專利名稱：新穎的5,7-二取代的[1,3]噻唑并[4,5-d]嘧啶-2(3h)-酮衍生物和它們在治療中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及與WO 01/25242中公開的化合物相關(guān)的一類化合物，但其結(jié)構(gòu)類型未在WO 01/25242中具體舉例說明的。當(dāng)與WO 01/58907中公開的實(shí)施例相比時(shí)，本發(fā)明化合物作為CX3CR1受體的拮抗劑顯示了出人意料的有用性質(zhì)。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了游離堿形式的式(I)化合物或其可藥用鹽、溶劑化物或鹽的溶劑化物，
其中 R1表示CH3或CF3； R2表示鹵素、CN或C1-6烷基； R3表示H或CH3； R4表示H或CH3； n表示0、1或2。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，其提供了式(I)化合物，其中n表示1。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，其提供了式(I)化合物，其中R1表示CH3。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，其提供了式(I)化合物，其中R2表示鹵素或CN。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，其提供了式(I)化合物，其中R2表示F或Cl。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，其提供了式(I)化合物，其中R2表示CN。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，其提供了式(I)化合物，其中n表示1；R1表示CH3，以及R2表示F、Cl或CN。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，其提供了式(I)化合物，其中吡啶以其5位進(jìn)行連接并且在吡啶的2位具有Cl。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，其提供了式(I)化合物，其中吡啶以其2位進(jìn)行連接并且在吡啶的4位具有CN。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，其提供了式(I)化合物，其中吡啶以其2位進(jìn)行連接并且在吡啶的5位具有F。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，其提供了式(I)化合物，其中吡啶以其2位進(jìn)行連接并且在吡啶的5位具有Cl。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，其提供了式(I)化合物，其中吡啶以其2位進(jìn)行連接并且在吡啶的3位具有F。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，其提供了式(I)化合物，其中吡啶以其4位進(jìn)行連接并且在吡啶的3位具有F。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，其提供了式(I)化合物，其中R3表示H。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，其提供了式(I)化合物，其中R4表示CH3。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，其提供了游離堿形式的式(I)化合物或其可藥用鹽、溶劑化物或鹽的溶劑化物，所述化合物選自 5-{[(1S)-1-(5-氯吡啶-2-基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮； 5-{[(1S)-1-(5-氟吡啶-2-基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮； 5-{[1-(3-氟吡啶-4-基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮； 5-{[(1S)-1-(3-氟吡啶-4-基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮； 5-{[(1R)-1-(3-氟吡啶-4-基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮； 5-{[(1S)-1-(3-氟吡啶-2-基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮； 2-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}-2-氧代-2，3-二氫[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}吡啶-4-甲腈； 5-{[(1S)-1-(6-氯吡啶-3-基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羥甲基)丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮；以及 5-{[(1S)-1-(6-氯吡啶-3-基)乙基]硫基}-7-[[(1R)-1-(羥甲基)丁基](甲基)氨基][1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮。
式(I)化合物可以以立體異構(gòu)形式和/或互變異構(gòu)形式存在。應(yīng)該理解，所有的對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體、外消旋體、互變異構(gòu)體及其混合物都包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
當(dāng)與WO 01/25242中公開的化合物相比時(shí)，本發(fā)明化合物的特征在于在噻唑并嘧啶環(huán)系的5位存在支化的硫基烷基吡啶基。換言之，本發(fā)明化合物引入了不是氫的R1基團(tuán)。
根據(jù)本發(fā)明，其還提供了制備式(I)化合物或其可藥用鹽的方法，所述方法包括 a)使式(II)化合物與式(III)化合物反應(yīng)， 式(II)化合物為
其中R3和R4如式(I)中所定義； 式(III)化合物為
其中R1、R2和n如式(I)中所定義，以及L1表示離去基；或 b)使式(IV)化合物水解，
其中R1、R2、R3、R4和n如式(I)中所定義； 以及必要時(shí)，將所得的式(I)化合物或其另一種鹽轉(zhuǎn)化為可藥用鹽；或?qū)⒌玫降氖?I)化合物轉(zhuǎn)化為式(I)化合物的另一個(gè)化合物；以及需要時(shí)，將形成的式(I)化合物轉(zhuǎn)化為其光學(xué)異構(gòu)體。
在方法(a)中，使反應(yīng)物(II)和(III)在合適的有機(jī)溶劑如二甲基亞砜(DMSO)、乙腈或1-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)中偶聯(lián)在一起。所述反應(yīng)任選在添加的有機(jī)堿或無機(jī)堿如三乙胺、N，N-二異丙基乙胺(DIPEA)或氫化鈉存在下進(jìn)行。所述反應(yīng)在溫和的還原劑如硼氫化鈉存在下進(jìn)行。所述反應(yīng)在合適的溫度進(jìn)行，通常在室溫和溶劑的沸點(diǎn)之間的溫度進(jìn)行。所述反應(yīng)通常持續(xù)約一小時(shí)至一周的一段時(shí)間，或直到分析顯示所需產(chǎn)物的形成已結(jié)束。合適的離去基L1為鹵素，特別是氯或溴。在一個(gè)實(shí)施方案中，L1表示氯。
在方法(b)中，使反應(yīng)物(IV)在合適的有機(jī)溶劑如1，4-二氧雜環(huán)己烷、四氫呋喃(THF)、二甲基亞砜(DMSO)或1-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)中經(jīng)受酸催化的水解。合適的酸包括無機(jī)酸如鹽酸或氫溴酸，或有機(jī)強(qiáng)酸如三氟乙酸。所述反應(yīng)在合適的溫度，通常在室溫和溶劑的沸點(diǎn)之間的溫度進(jìn)行。所述反應(yīng)通常持續(xù)約一小時(shí)至一天的一段時(shí)間，或直到分析顯示所需產(chǎn)物的形成已結(jié)束。
對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言顯見的是，在上述方法中對胺、羥基或其它潛在反應(yīng)基團(tuán)進(jìn)行保護(hù)可能是期望的或必要的。合適的保護(hù)基和添加或脫除所述基團(tuán)的方法的詳細(xì)情況通常是本領(lǐng)域公知的。參見，例如Greene和Wuts所著的“Protective Groups in Organic Synthesis″，3rd Edition(1999)。
本發(fā)明包括鹽形式的式(I)化合物。合適的鹽包括與有機(jī)酸或無機(jī)酸或有機(jī)堿或無機(jī)堿形成的鹽。所述鹽通常將是可藥用鹽，不過在制備和純化所述化合物時(shí)可以利用非可藥用酸或者堿的鹽。
式(I)化合物的鹽可如下形成使游離的化合物或其鹽、對映異構(gòu)體或外消旋體與一或多當(dāng)量的適當(dāng)酸或堿反應(yīng)。所述反應(yīng)可在所述鹽不溶于其中的溶劑或介質(zhì)中進(jìn)行，或在所述鹽溶于其中的溶劑(例如，水、二氧雜環(huán)己烷、乙醇、四氫呋喃或乙醚，或溶劑的混合物)中進(jìn)行，這些溶劑可真空除去或通過冷凍干燥除去。所述反應(yīng)還可為復(fù)分解方法(metatheticalprocess)，或其可在離子交換樹脂上進(jìn)行。
式(II)化合物可通常使用對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言容易顯見的已知方法制備。一種這樣的合適路線表示于方案1中。

式(III)化合物是市售的，或文獻(xiàn)中已知的，或可使用對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言容易顯見的已知方法制備。
式(IV)化合物是從例如WO 01/25242或WO 05/33115中已知的，或可使用對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言容易顯見的已知方法制備。一種這樣的合成路線表示于方案2中。

式(V)化合物是從WO 01/58907、WO 01/25242或WO 02/76990中已知的，或可使用對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言容易顯見的已知方法制備。
例如，式(V)化合物以及由此得到的式(VI)化合物可如方案3所示制備
制備式(II)、(III)、(IV)和(V)化合物的合適具體方法詳述在本說明書的實(shí)施例部分，并且所述方法代表了本發(fā)明方法的具體實(shí)施方案。
中間體化合物可以照原樣使用或以受保護(hù)的形式使用。合適的保護(hù)基和添加或脫除所述基團(tuán)的方法的詳細(xì)情況通常是本領(lǐng)域公知的。參見，例如Greene和Wuts所著的“Protective Groups in Organic Synthesis”，3rdEdition(1999)。
本發(fā)明化合物及其得到所述化合物的中間體可從它們的反應(yīng)混合物中分離，以及必要時(shí)通過使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)進(jìn)一步純化。
式(I)化合物可以以立體異構(gòu)體形式存在。因此，所有的對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體、外消旋體及其混合物都包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。各種光學(xué)異構(gòu)體可通過采用常規(guī)技術(shù)(例如分級結(jié)晶或HPLC)分離化合物的立體異構(gòu)體混合物而分離出來。
或者，各種光學(xué)異構(gòu)體可直接用光學(xué)活性原料制備。
式(I)化合物含有兩個(gè)立構(gòu)中心，由此可以以如式(Ia)至(Id)所示的四種不同的立體異構(gòu)形式存在。

所有這四種立體異構(gòu)體及其任何混合物都包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。在一個(gè)實(shí)施方案中，式(I)化合物具有式(Ia)中所示的立體化學(xué)。在另一實(shí)施方案中，式(I)化合物具有式(Ib)中所示的立體化學(xué)。
中間體化合物也可以以立體異構(gòu)形式存在，并且可以以純化的對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體、外消旋體或混合物的形式使用。
在本說明書中，術(shù)語“C1-6烷基”包括直鏈和支鏈烷基以及環(huán)烷基。具有1至6個(gè)碳原子C1-6烷基，所述烷基可以是但不限于甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、異戊基、叔戊基、新戊基、正己基、異己基或環(huán)己基。
在本說明書中，術(shù)語″鹵代(halo)″或″鹵素(halogen)″是指氟、氯、溴和碘。
式(I)化合物及其可藥用鹽是有用的，因?yàn)樗鼈兙哂凶鳛镃X3CR1受體拮抗劑的藥理學(xué)活性。具體地，當(dāng)與WO 01/25242中具體舉例說明的化合物相比時(shí)，本發(fā)明的式(I)化合物具有顯著改善的抑制CX3CR1受體的效力和/或降低的抑制CXCR2受體的效力。優(yōu)選的本發(fā)明化合物同時(shí)顯示出增強(qiáng)的抑制CX3CR1的效力和降低的抑制CXCR2的效力。
在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了式(I)化合物或其可藥用鹽，其用作藥物。
