專利名稱::外周造血干細(xì)胞的處理方法外周造血干細(xì)胞的處理方法相關(guān)申"i青本發(fā)明要求2006年6月15日提交的美國臨時申請60/814,235,申請日,2006年6月20日提交的美國臨時申請60/815,399,2006年8月21日提交的美國臨時申請60/839,311的優(yōu)先權(quán),這些申請的全部內(nèi)容在此引入作為參考。
技術(shù)領(lǐng)域:
本申請涉及制備及使用得自非疾病或病前(pre-disease)受試者的自體成體干細(xì)月包的方法。
背景技術(shù):
:干細(xì)胞移植技術(shù)已經(jīng)被單獨應(yīng)用(例如針對先天性疾病)或配合其他治療方法(例如化療)一起應(yīng)用。干細(xì)月包的廣泛應(yīng)用是由于其給予患者后,能重新產(chǎn)生一個或多個細(xì)胞譜系(lineages)。多數(shù)干細(xì)胞移植是使用相匹配的捐助者(異體)提供的干細(xì)胞或在患者接受治療前立即收集的患者(自體)的干細(xì)胞。然而,異體移植存在很多弊端,例如免疫排斥反應(yīng)和移植物抗宿主疾病。并且,異體移植也比自體移植更昂貴。自體移植方法的優(yōu)點在于用患者自身的細(xì)胞,包括干細(xì)胞,被重新引入患者體內(nèi)。利用患者自身的成體干細(xì)胞降低了細(xì)胞被免疫系統(tǒng)排斥的風(fēng)險。來自一個個體而非患者本人的干細(xì)胞可能會導(dǎo)致移植排斥反應(yīng),并產(chǎn)生所謂的移植物抗宿主疾病(GVHD)的風(fēng)險,也就是移植的細(xì)胞攻擊被移植者體內(nèi)的細(xì)胞。這是一個重大的缺陷,所謂的移植物抗宿主疾病是一個難題,只能通過免疫抑制藥物控制。干細(xì)胞的潛在來源包括胚胎干細(xì)胞、從臍帶血收集的干細(xì)胞和成體干細(xì)胞。不幸的是,雖然大量的胚胎干細(xì)胞比較容易在培養(yǎng)基中生長,但這些細(xì)胞很少存在于成體組織中并且在細(xì)胞培養(yǎng)中擴(kuò)增其數(shù)量的方法仍在研究中。這與干細(xì)胞移植治療中需要的大量細(xì)胞具有很大8差距。此外,來自一個個體的異體胚胎干細(xì)胞被輸入到患者體內(nèi),會增加移植排斥反應(yīng)的風(fēng)險。從臍帶血收集的干細(xì)胞可用于一些治療,但因為其細(xì)胞數(shù)量少、細(xì)胞不成熟、不完整的補(bǔ)體等限制了這些干細(xì)胞在一些治療中的應(yīng)用。成體(adult)干細(xì)胞或體干(somatic)細(xì)胞,是一種在組織或器官中的分化細(xì)胞間發(fā)現(xiàn)的未分化細(xì)胞。成體干細(xì)胞可以自我更新,并能夠分化產(chǎn)生所在組織或器官的主要的專門細(xì)胞類型。在活的生物體中,成體干細(xì)胞的主要作用是維持和修復(fù)它們所在的組織。成體干細(xì)胞是干細(xì)胞自體移植的一個來源,從而最大限度地降低移植排斥反應(yīng)的風(fēng)險。利用患者自身的成體干細(xì)胞將意味著細(xì)胞不會被免疫系統(tǒng)所排斥。這是一個重要的優(yōu)點,因為免疫排斥反應(yīng)是一個難題,只能通過免疫抑制藥物進(jìn)行抑制。因此,利用成體干細(xì)胞的自體轉(zhuǎn)移具有重要的現(xiàn)實和道德層面上的意義,而不僅僅是消除移植排斥反應(yīng)的危險。然而,在其接受治療前立即從所述個體收集的自體干細(xì)胞,可能包含被正在接受治療的疾病所污染或損傷的細(xì)胞。"損傷的(compromised)細(xì)胞"是指干細(xì)胞的增殖能力不如那些來自沒有疾病或紊亂的個體的干細(xì)胞。例如,從一個吸煙者或一個供氧困難的患者的干細(xì)胞到?jīng)]有患病的個體(例如,肺氣腫)。但是,這些干細(xì)胞是受到損傷的,因為(1)它們不能自我更新;并且(2)它們很難產(chǎn)生祖細(xì)胞或終末分化細(xì)胞。不幸的是,目前尚不能滿足非損傷的人類干細(xì)胞通過自體轉(zhuǎn)移用于治療疾病的需要。本發(fā)明的一個優(yōu)點在于,能夠收集大量的成體干細(xì)胞并且避免上述問題。此外,目前的干細(xì)胞保存的方法包括從胚胎臍血和獻(xiàn)血中收集干細(xì)胞。但這些技術(shù)的應(yīng)用是受到限制的,因為在外周血中干細(xì)胞的總數(shù)只占;[艮小的比例,因為通過輸血所獲得的血液被限定在一個特定的量。應(yīng)用來自成人的干細(xì)胞的潛在優(yōu)勢是患者自身的細(xì)胞可在培養(yǎng)中擴(kuò)增,然后在輸入患者體內(nèi)。因此,也需要收集人類干細(xì)胞群在低溫下長期保存,并且最終將細(xì)胞群解凍后通過自體移植治療一種疾病。本發(fā)明此處描述的實施方案可以通過提供一種方法來處理與現(xiàn)有技術(shù)相關(guān)的各種問題,有利于收集、處理、保存和分配健康的干細(xì)胞,用于個體的健康需要的未來治療。本說明書的全部,其中包括之前描述的相關(guān)文獻(xiàn),任何和所有公開的文獻(xiàn),包括任何及所有的美國專利,其全部內(nèi)容在此處作為一個整體供參考。上述相關(guān)文獻(xiàn)不僅包括所述文件,還包括未決的美國專利申請,均屬于本發(fā)明的現(xiàn)有技術(shù)。此外,本說明書中所述產(chǎn)品、方法和/或設(shè)備的相關(guān)缺陷,并不局限于本發(fā)明。事實上,本發(fā)明可能包括所述產(chǎn)品、方法和/或設(shè)備的某些功能,而不具有所述缺陷。發(fā)明概述本發(fā)明提供了一種選擇性健康護(hù)理保險模型(electivehealthcareinsurancemodel),該才莫型將個體自身外周血干細(xì)胞應(yīng)用于個體未來的健康護(hù)理用途。具體地說,本發(fā)明提供了一種方法,其中個體可以選擇當(dāng)他或她是在健康狀態(tài)時(在沒有立即察覺(immediateperceived)需要使用其自身的干細(xì)胞進(jìn)行治療的健康狀況的時期),將他或她自己的干細(xì)胞進(jìn)行收集、處理和保存,用于將來為他或她健康護(hù)理需要而發(fā)放。本發(fā)明還包括在非疾病狀態(tài)下收集、處理、保存和發(fā)放成人(包括兒童)的外周造血干細(xì)胞的方法。所收集的干細(xì)胞將包含足夠劑量,當(dāng)個體在未來的健康護(hù)理治療中需要時,能立即進(jìn)行一或多次移植。因此,根據(jù)一個實施方案,本發(fā)明提供了將干細(xì)胞提供給個體的方法,包括如下步驟從沒有立即察覺需要使用其自身收集的干細(xì)胞進(jìn)行治療的健康狀況的受試者主動收集干細(xì)胞;從所述受試者收集干細(xì)胞;收集的同時,標(biāo)記所收集的干細(xì)胞用于所述受試者;在容器中保存所收集的干細(xì)胞;如果或者當(dāng)所述受試者需要時,取出保存的干細(xì)胞。在優(yōu)選實施方案中,所述受試者是人。根據(jù)優(yōu)選實施方案,干細(xì)胞可通過血液分離(apheresis)方法進(jìn)行收集。因此,本發(fā)明提供了以下方法從病前人類受試者中收集自體成體干細(xì)胞;使用血液分離方法從病前人類受試者外周血中收集成體干細(xì)胞;收集的同時,標(biāo)記所收集的干細(xì)胞用于所述人類受試者;并且保存所收集的細(xì)胞,保持細(xì)胞完整性。根據(jù)另一優(yōu)選實施方案,本發(fā)明提供了從病前受試者中收集自體成體干細(xì)胞的方法,包括如下步驟給予所述病前受試者干細(xì)胞增效劑(stemcellpotentiatingagent);4吏用血液分離方法,人病前受試者外周10血中收集成體干細(xì)胞;收集的同時,標(biāo)記所收集的干細(xì)胞用于所述受試者;并且保存所收集的細(xì)胞,保持細(xì)胞完整性。根據(jù)另一優(yōu)選實施方案,本發(fā)明提供了從病前受試者中收集自體成體干細(xì)胞的方法,包括如下步驟給予所述病前受試者干細(xì)胞增效劑;使用血液分離方法從病前受試者外周血中收集成體干細(xì)胞;收集的同時,標(biāo)記所收集的千細(xì)胞用于所述受試者;并且保存所收集的細(xì)胞,保持細(xì)胞完整性;其中連續(xù)兩天給予所述病前受試者干細(xì)胞增效劑,所述受試者每天接受一劑量,其中所述血液分離方法在連續(xù)的笫三天實施。根據(jù)另一優(yōu)選實施方案,本發(fā)明提供了從病前受試者中收集自體成體干細(xì)胞的方法,包括如下步驟給予病前受試者至少兩劑量的粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF),約lpg/kg/天到8昭/kg/天;通過血液分離方法從病前受試者的外周血中收集成體干細(xì)胞;在收集的同時,標(biāo)記所收集的細(xì)胞用于所述受試者;并且保存所收集的細(xì)胞,并保持細(xì)胞完整性。所述病前受試者可以在2-6天之內(nèi),被給予至少兩劑量的粒細(xì)胞集落刺激因子。優(yōu)選地,至少兩劑量的粒細(xì)胞集落刺激因子是連續(xù)兩天給予的,所述受試者每天僅接受一劑量。更優(yōu)選地,所述受試者連續(xù)幾天接受兩劑量的粒細(xì)胞集落刺激因子。另一個優(yōu)選實施方案是,所述病前受試者在約12-26個小時的時間間隔內(nèi),分別被給予至少兩劑量的粒細(xì)胞集落刺激因子。根據(jù)另一個優(yōu)選實施方案,所述粒細(xì)胞集落刺激因子以約4-6pg/kg/天或等同劑量給予受試者。根據(jù)另一個優(yōu)選實施方案,每劑量約50pg到800|ig的粒細(xì)胞集落刺激因子被皮下給予受試者。根據(jù)另一個優(yōu)選實施方案,每劑量約300]ug到500ng的粒細(xì)胞集落刺激因子被皮下給予受試者。根據(jù)另一個優(yōu)選實施方案,所述受試者是人類受試者且符合至少一個選自以下條件體重在10至200公斤且年齡在2至80歲。所述粒細(xì)胞集落刺激因子可皮下給予。優(yōu)選的是,每劑量約480pg的粒細(xì)胞集落刺激因子皮下給予病前受試者。用血液分離方法從外周血中收集成體干細(xì)胞可以在給予笫二劑量ii的粒細(xì)胞集落刺激因子后的那天進(jìn)行。一個優(yōu)選實施方案是,用血液分離方法從外周血中收集成體干細(xì)胞可以在給予第二劑量的粒細(xì)胞集落刺激因子約12-36小時后進(jìn)行。根據(jù)一個實施方案,所述收集步驟是當(dāng)受試者在成年或非新生兒時期進(jìn)行的。根據(jù)另一個實施方案,所述收集步驟包括對每個受試者在單一收集方法中,收集至少多于約200xi08個總有核細(xì)胞。優(yōu)選地,收集步驟包括對每個個體在單一收集方法中,收集至少多于250xl()8個總有核細(xì)胞。根據(jù)另一個實施方案,所述收集步驟包括多個階段(sessions)。根據(jù)另一個實施方案,所述保存步驟包括在干細(xì)胞庫中保存所收集的細(xì)月包。根據(jù)另一個優(yōu)選實施方案,本發(fā)明提供了干細(xì)胞庫存(banking)方法,包括如下步驟(a)給予人體一或多種干細(xì)胞增效劑,增加所述人體的外周血中干細(xì)胞的數(shù)量;(b)使用血液分離方法,從所述人體的外周血中收集至少一個干細(xì)胞群和至少一個非干細(xì)胞群,其中所述人體沒有立即察覺的需要使用其自身所收集的干細(xì)胞進(jìn)行治療的健康狀況;(c)保存所述至少一個干細(xì)胞群和至少一個非干細(xì)胞群,作為保存的細(xì)胞群;(d)重新菱得(retrieving)所保存的細(xì)胞群,用于將所述至少一個干細(xì)胞群和至少一個非干細(xì)胞群自體移植到所述人體。優(yōu)選的是,所述一或多種干細(xì)胞增效劑選自粒細(xì)胞集落刺激因子、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、地塞米松、CXCR4受體抑制劑及它們的組合。所述CXCR4受體抑制劑可以選自AMD3100、ALX40-4C、T22、T134、T140和TAK-779。根據(jù)另一實施方案,所述方法在沒有對所述一個干細(xì)胞群或至少一個非干細(xì)胞群進(jìn)行HLA分型(typing)的情況下進(jìn)行。根據(jù)另一實施方案,所述給予步驟在收集步驟前的至少一周進(jìn)行。根據(jù)另一實施方案,所述健康狀況選自腫瘤(ne叩lastic)疾病、免疫疾病及白細(xì)月包減少癥。根據(jù)另一實施方案,所述收集步驟是在所述人體為成年或非新生兒時期進(jìn)行的。所述收集步驟可以進(jìn)行至少2次、至少3次或至少5次。根據(jù)優(yōu)選實施方案,所述收集步驟在單一收集階段中至少收集lxl06個總有核細(xì)胞/每公斤體重的人;在一個或多個收集階段中至少收集2xl()S個總有核細(xì)胞/每公斤體重的人;在一個或多個收集階段中,至少收集3><106個總有核細(xì)胞/每公斤體重的人;或在一個或多個收集階段中,至少收集5xl(^個總有核細(xì)胞/每公斤體重的人。根據(jù)優(yōu)選實施方案,所述血液分離方法在所述收集步驟中至少進(jìn)行l(wèi)小時;在所述收集步驟中至少進(jìn)行2小時;在所述收集步驟中至少進(jìn)行3小時;在所述收集步驟中至少進(jìn)行4小時;根據(jù)另一實施方案,所述血液分離方法將其他的細(xì)胞釋放到所述人體的外周血中。所述其他的細(xì)胞可選自干細(xì)胞、祖細(xì)胞和終末分化細(xì)胞。根據(jù)另一實施方案,所述保存步驟在實質(zhì)細(xì)胞分裂(substantialcelldivisions)之前將在收集步驟中收集的細(xì)胞進(jìn)行保存。根據(jù)另一實施方案,所述保存步驟還可包括將干細(xì)胞置于多個單獨容器中進(jìn)行保存的步驟。所述處理步驟還可包括分離出一富集或失去了干細(xì)胞表面抗原的細(xì)胞群的步驟。所述干細(xì)胞表面抗原可以選自CD34、KDR、CD45和CD133。根據(jù)另一實施方案,所述處理步驟還可包括分離出一富集或失去了組細(xì)胞表面抗原的細(xì)胞群的步驟。所述祖細(xì)胞表面抗原可以選自CD45、Lin、Muc-18、CK19、Nestin和KDR。根據(jù)另一實施方案,所述處理步驟還可包括分離出富集一或多種終末分化細(xì)胞表面抗原的細(xì)胞群的步驟。所述一或多種終末分化細(xì)胞表面抗原可以選自CD-4、CD-8、Flkl、肌球蛋白、骨特異性堿性磷酸酶、骨釣素、骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體、CD38、CD44、Thy-l和脂肪細(xì)胞脂質(zhì)結(jié)合蛋白。根據(jù)另一實施方案,所述處理步驟還可包括在一個干細(xì)胞群或至少一個非干細(xì)胞群中分析一種細(xì)胞的至少一種特性的步驟。所述至少一種特性可以是細(xì)胞的DNA或RNA序列,也可以是所述細(xì)胞的蛋白質(zhì)組(proteome)。根據(jù)另一實施方案,所述處理步驟也可包括用一種試劑處理所述一個干細(xì)胞群或至少一個非干細(xì)胞群,來增強(qiáng)所述細(xì)胞群的保存性、存活率或治療能力。所述處理步驟可以包括用核酸轉(zhuǎn)化所述一個干細(xì)胞群或至少一個非干細(xì)胞群。13根據(jù)另一實施方案,所述保藏步驟還可包括在保存到干細(xì)胞庫之前,從所收集的細(xì)胞群中確定出與個體相關(guān)聯(lián)的至少一個區(qū)別特性,以在需要使用時提供可靠鑒定的手段,以將所收集的干細(xì)胞匹配于所述個體。所述區(qū)別特性可以是所述一個干細(xì)胞群或至少一個非干細(xì)胞群中細(xì)胞的DNA或RNA序列,或是蛋白質(zhì)組。所述確定步驟還可包括對每個細(xì)胞群提供一個代表區(qū)別特性信息的標(biāo)記。所述標(biāo)記可包括標(biāo)簽、條形碼、磁條以及微芯片中的至少一種,或可嵌入所保存的細(xì)胞群。根據(jù)另一實施方案,所述保藏步驟還可包括冷凍保藏(cry叩reservation)所述至少一個干細(xì)胞群和至少一個非干細(xì)胞群。所述至少一個干細(xì)胞群和至少一個非干細(xì)胞群可以分別冷凍保藏在單獨的容器中或冷凍保藏在同一容器中。根據(jù)另一實施方案,所述方法可進(jìn)一步包括如下步驟(f)通過自體轉(zhuǎn)移將所述干細(xì)胞給予所述人。這個方法可用來治療白細(xì)胞減少癥患者。此外,所述自體轉(zhuǎn)移可以不需要HLA分型而進(jìn)行。根據(jù)另一優(yōu)選實施方案,本發(fā)明提供了一種方法,該方法表型性表征作為不同的干細(xì)胞群和祖細(xì)胞群的動員的(mobilized)外周造血干細(xì)胞的成為定型線性(committedlinear)特定組細(xì)胞的能力。根據(jù)另一優(yōu)選實施方案,本發(fā)明提供在需要時治療患者的組合物和方法,包括給予受試者干細(xì)胞、祖細(xì)胞和任選的功能性細(xì)胞的自體混合物。例如,本發(fā)明可用于增強(qiáng)造血祖細(xì)胞的效力,以治療癌癥。圖l是一個流程圖,根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案示意性地表示本發(fā)明的方法。圖2是一個流程圖,根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案示意性地表示干細(xì)胞的收集方法。圖3是一個流程圖,根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案示意性地表示干細(xì)月包的處理。