專利名稱：：高血壓改善劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及含有吡咯并全啉醌(pyrroloquinolinequinone)或其酯、或其鹽作為有效成分的高血壓改善劑。
背景技術(shù)：
：高血壓是導(dǎo)致心肌梗塞、心絞痛、腦梗塞、腦出血、腦血管障礙性癡呆等發(fā)病的危險因子，保持血壓在正常范圍，這對維持健康至關(guān)重要。高血壓治療藥包括通過引起鈉和水利尿、減少循環(huán)血液量來降壓的利尿藥；通過中樞或末梢抑制對血壓調(diào)節(jié)起極其重要的作用的交感神經(jīng)系統(tǒng)的活性來降壓的交感神經(jīng)抑制劑；抑制向血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)攝入鉤、以使血管擴(kuò)張的鈣拮抗劑；抑制升壓物質(zhì)血管緊張素II的產(chǎn)生，同時增加緩激肽和前列腺素，以使血管擴(kuò)張的血管緊張素I轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑等(非專利文獻(xiàn)1)。吡咯并喹啉醌(以下簡稱為PQQ)于1979年作為曱醇利用性菌的曱醇脫氬酶的輔酶^L發(fā)現(xiàn)(非專利文獻(xiàn)2、3),除細(xì)菌類以外，在大豆、蠶豆、青椒、馬鈴薯、荷蘭芽、菠菜等食用植物以及醋、茶、可可、納豆、豆腐等加工食品中也檢出了吡咯并喹啉醌(非專利文獻(xiàn)4)。另夕卜，有報道稱，在人和大鼠體內(nèi)也存在吡咯并會啉醌(非專利文獻(xiàn)5)。近年來，人們發(fā)現(xiàn)PQQ類具有細(xì)胞增殖促進(jìn)作用(專利文獻(xiàn)1)、活性氧除去作用(專利文獻(xiàn)2)、醛糖還原酶抑制作用(專利文獻(xiàn)3)、神經(jīng)成長因子產(chǎn)生促進(jìn)作用(專利文獻(xiàn)4)、逆轉(zhuǎn)錄酶抑制作用(專利文獻(xiàn)5)、抗白內(nèi)障作用(專利文獻(xiàn)6)、抑制黑色素產(chǎn)生和美白作用(專利文獻(xiàn)7)、紫外線吸收作用(專利文獻(xiàn)8)等各種作用。但是，PQQ或其酯、或它們的鹽的高血壓改善作用尚不為人所知。非專利文獻(xiàn)l:田中千賀子、加藤隆一編，"新藥理學(xué)，，，修訂第3版，；昧式會社南江堂，1996年，第380-381頁非專利文獻(xiàn)2:"Nature",1979年,第230巻，第843-844頁非專利文獻(xiàn)3:"FEBSLetters",1979年，第108巻，第443-446頁非專利文獻(xiàn)4:"BiochemicalJournal",1995年，第307巻，第331-333頁非專利文獻(xiàn)5:"BiochimicaetBiophysicaActa",1992年，第1156巻，第62-66頁專利文獻(xiàn)1專利文獻(xiàn)2專利文獻(xiàn)3專利文獻(xiàn)4專利文獻(xiàn)5專利文獻(xiàn)6專利文獻(xiàn)7專利文獻(xiàn)8日本特開昭61-58584號公才艮日本特開平5-078247號公才艮日本特開平6-256191號公報曰本特開平6-211660號公報曰本特公平8-005792號公報曰本特公平8-005791號公報曰本特開平8-020512號公報曰本專利第3625493號公報
