，即得；供試品溶液的制備取本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材4g，研細(xì)，精密稱取約5g，置索氏提取器中，加正己垸適量，浸泡過夜，于8085°C回流提取6小時，提取液低溫蒸干，殘渣加甲醇微熱使溶解，移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各515Pl，注入液相色譜儀，測定，即得；本發(fā)明藥物制劑相當(dāng)于原藥材0.719§含五味子以五味子乙素((:2孔806)計，不得少于0.07mg。全文摘要本發(fā)明涉及一種治療男性不育的中藥組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法，該中藥組合物由枸杞子、菟絲子(炒)、覆盆子、五味子(蒸)、車前子(鹽炒)等原料藥組成，其制備方法包括超微粉碎技術(shù)等，本發(fā)明藥物組合物質(zhì)量控制方法包括枸杞子、菟絲子、覆盆子、五味子、車前子的薄層鑒別和五味子中五味子乙素的含量測定方法。本發(fā)明藥物組合物用于腎虛腰痛，尿后余瀝，遺精早泄，陽痿不育有顯著療效。文檔編號G01N30/02GK101417038SQ20071017622公開日2009年4月29日申請日期2007年10月23日優(yōu)先權(quán)日2007年10月23日發(fā)明者付建家,付立家申請人:北京亞東生物制藥有限公司