在另一方面，本發(fā)明提供了式(I)化合物或其可藥用鹽在制備用于治療或預(yù)防對CX3CR1受體進(jìn)行拮抗是有益的疾病或病癥的藥物中的用途。
在另一方面，本發(fā)明提供了式(I)化合物或其可藥用鹽在制備用于治療或預(yù)防神經(jīng)變性疾病(neurodegenerative disorder)、脫髓鞘病(demyelinatingdisease)、心腦血管動(dòng)脈粥樣硬化疾病(cardio-and cerebrovascularatherosclerotic disorder)、外周動(dòng)脈疾病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肺病疾病如COPD(慢性阻塞性肺病)、哮喘或疼痛的藥物中的用途。
在另一方面，本發(fā)明提供了式(I)化合物或其可藥用鹽在制備用于治療或預(yù)防多發(fā)性硬化癥(MS)的藥物中的用途。
在另一方面，本發(fā)明提供了式(I)化合物或其可藥用鹽在制備用于治療或預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的藥物中的用途，所述藥物通過防止和/或減少新的動(dòng)脈粥樣硬化損傷或斑塊的形成和/或通過防止或減緩現(xiàn)有損傷和斑塊的進(jìn)展來治療或預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化。
在另一方面，本發(fā)明提供了式(I)化合物或其可藥用鹽在制備用于治療或預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的藥物中的用途，所述藥物通過改變斑塊的組成以降低斑塊破裂和動(dòng)脈粥樣硬化血栓形成事件的危險(xiǎn)來治療或預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化。
在另一方面，本發(fā)明提供了式(I)化合物或其可藥用鹽在制備用于治療或預(yù)防中風(fēng)或短暫性腦損傷(transient brain injury，TBI)的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，其還提供了一種治療對CX3CR1進(jìn)行拮抗是有益的疾病或病癥或降低對CX3CR1進(jìn)行拮抗是有益的疾病或病癥危險(xiǎn)的方法，所述方法包括將治療有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽給藥至患有所述疾病或病癥或面臨所述疾病或病癥危險(xiǎn)的人。
本發(fā)明還提供一種在患有神經(jīng)變性疾病、脫髓鞘病、心腦血管動(dòng)脈粥樣硬化疾病、外周動(dòng)脈疾病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肺病疾病如COPD、哮喘或疼痛的人或面臨神經(jīng)變性疾病、脫髓鞘病、心腦血管動(dòng)脈粥樣硬化疾病、外周動(dòng)脈疾病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肺病疾病如COPD、哮喘或疼痛危險(xiǎn)的人中，治療所述疾病或病癥或降低所述疾病或病癥危險(xiǎn)的方法，其中所述方法包括將治療有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽給藥至所述人。
本發(fā)明還提供在患有多發(fā)性硬化癥(MS)或面臨多發(fā)性硬化癥(MS)危險(xiǎn)的人中治療所述疾病或病癥或降低所述疾病或病癥危險(xiǎn)的方法，其中所述方法包括將治療有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽給藥至人。
本發(fā)明還提供在患有多發(fā)性硬化癥(MS)或面臨多發(fā)性硬化癥(MS)危險(xiǎn)的人中，通過防止和/或減少新的動(dòng)脈粥樣硬化損傷或斑塊的形成和/或通過防止或減緩現(xiàn)有損傷和斑塊的進(jìn)展來治療或降低所述疾病或病癥危險(xiǎn)的方法，其中所述方法包括將治療有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽給藥至人。
本發(fā)明還提供在患有動(dòng)脈粥樣硬化或面臨動(dòng)脈粥樣硬化危險(xiǎn)的人中，通過改變斑塊的組成以降低斑塊破裂和動(dòng)脈粥樣硬化血栓形成事件的危險(xiǎn)，來治療或降低所述疾病或病癥危險(xiǎn)的方法，其中所述方法包括將治療有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽給藥至人。
在另一方面，本發(fā)明提供一種藥物制劑，其包含治療有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽，以及混合有可藥用佐劑、稀釋劑或載體，該藥物制劑用于治療或預(yù)防對CX3CR1受體的拮抗是有益的疾病或病癥。
在另一方面，本發(fā)明提供一種藥物制劑，其包含治療有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽，以及混合有可藥用佐劑、稀釋劑或載體，該藥物制劑用于治療或預(yù)防神經(jīng)變性疾病、脫髓鞘病、心腦血管動(dòng)脈粥樣硬化疾病、外周動(dòng)脈疾病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、COPD、哮喘或疼痛。
在另一方面，本發(fā)明提供一種藥物制劑，其包含治療有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽，以及混合有可藥用佐劑、稀釋劑或載體，該藥物制劑用于治療或預(yù)防多發(fā)性硬化癥。
在另一方面，本發(fā)明提供一種藥物制劑，其包含治療有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽，以及混合有可藥用佐劑、稀釋劑或載體，該藥物制劑通過防止和減少新的動(dòng)脈粥樣硬化的損傷和/或斑塊的形成和/或通過防止或減緩現(xiàn)有損傷和斑塊的進(jìn)展來治療或預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化。
所述化合物可作為單一療法使用，或作為對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥性病癥和疾病(如中風(fēng)和短暫性腦損傷(TBI))的預(yù)防性或治療性治療以聯(lián)合方式使用(Soriano et al.J.Neuroimmunology 2002，125，59-65.)。
在另一方面，本發(fā)明提供一種藥物制劑，其包含治療有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽，以及混合有可藥用佐劑、稀釋劑或載體，該藥物制劑通過改變斑塊的組成以降低斑塊破裂和動(dòng)脈粥樣硬化血栓形成事件的危險(xiǎn)來治療或預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化。
式(I)化合物及其可藥用鹽意在用于治療或預(yù)防對CX3CR1受體的活性進(jìn)行調(diào)節(jié)是期望的疾病或病癥。具體地，所述化合物意在用于在哺乳動(dòng)物(包括人)中治療神經(jīng)變性疾病或脫髓鞘病。更具體地，所述化合物意在用于治療多發(fā)性硬化癥。所述化合物也意在用于治療疼痛、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、心腦血管動(dòng)脈粥樣硬化疾病、外周動(dòng)脈疾病和肺動(dòng)脈高壓(pulmonary arterial hypertension)。
可具體提及的病癥為神經(jīng)變性疾病和癡呆疾病，例如，阿爾茲海默氏病(Alzheimer’s Disease)、肌萎縮性側(cè)索硬化(amyotrophic lateral sclerosis)和其它運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾病、克-雅綜合征(Creutzfeld-Jacob Disease)和其它阮病毒病、HIV腦病(HIV encephalopathy)、亨廷頓病(Huntington’s Disease)、額顳癡呆(Frontotemporal dementia)、盧伊體癡呆(Lewy body dementia)和血管性癡呆(vascular dementia)；多神經(jīng)病(polyneuropathies)，例如吉-巴綜合征(Guillain-Barrésyndrome)、慢性炎性脫髓鞘性多神經(jīng)病(Chronic InflammatoryDemyelinating Polyneuropathy)、多灶性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)病(multifocal motorneuropathy)和神經(jīng)叢病(plexopathies)；CNS脫髓鞘，例如，急性彌散性/出血性腦脊髓炎(acute disseminated/haemorrhagic encephalomyelitis)和亞急性硬化性全腦炎(subacute sclerosing panencephalitis)；神經(jīng)肌肉疾病(neuromuscular disorders)，例如重癥肌無力(myasthenia gravis)和蘭-伊綜合征(Lambert-Eaton syndrome)；脊柱疾病(spinal disorders)，例如熱帶痙攣性輕截癱(tropical spastic paraparesis)和僵人綜合征(stiff-man syndrome)；瘤外綜合征(paraneoplastic syndromes)，例如小腦變性(cerebellar degeneration)和腦脊髓炎(encephalomyelitis)；創(chuàng)傷性腦損傷(traumatic brain injury)；偏頭痛；癌癥；同種異體移植物排斥(allograft rejection)；全身性硬化(systemic sclerosis)；病毒感染；寄生蟲傳播疾病(parasite-transmitted disease)，例如瘧疾；牙周病(periodontal disease)；心肌梗塞(myocardial infarction)；中風(fēng)；冠心病(coronaryheart disease)、缺血性心臟病(ischaemic heart disease)；以及再狹窄(restenosis)；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；肺病疾病如COPD；哮喘或疼痛。
本發(fā)明化合物還意在通過防止和/或減少新的動(dòng)脈粥樣硬化的損傷和/或斑塊的形成和/或通過防止或減緩現(xiàn)有損傷和斑塊的進(jìn)展來用于治療動(dòng)脈粥樣硬化。
本發(fā)明化合物還意在通過改變斑塊的組成從而降低斑塊破裂和動(dòng)脈粥樣硬化血栓形成事件的危險(xiǎn)來用于治療防動(dòng)脈粥樣硬化。
本發(fā)明化合物還意在通過誘導(dǎo)IBD的緩解和/或維持緩解，從而用于治療炎癥性腸疾病(IBD)，例如克羅恩病(Crohn’s disease)和潰瘍性結(jié)腸炎。
預(yù)防(prophylaxis)被認(rèn)為與治療已患有所述疾病或病癥的先前發(fā)作的人或被認(rèn)為面臨增加的患有所述疾病或病癥危險(xiǎn)的人特別相關(guān)。面臨發(fā)展成具體疾病或病癥危險(xiǎn)的人通常包括具有所述疾病或病癥家族史或通過遺傳試驗(yàn)或篩選鑒定為特別容易發(fā)展成所述疾病或病癥的人。
對于上述的治療適應(yīng)癥，給藥的劑量當(dāng)然將隨所使用的化合物、給藥方式和所需的治療變化。然而，通常當(dāng)化合物以每天1mg-2000mg的固體形式劑量給藥時(shí)，就獲得令人滿意的結(jié)果。
式(I)化合物及其可藥用衍生物可以單獨(dú)使用或以適當(dāng)?shù)乃幬锝M合物的形式使用，在組合物中，所述化合物或衍生物與可藥用佐劑、賦形劑或載體混合。給藥可通過，但不限于，經(jīng)腸(包括經(jīng)口、經(jīng)舌下或經(jīng)直腸)、經(jīng)鼻內(nèi)、靜脈內(nèi)、局部或其它腸胃外途徑。選擇和制備合適藥物制劑的常規(guī)操作描述在，例如“Pharmaceuticals-The Science of Dosage Form Designs”，M.E.Aulton，Churchill Livingstone，1988中。藥物組合物優(yōu)選含有低于80％，更優(yōu)選低于50％的式(I)化合物或其可藥用鹽。
本發(fā)明還提供了制備這種藥物組合物的方法，其包括混合各成分。
本發(fā)明還涉及聯(lián)合治療，其中當(dāng)式(I)化合物或其可藥用鹽或包含式(I)化合物的藥物組合物或制劑與用于治療心腦血管動(dòng)脈粥樣硬化疾病和外周動(dòng)脈疾病中的任一項(xiàng)治療和/或藥物一起同時(shí)或依次給藥。
具體地，式(I)化合物或其可藥用鹽可以與一種或多種下列組的化合物一起給藥 1)抗炎藥，例如 a)NSAID(例如乙酰水楊酸、布洛芬、萘普生、氟比洛芬、雙氯芬酸和吲哚美辛)； b)白細(xì)胞三烯合成抑制劑(5-LO抑制劑，例如AZD4407、棄留通、licofelone、CJ13610和CJ13454；FLAP抑制劑，例如BAY-Y-1015、DG-031、MK591、MK886和A81834；LTA4水解酶抑制劑，例如SC56938和SC57461A)； c)白細(xì)胞三烯受體拮抗劑(例如，CP195543、阿美盧班(amelubant)、LY293111、扎魯司特(accolade)和MK571)； 2)抗高血壓藥，例如 a)β-阻滯劑(例如美托洛爾、阿替洛爾和索他洛爾)； b)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(例如卡托普利、雷米普利、喹那普利和依那普利)； c)鈣通道阻滯劑(例如維拉帕米、地爾硫卓、非洛地平和氨氯地平)； d)血管緊張素II受體拮抗劑(例如依貝沙坦、坎地沙坦、替米沙坦(telemisartan)和氯沙坦)； 3)抗凝血?jiǎng)?，例? a)凝血酶抑制劑(例如美拉加群(ximelagatran))、肝素和凝血因子Xa抑制劑； b)血小板聚集抑制劑(例如氯吡格雷(clopidrogrel)、噻氯匹定、prasugel和AZ4160)； 4)脂類代謝調(diào)節(jié)劑，例如 a)胰島素敏化劑如PPAR激動(dòng)劑(例如匹格列酮、羅格列酮、Galida、muraglitazaar、gefemrozil和非諾貝特)； b)HMG-CoA還原酶抑制劑，他汀類(例如辛伐他汀、帕伐他汀、阿托伐他汀、羅蘇伐他汀、氟伐他汀和匹伐他汀)； c)膽固醇吸收抑制劑(例如依澤替米貝)； d)IBAT抑制劑(例如，AZD-7806)； e)LXR激動(dòng)劑(例如，GW-683965A和T-0901317)； f)FXR受體調(diào)節(jié)劑； g)磷脂酶抑制劑； 5)抗心絞痛藥，例如，硝酸鹽和亞硝酸鹽； 6)氧化應(yīng)激調(diào)節(jié)劑，例如，抗氧化劑(普羅布考)和髓過氧化物酶抑制劑。