圖4是一個流程圖,示意性地表示優(yōu)選實施方案的獲取、收集、處理方法。圖5是一個流程圖,根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案示意性地表示干細(xì)胞的收集方法。圖6是一個流程圖,根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案示意性地表示干細(xì)胞的冷凍保藏方法。圖7是一個流程圖,根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案示意性地表示自體干細(xì)力包重輸注方法。優(yōu)選實施方案的詳細(xì)說明本說明書為了示例性的說明本發(fā)明的普遍原理,而不應(yīng)在某種意義上限制本發(fā)明。本發(fā)明的范圍最好通過所附的權(quán)利要求進(jìn)行確定。本發(fā)明已經(jīng)在這里提到的各種實施方案和附圖。本領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的教導(dǎo),對所述實施方案和附圖進(jìn)行改變或改進(jìn),沒有偏離本發(fā)明的保護(hù)范圍和精神。為了促進(jìn)對本發(fā)明所述實施方案的理解,所提到的優(yōu)選實施方案和專門術(shù)語都用相同的描述。此處所使用術(shù)語的目的僅僅是描述一個特殊的實施方案,并不打算限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。由于這個愿意,單數(shù)形式"一"、"一個"和"所述"包括復(fù)數(shù)形式,除非本文中另有明確要求。例如,提到"一種成分"包括多種成分,也包括一種單一成分;提到"一種治療劑,,代表一或多種治療劑和/或藥物學(xué)上的制劑及已知文獻(xiàn)中所提到的等同物,等等。此外,為便于討論,也使用了代詞"他,,??梢岳斫?他"這個詞,包括"他"和/或"她"。用自體外周血干細(xì)胞進(jìn)行造血重建可用于治療各種疾病和紊亂例如障礙性貧血、惡性肺瘤、免疫和自身免疫性缺陷、紊亂及功能失調(diào)和神經(jīng)系統(tǒng)疾病,如帕金森氏癥、肌萎縮側(cè)索硬化癥(肌萎縮側(cè)索硬化,也;f皮稱為"盧伽雷氏癥,,)和其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病。然而外周血一般不能包括許多干細(xì)胞。令人驚訝的是,使用本發(fā)明所述方法,外周血可以成為成體干細(xì)胞的一個特別豐富的來源。用自體外周血干細(xì)胞進(jìn)行造血重建可能會發(fā)生或沒有發(fā)生骨髓的消融。射頻消融是通過化療、電離輻射或化療與電離輻射的結(jié)合部分或完全破壞了細(xì)胞系統(tǒng)。這種消融,也可以是由于在核爆炸產(chǎn)生的電離輻射中暴露后引起的。雖然造血系統(tǒng)的消融是最常見的,但也可能15細(xì)胞消融,如通過高劑量的環(huán)磷酰胺進(jìn)行免疫凈化。其他細(xì)胞消融的方法包括,例如,用鉍-213-標(biāo)記的抗T細(xì)胞受體抗體進(jìn)行選擇性T細(xì)胞消融。在造血系統(tǒng)中,在一種消融的哺乳動物中,多能干細(xì)胞被認(rèn)為是能夠產(chǎn)生所有的血細(xì)胞系。哺乳動物的血細(xì)胞包括不同的活性范圍。血細(xì)胞分成不同的細(xì)胞系包括淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞和紅細(xì)胞。淋巴細(xì)胞系,其中包括B細(xì)胞和T細(xì)胞,用于生產(chǎn)的抗體、調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫系統(tǒng)、檢測在血液中的外援試劑、檢測異源的細(xì)胞等。在骨髓細(xì)胞系,其中包括單核細(xì)胞、粒細(xì)胞、巨核細(xì)胞以及其他細(xì)胞,檢測血液中外源物質(zhì)的存在、防止腫瘤細(xì)胞、清理血液中外源物質(zhì)、產(chǎn)生血小板等。在紅細(xì)胞系,提供了紅血細(xì)胞,作為氧的攜帶著。應(yīng)該理解"造血干細(xì)胞"或"造血多能干細(xì)胞,,和"從造血系統(tǒng)收集的干細(xì)胞,,是有區(qū)別的。所述"造血干細(xì)胞"或"造血多能干細(xì)胞,,是一種干細(xì)胞,通過分化和增殖,可以產(chǎn)生造血系統(tǒng)的各種細(xì)胞系。造血干細(xì)胞(HSC)是干細(xì)胞和早期前體細(xì)胞,可以產(chǎn)生所有血細(xì)胞類型,包括骨髓細(xì)胞(單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、紅細(xì)胞、巨核細(xì)胞/血小板和一些樹突狀細(xì)胞)和淋巴細(xì)胞系(T細(xì)胞、B細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞和一些樹突狀細(xì)胞)。造血多能干細(xì)胞不一定是收集自造血系統(tǒng)。例如,造血干細(xì)胞可收集到腸、脾、腎或卵巢組織,而不是造血系統(tǒng)。反過來說,"從造血系統(tǒng)收集的干細(xì)胞",例如通過本發(fā)明所述血液凈化系統(tǒng)所收集的"外周造血干細(xì)胞"或"外周血干細(xì)胞,,,可能成為身體內(nèi)所有組織類型的干細(xì)胞。也就是說,本發(fā)明所述從造血系統(tǒng)收集的干細(xì)胞可以是任何干細(xì)胞,例如神經(jīng)干細(xì)胞、脂肪組織的干細(xì)胞、肝臟干細(xì)胞、肌肉干細(xì)胞或造血干細(xì)胞等。因此,根據(jù)本發(fā)明所述干細(xì)胞收集的方法,可以產(chǎn)生哺乳動物身體的任何細(xì)胞系,例如,神經(jīng)干細(xì)胞、脂肪組織的干細(xì)胞、肝臟干細(xì)胞、肌肉干細(xì)胞或造血干細(xì)胞等。本發(fā)明的文中所描述的,術(shù)語"供體(donor)"或"個體"是指干細(xì)胞收集自一個人或動物。干細(xì)胞將來可用于自體移植治療同樣的供體或個體。術(shù)語"供體"或"個體"是指所有的動物,尤其是脊推動物,其中可收集外周血的動物。例如這些脊推動物是哺乳類動物,其中包括人、具有商業(yè)價值和研究價值的牲畜,如馬、牛、羊、鼠、兔、豬等。例如,這種哺乳動物是人,例如嬰兒、兒童或成人。為了便于討論本專利申請,我們使用了人(定義為一個個體、一個患者或供體)作為一個非限制性的例子,代表例如一種動物。根據(jù)優(yōu)選實施方案,所述個體是一個人。本發(fā)明的一個重要方面是涉及將所述干細(xì)胞能夠應(yīng)用于個體,包括如下步驟當(dāng)所述個體沒有立即察覺的健康狀況需要用自己收集的干細(xì)胞進(jìn)行治療時,主動從所述個體收集干細(xì)胞;從所述個體收集干細(xì)胞;收集的同時,標(biāo)記所收集的干細(xì)胞僅應(yīng)用于所述個體;在容器中保存所收集的干細(xì)胞;當(dāng)所述個體需要時,取出保存的干細(xì)胞。在一個優(yōu)選實施方案中,所述個體是人。因此,本發(fā)明的一個重要方面涉及將所述干細(xì)胞能夠應(yīng)用于人體,包括如下步驟當(dāng)所述人體沒有立即察覺的健康狀況需要用自己收集的干細(xì)胞進(jìn)行治療時,主動從所述人體收集干細(xì)胞;從所述人體收集干細(xì)胞;收集的同時,標(biāo)記所收集的干細(xì)胞僅應(yīng)用于所述人體;在容器中保存所收集的干細(xì)胞;當(dāng)所述人體需要時,取出保存的干細(xì)胞。優(yōu)選的,所述個體或人體是在非疾病或病前狀態(tài)下的。應(yīng)該指出的是,術(shù)語"病前"狀態(tài)(相對于"病后"狀態(tài))在本文中涵蓋了絕對性術(shù)語"健康"、"沒有疾病,,(相對于"不健康/患病")和表示疾病方法中某個階段的相對性術(shù)語(比"病后"狀態(tài)"更健康"或"疾病更少,,的狀態(tài))。由于"病前"可以被定義為被診斷到某種病前的一段時間,所述個體可以基于絕對性的術(shù)語處于健康狀態(tài)或者可能已經(jīng)患病,只是這種疾病還沒有表現(xiàn)出來、尚未確診或尚未發(fā)現(xiàn)。即使在后一種情況,對于這樣一個"病前"狀態(tài),可能這種疾病并非如此廣泛,例如,它已經(jīng)侵蝕了所收集的細(xì)胞;或即使所收集的細(xì)胞病變,它們可能侵襲性更小或者處于發(fā)展早期的較健康的階段,或細(xì)胞仍然保留一些對抗同種疾病和/或其他疾病的必要功能。因此,術(shù)語"健康"的細(xì)胞涵蓋了絕對性術(shù)語,即細(xì)胞是健康的,和相對性術(shù)語,即所收集的細(xì)胞(在個體患病前)比目前患者(在"病后"階段)體內(nèi)存在的細(xì)胞更健康。17具體來說,"病前,,狀態(tài)可以指事先診斷或知曉特定的目標(biāo)疾病、或疾病或個體的分類(統(tǒng)稱為"特定的疾病,,),可以在預(yù)期所述人體可能會在未來患有某種特定的疾病時,在某個適當(dāng)?shù)臅r機(jī)收集所述干細(xì)胞。例如,鑒于家庭的健康史、遺傳史和/或譜圖,個體被認(rèn)為可能會有在成年時期,一定程度上與某種特定的疾病相關(guān)(例如,某些特定的癌癥)。其他對"病前"狀態(tài)的定義也被釆用,且不會偏離本發(fā)明的范圍和精神。例如,可以建立某些標(biāo)準(zhǔn)判斷診斷前干細(xì)胞處于一個"病前"狀態(tài)。這種診斷前細(xì)胞類型的確定可以作為從"病前"狀態(tài)的個體中收集干細(xì)胞之前的一個可選的篩選步驟。所述病前狀態(tài)標(biāo)準(zhǔn)可以在收集步驟前包括下列考慮如(a)特定的病前;(b)在所述個體和/或健康專家實際的知曉,所述個體患有某種特定的或一般的疾病之前;(c)確定和/或診斷出一或多種類別的疾病之前;(d)在所述個體患有某種確定的疾病相關(guān)的一或多種參數(shù)前,例如在一定的年齡,與某些特定的身體條件和/或癥狀,與某些特定的疾病,與某些事先治療史和/或預(yù)防性治療等相關(guān);(e)有否所述個體具有一或多種已確定的統(tǒng)計數(shù)據(jù)和/或統(tǒng)計學(xué)模型或譜圖(例如,統(tǒng)計意義上不太可能獲得某些疾病);和(f)基于目前的醫(yī)學(xué)實踐,所述個體是否處在一定可接受的健康狀況下。本發(fā)明提供了一種使用個人的自身外周血干細(xì)胞作為個人未來的醫(yī)療用途的選擇性醫(yī)療保險模式。具體地說,本發(fā)明提供了一種方法,所述個體可以選擇將他或她自己的干細(xì)胞進(jìn)行收集、處理和保存,而他或她是處于健康狀態(tài),為未來他或她的健康需要。本發(fā)明還體現(xiàn)在非疾病狀態(tài)下收集、處理、保存和分配的成人(包括兒童)外周造血干細(xì)胞的方法。所收集的干細(xì)胞將包含足夠劑量,作為個人今后的醫(yī)學(xué)治療中立即所需的一或多次移植中使用。結(jié)合本發(fā)明所述步驟,所述干細(xì)胞是在所述個體處于疾病狀態(tài)前的早幾年進(jìn)行收集的,其中干細(xì)胞被存入干細(xì)胞庫,在未來用于某種預(yù)期的特定的疾病。供體可能是在醫(yī)療檢查時,確認(rèn)他處于某種相關(guān)的特定疾病的"病前,,狀態(tài)。在干細(xì)胞收集的同時,所述個體可以凈皮i貪斷出某種疾病,或不同于特定疾病的某一或幾種疾病,在目前的醫(yī)18療條件下,所診斷的疾病可以接受干細(xì)胞收集和/或特定疾病。換句話說,所述干細(xì)胞可在所述個體處于一個階段時進(jìn)行收集,實際上可能患有或被診斷出的健康狀況沒有類似于需要干細(xì)胞移植進(jìn)行治療的疾病。參照圖1,本發(fā)明的步驟10結(jié)合一個本發(fā)明的實施方案,大致包括以下步驟(1)在所述個體處于"病前"階段(12)時,收集健康的干細(xì)胞。所謂"病前"是指所述個體是健康的、或所述個體在發(fā)生、表現(xiàn)或者被診斷患有任何或某一特定疾病之前,所述特定疾病是眾所周知的影響干細(xì)胞的質(zhì)量的,或所述個體被認(rèn)為處在某種健康狀況下,使得其不能收集特定質(zhì)量的干細(xì)胞。(2)病前狀態(tài)的細(xì)胞被保藏(preserve)和貯存(store)在干細(xì)胞庫(14),例如,通過冷凍,保存多年,例如500年或更少。優(yōu)選的是,病前狀態(tài)的細(xì)胞在整個個體的一生中,都被保存和保存在干細(xì)胞庫中,在此之后,細(xì)胞可能被丟棄或用于異體移植或其他用途。病前狀態(tài)的可能予以保留,并保存在干細(xì)胞庫,直到所述個體需要一個造血干細(xì)胞移植。因此,根據(jù)優(yōu)選實施方案,病前狀態(tài)的細(xì)胞被保存和保存在干細(xì)胞庫中至少在0至約100年、約1至約100年、約5至約80年、約5至約50年、約10至約30年、約10至約20年、約15至約30年,等等。(3)如果所述個體在發(fā)生、發(fā)現(xiàn)或診斷出疾病("病后"狀態(tài))時,其被移植上述以前保存的病前狀態(tài)的細(xì)胞(16)。術(shù)語"病后"是指個體處于發(fā)生、發(fā)展、顯現(xiàn)、已顯現(xiàn)、;故診斷患有疾病,或該疾病可被檢測或已被檢測的時期或之后。優(yōu)選的,所述疾病是癌癥或可以在個體通過造血干細(xì)胞移植后進(jìn)行治療的其他疾病。根據(jù)另一優(yōu)選實施方案,提供了一個方法,從癌前個體中收集自體成體干細(xì)胞,包括使用血液分離方法,從癌前個體的外周血中收集成體干細(xì)胞;在收集的同時,標(biāo)記所收集的細(xì)胞僅應(yīng)用于所述個體;并保存所收集的細(xì)胞,保持細(xì)胞完整性。由于此處使用的術(shù)語"癌前"是指個體被診斷患有癌癥需要治療之前的時期,因此,所述個體可能是處于健康的一個絕對期或可能已經(jīng)患有這種疾病,但只是它本身沒有被診斷或檢測出來。同樣,術(shù)語"癌后"是指個體被診斷患有癌癥需要治療之后的時期。本發(fā)明的方法中的各個階段,將在下文更詳細(xì)地討論。干細(xì)胞收集方法作為本發(fā)明的一個方面,干細(xì)胞收集方法是針對所述個人的一段時期和健康狀況進(jìn)行收集的。根據(jù)優(yōu)選實施方案,收集方法中出現(xiàn)在個人正處于非疾病或病前狀態(tài)。干細(xì)胞可從處于病前階段的人中收集,所述人診斷出的健康狀況沒有需要對干細(xì)胞收集后用于治療的相關(guān)疾病。干細(xì)胞主要是在長骨的內(nèi)部(腿、臀部、胸骨等),并包括"骨髓"。這些干細(xì)胞有可能離開骨髓并分布在血液中。收集干細(xì)胞的物理步驟可能包括已知的文獻(xiàn)中的這些步驟。在CD34+細(xì)胞中,干細(xì)胞約為總有核細(xì)胞的0.1-1.0%。根據(jù)另一優(yōu)選實施方案,提供了一個方法,在個體供體處于非疾病狀態(tài)時,收集足夠的造血干細(xì)胞用量、處理所收集的干細(xì)胞、冷凍保藏所收集的干細(xì)胞作為未來給予所供體的醫(yī)療需要。在另一個實施方案中,本發(fā)明所收集的干細(xì)胞和祖細(xì)胞來自非疾病或病前階段的成人或兒童的外周血,通過血液分離方法獲得、優(yōu)化處理所收集的干細(xì)胞的數(shù)量和質(zhì)量、冷凍保藏,并在需要時將其解凍,用于自體移植治療的目的。自體治療的目的是將收集自供體的細(xì)胞在今后重新注入供體體內(nèi)。根據(jù)另一優(yōu)選實施方案,干細(xì)胞可通過血液分離方法進(jìn)行收集,采用通常的分離手段。血液分離儀器看起來非常像一個透析機(jī),但不同之處在于它是一個離心機(jī),而透析機(jī)使用的是過濾技術(shù)。干細(xì)胞收集可供體自己的家里或在收集中心完成。血液是從一只胳膊進(jìn)入血液分離儀,干細(xì)胞在其中^皮分離和收集。剩余的全血又再次回到供體體內(nèi)。注冊護(hù)士(RN)在所述個體的兩個手臂均以同樣的方式放置針頭,作為一個常規(guī)血液收集。護(hù)士隨后操作分離儀,分離血液的組分(紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血漿)收集干細(xì)胞,并將剩余的全血重新輸入供體體內(nèi)。干細(xì)胞的收集方法約需要2-4小時,所述個體在放松的情況下和看電影時進(jìn)行。分離收集后不久,骨髓釋放更多的干細(xì)胞進(jìn)入血液,以取代所收集的干細(xì)胞。所收集干細(xì)胞的數(shù)量只占所述人的干細(xì)胞總數(shù)中非常小的一部分。在一個健康人中,干細(xì)胞能迅速增殖并迅速替代所收集的干細(xì)胞。因此,本發(fā)明的方法并不消耗體內(nèi)的干細(xì)胞。每年,許多數(shù)以十萬計的血液分離方法用于收集血小板、紅細(xì)胞、血漿和干細(xì)胞。它已被證明是安全有效的技術(shù)。根據(jù)一優(yōu)選實施方案,提供了一個方法,從病前狀態(tài)的人體收集自體的成體干細(xì)胞;使用血液分離方法,從病前狀態(tài)的人體的外周血中收集成體干細(xì)胞;在收集的同時,標(biāo)記所收集的干細(xì)胞僅應(yīng)用于所述人體;保存所收集的細(xì)胞,保持細(xì)胞完整性。所述個體可能是成人或非新生兒的兒童。因此,上述方法可能會進(jìn)一步包括收集成人或非新生兒的外周血中的造血干細(xì)胞,然后將確定劑量分?jǐn)?shù)的細(xì)胞進(jìn)行冷凍保藏,當(dāng)需要使用時,將所收集的干細(xì)胞解凍。