專利名稱：單純皰疹病毒聯(lián)合亞單位疫苗及其使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供疫苗，所述疫苗包含兩種或多種重組單純皰疹病毒(HSV)蛋白 質(zhì)，所述蛋白質(zhì)選自gD蛋白、gC蛋白和gE蛋白；并提供對對象進(jìn)行抗HSV 免疫接種以阻止其免疫逃避的方法和用于治療、阻止、抑制、壓制HSV感染 或其癥狀或表現(xiàn)和/或降低其發(fā)生率的方法，所述方法包括施用本發(fā)明的疫苗。
背景技術(shù)：
l型單純皰疹病毒(HSV-l)和2型單純皰疹病毒(HSV-2)是常見的人類病原 體，引起多種臨床疾病，包括口腔面部感染、生殖器皰疹、眼部感染、皰疹 性腦炎和新生兒皰疹。HSV-1與非生殖器感染更加相關(guān)，且最常見的是在兒 童期通過非性接觸獲得的。不過，在過去十年間，其已經(jīng)成為生殖器皰疹的 重要病因。HSV-2是絕大多數(shù)生殖器皰疹的病因。估計(jì)其在美國每年造成 500,000人感染。盡管有多種治療HSV疾病的抗病毒劑，但生殖器HSV-2感 染仍舊是一個長期的問題，在美國，14-49歲個體中的血清陽性率為大約17%, 而在南美洲和非洲的部分地區(qū)，血清陽性率更高。
現(xiàn)在迫切需要預(yù)防HSV-1和HSV-2原發(fā)性(初次)感染和預(yù)防HSV-1和 HSV-2復(fù)發(fā)的方法。
單純皰疹病毒還是人免疫缺陷病毒(HIV)感染的主要風(fēng)險(xiǎn)因素。HSV-2血 清陽性個體感染HIV的風(fēng)險(xiǎn)增加2倍。初次HSV-2感染之后的得病率最高， 此時HSV-2的再活化最為頻繁。以降低HSV感染為目的的治療和疫苗策略可 預(yù)防HIV的傳播、獲得以及疾病進(jìn)展。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供疫苗，其包含兩種或多種重組單純皰疹病毒(HSV)蛋白質(zhì)，所 述蛋白質(zhì)選自gD蛋白、gC蛋白和gE蛋白；和用于對對象進(jìn)行抗HSV免疫 接種和治療、阻止、抑制、壓制HSV感染或其癥狀或表現(xiàn)或降低其發(fā)生率的 方法，所述方法包括施用本發(fā)明的疫苗。在一個實(shí)施方式中，所述疫苗額外地包含佐劑。
在一個實(shí)施方式中，本發(fā)明提供疫苗，其包含(a)重組HSVgD蛋白或 其片段；(b)重組HSV gC蛋白或其片段；(c)重組HSV gE蛋白或其片段；
和(d)佐劑。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供疫苗，其包含(a)重組HSVgD蛋白或 其片段；(b)重組HSVgC蛋白或其片段；和(c)佐劑。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供疫苗，其包含(a)重組HSVgD蛋白或 其片段；(b)重組HSVgE蛋白或其片段；禾H (c)佐劑。
在一個實(shí)施方式中，本發(fā)明提供疫苗，其包含(a)重組HSVgC蛋白或 其片段；(b)重組HSVgE蛋白或其片段；和(c)佐劑。
在一個實(shí)施方式中，每一所述重組HSV蛋白是重組HSV-1蛋白。在另一 實(shí)施方式中，每一所述重組HSV蛋白是重組HSV-2蛋白。在另一實(shí)施方式中， 所述重組HSV蛋白是重組HSV-1蛋白和重組HSV-2蛋白的混合物。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種在對象中誘導(dǎo)抗HSV免疫應(yīng)答的方 法，所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種治療、壓制、抑制對象的HSV感染 或降低HSV感染的發(fā)生率的方法，所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的疫 苗的步驟。在一個實(shí)施方式中，所述HSV感染是HSV-1感染。在一個實(shí)施方 式中，所述HSV感染是HSV-2感染。在一個實(shí)施方式中，所述HSV感染是 原發(fā)性HSV感染。在一個實(shí)施方式中，所述HSV感染是原發(fā)性HSV感染之 后的潮紅(flare)、復(fù)發(fā)(recurrence)或HSV唇皰疹(HSV labialis)。在一個實(shí)施方 式中，所述HSV感染是HSV腦炎。在一個實(shí)施方式中，所述HSV感染是 HSV新生兒感染。在一個實(shí)施方式中，所述對象感染了HIV。


圖1:玫瑰花結(jié)形成試驗(yàn)(Rosetting assay)檢測阻斷C3b結(jié)合HSV-1感染 的細(xì)胞上的gC的抗體。(A)上方測定C3b結(jié)合gC-l的玫瑰花結(jié)形成試驗(yàn)的 示意圖。HSV-1感染的Vero細(xì)胞在細(xì)胞表面表達(dá)gC，并結(jié)合C3b包被的綿 羊紅細(xì)胞，從而在感染的Vero細(xì)胞周圍形成玫瑰花結(jié)。下方阻斷玫瑰花結(jié) 形成的抗體的示意圖。存在抗gC抗體時，C3b包被的紅細(xì)胞不能結(jié)合gC， 因此無玫瑰花結(jié)形成。(B)使用來自假免疫或gC-l免疫的小鼠的血清阻斷C3b包被的紅細(xì)胞形成玫瑰花結(jié)(+/-標(biāo)準(zhǔn)誤)。
圖2:對以側(cè)腹部感染致死量的WT病毒進(jìn)行攻擊的gC-l免疫的小鼠進(jìn)
行疾病評分。小鼠被假免疫或以0.1、 1或10嗎的gC-l進(jìn)行免疫。攻擊后3 至7天對免疫的小鼠的接種部位和帶狀皰疹樣部位(zosteriform sites)的疾病嚴(yán) 重程度進(jìn)行評分。
圖3:對免疫后再以側(cè)腹部感染致死量的WT病毒進(jìn)行攻擊的小鼠進(jìn)行疾 病評分。小鼠被假免疫或以gD-l單獨(dú)免疫或以gD-l和gC-l免疫。攻擊后3 至14天對小鼠的接種部位和帶狀皰疹樣部位的疾病嚴(yán)重程度進(jìn)行評分。
圖4:免疫后再以致死量的WT病毒進(jìn)行攻擊的小鼠的存活率。小鼠被假 免疫或以gD-l單獨(dú)免疫或以gD-l和gC-l免疫。監(jiān)測攻擊后3-15天的存活 率。
圖5:自DRG回收病毒。小鼠被假免疫或以gD-l單獨(dú)免疫或以gD-l和 gC-l免疫。然后以致死量的HSV-1對各組進(jìn)行攻擊。收集后根神經(jīng)節(jié)(DRG) 并測定感染性病毒。
圖6:抗gC-l IgG不中和HSV-l。通過3次肌肉注射(IM) 5昭的gC-l 與CpG (50 pg/小鼠)和鋁鹽(25 蛋白)的混合物免疫小鼠。第三次免疫后2 周獲取血清，在蛋白G柱上自小鼠血清純化IgG并測試中和抗體活性。作為 對照，使用抗gDl單克隆抗體DLll、抗gC-l單克隆抗體lC8 (其結(jié)合gC-l 上的與C3b相互作用并阻斷C3b與HSV-1感染的細(xì)胞形成玫瑰花結(jié)的結(jié)構(gòu) 域)、和非免疫鼠IgG進(jìn)行中和。將大約80PFU的HSV-1NS株與獲取自免疫 的小鼠的抗gC-l IgG或與DLll、 1C8或非免疫鼠IgG溫育1小時，37°C。 通過在Vera細(xì)胞上進(jìn)行噬斑分析而確定病毒效價(jià)。
圖7:側(cè)腹部感染5xl05 HSV-1之前24小時，對補(bǔ)體完好的小鼠(C57B1/6) 或C3敲除小鼠(C3K0)用抗gC-l IgG (200 pg/小鼠)、1C8 (200嗎/小鼠)、或非 免疫鼠IgG (200 pg/小鼠)進(jìn)行被動免疫。評價(jià)小鼠接種和帶狀皰疹樣部位的疾 病，評價(jià)進(jìn)行l(wèi)l天。
圖8: (A)免疫印跡分析HSV-2野生型和gC2-nul1感染的細(xì)胞的提取物 中的gC2表達(dá)。以兔抗gC2抗體R81或作為上樣對照的兔抗VP5對膜進(jìn)行探 測。(B至E)用正常人血清(NHS)中和HSV-1(NS)和HSV-2(G、 333、和2.12) 野生型和gC-null株。病毒與PBS (對照)或作為補(bǔ)體來源的指定濃度的NHS 溫育1小時，37°C。結(jié)果表示為PFU/ml (對照的％)并如下計(jì)算(加NHS的PFU/加PBS的PFU) X 100。對于毒株G，結(jié)果代表4次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均效價(jià) ±標(biāo)準(zhǔn)差，對于毒株333、 2.12和NS，結(jié)果代表3次實(shí)驗(yàn)的平均效價(jià)士標(biāo)準(zhǔn) 差。比較野生型和gC-null病毒的曲線下面積(AUC):毒株G為P〈 0.0001， 毒株333為P〈0.002，毒株2.12為P<0.001， NS毒株為P〈0.05。
圖9: (A)NHS、耗竭Clq的NHS(Clq耗竭)、和以Clq重建的耗竭Clq 的血清(Clq耗竭+0^)的總?cè)苎a(bǔ)體活性。EA(包被IgM的綿羊紅細(xì)胞)與 血清溫育并確定溶解的EA的百分?jǐn)?shù)。(B)通過經(jīng)典補(bǔ)體途徑中和gC l-null 和gC2-null病毒。以Clq耗竭的或Clq重建的20n/。 NHS進(jìn)行中和實(shí)驗(yàn)。所 示結(jié)果代表三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均效價(jià)±標(biāo)準(zhǔn)差。比較熱滅活的NHS與NHS 或Clq-恢復(fù)血清之間的NS-gClnull和G-gC2nu11， P<0.02。與此不同，比較 熱滅活的NHS與耗竭Clq的血清之間的NS-gClnull和G-gC2nulI， P < 0.23 和0.86，沒有顯著性。
圖10:在無針對HSV的特異性抗體的情況下，用來自4個供者的NHS 中和HSV-1和HSV-2 gC-null病毒。在與PBS、熱滅活的NHS (無活性NHS)、 或20% NHS溫育的病毒上進(jìn)行中和實(shí)驗(yàn)。4份血清樣品標(biāo)記為1到4。所示 結(jié)果代表三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均效價(jià)±標(biāo)準(zhǔn)差。對于全部4份血清，比較PBS 與NHS之間的NS-gClnull均P < 0.001 ，而對于G-gC2nu11病毒，P范圍在0.006 至<0.001。與此不同，PBS與熱滅活的NHS相比沒有顯著區(qū)別。
圖11:對HSV-1和HSV-2 gC-null病毒的中和依賴于C3活化。在使用 PBS、20% NHS、或以無活性Compstatin (NHS +線性)或活性Compstatin (NHS + 4W9A)處理的NHS處理的病毒上進(jìn)行中和實(shí)驗(yàn)。對于NS-gClnull和 G-gC2nu11，結(jié)果均代表三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均效價(jià)±標(biāo)準(zhǔn)差。對于這兩種病毒， PBS與NHS之間(P〈0.01)和PBS與以無活性Compstatin處理的NHS之間(P <0.05)均有顯著區(qū)別。不過，在PBS與以活性Compstatin處理的NHS之間沒 有檢測到顯著的區(qū)別。
圖12: (A) NHS、耗竭C5的NHS (C5耗竭)和C5-恢復(fù)血清(C5耗竭+ C5) 的總?cè)苎a(bǔ)體活性。(B) gCl-null和gC2-nul1病毒的中和需要C5。病毒與PBS、 20% NHS、 20%耗竭C5的NHS (C5耗竭)、或C5-恢復(fù)血清(C5耗竭+ C5) 溫育。結(jié)果表示為4次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)(NS-gClnull)和2次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)(G-gC2null)的平 均效價(jià)±標(biāo)準(zhǔn)差。對于這兩種病毒，NHS和C5-恢復(fù)的NHS與PBS相比， 均P < 0.005。 PBS與耗竭C5的NHS之間沒有檢測到顯著區(qū)別。(C) NHS、耗竭C6的NHS (C6耗竭)、和C6-恢復(fù)血清(C6耗竭+ C6)的總?cè)苎a(bǔ)體活性。 (D)對gCl-null或gC2-null病毒的中和不依賴于C6。在以PBS、 20%NHS、 耗竭C6的NHS (C6耗竭)、和C6-恢復(fù)血清(C6耗竭+ C6)處理的病毒上進(jìn) 行中和測定。結(jié)果代表三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)(NS-gCl null)和7次實(shí)驗(yàn)(G-gC2null)的平 均效價(jià)±標(biāo)準(zhǔn)差。對于這兩種病毒，PBS與NHS、耗竭C6的血清和C6重 建的血清相比，均P〈0.01。