具體的實(shí)施方式 通過下列實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行說明，但是本發(fā)明并不限于這些實(shí)施例 一般方法 使用的所有溶劑都是分析級的，并且市售的無水溶劑是反應(yīng)常規(guī)所使用的。反應(yīng)通常在氮?dú)饣驓鍤獾亩栊詺夥罩羞M(jìn)行。
使用配備Z梯度的5mm BBO探針的Varian Unity+400NMR光譜儀、配備Z梯度的60μl二元反流探針的Bruker Avance 400NMR光譜儀或者配備Z梯度的4-核探針的Bruker DPX400NMR光譜儀記錄400MHz(質(zhì)子)的1H NMR光譜和100MHz(碳-13)的13C NMR光譜。在配備Z梯度的5mm BBI探針頭的Bruker av600NMR光譜儀上記錄600MHz1H NMR光譜。在配備5mm BBI探針頭的Varian Gemini 300NMR上記錄300MHz1H NMR光譜。在配備5mm核梯度探針(nuclei gradient probe)在11.74 T磁場操作的VarianInova 500光譜儀上記錄500MHz1H NMR光譜。除非在實(shí)施例中具體說明，記錄400MHz(質(zhì)子)光譜和100MHz(碳-13)光譜。使用如下參比信號DMSO-d6中線δ2.50(1H)，δ39.51(13C)；CD3OD中線δ3.31(1H)或δ49.15(13C)；丙酮-d6 2.04(1H)，206.5(13C)；和CDCl3δ7.26(1H)，CDCl3中線δ77.16(13C)(除非另有說明)。
在Cyclodex B柱(100℃恒溫洗脫)上或在Cyclosil B柱(溫度梯度110-130℃)上由GC確定對映體過量(ee)。由HPLC確定非對映體過量(de)。
在由Alliance 2795(LC)和ZQ單四極質(zhì)譜儀組成的Waters LCMS上記錄質(zhì)譜。質(zhì)譜儀配備有以正離子模式或負(fù)離子模式操作的電噴霧離子源(ESI)。毛細(xì)管電壓為3kV，質(zhì)譜儀在m/z 100-700之間掃描，掃描時(shí)間為0.3s或0.8s。在X-Terra MS，C8-柱(3.5μm，50或100mmx2.1mm內(nèi)徑)或ScantecLab′s ACE 3 AQ柱(100mmx2.1mm內(nèi)徑)上進(jìn)行分離。柱溫設(shè)定為40℃。應(yīng)用線性梯度，使用中性或酸性流動(dòng)相系統(tǒng)，在4-5分鐘內(nèi)以0％至100％的有機(jī)相運(yùn)行，流速0.3ml/min。中性流動(dòng)相系統(tǒng)乙腈/[10mMNH4OAc(水溶液)/MeCN(95∶5)]或[10mM NH4OAc(水溶液)/MeCN(1/9)]/[10mM NH4OAc(水溶液)/MeCN(9/1)]。酸性流動(dòng)相系統(tǒng)[133mM HCOOH(水溶液)/MeCN(5/95)]/[8mM HCOOH(水溶液)/MeCN(98/2)]。
或者，在配備有以正離子模式操作的電噴霧離子源(ESI)的MicromassLCT質(zhì)譜儀上記錄質(zhì)譜。
在由Agilent Technologies提供的GC-MS(GC 6890，5973N MSD)上進(jìn)行化合物鑒定。使用的柱為VF-5 MS ID 0.25mmx30m，0.25μm(Varian Inc.)。應(yīng)用線性溫度梯度，起始于40℃(保持1分鐘)，終止于300℃(保持1分鐘)，25℃/分鐘。MS配備有EI離子源。MS在m/z 50-500之間掃描，并且掃描速度設(shè)為3.25掃描/秒。將電子電壓設(shè)為70eV。
用由G1379A微真空脫氣器、G1312A二元泵、G1367A孔板自動(dòng)進(jìn)樣器、G1316A恒溫柱室和G1315B二極管陣列檢測器組成的Agilent HP1000系統(tǒng)上進(jìn)行HPLC分析。柱X-Terra MS，Waters，4.6x50mm，3.5μm。將柱溫設(shè)定為40℃，流速1.5ml/分鐘。二極管陣列檢測器從210-300nm掃描，步長和峰寬分別設(shè)為2nm和0.05分鐘。應(yīng)用線性梯度，在4分鐘內(nèi)從0％運(yùn)行至100％乙腈。流動(dòng)相在MilliQ Water中具有乙腈/10nM乙酸銨的5％乙腈溶液。
典型的反應(yīng)后處理方法(typical workup procedure after a reaction)包括用溶劑(例如乙酸乙酯)萃取產(chǎn)物；用水洗滌，隨后用MgSO4或Na2SO4干燥有機(jī)相，然后對溶液進(jìn)行真空濃縮。
在Merck TLC-板(硅膠60 F254)上進(jìn)行薄層色譜(TLC)，斑點(diǎn)由UV顯現(xiàn)。
在Combi

CompanionTM(使用RediSepTM正相快速柱)上或在Merck硅膠60(0.040-0.063mm)上進(jìn)行快速色譜法?？焖僦V法的典型溶劑是氯仿/甲醇的混合物、甲苯/乙酸乙酯的混合物以及乙酸乙酯/己烷的混合物。
除非在實(shí)施例中另有說明，在配備二極管陣列檢測器的Gilson自動(dòng)制備性HPLC上進(jìn)行制備性色譜，使用XTerra MS柱(C8，19x300mm，7μm)，在MilliQ Water中具有乙腈/0.1M乙酸銨的5％乙腈溶液的梯度，在13分鐘內(nèi)，從20％運(yùn)行至60％乙腈，以及流速為20ml/分鐘?；蛘?，純化在半制備性Shimadzu LC-8A HPLC上進(jìn)行，其配有Waters

柱(C18，5μm，100mmx19mm)的Shimadzu SPD-10AUV-vis.-檢測器。梯度為在MilliQWater中的乙腈/0.1％三氟乙酸，在20分鐘內(nèi)從35％運(yùn)行至60％乙腈。流速10ml/分鐘?；蛘咴谘b有UV檢測的Agilent 1100儀器上進(jìn)行制備性HPLC。柱Kromasil-C18，20x250mm，10μm。用流動(dòng)相乙腈/MilliQ Water/甲酸(46/54/0.1)進(jìn)行等度洗脫。流速19ml/min。
通常在溶劑或溶劑的混合物(如醚、乙酸乙酯/庚烷和甲醇/水)中進(jìn)行重結(jié)晶。
使用以下縮寫 DCM＝二氯甲烷； de＝非對映體過量； DIPCl＝β-氯二異松蒎烯基硼烷(β-chlorodiisopinocamphenylborane，DIP-ChlorideTM)； DIPEA＝N，N-二異丙基乙胺； DMF＝N，N-二甲基甲酰胺； DMSO＝二甲基亞砜； ee＝對映體過量； NCS＝N-氯琥珀酰亞胺； NMP＝1-甲基-2-吡咯烷酮； THF＝四氫呋喃； aq＝水溶液；和 conc＝濃縮的。
所用的原料是商業(yè)來源獲得的或根據(jù)文獻(xiàn)操作制備的，并具有與報(bào)道一致的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
所制備的原料的實(shí)例如下 (2R)-2-[(2-氨基-5-巰基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇WO 02/076990(實(shí)施例1-4)； 5-(芐基硫基)-7-氯[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-胺WO 00/09511(實(shí)施例6和7)； 5-氟-吡啶-2-甲腈WO 2005/066155(實(shí)施例2)； 1-(3-氟吡啶-4-基)乙醇Marsais，F(xiàn).et al.Tetrahedron 1983，39，2009-2021(實(shí)施例3)； 2-乙?；?吡啶-4-甲腈Citterio et al.J.Chem.Res.Synopses 1982，10，272-273(實(shí)施例5)； 1-(6-氯吡啶-3-基)乙酮Lee，C.et al.J.Med.Chem.2001，44，2133(實(shí)施例6和7)。
在隨后的一般方法中，R3和R4如式(I)中所定義；Py表示任選被取代的吡啶基，以及LG表示離去基。
一般方法A
在氮?dú)鈿夥罩袑⑴饸浠c(0.1當(dāng)量)、DIPEA(1.5當(dāng)量)和化合物(III)(1.2當(dāng)量)加到化合物(V)(1.0當(dāng)量)/DMSO中。將形成的反應(yīng)混合物在40℃攪拌直到反應(yīng)結(jié)束(由LC-MS、HPLC或TLC監(jiān)測)。將混合物倒入冰水中，然后將產(chǎn)物用DCM或EtOAc萃取。將合并的有機(jī)相干燥，然后真空濃縮。必要時(shí)，使用制備性HPLC或經(jīng)快速柱色譜對粗產(chǎn)物進(jìn)行純化。
一般方法B
將濃HCl(2.5mL/mmol化合物(VI))加到化合物(VI)(1.0當(dāng)量)/CH3CN中。將反應(yīng)混合物在冰浴中冷卻，然后滴加溶于最小量水中的亞硝酸鈉(2.0當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物在0℃攪拌直到反應(yīng)結(jié)束(由LC-MS、HPLC或TLC監(jiān)測)，然后倒入冰水中，用碳酸氫鈉中和，然后用DCM或EtOAc萃取。將合并的有機(jī)相干燥，然后真空濃縮得到產(chǎn)物。
一般方法C
將溶于甲醇中的氫氧化鉀(2.0當(dāng)量)滴加到化合物(VII)(1.0當(dāng)量)于甲醇中的冷(0℃)溶液中。將形成的混合物在0℃攪拌直到反應(yīng)結(jié)束(由LC-MS、HPLC或TLC監(jiān)測)。蒸出溶劑，產(chǎn)物不經(jīng)進(jìn)一步純化就用于下一步。
一般方法D
將濃HCl(1.0當(dāng)量)溶液加到化合物(IV)(1.0當(dāng)量)于1，4-二氧雜環(huán)己烷中的冷(0℃)溶液中。將形成的混合物在40℃攪拌，直到反應(yīng)結(jié)束(由LC-MS、HPLC或TLC監(jiān)測)。將反應(yīng)混合物用NaHCO3(水溶液)中和，然后蒸出二氧雜環(huán)己烷。將殘余物溶于DCM或EtOAc中，用鹽水洗滌，干燥并真空濃縮。必要時(shí)，使用制備性HPLC或經(jīng)快速柱色譜對粗產(chǎn)物進(jìn)行純化。
一般方法E1
在0℃和在氮?dú)鈿夥罩?，將化合?VIII)(1.0當(dāng)量)于THF中的溶液加到(+)-DIPCl中(得到化合物(IX))或加到(-)-DIPCl中(得到化合物(X))(1.5當(dāng)量)/THF中。使反應(yīng)混合物緩慢達(dá)到室溫并過夜。蒸出溶劑，接著加入Et2O和二乙醇胺(2.2當(dāng)量)。對混合物進(jìn)行攪拌，直到反應(yīng)結(jié)束(由LC-MS、HPLC或TLC監(jiān)測)。濾出形成的沉淀，用Et2O洗滌，然后將濾液真空濃縮。必要時(shí)，使用制備性HPLC或經(jīng)快速柱色譜對粗產(chǎn)物進(jìn)行純化。
一般方法E2 將(R)-(+)-2-甲基-CBS-氧雜氮雜硼雜戊環(huán)((R)-(+)-2-methyl-CBS-oxazaborolidine，1M的甲苯溶液，0.1-1當(dāng)量)溶于THF中，然后冷卻至0℃。滴加硼烷·二甲硫醚(Borane-methyl sulfide complex，2M的THF溶液，1當(dāng)量)，然后將反應(yīng)混合物攪拌1h。將反應(yīng)混合物冷卻至-10℃，然后歷時(shí)0.5h滴加溶于THF中的化合物(VIII)(1當(dāng)量)。將形成的混合物攪拌1h或直到反應(yīng)結(jié)束，然后將溫度緩慢升至10℃。加入1M HCl水溶液以淬滅反應(yīng)。加入飽和NaHCO3水溶液，直到pH約為8。將產(chǎn)物用DCM萃取。合并的有機(jī)萃取物經(jīng)Na2SO4干燥，然后真空濃縮得到化合物(X)。產(chǎn)物任選經(jīng)柱色譜法進(jìn)行純化。
一般方法F1
在0℃和在氬氣氣氛中，將三苯基膦(1.3當(dāng)量)/THF加到NCS(1.3當(dāng)量)/THF中。將形成的混合物在環(huán)境溫度攪拌30分鐘。在0℃加入化合物(IX)或化合物(XI)(1當(dāng)量)，然后將反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度攪拌直到反應(yīng)結(jié)束(由LC-MS、HPLC或TLC監(jiān)測)。蒸出溶劑，接著加入己烷，然后經(jīng)過濾除去沉淀。將濾液真空濃縮，必要時(shí)，使用制備性HPLC或經(jīng)快速柱色譜對粗產(chǎn)物進(jìn)行純化。
一般方法F2 將氰尿酰氯(Cyanuric chloride，0.6當(dāng)量)溶于乙酸乙酯中。加入DMF(1.5當(dāng)量)，然后將混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃。將化合物(IX)或化合物(X)(1當(dāng)量)溶于乙酸乙酯中，然后在10分鐘內(nèi)滴加到反應(yīng)混合物中。將形成的混合物在室溫?cái)嚢柽^夜。加入異丙醇(約0.25mL/mmol化合物(IX)或化合物(X))。濾出沉淀，然后用EtOAc洗滌。將濾液濃縮，得到標(biāo)題化合物化合物(XI)或化合物(XII)。
一般方法G