所述收集可在任何人中進(jìn)行,包括成人或非新生兒的兒童。此外,收集步驟可能涉及一或多個收集步驟或時期。例如,收集步驟(例如,使用血液分離方法)可能會對每個人進(jìn)行至少2次、至少3次或至少5次。在每次收集步驟中,對每公斤體重的人,收集的總有核細(xì)胞是100萬(lx106)或以上、200萬或以上、300萬或以上、或500萬或以上。在血液分離方法中出現(xiàn)醫(yī)療不良反應(yīng)是罕見的,并可能包括嘴和手指的刺痛感。這種反應(yīng)通常是輕度的,但并不阻止干細(xì)胞收集。我們發(fā)現(xiàn),令人驚訝的是,由于分離方法的增加,一些所收集干細(xì)胞的增長速度大于線性。舉例來說,兩個小時分離方法中所收集的細(xì)胞數(shù)(干細(xì)胞、祖細(xì)胞或終末分化細(xì)胞)是一個小時分離方法中所收集的細(xì)胞數(shù)的兩倍以上。不限于一種理論,我們認(rèn)為通過使用本發(fā)明所述方法,在分離方法中導(dǎo)致釋放更多的細(xì)胞(干細(xì)胞、祖細(xì)胞或終末分化細(xì)胞)進(jìn)入外周血。因此,使用本發(fā)明所述分離方法中的任何一種方法可能是至少1個小時、至少2個小時、至少3個小時、至少4個小時。收集干細(xì)胞(26)后,將收集袋密封,然后運(yùn)到實驗室進(jìn)行處理、檢測和保存。參見圖2。干細(xì)胞可能通過已知的方法進(jìn)行運(yùn)輸。例如,可用傳統(tǒng)的血液保存容器進(jìn)行運(yùn)輸,例如熱穩(wěn)定保存容器可通過明確的方法用于運(yùn)輸。在這些實施方案中,容器中的溫度在很長的一段時21間內(nèi)基本保持恒定。根據(jù)從供體所收集的干細(xì)胞的不同情況和數(shù)量和質(zhì)量,優(yōu)選的應(yīng)在供體處于"成人"或"成熟"時期(術(shù)語"成人"作為本文是指,包括成人和非新生兒,除非根據(jù)上下文理解,在本文中采取了不同的含義)和/或在某一個最低體重時,收集供體的干細(xì)胞。例如,在干細(xì)胞的收集時,根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案,個體的體重在10至200公斤的范圍內(nèi),或該范圍內(nèi)的任何范圍,例如20至40公斤。此外,可以確定所述個體在某一個年齡范圍之內(nèi),根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案,個體的年齡在2-80歲,或任何范圍內(nèi),例如9至18歲,或者12至16歲,或該范圍內(nèi)的任何年齡范圍,或通過統(tǒng)計學(xué)進(jìn)行確定。某些法律規(guī)定也可能禁止和/或限制在適當(dāng)?shù)哪挲g和/或重量,對所述個體進(jìn)行干細(xì)胞收集。在本發(fā)明的另一個實施方案中,一個個體可以選擇在多個階段(28)進(jìn)行干細(xì)胞收集,以增加所保存的干細(xì)胞,供今后使用。參見圖2。例如,供體可以選擇在不同的年齡和/或重量收集干細(xì)胞。可以在每次收集方法中,收集不同單位的干細(xì)胞,并酌情根據(jù)年齡和/或重量進(jìn)行收集。一般來說,隨著年齡和體重的增加,可以在每次單一的收集方法中,收集更多的干細(xì)胞。此外,他可以選擇在病前狀態(tài)或病中狀態(tài)(例如,此處是指病前狀態(tài)之后的時期)時,收集造血干細(xì)胞。另外,他可能選擇定期或在病前狀態(tài)的某個特定時期進(jìn)行干細(xì)胞收集,而不考慮其體重和/或年齡,及其健康條件。干細(xì)胞增效劑圖2結(jié)合本發(fā)明的一個實施方案,示意性的說明干細(xì)胞收集方法(20)。由于收集前所給予的細(xì)胞生長因子(22),例如,粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF),外周血中存在的干細(xì)胞的數(shù)量可能隨之增加。在供體的骨髓或外周血中注射細(xì)胞生長因子,尚未發(fā)現(xiàn)任何持久的不良影響。副作用也是不常見的,但包括長骨、胸骨、骨盆可能出現(xiàn)疼痛及輕度頭痛、輕度惡心和短暫的體溫升高。生長因子是在收集外周造血干細(xì)胞的1-6天前給予的。給予G-SCF的1-6天之后,通過血液分離儀(24)收集外周血干細(xì)胞。在一個優(yōu)選實施方案,提供了一個方法,通過給予干細(xì)胞增效劑22增加了外周血中干細(xì)胞的數(shù)量。干細(xì)胞增效劑的功能是增加供體體內(nèi)的干細(xì)胞的數(shù)量或質(zhì)量。所述增效劑包括,但不僅限于粒細(xì)胞集落刺激因子、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞刺激因子、地塞米松、CXCR4受體抑制劑、白介素-1(IL-1)、白介素誦3(IL-3)、白介素-8(IL-8)、PIXY-321(粒細(xì)胞集落刺激因子/白介素-3的融合蛋白)、巨噬細(xì)胞炎癥因子、干細(xì)胞因子、細(xì)胞因子及生長相關(guān)的致癌基因,單一試劑及其組合物。在一個優(yōu)選實施方案中,提供了一個方法,通過給予病前個體粒細(xì)胞集落刺激因子,增加外周血中的造血干細(xì)胞。根據(jù)一個優(yōu)選實施方案,所述粒細(xì)胞集落刺激因子在1-6天的療程中,被給予病前的個體,結(jié)束后進(jìn)行個體的外周血血液分離方法。優(yōu)選的,粒細(xì)胞集落刺激因子在2-6天的療程中,被分兩次給予病前的個體。例如,粒細(xì)胞集落刺激因子可在第1天和第3天,或第1天、第3天和第5天,或第1天、第2天和第5天給予供體。更優(yōu)選的是,粒細(xì)胞集落刺激因子在一個3天的療程中,在兩個連續(xù)的天,分兩次給予供體。因而,根據(jù)優(yōu)選實施方案,粒細(xì)胞集落刺激因子在第1天和第2天分別給予供體,并在第3天進(jìn)行血液分離方法。參見,例如,圖4和圖5。此外,根據(jù)優(yōu)選實施方案,低劑量的粒細(xì)胞集落刺激因子被給予所述個體。因此,所述個體接受1劑量的粒細(xì)胞集落刺激因子約1(ig/kg/天至8嗎/kg/天。更優(yōu)選的是,所述個體接受1劑量的粒細(xì)胞集落刺激因子約2至7pg/kg/天或等值。更優(yōu)選的是,所述個體接受1劑量的粒細(xì)胞集落刺激因子約4至6pg/kg/天或等值。作為皮下注射,粒細(xì)胞集落刺激因子的劑量可從約50嗎到約800嗎,優(yōu)選的是從約100pg到約600嗎,更優(yōu)選的是從約250嗎到500pg,最優(yōu)選的是從約300pg到約500ng。根據(jù)另一優(yōu)選實施方案,CXCR4受體的激動劑或抑制劑可作為一種干細(xì)胞增效劑。已^皮發(fā)現(xiàn)可增加外周血中干細(xì)胞的數(shù)量的CXCR4的抑制劑的例子包括,但不僅限于AMD3勵、ALX40-4C、T22、T134、T140和TAK-779。參見,美國專利號No.7,169,750,其全部內(nèi)容納入本文。這些干細(xì)胞增效劑可在收集前給予所述人體。例如,所述增效劑在收集步驟前至少1天、至少3天或至少1個星期之前給予所述個體。優(yōu)選的是,CXCR4抑制劑在所述個體進(jìn)行血液分離方法之前的2至6天之內(nèi)給予所述個體。例如,CXCR4抑制劑可以在第1天和第3天,或在第1天、第3天和第5天,或在笫1天、第2天和第5天給予所述個體。更優(yōu)選的是,所述CXCR4抑制劑在三天的療程中,在兩個連續(xù)的天給予所述個體。因此,根據(jù)最優(yōu)選實施方案,CXCR4抑制劑實在笫1天和第2天分別給予所述病前個體,并在第3天進(jìn)4亍血液分離方法??梢愿鶕?jù)不同個體確定不同的給藥途徑,在自然條件下處理所述個體,并且判斷治療者的情況。由于這些因素,CXCR4抑制劑的合適的劑量范圍不同,但總的來說,這些化合物的給藥范圍約0.1貼/kg至5mg/kg體重;優(yōu)選的是,約為l貼/kg至300貼/kg體重;更優(yōu)選的是10貼/kg至100貼/kg體重。對于一個典型的70公斤的個人,因此,劑量范圍是從約0.7^g到350mg;優(yōu)選的是約700jxg至21mg;更優(yōu)選的是約700pg至7mg。當(dāng)采用口服和皮膚注射時劑量可能更高,例如,靜脈給藥。干細(xì)胞處理在本發(fā)明的一些實施方案中,收集步驟之后,干細(xì)胞的處理方法根據(jù)已知的文獻(xiàn)進(jìn)行(例如,參見Lasky,L.C.andWarkentin,P.I.;MarrowandStemCellProcessingforTransplantation;AmericanAssociationofBloodBanks(2002))。在本發(fā)明的一個實施方案中,參見附圖3,處理步驟(30)可包括以下步驟準(zhǔn)備容器(例如試管)和標(biāo)簽(32),抽樣(sample)和/或測試所收集的材料(33),離心(34),將所收集的材料從收集容器轉(zhuǎn)移到保存容器(37),添加保護(hù)劑(38)等。在一些實施方案中,進(jìn)行處理方法后,一些處理后的干細(xì)胞可用于進(jìn)一步的測試(39)。細(xì)胞也可以被處理,最好是在保存步驟前進(jìn)行。處理步驟可能涉及,例如,提高或降低某些細(xì)胞特定的細(xì)胞表面標(biāo)志。任何細(xì)胞表面標(biāo)志,包括本說明書所描述的細(xì)胞表面標(biāo)志可作為標(biāo)準(zhǔn)的提高或降4氐。此外,處理步驟可能涉及分析所述一個干細(xì)胞群或至少一個非干細(xì)胞群的至少一個特性。所述特性可能是DNA或RNA序列。例如,基因組DNA或RNA可凈皮部分或全部測序"全測)。另外,也可以針對細(xì)24胞中特定區(qū)域的DNA或RNA進(jìn)行測序。例如,從細(xì)胞或細(xì)胞群中提取核酸。通過擴(kuò)增方法,用擴(kuò)增探針對特定區(qū)域的核酸進(jìn)行擴(kuò)增。所述擴(kuò)增方法可能是,例如聚合酶鏈反應(yīng)或LCR。擴(kuò)增后的產(chǎn)物(擴(kuò)增產(chǎn)物)可進(jìn)行測序。此外,可利用基因芯片、雜交或其他技術(shù)進(jìn)行DNA和RNA分析。本發(fā)明的特點在于本發(fā)明不要求任何組織的類型,因為所收集的干細(xì)胞將被用于自體移植。然而,特異性的組織類型可用于樣品標(biāo)識或使用這些干細(xì)胞作為異體移植使用。這種類型的信息可包括基因型或表現(xiàn)型的信息。表現(xiàn)型的信息可包括任何可見的或可〗軒量的特性,無論在宏觀或系統(tǒng)水平或顯微鏡下,細(xì)胞或分子水平?;蛐托畔⒖赡艽砟硞€個人的特異性遺傳組成,包括個體的基因組或與疾病相關(guān)基因的一或更多變異或突變的遺傳組成。作為遺傳信息的一個實施方案是,供體的遺傳"指紋"和人類白細(xì)胞抗原(HLA)的類型。在本發(fā)明的一些實施方案中,當(dāng)確定移植劑量后,將所述干細(xì)胞分別保存入適當(dāng)?shù)娜萜鲀?nèi)。在一個優(yōu)選實施方案中,根據(jù)供體的體重和年齡,在單一的收集步驟中,所收集的細(xì)胞可能會等于或大于2xl()W個有核細(xì)胞,或至少在109或108,或107或106,或105個有核細(xì)胞。分別保存這些細(xì)胞,最優(yōu)選的是將足夠一次移植的細(xì)胞數(shù)量(2xl09個有核細(xì)胞)保存在一個冷凍貯存袋或冷凍貯存管中,其中細(xì)胞的數(shù)量適合一次微移植(補(bǔ)充造血干細(xì)胞的移植),將1><108個有核細(xì)胞20等分,分別保存在適當(dāng)?shù)娜萜髦?冷凍貯存袋或冷凍貯存管)。一般來說,每次收集方法中,至少收集l個單位,并且按照本發(fā)明的1個實施方案,在每次收集方法中,對每公斤體重的人收集大于106個有核細(xì)胞。所述方法包括一個"組合保存(unitizedstorage)"的特定方法,使得個體能夠得到足夠數(shù)量的細(xì)胞供自體使用,當(dāng)需要對所保存的細(xì)胞進(jìn)行解凍時(進(jìn)一步的細(xì)節(jié)將下文中討論)。這可能包括處理所收集的干細(xì)胞(36),對有核細(xì)胞進(jìn)行優(yōu)化,以確保足夠數(shù)量的細(xì)胞進(jìn)行有針對性的疾病治療,同時又不會浪費(例如,針對疾病的劑量)。容錯冗余計算機(jī)系統(tǒng)將被用于數(shù)據(jù)處理,維護(hù)與個體相關(guān)的記錄數(shù)據(jù),并確保迅速有效地提取所保存的干細(xì)胞。25所述處理步驟可以包括在保存到干細(xì)胞庫之前,優(yōu)化單元數(shù)和各單元中干細(xì)胞數(shù)中的至少一個,并考慮將這些干細(xì)胞應(yīng)用于所述疾病。在某些情況下,每個單元包括106個有核細(xì)胞每公斤人體重。此外,每個單元可以包括疾病治療所需要的有核細(xì)胞計量的一部分。此處并沒有限制保存在一個單元中細(xì)胞的數(shù)量,使得每個單元可能包含相同或不同劑量的細(xì)胞。在另一個方面,通過檢測蛋白質(zhì)組所確定的特性(所述細(xì)胞的完整的蛋白質(zhì)組成)。蛋白質(zhì)組可以使用常規(guī)檢測方法進(jìn)行檢測,其中包括,自動蛋白質(zhì)組分析儀或一、二或多向凝膠電泳。在另一個方面,所述特性通過一或多個抗體與細(xì)胞或細(xì)胞群的蛋白相接觸進(jìn)行檢測。所述抗體實—驗可以包括夾心法、免疫層神斤(試紙)法,western雜交等。所述處理步驟也可以涉及用一種試劑處理所述一個干細(xì)胞群或所述至少一個非干細(xì)胞群,來增強(qiáng)所述細(xì)胞群的保存、增殖和治療能力(即分子重編程(reprogramming)方法)。所述試劑可以是核酸,在這種情況下,所述處理步驟可能涉及改變細(xì)胞的DNA或RNA。據(jù)了解,所述轉(zhuǎn)化可能會是暫時性的或永久性的。暫時性轉(zhuǎn)化包括將所述核酸引入細(xì)胞,使細(xì)胞表達(dá)核酸和產(chǎn)生產(chǎn)物。例如RNA或蛋白質(zhì),可能會影響細(xì)胞的功能。據(jù)了解,在大多數(shù)細(xì)胞中,所轉(zhuǎn)化的DNA最終會失去,因而短暫性的轉(zhuǎn)化會限制其時間。永久性轉(zhuǎn)化是使核酸整合到宿主細(xì)胞的基因組中,并在隨后的細(xì)胞分裂中成為基因組的一部分。所述試劑也可能是一種蛋白(配體、抗體、類似物和模仿物)。本發(fā)明的一個優(yōu)點是所收集的細(xì)胞不需要基因配型,因為所述細(xì)胞用于自體移植。由于是自體移植,移植物抗宿主或宿主抗移植物的排斥反應(yīng)并不存在。檢測步驟此外,所述處理步驟可能涉及一個檢測步驟,在保存到干細(xì)胞庫之前,對所收集的細(xì)胞鑒定其中至少一種特定的性質(zhì),從而提供了一種手段,確定在使用時將所收集的干細(xì)胞匹配于所收集個人使用。所述特定性質(zhì)可能是姓名、出生日期、社會保險號碼等。在一個更優(yōu)選實施方案中,所述特定性質(zhì)是一個生物學(xué)特性,例如所述人體的DNA或RNA序列或蛋白質(zhì)組??梢哉f,所述DNA或RNA或蛋白質(zhì)組不需要是完整的。例如,對所迷DNA的高特異性區(qū)域進(jìn)行短的延伸是足以識別一個人的。同時也了解到,所述特定性質(zhì)不需要100%的確定一個人。所述特定性質(zhì)是用來協(xié)助鑒定,雖然有可能,但不一定是唯一的身份識別手段。所述特定性質(zhì)可以是,例如存在Y染色體。在另一實施方案中,所述檢測步驟還可包括提供了一種標(biāo)記,代表每個單元中所收集細(xì)胞的特定性質(zhì)。這些標(biāo)記可能是,例如標(biāo)簽、條形碼、磁條以及微芯片。這些標(biāo)記可嵌入保存細(xì)胞的樣本中。例如,所述標(biāo)記可嵌入在磁珠中與所保存的細(xì)胞相混合。作為另一個例子,所述標(biāo)記可以編碼到一個核酸,例如寡核苷酸,與所保存的細(xì)胞相混合。所述寡核苷酸可能包括一段已知序列,使其能夠很容易地擴(kuò)增、測序或兩者兼而有之。因此,所述標(biāo)記可以;故識別,例如,采取從所保存的細(xì)胞中選取少量的樣本進(jìn)行分析。在冷凍保藏的細(xì)胞中,可從冷凍細(xì)胞群中刮出少量的樣本進(jìn)行分析,而不需解凍所保存的細(xì)胞群。干細(xì)胞富集或分選在本發(fā)明的一個方面,通過本發(fā)明所述方法所收集的這些細(xì)胞可分為至少兩個亞群單獨凍存或共同保存(例如,在同一小瓶中)。所述至少兩個亞群的細(xì)l包可能是兩個干細(xì)l包亞群。然而,所述至少兩個亞群可能是(1)一個干細(xì)胞群或富集的干細(xì)胞群和(2)—個非干細(xì)胞群或缺少干細(xì)胞的細(xì)胞群。此外,也可能這兩個細(xì)胞亞群(例如,(1)和(2))可冷凍保存在一起。所述干細(xì)胞可按照與所述干細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞表面標(biāo)記進(jìn)行分類。由于這是本發(fā)明的一個用于富集干細(xì)胞的實施方案,使用標(biāo)記將細(xì)胞進(jìn)行分選而不需要僅在干細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)。并不只在干細(xì)胞中表達(dá)的細(xì)胞標(biāo)記,可用于富集所述干細(xì)胞。還應(yīng)該指出的是,分化細(xì)胞的標(biāo)記物,也是一種有益于本發(fā)明的方法,因為這些標(biāo)記物的使用,例如,有選擇性地去除分化細(xì)胞,從而在余下的細(xì)胞群中富集所述干細(xì)胞。