發(fā)明內(nèi)容發(fā)明所要解決的課題本發(fā)明的目的在于提供一種高血壓改善劑。解決課題的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明提供下述(1)(3)的高血壓改善劑。(l)高血壓改善劑，其含有通式(I)表示的化合物[以下稱作化合物(I)]或其鹽作為有效成分，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>(式中，Ri、R2和R3相同或不同，表示低級烷基、低級烯基、低級炔基、芳烷基、烷芳基、苯基、氫原子。)。(2)高血壓改善方法，該方法向必需的對象給予有效量的上述(l)所述的通式(I)表示的化合物或其鹽。(3)上述(1)所述的通式(I)表示的化合物或其鹽在制造高血壓改善劑中的應(yīng)用。發(fā)明效果根據(jù)本發(fā)明，可以提供安全有效的高血壓改善劑。本說明書包含作為本申請的優(yōu)先權(quán)基礎(chǔ)的日本專利申請2006-244445號說明書中記載的內(nèi)容。實施發(fā)明的最佳方式在化合物(I)的定義中，式中A、R2和R3相同或不同，表示低級烷基、低級烯基、低級炔基、芳烷基、烷芳基(烷基芳基)、苯基、氫原子。作為上述低級烷基和芳烷基、烷芳基的烷基部分，有例如直鏈或支鏈狀的碳原子數(shù)為16的烷基，更具體來說有曱基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、新戊基、己基等，其中優(yōu)選曱基或乙基。低級烯基有例如直鏈或支鏈狀的碳原子數(shù)為2~6的烯基，更具體來說有乙烯基、烯丙基、1-丙烯基甲基丙烯酰基、巴豆基、1-丁烯基、3-丁烯基、2-戊烯基、4-戊烯基、2-己烯基、5-己烯基等。低級炔基有例如直鏈或支鏈狀的碳原子數(shù)為2~6的炔基，更具體來說有乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基等。芳烷基有例如碳原子數(shù)為715的芳烷基，更具體來說有節(jié)基、苯乙基、二苯曱基、萘甲基等。作為烷芳基的芳基部分，有例如碳原子數(shù)為6~14的芳基，更具體來說有苯基、萘基、蒽基等。因此，烷芳基有曱基苯基、乙基苯基等。PQQ、即上述通式(I)中R!、R2和R3均為氫原子的化合物，可以利用有機(jī)化學(xué)方法(例如J.Am.Chem.Soc.,103，5599-5600(1981))和發(fā)酵法等來制備。例如通過在含有曱醇作為碳源、并控制鐵化合物濃度的培養(yǎng)液中培養(yǎng)具有甲醇利用性、且具有產(chǎn)生吡咯并喹啉醌的能力的細(xì)菌，來產(chǎn)生吡咯并喹啉醌的方法(日本特開平1-218597號公才艮)。關(guān)于化合物(I)所示的PQQ的酯體的制造方法，可以按照常規(guī)方法的酯化反應(yīng)由PQQ合成。PQQ的三酯體例如可利用使PQQ或其鹽在酸性條件下與醇類反應(yīng)的方法(例如日本特開平3-123781號公才艮、日本特開平3-145492號公報)、或者使PQQ或其鹽在堿的存在下與卣代烷基、卣代烯基、卣代炔基、卣代芳烷基、卣代烷芳基等反應(yīng)的方法等容易地合成。另夕卜，通過使由上述方法得到的PQQ的三酯體在酸性或44性條件下部分水解，可以得到單酯體、二酯體。如此操作而得到的化合物(I)可以利用柱色語法、重結(jié)晶法和溶劑提取法等通常的方法自反應(yīng)液中分離.純化。另外，鑒定化合物(I)時，采用元素分析、NMR光i普、IR光謙、質(zhì)量分析等各種方法。化合物(I)的鹽有鈉鹽、鉀鹽等堿金屬鹽；鎂鹽、鈣鹽等堿土金屬鹽；銨、三乙醇胺、三乙胺等有機(jī)胺鹽；賴氨酸、精氨酸等堿性氨基酸鹽等。作為本發(fā)明的高血壓改善劑，可以將作為有效成分的化合物(I)或其鹽單獨或混合制成制劑，或者與用于治療的其它任意有效成分混合制成制劑。該制劑通過將有效成分與藥理學(xué)上可接受的一種或一種以上的載體一同混合，利用制劑學(xué)