將硼氫化鈉(1至2當(dāng)量)加到化合物(II)(1.0當(dāng)量)/DMSO中。一旦停止冒泡，加入化合物(III)(2-2.5當(dāng)量)。將形成的反應(yīng)混合物在40℃攪拌直到反應(yīng)結(jié)束(由LC-MS、HPLC或TLC監(jiān)測)。必要時(shí)，使用制備性HPLC或經(jīng)快速柱色譜進(jìn)行純化。
實(shí)施例1 5-{[(1S)-1-(5-氯吡啶-2-基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮
a)1-(5-氯吡啶-2-基)乙酮
在氮?dú)鈿夥罩袑?-氯吡啶-2-甲腈(10.7g，77mmol)溶于乙醚(65mL)和THF(35mL)中。將混合物冷卻，直到內(nèi)部溫度為-63℃。歷時(shí)30分鐘滴加甲基溴化鎂(3M的THF溶液，35mL，105mmol)。然后將反應(yīng)混合物在-60℃攪拌45分鐘，然后溫?zé)嶂潦覝亍＜尤?0mL THF以溶解任何沉淀的物質(zhì)。在室溫反應(yīng)1h后，經(jīng)HPLC判斷反應(yīng)結(jié)束。加入2M鹽酸(水溶液，100mL)，然后將反應(yīng)混合物攪拌4h。然后用碳酸氫鈉將pH調(diào)節(jié)至7。分離各相，然后用DCM從水相中萃取兩次得到產(chǎn)物。合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鈉干燥，然后真空濃縮。產(chǎn)物經(jīng)快速柱色譜(洗脫劑庚烷∶乙酸乙酯梯度)純化，得到7.9g(64％收率)標(biāo)題化合物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δppm 8.62(m，1H)；8.00(m，1H)；7.80(m，1H)；2.70(s，3H)。
b)(1S)-1-(5-氯吡啶-2-基)乙醇
標(biāo)題化合物是由一般方法E2，從1-(5-氯吡啶-2-基)乙酮(780mg，5mmol)開始制備的。經(jīng)快速柱色譜純化，得到695mg(88％收率)標(biāo)題化合物，92％ee。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δppm 8.47(s，1H)；7.65(d，1H)；7.26(d，1H)；4.87(q，1H)；3.87(br s，1H)；1.47(d，3H)；MS(ESI)m/z 140和142[M+1]+。
c)5-氯-2-[(1R)-1-氯乙基]吡啶
標(biāo)題化合物是由一般方法F2，從(1S)-1-(5-氯吡啶-2-基)乙醇(695mg，4.41mmol)開始制備的。粗產(chǎn)物未經(jīng)純化就用于下一步。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 8.46(d，1H)，7.64(dd，1H)，7.41(d，1H)，5.08(q，1H)，1.80(d，3H)；MS(ESI)m/z 176和178[M+1]+。
d)(2R)-2-[(2-氨基-5-{[(1S)-1-(5-氯吡啶-2-基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇
標(biāo)題化合物是由一般方法A，從(2R)-2-[(2-氨基-5-巰基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇(823mg，2.75mmol)和5-氯-2-[(1R)-1-氯乙基]吡啶(＜4.4mmol)開始制備的。經(jīng)快速柱色譜(洗脫劑DCM∶甲醇梯度)純化，得到350mg(30％收率)標(biāo)題化合物。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 8.49(d，1H)，7.79(dd，1H)，7.66(d，1H)，5.22(q，1H)，4.46(br s，1H)，3.40-3.57(m，2H)，1.66-1.78(m，4H)，1.40-1.61(m，2H)，0.93-1.03(m，6H)；MS(ESI)m/z 439和441[M+1]+。
e)(2R)-2-[(2-氯-5-{[(1S)-1-(5-氯吡啶-2-基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇
標(biāo)題化合物是由一般方法B，從(2R)-2-[(2-氨基-5-{[(1S)-1-(5-氯吡啶-2-基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇(340mg，0.77 mmol)開始制備的。
MS(ESI)m/z 458和460[M+1]+。
f)(2R)-2-[(5-{[(1S)-1-(5-氯吡啶-2-基)乙基]硫基}-2-甲氧基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇
標(biāo)題化合物是使用一般方法C，從先前步驟得到的(2R)-2-[(2-氯-5-{[(1S)-1-(5-氯吡啶-2-基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇制備的，除了將反應(yīng)混合物加熱至50℃并持續(xù)1h。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)混合物用水稀釋，產(chǎn)物用DCM萃取(四次)。合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鈉干燥，然后真空濃縮，得到標(biāo)題化合物，其未經(jīng)純化就用于下一步。
MS(ESI)m/z 453和455[M+1]+。
g)5-{[(1S)-1-(5-氯吡啶-2-基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮
標(biāo)題化合物是使用一般方法D，從先前步驟得到的(2R)-2-[(5-{[(1S)-1-(5-氯吡啶-2-基)乙基]硫基}-2-甲氧基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇制備的，不同的是將反應(yīng)混合物在50℃攪拌2.5h，然后在室溫?cái)嚢柽^夜。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)混合物用鹽水稀釋，然后用DCM萃取(三次)。合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮。產(chǎn)物經(jīng)快速色譜(洗脫劑DCM∶甲醇梯度)純化，得到160mg。經(jīng)制備性HPLC(柱Chiralcel OJ；洗脫劑乙醇/庚烷30/70；流速12ml/min)進(jìn)一步純化，得到82mg標(biāo)題化合物。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 8.24(d，1H)，7.56(dd，1H)，7.38(d，1H)，4.90(q，1H)，4.19(br s，1H)，3.16-3.30(m，2H)，1.39-1.51(m，4H)，1.15-1.34(m，2H)，0.68-0.76(m，6H)；1H NMR(DMSO-d6)δppm12.36(br s，1H)，8.57(d，1H)，7.86(dd，1H)；7.57(d，1H)；7.23(d，1H)；5.03(q，1H)；4.69(t，1H)；4.29(br s，1H)；3.40-3.25(m，2H)，1.66(d，3H)，1.63-1.52(m，1H)；1.48-1.32(m，2H)，0.88(d，3H)，0.85(d，3H)；MS(ESI)m/z 440和442[M+1]+，438和440[M-1]+。
實(shí)施例2 5-{[(1S)-1-(5-氟吡啶-2-基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮
a)1-(5-氟吡啶-2-基)乙酮
在氮?dú)鈿夥罩?，?-氟-吡啶-2-甲腈(29g，240mmol)溶于THF(150mL)中。將反應(yīng)混合物冷卻至內(nèi)部溫度為-64℃。歷時(shí)40分鐘滴加甲基溴化鎂(3M的THF溶液，105mL，315mmol)。將反應(yīng)混合物在-65℃攪拌1.5h，然后溫?zé)嶂潦覝?。加入THF(50mL)，然后將混合物再攪拌3h。加入2M鹽酸(水溶液，100mL)，直到混合物為微酸性，然后將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^夜。然后加入碳酸氫鈉以中和反應(yīng)混合物。分離各相，水相用DCM萃取。合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)快速柱色譜純化，得到18g(55％收率)標(biāo)題化合物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δppm 8.50(m，1H)；8.10(m，1H)；7.52(m，1H)；2.70(s，3H)。
b)(1S)-1-(5-氟吡啶-2-基)乙醇
標(biāo)題化合物是由一般方法E2，從1-(5-氟吡啶-2-基)乙酮(3.18g，22.9mmol)開始制備的。經(jīng)快速柱色譜純化，得到2.73 g(84％收率)標(biāo)題化合物，84％ee。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δppm 8.38(m，1H)；7.5-7.2(m，2H)；4.89(q，1H)；3.9(br s，1H)；1.49(d，3H)。
c)2-[(1R)-1-氯乙基]-5-氟吡啶
具有80％ee的標(biāo)題化合物是由一般方法F2，從(1S)-1-(5-氟吡啶-2-基)乙醇(720mg，5.1mmol)開始制備的。粗產(chǎn)物未經(jīng)純化就用于下一步。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δppm 8.44-8.40(m，1H)；7.6-7.4(m，2H)；5.16(q，1H)，1.86(d，3H)。
d)(2R)-2-[(2-氨基-5-{[(1S)-1-(5-氟吡啶-2-基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇
標(biāo)題化合物是由一般方法A，從(2R)-2-[(2-氨基-5-巰基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇(940mg，3.1mmol)和2-[(1R)-1-氯乙基]-5-氟吡啶(0.81g，5.1mmol)開始制備的。產(chǎn)物經(jīng)快速柱色譜純化，得到0.75g(56％收率)標(biāo)題化合物。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.51(d，1H)，7.98(s，2H)，7.65(dt，1H)；7.58(dd，1H)，6.88(d，1H)；5.12(q，1H)；4.66(t，1H)；4.27(br s，1H)；3.41-3.27(m，2H)，1.66(d，3H)，1.65-1.55(m，1H)；1.48-1.35(m，2H)，0.88(d，3H)，0.85(d，3H)；MS(ESI)m/z 423[M+1]+。
e)(2R)-2-[(2-氯-5-{[(1S)-1-(5-氟吡啶-2-基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇
標(biāo)題化合物是使用一般方法B，從(2R)-2-[(2-氨基-5-{[(1S)-1-(5-氟吡啶-2-基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇(750mg，1.77mmol)開始制備的。
MS(ESI)m/z 442和444[M+1]+。
f)(2R)-2-[(5-{[(1S)-1-(5-氟吡啶-2-基)乙基]硫基}-2-甲氧基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇
標(biāo)題化合物是使用一般方法C，從先前步驟得到的(2R)-2-[(2-氯-5-{[(1S)-1-(5-氟吡啶-2-基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇制備的，不同的是將反應(yīng)混合物加熱至50℃并持續(xù)1.5h。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)混合物用水和鹽水稀釋，產(chǎn)物用氯仿萃取(三次)。合并的有機(jī)萃取液經(jīng)硫酸鎂干燥，然后真空濃縮，得到標(biāo)題化合物，其未經(jīng)純化就使用。
MS(ESI)m/z 438[M+1]+。
g)5-{[(1S)-1-(5-氟吡啶-2-基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮
標(biāo)題化合物是使用一般方法D，從先前步驟得到的(2R)-2-[(5-{[(1S)-1-(5-氟吡啶-2-基)乙基]硫基}-2-甲氧基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇制備的，不同的是將反應(yīng)混合物在50℃攪拌3h。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)混合物用鹽水稀釋，然后用DCM萃取(三次)。合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。產(chǎn)物經(jīng)快速色譜純化(洗脫劑DCM∶甲醇梯度)。經(jīng)制備性HPLC(柱Chiralcel OJ；洗脫劑乙醇；流速8mL/min)進(jìn)一步純化，得到13mg標(biāo)題化合物。
1H NMR(CD3OD)δppm 8.19(d，1H)，7.46(dd，1H)，7.36(dt，1H)，4.97(q，1H)，4.26(br s，1H)，3.23-3.34(m，2H)，1.44-1.55(m，4H)，1.19-1.37(m，2H)，0.75(dd，6H)；1H NMR(DMSO-d6)δppm 12.36(br s，1H)，8.52(d，1H)，7.66(dt，1H)；7.60(dd，1H)，7.23(d，1H)；5.07(q，1H)；4.69(t，1H)；4.30(br s，1H)；3.40-3.26(m，2H)，1.67(d，3H)，1.64-1.53(m，1H)；1.48-1.33(m，2H)，0.88(d，3H)，0.85(d，3H)；MS(ESI)m/z 424[M+1]+。