細(xì)胞表面或其他方式的細(xì)胞標(biāo)記,可用于本發(fā)明所包括的任何步驟中,如下所述<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>胎肝激酶-1(Flkl)內(nèi)皮細(xì)胞能識別內(nèi)皮細(xì)月包3且細(xì)月包的細(xì)月包表面受體蛋白;細(xì)胞間接觸的標(biāo)記骨骨特異性堿性磷酸酶(BAP)成骨細(xì)胞在成骨細(xì)胞中表達(dá)的酶;其活性表示骨的形成骨髓和血液骨形成素蛋白受體(BMPR)間質(zhì)干細(xì)月包和祖細(xì)胞從間質(zhì)干細(xì)胞和祖細(xì)胞分化成為間質(zhì)細(xì)胞具有重要作用;BMPR可鑒定早期間質(zhì)細(xì)胞系(干細(xì)胞和祖細(xì)胞)CD34造血干細(xì)月包(HSC)、衛(wèi)星細(xì)月包、內(nèi)皮祖細(xì)胞骨髓細(xì)胞的細(xì)胞表面蛋白,可鑒定造血干細(xì)胞和內(nèi)皮祖細(xì)胞;CD34同樣可以鑒定肌肉衛(wèi)星細(xì)胞,一種肌肉干細(xì)胞CD34+、Scal+、Lin-譜圖間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)鑒定間充質(zhì)干細(xì)胞,其可分化為脂肪細(xì)胞、骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和肌細(xì)胞CD38不存在于造血干細(xì)胞,存在于白細(xì)胞(WBC)系鑒定白細(xì)胞系的細(xì)胞表面分子,經(jīng)過CD34+/CD38-篩選的細(xì)胞可以得到純化的造血干細(xì)胞群c-KitHSC,MSCBM細(xì)胞分型的細(xì)胞表面受體,能鑒別HSC和MSC;可以與胎牛血清相結(jié)合(FCS)提高ES細(xì)胞、HSCs、MSCs和造血祖細(xì)胞的增殖能力集落生成單位(CFU)HSC,MSC祖細(xì)胞集落生成單位實驗可用于檢測一個單一的干細(xì)力包或3且細(xì)力包生成一或多個細(xì)月包系,例如紅細(xì)月包(RBC)28<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>Thy-lHSC,MSC細(xì)胞表面蛋白;在HSC細(xì)胞中成陰性或很難檢測到CD14單核細(xì)胞單核細(xì)胞分化成為樹突狀細(xì)胞血小+反內(nèi)皮細(xì)胞粘附因子(PECAM誦1或CD31)嗜中性粒細(xì)胞,巨喧細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞粘附因子CD73淋巴細(xì)胞-淋巴成熟細(xì)月包才示i己脂肪細(xì)胞脂肪細(xì)胞脂質(zhì)結(jié)合蛋白(ALBP)脂肪細(xì)胞特異性定位于脂肪細(xì)胞的磷脂結(jié)合蛋白脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)子(FAT)脂肪細(xì)胞特異性定位于脂肪細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)分子脂肪細(xì)胞脂質(zhì)結(jié)合蛋白(ALBP)脂肪細(xì)胞特異性定位于脂肪細(xì)胞的磷脂結(jié)合蛋白肝B-l整合素肝細(xì)胞與細(xì)胞相互作用相關(guān)的重要的細(xì)胞粘附分子;在整個肝的發(fā)育方法中均有表達(dá)的細(xì)胞標(biāo)記神經(jīng)系統(tǒng)CD133神經(jīng)干細(xì)胞,HSC用于鑒定神經(jīng)干細(xì)胞的細(xì)胞表面蛋白,所述神經(jīng)干細(xì)胞可生成神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)星形"交質(zhì)細(xì)胞星形膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的特異性蛋白3004少突細(xì)胞未成熟、發(fā)展中的少突細(xì)胞的細(xì)胞表面標(biāo)記CD166對中經(jīng)細(xì)力包才示記神經(jīng)細(xì)胞標(biāo)記;激活的T-cells胰腺細(xì)胞角蛋白19(CK19)胰腺上皮細(xì)胞CK19鑒定特異性的胰腺上皮細(xì)胞是胰島細(xì)胞和導(dǎo)管上皮細(xì)胞的祖細(xì)胞Nestin胰腺祖細(xì)胞用于鑒定胰腺祖細(xì)胞系的結(jié)構(gòu)纖維蛋白多能干細(xì)胞堿性磷酸酶胚胎干細(xì)胞(ES)胚胎癌細(xì)胞(EQ堿性磷酸酶的高表達(dá)與未分化的多能干細(xì)胞相關(guān)(PSC)a-胎甲球蛋白(AFP)內(nèi)皮層伴隨原始內(nèi)皮層的發(fā)育而表達(dá)的蛋白;反映內(nèi)皮層分化為多能干細(xì)胞骨成形素蛋白-4中胚層在早期中胚層的形成和分化中表達(dá)的生長和分化因子Brachyury中胚層在中胚層形成的最早期階段的重要的轉(zhuǎn)錄因子;作為中胚層形成的最早的指示劑細(xì)胞串30(CD30)ES,EC特異性發(fā)現(xiàn)于PSC的細(xì)胞表面分子Cripto(TDGF-1)ES,心肌ES細(xì)胞、原始內(nèi)胚層和發(fā)展中的心肌所表達(dá)的生長因子的基因GATA隱4基因內(nèi)皮層ES分化成內(nèi)皮層時的表達(dá)量提高GCTM-2ES,EC特異性胞外-基質(zhì)根子的抗體,由未31<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>端粒酶ES,EC與永生細(xì)胞系相關(guān)的特異性酶;用于鑒定未分化的PSCsTRA-1-60ES,EC一種特異性胞外基質(zhì)分子的抗體,由未分化的PSCs合成TRA-1-81ES,EC一種特異性胞外基質(zhì)分子的抗體,由未分化的PSCs合成波形蛋白外胚層,神經(jīng)3且細(xì)"包和胰腺祖細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的中間纖維;原始外胚層形成中所特有的骨骼肌/心肌/平滑肌MyoD和Pax7成肌細(xì)胞肌細(xì)胞成肌細(xì)胞分化為成熟肌細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄因子肌漿蛋白和MR4骨肌細(xì)胞從肌肉干細(xì)胞分化為成肌細(xì)胞所需的第二轉(zhuǎn)錄因子CD36(FAT)心臟細(xì)胞標(biāo)記膜結(jié)合蛋白祖細(xì)胞標(biāo)記CD29與細(xì)胞-細(xì)胞粘附相關(guān)的早期抗原受體干細(xì)胞所表達(dá)的標(biāo)記可被用作對干細(xì)胞更準(zhǔn)確的進(jìn)行排序和分類。任何定性的手段,包括檢測標(biāo)記或?qū)?biāo)記排序,可在本實施方案中用于定性和/或鑒定細(xì)胞。例如,某些特定的細(xì)胞類型已知可表達(dá)某種模式的標(biāo)記,通過本文所收集的細(xì)胞可根據(jù)這些已知的模式進(jìn)行分選(sort)。下表提供了一些用于標(biāo)記物的鑒定模式或陣列,所述標(biāo)記物可能在某些細(xì)胞類型中表達(dá)。33細(xì)胞類型標(biāo)記物造血干細(xì)月包C34,CD45,CXCR4內(nèi)皮s且細(xì)月包CD34,CD73,CD133,CXCR4,KDR,抗誦MIgG極小胚胎狀細(xì)胞CVSEL)CD34,CD133,CXCR4,SSEA4,抗-MIgG間質(zhì)干細(xì)i包CD34,CD45,CD90,CD105,CD106,CD44干細(xì)胞的體外繁殖本實施方案的外周血干細(xì)胞表達(dá)多能標(biāo)記。響應(yīng)于適當(dāng)?shù)姆只盘?,干?xì)胞沿多個途徑分化,產(chǎn)生多個不同的表型。根據(jù)另一個優(yōu)選實施方案,干細(xì)胞可被誘導(dǎo),在體外分化成表達(dá)特異化組織細(xì)胞譜系(lineage)的至少一個特征的細(xì)l包。本實施方案的非新生或成體干細(xì)月包可被誘導(dǎo),部分或完全分化成具有包括但不限于內(nèi)分泌胰腺、外分泌胰腺、腦、肝、軟骨、骨、肌肉、心和腎的組織細(xì)胞特性的組織細(xì)胞??稍隗w外繁殖或分化由血液分離方法收集的干細(xì)胞或富集的細(xì)胞群??赏ㄟ^將細(xì)胞置于信號的影響下而分化干細(xì)胞,所述信號被設(shè)計為特異性誘導(dǎo)前述表型。使干細(xì)胞接收該信號的方法可包括但不限于用已知引起分化的基因轉(zhuǎn)染干細(xì)胞,和/或使干細(xì)胞暴露于分化劑。例如,干細(xì)胞可被穩(wěn)定或瞬時地遺傳修飾,以表達(dá)外源基因或抑制內(nèi)源基因的表達(dá)。以此方式,干細(xì)胞的分化可受到控制。作為另一個例子,可通過使用有利于在培養(yǎng)物中維持表型的介質(zhì)而誘導(dǎo)干細(xì)胞和其集落沿可預(yù)測的途徑分化。干細(xì)胞的繁殖可用任何已知方法實現(xiàn)。本發(fā)明的干細(xì)胞可繁殖于織培養(yǎng)基質(zhì);2)支^細(xì)胞生長和繁殖并抑制分化的成纖維飼養(yǎng)層;、或3)l和2的組合。在優(yōu)選實施方案中,用粘附性或增加細(xì)胞對基質(zhì)粘附的其他化合物或物質(zhì)(例如膠原、明膠或聚賴氨酸等)包被組織培養(yǎng)基質(zhì)。膠原包被的平板是最優(yōu)選的。當(dāng)使用成纖維飼養(yǎng)細(xì)胞時,優(yōu)34選單獨或組合使用小鼠或人成纖維細(xì)胞。優(yōu)選地處理飼養(yǎng)細(xì)胞以抑制(arrest)它們的生長,這可通過輻射來實現(xiàn),或用例如絲裂霉素C這樣的化學(xué)物質(zhì)處理來抑制它們的生長。最優(yōu)選地,用絲裂霉素C處理成纖維飼養(yǎng)細(xì)胞。在優(yōu)選實施方案中,成纖維祠養(yǎng)層的密度為每平方厘米約25,000人細(xì)胞和70,000小鼠細(xì)胞,或每平方厘米75,000至100,000小鼠細(xì)胞。優(yōu)選地,干細(xì)胞培養(yǎng)4至24天,優(yōu)選7至14天。優(yōu)選地,干細(xì)胞生長在成纖維飼養(yǎng)層上,例如絲裂霉素處理的MEF細(xì)胞,生長約4至14天,優(yōu)選7至10天。細(xì)胞治療在本發(fā)明的一個實施方案中,從受試者的外周血中收集干細(xì)胞,當(dāng)需要細(xì)胞治療時,在轉(zhuǎn)入或移植到個體身上。本發(fā)明中的干細(xì)胞可以從移植后具有大量干細(xì)胞并表現(xiàn)出長期活性的個體中進(jìn)一步分離和富集。本發(fā)明中的干細(xì)胞及含有干細(xì)胞的組分可以通過強(qiáng)化受傷組織來修復(fù)、治療、改善組織的狀態(tài)或功能(如缺陷)。本發(fā)明中的干細(xì)胞是重建或強(qiáng)化受傷組織的重要來源,可以成為一種新的有用的醫(yī)用干細(xì)胞。優(yōu)選的,干細(xì)l包可以用于組織工程和再生醫(yī)學(xué),以^f更修復(fù)那些因為發(fā)育缺陷、受傷、疾病或老化引起的損傷。干細(xì)胞為細(xì)胞分化成特異的細(xì)胞系或細(xì)胞型提供了一種獨特的系統(tǒng)。因此干細(xì)胞在細(xì)胞治療方面具有顯著的優(yōu)勢。另外,這種干細(xì)胞及其組分可以用來強(qiáng)化與受傷無關(guān)的軟組織。在沒有疾病或損傷的情況下,比如"平滑(smoothing)",也可以增加軟組織區(qū)域、開孔、凹陷或空隙等的容積。復(fù)合或者連續(xù)的使用干細(xì)胞也納入本發(fā)明的范圍。對于基于干細(xì)胞的治療,干細(xì)胞優(yōu)先取自同源或異源的人或動物。更優(yōu)選的為同源的人或動物。干細(xì)胞組分可以按照所述方法制備和分可以預(yù)先制備單核細(xì)胞懸液。該懸液中含有濃縮的干細(xì)胞以及生理可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。例如,將用于移入受體的干細(xì)胞制備成含有108到109細(xì)胞/毫升的懸液,懸液為滅菌的完全培養(yǎng)基,并在其中加入受體的血清,而不是原來的胎牛血清。干細(xì)胞也可以在無血清、35滅菌的溶液中,如冷凍的溶液。也可以^使用濃縮的細(xì)i包4諸液。進(jìn)而含有干細(xì)胞的溶液可以通過注射進(jìn)入受體的一個或多個組織中。濃縮或者富集的細(xì)胞可以被制成醫(yī)藥學(xué)或生理學(xué)可接受的配制劑或者含有生理學(xué)可接受的載體、賦形劑或者稀釋劑的混合物,并輸入到感興趣的有個體組織中,包括人或非人動物。含有干細(xì)胞的混合物可以通過將細(xì)胞重懸浮在合適的液體或者溶液中來制備,例如無菌生理鹽水或者其它的生理上可以接受的注射用的水狀液體。在這項技術(shù)中混合物所含各種成分的量可以由本領(lǐng)域的技術(shù)人員按照常規(guī)的方法來確定。干細(xì)胞或其組合物還可以被放置在吸收劑或者粘合材料上,例如膠原蛋白海綿狀基質(zhì),然后將含有干細(xì)胞的材料插入到目標(biāo)組織的內(nèi)部或者表面。另外,干細(xì)胞可以-故制備成用于皮下、靜脈、肌肉和胸骨注射的注射液。其它的制備模式包括但是不限于鼻內(nèi)、膜內(nèi)、皮內(nèi)、經(jīng)皮的、腸內(nèi)和舌下的給藥的藥劑制備模式。本發(fā)明的一個實施方式,將干細(xì)胞制備成通過內(nèi)窺鏡外科手術(shù)給藥的藥劑模式。為了進(jìn)行注射,各種成分溶解在無菌的溶液中或懸浮或重懸浮在醫(yī)藥學(xué)和生理學(xué)上可接受的水質(zhì)的或油質(zhì)的介質(zhì)中,這種介質(zhì)中可以包含防腐劑、穩(wěn)定劑、以及用于調(diào)節(jié)溶液或者懸浮液的離子強(qiáng)度與受體體液(例如血液)離子強(qiáng)度相同的原料成分。適合使用的賦形劑的例子包括但是不限于水,磷酸鹽緩沖液,pH7.4,0.15M的氯化鈉水溶液,葡萄糖,甘油,稀釋的乙醇和其他類似的混合物。穩(wěn)定劑的例子包括聚乙二醇,蛋白質(zhì),糖類,氨基酸,無機(jī)酸和有機(jī)酸,這些成分可以被單獨使用也可以被混合使用。在這項技術(shù)中,制備方法中所含各種成分的量取決于各自的基礎(chǔ),與技術(shù)人員所掌握的相同類型的應(yīng)用和適用癥所需要的量相適應(yīng)。與本發(fā)明一致,干細(xì)月包可以用于人體組織,包括上皮組織(例如皮膚,管腔等),肌肉組織(例如平滑肌),血液,腦部,和不同的組織器官例如那些和泌尿系統(tǒng)相關(guān)的系統(tǒng)(例如膀胱、尿道、輸尿管、腎臟等)根據(jù)另一優(yōu)選實施方式,提供了一種可以增強(qiáng)外周血干細(xì)胞植入的組分和方法。從一個對象的外周血收集的細(xì)胞通常是含有很多種類細(xì)胞的混合物。也就是說,是干細(xì)胞,部分分化細(xì)胞(例如祖細(xì)胞或者成纖維細(xì)胞)和功能細(xì)胞(例如終末分化細(xì)胞)的混合物。祖細(xì)胞的存在,以及部分可能存在的終末分化細(xì)胞,可能在縮短重建時間上具有顯著的優(yōu)勢,另外在注射后一段時間內(nèi)具有其他方面的生理優(yōu)勢。根據(jù)本文所述一般的治療方法,通過分離方法獲得的細(xì)胞混合物,可以轉(zhuǎn)入一對象中。例如像其他液體一樣通過靜脈導(dǎo)管注射入對象的血液中。另一方面,然而,可能會制備一些滿足某些對象治療需要的特異的細(xì)胞治療混合物。所述通過分離方法獲得的廣泛的細(xì)胞混合物可以纟皮表征、貯存并#:分成不同的細(xì)胞群。細(xì)胞標(biāo)記分子,例如干細(xì)胞標(biāo)記分子或者組織特異性標(biāo)記分子可以用來表征從外周血收集到的細(xì)胞群的表型。利用這些標(biāo)記分子,有可能實現(xiàn)根據(jù)細(xì)胞類型進(jìn)行分離和貯存。因此,混合的細(xì)胞凈皮轉(zhuǎn)換成細(xì)胞群,這些細(xì)胞群可以凈皮廣泛的分成兩部分干細(xì)胞部分和非干細(xì)胞部分。非干細(xì)l包成分會^皮進(jìn)一步分成祖細(xì)胞或者纖維細(xì)胞組分,和功能細(xì)胞或者完全分化細(xì)胞組分。一旦外周血細(xì)月包混合物^皮貯存,干細(xì)胞和非干細(xì)胞組分可以分別進(jìn)行冷凍保存。通過這種方式,可以建立一種從對象分離獲得的不同細(xì)胞群的貯存庫。另外,干細(xì)胞和非干細(xì)J包組分可以;故一起凍存,然后在使用前進(jìn)行分類并分離。通過這種方法所產(chǎn)生的細(xì)胞類群包括由胚胎層發(fā)育而來的任何一種細(xì)胞類型(例如內(nèi)胚層,中胚層以及外胚層)。這些細(xì)胞類型包括但是不限于外周血干細(xì)胞,造血祖細(xì)胞或者分化細(xì)胞,神經(jīng)祖細(xì)胞或者分化細(xì)胞,神經(jīng)膠質(zhì)祖細(xì)胞或者分化細(xì)胞,少突祖細(xì)胞或者分化細(xì)胞,皮膚祖細(xì)胞或者分化細(xì)胞,肝祖細(xì)胞或者分化細(xì)胞,肌肉祖細(xì)胞或者分化細(xì)胞,骨骼祖細(xì)胞或者分化細(xì)胞,間質(zhì)干細(xì)胞或者祖細(xì)胞,胰腺祖細(xì)胞或者分化的祖細(xì)胞,祖細(xì)胞或者分化的軟骨細(xì)胞,基質(zhì)祖細(xì)胞或者分化細(xì)胞,培養(yǎng)擴(kuò)增的干細(xì)胞或者祖細(xì)胞,培養(yǎng)分化的干細(xì)胞或者祖細(xì)胞或者他們自身的結(jié)合物。