圖13: (A) NHS和耗竭IgM的NHS (IgM耗竭)的總?cè)苎a(bǔ)體活性。使用 抗體包被的綿羊紅細(xì)胞進(jìn)行溶血試驗(yàn)來證明耗竭IgM的血清中的完全的經(jīng)典 補(bǔ)體途徑。(B)中和HSV-1和HSV-2 gC-null病毒需要天然IgM抗體。gC-null 病毒與20n/。NHS、熱滅活的NHS(無活性NHS)、 20%耗竭IgM的NHS (IgM 耗竭)、和IgM-恢復(fù)血清(IgM耗竭+IgM)溫育。所示結(jié)果代表4次獨(dú)立實(shí)驗(yàn) 的平均效價(jià)±標(biāo)準(zhǔn)差。P<0.05，比較IgM耗竭的血清與IgM重建的血清的 NS-gClnull禾Q G-gC2null。與此不同，比較PBS與耗竭IgM的血清之間的 NS-gClnull和G-gC2null沒有顯著區(qū)別，P分別為0.83和0.31 。(C至F)ELISA 檢測天然IgM抗體與gC2-rmll病毒的結(jié)合。將來自4個供者的熱滅活的20% NHS系列稀釋并加至微孔板的以G-gC2mill包被的空或?qū)φ湛字?。?shí)驗(yàn)進(jìn)行 了兩次，結(jié)果相似。給出了實(shí)驗(yàn)l的結(jié)果。
圖14:鼠側(cè)腹部模型的NS-gE264疾病。以5 x 105 PFU的NS-gE264或 拯救(rescue)NS-gE264感染小鼠，并在感染后3-7天對帶狀皰疹樣疾病進(jìn)行評 分。(A)無被動轉(zhuǎn)移IgG: NS-gE264引起與拯救病毒相當(dāng)?shù)募膊　?B)被動 轉(zhuǎn)移人抗HSVIgG: NS-gE264疾病評分顯著低于拯救株(P<.001)。 (C)被動 轉(zhuǎn)移人非免疫IgG: NS-gE264與拯救株之間沒有顯著區(qū)別。N-每組5只小鼠， 例外是，對無IgG的NS-gE264， N=10。
圖15:感染后3和4天DRG的病毒效價(jià)。Balb/C在側(cè)腹部接種105 PFU 的NS (WT)或5 x 105 PFU的NS-gCSs aaC3。分別測定來自各小鼠的DRG的 效價(jià)。結(jié)果代表每組3只小鼠的平均值±SE。線代表檢測下限(2PFU)。
圖16: (A)在補(bǔ)體完好的小鼠中，2.12-gCnull的毒力低于2.12。 HSV-2 毒株2.12和2.12-gCnull以5 x 105 PFU刮擦接種于補(bǔ)體完好的C57B1/6小鼠 的側(cè)腹部(n-lO)，感染后3-7天對疾病進(jìn)行評分。2.12-gCnull在接種部位(左 側(cè))和帶狀皰疹樣部位(右側(cè))引起明顯更少的疾病(P < .001)。 (B)在C3KO小 鼠中，2.12-gCnull的毒力與2.12 —樣。在C3KO小鼠中進(jìn)行了相同的實(shí)驗(yàn)(n=4)。在2.12-gCnull和2.12中沒有檢測到差異。誤差線代表SD。
圖17:在小鼠血清中測定到的針對誘導(dǎo)免疫原的抗體。結(jié)果代表以bac-gE 片段免疫的5只小鼠或3只假免疫小鼠的平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤。
圖18:結(jié)合gE并阻斷生物素標(biāo)記的非免疫人IgG結(jié)合于FcYR的鼠抗體 和兔抗體。(A)感染的細(xì)胞與來自免疫的小鼠(n = 5/組)或假免疫對照(n = 3) 的血清溫育。通過流式細(xì)胞術(shù)評價(jià)血清(1:10稀釋)與感染細(xì)胞上的gE的結(jié)合。 (B)將血清(未稀釋)加至感染的細(xì)胞以阻斷10昭生物素標(biāo)記的非免疫人IgG 的結(jié)合。短棒表示各組的中位值。
圖19:對gD/gC免疫接種的抗gD抗體應(yīng)答。單獨(dú)用gD (前三個條形)或 一起用gC與gD(置于同一注射器中)(后兩個條形)免疫小鼠3次。結(jié)果顯示， 同時施用gC和gD減弱了對50ng gD的抗體應(yīng)答。
圖20: (A)如圖19所示免疫小鼠，且對接受50nggD和10嗎gC的小鼠 用50 ng gD進(jìn)行加強(qiáng)。對gD的抗體應(yīng)答增強(qiáng)(最后一個條形)。(B)抗血清抑 制C3b包被的紅細(xì)胞形成玫瑰花結(jié)的能力。
圖21: (A)對gC與佐劑CpG和鋁鹽的混合物進(jìn)行免疫的ELISA抗體應(yīng) 答。(B)抗血清抑制C3b包被的紅細(xì)胞形成玫瑰花結(jié)的能力。
圖22: gC-2免疫的小鼠在側(cè)腹部暴露于HSV-2后的存活率。Balb/C小 鼠以0.5、 1、 2、或5嗎的gC-2與CpG(50iag/小鼠)禾口鋁鹽(25^ig/嗎蛋白)的 混合物腓腸肌注射免疫或以CpG和鋁鹽但無gC-2假免疫，注射3次，間隔為 兩周。第三次免疫后14天，用4xl05 PFU的HSV-2毒株2.12在剔毛并化學(xué) 脫毛的側(cè)腹部刮擦接種對小鼠進(jìn)行攻擊。記錄0-14天的存活率。
圖23: gC-2免疫的小鼠側(cè)腹部暴露于HSV-2之后在接種部位和帶狀皰疹 樣部位的疾病嚴(yán)重程度。如圖22所示進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。以4xl05PFU的HSV-2毒株 2.12刮擦接種攻擊之后，在3-14天對動物接種部位和帶狀皰疹樣部位的疾病 嚴(yán)重程度進(jìn)行評分(N = 5只小鼠/組)。
圖24: gC-2免疫的小鼠陰道暴露于HSV-2之后的存活率。Balb/C小鼠 以腓腸肌注射CpG (50嗎/小鼠)和鋁鹽(25昭/嗎蛋白)進(jìn)行假免疫或注射1、2、 或5 ^g的gC-2與CpG和鋁鹽的混合物進(jìn)行免疫，間隔為兩周。除了一組以 5嗎劑量免疫2次[標(biāo)記為5嗎(2x)]而另一組5只小鼠免疫3次[標(biāo)記為5嗎(3x)] 之外，各組5只小鼠均免疫3次。第三次免疫后9天或5嗎(2x)免疫之后23 天，給小鼠腹腔內(nèi)注射(IP) Depo Provem (2 mg/小鼠)以同步化發(fā)情周期。5天后，通過陰道內(nèi)施用2x105 PFU的HSV-2毒株2.12對小鼠進(jìn)行攻擊。觀察 動物從0-14天的死亡率。
圖25: gC-2免疫的小鼠陰道暴露于HSV-2之后的平均疾病評分。如圖 24所示進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。2xl()SpFU的HSV-2毒株2.12陰道內(nèi)攻擊之后，對動物在 3-14天的疾病嚴(yán)重程度進(jìn)行評分。
圖26: gC-2免疫的小鼠陰道暴露于HSV-2之后的陰道HSV-2病毒效價(jià)。 如圖24所示進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。攻擊后l-ll天每日獲取陰道拭子，并確定病毒效價(jià)。
圖27: gD-2免疫的小鼠側(cè)腹部暴露于HSV-2之后的存活率。Balb/C小 鼠被假免疫或以10、 25、 50、或100 ng的gD-2與CpG (50 pg/小鼠)和鋁鹽(25 pg/嗎蛋白)的混合物腓腸肌IM免疫3次。通過側(cè)腹部接種4xl05 PFU/10ml 的HSV-2毒株2.12攻擊小鼠。
圖28: gD-2免疫的小鼠側(cè)腹部暴露于HSV-2之后的平均疾病評分。如圖 27所示進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。側(cè)腹部接種4x105 PFU/10ml的HSV-2毒株2.12之后，在 3-14天對動物接種部位和帶狀皰疹樣部位的疾病嚴(yán)重程度進(jìn)行評分。
圖29: gD-2免疫的小鼠陰道暴露于HSV-2之后的存活率。Balb/C小鼠 以50、 100、或250 ng (3x)的gD-2 IM免疫3次(3x)或以250 ng的gD-2 IM免 疫2次(2x)。 gD-2與CpG (50嗎/小鼠)和鋁鹽(25嗎 g蛋白)混合，然后如圖 24就gC-2所描述的那樣接種。如圖24就gC-2免疫所描述的那樣用Depo Provera⑧處理小鼠并以2xl05 PFU的HSV-2毒株2.12進(jìn)行攻擊，并評價(jià)存活 率和疾病嚴(yán)重程度。
圖30: gD-2免疫的小鼠陰道暴露于HSV-2之后的平均疾病評分。如圖 29所示進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。以2xl()SpFU的HSV-2毒株2.12進(jìn)行陰道內(nèi)攻擊之后，在 3-14天對動物的疾病嚴(yán)重程度評分。
圖31: gD-2免疫的小鼠陰道暴露于HSV-2之后的陰道HSV-2病毒效價(jià)。 如圖29所示進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。攻擊后l-ll天每日獲取陰道拭子，各組3只小鼠。
圖32; (A)維持111￥/1 ￥-1+/2-共感染的對象的補(bǔ)體水平。測定CD4T-細(xì)胞計(jì)數(shù)< 200/^1、 200-500/pl、和> 500/pl的HIV陽性對象的血清總?cè)苎a(bǔ) 體活性(CHs())以及來自未感染HIV的對照的血清總?cè)苎a(bǔ)體活性(CH5。)。所示 結(jié)果代表平均值+/-標(biāo)準(zhǔn)誤(SE)。 (B)僅抗體或抗體與補(bǔ)體中和HSV-1 WT和 gC/gE突變體病毒。WT或gC/gE突變體病毒與PBS、以EDTA處理以滅活補(bǔ) 體的1%血清(標(biāo)記為Ab)、或含有活性補(bǔ)體的1%血清(標(biāo)記為Ab&C)溫育1小時，37°C。
圖33: gC/gE突變體病毒在病毒體表面表達(dá)的HSV-1糖蛋白的濃度類似 于WT病毒或較其略高。通過免疫印跡和光密度分析法評價(jià)純化的gC/gE突 變體和WT病毒的VP5、 gB、 gC、 gD、 gE、 gH/gL、和gl表達(dá)，以比較相對 的糖蛋白濃度。
圖34: HSV-1FcyR在抗體中和中的作用。(A)用于解釋gC/gE突變體病 毒更易被抗體單獨(dú)中和的可能的模型。在WT病毒模型左側(cè)，gE結(jié)合IgG的 Fc結(jié)構(gòu)域，防止F(ab')2與抗原(在此顯示的是gD)結(jié)合。在WT病毒模型的右 側(cè)，顯示了抗體雙極橋連(bipolar bridging),其中Fab結(jié)構(gòu)域結(jié)合gD，而同一 IgG分子的Fc結(jié)構(gòu)域結(jié)合gE。如果抗體的結(jié)合如所示的那樣出現(xiàn)于WT病毒 模型的左側(cè)而非右側(cè)，則HSV-1 FqR (由gE/gl組成)可防止某些F(ab')2結(jié)構(gòu) 域與它們的靶抗原相互作用。在gC/gE突變體病毒的模型中，AgE不能結(jié)合 IgG Fc結(jié)構(gòu)域，使得F(ab')2結(jié)構(gòu)域結(jié)合抗原(顯示為gD)并中和病毒。(B)無 功能病毒FqR無法解釋為何gC/gE突變體病毒更易被抗體中和。病毒與來自 HIV陰性供者的集合人IgG溫育并確定中和的量。
圖35: gC和gE免疫逃避結(jié)構(gòu)域遮蔽關(guān)鍵的中和表位。(A)WT和gC/gE 突變體病毒與針對gB, 、 gC、 gD、 gH/gL、或gl。所示結(jié)果代表以每一單獨(dú) 的抗體進(jìn)行2-3次測定的中和(Log^) +/-SE。 (B) WT和gC/gE突變體病毒與針 對每一單獨(dú)的糖蛋白的兔血清溫育。所示結(jié)果代表對每一抗體進(jìn)行2-3測定的 中和+/-SE。
圖36:抗糖蛋白免疫球蛋白結(jié)合HSV-1 WT和gC/gE突變體病毒。(A)比 較抗gD與gC/gE突變體和WT病毒的結(jié)合。(B)比較抗gB與gC/gE突變體 和WT病毒的結(jié)合。(C)比較抗gH/gL與gC/gE突變體和WT病毒的結(jié)合。 圖A-C代表三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值。誤差線代表標(biāo)準(zhǔn)差。(D)雞抗gD免疫球 蛋白的結(jié)合。圖D進(jìn)行一次。
圖37:表位遮掩模型。左側(cè)，gC阻斷gD上的表位，防止中和IgG抗體 結(jié)合于WT病毒。右側(cè)，突變體病毒上的gC不能阻斷gD的表位，使得中和 抗體能夠結(jié)合。gE的表位遮蔽在圖中沒有顯示；我們的發(fā)現(xiàn)支持類似的gE 模型。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供疫苗，其包含兩種或多種重組單純皰疹病毒(HSV)蛋白質(zhì)，所 述蛋白質(zhì)選自gD蛋白、gC蛋白和gE蛋白；和用于對對象進(jìn)行抗HSV免疫 接種和治療、阻止、抑制、壓制HSV感染或其癥狀或表現(xiàn)或降低其發(fā)生率的 方法，所述方法包括施用本發(fā)明的疫苗。在一個實(shí)施方式中，所述疫苗額外 地包含佐劑。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供疫苗，其包含重組單純皰疹病毒(HSV) gD 蛋白和選自HSV gC蛋白和HSV gE蛋白中的至少一種的重組蛋白。在一個實(shí) 施方式中，所述疫苗額外地包含佐劑。