實(shí)施例3 5-{[1-(3-氟吡啶-4-基)乙基]硫基}-7-{[1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮
d)4-(1-氯乙基)-3-氟吡啶
將1-(3-氟吡啶-4-基)乙醇(0.8g，5.7mmol)用亞硫酰氯(5mL)處理，然后將形成的混合物加熱至80℃并持續(xù)2h。加入水(10mL)和飽和碳酸氫鈉(水溶液，10mL)。將產(chǎn)物用DCM萃取(三次)。合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)快速柱色譜(洗脫劑庚烷∶乙酸乙酯梯度)純化，得到0.36g(39％收率)標(biāo)題化合物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δppm 8.45(m，2H)，7.50(m，1H)，5.34(q，1H)，1.83(d，3H)。
b)(2R)-2-[(2-氨基-5-{[1-(3-氟吡啶-4-基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇
標(biāo)題化合物(370mg，47％收率)是使用一般方法A，從(2R)-2-[(2-氨基-5-巰基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇(560mg，1.87mmol)開始制備的。
MS(ESI)m/z 423[M+1]+。
c)(2R)-2-[(2-氯-5-{[1-(3-氟吡啶-4-基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[45-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇
標(biāo)題化合物是使用一般方法B，從(2R)-2-[(2-氨基-5-{[1-(3-氟吡啶-4-基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇(370mg，0.84mmol)開始制備的。
d)(2R)-2-[(5-{[1-(3-氟吡啶-4-基)乙基]硫基}-2-甲氧基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇
標(biāo)題化合物是使用一般方法C，從先前步驟得到的(2R)-2-[(2-氯-5-{[1-(3-氟吡啶-4-基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇制備的，不同的是將反應(yīng)混合物加熱至50℃并持續(xù)1.5h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)混合物用水和鹽水(1∶1)稀釋，產(chǎn)物用DCM萃取(兩次)。然后用氯化銨將水相的pH調(diào)節(jié)至7，產(chǎn)物用DCM萃取(兩次)。合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮，得到標(biāo)題化合物。
e)5-{[1-(3-氟吡啶-4-基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮
標(biāo)題化合物是使用一般方法D，從先前步驟得到的(2R)-2-[(5-{[1-(3-氟吡啶-4-基)乙基]硫基}-2-甲氧基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇制備的，不同的是將反應(yīng)混合物在50℃攪拌2h。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液和水(1∶1)稀釋，然后用DCM萃取(三次)。合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮。產(chǎn)物經(jīng)快速柱色譜純化(洗脫劑庚烷∶乙酸乙酯梯度)，得到標(biāo)題化合物，其為非對映異構(gòu)體的混合物(194mg)。
MS(ESI)m/z424[M+1]+。
實(shí)施例4 5-{[1S)-1-(3-氟吡啶-2-基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮
a)1-(6-溴-3-氟-吡啶-2-基)乙酮
在室溫和在氮?dú)鈿夥罩袑?-溴-5-氟-吡啶(11g，62.5mmol)溶于乙醚中。將反應(yīng)混合物冷卻直到內(nèi)部溫度為-66℃。歷時(shí)0.5h滴加丁基鋰(2.5M的己烷溶液，26mL，65mmol)。將形成的反應(yīng)混合物在-65℃攪拌1h。歷時(shí)10分鐘加入N，N-二甲基乙酰胺(6.5mL，70mmol)，然后將反應(yīng)混合物在-65℃攪拌2h。加入1M鹽酸水溶液(50mL)，然后將混合物溫?zé)嶂潦覝?。用額外的鹽酸將pH調(diào)節(jié)至7。水相用乙醚萃取3次。合并的有機(jī)相用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，并真空濃縮。經(jīng)快速柱色譜(洗脫劑庚烷∶乙醚梯度)純化，得到4.6g(34％收率)標(biāo)題化合物。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 8.0-7.8(m，2H)；2.57(s，3H)；MS(ESI)m/z 218和220[M+1]+。
b)(1S)-1-(6-溴-3-氟-吡啶-2-基)乙醇
標(biāo)題化合物是使用一般方法E2，從1-(6-溴-3-氟-吡啶-2-基)乙酮(1.76g，8.19mmol)開始制備的。產(chǎn)物經(jīng)快速柱色譜(洗脫劑庚烷∶乙酸乙酯梯度)純化，得到1.31g(73％收率)標(biāo)題化合物，80％ee。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δppm 7.38(m，1H)；7.26(m，1H)；5.06(q，1H)；3.38(br s，1H)；1.47(d，3H)；MS(ESI)m/z 220和222[M+1]+，m/z 202[M-H2O]+。
c)(1S)-1-(3-氟-吡啶-2-基)乙醇
將(1S)-1-(6-溴-3-氟-吡啶-2-基)乙醇(1.3g，5.9mmol)、三乙胺(1.6mL，11.5mmol)和鈀/碳(0.64g，0.34mmol)在DCM(25mL)中混合。將燒瓶抽真空/充入氫氣，重復(fù)此操作4次，然后在室溫置于2.5大氣壓氫氣下24h。對混合物進(jìn)行過濾，固體用DCM洗滌。濾液用水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)快速柱色譜(洗脫劑DCM∶甲醇梯度)純化，得到0.54g(65％收率)標(biāo)題化合物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δppm 8.38(m，1H)；7.39(m，1H)；7.26(m，1H)；5.11(q，1H)；4.16(br s，1H)；1.49(d，3H)。
d)2-((R)-1-氯乙基)-3-氟-吡啶
標(biāo)題化合物(0.24g)是使用一般方法F2，從(1S)-1-(3-氟-吡啶-2-基)乙醇(254mg，1.8mmol)開始制備的。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δppm 8.46(m，1H)；7.47(m，1H)；7.34(m，1H)；5.48(q，1H)，1.94(d，3H)；MS(ESI)m/z 160和162[M+1]+。
e)(2R)-2-[(2-氨基-5-{[(1S)-1-(3-氟吡啶-2-基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇
標(biāo)題化合物是使用一般方法A，從(2R)-2-[(2-氨基-5-巰基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇(348mg，1.16mmol)和2-((R)-1-氯乙基)-3-氟-吡啶(240mg，1.5mmol)開始制備的。經(jīng)快速柱色譜(洗脫劑DCM∶甲醇梯度)純化，得到190mg(47％收率)標(biāo)題化合物，非對映體過量60％。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.40(dt，1H)，7.98(s，2H)，7.70(m，1H)，7.40(m，1H)；6.92(d，1H)；5.45(q，1H)；4.65(t，1H)；4.27(br s，1H)；3.45-3.30(m，2H)，1.69(d，3H)，1.66-1.58(m，1H)，1.50-1.35(m，2H)，0.88(d，3H)，0.85(d，3H)；MS(ESI)m/z 423[M+1]+。MS(ESI)m/z 423[M+1]+。
f)(2R)-2-[(2-氯-5-{[(1S)-1-(3-氟吡啶-2-基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇
標(biāo)題化合物是使用一般方法B，從(2R)-2-[(2-氨基-5-{[(1S)-1-(3-氟吡啶-2-基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇(135mg，0.32mmol)開始制備的。
MS(ESI)m/z 442和444[M+1]+。
g)(2R)-2-[(5-{[(1S)-1-(3-氟吡啶-2-基)乙基]硫基}-2-甲氧基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇
標(biāo)題化合物是使用一般方法C，從上一步得到的(2R)-2-[(2-氯-5-{[(1S)-1-(3-氟吡啶-2-基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇制備的，不同的是將反應(yīng)混合物加熱至50℃并持續(xù)1.5h。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)混合物用水和鹽水(2∶1)稀釋，產(chǎn)物用氯仿萃取(三次)。合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮，得到標(biāo)題化合物。
MS(ESI)m/z 438[M+1]+。
h)5-{[(1S)-1-(3-氟吡啶2-基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮
標(biāo)題化合物是使用一般方法D，從(2R)-2-[(5-{[(1S)-1-(3-氟吡啶-2-基)乙基]硫基}-2-甲氧基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇制備的，不同的是將反應(yīng)混合物加熱至50℃并持續(xù)1.5h。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)混合物用鹽水稀釋，然后用DCM萃取(三次)。合并的有機(jī)萃取物經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮。產(chǎn)物先后經(jīng)快速柱色譜(洗脫劑DCM∶甲醇梯度)和制備性HPLC純化，得到20mg標(biāo)題化合物。
1H NMR(DMSO-d6)δppm 12.37(br s，1H)，8.41(dt，1H)，7.72(m，1H)；7.42(m，1H)；7.27(br s，1H)；5.43(q，1H)；4.67(t，1H)；4.30(br s，1H)；3.44-3.30(m，2H)，1.70(d，3H)，1.65-1.55(m，1H)；1.52-1.32(m，2H)，0.89(d，3H)，0.86(d，3H)；MS(ESI)m/z 424[M+1]+。
實(shí)施例5 2-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}-2-氧代-2，3-二氫[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}吡啶-4-甲腈
a)2-((S)-1-羥基-乙基)-吡啶-4-甲腈
標(biāo)題化合物是根據(jù)一般方法E1，從2-乙?；?吡啶-4-甲腈(1.42g，9.72mmol)和(-)-DIPCl(4.67g，14.57mmol)開始制備的。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm 8.72(d，1H)，7.62(s，1H)，7.44(dd，1H)，4.96(q，1H)，1.54(d，3H)。
b)2-((R)-1-氯-乙基)-吡啶-4-甲腈
標(biāo)題化合物(32.2mg，0.19mmol)是根據(jù)一般方法F1，從2-((S)-1-羥基-乙基)-吡啶-4-甲腈(400mg，2.7mmol)開始制備的。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm 8.74(d，1H)，7.76(s，1H)，7.46(dd，1H)，5.16(q，1H)，1.88(d，3H)。
c)(2R)-2-{2-氯-5-[2-氯-7-((1R)-1-羥甲基-3-甲基-丁基氨基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基聯(lián)硫基]-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氨基}-4-甲基-戊-1-醇
在0℃，將亞硝酸鈉(5.19g，75mmol)于水(25mL)中的溶液滴加到(2R)-2-[[2-氨基-5-巰基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基]氨基]-4-甲基戊-1-醇(7.50g，25mmol)于濃鹽酸(150mL)和乙腈(150mL)中的溶液中。將反應(yīng)混合物在0-5℃攪拌18h，然后倒在冰(500mL)上，用乙酸乙酯萃取。濾出任何剩余固體。合并的有機(jī)相先后用鹽水和飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌。將有機(jī)相干燥并蒸發(fā)，然后向其中加入先前濾出的固體。將全部固體在乙酸乙酯中漿化，之后過濾得到標(biāo)題化合物(6.3g，80％收率)。