特別有趣的是造血細(xì)胞,可能包含任何一種有核的細(xì)胞,這些有核細(xì)胞可能屬于紅細(xì)胞、淋巴細(xì)胞或者粒細(xì)胞系,也可能屬于成肌細(xì)胞或者成纖維細(xì)胞。同樣有趣的是祖細(xì)胞,例如造血的、神經(jīng)的、基質(zhì)的、肌肉的(包括平滑肌)、肝37臟的、肺部的、胃與腸的和間質(zhì)細(xì)胞的祖細(xì)胞。同樣有趣的是分化細(xì)胞,例如造骨細(xì)胞、肝細(xì)胞、粒細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、肌細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、胰腺細(xì)胞或者它們的組合和混合物。干細(xì)胞和/或祖細(xì)胞的收集也可以擴(kuò)展為間接體內(nèi)(ex-vivo)方法。例如,有可能需要擴(kuò)增和繁殖干細(xì)胞、部分分化細(xì)胞群而獲得組織特異的祖細(xì)胞,或使干細(xì)胞或祖細(xì)胞分化成為全能細(xì)胞。已經(jīng)發(fā)明了很多種方法來富集這類細(xì)胞群,將美國專利No.5,486,359,美國專利No.5,753,506,和美國專利No.5,736,396的全部內(nèi)容納入此處供參考。任何已知的擴(kuò)增或者分化干細(xì)胞或者祖細(xì)胞的方法都可以4吏用。例如使用的方法包括用下列方式培養(yǎng)干細(xì)胞或祖細(xì)胞存在或不存在早期和晚期生長因子的復(fù)合物;存在或者不存在組織特異性的生長因子或者分化因子;存在或不存在血清;在靜止期,快速交換培養(yǎng)或者持續(xù)灌注培養(yǎng)(生物反應(yīng)器);存在或者不存在建立的細(xì)胞飼養(yǎng)層。為了實現(xiàn)最大程度的體外擴(kuò)增干細(xì)胞,必須實現(xiàn)如下列出的一般的培養(yǎng)條件(i)分化必須能夠可逆的抑制或者延遲,和(ii)自我更新要最大程度的延長。同樣的,隨著細(xì)胞的擴(kuò)增,為了將擴(kuò)增的細(xì)胞群轉(zhuǎn)化為成熟的功能細(xì)胞群或組織,提供一種誘導(dǎo)擴(kuò)增的細(xì)胞群進(jìn)行分化的方法就十分重要了不同類型的細(xì)胞群可以聯(lián)合、再聯(lián)合或者混合成可進(jìn)行適當(dāng)?shù)募?xì)胞治療的細(xì)胞混合物,以便用來治療某種疾病或者再生某種特異性的組織。聯(lián)合使用干細(xì)胞、組織特異性的祖細(xì)胞和任選的功能細(xì)胞被認(rèn)為可以增強(qiáng)干細(xì)胞的植入效率。因此,本發(fā)明提供的一個實施方式提供了一種關(guān)于使用自源干細(xì)胞、祖細(xì)胞和任選的功能細(xì)胞混合物來增強(qiáng)干細(xì)胞或者祖細(xì)胞植入的方法和產(chǎn)品。細(xì)胞治療產(chǎn)品可能包括由約10%-90%的外周血干細(xì)胞,約10%-80%的外周血干細(xì)胞,約10%-60%的外周血干細(xì)胞或者約10%-40%的外周血干細(xì)胞,由10%-90%非干細(xì)胞,約20%-90%的非干細(xì)胞、約40%-90%的非干細(xì)胞,約60%-90%的非干細(xì)胞。非干細(xì)胞成分可以由約5%-50%的功能細(xì)胞、約5%-40%功能細(xì)胞、約5%-30%功能細(xì)月包、約5%-20%功能細(xì)胞或者約5%-10%功能細(xì)胞組成。上面所描述的細(xì)胞治療產(chǎn)品的合適的例子是指用自源性的38PBSCs,造血祖細(xì)胞和任選的粒細(xì)胞或者其他的造血系統(tǒng)的功能細(xì)胞混合。另一個細(xì)胞治療產(chǎn)品的例子,這種細(xì)胞治療產(chǎn)品包括自源的PBSCs,心肌祖細(xì)胞和任選的心肌細(xì)胞的混合物。根據(jù)另一優(yōu)選實施方式,提供了一種治療患者的方法,這種方法需要患者自源的干細(xì)胞、祖細(xì)胞和任選的功能細(xì)胞的混合物。例如,本發(fā)明;故用來通過增強(qiáng)造血祖細(xì)胞的遷移效力來治療癌癥。利用x-射線或者烷基化合物治療癌癥會損傷骨髓的微環(huán)境,也會損傷造血干細(xì)胞。目前的治療方法是在患者骨髓受到損傷后給患者移植骨髓受損前從患者體內(nèi)收集并凍存的造血祖細(xì)胞。由于骨髓的微環(huán)境被破壞,所以只能等到基質(zhì)環(huán)境恢復(fù)后再移植造血祖細(xì)胞。這里所述成分和方法有利于恢復(fù)基質(zhì)微環(huán)境,因此可以增強(qiáng)遷移方法。干細(xì)胞庫本發(fā)明的另一個方面,提供了一個細(xì)胞庫,可以提供一種可供選擇的健康保健保險模式,可以有效地保護(hù)成員不受未來疾病的折磨。個人可以選擇在他或她健康的時候,將他的或者她的干細(xì)胞收集并保存起來,以備將來作為他或她的健康保健之用。收集并處理的干細(xì)胞"庫存"以備將來之用,干細(xì)胞可以貯存在干細(xì)胞庫或者存放處或者保存設(shè)備中或者任何可以將干細(xì)胞安全保存的地方。貯存設(shè)備可以按照以下方式設(shè)計,即即使發(fā)生突發(fā)事件,例如核襲擊,干細(xì)胞也可以被安全貯存。在一些實施方案中,貯存設(shè)備可以在地下,在洞穴中、在地窖中。在其它的一些實施方式中,貯存設(shè)備也可以設(shè)在山邊或者在外太空。貯存設(shè)備可以設(shè)在起屏蔽作用的物質(zhì),例如鉛盒內(nèi)。根據(jù)一優(yōu)選實施方式,提供了一種四步制作干細(xì)胞庫的方法。步驟A包含給人使用一種或者多種干細(xì)胞增效劑以增加這個人外周血中的干細(xì)胞含量。步驟B包括從上述人的外周血中收集至少一種干細(xì)胞群和至少一種非干細(xì)胞群的分離方法,這里所說的人是指具有不需要立刻使用收集的他自己干細(xì)胞進(jìn)行治療的健康狀況的人。步驟C包括保存至少一種干細(xì)胞群和至少一種非干細(xì)胞群作為保存的細(xì)胞群。步內(nèi)。這個方法的每個方面都將在下面^皮詳細(xì)闡述。a、組合貯存如在先技術(shù)所述,干細(xì)胞貯存的物理步驟包括使用冷凍保護(hù)劑(DMSO)來控制冷凍速度并貯存在液氮罐中。發(fā)明中干細(xì)胞貯存的方法接受組合貯存的理念,允許干細(xì)胞在地上或者地下多個地點貯存。這些地點可以選擇那些在發(fā)生自然事件例如火災(zāi)、地震或者其他的自然災(zāi)害和恐怖襲擊或戰(zhàn)爭發(fā)生等情況下都會安全的地方。另外,組合貯存有助于僅僅轉(zhuǎn)移和使用必要的干細(xì)胞數(shù)量單位進(jìn)行治療,因此會留下其他的干細(xì)胞作為未來之用。尤其是,組合貯存包括將收集的干細(xì)胞按照希望的、定義的或者給藥劑量分別貯存在貯存容器中(袋子,試管等)。到了使用的時候,mi^迅Wfj&《疋,尸乂''而關(guān)丁5w/i&^n!日'v務(wù)&日'v戮!盡頭5HM又及辦^"要欽量的干細(xì)胞。某些需要干細(xì)胞治療的疾病需要一系列反復(fù)的治療。通過提供組合貯存收集的干細(xì)胞,每次治療只復(fù)蘇需要劑量的干細(xì)胞,可以l呆i正完成整個治療方法。每個貯存容器貯存的單位干細(xì)胞的數(shù)量可以根據(jù)一般主流的干細(xì)胞療法和治療需要或者根據(jù)某些需要進(jìn)行干細(xì)胞治療的特殊疾病所需要的干細(xì)胞數(shù)而被預(yù)先確定。例如,根據(jù)健康條件,遺傳歷史或者供體的個人資料,在未來針對某些特殊的疾病可能需要或得益于干細(xì)胞治療。根據(jù)針對特殊的疾病,每種干細(xì)胞治療的數(shù)量單位可以被預(yù)先估計,以便于每個分離貯存器只是容納未來使用所需要的約的細(xì)胞量。每個貯存器中不需要含有未來用于治療所需要的全部細(xì)胞數(shù)量,收集到的所有的干細(xì)胞可以被再次分成精細(xì)的小組分而貯存在更小的容器中,這樣可以實現(xiàn)幾個干細(xì)胞貯存器貯存的干細(xì)胞數(shù)量就可以滿足特殊治療所需要的全部干細(xì)胞。本發(fā)明所提出的組合貯存多個劑量的概念只有通過本專利才有可能實現(xiàn)。也就是說本發(fā)明提出這樣一種概念,在病前的階段選擇收集和貯存自源外周血干細(xì)胞,以便獲得足夠質(zhì)量和數(shù)量的干細(xì)胞并組合貯存在分離的貯存器中,每個貯存器都要標(biāo)明貯存的干細(xì)胞的數(shù)量單位。一般認(rèn)為,一個合理的干細(xì)胞庫應(yīng)該至少含有20個貯存器或者單位劑量的干細(xì)胞用于未來進(jìn)行的利用干細(xì)胞治療某種疾病。在先技術(shù)的異源(例如臍帶)干細(xì)胞收集不只是不能提供足夠數(shù)量的干細(xì)胞,40而且以后也不能提供足夠質(zhì)量的干細(xì)胞。本發(fā)明的另一個方面是指每一個貯存容器(例如袋子或者試管)在貯存入干細(xì)胞庫前都要根據(jù)貯存的樣品的特性對樣品進(jìn)行明確的標(biāo)注。例如,DNA遺傳指紋和HLA類型可以:帔用來作為安全鑒定的枳j制,如可接受的方法是用微芯片、磁條或者條形碼標(biāo)簽技術(shù)。這個筌定步驟40可以包括在圖3的方法30中。在使用干細(xì)胞之前,從患者體內(nèi)提取的DNA樣本與標(biāo)簽上的DNA遺傳指紋鑒定結(jié)果進(jìn)行比對。這個方法可以明確地鑒定干細(xì)胞庫中貯存在干細(xì)胞是來源于某位患者的。這個技術(shù)的一個優(yōu)勢在于收集的細(xì)胞在體外進(jìn)行分裂之前就被貯存起來了。也就是說,貯存的細(xì)胞幾乎或者全部都是原代細(xì)胞。原代細(xì)胞的定義是在體外沒有經(jīng)過分裂的細(xì)胞。保藏可以包括將細(xì)胞分離在多個貯存容器中進(jìn)行貯存。多個貯存容器可以包含任何的細(xì)胞組合。例如,一個^存容器可以包含從一種分離方法分離獲得的細(xì)胞。另一方面,每個p&存器可以包含一種干細(xì)胞群或者一種非干細(xì)胞群,或者一種富含干細(xì)胞的細(xì)胞群或者一種富含非干細(xì)胞的細(xì)胞群。每種貯存容器中可以包含一種細(xì)胞群,這種細(xì)胞群可以是富含細(xì)胞表面抗原的也可以是刪除了細(xì)胞表面抗原的。可以被富集或者刪除細(xì)胞表面抗原包括本發(fā)明中的任何抗原,至少包括CD34、CD133和KDR。一個優(yōu)選實施方式,細(xì)胞表面抗原可以是一種用來區(qū)分干細(xì)胞和非干細(xì)胞的抗原。例如,這種抗原可能特異性的存在與非干細(xì)胞上??梢岳眉?xì)胞表面抗原來實現(xiàn)對干細(xì)胞的富集作用。另一方面,抗原如果是干細(xì)胞特異性的抗原,可以根據(jù)這種抗原來分選干細(xì)胞。在另一個實施方案中,抗原可以是原代細(xì)胞特異性表面抗原,或者是終末分化細(xì)胞特異性表面抗原。細(xì)胞保藏的一個優(yōu)選的方法是冷凍保藏,這包括將細(xì)胞保藏在約-196°。至約-80°(:的液氮中。在這個技術(shù)中,冷凍保藏的方法是本領(lǐng)域已知的。保藏的步驟包括在干細(xì)胞庫中貯存收集的干細(xì)胞。例如,保藏的方法包括對干細(xì)胞的處理,包括將干細(xì)胞組合貯存的多個分離的貯存器中。保藏的步驟還包括在將收集的干細(xì)胞貯存在干細(xì)胞庫之前要對41獨立的組織或者收集的干細(xì)胞的HLA型進(jìn)行鑒定。此外,保藏的步驟還包括在!3i存進(jìn)干細(xì)胞庫前對收集的干細(xì)胞進(jìn)行鑒定,至少尋找出一種和供體相關(guān)的特性,這樣以便與在使用時進(jìn)行干細(xì)胞與患者之間是否匹配的安全鑒定。HLA型鑒定步驟可以包括為每個貯存單位的干細(xì)胞標(biāo)注至少一種獨一無二的特性。例如,標(biāo)注至少可以用以下方式標(biāo)記、條形碼、磁性條、微芯片和核酸序列(下面會進(jìn)行更詳細(xì)的表述)用庫存的干細(xì)胞進(jìn)行移植-治療本發(fā)明所提供的方法可以處理各種健康問題,包括利用干細(xì)胞進(jìn)行疾病的治療。特別是,對于癌癥或者其它的一些疾病來說恢復(fù)患者造血干細(xì)胞的水平是十分有益的。例如許多癌癥(腫瘤)的治療需要在化療后利用干細(xì)胞補(bǔ)充體內(nèi)一種或者多種細(xì)胞系統(tǒng)。在化療后,最需要補(bǔ)充的一種系統(tǒng)就是造血干細(xì)胞系統(tǒng)。其它的一些疾病的治療也會得益于干細(xì)胞治療,這些疾病包括免疫疾病(包括癌癥和自身免疫疾病)和白細(xì)月包減少癥。如上所述,本發(fā)明所涉及的貯存細(xì)胞可以在一個人需要進(jìn)行自源轉(zhuǎn)移的時候進(jìn)行移植。例如,這種移植可以用于治療患者的白細(xì)胞減少癥。這一發(fā)明所提供的方法可以用來治療那些需要增強(qiáng)免疫系統(tǒng)功能的患者,同時,會出現(xiàn)患者由于細(xì)菌感染而中毒休克的現(xiàn)象。根據(jù)優(yōu)選實施方案,這里提供了一個治療人的方法,這個方法包括在這個人不需要立刻使用自己的干細(xì)胞進(jìn)行治療的階段時選擇收集其自身的干細(xì)胞。從人體內(nèi)收集干細(xì)胞,在收集的時候,由提供干細(xì)胞的人指定收集的干細(xì)胞的用途,在l&存處保藏干細(xì)胞;如果提供干細(xì)胞的人被診斷患了需要干細(xì)胞進(jìn)行治療的疾病后,就復(fù)蘇貯存的干細(xì)胞。貯存的細(xì)胞被復(fù)蘇后用于為患者治療。在這個方法中,可選擇的步驟包括考慮收集的干細(xì)胞被確定用于治療特定的一種或者一類疾病,在收集干細(xì)胞的時候,提供干細(xì)胞的人不能被診斷患有這種或者這類特定的疾病。收集的步驟可以包括收集足夠預(yù)期治療用的干細(xì)胞的數(shù)量。此外,這個方法還可以包括更多的步驟收集的干細(xì)胞在貯存在細(xì)胞庫之前要確定至少一種與供者相關(guān)的獨特特征,這樣在使用的時候可以提供一種鑒定收集的干細(xì)胞和患者本人是否匹配的安全鑒定的依據(jù)。在使用干細(xì)胞的時候,將從患者體內(nèi)獲得的樣本與貯存的干細(xì)胞的獨特性質(zhì)進(jìn)行比對,獲得確定的鑒定結(jié)果以便確定貯存的干細(xì)胞的確來自患者。在另一個實施方式中,提供了一種為人治療的方法,包括如下步驟人在不需要立刻使用自己的干細(xì)胞進(jìn)行治療的時候選擇收集他自己的干細(xì)胞;從這個人體內(nèi)收集干細(xì)胞;在這個人^L診斷患有需要自身干細(xì)胞進(jìn)行治療的時候用收集的干細(xì)胞對其進(jìn)行治療,用從患者自身收集的干細(xì)胞對患者進(jìn)行治療。經(jīng)歷過干細(xì)胞收集方法的患者可使用貯存的自身的干細(xì)胞對其自身進(jìn)行治療。傳統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)輸血方法(例如靜脈注射)可以用來將干細(xì)胞注入患者體內(nèi)。在注射了干細(xì)胞對骨髓進(jìn)行補(bǔ)充后可以為患者實施標(biāo)準(zhǔn)的化療程序。根據(jù)本發(fā)明,可以通過任何一種傳統(tǒng)的已知的注射方法將干細(xì)胞輸入到患者的體內(nèi)。留心觀察普通的傳統(tǒng)的操作來調(diào)控患者移植干細(xì)胞的方法。不論怎樣,申請者的方法可以減少由于免疫排斥,移植抗宿主疾病,移植期間和并發(fā)感染引起的潛在的并發(fā)癥的數(shù)量?;颊邚闹惺芤娴氖牵绻浦埠笤煅到y(tǒng)不能植入和重建的話,醫(yī)生可以迅速的發(fā)現(xiàn)排斥反應(yīng)并準(zhǔn)備第二次移植。本發(fā)明所提供的方法和細(xì)胞有許多潛在的用途。例如,可以將文庫中可以產(chǎn)生健康平滑心肌的細(xì)胞移植入慢性心臟病患者的體內(nèi)。另一方面,也可以直接為患者注射干細(xì)胞以便產(chǎn)生新的心肌細(xì)胞。對小鼠、臨床患者和其它動物的研究結(jié)果顯示,將骨髓干細(xì)胞移植入受損的心臟后,可以產(chǎn)生心月幾細(xì)J包并成功地^修復(fù)心臟組織。另一項關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)的研究結(jié)果表明,存在直接將分化的胚胎干細(xì)胞或成體干細(xì)胞直接轉(zhuǎn)化成心肌細(xì)胞的可能性。患了I型糖尿病的患者,患者體內(nèi)可以正常產(chǎn)生胰島素的胰腺細(xì)胞被患者自身的免疫系統(tǒng)所破壞。產(chǎn)生胰島素的細(xì)胞,最后用于^用移植技術(shù)治療糖尿病的可能性:'在另一個實施方式中,成年人或者非新生兒童的外周血干細(xì)胞的43劑量不足以用于治療上述的疾病和腫瘤,仍然可以為這些患者移入干細(xì)胞作為免疫系統(tǒng)的增強(qiáng)劑,在移入干細(xì)胞之前,這些患者的免疫系統(tǒng)由于疾病、感染、壓力、年齡或者其它因素被抑制。在這個方法中,可選擇的步驟可以包括考慮收集的干細(xì)胞用于治療某種特定疾病或者某種特定類型疾病。要在人患病之前的階段進(jìn)行干細(xì)胞的收集步驟,至少在這個人還沒有被診斷出患有打算利用干細(xì)胞治療的某種特定疾病或者某種特定類型的疾病之前的階段收集干細(xì)胞。另外,收集步驟中收集的干細(xì)胞的數(shù)量要足夠滿足進(jìn)行預(yù)期的治療需要。