在一個實(shí)施方式中，本發(fā)明提供疫苗，其包含(a)重組單純皰疹病毒-1 (HSV-l)gD蛋白或其片段；(b)重組HSV-lgC蛋白或其片段；禾口 (c)佐劑。 在另一實(shí)施方式中，給人類對象施用所述疫苗引發(fā)抗HSV-lgC抗體，所述抗 體阻斷相應(yīng)于所述重組HSV-1 gC蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。在另一 實(shí)施方式中，所述gC片段包括gC的免疫逃避結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí)施方式中， 以gC和gD、或其片段聯(lián)合免疫限制了 HSV-1在后續(xù)攻擊過程中逃避宿主免 疫應(yīng)答的能力。在另一實(shí)施方式中，以gC或其片段免疫限制了 HSV-1在后 續(xù)攻擊過程中逃避宿主抗gD免疫應(yīng)答的能力。在另一實(shí)施方式中，所提及的 宿主免疫應(yīng)答包括由所述疫苗誘導(dǎo)的抗gD抗體。
在另一實(shí)施方式中，"HSV蛋白"指的是HSV-l或HSV-2蛋白。在另一實(shí) 施方式中，"HSV蛋白"指的是HSV-1蛋白。在另一實(shí)施方式中，"HSV蛋白" 指的是HSV-2蛋白。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語指的是HSV-1 gD蛋白。在 另一實(shí)施方式中，該術(shù)語指的是HSV-1 gD蛋白的片段。在另一實(shí)施方式中， 該術(shù)語指的是HSV-1 gC蛋白。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語指的是HSV-1 gC 蛋白的片段。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語指的是HSV-lgE蛋白。在另一實(shí)施 方式中，該術(shù)語指的是HSV-lgE蛋白的片段。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語指 的是HSV-2gD蛋白。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語指的是HSV-2gD蛋白的片 段。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語指的是HSV-2gC蛋白。在另一實(shí)施方式中， 該術(shù)語指的是HSV-2 gC蛋白的片段。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語指的是 HSV-2gE蛋白。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語指的是HSV-2 gE蛋白的片段。 在一個實(shí)施方式中，在此所提及的片段是免疫原性片段。在一個實(shí)施方式中， "免疫原性片段"指的是寡肽、多肽或蛋白質(zhì)的一部分，其具有免疫原性且當(dāng)施 用于對象后弓I發(fā)保護(hù)性免疫應(yīng)答。在一個實(shí)施方式中，"免疫原性"或"具有免疫原性的"在此指的是當(dāng)?shù)鞍?質(zhì)、肽、核酸、抗原或生物體被施用于動物時所述蛋白質(zhì)、肽、核酸、抗原 或生物體在所述動物內(nèi)引發(fā)免疫應(yīng)答的固有能力。因此，在一個實(shí)施方式中， "增強(qiáng)免疫原性"指的是提高當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)、肽、核酸、抗原或生物體被施用于動物 時所述蛋白質(zhì)、肽、核酸、抗原或生物體在所述動物內(nèi)引發(fā)免疫應(yīng)答的固有 能力。在一個實(shí)施方式中，可通過如下方面衡量蛋白質(zhì)、肽、核酸、抗原或 生物體引發(fā)免疫應(yīng)答的能力的提高更大量的針對蛋白質(zhì)、肽、核酸、抗原 或生物體的抗體、更具多樣性的針對抗原或生物體的抗體、更大量的特異于 蛋白質(zhì)、肽、核酸、抗原或生物體的T細(xì)胞、針對蛋白質(zhì)、肽、核酸、抗原 或生物體的更強(qiáng)的細(xì)胞毒T細(xì)胞應(yīng)答或輔助T細(xì)胞應(yīng)答，等等。
在一個實(shí)施方式中，在此所使用的"功能性"一詞在本發(fā)明中的含義是指蛋 白質(zhì)、肽、核酸、片段或其變體展現(xiàn)出生物學(xué)活性或功能的固有能力。在一 個實(shí)施方式中，所述生物學(xué)功能是其與相互作用配偶體例如膜相關(guān)受體結(jié)合 的結(jié)合特性，而在另一實(shí)施方式中，是其三聚化特性。對于本發(fā)明的功能性 片段和功能性變體，這些生物學(xué)功能實(shí)際上可以改變，例如在其特異性或選 擇性方面發(fā)生改變，但保留基本的生物學(xué)功能。
從相關(guān)技術(shù)領(lǐng)域可獲知眾多用于測定蛋白質(zhì)、多肽或分子的生物學(xué)活性 的方法，例如蛋白質(zhì)測定法，其使用標(biāo)記的底物，通過層析法進(jìn)行底物分析
例如HPLC或薄層色譜、分光光度法等等。(見，例如，Maniatis et al. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.)。
在一個實(shí)施方式中，在此所使用的術(shù)語"片段"指的是與全長蛋白質(zhì)或多肽 相比較短的或包含較少氨基酸的蛋白質(zhì)或多肽。在另一實(shí)施方式中，片段指 的是與全長核酸相比較短的或包含較少核苷酸的核酸。在另一實(shí)施方式中， 所述片段是N-末端片段。在另一實(shí)施方式中，所述片段是C-末端片段。在一 個實(shí)施方式中，所述片段是所述蛋白質(zhì)、肽或核酸的內(nèi)部序列節(jié)段。在另一 實(shí)施方式中，所述片段是所述蛋白質(zhì)、肽或核酸的免疫原性內(nèi)部序列節(jié)段。 在另一實(shí)施方式中，所述片段是所述蛋白質(zhì)、肽或核酸的功能性內(nèi)部序列節(jié) 段。在另一實(shí)施方式中，所述片段是N-末端免疫原性片段。在一個實(shí)施方式 中，所述片段是C-末端免疫原性片段。在另一實(shí)施方式中，所述片段是N-末 端功能性片段。在另一實(shí)施方式中，所述片段是C-末端功能性片段。因此，在一個實(shí)施方式中，本發(fā)明所述的蛋白質(zhì)(例如gC-l、 gC-2、 gE-l、 gE-2、 gD-l、 gD-2等等)的"免疫原性片段"指的是所述蛋白質(zhì)的部分，在一個 實(shí)施方式中，其具有免疫原性，而在另一實(shí)施方式中，當(dāng)施用于對象后其引 發(fā)保護(hù)性免疫應(yīng)答。
在一個實(shí)施方式中，本發(fā)明的組合物和方法中所提及的任何HSV，在一 個實(shí)施方式中，指的是HSV-1，而在另一實(shí)施方式中，指的是HSV-2，而在 另一實(shí)施方式中，指的是HSV-l和HSV-2兩者，而在另一實(shí)施方式中，指的 是HSV-1或HSV-2。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供疫苗，其包含(a)重組單純皰疹病毒-2 (HSV-2)gD蛋白或其片段；(b)重組HSV-2gC蛋白或其片段；和(c)佐齊ij。 在另一實(shí)施方式中，給人類對象施用所述疫苗引發(fā)抗HSV-2gC抗體，所述抗 體阻斷相應(yīng)于重組HSV-2 gC蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。在另一實(shí)施 方式中，所述gC片段包括gC的免疫逃避結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí)施方式中，以gC 和gD、或其片段聯(lián)合免疫限制了 HSV-2在后續(xù)攻擊過程中逃避宿主免疫應(yīng)答 的能力。在另一實(shí)施方式中，以gC或其片段免疫，限制了HSV-2在后續(xù)攻 擊過程中逃避宿主抗gD免疫應(yīng)答的能力。在另一實(shí)施方式中，所提及的宿主 免疫應(yīng)答包括由所述疫苗誘導(dǎo)的抗gD抗體。
本發(fā)明所提供的gC-l亞單位疫苗可保護(hù)抵抗HSV-l感染(圖2)。此外， 在一個實(shí)施方式中，聯(lián)合gC-l/gD-l疫苗賦予了比含有僅gD-l (圖3)或僅gC-l 的疫苗更優(yōu)越的保護(hù)并減輕或預(yù)防后根神經(jīng)節(jié)感染(圖5)。此外，gC-2亞單 位疫苗可保護(hù)抵抗HSV-2感染(圖22-26)，且聯(lián)合gC-2/gD-2疫苗賦予比含 有僅gD-2或僅gC-2的疫苗更優(yōu)越的保護(hù)。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供疫苗，其包含(a)重組HSV-lgD蛋白 或其片段；(b)重組HSV-lgE蛋白或其片段；和(c)佐劑。在另一實(shí)施方式 中，給人類對象施用所述疫苗引發(fā)抗HSV-lgE抗體，所述抗體阻斷相應(yīng)于重 組HSV-1 gE蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。在另一實(shí)施方式中，所述gE 片段包括gE的免疫逃避結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí)施方式中，以gE和gD、或其片段 聯(lián)合免疫限制了 HSV-1在后續(xù)攻擊過程中逃避宿主免疫應(yīng)答的能力。在另一 實(shí)施方式中，以gE或其片段免疫，限制了 HSV-1在后續(xù)攻擊過程中逃避宿 主抗gD免疫應(yīng)答的能力。在另一實(shí)施方式中，所提及的宿主免疫應(yīng)答包括由 所述疫苗誘導(dǎo)的抗gD抗體。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供疫苗，其包含(a)重組HSV-2gD蛋白 或其片段；(b)重組HSV-2 gE蛋白或其片段；和(c)佐劑。在另一實(shí)施方式 中，給人類對象施用所述疫苗引發(fā)抗HSV-2 gE抗體，所述抗體阻斷相應(yīng)于重 組HSV-2 gE蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。在另一實(shí)施方式中，所述gE 片段包括gE的免疫逃避結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí)施方式中，以gE和gD、或其片段 聯(lián)合免疫限制了 HSV-2在后續(xù)攻擊過程中逃避宿主免疫應(yīng)答的能力。在另一 實(shí)施方式中，以gE或其片段免疫，限制了 HSV-2在后續(xù)攻擊過程中逃避宿 主抗gD免疫應(yīng)答的能力。在另一實(shí)施方式中，所提及的宿主免疫應(yīng)答包括由 所述疫苗誘導(dǎo)的抗gD抗體。
本發(fā)明所提供的gE-l亞單位疫苗可保護(hù)抵抗HSV-1感染。此外，聯(lián)合 gE-l/gD-l疫苗賦予了比含有僅gD-l或僅gE-l的疫苗更優(yōu)越的保護(hù)。此外， gE-2亞單位疫苗可保護(hù)抵抗HSV-2感染，而聯(lián)合gE-2/gD-2疫苗賦予了比含 有僅gD-2或僅gE-2的疫苗更優(yōu)越的保護(hù)。