技術(shù)領(lǐng)域：
所熟知的任意方法來制備。制劑的給藥形式優(yōu)選釆用治療時最有效的形式，可以列舉口服給藥或例如靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)或皮下給藥等胃腸外給藥形式，但優(yōu)選口服給藥。給藥劑型例如可以是片劑、散劑、顆粒劑、丸劑、懸浮劑、乳劑、浸劑.煎劑、"交嚢劑、津唐漿劑、液劑、酏劑、浸膏劑、酊劑、流浸膏劑等口服制劑、注射劑、點滴劑、霜劑、栓劑等非口服制劑中的任一種，但適合以口服制劑的形式使用。制成口服制劑時，可以使用賦形劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、分散劑、懸浮劑、乳化劑、稀釋劑、緩沖劑、抗氧劑、抑菌劑等添加劑。制成適于口服給藥的劑型、例如片劑、散劑和顆粒劑等時，可以添加乳糖、白糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇等糖類；馬鈴薯、小麥、玉米等的淀粉；碳酸鈣、疏酸4丐、碳酸氬鈉、氯化鈉等無機(jī)物；結(jié)晶纖維素、甘草粉末、龍膽粉末等植物粉末等賦形劑；淀粉、瓊脂、明膠粉末、結(jié)晶纖維素、羧曱纖維素鈉、羧甲纖維素鈣、碳酸鉤、碳酸氫鈉、海藻酸鈉等崩解劑；硬脂酸^:、滑石粉、氫化植物油、聚乙二醇、硅油等潤滑劑、聚乙烯醇、羥丙基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、羧曱纖維素、明膠、淀粉漿等粘合劑；脂肪酸酯等表面活性劑、甘油等增塑劑等，之后制成制劑。當(dāng)劑型為糖漿劑等液體調(diào)制物時，可以添加水；蔗糖、山梨醇、果糖等糖類；聚乙二醇、丙二醇等二醇類；芝麻油、橄欖油、大豆油等油類；對羥基苯曱酸酯類等防腐劑；對羥基苯曱酸甲酯等對羥基苯曱酸衍生物、苯曱酸鈉等保存劑；草莓香精、薄荷等香精類等，之后制成制劑。另外，在適于口服給藥的制劑中，可以添加通常用于飲食品的食品添加劑，例如甜味劑、著色劑、保存劑、增稠穩(wěn)定劑、抗氧劑、顯色劑、漂白劑、防霉劑、香糖膠基、苦味劑、酶、光澤劑、酸味劑、調(diào)味劑、乳化劑、強(qiáng)化劑、制造用劑、香料、香辛料提取物等。適于口服給藥的制劑可以直接或者以例如粉末食品、薄片狀食品、瓶裝食品、罐裝食品、蒸餾食品、膠嚢食品、片劑狀食品、流質(zhì)食品、飲品等形式，作為高血壓改善用的健康食品、功能性食品、營養(yǎng)輔助食品、特定保健用食品等飲食品使用。適于胃腸外給藥的劑型、例如注射劑，優(yōu)選包含與受體的血液等滲的、含有化合物(I)或其鹽的滅菌水性劑。例如，當(dāng)為注射劑時，使用包含鹽溶液、葡萄糖溶液或鹽溶液與葡萄糖溶液的混合物的載體等，制備注射用溶液。在上述非口服制劑中，也可以添加選自口服制劑中例示的稀釋劑、防腐劑、香精類、賦形劑、崩解劑、潤滑劑、粘合劑、表面活性劑、增塑劑等的一種或一種以上的輔助成分。本發(fā)明制劑的給藥量和給藥次數(shù)根據(jù)給藥形式、患者的年齡、體重、應(yīng)治療的癥狀的性質(zhì)或嚴(yán)重程度而不同，通常成人每天以化合物(I)或其鹽計，通常為0.5mg10000mg，優(yōu)選0.5mg~5000mg,更優(yōu)選5mg1000mg,—天給藥一次至數(shù)次。