在一個優(yōu)先的實施方式中,收集干細(xì)胞的條件如下(l)人需要是成年人或者非新生兒或者(2)至少符合體重或年齡一條標(biāo)準(zhǔn)或者(3)至少符合下面的一個條件體重在10-200Kg,年齡在2-80歲。在另一個優(yōu)選實施方式中,收集方法要實現(xiàn)多次收集,一個人至少是再收集一次與上次不同的年齡和體重時的干細(xì)胞。在另一個實施方式中,收集步驟包括,每次單一的收集方法所收集的干細(xì)胞的數(shù)量要達(dá)到1()S個/Kg體重。因此,這個發(fā)明提供的一個實施方式當(dāng)非新生兒或者成年人處在患病前階段,非新生兒或者成年人的干細(xì)胞被收集并貯存起來(例如冷凍保存),收集干細(xì)胞的方法可以利用血漿分離置換法實現(xiàn)。在收集干細(xì)胞之前的1-6天需要注射生長因子,例如G-CSF。根據(jù)優(yōu)選實施方式對非新生兒或者成年人連續(xù)兩天使用細(xì)胞生長因子,第三天利用血漿分離置換法分離外周血干細(xì)胞。為了貯存收集的干細(xì)胞已備將來之用,可以應(yīng)用冷凍技術(shù)和冷凍劑。后來(例如幾年后)一旦保存了干細(xì)胞的人患了癌癥、免疫疾病、感染疾病、心臟病、螺旋線病,胰腺病,肝病或者骨髓病或者遇到由于治療或暴露的條件所導(dǎo)致免疫抑制作用或者感染,消除自身的免疫細(xì)胞的情況,保存的骨髓或者干細(xì)胞可以一皮注射到患者體內(nèi)與疾病抗?fàn)???梢赃x擇靜脈注射,動脈內(nèi)、器官內(nèi)注射,骨髓內(nèi)注射,脂肪內(nèi)注射,肌肉內(nèi)注射的方式注射干細(xì)胞產(chǎn)物,或者通過髓內(nèi)輸注(骨髓),選擇性動脈輸注、心包輸注、硬膜外和硬膜下注射。類似地,治療程序,決定一個人治療方法的標(biāo)準(zhǔn)和調(diào)整注射細(xì)胞的劑量可以通過標(biāo)準(zhǔn)的移植程序來實施。44當(dāng)然,收集的干細(xì)胞的數(shù)量應(yīng)該足夠用來進(jìn)行主要的移植方法。如果有必要的話,應(yīng)該多次收集干細(xì)胞,收集次數(shù)中間的間隔要合適(可以是一周或是更長的時間)。然而,隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展,在為患者注射前,貯存的干細(xì)胞可以體外擴(kuò)增并繁殖或者分化成治療所需要的細(xì)胞類型。如果人體缺乏某種亞細(xì)胞群,在未來,可以從貯存或擴(kuò)增的細(xì)胞中篩選亞細(xì)胞群并注射入人體。另外,從收集或者擴(kuò)增的細(xì)胞中篩選需要的細(xì)胞群并將其注入到人體之前可以在體外使細(xì)胞和人的患病細(xì)胞或者組織共培養(yǎng)或者用化學(xué)試劑或細(xì)胞因子對細(xì)胞進(jìn)行刺激。在這個實施方式中,選擇干細(xì)胞和骨髓細(xì)胞的原因在于他們具有全能型,他們可用于癌癥和免疫疾病的治療并且現(xiàn)在具有收集、處理、保存、擴(kuò)增這類細(xì)胞的技術(shù)。本發(fā)明涉及將他們用于這種治療。下面進(jìn)一步描述了所述實施方式的細(xì)節(jié)。將庫存干細(xì)胞應(yīng)用于癌癥治療只是一個例子,但并不僅限于癌癥治療。a、干細(xì)胞治療癌癥的發(fā)展引起正常的組織轉(zhuǎn)變成惡性的組織包含了"非常復(fù)雜的方法"。事實上,癌變的復(fù)雜性發(fā)生在許多等級的每一步上。即使在遺傳學(xué)的水平上,在形成癌癥的方法中,腫瘤細(xì)胞積累了多個基因的突變。其他水平包括RNA,蛋白質(zhì),細(xì)胞內(nèi)信號通路,細(xì)J包間相互作用,組織,器官等水平的機(jī)制變化也會引發(fā)癌癥。既然,在一個等級水平發(fā)生的事件可以反饋到其他水平并更改機(jī)制,那么癌癥的發(fā)展就是一個動態(tài)的方法,這個方法比幾個部分單一的病變更加復(fù)雜。一個重要的考慮就是一些癌癥的誘因或者與干細(xì)胞相關(guān)。因此,對于沒有被收集干細(xì)胞的癌癥患者在進(jìn)行免疫抑制治療時,醫(yī)生也會使用自體移植術(shù)在化療或者放療之前,將患者的骨髓取出,冷凍,貯存,在化療或者放療后再將干細(xì)胞重新輸回患者體內(nèi)。收集的干細(xì)胞產(chǎn)品(SC產(chǎn)品),這個概念包括真實的干細(xì)胞和定向祖細(xì)胞(例如CD34+細(xì)胞也被包括在其中),無論來自骨髓,臍帶血或者從第三方供體收集的外周血可以被貯存以備未來之用。這些干細(xì)胞最顯著的功能之一就是在免疫抑制程序,例如化療之后用于移45植以便增強(qiáng)造血液的恢復(fù)能力。在現(xiàn)有技術(shù)中,這種用于治療癌癥患者的注射程序存在一個顯著的缺點。如果SC產(chǎn)品是從癌癥患者體內(nèi)獲得的,在SC產(chǎn)品中會包含一定數(shù)量的腫瘤細(xì)胞。隨后,當(dāng)sc產(chǎn)品被輸入癌癥患者的體內(nèi),腫瘤細(xì)胞也被再次引入,增加或再次引入胂瘤細(xì)胞進(jìn)入患者血液循環(huán)的機(jī)會。雖然還沒有發(fā)現(xiàn)循環(huán)的腫瘤細(xì)胞與特殊的腫瘤復(fù)發(fā)存在直接的關(guān)系,但是例如在、淋巴瘤的病例中,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)再輸入的細(xì)月包可以定位在復(fù)發(fā)的疾病上。在腺癌的病例中,據(jù)估計對于一個體重為50Kg的成年人來說,在單一的干細(xì)胞移植方法中約有150,000個腫瘤細(xì)胞^皮重新輸回體內(nèi)。另外,研究顯示在SC產(chǎn)品中含有的腫瘤細(xì)胞是可變的并且具有體外克隆增殖的能力,因此,這也表示這些腫瘤細(xì)胞可能與參與注射后腫瘤復(fù)發(fā)的方法。據(jù)知卵巢癌細(xì)胞,睪丸癌細(xì)胞,胸腺癌細(xì)胞,多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞,非霍奇金淋巴瘤細(xì)胞,慢性髓細(xì)胞性白細(xì)胞,慢性淋巴白血病細(xì)胞,急性骨髓白血病細(xì)胞,和嚴(yán)重的淋巴白血病細(xì)胞都具有轉(zhuǎn)移性。腫瘤細(xì)胞對sc產(chǎn)品污染程度對于每個患者都不相同,有記錄的變化在11%-78%之間。因此再次輸入循環(huán)系統(tǒng)的腫瘤細(xì)胞可能會屏蔽掉化療及隨后干細(xì)胞移植帶來的好處。現(xiàn)在用來從不希望被腫瘤細(xì)胞污染的產(chǎn)品中分離出有價值的干細(xì)胞的方法主要依靠陽性或者陰性的篩選技術(shù)。陽性篩選分析鑒定那些表達(dá)CD34抗原為標(biāo)記分子的干細(xì)胞和祖細(xì)胞,并將他們從;陂腫瘤細(xì)胞污染的血液或者骨髓產(chǎn)品分離出來。這種方法需要非常密集的勞動,降低可用的干細(xì)胞的數(shù)量,并且需要使用特殊的設(shè)備,因此,增加了患者治療的費用,嚴(yán)重的限制了SC產(chǎn)品在移植程序中的使用。另一個用來除去血液中的癌細(xì)胞的陽性篩選方法是由Gudemann等提出用過濾技術(shù),使用可以特異性除去白細(xì)胞的濾i(這種濾膜的工作;理是可以吸附帶電荷的顆粒)去除自體同源血液中的泌尿系的腫瘤細(xì)月包。Gudemannetal.,IntraoperativeAutotransfusionInUrologicCancerSurgeryByUsingMembraneFilters,XXIIIrdCongressoftheISBT,abstractsinVoxSang.,67(S2),22.)的全部內(nèi)容納入此發(fā)明中作為參考。Gudemann等人使用的濾膜技術(shù)的一個缺點就是這種濾膜不能選擇性的截留胂瘤細(xì)胞。血液白細(xì)胞,包括干細(xì)胞在通過濾膜是也會被截留。因此不能將胂瘤細(xì)胞從干細(xì)胞中分離。Miller提供的標(biāo)準(zhǔn)的輸血過濾器也不能有效的除去回輸血液中的肺瘤細(xì)胞。Milleretal.,Autologoustransfusion:analternativetotransfusionwithbankedbloodduringsurgeryforcancer,B.J.Surg.1991,Vol.78,June,713-715的全部內(nèi)容納入此處參考。在另一方面,為了提高干細(xì)胞的治療效率,再將從癌癥患者體內(nèi)提取的干細(xì)胞回輸回患者體內(nèi)之前,科學(xué)家們將這些干細(xì)胞在體外進(jìn)行培養(yǎng)修飾以期使這些干細(xì)跑"程序化",以便增強(qiáng)他們抗擊癌癥的能力。然而,這些研究并沒有成功,因為程序化后的干細(xì)胞并沒有比天然的干細(xì)胞表現(xiàn)出更好的治療效果。b.本發(fā)明發(fā)展的一種解決辦法本發(fā)明的目標(biāo)是提高干細(xì)胞輸血的好處,本發(fā)明的最終結(jié)果可以提高存活率,與此同時,提供一種價格低,有臨床療效的方法,即用干細(xì)胞產(chǎn)品實現(xiàn)治療癌癥患者。為了實現(xiàn)本發(fā)明所述目標(biāo),申請人基于最初的假設(shè)創(chuàng)建了本發(fā)明的方法,這些假設(shè)與最終成型的實施方式相關(guān)或不相關(guān)。由于不希望本發(fā)明被提出的假設(shè)束縛,所以申請者做了如下假設(shè)。每個假設(shè)可能與其它假設(shè)相關(guān)也可能與其它假設(shè)不相關(guān)。本發(fā)明實施的效力^f艮明顯不受假設(shè)的正確性束縛。第一假設(shè),申請人認(rèn)為許多癌癥在診斷出后在本質(zhì)上是全身性的,而且廣泛分布于患者全身。也就是說,申請者認(rèn)為當(dāng)患者被診斷為患了多種類型的癌癥時,例如乳腺癌,癌細(xì)胞已經(jīng)存在于那些被發(fā)現(xiàn)有病灶以外的其它部位了。事實上,癌癥已經(jīng)擴(kuò)散或者遷移到了患者的全身,例如,癌細(xì)胞可以由患者的血液循環(huán)系統(tǒng)或者淋巴系統(tǒng)運(yùn)載。這個假設(shè)說明,收集的患者體內(nèi)的干細(xì)胞可以被癌細(xì)胞所污染,將污染的干細(xì)胞移植回患者的體內(nèi)會引起肺瘤的復(fù)發(fā)。第二種假設(shè),申請者認(rèn)為在某些情況下,人體會常規(guī)的產(chǎn)生一些惡性或者前惡性細(xì)胞。然而,人不會患癌癥是因為人體內(nèi)正常的細(xì)胞可以對個體進(jìn)行"自調(diào)控",即在惡性細(xì)胞或者前惡性細(xì)胞開始不受控制擴(kuò)增最終引起癌癥之前對這些細(xì)胞進(jìn)行調(diào)控和消除。這個方法被定義為免疫監(jiān)視。另外,申請者推斷,在一些癌癥患者體內(nèi),他們的健康細(xì)胞發(fā)生病變的原因是這些病變的細(xì)胞由于老化、外界環(huán)境侵襲(如暴露在射線,致癌原或者壓力等)、其它未知的原因已經(jīng)部分或者完全喪失了"自我調(diào)控,,的能力。因此,將這些從患者體內(nèi)收集的病變細(xì)胞(或者有缺陷的細(xì)胞)輸回患者的體內(nèi)可能是沒有任何幫助的。第三假設(shè),申請者認(rèn)為某些疾病被引起的原因是健康的細(xì)胞由于老化、外界環(huán)境侵襲(如暴露在射線,致癌原或者壓力等)、其它未知的原因而喪失了一種或者更多種的功能。這些功能的喪失可以導(dǎo)致細(xì)胞自我調(diào)控的失敗,或者不能正常行使個體的功能。例如,細(xì)胞喪失了產(chǎn)生人體執(zhí)行正常的生理功能所需要的酶或者化學(xué)物質(zhì)的能力。因此這些物質(zhì)的缺失會導(dǎo)致老年癡呆癥或者帕金森綜合癥。綜上所述,根據(jù)上述假設(shè),即使在本專利中申請人只用癌癥作為本專利發(fā)明方法進(jìn)行治療的一種疾病的例子,也應(yīng)該明確其它的疾病(那些由于時間的流逝,細(xì)胞部分或者全部喪失了一種或者多種能力所引起的疾病,或者系統(tǒng)性疾病,或者免疫疾病,例如癌癥)用本專利發(fā)明的方法進(jìn)行治療也會產(chǎn)生相似的益處。這里用癌癥作為例子只是為了方便闡述和討論。利用本發(fā)明所提供的方法,可以替代那些經(jīng)歷過抑制免疫的治療,例如化療,放療,或者那些暴露在某些因素下,從而使自身的免疫細(xì)胞受傷害的患者體內(nèi)的免疫細(xì)胞。第四假設(shè),申請者認(rèn)為之所以從癌癥患者體內(nèi)收集的干細(xì)胞程序化后的治療效果與從相同患者體內(nèi)獲得未程序化的干細(xì)胞相比并沒有任何優(yōu)勢,是因為這些程序化和非程序化的細(xì)胞本身已經(jīng)受到了破壞或者發(fā)生了病變。也就是說,不論是程序化的還是非程序化的細(xì)胞均已經(jīng)喪失了抗擊癌癥的能力(或者喪失了同正常細(xì)胞相比最佳的抗擊癌癥的能力),并且,程序化的方法不能使病變的細(xì)胞貯存必要的抗擊癌癥的正常功能。另外,這種假設(shè)可以普及到任何一種疾病中,不只是癌癥。在這些疾病中,健康的細(xì)胞比那些病變的細(xì)胞(即那些可能部分或者全部對程序化不應(yīng)答的細(xì)胞)更易于程序化。c.癌癥治療為了便于討論,以下利用乳腺癌作為癌癥的例子,但是所說的癌癥并不限于乳腺癌。在高加索女人中,乳腺癌是繼肺癌后第二種高發(fā)的癌癥。乳腺癌很難治療。患者在經(jīng)歷了化療,放射性治療或者免疫抑制治療后通常會喪失免疫細(xì)胞。在本發(fā)明中,患者的免疫細(xì)胞會由他們在生病前所收集的sc補(bǔ)充。另外,化療和放療會毀壞快速分裂的細(xì)胞,這些細(xì)胞包括存在于骨髓、胃腸道(GI)和毛嚢中的細(xì)胞。因此,對患者進(jìn)行化學(xué)或者放療要有一劑量限制。因此,有本發(fā)明的技術(shù)對干細(xì)胞進(jìn)行補(bǔ)充,可以使用更高、更有效的劑量對患者進(jìn)行化療或者放療以便更有效的消除癌細(xì)胞。(i)SC收集、處理、保存和輸入的方法干細(xì)胞收集、處理、冷凍保存、貯存融化、篩選、干細(xì)胞定量、篩選干細(xì)胞的亞細(xì)胞群都可以使用常規(guī)的技術(shù)手段。目前,利用分離收集方法收集外周血干細(xì)胞是一種常規(guī)的收集干細(xì)胞的方法。造血干細(xì)胞可以從人類的組織中分離獲得,例如外周血、骨髓、脂肪組織。單核細(xì)胞,例如外周血單核細(xì)胞(PBMCs)可以利用,例如密度梯度離心技術(shù)進(jìn)一步收集。收集的量應(yīng)該是足夠的。如果有必要,可以考慮多次收集以便保證獲得足夠量的干細(xì)胞以便進(jìn)行移植,一般干細(xì)胞的量為十億個細(xì)胞。干細(xì)胞可以用冷凍保存的方法保存,然后融化使用,用于標(biāo)準(zhǔn)的移植程序。本發(fā)明的一具體實施方式,為了減少細(xì)胞分離方法中的損失,所有收集的干細(xì)胞都可以冷凍保藏,凍融后可以用于造血重建。但是如果需要可以實施細(xì)胞分離程序。本發(fā)明的一具體實施方式,通過特異的細(xì)胞表面標(biāo)記分子可以將原代細(xì)胞群進(jìn)一步分為單獨的細(xì)胞亞群。本發(fā)明中的方法還包括將細(xì)胞亞群分離的方法如與流式細(xì)胞相偶聯(lián)的高速細(xì)胞分離。(ii)輸注和移才直干細(xì)胞的注射可以采用常規(guī)的標(biāo)準(zhǔn)注射方法(如靜脈注射)。對骨髓重建而言,可以在注射干細(xì)胞后輔助以標(biāo)準(zhǔn)的化學(xué)治療方案。(iii)確認(rèn)移植物開始起作用為了監(jiān)測接受移植的患者的進(jìn)展,需要觀察一些常規(guī)的做法。然而,申請者的方法應(yīng)當(dāng)降低由免疫排斥、移植抗宿主疾病、移植期間49和并發(fā)感染引起的潛在的并發(fā)癥數(shù)量?;颊邚闹惺芤娴氖?,如果移植后造血系統(tǒng)不能植入和重建的話,醫(yī)生可以迅速的發(fā)現(xiàn)排斥反應(yīng)并準(zhǔn)備第二次移植。為了實現(xiàn)基于干細(xì)胞的治療,還需要克服很多難題。通過研究,我們提供解決這些難題的方法,如下所列1.為了達(dá)到移植的目的,干細(xì)胞必須滿足以下的要求(a)用于移植的干細(xì)胞數(shù)量必須足夠。在先技術(shù)中為獲得足夠數(shù)量的干細(xì)胞,需要細(xì)胞在體外進(jìn)行大量的增殖。而體外的傳代和增殖方法中可能導(dǎo)致細(xì)胞的腫瘤轉(zhuǎn)化或者全能性的喪失。本發(fā)明的方法中通過省去體外增殖的步驟從而解決該問題。用本發(fā)明新穎的方法,即收集大量的原代和未擴(kuò)增的細(xì)胞,并將這些細(xì)胞用于移植。所述原代細(xì)胞是指從對象體內(nèi)收集的未進(jìn)行明顯分裂的細(xì)胞。本發(fā)明的一優(yōu)選實施方式,收集到的原代細(xì)胞未進(jìn)行任何體外的增殖。而將收集的細(xì)胞迅速保存或經(jīng)處理后迅速保存是可以實現(xiàn)該目的的。換句話說,細(xì)胞未經(jīng)過體外的培養(yǎng)。例如,采用本發(fā)明的方法,經(jīng)數(shù)年或多次的收集幾乎可以得到無限量的細(xì)胞。而事實上,干細(xì)胞的數(shù)量僅受限于患者的意愿,即其所能承受的收集次數(shù)。而該問題是很容易克服的,因為高危人群具有更大的動機(jī)去保存他們的干細(xì)胞庫。2.移植后的干細(xì)胞必須能夠在受體中存活。