在另一實(shí)施方式中，gC和gE —起的免疫增效效應(yīng)強(qiáng)于任一單獨(dú)的效應(yīng)。 在另一實(shí)施方式中，gC和gE的免疫增效效應(yīng)表現(xiàn)出協(xié)同性。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供疫苗，其包含(a)重組單純皰疹病毒-1 (HSV-l)gC蛋白或其片段；(b)重組HSV-lgE蛋白或其片段；和(c)佐劑。 在另一實(shí)施方式中，給人類對象施用所述疫苗引發(fā)抗HSV-lgC抗體，所述抗 體阻斷相應(yīng)于所述重組HSV-1 gC蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。在另一 實(shí)施方式中，所述gC片段包括gC的免疫逃避結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí)施方式中， 以gC和gE、或其片段聯(lián)合免疫限制了 HSV-1在后續(xù)攻擊過程中逃避宿主免 疫應(yīng)答的能力。在另一實(shí)施方式中，以gC或其片段免疫，限制了HSV-1在 后續(xù)攻擊過程中逃避宿主抗gE免疫應(yīng)答的能力。在另一實(shí)施方式中，以gE 或其片段免疫，限制了 HSV-1在后續(xù)攻擊過程中逃避宿主抗gC免疫應(yīng)答的 能力。在另一實(shí)施方式中，所提及的宿主免疫應(yīng)答包括由所述疫苗誘導(dǎo)的抗 gC抗體。在另一實(shí)施方式中，所提及的宿主免疫應(yīng)答包括由所述疫苗誘導(dǎo)的 抗gE抗體。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供疫苗，其包含(a)重組單純皰疹病毒-2 (HSV-2)gC蛋白或其片段；(b)重組HSV-2gE蛋白或其片段；和(c)佐劑。 在另一實(shí)施方式中，給人類對象施用所述疫苗引發(fā)抗HSV-2gC抗體，所述抗 體阻斷相應(yīng)于重組HSV-2 gC蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。在另一實(shí)施方式中，所述gC片段包括gC的免疫逃避結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí)施方式中，以gC
和gE、或其片段聯(lián)合免疫限制了 HSV-2在后續(xù)攻擊過程中逃避宿主免疫應(yīng)答 的能力。在另一實(shí)施方式中，以gC或其片段免疫，限制了HSV-2在后續(xù)攻 擊過程中逃避宿主抗gE免疫應(yīng)答的能力。在另一實(shí)施方式中，以gE或其片 段免疫，限制了 HSV-2在后續(xù)攻擊過程中逃避宿主抗gC免疫應(yīng)答的能力。 在另一實(shí)施方式中，所提及的宿主免疫應(yīng)答包括由所述疫苗誘導(dǎo)的抗gC抗 體。在另一實(shí)施方式中，所提及的宿主免疫應(yīng)答包括由所述疫苗誘導(dǎo)的抗gE 抗體。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供疫苗，其包含(a)重組HSV-lgD蛋白 或其片段；(b)重組HSV-lgC蛋白或其片段；(c)重組HSV-lgE蛋白或其片 段；和(d)佐劑。在另一實(shí)施方式中，給人類對象施用所述疫苗引發(fā)抗HSV-1 gC抗體，所述抗體阻斷相應(yīng)于所述重組HSV-1 gC蛋白的HSV蛋白的免疫逃 避功能。在另一實(shí)施方式中，施用所述疫苗引發(fā)抗HSV-lgE抗體，所述抗體 阻斷相應(yīng)于重組HSV-1 gE蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。在另一實(shí)施方 式中，所述gC片段包括gC的免疫逃避結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí)施方式中，所述gE 片段包括gE的免疫逃避結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí)施方式中，以gC、 gD和gE、或其 片段聯(lián)合免疫限制了 HSV-1在后續(xù)攻擊過程中逃避宿主免疫應(yīng)答的能力。在 另一實(shí)施方式中，以gC和gE、或其片段免疫，限制了 HSV-1在后續(xù)攻擊過 程中逃避宿主抗gD免疫應(yīng)答的能力。在另一實(shí)施方式中，宿主免疫應(yīng)答包含 由所述疫苗誘導(dǎo)的抗gD抗體。在另一實(shí)施方式中，gC和gE、或其片段一起 的免疫增效效應(yīng)強(qiáng)于任一單獨(dú)的效應(yīng)。在另一實(shí)施方式中，gC和gE的免疫 增效效應(yīng)表現(xiàn)為協(xié)同性。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供疫苗，其包含(a)重組HSV-2gD蛋白 或其片段；(b)重組HSV-2gC蛋白或其片段；(c)重組HSV-2 gE蛋白或其片 段；和(d)佐劑。在另一實(shí)施方式中，給人類對象施用所述疫苗引發(fā)抗HSV-2 gC抗體，所述抗體阻斷相應(yīng)于重組HSV-2 gC蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功 能。在另一實(shí)施方式中，給人類對象施用所述疫苗引發(fā)抗HSV-2gE抗體，所 述抗體阻斷相應(yīng)于重組HSV-2 gE蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。在另一 實(shí)施方式中，所述gC片段包括gC的免疫逃避結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí)施方式中， 所述gE片段包括gE的免疫逃避結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí)施方式中，以gC、 gD和 gE、或其片段聯(lián)合免疫限制了 HSV-2在后續(xù)攻擊過程中逃避宿主免疫應(yīng)答的能力。在另一實(shí)施方式中，以gC和gE、或其片段免疫，限制了HSV-2在后 續(xù)攻擊過程中逃避宿主抗gD免疫應(yīng)答的能力。在另一實(shí)施方式中，宿主免疫 應(yīng)答包含由所述疫苗誘導(dǎo)的抗gD抗體。在另一實(shí)施方式中，gC和gE、或其 片段一起的免疫增效效應(yīng)強(qiáng)于任一單獨(dú)的效應(yīng)。在另一實(shí)施方式中，gC和gE、
或其片段的免疫增效效應(yīng)展現(xiàn)出協(xié)同性。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供疫苗，其包含(a)重組HSV-lgD蛋白 或其片段；(b)重組HSV-lgC蛋白或其片段；或(c)重組HSV-lgE蛋白或其 片段。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供疫苗，其包含(a)重組HSV-2gD蛋 白或其片段；(b)重組HSV-2gC蛋白或其片段；或(c)重組HSV-2gE蛋白或 其片段。在一個實(shí)施方式中，所述疫苗還包含佐劑。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的疫苗包括重組HSV-lgD蛋白。在另一實(shí)施 方式中，所述疫苗包含HSV-lgD蛋白的片段。在另一實(shí)施方式中，所述疫苗 包含HSV-2gD蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述疫苗包含HSV-2gD蛋白的片 段。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物中所用的gD蛋白片段是免疫 原性片段。在另一實(shí)施方式中，gD免疫保護(hù)性抗原不需要是整個蛋白。在另 一實(shí)施方式中，保護(hù)性免疫應(yīng)答通常包括抗體應(yīng)答。在另一實(shí)施方式中，gD 的突變體、序列保守性變體、和功能保守性變體可用于本發(fā)明的方法和組合 物，條件是所有此類變體保留了所需的免疫保護(hù)效應(yīng)。
在另一實(shí)施方式中，免疫原性片段可包含來自任何HSV毒株的免疫保護(hù) 性gD抗原。在另一實(shí)施方式中，免疫原性片段可包含HSV的序列變體，如 被感染個體中的那些變體。
在一個實(shí)施方式中，免疫原性多肽也具有抗原性。"抗原性"指的是，在另 一實(shí)施方式中，能夠與免疫系統(tǒng)的抗原識別分子，如免疫球蛋白(抗體)或T細(xì) 胞抗原受體，特異性相互作用的肽。在另一實(shí)施方式中，抗原性肽含有表位， 其長度為至少大約8個氨基酸(AA)。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語所指的肽具 有至少大約9個AA。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語所指的肽具有至少大約10 個AA。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語所指的肽具有至少大約ll個AA。在另一 實(shí)施方式中，該術(shù)語所指的肽具有至少大約12個AA。在另一實(shí)施方式中， 該術(shù)語所指的肽具有至少大約15個AA。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語所指的 肽具有至少大約20個AA。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語所指的肽具有至少大約25個AA。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語所指的肽具有至少大約30個AA。 在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語所指的肽具有至少大約40個AA。在另一實(shí)施方 式中，該術(shù)語所指的肽具有至少大約50個AA。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語 所指的肽具有至少大約70個AA。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語所指的肽具有 至少大約100個AA。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語所指的肽具有至少大約150 個AA。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語所指的肽具有至少大約200個AA。在另 一實(shí)施方式中，該術(shù)語所指的肽具有至少大約250個AA。在另一實(shí)施方式中， 該術(shù)語所指的肽具有至少大約300個AA。在某些實(shí)施方式中，所述肽的上限 為20、 25、 30、 40、 50、 70、 100、 150、 200、 250或300個AA。多肽的抗 原性部分在此也稱為表位，在一個實(shí)施方式中，其可以是對抗體或T細(xì)胞受 體識別具有免疫顯性的部分，或其可以是用于產(chǎn)生針對該分子的抗體的部分， 可通過將所述抗原性部分綴合于載體多肽進(jìn)行免疫而產(chǎn)生所述抗體。具有抗 原性的分子其本身不一定具有免疫原性，具有免疫原性是指能夠在無載體的 情況下引發(fā)免疫應(yīng)答。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物的所述gD蛋白片段是gD-l 片段。在另一實(shí)施方式中，所述gD-l片段由gD-l胞外結(jié)構(gòu)域(ectodomain)組 成。在另一實(shí)施方式中，所述gD-l片段包含gD-l胞外結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí)施 方式中，所述gD-l片段由gD-l胞外結(jié)構(gòu)域的片段組成。在另一實(shí)施方式中， 所述gD-l片段包含gD-l胞外結(jié)構(gòu)域的片段。在另一實(shí)施方式中，所述gD-l 片段是本領(lǐng)域已知的任何其他gD-l片段。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物中所用的gD-l蛋白具有以下 序列
MGGAAARLGAVILFVVIVGLHGVRGKYALADASLKLADPNRFRRKDLPVLD QLTDPPGVRRVYHIQAGLPDPFQPPSLPITVYYAVLERACRSVLLNAPSEAPQIVRGA SEDVRKGPYNLTIAWFRMGGNCAIPITVMEYTECSYNKSLGACPIRTQPRWNYYDSF SAVSEDNLGFLMHAPAFETAGTYLRLVKINDWTEITQFILEHRAKGSCKYALPLRIPP SACLSPQAYQQGVTVDSIGMLPRFIPENQRTVAVYSLKIAGWHGPKAPYTSTLLPPE LSETPNATQPELAPEAPEDSALLEDPVGTVAPQIPP匿HIPSI(2DAATPYHPPATPNN MGLIAGAVGGSLLAALVICGIVYWMRRRTQKAPKRIRLPHIREDDQPSSHQPLFY