1H NMR(DMSO-d6)δppm 8.25(d，2H)，4.19(m，2H)，3.35(m，4H)，1.40(m，4H)，1.21(m，2H)，0.68(d，6H)，0.51(d，6H)；MS(ESI)m/z 635[M+1]+。
d)(2R)-2-{5-[7-((1R)-1-羥甲基-3-甲基-丁基氨基)-2-甲氧基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基聯(lián)硫基]-2-甲氧基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氨基}-4-甲基-戊-1-醇
在0℃，將氫氧化鉀(0.53g，9.4mmol)于甲醇(5mL)中的溶液加到(2R)-2-{2-氯-5-[2-氯-7-((1R)-1-羥甲基-3-甲基-丁基氨基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基聯(lián)硫基]-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氨基}-4-甲基-戊-1-醇(3.0g，4.7mmol)于甲醇(200mL)中的溶液中。將反應(yīng)混合物在0-5℃維持18h。蒸出溶劑，殘余物用甲醇/乙酸乙酯(1∶1)吸收。將該溶液快速進(jìn)行色譜(洗脫劑乙酸乙酯)純化，得到標(biāo)題化合物(2.0g，68％收率)。
MS(ESI)m/z 627[M+1]+。
e)5-[7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}-[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮-5-基聯(lián)硫基]-7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮
將濃鹽酸(20mL)和水(20mL)的混合物加到(2R)-2-{5-[7-((1R)-1-羥甲基-3-甲基-丁基氨基)-2-甲氧基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基聯(lián)硫基]-2-甲氧基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氨基}-4-甲基-戊-1-醇(1.5g，2.4mmol)于1，4-二氧雜環(huán)己烷(20mL)中的溶液中。然后將溶液在45℃攪拌18h。蒸出溶劑，殘余物用乙酸乙酯吸收。經(jīng)過濾收集任何不溶的殘余物。使濾液進(jìn)行快速柱色譜(洗脫劑乙酸乙酯∶甲醇95∶5)。將從色譜法收集的固體殘余物和產(chǎn)物匯集在一起，得到標(biāo)題化合物(600mg，42％收率)。
1H NMR(DMSO-d6)δppm 12.45(s，2H)，7.33(d，2H)，4.62(t，2H)，4.17(brs，2H)，1.48-1.31(m，4H)，1.25-1.14(m，2H)，0.72(d，6H)，0.56(d，6H)；MS(ESI)m/z 599[M+1]+。
f)2-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}-2-氧代-2，3-二氫[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}吡啶-4-甲腈
標(biāo)題化合物是根據(jù)一般方法G，并加入DIPEA(2當(dāng)量)制備的。從5，5′-聯(lián)硫基雙[7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮](64mg，0.096mmol)和2-((R)-1-氯-乙基)-吡啶-4-甲腈(32mg，0.192mmol)開始，獲得標(biāo)題化合物(39mg)，其為非對映異構(gòu)體混合物。經(jīng)制備性HPLC(柱Kromasil-C18)純化，得到15mg(36％收率)標(biāo)題化合物，98％de。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm 8.71(d，1H)，7.92(s，1H)，7.56(d，1H)，5.17(q，1H)，4.4(s，1H)，3.40-3.52(m，2H)，1.72(d 3H)，1.60-1.71(m 1H)，1.38-1.54(m，2H)，0.90-0.98(m 6H)；MS(ESI+)m/z 431[M+H]+。
實(shí)施例6 5-{[1S)-1-(6-氯吡啶-3-基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羥甲基)丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮
a)(2R)-2-{[2-氨基-5-(芐硫基)[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基]氨基}戊-1-醇
將5-(芐硫基)-7-氯[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-胺(6.0g，19.4mmol)溶于NMP(30mL)中。加入DIPEA(8.4mL，48.5mmol)和2-氨基-(2R)-1-戊醇(3.5g，33.9mmol)，然后將混合物加熱至110℃并持續(xù)4天。冷卻至室溫后，將混合物倒入水(200mL)中。過濾收集沉淀出的產(chǎn)物，用水洗滌，不經(jīng)進(jìn)一步純化就用于下一步(7.0g，97％收率)。
MS(ESI+)m/z 376[M+H]+。
b)(2R)-2-[(2-氨基-5-巰基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]戊-1-醇
將圓底燒瓶配備干冰-乙醇冷凝器，然后浸入干冰-乙醇冷卻浴中。使氨(250mL)冷凝進(jìn)入燒瓶中，接著加入(2R)-2-{[2-氨基-5-(芐基硫基)[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基]氨基}戊-1-醇(6.8g，18.1mmol)。使形成的混合物溫?zé)嶂?33℃，然后加入小塊形式的金屬鈉直到出現(xiàn)藍(lán)色并持續(xù)30秒。然后通過加入一匙固體氯化銨將反應(yīng)淬滅。蒸出氨，然后將水(250mL)加到殘余物中。將所得的混合物用1M鹽酸(水溶液)中和。過濾收集沉淀出的產(chǎn)物，用水洗滌，然后真空干燥，得到4.15g(80％收率)標(biāo)題化合物。
MS(ESI+)m/z 286[M+H]+。
c)(2R)-2-{2-氯-5-[2-氯-7-((1R)-1-羥甲基丁基氨基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基聯(lián)硫基]-噻唑[4，5-d]嘧啶-7-基氨基}-戊-1-醇
將(2R)-2-[(2-氨基-5-巰基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]戊-1-醇(4.0g，14mmol)溶于乙腈(100ml)和濃鹽酸(150mL)中。將亞硝酸鈉(1.93g，28mmol)溶于水中(10mL)然后在0℃加入。將反應(yīng)混合物置于0℃持續(xù)2天直到經(jīng)LCMS監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束。將反應(yīng)混合物倒在冰上，然后過濾收集沉淀出的產(chǎn)物。將固體真空干燥得到3.3g(78％收率)標(biāo)題化合物。
1H NMR(DMSO-d6)δppm 8.27(d，1H)，4.32-3.81(m，2H)，3.50-3.23(m，2H)，1.37-1.19(m，2H)，1.10-0.93(m，1H)，0.94-0.78(m，1H)，0.49(t，3H)；MS(ESI)m/z 607[M+1]+。
d)(2R)-2-{5-[7-((1R)-1-羥甲基丁基氨基)-2-甲氧基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基聯(lián)硫基]-2-甲氧基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氨基}-戊-1-醇
在0℃，將氫氧化鉀(495mg，8.8mmol)加到(2R)-2-{2-氯-5-[2-氯-7-((1R)-1-羥甲基丁基氨基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基聯(lián)硫基]-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氨基}-戊-1-醇(2.68g，4.41mmol)于甲醇(200mL)中的溶液中。將反應(yīng)混合物在0℃攪拌過夜，然后蒸出甲醇。將殘余物倒入水中，然后過濾收集形成的沉淀。潮濕的粗產(chǎn)物不經(jīng)任何進(jìn)一步純化就用于下一步。
MS(ESI)m/z 599[M+1]+。
e)5-[7-{[(1R)-1-(羥甲基)]氨基}-[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮-5-基聯(lián)硫基]-7-{[(1R)-1-(羥甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮
將從先前步驟得到的粗制(2R)-2-{5-[7-((1R)-1-羥甲基丁基氨基)-2-甲氧基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基聯(lián)硫基]-2-甲氧基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氨基}-戊-1-醇(4.41mmol)溶于1，4-二氧雜環(huán)己烷(100mL)中。加入濃鹽酸(2mL)和水(2mL)，然后將形成的混合物在45℃攪拌過夜。真空蒸發(fā)溶劑，通過加入水使產(chǎn)物沉淀出。過濾收集沉淀，然后用水洗滌。粗產(chǎn)物經(jīng)快速柱色譜(洗脫劑DCM∶乙酸乙酯梯度)純化，得到1.5g(兩步收率為59％)標(biāo)題化合物。
1H NMR(DMSO-d6)δppm 12.46(s，1H)，7.33(d，1H)，4.61(t，1H)，4.10(br.s.，1H)，3.35(t，2H)，1.37-1.20(m，2H)，1.13-1.10(m，1H)，0.96-0.82(m，1H)，0.59(t，3H)；MS(ESI)m/z 571[M+1]+。
f)(1S)-1-(6-氯吡啶-3-基)乙醇
標(biāo)題化合物是根據(jù)一般方法E1，使用1-(6-氯吡啶-3-基)乙酮(0.80g，5.14mmol)制備的，得到0.71g(88％收率)標(biāo)題化合物。
1H NMR(CDCl3)δppm 8.40-8.28(m，1H)，7.75-7.63(m，1H)，7.35-7.24(m，1H)，5.04-4.79(m，1H)，1.63-1.45(m，3H)；MS(ESI)m/z 158和160[M+1]+。
g)2-氯-5-[(1R)-1-氯乙基]吡啶
標(biāo)題化合物是根據(jù)一般方法F1，使用(1S)-1-(6-氯吡啶-3-基)乙醇(0.20g，1.27mmol)制備的，得到0.16g(72％收率)標(biāo)題化合物。
1H NMR(CDCl3)δppm 8.45-8.35(m，1H)，7.79-7.70(m，1H)，7.39-7.29(m，1H)，5.07(q，1H)，1.85-1.78(m，3H)；MS(ESI)m/z 176和178[M+1]+。
h)5-{[(1S)-1-(6-氯吡啶-3-基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羥甲基)丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮
標(biāo)題化合物是根據(jù)一般方法G，使用5-[7-{[(1R)-1-(羥甲基)]氨基}-[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮-5-基聯(lián)硫基]-7-{[(1R)-1-(羥甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮(0.10g，0.175mmol)、2-氯-5-[(1R)-1-氯乙基]吡啶(0.069g，0.39mmol)和硼氫化鈉(0.040g，1.05mmol)制備的，得到0.055g(37％收率)標(biāo)題化合物。
1H NMR(CDCl3)δppm 8.52-8.38(m，1H)，7.87-7.72(m，1H)，7.30-7.26(m，1H)，4.91-4.81(m，1H)，4.74-4.65(m，1H)，4.29-4.17(m，1H)，3.68-3.52(m，2H)，1.69-1.64(m，3H)，1.56-1.46(m，2H)，1.46-1.32(m，2H)，0.98-0.90(m，3H)； MS(ESI)m/z 426和428[M+1]+。
實(shí)施例7 5-{[1S)-1-(6-氯吡啶-3-基)乙基]硫基}-7-[[(1R)-1-(羥甲基)丁基](甲基)氨基][1.3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮
a)N-(乙氧基羰基)-D-正纈氨酸
將D-正纈氨酸(10.0g，85.3mmol)溶于氫氧化鈉水溶液(4M，25mL)中。歷時(shí)15分鐘在0℃加入氯甲酸乙酯(10.6mL，111mmol)和氫氧化鈉水溶液(4M，25mL)。將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?，然后在此溫度攪?h。將反應(yīng)混合物用乙醚洗滌三次，然后用鹽酸水溶液(2M)酸化。產(chǎn)物用乙醚萃取三次。合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮，以定量收率得到標(biāo)題化合物。