我們獨特的自體移植方法(如經(jīng)長期的保存或冷凍保藏)消除了移植干細(xì)胞被受體排斥的風(fēng)險。另外,現(xiàn)在的冷凍技術(shù)可以保證細(xì)胞的存活率超過95%。因此,細(xì)胞的低存活率可以被顯著的降低。3.為了使治療能夠成功,移植的干細(xì)胞必須能夠融合到周圍的組織中。而本發(fā)明中采用的是自體移植,移植的細(xì)胞和患者的細(xì)胞的相容性是非常高的,因此融合不會是問題。4.對于長時間的治療,移植的干細(xì)胞在受體體內(nèi)必須能長時間的發(fā)揮功能。由于自體移植的干細(xì)胞與患者原有的干細(xì)胞具有相同的表型和基因型,預(yù)計兩者可以存活相同的時期。5.移植的干細(xì)胞不能對受體造成任何損害。本發(fā)明的自體移植消除了移植排斥宿主的可能性??偠灾?,雖然干細(xì)胞療法還需要解決許多困難,但干細(xì)胞療法50仍是一種令人振奮的治療方法。盡管如此,如上所述原因,我們通過本發(fā)明的方法克服了這些困難。本發(fā)明使用自源干細(xì)胞進(jìn)行移植治療疾病,這些干細(xì)胞來自出生后的人的(如嬰兒、幼兒和成年人)的外周血以及骨髓。本發(fā)明的一個實施方案但不局限于此,是使用干細(xì)胞治療癌癥及免疫疾病如艾滋病。本發(fā)明要優(yōu)于臍帶血移植,原因在于絕大數(shù)的兒童和成年人出生時的臍帶血已經(jīng)不存在。當(dāng)用干細(xì)胞治療骨髓缺陷和免疫缺陷疾病時,患者的細(xì)胞和各器官系統(tǒng)(如造血系統(tǒng),肝臟系統(tǒng),免疫系統(tǒng))恢復(fù)緩慢,這是由于干細(xì)胞的用量不足造成的。各器官恢復(fù)緩慢是由于低劑量的干細(xì)胞需要更長的時間來重建損傷的器官。對許多移植患者來說,這種緩慢的恢復(fù)能力也是治療病態(tài)和活性的源泉。祖細(xì)胞的存在,以及部分可能存在的終末分化細(xì)胞,可能在縮短重建時間上具有顯著的優(yōu)勢,另外在注射后一段時間內(nèi)具有其他方面的生理優(yōu)勢。本發(fā)明至少具有如下所示其他優(yōu)勢(1)由于采用了自體移植,不需要花費大量的時間、金錢和精力清洗干細(xì)胞或?qū)λ拗骶哂袧撛谖kU的成熟骨髓T細(xì)胞(對移植抗宿主疾病的發(fā)展非常重要)。清洗的方法如可特異識別并清除成熟T細(xì)胞的化學(xué)制劑或單克隆抗體(OKT3),過濾,柱層析或分批層析。需要注意的是層析包括具有識別干細(xì)胞、原代細(xì)胞或終末分化細(xì)胞特異抗體的親和層析。當(dāng)收集患者細(xì)胞時,如果患者具有靶疾病之外的疾病,收集到的患者"健康"干細(xì)胞應(yīng)當(dāng)沒有靼疾病。如AIDS患者,病前的細(xì)胞應(yīng)當(dāng)不含有AIDS病毒。(2)由于我們采用的是自體移植,因此我們不需要花費精力找出來自于另一對象的干細(xì)胞或骨髓細(xì)胞或通過一系列的檢測來確定干細(xì)胞或骨髓細(xì)胞與受體的匹配度。此外,我們也不需擔(dān)心因找不到匹配的干細(xì)胞或骨髓或者由于檢測和找出匹配的干細(xì)胞或骨髓而錯過了合適的時間而使受體受到生命危險或致命傷害。(3)由于所述方法采用自體移植,因此不必?fù)?dān)心移植排斥宿主的發(fā)生,以及免疫排斥反應(yīng)。險。(5)由于采用了自體移植,也不必?fù)?dān)心移植帶來的傳播性疾病(如HIV、CMV、乙肝、梅毒等)。(6^艮重要的是,與疾病發(fā)生后的時期相比,這些自體移植的細(xì)胞來自疾病發(fā)生前(病前期)。使用病前的細(xì)胞進(jìn)行自體移植比使用疾病后的細(xì)胞進(jìn)行自體移植具有如下的優(yōu)勢(i)先前收獲的病前細(xì)胞比較年輕。與疾病后收集的干細(xì)胞相比,年輕的細(xì)胞具有優(yōu)勢細(xì)胞更具恢復(fù)力,更多樣化,保留了正常(或者相對正常)的活性和多種多樣的活性,在治療疾病方面更具有能力和活力。此外,由于年齡的增長(如老年),在人生命的后期,某些細(xì)胞群將衰竭、丟失或不再適合收集。同樣,由于自然衰老,與年老相關(guān)的退化,突變,積累的損傷或受多年環(huán)境的侵襲,在年老細(xì)胞中,某些細(xì)胞功能或基因被關(guān)閉,下調(diào)或喪失。此外,由于年老或復(fù)制方法中的錯誤或環(huán)境的侵襲,年老的細(xì)胞(疾病后的細(xì)胞相對于病前的細(xì)胞)中具有更多的突變,缺陷。(ii)在患者病前獲得的細(xì)胞比較健康(或者比發(fā)病時的患者的細(xì)胞健康),而且細(xì)胞更易生長或操作,或比疾病后的細(xì)胞更容易操作。(iii)病前的獲得的細(xì)胞會更加健康或者比疾病后的細(xì)胞包含更多的健康細(xì)胞(或較少的病態(tài)細(xì)胞),因此病前獲得的細(xì)胞不會或者較少被病態(tài)的細(xì)胞污染,從而可以重新回到患者體內(nèi)并潛在的促進(jìn)患者恢復(fù)。例如,在治療癌癥方面,本發(fā)明與在先技術(shù)相比,具有以下的優(yōu)點。與從患有癌癥的患者體內(nèi)收集到的細(xì)胞相比,注射的細(xì)胞不會4皮癌細(xì)胞污染(或者由于收集細(xì)胞時癌細(xì)胞已經(jīng)扎根但并未被診斷出來引起的較少污染)。因此,不需要費力的、費時的、低效的(可能無意的引入不良的化學(xué)制劑)檢驗和篩選方法清洗病前獲得細(xì)胞并從中除去癌細(xì)胞。此外,本發(fā)明消除或降低了由于注射入含有亞劑量的癌細(xì)胞的干細(xì)胞而導(dǎo)致復(fù)發(fā)的可能性。(iv)與患病期較長患者體內(nèi)收集到的細(xì)胞相比,病前收集到的細(xì)胞會有多種多樣的更飽滿或者更正常/健康的細(xì)胞。例如,由于AIDS病毒的侵害,AIDS患者的外周血中的T輔助細(xì)胞是不足的,但是在病前卻能收集到正常數(shù)量的健康細(xì)胞。(V)—個可以選擇的步驟,將收集的干細(xì)月包、祖細(xì)胞和終末分化細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增。擴(kuò)增可以在冷凍保藏前或冷凍保藏后。采用這個方法,可以增加用于治療的干細(xì)胞的數(shù)量。從而可以增加健康細(xì)胞的數(shù)量,當(dāng)大量的健康細(xì)胞注射入患者體內(nèi)后可以極大地促進(jìn)細(xì)胞的免疫防御功能。(vi)此外,通過處理和冷凍保藏技術(shù),可以對干細(xì)胞進(jìn)行免疫修飾或內(nèi)在的細(xì)胞調(diào)整,從而提高細(xì)胞的質(zhì)量。為了使本發(fā)明能更清楚和便于理解,通過圖表和實施方案對前述發(fā)明的一些細(xì)節(jié)做了闡述,但上述的實施方案不能理解為對本發(fā)明的限制。很明顯本領(lǐng)域的技術(shù)人員在所屬領(lǐng)域內(nèi)對本發(fā)明做出的各種修改和變動都將落入所附的權(quán)利要求范圍之內(nèi)。允許對本發(fā)明做出明顯改變的未來技術(shù)也將落入本發(fā)明的權(quán)利要求范圍之內(nèi)。為了達(dá)到能夠充分闡述發(fā)明的程度,引用的出版物,圖片,專利和專利申請都清楚和全部的納入此處供參考。外周血干細(xì)胞的特征分析本發(fā)明的一個方面是關(guān)于動員的外周血干細(xì)胞作為一個多樣化干細(xì)胞群的應(yīng)用。這些干細(xì)胞可以通過許多技術(shù)對其表型和基因型進(jìn)行分析。例如,基于表型的特征可以通過熒光激活細(xì)胞分離儀檢測細(xì)胞表面抗原。可^r測的細(xì)胞表面抗原包括CD34、KDR和CD133。其他檢測包括如通過核型分析檢測分裂中期細(xì)胞的染色體結(jié)構(gòu)?;蛐吞卣鞣治霭ㄒ韵乱豁椈蚨囗椉夹g(shù)分離核酸(DNA、RNA)、電泳、PCR、基因芯片分析、基因組測序。此外,可通過蛋白質(zhì)芯片,一維和二維凝膠電泳以及柱層析分析細(xì)胞的蛋白質(zhì)組。例如,內(nèi)皮祖細(xì)胞的出現(xiàn)與心血管危險因子之間有密切的相互聯(lián)系。即血細(xì)胞中內(nèi)皮干細(xì)胞的數(shù)量越多,結(jié)果就更好(發(fā)生心血管事件的風(fēng)險就小)??梢灶A(yù)測的心血管事件包括動脈高血壓、高血脂、糖尿病、冠狀動脈疾病、心肌梗死、主要心血管事件、需血管再生、需住院治療、中風(fēng)或死于心血管事件,以及這些現(xiàn)象的組合。53本發(fā)明的另一方面是關(guān)于從外周血中收集神經(jīng)干細(xì)胞、間質(zhì)干細(xì)胞或胰腺干細(xì)胞。外周血細(xì)胞可以分類,如利用流式細(xì)胞術(shù)可以分離具有神經(jīng)干細(xì)胞、間質(zhì)干細(xì)胞或胰腺干細(xì)胞典型表型的干細(xì)胞。將具有這些細(xì)胞系典型表面受體的干細(xì)胞分離,然后進(jìn)行分類。該技術(shù)可以擴(kuò)展到從其他器官分離干細(xì)胞。外周血細(xì)胞的標(biāo)記分子可纟皮同時或連續(xù)的分類。例如,細(xì)月包可以通過一種標(biāo)記分子被流式細(xì)胞儀分類并收集。而收集的細(xì)胞可以通過第二種標(biāo)記分子;f皮流式細(xì)胞儀進(jìn)一步分類。換句話說,細(xì)胞可以通過兩種標(biāo)記分子同時分類。應(yīng)當(dāng)理解,流式細(xì)胞儀上可以結(jié)合細(xì)胞表面標(biāo)記分子特異性抗體(或其衍生物)。本發(fā)明的另一方面是關(guān)于收集患者不同發(fā)病階段的外周血細(xì)胞。干細(xì)胞的組成/分布可以通過流式細(xì)胞儀、表型或基因型決定。即各種干細(xì)胞的數(shù)量及質(zhì)量可以用本說明書中描述的任何方法測量,收集和保藏。此外,收集的干細(xì)胞也可以冷凍保藏。這些數(shù)據(jù)可以對干細(xì)胞的組成/分布做一個簡短描述,并作為有價值的數(shù)據(jù)用于診斷和預(yù)測。即集體干細(xì)胞的標(biāo)記分子代表了一個個體現(xiàn)在和其未來潛在的健康的重要圖譜,具有重要的預(yù)測價值。對相同個體不同時期收集的干細(xì)胞群之間的比較,可以檢測干細(xì)胞的組成/分布是否發(fā)生改變。任何改變都可能具有診斷價值。包括具有治療自身免疫疾病、病毒性疾病、移植抗宿主疾病和癌癥的T-調(diào)控細(xì)胞的標(biāo)記分子。未描述的其他方法為本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知的或在公開的美國專利申請US20040258673(A1)或US20040265281(A1)中描述,并納入此處供參考。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施方式,本發(fā)明中的動員外周血干細(xì)胞可以用作多樣化的干細(xì)胞或祖細(xì)胞,并且可以通過流式細(xì)胞儀、免疫熒光、PCR或其他方法鑒定其表型特征,且具有成為盡職的線性特異的祖細(xì)胞的能力。干細(xì)胞標(biāo)記分子可以用來描述外周血干細(xì)胞的表型特征。這些干細(xì)胞標(biāo)記分子,尤其在心血管疾病領(lǐng)域,可以用來預(yù)測心臟事件,包括心肌梗死、主要心臟事件,住院治療和死亡。與內(nèi)皮祖細(xì)胞的分子標(biāo)記一樣,這種標(biāo)記分子包括CD34和CD133。這些標(biāo)記分子還包括具有治療自身免疫疾病、病毒性疾病、移植抗宿主疾病和癌癥的T-調(diào)控細(xì)胞的標(biāo)記分子。這些干細(xì)胞標(biāo)記分子還可以用來鑒定和分離神經(jīng)祖細(xì)胞,間質(zhì)干細(xì)胞、胰腺干細(xì)胞或者體內(nèi)其他器官的干細(xì)胞。這些標(biāo)記分子也可以在患者體內(nèi)連續(xù)使用以使"干細(xì)胞"達(dá)到最佳健康狀態(tài),以便將來獲得干細(xì)胞。這些收集的干細(xì)胞標(biāo)記物是個體現(xiàn)在和將來健康狀態(tài)的重要印記,并且具有預(yù)測的價值。例如,收集的干細(xì)胞標(biāo)記分子可以作為特異祖細(xì)胞系的干細(xì)胞群的生物標(biāo)記。參考文獻(xiàn)1.C.Sonnenschein,A.M.Soto,TheSocietyofCells-CancerAndControlofCellProliferation,BIOSScientificPublishersLtdandSpringer-Verlag,NewYork,1999.2.G.B.Pierceetal.Cancer—AProblemInDevelopmentalBiology.PrenticeHall,NewYork,1974,pp.79-84;G.B.Pierce,inTheBiologicalBasisofCancer,R.G.McKinnel,R.E.Parchment,A.O.Perantoni,G.B.Pierce,Eds"CambridgeUniv.Press,CambridgeUK,1998,pp.39-47.3.UnitedStatesPatentApplication,PublicationNo.20010000204Al,ofCastinoetal"publishedApr.12,2001.Hereinafterreferredtoas"Castinoetal.4.Gudemann,C.,Wiesel,M.AndStaehler,G.,IntraoperativeAutotransfusionInUrologicCancerSurgeryByUsingMembraneFilters,XXIIIrdCongressoftheISBT,abstractsinVoxSang.,67(S2),22)5.Miller,G.V.,Ramsden,C.W.andPrimrose,J.N.,Autologoustransfusion:analternativetotransfusionwithbankedbloodduringsurgeryforcancer,B.J.Surg.1991,Vol.78,June,713-715.6.Douayetal,,1986,RecoveryofCFU-GMfromcryopreservedmarrowandinvivoevaluationafterautologousbonemarrowtransplantationarepredictiveofengraftment.ExpHematol.14(5):358-365;Knight,1980,PreservationofLeukocytesinLowTemperaturePreservationinMedicineandBiology,Ch.6,Ashwood-SmithandFarrant(UniversityParkPress,Baltimore)pp.121-137.7.UnitedStatesPatentApplicationPublicationNo.20020146680Al:ofRich,IvanN.,publishedOct.10,2002,entitled"High-throughputstemcellassayofhematopoieticstemandprogenitorcellproliferation,incorporatedhereinbyreferenceinitsentirety.8.UnitedStatesPatentApplicationSerialNo.10/819,342,filedApril5,2004andUnitedStatesPatentApplicationSerialNo.60/460,362,filedApril3,2003,incorporatedhereinbyreferenceintheirentireties.以下實施例用于說明本發(fā)明的方法和組合物,但不是對本發(fā)明的限定。對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言,對本發(fā)明中治療的各項條件和參數(shù)做出的顯而易見的相應(yīng)修改也將在本發(fā)明的構(gòu)思和保護(hù)范圍之內(nèi)。實施例1:收集并冷凍保藏外周血干細(xì)胞選擇要保存其干細(xì)胞用于將來接受自體轉(zhuǎn)移的患者,收集該患者的外周血干細(xì)胞。簡要地說,收集患者重要的醫(yī)學(xué)指標(biāo),包括年齡(45歲),體重(150磅),性別(男),血壓(120/80)和血細(xì)胞比容值(42%)。通過供體的性別、身高和體重計算其血液總量,通過血細(xì)胞比容值確定每個循環(huán)總血液的處理量(processvolume)。血液分離機(jī)的離心轉(zhuǎn)速i殳定為4800rpm,臨界流速設(shè)定為50ml/min。收泉患者的干細(xì)胞3小時。收集的細(xì)胞總體積為250ml。用滅菌的RPMI培養(yǎng)基洗滌這些細(xì)胞并重懸于冷凍保藏培養(yǎng)基(RPMI+10%甘油+5。/oDMSO)中。將一半細(xì)胞等分于20個Corning公司的冷凍小瓶(cryovials)中。另一半置于Baxter公司的冷凍袋中。干細(xì)胞的冷凍保藏使用MVECRF2000型控制速率冷凍儀,并使用如下程序化溫度斜坡(ramp):冷藏室降溫至4。C;以-0,7。C/min的速率將溫度由4。C降至-ll。C;以-25。C/min的速率將溫度由-ll。C降至-60。C;維持-60。C的溫度1分鐘30秒;以+10。C/min的速率將溫度由-60。C升至-25。C;以0.7。C/min的速率將溫度由-25。C降至-45。C;以-5。C/min的速率將溫度由-45。C降至-60。C;以-10。