(SEQIDNo:l)。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物中所用的gD-l是 SEQ ID No:l的同源物。在另一實(shí)施方式中，所述gD-l蛋白是SEQ ID No:l的異構(gòu)體。在另一實(shí)施方式中，所述gD-l蛋白是SEQIDNo:l的變體。在另 一實(shí)施方式中，所述gD-l蛋白是SEQIDNo:l的片段。在另一實(shí)施方式中， 所述gD-l蛋白是SEQIDNo:l的異構(gòu)體的片段。在另一實(shí)施方式中，所述gD-l 蛋白是SEQIDNo:l的變體的片段。
在另一實(shí)施方式中，編碼本發(fā)明的方法和組合物中所用的gD-l的核酸序 列在GenBank條目中給出，登錄號如下NC—001806、X14112、E03111、E03023、 E02509、 E00402、 E00401、 E00395、 AF487902、 AF487901、 AF293614、 L09242、 J02217、 L09244、 L09245、和L09243。在另一實(shí)施方式中，所述gD-l蛋白 由具有上述GenBank條目之一所示序列的核苷酸分子編碼。在另一實(shí)施方式 中，所述gD-1蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質(zhì)的同源物。 在另一實(shí)施方式中，所述gD-l蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的 蛋白質(zhì)的異構(gòu)體。在另一實(shí)施方式中，所述gD-l蛋白是上述GenBank條目之 一所示序列編碼的蛋白質(zhì)的變體。在另一實(shí)施方式中，所述gD-l蛋白是上述 GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質(zhì)的片段。在另一實(shí)施方式中，所述 gD-l蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質(zhì)的異構(gòu)體的片段。 在另一實(shí)施方式中，所述gD-l蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的 蛋白質(zhì)的變體的片段。
在另一實(shí)施方式中，所述gD-l片段由大約第26-306位氨基酸(AA)組成。 在另一實(shí)施方式中，所述gD-l片段由大約第36-296位AA組成。在另一實(shí)施 方式中，所述片段由大約第46-286位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述片 段由大約第56-276位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述片段由大約第66-266 位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述片段由大約第76-256位AA組成。在 另一實(shí)施方式中，所述片段由大約第86-246位AA組成。在另一實(shí)施方式中， 所述片段由大約第96-236位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述片段由大約 第106-226位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述gD-l片段由大約第116-216 位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述gD-l片段由大約第126-206位AA組 成。在另一實(shí)施方式中，所述gD-l片段由大約第136-196位AA組成。在另 一實(shí)施方式中，所述gD-l片段由大約第26-286位AA組成。在另一實(shí)施方式 中，所述gD-l片段由大約第26-266位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述 gD-l片段由大約第26-246位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述gD-l片段 由大約第26-206位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述gD-l片段由大約第26-166位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述gD-l片段由大約第26-126位 AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述gD-l片段由大約第26-106位AA組成。 在另一實(shí)施方式中，所述gD-l片段由大約第46-306位AA組成。在另一實(shí)施 方式中，所述gD-l片段由大約第66-306位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所 述gD-l片段由大約第86-306位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述gD-l片 段由大約第106-306位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述gD-l片段由大約 第126-306位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述gD-l片段由大約第146-306 位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述gD-l片段由大約第166-306位AA組 成。在另一實(shí)施方式中，所述gD-l片段由大約第186-306位AA組成。在另 一實(shí)施方式中，所述gD-l片段由大約第206-306位AA組成。在替代性實(shí)施 方式中，所述gD-l片段包含或基本上由任何所述氨基酸殘基組成。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物中使用HSV-1 gD AA序列。 在另一實(shí)施方式中，使用HSV-lgD蛋白或肽。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物的所述gD蛋白片段是gD-2 片段。在另一實(shí)施方式中，所述gD-2片段由gD-2胞外結(jié)構(gòu)域組成。在另一 實(shí)施方式中，所述gD-2片段包含gD-2胞外結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí)施方式中，所 述gD-2片段由gD-2胞外結(jié)構(gòu)域的片段組成。在另一實(shí)施方式中，所述gD-2 片段包含gD-2胞外結(jié)構(gòu)域的片段。在另一實(shí)施方式中，所述gD-2片段本領(lǐng) 域已知的任何其他gD-2片段。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物中所用的gD-2具有以下序列
MGRLTSGVGTAALLVVAVGLRVVCAKYALADPSLKMADPNRFRGKNLPVL DQLTDPPGVKRVYHIQPSLEDPFQPPSIPITVYYAVLERACRSVLLHAPSEAPQIVRGA SDEARKHTYNLTIAWYRMGDNCAIPITVMEYTECPYNKSLGVCPIRTQPRWSYYDSF SAVSEDNLGFLMHAPAFETAGTYLRLVKINDWTEITQFILEHRARASCKYALPLRIPP AACLTSKAY(5QGVTVDSIGMLPRFIPENQRTVALYSLKIAGWHGPKPPYTSTLLPPEL SDTTNAT(3PELVPEDPEDSALLEDPAGTVSSQIPPNWHIPSIQDVAPHHAPAAPSNPG LIIGALAGSTLAVLVIGGIAFWVRRRAQMAPKRLRLPHIRDDDAPPSHGPLFY
(SEQIDNo:2)。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物中所用的gD-2是 SEQIDNo:2的同源物。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是SEQIDNo:2的異構(gòu) 體。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是SEQ ID No:2的變體。在另一實(shí)施方式 中，所述蛋白是SEQIDNo:2的片段。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是SEQIDNo:2的異構(gòu)體的片段。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是SEQIDNo:2的變體 的片段。
在另一實(shí)施方式中，編碼本發(fā)明的方法和組合物中所用的gD-2的核酸序 列在GenBank中給出，登錄號如下NC—001798、 E00205、 Z86099、 AY779754、 AY779753、 AY779752、 AY779751、 AY779750、 AY517492、 AY155225、和 K01408。在另一實(shí)施方式中，所述gD-2蛋白由具有上述GenBank條目之一 所示序列的核苷酸分子編碼。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是上述GenBank 條目之一所示序列編碼的蛋白質(zhì)的同源物。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是 上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質(zhì)的異構(gòu)體。在另一實(shí)施方式中， 所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質(zhì)的變體。在另一實(shí) 施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質(zhì)的片段。 在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白 質(zhì)的異構(gòu)體的片段。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一 所示序列編碼的蛋白質(zhì)的變體的片段。
在另一實(shí)施方式中，所述gD-2片段由大約第26-306位AA組成。在另一 實(shí)施方式中，所述gD-2片段由大約第36-296位AA組成。在另一實(shí)施方式中， 所述片段由大約第46-286位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述片段由大約 第56-276位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述片段由大約第66-266位AA 組成。在另一實(shí)施方式中，所述片段由大約第76-256位AA組成。在另一實(shí) 施方式中，所述片段由大約第86-246位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述 片段由大約第96-236位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述片段由大約第 106-226位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述gD-2片段由大約第116-216 位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述gD-2片段由大約第126-206位AA組 成。在另一實(shí)施方式中，所述gD-2片段由大約第136-196位AA組成。在另 一實(shí)施方式中，所述gD-2片段由大約第26-286位AA組成。在另一實(shí)施方式 中，所述gD-2片段由大約第26-266位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述 gD-2片段由大約第26-246位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述gD-2片段 由大約第26-206位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述gD-2片段由大約第 26-166位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述gD-2片段由大約第26-126位 AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述gD-2片段由大約第26-106位AA組成。 在另一實(shí)施方式中，所述gD-2片段由大約第46-306位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述gD-2片段由大約第66-306位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所 述gD-2片段由大約第86-306位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述gD-2片 段由大約第106-306位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述gD-2片段由大約 第126-306位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述gD-2片段由大約第146-306 位AA組成。在另一實(shí)施方式中，所述gD-2片段由大約第166-306位AA組 成。在另一實(shí)施方式中，所述gD-2片段由大約第186-306位AA組成。在另 一實(shí)施方式中，所述gD-2片段由大約第206-306位AA組成。在替代性實(shí)施 方式中，所述gD-2片段包含或基本上由任何所述氨基酸殘基組成。