1H NMR(CDCl3)δppm 6.43(br s，1H)，5.22(d，1H)，4.37(q，1H)，4.13(q，2H)，1.84(m，1H)，1.68(六重峰，1H)，1.42(六重峰，1H)，1.25(t，3H)，0.95(t，3H)；MS(CI)144(100％)，190[M+1]+。
b)(2R)-2-(甲基氨基)戊-1-醇
在0℃在氮?dú)鈿夥罩校瑢浠X鋰(6.5g，171mmol)懸浮于THF中。將N-(乙氧基羰基)-D-正纈氨酸溶于THF中，然后在0℃滴加。將反應(yīng)混合物回流過夜。冷卻至室溫后，加入飽和硫酸鈉水溶液以形成漿料。所得的混合物經(jīng)過硅藻土過濾。固體用DCM洗滌，直到萃取出所有產(chǎn)物。合并的濾液經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮。在0.1毫巴進(jìn)行泡-泡蒸餾(Bulb-to-bulbdestillation)，收集75-85℃之間的餾分，得到7.1g(71％收率)標(biāo)題化合物。
1H NMR(CDCl3)δppm 3.63(dd，1H)；3.30(dd，1H)；2.51(m，1H)；2.41(s，3H)；2.09(br s，2H)；1.50-1.28(m，4H)；0.93(t，3H)；MS(CI)86(100％)，118[M+1]+。
c)(2R)-2-{[2-氨基-5-(芐基硫基)[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基](甲基)氨基}戊-1-醇
將5-(芐基硫基)-7-氯[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-胺(6.0g，19.4mmol)溶于NMP(25mL)中。加入DIPEA(6.8mL，38.8mmol)和(2R)-2-(甲基氨基)戊-1-醇(3.4g，29.1mmol)，然后將混合物加熱至120℃并持續(xù)3天。加入額外的(2R)-2-(甲基氨基)戊-1-醇(350mg，2.99mmol)和DIPEA(1mL，5.74mmol)，然后將反應(yīng)混合物在120℃加熱6h。冷卻至室溫后，將混合物倒入冰中。經(jīng)過濾收集沉淀出的產(chǎn)物，然后經(jīng)快速柱色譜(洗脫劑DCM∶乙酸乙酯梯度)純化，得到標(biāo)題化合物(5.74g，76％收率)。
1H NMR(DMSO-d6)δppm 7.98(br s，2H)，7.41(m，2H)，7.29(m，2H)，7.22(m，1H)，4.73(t，1H)，4.54(br s，1H)，4.33(m，2H)，3.55-3.40(m，2H)，3.01(s，3H)，1.52-1.44(m，2H)，1.25-1.10(m，2H)，0.84(t，3H)；MS(ESI)m/z 390[M+1]+。
d)(2R)-2-[(2-氨基-5-巰基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)(甲基)氨基]戊-1-醇
將圓底燒瓶配備干冰-乙醇冷凝器，然后浸入干冰-乙醇冷卻浴中。使氨(200mL)冷凝進(jìn)入燒瓶中，接著加入(2R)-2-{[2-氨基-5-(芐硫基)[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基](甲基)氨基}戊-1-醇(5.43g，13.9mmol)。使形成的混合物溫?zé)嶂?33℃，然后加入小塊形式的金屬鈉直到出現(xiàn)藍(lán)色并持續(xù)30秒。然后通過加入一匙固體氯化銨將反應(yīng)淬滅。蒸出氨，然后將水(250mL)加到殘余物中。形成的混合物用1M鹽酸(水溶液)中和。過濾收集沉淀出的產(chǎn)物，用水和乙腈洗滌，然后真空干燥，得到3.38g(81％收率)標(biāo)題化合物。
1H NMR(DMSO-d6)δppm 12.81(br s，1H)；8.45(br s，2H)，4.84(br s，1H)，3.55-3.40(m，2H)，3.02(s，3H)，1.48(m，2H)，1.21(m，2H)，0.87(t，3H)；MS(ESI)m/z 300[M+1]+。
e)(2R，2′R)-2，2′-{聯(lián)硫基雙[(2-氯[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5，7-二基)(甲基亞胺基)]}二(戊-1-醇)
將(2R)-2-[(2-氨基-5-巰基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)(甲基)氨基]戊-1-醇(1.0g，3.34mmol)溶于乙腈(25ml)和濃鹽酸(40mL)中。將亞硝酸鈉(461mg，6.67mmol)溶于水(2mL)中，然后在0℃加到反應(yīng)混合物中。將反應(yīng)混合物在0℃保持三天。將反應(yīng)混合物倒在冰上，然后過濾收集沉淀出的產(chǎn)物并用水洗滌。真空干燥得到標(biāo)題化合物800mg(75％收率)。
MS(ESI)m/z 635和637[M+1]+。
f)(2R，2′R)-2，2′-{聯(lián)硫基雙[(2-甲氧基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5，7-二基)(甲基亞胺基)]}二(戊-1-醇)
在0℃，將溶于甲醇(20mL)中的氫氧化鉀(210mg，3.75mmol)加到(2R，2′R)-2，2′-{聯(lián)硫基雙[(2-氯[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5，7-二基)(甲基亞胺基)]}二(戊-1-醇)(795mg，1.25mmol)于甲醇(40mL)中的溶液中。將反應(yīng)混合物在0℃攪拌過夜，然后蒸出甲醇。將殘余物倒入冰中，然后過濾收集形成的沉淀。將濾液用乙酸乙酯萃取。有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮，將殘余物與先前收集的固體合并，得到標(biāo)題化合物，其不經(jīng)任何進(jìn)一步純化就用于下一步。
MS(ESI)m/z 627[M+1]+。
g)5-[7-{[(1R)-1-(羥甲基)](甲基)氨基}-[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮-5-基聯(lián)硫基]-7-{[(1R)-1-(羥甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮
將從先前步驟得到的粗制(2R，2′R)-2，2′-{聯(lián)硫基雙[(2-甲氧基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5，7-二基)(甲基亞胺基)]}二(戊-1-醇)(1.25mmol)溶于1，4-二氧雜環(huán)己烷(25mL)中。加入濃鹽酸(0.5mL)和水(0.5mL)，然后將形成的混合物在45℃攪拌過夜。真空蒸發(fā)二氧雜環(huán)己烷，然后將殘余物倒在冰上，以便使產(chǎn)物沉淀，經(jīng)過濾收集產(chǎn)物。真空干燥得到590mg(兩步收率78％)標(biāo)題化合物。
MS(ESI)m/z 599[M+1]+。
h)5-{[(1S)-1-(6-氯吡啶-3-基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羥甲基)丁基](甲基)氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮
標(biāo)題化合物是根據(jù)一般方法G，使用5-[7-{[(1R)-1-(羥甲基)](甲基)氨基}-[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮-5-基聯(lián)硫基]-7-{[(1R)-1-(羥甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮(0.10g，0.167mmol)、2-氯-5-[(1R)-1-氯乙基]吡啶(實(shí)施例6g，0.065g，0.37mmol)和硼氫化鈉(0.038g，1.00mmol)制備的，得到0.060g(41％收率)標(biāo)題化合物。
1H NMR(CDCl3)δppm 8.56-8.38(m，1H)，7.87-7.73(m，1H)，7.28-7.26(m，1H)，4.86(q，1H)，4.75-4.62(m，1H)，3.76-3.55(m，3H)，3.03(s，3H)，1.70-1.63(m，3H)，1.53-1.45(m，2H)，1.26-1.21(m，2H)，0.95-0.88(m，3H)； MS(ESI)m/z 440和442[M+1]+。
實(shí)施例8 實(shí)施例8a 5-{[(1R)-1-(3-氟吡啶-4-基)乙基]硫基}-7-{[1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮，和 實(shí)施例8b 5-{[(1S)-1-(3-氟吡啶-4-基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮
來自實(shí)施例3的5-{[1-(3-氟吡啶-4-基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮(179mg)的非對映異構(gòu)體混合物經(jīng)制備性HPLC分離，得到25mg首先洗脫出的異構(gòu)體 1H NMR(DMSO-d6)δppm 12.31(br s，1H)，8.51(m，1H)，8.38(d，1H)；7.62(m，1H)；6.97(br s，1H)；5.16(q，1H)；4.66(t，1H)；4.12(m，1H)；3.44-3.30(m，2H，被水信號掩蔽)，1.66(d，3H)，1.61-1.27(m，3H)，0.84(d，3H)，0.74(d，3H)；MS(ESI)m/z 424[M+1]+。
以及45mg最后洗脫出的異構(gòu)體 1H NMR(DMSO-d6)δppm 12.35(br s，1H)，8.52(d，1H)，8.38(d，1H)；7.62(dd，1H)；7.12(br s，1H)；5.15(q，1H)；4.62(t，1H)；4.21(m，1H)；3.35-3.15(m，2H，部分被水信號掩蔽)，1.65(d，3H)，1.63-1.29(m，3H)，0.88(d，3H)，0.85(d，3H)；MS(ESI)m/z 424[M+1]+。
藥理學(xué)篩選 材料 重組的人CXXXC趨化分子(hCX3CL1)和重組的人白細(xì)胞介素-8(IL-8或hCXCL8)購于PeproTech Inc.，UK。具有2200Ci/mmol特異活性的重組的[125I]-CXXXC趨化分子(人)和[125I]hIL-8購于

Life Science Products，Inc.，UK。Fluo4-AM購于Molecular Probes，US。所有其它化學(xué)試劑是分析等級的。
細(xì)胞 完全人CX3CR1 cDNA(GenBank登錄號U20350)是從人腦mRNA(Superscript，Life Technologies)中提取的，并連接(ligate)到pCR-BluntII TOPO載體(In Vitrogen)中。分離出插入物相應(yīng)的hCX3CR1(insertcorresponding hCX3CR1)，并進(jìn)一步亞克隆到pcDNA3.1zeo中。使用PlasmidMidi試劑盒(Qiagen)制備質(zhì)粒DNA。然后根據(jù)制造商提供的方案，使用Superfect轉(zhuǎn)染劑(Qiagen)將針對hCX3CR1的表達(dá)質(zhì)粒引入人胚腎懸浮(HEKS)293細(xì)胞系中，所述細(xì)胞系含有用于穩(wěn)定表達(dá)嵌合G-蛋白Gαqi5的載體。利用Zeocin(500μg/mL)和潮霉素(hygromycin)(100μg/mL)選擇產(chǎn)生穩(wěn)定克隆。對于進(jìn)一步應(yīng)用而言，將細(xì)胞維持在Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)基/Ham營養(yǎng)混合物F12(DMEM/F12)中，所述DMEM/F12含有吡哆素(pyridoxine)，并且補(bǔ)充有10％(v/v)胎牛血清、2mM L-谷氨酰胺、100U/ml青霉素和100mg/ml鏈霉素、250μg/mL Zeocin和100μg/mL潮霉素。
將獲自AstraZeneca Charnwood的表達(dá)人CXCR2的細(xì)胞在EMEM中培養(yǎng)，所述EMEM含有Glutamax，并且補(bǔ)充有10％FBS(來自PAA，Austria)、1％非必需氨基酸(NEAA)、100U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素(PEST)和500μg/mL遺傳霉素/G418。
膜制備 將細(xì)胞在37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)，并且在含有10mM Tris-HCl pH7.4、5mM EDTA、0.1mg/mL桿菌肽(bacitracin)的緩沖液中以60-80％融合率收集。將細(xì)胞以300xg離心10分鐘，然后將沉淀(pellet)再懸浮于收集緩沖液(10mM Tris-HCl，pH7.4、5mM乙二胺四乙酸(EDTA)和0.1mg/mL桿菌肽)中，匯集，然后使用Dounce勻漿器(homogeniser)勻漿。將勻漿以48000xg離心10分鐘，然后使用Ultra-Turrax T8再懸浮于收集緩沖液中。將膜等分試樣在-80℃儲存。如Harrington(1990，Anal.Biochem.186，285-287)所述，在微量滴定板中確定蛋白質(zhì)濃度。