給藥期間沒有特別限定，通常為1天~1年，優(yōu)選為2周~3個月。需要說明的是，本發(fā)明的制劑不僅可用于人，還可用于人以外的動物(以下簡稱為非人動物)。非人動物有哺乳類、鳥類、爬蟲類、兩棲類、魚類等人以外的動物。對非人動物給藥時的給藥量根據(jù)動物的年齡、種類、癥狀的性質(zhì)或嚴(yán)重程度而不同，通常每天、每kg體重，以化合物(I)或其鹽計為0.01mg200mg，優(yōu)選0.1mg100mg,更優(yōu)選1mg~20mg，一天給藥一次至數(shù)次。給藥期間沒有特別限定，通常為1天~1年，優(yōu)選為2周~3個月。實施例以下，給出研究化合物(I)的高血壓改善效果的試驗例。(試驗例)使用自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)。在給藥的第1天測定18只雄性SHR/Izm(日本SLC公司、IO周齡)的收縮壓，每6只為一組，分為3組，作為第1組第3組，使每組平均值大致相等。按照5mL/kg的容量向各組大鼠口服給藥29天，1天1次，其中第1組大鼠給予0.5w/v。/。的甲基纖維素水溶液，第2組大鼠給予懸浮于0.5w/v。/。曱基纖維素水溶液中的1mg/mL的吡咯并查啉醌二鈉鹽(以下稱作PQQ二鈉鹽，三菱瓦斯化學(xué)社制)溶液，第3組大鼠給予懸浮于0.5w/v。/。甲基纖維素水溶液中的4mg/mL的PQQ二鈉鹽溶液。PQQ二鈉鹽的每次給藥量如下第2組為5mg/kg、第3組為20mg/kg。在給藥的第1天、第8天、第15天、第22天和第29天，于給藥前(前一天給藥起24小時后)和給予PQQ二鈉鹽4小時后測定收縮壓。使用小鼠.大鼠用不加熱型無創(chuàng)血壓計(非観血式血圧計)(MK-2000、室町機(jī)械)，按照尾套(tail-caff)法測定收縮壓。每次測定5次，以除去最高值和最低值后的3次收縮壓的平均值作為個體的值。值以平均值士標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)表示。在各測定點進(jìn)行一元配置分散分析，由此求出統(tǒng)計學(xué)上的顯著差異。通過一元配置M分析確i/v存在顯著性時，進(jìn)行參數(shù)Du皿ett的多重比較4企驗，求出相對于第1組的第2組和第3組的顯著差異。需要說明的是，危險率(p值)小于0.05時，判斷為存在顯著差異。給藥前的收縮壓結(jié)果見表1。表1收縮壓(mmHg)第1天第8天第15天第22天第29天第1組172±4181±4191±4195±3195±3第2組172±3177±3185±3189±31卯±1第3組172±3174±2182±3184±3186±3如表l所示第l組的收縮壓在整個試驗期間緩慢上升，高血壓病情在惡化。相對于此，給藥第8天以后，在試驗期間第2組的收縮壓較第1組低，第3組的收縮壓較第2組進(jìn)一步降低。給予PQQ二鈉鹽4小時后的收縮壓結(jié)果見表2。表2收縮壓(mmHg)第1天第8天第15天第22天第29天第1組173±4181±5192±4195±3194±2第2組172±4175±3184±3189±3190±1第3組171±3171±2180±3184±3186±3**:相對于第1組p〈0.05如表2所示，給藥第8天以后，在試驗期間第2組的收縮壓較第1組的低。第3組的收縮壓進(jìn)一步降低，在給藥第29天給予PQQ二鈉鹽4小時后，相對于第l組顯著降低。由以上結(jié)果可知在給予了PQQ二鈉鹽的高血壓大鼠中顯示出降壓作用、即高血壓改善作用。