在另一實(shí)施方式中，所述重組gD蛋白或其片段引發(fā)的抗體抑制gD與細(xì) 胞受體的結(jié)合。在另一實(shí)施方式中，所述受體是皰疹病毒進(jìn)入介導(dǎo)物A (HveA/HVEM)。在另一實(shí)施方式中，所述受體是柄蛋白-1 (HveC)。在另一實(shí) 施方式中，所述受體是柄蛋白-2 (HveB)。在另一實(shí)施方式中，所述受體是修 飾型的硫酸乙酰肝素。在另一實(shí)施方式中，所述受體是硫酸乙酰肝素蛋白聚 糖。在另一實(shí)施方式中，所述受體是本領(lǐng)域已知的任何其他gD受體。
在另一實(shí)施方式中，所述重組gD蛋白或其片段包括AA 26-57。在另一 實(shí)施方式中，因納入這些殘基而引發(fā)的抗體抑制與HVEM的結(jié)合。在另一實(shí) 施方式中，所述gD蛋白或片段包括Y63。在另一實(shí)施方式中，所述gD蛋白 或片段包括R159。在另一實(shí)施方式中，所述gD蛋白或片段包括D240。在另 一實(shí)施方式中，所述gD蛋白或片段包括P246。在另一實(shí)施方式中，所述重 組gD蛋白或片段包括選自Y63、 R159、 D240、和P246的殘基。在另一實(shí)施 方式中，因納入這些殘基之一而引發(fā)的抗體抑制與柄蛋白-1的結(jié)合。
上述對gDAA殘基的命名法包括信號序列的殘基。因此，成熟蛋白質(zhì)的 第一個殘基稱為第"26"位。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物中使用HSV-2gDAA序列。 在另一實(shí)施方式中，使用HSV-2gD蛋白或肽。
每一重組gD-l和gD-2蛋白或其片段代表了本發(fā)明的一個單獨(dú)的實(shí)施方式。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的疫苗包括重組HSV-lgC蛋白。在另一實(shí)施 方式中，所述疫苗包含HSV-lgC蛋白的片段。在另一實(shí)施方式中，所述疫苗 包含HSV-2gD蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述疫苗包含HSV-2gD蛋白的片段。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物中所用的gC-l具有以下序列
MAPGRVGLAVVLWGLLWLGAGVAGGSETASTGPT訂AGAVTNASEAPTSGS PGSAASPEVTPTSTPNPNNVTQNKTTPTEPASPPTTPKPTSTPKSPPTSTPDPKPKNNT TPAKSGRPTKPPGPVWCDRRDPLARYGSRVQIRCRFRNSTRMEFRLQIWRYSMGPSP PIAPAPDLEEVLTNUAPPGGLLVYDSAPNLTDPHVLWAEGAGPGADPPLYSVTGPLP TQRLIIGEVTPATQGMYYLAWGRMDSPHEYGTWVRVRMFRPPSLTLQPHAVMEGQ PFKATCTAAAYYPRNPVEFDWFEDDRQVFNPGQIDTQTHEHPDGFTTVSTVTSEAV GGGVPPRTFTCQMTWHRDSVTFSRRNATGLALVLPRPTITMEFGVRHVVCTAGCVP EGVTFAWFLGDDPSPAAKSAVTA(5ESCDHPGLATVRSTLPISYDYSEYICRLTGYPA GIPVLEHHGSHQPPPRDPTERQV正A正WVGIGIGVLAAGVLVVTAIVYVVRTS(2SRQ RHRR
(SEQIDNo:3)。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物中所用的gC-l是 SEQIDNo:3的同源物。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是SEQIDNo:3的異構(gòu) 體。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是SEQ ID No:3的變體。在另一實(shí)施方式 中，所述蛋白是SEQIDNo:3的片段。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是SEQID No:3的異構(gòu)體的片段。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是SEQ ID No:3的變體 的片段。
在另一實(shí)施方式中，編碼本發(fā)明的方法和組合物中所用的gC-l的核酸序 列在GenBank中給出，登錄號如下NCJ301806、X14112、AJ421509、AJ421508、 AJ421507、 AJ421506、 AJ421505、 AJ421504、 AJ421503、 AJ421502、 AJ421501、 AJ421500、 AJ421499、 AJ421498、 AJ421497、 AJ421496、 AJ421495、 AJ421494、 AJ421493 、 AJ421492 、 AJ421491 、 AJ4214卯、AJ421489、 AJ421488 、和AJ421487。 在另一實(shí)施方式中，所述gC-l蛋白由具有上述GenBank條目之一所示序列的 核苷酸分子編碼。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一所 示序列編碼的蛋白質(zhì)的同源物。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是上述GenBank 條目之一所示序列編碼的蛋白質(zhì)的異構(gòu)體。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是 上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質(zhì)的變體。在另一實(shí)施方式中， 所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質(zhì)的片段。在另一實(shí) 施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質(zhì)的異構(gòu) 體的片段。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列 編碼的蛋白質(zhì)的變體的片段。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物中所用的gC-2蛋白具有以下序列
MALGRVGLAVGLWGLLWVGWVVLANASPGRTrrVGPRGNASNAAPSASP RNASAPRTTPTPPQPRKATKSKASTAKPAPPPKTGPPKTSSEPVRCNRHDPLARYGSR VQIRCRFPNSTRTEFRLQIWRYATATDAEIGTAPSLEEVMVNVSAPPGGQLVYDSAP NRTDPHVIWAEGAGPGASPRLYSVVGPLGR(3RLI正ELTLET(2GMYYWVWGRTDRP SAYGTWVRVRVFRPPSLTIHPHAVLEGQPFKATCTAATYYPGNRAEFVWFEDGRRV FDPAQIHTQTQENPDGFSTVSTVTSAAVGGQGPPRTFTCQLTWHRDSVSFSRRNASG TASVLPRPTITMEFTGDHAVCTAGCVPEGVTFAWFLGDDSSPAEKVAVASQTSCGRP GTATERSTLPVSYEQTEYICRLAGYPDGIPVLEHHGSHQPPPRDPTERQVIRAVEGAGI GVAVLVAVVLAGTAWYLTHASSVRYRRLR
(SEQ ID NO:4)。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物中所用的gC-2 蛋白是SEQIDNo:4的同源物。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是SEQIDNo:4 的異構(gòu)體。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是SEQ ID No:4的變體。在另一實(shí) 施方式中，所述蛋白是SEQ ID No:4的片段。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白 是SEQ ID No:4的異構(gòu)體的片段。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是SEQ IDNo:4 的變體的片段。
在另一實(shí)施方式中，編碼本發(fā)明的方法和組合物中所用的gC-2蛋白的核 酸序列在GenBank中給出，登錄號如下NC_001798、 Z86099、 M 10053、 AJ297389、 AF021341、 U12179、 U12177、 U12176和U12178。在另一實(shí)施方 式中，所述gC-2蛋白由具有上述GenBank條目之一所示序列的核苷酸分子編 碼。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的 蛋白質(zhì)的同源物。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一所 示序列編碼的蛋白質(zhì)的異構(gòu)體。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是上述GenBank 條目之一所示序列編碼的蛋白質(zhì)的變體。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是上 述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質(zhì)的片段。在另一實(shí)施方式中，所 述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質(zhì)的異構(gòu)體的片段。在 另一實(shí)施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質(zhì) 的變體的片段。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物中所用的gC蛋白片段是免疫 原性片段。在另一實(shí)施方式中，gC免疫保護(hù)性抗原不需要是整個蛋白。在另 一實(shí)施方式中，保護(hù)性免疫應(yīng)答通常包括抗體應(yīng)答。在另一實(shí)施方式中，gC 的突變體、序列保守性變體、和功能保守性變體可用于本發(fā)明的方法和組合物，條件是所有此類變體保留了所需的免疫保護(hù)效應(yīng)。
在另一實(shí)施方式中，免疫原性片段可包含來自任何HSV毒株的免疫保護(hù)
性gC抗原。在另一實(shí)施方式中，免疫原性片段可包含HSV的序列變體，如 被感染個體中的那些變體。
在另一實(shí)施方式中，所述gC蛋白片段包含gC免疫逃避結(jié)構(gòu)域。在另一 實(shí)施方式中，所述gC蛋白片段包含gC免疫逃避結(jié)構(gòu)域的一部分。在另一實(shí) 施方式中，所述gC蛋白片段是gC免疫逃避結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí)施方式中，所 述gC蛋白片段是gC免疫逃避結(jié)構(gòu)域的一部分。在另一實(shí)施方式中，使用 HSV-lgCAA序列。在另一實(shí)施方式中，使用HSV-lgC蛋白或肽。