體外受體結(jié)合測定 在2mL 96深孔板(Beckman，Germany)中以1000μL/孔的總體積進(jìn)行[125I]CXXXC趨化分子的競爭結(jié)合研究。每孔含有于測定緩沖液(50mMHepes-KOH，pH7.4，10mM MgCl2，1mM EDTA，0.1％(w/v)明膠)中的10pM[125I]-CXXXC趨化分子以及相當(dāng)于1pM的受體濃度的膜。將十種濃度的(2點(diǎn)/對數(shù)單位)測試化合物預(yù)溶解于DMSO中，然后添加以達(dá)到1％(v/v)DMSO的最終濃度。通過加入膜開始進(jìn)行測定，然后在25℃孵育24h。反應(yīng)通過以下方式終止經(jīng)過用0.3％聚乙烯亞胺(polyethylimine)預(yù)處理的Whatman GF/B玻璃纖維濾器快速過濾，隨后使用Brandel受體結(jié)合收集器用冰冷的緩沖液(10mM Hepes-KOH pH7.4、500mM NaCl)洗滌。加入閃爍雞尾酒式混合物(Scintillation cocktail)，然后在Packard 2500TR液體閃爍計(jì)數(shù)器(Perkin Elmer，USA)中確定放射性。
在白色透明底96孔Isoplate中單份(singlicates)進(jìn)行[125I]-hIL-8競爭結(jié)合研究，最終體積為200μL，每孔含有于測定緩沖液[50mM HEPES-KOH pH7.4、10mM MgCl2、1mM EDTA、0.5％(w/v)明膠]中的150pM[125I]-hIL-8(特異活性2200 Ci/mmol)、相當(dāng)于20pM受體濃度的膜-SPA制品和1.5mg SPA-珠。將測試化合物如上處理。在500nM未標(biāo)記的hIL-8存在下確定非特異性結(jié)合。在每次試驗(yàn)時(shí)激動(dòng)劑hIL-8(濃度響應(yīng)曲線3pM至30nM)用作參考化合物。肽曲線不含DMSO。結(jié)合反應(yīng)通過加入140μL膜-SPA制品開始，然后將樣本在室溫避光孵育4h。將測定板在液體閃爍計(jì)數(shù)器(Wallac

TriLux 1450，來自PerkinElmer，USA)中計(jì)數(shù)。
[35S]GTPγS結(jié)合 在室溫在透明底微量滴定板中一式兩份用10種濃度的抑制劑((2濃度/對數(shù)單位)，稀釋于DMSO(最終濃度1％)中)進(jìn)行[35S]GTPγS結(jié)合研究。將表達(dá)hCX3CR1受體的膜(最終濃度20μg蛋白質(zhì)/孔)與都懸浮于GTPγS結(jié)合緩沖液(50mM Tris-HCl、100mM NaCl、0.1％明膠、15μg皂苷/mL和3μM GDP，室溫pH7.4)中的SPA珠(最終濃度1mg/孔)一起添加。將膜、SPA珠和藥物預(yù)孵育30分鐘，然后添加310pM CXXXC趨化分子用于最大刺激。基礎(chǔ)活性(Basal activity)定義為沒有CXXXC趨化分子刺激(GTPγS結(jié)合緩沖液)時(shí)確定的活性。額外30分鐘后，通過添加[35S]GTPγS使最終濃度為0.1nM以及最終測定體積為0.2mL而開始反應(yīng)。30分鐘后，通過以2000rpm離心2x5分鐘(不同方向)終止實(shí)驗(yàn)，并且在液體閃爍計(jì)數(shù)器(Wallac

TriLux1450)中確定放射性。
結(jié)果 本發(fā)明化合物的典型CX3CR1 Ki值在約0.1至約1000nM的范圍中。CX3CR1 Ki的其它值在約0.1nM至約500nM的范圍中。CX3CR1 Ki的其它值在約0.1nM至約25nM的范圍中。最終化合物的體外hCX3CR1結(jié)合測定結(jié)果表示于表1中。
表1. *)實(shí)施例8a和8b的非對映異構(gòu)體混合物 **)未得到足夠的量以用于在體外hCX3CR1結(jié)合測定中進(jìn)行試驗(yàn) 本發(fā)明化合物(其中R1表示Me(在5位含有支化的硫基烷基吡啶基)與相應(yīng)的參考化合物(其中R1表示H)相比是更強(qiáng)效的CX3CR1受體拮抗劑和/或效力較差的CXCR2受體拮抗劑。人們認(rèn)為這種對CX3CR1受體拮抗作用的增強(qiáng)選擇性引起顯著的治療益處。
權(quán)利要求
1.游離堿形式的式(I)化合物或其可藥用鹽、溶劑化物或鹽的溶劑化物，
其中
R1表示CH3或CF3；
R2表示鹵素、CN或C1-6烷基；
R3表示H或CH3；
R4表示H或CH3；
n表示0、1或2。
2.權(quán)利要求1所述的化合物，其中n表示1。
3.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1表示CH3。
4.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R2表示鹵素或CN。
5.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R2表示F或Cl。
6.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R2表示CN。
7.權(quán)利要求1所述的化合物，其中n表示1；R1表示CH3；以及R2表示F、Cl或CN。
8.權(quán)利要求1所述的化合物，其中吡啶以其5位進(jìn)行連接并且在吡啶2位具有Cl。
9.權(quán)利要求1所述的化合物，其中吡啶以其2位進(jìn)行連接并且在吡啶4位具有CN。
10.權(quán)利要求1所述的化合物，其中吡啶以其2位進(jìn)行連接并且在吡啶5位具有F。
11.權(quán)利要求1所述的化合物，其中吡啶以其2位進(jìn)行連接并且在吡啶5位具有Cl。
12.權(quán)利要求1所述的化合物，其中吡啶以其2位進(jìn)行連接并且在吡啶3位具有F。
13.權(quán)利要求1所述的化合物，其中吡啶以其4位進(jìn)行連接并且在吡啶3位具有F。
14.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R3表示H。
15.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R4表示CH3。
16.游離堿形式的化合物或其可藥用鹽、溶劑化物或鹽的溶劑化物，所述化合物選自
5-{[(1S)-1-(5-氯吡啶-2-基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮；
5-{[(1S)-1-(5-氟吡啶-2-基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮；
5-{[1-(3-氟吡啶-4-基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮；
5-{[(1S)-1-(3-氟吡啶-4-基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮；
5-{[(1R)-1-(3-氟吡啶-4-基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮；
5-{[(1S)-1-(3-氟吡啶-2-基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮；
2-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]氨基}-2-氧代-2，3-二氫[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}吡啶-4-甲腈；
5-{[(1S)-1-(6-氯吡啶-3-基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羥甲基)丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮；以及
5-{[(1S)-1-(6-氯吡啶-3-基)乙基]硫基}-7-[[(1R)-1-(羥甲基)丁基](甲基)氨基][1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮。
17.權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)所述的化合物或其可藥用鹽，其用作藥物。
18.權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)所述的化合物或其可藥用鹽，以及混合有可藥用稀釋劑或載體。
19.治療神經(jīng)變性疾病、脫髓鞘病、心腦血管動(dòng)脈粥樣硬化疾病、外周動(dòng)脈疾病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肺病疾病如COPD、哮喘或疼痛或降低所述疾病風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括向患有或容易感染所述疾病或病癥的人給藥治療有效量的如權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)所定義的式(I)化合物或其可藥用鹽。
20.治療多發(fā)性硬化癥或降低所述疾病風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括向患有或容易感染所述疾病或病癥的人給藥治療有效量的如權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)所定義的式(I)化合物或其可藥用鹽。
21.通過改變斑塊的組成以降低斑塊破裂和動(dòng)脈粥樣硬化血栓形成事件的危險(xiǎn)來治療或預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的方法，所述方法包括向患有或容易感染所述疾病或病癥的人給藥治療有效量的如權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)所定義的式(I)化合物或其可藥用鹽。
22.通過防止和/或減少新的動(dòng)脈粥樣硬化損傷或斑塊的形成和/或通過防止或減緩現(xiàn)有損傷和斑塊的進(jìn)展來治療或預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的方法，所述方法包括向患有或容易感染所述疾病或病癥的人給藥治療有效量的如權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)所定義的式(I)化合物或其可藥用鹽。
23.治療或預(yù)防中風(fēng)或短暫性腦損傷(TBI)的方法，所述方法包括向患有或容易感染所述疾病或病癥的人給藥治療有效量的如權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)所定義的式(I)化合物或其可藥用鹽。
24.權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)定義的式(I)化合物或其可藥用鹽在制備用于治療或預(yù)防神經(jīng)變性疾病、脫髓鞘病、心腦血管動(dòng)脈粥樣硬化疾病、外周動(dòng)脈疾病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肺病疾病如COPD、哮喘或疼痛的藥物中的用途。
25.權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)定義的式(I)化合物或其可藥用鹽在制備用于治療或預(yù)防多發(fā)性硬化癥的藥物中的用途。
26.權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)定義的式(I)化合物或其可藥用鹽在制備用于治療或預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的藥物中的用途，所述藥物通過改變斑塊的組成以降低斑塊破裂和動(dòng)脈粥樣硬化血栓形成事件的危險(xiǎn)來治療或預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化。
27.權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)定義的式(I)化合物或其可藥用鹽在制備用于治療或預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的藥物中的用途，所述藥物通過防止和/或減少新的動(dòng)脈粥樣硬化損傷或斑塊的形成和/或通過防止或減緩現(xiàn)有損傷和斑塊的進(jìn)展來治療或預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化。
28.權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)定義的式(I)化合物或其可藥用鹽在制備用于治療或預(yù)防中風(fēng)或短暫性腦損傷(TBI)的藥物中的用途。
29.制備權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)定義的式(I)化合物或其可藥用鹽的方法，所述方法包括
a)使式(II)化合物與式(III)化合物反應(yīng)，
式(II)化合物
其中R3和R4如式(I)中所定義；
式(III)化合物
其中R1、R2和n如式(I)中所定義，以及L1表示離去基；或
b)使式(IV)化合物水解，
其中R1、R2、R3、R4和n如式(I)中所定義；
以及任選地，將所得的式(I)化合物或其另一種鹽轉(zhuǎn)化為其可藥用鹽；或?qū)⑺玫氖?I)化合物轉(zhuǎn)化為式(I)化合物的另一個(gè)化合物；以及任選地，將所得的式(I)化合物轉(zhuǎn)化為其光學(xué)異構(gòu)體。
全文摘要
本發(fā)明披露了新穎的式(I)所示5，7-二取代的[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮衍生物及其可藥用鹽，其中R1、R2、R3、R4和n如說明書中所定義，以及其制備方法，含有它們的藥物組合物和它們在治療中的用途。式(I)化合物是CX3CR1受體拮抗劑，由此所述化合物特別用于治療或預(yù)防神經(jīng)變性疾病、脫髓鞘病、心腦血管動(dòng)脈粥樣硬化疾病、外周動(dòng)脈疾病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肺部疾病如COPD、哮喘或疼痛。
文檔編號A61P25/00GK101516893SQ200780036054
公開日2009年8月26日 申請日期2007年9月27日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月29日
發(fā)明者羅爾夫·約翰森, 索菲婭·卡爾斯特羅姆, 安妮卡·克斯, 岡納·諾德瓦爾, 托拜厄斯·雷恩, 坎·斯利沃 申請人:阿斯利康(瑞典)有限公司