C/min的速率將溫度由-60。C降至-95。C;維持-95。C的溫度10分鐘。將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮貯存罐隔離(quarantine)—段時間,直至獲得所有的試驗結(jié)果,然后將細(xì)胞永久保存于液氮蒸汽中。實施例2冷凍保藏細(xì)胞的存活率檢測將冷凍的含有細(xì)胞的小瓶從液氮貯存中取出并浸入37。C水浴中。在1000rpm下將細(xì)胞離心5分鐘。吸出上清,用PBS將細(xì)胞洗滌兩次。洗滌后,細(xì)胞重置于生理鹽水中。取等分試樣,用只結(jié)合死細(xì)胞的臺盼蘭染料染色。在血球計數(shù)板上對染色的細(xì)胞計數(shù),結(jié)果顯示高于95%的細(xì)胞存活。細(xì)胞解凍后將被注入患者進(jìn)行自體轉(zhuǎn)移。實施例3根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施方案,從非疾病或病前的供體收集外周血干細(xì)胞(PBSC)。圖4和圖5提供了獲得、收集和處理供體PBSC的一般流程。根據(jù)參考標(biāo)準(zhǔn)5R-A(AABBCT標(biāo)準(zhǔn),2004版42-44頁)定義和選擇供體合適度。供體是18歲或更大的成人。供體的通常最小體重為110磅,雖然可調(diào)整方法以針對低體重患者。另外還需要對供體的病史進(jìn)行篩查或檢測,找出是否有影響受體健康或PBSC治療效果的異常的結(jié)果。基于如下的考慮,在收集PBSC產(chǎn)品前應(yīng)當(dāng)檢測是否有潛在的傳播性疾病<table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table>HB核心抗體乙肝抗體陽性可以作為供體RPR(梅毒螺旋體)陽性可以作為供體細(xì)月包巨4b病毒陽性可以作為供體ABO/RH(血型)不適用CBC(全部血球數(shù))必須經(jīng)醫(yī)師評定異常性Hct(血細(xì)胞比容)<33%不接受,不足的患者可以治療以增加HbHLA(組織移植抗原)不適用經(jīng)3天收集供體的PBSC。第一天將第一劑480)igG-CSF皮下注射入病前受試者。第二天皮下注射第二劑480pgG-CSF。第3天從供體的一只胳膊抽血,加入血液分離儀,分離并收集干細(xì)胞。剩下的全血重新輸回供體。經(jīng)過連續(xù)兩天的皮下注射給予480^gG-CSF,總有核細(xì)胞的外周計數(shù)由未刺激對照組的平均值169.4x108/L(n-21)增加至平均值252.3xl08/L(n=22)。CD34+細(xì)胞的絕對數(shù)量由平均值64.29x106/L(『21)增加至平均值85.4xl06/L(n=22)。將由G-CSF刺激的供體獲得結(jié)果列于下表。經(jīng)G-CSF刺激的供體編號體重/Kg.總TNCx108總CD34+x106CD34+百分比A00553.692.466.530.72A00661.498.9162.201.64A00777.7305.048.800.16A00868.2282.05.640.02A00995.5245.5144.850.59A01081.8348.020.880.06A01177.3344.1120.440.35A01281.8140.816.900.12A01386.4313.718.820.0658<table>tableseeoriginaldocumentpage59</column></row><table>不符合一項或多項可接受標(biāo)準(zhǔn)的外周血單位將優(yōu)選地被丟棄。一些預(yù)定的檢測、標(biāo)準(zhǔn)和準(zhǔn)則被用來測定外周血單位處理、冷凍保藏和最終移植的潛在合適度。外周血干細(xì)胞(PBSC)可以長期保存在液氮中(蒸汽相或液相)。袋子中產(chǎn)品的體積優(yōu)選至少為100ml。PBSC產(chǎn)品的WBC計數(shù)優(yōu)選至少5xl06/ml,但是高于或低于該值也可以使用。雖然通過詳細(xì)的優(yōu)選實施方式和實施例解釋本發(fā)明,但是本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到在不超出本發(fā)明的構(gòu)思和范圍內(nèi)可以對本發(fā)明做出多種修改。前述的與本申請說明書相關(guān)和/或列在申請表上的美國專利、美國公開專利申請、美國專利申請、國外專利、國外專利申請和非專利公開全部納入此處供參考。權(quán)利要求1、一種從病前受試者中收集自體成體干細(xì)胞的方法,包含如下步驟給予病前受試者至少兩劑量的粒細(xì)胞集落刺激因子,約1μg/kg/天到8μg/kg/天;用血液分離方法,從病前受試者的外周血中收集成體干細(xì)胞;在收集的同時,標(biāo)記所收集細(xì)胞用于所述受試者;并且保藏所收集的細(xì)胞,保持細(xì)胞完整性。2、權(quán)利要求l的方法,在2至6天時間內(nèi),給予所述病前受試者至少兩劑量的粒細(xì)胞集落刺激因子。3、權(quán)利要求2的方法,其中所述至少兩劑量的粒細(xì)胞集落刺激因子是連續(xù)兩天給予的,所述受試者每天接受一劑量。4、權(quán)利要求3的方法,其中所述受試者連續(xù)幾天接受兩劑量的粒細(xì)胞集落刺激因子。5、權(quán)利要求7的方法,其中用血液分離方法從外周血中收集成體干細(xì)胞是在給予第二劑量的粒細(xì)胞集落刺激因子后的那天進(jìn)行的。6、權(quán)利要求4的方法,其中所述粒細(xì)胞集落刺激因子是皮下給予的。7、權(quán)利要求5的方法,其中每劑量約480pg的粒細(xì)胞集落刺激因子皮下給予受試者。8、權(quán)利要求l的方法,其中在約12至36小時內(nèi),分別給予所述病前受試者至少兩劑量的粒細(xì)胞集落刺激因子。9、權(quán)利要求7的方法,其中用血液分離方法從外周血中收集成體干細(xì)胞是在給予第二劑量的粒細(xì)胞集落刺激因子約12至36小時后進(jìn)行的。10、權(quán)利要求9的方法,其中所述粒細(xì)胞集落刺激因子是皮下給予的。11、權(quán)利要求10的方法,其中每劑量約480pg的粒細(xì)胞集落刺激因子皮下給予受試者。12、權(quán)利要求3的方法,其中給予受試者的粒細(xì)胞集落刺激因子的劑量約為4至6pg/kg/天或其等同劑量。13、權(quán)利要求3的方法,其中每劑量約50pg至800pg的粒細(xì)胞集落刺激因子皮下給予受試者。14、權(quán)利要求3的方法,其中每劑量約300pg至500jxg的粒細(xì)胞集落刺激因子皮下給予受試者。15、權(quán)利要求1的方法,其中所述受試者是人類受試者且符合至少一個選自以下的條件體重在10至200公斤且年齡在2至80歲。16、權(quán)利要求1的方法,其中所述收集步驟是在受試者處于成年或非新生兒時期進(jìn)行的。17、權(quán)利要求1的方法,其中所述收集步驟包括在單一收集過程中,每個受試者收集至少大于100x108個總有核細(xì)胞。18、權(quán)利要求1的方法,其中所述收集步驟包括在單一收集過程中,每個受試者收集至少大于250x108個總有核細(xì)胞。19、權(quán)利要求17的方法,其中所述收集步驟是多階段進(jìn)行的。20、權(quán)利要求1的方法,其中所述保藏步驟包括將收集的細(xì)胞貯存在干細(xì)胞庫中。21、干細(xì)胞庫存方法,包括如下步驟(a)對受試者給予一種或多種干細(xì)胞增效劑,以增加所述受試者的外周血中干細(xì)胞的數(shù)量;(b)使用血液分離方法從所述受試者的外周血中收集至少一個干細(xì)胞群和至少一個非干細(xì)胞群,其中所述受試者沒有立即察覺的需要用其自身所收集的干細(xì)胞進(jìn)行治療的健康狀況;(c)保藏所述至少一個干細(xì)胞群和至少一個非干細(xì)胞群,作為保藏的細(xì)胞群;(d)重新獲得所保藏的細(xì)胞群,用于將所述至少一個干細(xì)胞群和至少一個非干細(xì)胞群自體移植入所述受試者。22、權(quán)利要求21的方法,其中所述一種或多種干細(xì)胞增效劑選自粒細(xì)胞集落刺激因子、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子、地塞米松、CXCR4受體抑制劑及它們的組合。23、權(quán)利要求22的方法,其中所述CXCR4受體抑制劑選自AMD3100、ALX40-4C、T22、T134、T140以及TAK國779。24、權(quán)利要求21的方法,其中所述給予是在所述收集步驟的至少一周前進(jìn)行的。25、權(quán)利要求21的方法,其中所述健康狀況選自腫瘤疾病、免疫疾病及白細(xì)月包減少癥。26、權(quán)利要求21的方法,其中所述收集步驟是在所述受試者在成年人或非新生兒時期進(jìn)行的。27、權(quán)利要求21的方法,其中所述收集步驟至少進(jìn)行2次。28、權(quán)利要求21的方法,其中所述收集步驟至少進(jìn)行3次。29、權(quán)利要求21的方法,其中所述收集步驟至少進(jìn)行5次。30、權(quán)利要求21的方法,其中所述收集步驟在單一收集階段中每公斤人體重收集至少1x106個總有核細(xì)胞。31、權(quán)利要求21的方法,其中所述收集步驟在單一收集階段中每公斤人體重收集至少2x106個總有核細(xì)胞。32、權(quán)利要求21的方法,其中所述收集步驟在單一收集階段中每公斤人體重收集至少3x106個總有核細(xì)胞。33、權(quán)利要求21的方法,其中所述收集步驟在單一收集階段中每公斤人體重收集至少5x106個總有核細(xì)胞。34、權(quán)利要求21的方法,所述血液分離方法在所述收集步驟中進(jìn)4亍至少1小時。35、權(quán)利要求21的方法,所述血液分離方法在所述收集步驟中至少進(jìn)行2小時。36、權(quán)利要求21的方法,所述血液分離方法在所述收集步驟中至少進(jìn)行3小時。37、權(quán)利要求21的方法,所述血液分離方法在所述收集步驟中至少進(jìn)行4小時。38、權(quán)利要求21的方法,其中血液分離方法將其他細(xì)胞釋放到所述受試者的外周血中。39、權(quán)利要求38的方法,其中所述其他細(xì)胞選自干細(xì)胞、祖細(xì)胞和終末分化細(xì)胞。40、權(quán)利要求21的方法,其中所述保藏步驟包括在實質(zhì)細(xì)胞分裂前,保藏在所述收集步驟中所收集的細(xì)胞。41、權(quán)利要求21的方法,其中所述保藏步驟包括處理所述干細(xì)胞,置于多個單獨容器中保存。42、權(quán)利要求41的方法,其中所述處理步驟包括分離一個細(xì)胞群,所述細(xì)胞群富集或失去干細(xì)胞表面抗原。43、權(quán)利要求42的方法,其中所述干細(xì)胞表面抗原選自CD34、KDR、CD45和CD133。44、權(quán)利要求41的方法,其中所述處理步驟包括分離一個細(xì)胞群,所述細(xì)胞群富集或失去祖細(xì)胞表面抗原。45、權(quán)利要求44的方法,其中所述祖細(xì)胞表面抗原選自CD45、Lin、Muc畫18、CK19、Nestin和KDR。46、權(quán)利要求41的方法,其中所述處理步驟包括分離一個細(xì)胞群,所述細(xì)胞群富集一種或多種終末分化細(xì)胞表面抗原。47、權(quán)利要求46的方法,其中所述一種或多種終末分化細(xì)胞表面抗原選自CD-4、CD-8、Flkl、肌球蛋白、骨特異性堿性磷酸酶、骨鈣素、骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體、CD38、CD44、Thy-l和脂肪細(xì)胞脂質(zhì)結(jié)合蛋白。48、權(quán)利要求41的方法,其中所述處理步驟包括分析在所述一個干細(xì)胞群和至少一個非干細(xì)胞群中一種細(xì)胞的至少一種特性。49、權(quán)利要求48的方法,其中所述至少一種特性是所述細(xì)胞的DNA或RNA序列。50、權(quán)利要求48的方法,其中所述至少一種特性是所述細(xì)胞的蛋白質(zhì)組。51、權(quán)利要求41的方法,其中所述處理步驟包括用一種試劑處理所述一個干細(xì)胞群或至少一個非干細(xì)胞群,以增強(qiáng)所述細(xì)胞群的保存性、存活率或治療能力。52、權(quán)利要求51的方法,其中所述處理是用核酸轉(zhuǎn)化所述一個干細(xì)胞群或至少一個非干細(xì)胞群。53、權(quán)利要求21的方法,其中所述方法不需要對所述一個干細(xì)胞群或至少一個非干細(xì)胞群進(jìn)行HLA分型。54、權(quán)利要求21的方法,其中所述保存步驟包括在保存到干細(xì)胞庫之前,對收集的細(xì)胞群中測定至少一種與受試者有關(guān)的區(qū)別特性,以在需要使用時提供可靠鑒定的手段,以將所收集的干細(xì)胞匹配于所述受試者。55、權(quán)利要求54的方法,其中所述區(qū)別特性是DNA或RNA序列。56、權(quán)利要求54的方法,其中所述區(qū)別特性是所述一個干細(xì)胞群或至少一個非干細(xì)胞群的細(xì)胞的蛋白質(zhì)組。57、權(quán)利要求54的方法,其中所述測定步驟還包括為每個細(xì)胞群提供代表所述區(qū)別特性的信息的標(biāo)記。58、權(quán)利要求57的方法,其中所述標(biāo)記包括標(biāo)簽、條形碼、磁條及微芯片中的至少一種。59、權(quán)利要求57的方法,其中所述標(biāo)記被植入所保藏的收集到的細(xì)胞群中。60、權(quán)利要求21的方法,其中所述保藏步驟包括將所述至少一個干細(xì)胞群和至少一個非干細(xì)胞群進(jìn)行冷凍保藏。61、權(quán)利要求60的方法,其中所述至少一個干細(xì)胞群和至少一個非干細(xì)胞群被冷凍保藏在分離容器中。62、^L利要求60的方法,其中所述至少一個干細(xì)月包群和至少一個非干細(xì)胞群被冷凍保藏在同一容器中。63、權(quán)利要求21的方法,進(jìn)一步包括(f)在自體移植中將所述干細(xì)胞給予所述受試者。64、權(quán)利要求63的方法,其中所述方法:故用于治療白細(xì)胞減少癥患者。65、權(quán)利要求63的方法,其中所述自體移植沒有進(jìn)行HLA分型。66、一種細(xì)胞治療產(chǎn)品,其包含外周造血干細(xì)胞和非干細(xì)胞的自體混合物,其中所述非干細(xì)胞包括祖細(xì)胞和任選的功能細(xì)胞。67、權(quán)利要求67的細(xì)胞治療產(chǎn)品,其包含約10%至約90%的外周造血干細(xì)胞及約10%至約90%的非干細(xì)胞。68、權(quán)利要求67的細(xì)胞治療產(chǎn)品,其包含約10%至約80%的外周造血千細(xì)胞及約20%至約90%的非干細(xì)胞。69、權(quán)利要求67的細(xì)胞治療產(chǎn)品,其包含約10%至約60%的外周造血千細(xì)胞及約40%至約90%的非干細(xì)胞。70、權(quán)利要求67的細(xì)胞治療產(chǎn)品,其中所述非干細(xì)胞選自造血祖細(xì)胞、神經(jīng)祖細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)祖細(xì)胞、少突膠質(zhì)祖細(xì)胞、皮膚祖細(xì)胞、肝臟祖細(xì)胞、肌肉皮祖細(xì)胞、骨祖細(xì)胞、骨髓基質(zhì)干細(xì)胞或祖細(xì)胞、胰腺祖細(xì)胞、祖軟骨細(xì)胞、基質(zhì)祖細(xì)胞、培養(yǎng)擴(kuò)展干細(xì)胞或祖細(xì)胞、培養(yǎng)分化干細(xì)胞或祖細(xì)胞,或它們的組合。71、權(quán)利要求67的細(xì)胞治療產(chǎn)品,其中所述功能細(xì)胞選自終末分化造血干細(xì)胞、終末分化神經(jīng)細(xì)胞、終末分化神經(jīng)"交質(zhì)細(xì)胞、終末分化少突膠質(zhì)細(xì)胞、終末分化皮膚細(xì)胞、終末分化肝細(xì)胞、終末分化肌肉細(xì)胞、終末分化骨細(xì)胞、終末分化脂肪細(xì)胞、終末分化胰腺細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞、培養(yǎng)分化干細(xì)胞或祖細(xì)胞,或它們的組合。72、一種增強(qiáng)干細(xì)胞或祖細(xì)胞移植的方法,包括給予受試者外周血干細(xì)胞、祖細(xì)胞和任選的功能細(xì)胞的自體混合物。全文摘要一種將受試者自身的外周血干細(xì)胞應(yīng)用于未來的受試者醫(yī)療用途的可選的醫(yī)療保險模式??梢栽谑茉囌呓】禒顟B(tài)或“病前”狀態(tài)下,選擇將其自身的干細(xì)胞進(jìn)行收集、處理并保存,作為未來其自身健康需求的應(yīng)用。所述方法包括在非疾病狀態(tài)下,對成人(包括兒童)外周造血干細(xì)胞進(jìn)行收集、處理、保存和分配的方法。所收集的干細(xì)胞包含足夠劑量,應(yīng)用于受試者在未來的醫(yī)學(xué)治療中所需的一次或多次移植。所收集的成人或非新生兒的外周造血干細(xì)胞在冷凍儲藏前被分成確定劑量的組分,使得可以根據(jù)需要取出所儲藏的固定量的細(xì)胞而不需解凍所有收集的細(xì)胞。文檔編號A61K35/14GK101506353SQ200780030328公開日2009年8月12日申請日期2007年6月15日優(yōu)先權(quán)日2006年6月15日發(fā)明者D·O·羅杰森,G·S·史密斯,R·E·阿林,W·A·馬拉斯科申請人:尼奧斯泰姆公司