在另一實(shí)施方式中，所述gC蛋白片段是C3b結(jié)合結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí)施方 式中，所述gC蛋白片段是C3b結(jié)合結(jié)構(gòu)域的一部分。在另一實(shí)施方式中，"C3b 結(jié)合結(jié)構(gòu)域"指的是介導(dǎo)gC與宿主C3b分子結(jié)合的結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí)施方式 中，該術(shù)語指的是介導(dǎo)gC與宿主C3b分子相互作用的結(jié)構(gòu)域。
在另一實(shí)施方式中，(例如在gC-l的情況中)，所述gC結(jié)構(gòu)域大致由AA 26-457組成。在另一實(shí)施方式中，所述結(jié)構(gòu)域大致由AA 46-457組成。在另 一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 66-457。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大 致為AA 86-457。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 106-457。在另一 實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 126-457。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大 致為AA 146-457。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 166-457。在另一 實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 186-457。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大 致為AA206-457。在另一實(shí)施方式中，所述結(jié)構(gòu)域大致由AA226-457組成。 在另一實(shí)施方式中，所述結(jié)構(gòu)域大致由AA 246-457組成。在另一實(shí)施方式中， 所述范圍大致為AA 26-447。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 26-437。 在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA26-427。在另一實(shí)施方式中，所述范 圍大致為AA 26-417。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 26-407。在另 一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA26-387。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大 致為AA26-367。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA26-347。在另一實(shí) 施方式中，所述范圍大致為AA 26-327。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為 AA 26-307。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 26-287。在另一實(shí)施方 式中，所述范圍大致為AA 26-267。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 26-247。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 36-447。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 46-437。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 56-427。 在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 66-417。在另一實(shí)施方式中，所述范 圍大致為AA 76-407。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 86-397。在另 一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 96-387。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大 致為AA 106-377。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 116-367。在另一 實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 126-357。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大 致為AA 136-347。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 147-337。在另一 實(shí)施方式中，所述結(jié)構(gòu)域大致由AA 124-366組成。在另一實(shí)施方式中，所述 結(jié)構(gòu)域大致由AA 124-137組成。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 223-246。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 276-292。在另一實(shí)施方式 中，所述范圍大致為AA 339-366。在替代性實(shí)施方式中，所述gC結(jié)構(gòu)域包 含或基本上由任何所述氨基酸殘基組成。
在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 124-246。在另一實(shí)施方式中， 所述范圍大致為AA 124-292。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 223-292。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 223-366。在另一實(shí)施方式 中，所述gC結(jié)構(gòu)域選自AA 124-137、 223-246、 276-292和339-366。在另一 實(shí)施方式中，所述結(jié)構(gòu)域選自AA 124-137和223-246。在另一實(shí)施方式中， 所述結(jié)構(gòu)域選自AA 124-137和276-292。在另一實(shí)施方式中，所述結(jié)構(gòu)域選 自AA 124-137和339-366。在另一實(shí)施方式中，所述結(jié)構(gòu)域選自AA 223-246 和276-292。在另一實(shí)施方式中，所述結(jié)構(gòu)域選自AA 223-246和339-366。在 另一實(shí)施方式中，所述結(jié)構(gòu)域選自AA 276-292和339-366。在另一實(shí)施方式 中，所述結(jié)構(gòu)域選自AA 124-137、 223-246和276-292。在另一實(shí)施方式中， 所述結(jié)構(gòu)域選自AA 124-137、 223-246和339-366。在另一實(shí)施方式中，所述 gC結(jié)構(gòu)域選自AA 124-137、 276-292和339-366。在另一實(shí)施方式中，所述 gC結(jié)構(gòu)域選自AA 223-246、 276-292和339-366。在另一實(shí)施方式中，所述范 圍大致為AA 164-366。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 204-366。在 另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 244-366。在另一實(shí)施方式中，所述范 圍大致為AA 124-326。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 124-286。在 另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 124-246。在另一實(shí)施方式中，所述范 圍大致為AA 204-326。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 244-326。在 另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 204-286。在替代性實(shí)施方式中，所述范圍包含或基本上由任何所述氨基酸殘基組成。
在另一實(shí)施方式中，所述gC-l蛋白以抗原性標(biāo)簽修飾。在另一實(shí)施方式 中，上述gC-l片段之一以抗原性標(biāo)簽修飾。在另一實(shí)施方式中，所述標(biāo)簽是
組氨酸("His")標(biāo)簽。在另一實(shí)施方式中，所述His標(biāo)簽由5個組氨酸殘基組成。 在另一實(shí)施方式中，所述His標(biāo)簽由6個組氨酸殘基組成。在另一實(shí)施方式中， 所述His標(biāo)簽由另一數(shù)量的組氨酸殘基組成。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方 法和組合物中所用的gC-l片段是以His標(biāo)簽修飾的AA 26-457。
在另一實(shí)施方式中，(例如對于gC-2)，所述gC結(jié)構(gòu)域大致由AA 27-426 組成。在另一實(shí)施方式中，所述結(jié)構(gòu)域大致由AA 47-426組成。在另一實(shí)施 方式中，所述范圍大致為AA 67-426。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為 AA 87-426。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 107-426。在另一實(shí)施方 式中，所述范圍大致為AA 127-426。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 147-426。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 167-426。在另一實(shí)施方式 中，所述范圍大致為AA 187-426。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 207-426。在另一實(shí)施方式中，所述結(jié)構(gòu)域大致由AA227-426組成。在另一實(shí) 施方式中，所述結(jié)構(gòu)域大致由AA 247-426組成。在另一實(shí)施方式中，所述范 圍大致為AA27-406。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA27-386。在另 一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 27-366。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大 致為AA27-346。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 27-326。在另一實(shí) 施方式中，所述范圍大致為AA 27-306。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為 AA 27-286。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 27-266。在另一實(shí)施方 式中，所述范圍大致為AA 27-246。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 37-416。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 47-406。在另一實(shí)施方式中， 所述范圍大致為AA 57-396。