接下來，利用顯示本發(fā)明組合物的配合例的實施例，進(jìn)一步具體說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受這些實施例的限定。(實施例1)按照表3記載的配比，制造高血壓改善用清涼飲料水(IO瓶)。表3組成含量PQQ二鈉鹽100mg維生素Clg維生素Bl5mg維生素B210mg維生素B625mg液體糖150g枸櫞酸3g香料lg用水定容至1000mL。(實施例2)按照表4記載的配比，制備1000mL高血壓改善用茶飲料。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>用1000mL水進(jìn)行洗脫。(實施例3)按照表5記載的配比，制造高血壓改善用口香糖(30個)。表5組成含量PQQ三曱酯0.1g香糖膠基25g砂糖63g糖稀10g香料lg(實施例4)按照表6記載的配比，制造高血壓改善用糖果(20顆)。表6組成含量PQQ.二鈉鹽0.1g砂糖80g糖稀20g香料0.1g(實施例5)按照表7記載的處方，利用常規(guī)方法制備高血壓改善用片劑(每片200mg)。表7組成含量PQQ二鈉鹽5mg乳糖120mg玉米淀粉45mg合成硅酸鋁12mg羧甲基纖維素4丐15mg硬脂酸鎂3mg(實施例6)按照表8記載的處方，利用常規(guī)方法制備高血壓改善用散劑(每包550mg)。表8組成含量PQQ二乙酯5mg乳糖330mg玉米淀粉215mg(實施例7)按照表9記載的處方，制備高血壓改善用硬膠嚢劑(每粒膠嚢160mg)。表9組成含量PQQ—烯丙酯5mg乳糖90mg玉米淀粉45mg幾丙基纖維素20mg向5mgPQQ—烯丙酯中添加90mg乳糖和45mg玉米淀4分，混合。向其中添加20mg羥丙基纖維素的水溶液，捏合。然后，使用擠出造粒機(jī)，按照常規(guī)方法造粒。將該顆粒填充在明膠硬膠嚢中，由此制備硬膠嚢劑。(實施例8)按照表IO記載的處方，制備高血壓改善用軟膠嚢劑(每粒膠嚢170mg)。<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>向165mg大豆油中添加5mgPQQ二鈉鹽，混合。然后，使用轉(zhuǎn)模式自動成型機(jī)，按照常規(guī)方法將其充填到軟膠嚢中，由此制備軟膠嚢劑。產(chǎn)業(yè)實用性沖艮據(jù)本發(fā)明，可以提供含有吡咯并喹啉醌或其酯、或其鹽作為有效成分的高血壓改善劑。本說明書中引用的所有出版物、專利和專利申請均直4妄引用而納入本說明書中。權(quán)利要求1.高血壓改善劑，其含有通式(I)表示的化合物或其鹽作為有效成分，式中，R1、R2和R3相同或不同，表示低級烷基、低級烯基、低級炔基、芳烷基、烷芳基、苯基、氫原子。2.高血壓改善方法，該方法向必需的對象給予有效量的權(quán)利要求1所述的通式(I)表示的化合物或其鹽。3.權(quán)利要求1所述的通式(I)表示的化合物或其鹽在制造高血壓改善劑中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明的目的在于提供一種安全且高效的高血壓改善劑。根據(jù)本發(fā)明，可以提供含有通式(I)表示的化合物或其鹽作為有效成分的高血壓改善劑。式中，R₁、R₂和R₃相同或不同，表示低級烷基、低級烯基、低級炔基、芳烷基、烷芳基、苯基、氫原子。文檔編號A61P9/12GK101553488SQ20078004130公開日2009年10月7日申請日期2007年9月7日優(yōu)先權(quán)日2006年9月8日發(fā)明者中野昌彥,吉川和俊,神谷俊一,荻野史子申請人:協(xié)和發(fā)酵生化株式會社;三菱瓦斯化學(xué)株式會社