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 67-386。 在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 77-376。在另一實(shí)施方式中，所述范 圍大致為AA 87-366。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 97-356。在另 一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 107-346。在另一實(shí)施方式中，所述范圍 大致為AA 117-326。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 127-316。在另 一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 137-306。在另一實(shí)施方式中，所述范圍 大致為AA 147-296。在替代性實(shí)施方式中，所述gC結(jié)構(gòu)域包含或基本上由 任何所述氨基酸殘基組成。在另一實(shí)施方式中，所述結(jié)構(gòu)域大致由AA 102-107組成。在另一實(shí)施方 式中，所述結(jié)構(gòu)域大致由AA222-279組成。在另一實(shí)施方式中，所述結(jié)構(gòu)域 大致由AA 307-379組成。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 94-355。 在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 102-279。在另一實(shí)施方式中，所述 范圍大致為AA 102-379。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA222-379。 在另一實(shí)施方式中，所述gC結(jié)構(gòu)域選自AA 102-107、 222-279和307-379。 在另一實(shí)施方式中，所述結(jié)構(gòu)域選自AA 102-107和222-279。在另一實(shí)施方 式中，所述結(jié)構(gòu)域選自AA 102-107和307-379。在另一實(shí)施方式中，所述結(jié) 構(gòu)域選自AA 222-279和307-379。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 122-379。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 142-379。在另一實(shí)施方式 中，所述范圍大致為AA 162-379。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 182-379。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA202-379。在另一實(shí)施方式 中，所述范圍大致為AA 222-379。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 242-379。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 102-359。在另一實(shí)施方式 中，所述范圍大致為AA 102-339。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 102-319。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 102-299。在另一實(shí)施方式 中，所述范圍大致為AA 102-279。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 102-259。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 102-239。在另一實(shí)施方式 中，所述范圍大致為AA 112-369。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 122-359。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 132-349。在另一實(shí)施方式 中，所述范圍大致為AA 142-339。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 152-329。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 162-319。在另一實(shí)施方式 中，所述范圍大致為AA 172-309。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 182-299。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 192-289。在另一實(shí)施方式 中，所述范圍大致為AA 202-279。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 232-279。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 242-279。在另一實(shí)施方式 中，所述范圍大致為AA 252-279。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 262-279。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA222-269。在另一實(shí)施方式 中，所述范圍大致為AA 222-259。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 222-249。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA222-239。在另一實(shí)施方式 中，所述結(jié)構(gòu)域大致由AA 227-274組成。在另一實(shí)施方式中，所述結(jié)構(gòu)域大致由AA 232-269組成。在另一實(shí)施方式中，所述結(jié)構(gòu)域大致由AA 237-264 組成。在另一實(shí)施方式中，所述結(jié)構(gòu)域大致由AA 242-259組成。在另一實(shí)施 方式中，所述結(jié)構(gòu)域大致由AA 307-379組成。在另一實(shí)施方式中，所述范圍 大致為AA317-379。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA327-379。在另 一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 337-379。在另一實(shí)施方式中，所述范圍 大致為AA347-379。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 357-379。在另 一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 307-369。在另一實(shí)施方式中，所述范圍 大致為AA307-359。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA307-349。在另 一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 307-339。在另一實(shí)施方式中，所述范圍 大致為AA307-329。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA312-374。在另 一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 317-369。在另一實(shí)施方式中，所述范圍 大致為AA322-364。在另一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 327-359。在另 一實(shí)施方式中，所述范圍大致為AA 332-354。在另一實(shí)施方式中，所述范圍 大致為AA 337-349。在替代性實(shí)施方式中，所述gC結(jié)構(gòu)域包含或基本上由 任何所述氨基酸殘基組成。
在另一實(shí)施方式中，所述gC-2蛋白以抗原性標(biāo)簽修飾。在另一實(shí)施方式 中，上述gC-2片段之一以抗原性標(biāo)簽修飾。在另一實(shí)施方式中，所述標(biāo)簽是 組氨酸("His")標(biāo)簽。在另一實(shí)施方式中，所述His標(biāo)簽由5個組氨酸殘基組成。 在另一實(shí)施方式中，所述His標(biāo)簽由6個組氨酸殘基組成。在另一實(shí)施方式中， 所述His標(biāo)簽由另一數(shù)量的組氨酸殘基組成。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方 法和組合物中所用的gC-2片段是以His標(biāo)簽修飾的AA 27-426。
在另一實(shí)施方式中，所述gC結(jié)構(gòu)域是本領(lǐng)域已知的介導(dǎo)gC結(jié)合宿主C3b 分子或介導(dǎo)與宿主C3b分子的相互作用的任何其他gC結(jié)構(gòu)域。
在另一實(shí)施方式中，所述gC蛋白片段是備解素干擾結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí)施 方式中，所述gC蛋白片段是備解素干擾結(jié)構(gòu)域的一部分。在另一實(shí)施方式中， "備解素-干擾結(jié)構(gòu)域"指的是阻斷或抑制宿主C3b分子與宿主備解素分子結(jié)合 的結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語指的是阻斷或抑制宿主C3b分子與宿 主備解素分子相互作用的結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí)施方式中，(例如對于gC-l)，所 述gC結(jié)構(gòu)域大致由AA 33-133組成。在另一實(shí)施方式中，所述gC結(jié)構(gòu)域大 致由AA 33-73組成。在另一實(shí)施方式中，所述gC結(jié)構(gòu)域大致由AA 33-83組 成。在另一實(shí)施方式中，所述gC結(jié)構(gòu)域大致由AA 33-93組成。在另一實(shí)施方式中，所述gC結(jié)構(gòu)域大致由AA 33-103組成。在另一實(shí)施方式中，所述 gC結(jié)構(gòu)域大致由AA 33-113組成。在另一實(shí)施方式中，所述gC結(jié)構(gòu)域大致 由AA 33-123組成。在另一實(shí)施方式中，所述gC結(jié)構(gòu)域大致由AA43-133組 成。在另一實(shí)施方式中，所述gC結(jié)構(gòu)域大致由AA 53-133組成。在另一實(shí)施 方式中，所述gC結(jié)構(gòu)域大致由AA 63-133組成。在另一實(shí)施方式中，所述 gC結(jié)構(gòu)域大致由AA 73-133組成。在另一實(shí)施方式中，所述gC結(jié)構(gòu)域大致 由AA 83-133組成。在另一實(shí)施方式中，所述gC結(jié)構(gòu)域大致由AA 93-133組 成。在另一實(shí)施方式中，所述gC結(jié)構(gòu)域大致由AA 103-133組成。在另一實(shí) 施方式中，所述gC結(jié)構(gòu)域大致由AA 43-93組成。在替代性實(shí)施方式中，所 述gC結(jié)構(gòu)域包含或基本上由任何所述氨基酸殘基組成。
在另一實(shí)施方式中，所述gC結(jié)構(gòu)域是本領(lǐng)域已知的干擾宿主C3b分子與 宿主備解素分子結(jié)合的任何其他gC結(jié)構(gòu)域。
在另一實(shí)施方式中，所述gC蛋白片段是C5干擾結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí)施方 式中，所述gC蛋白片段是C5干擾結(jié)構(gòu)域的一部分。在另一實(shí)施方式中，"C5 干擾結(jié)構(gòu)域"指的是干擾宿主C3b分子結(jié)合宿主C5分子的結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí) 施方式中，該術(shù)語指的是干擾宿主C3b分子與宿主C5分子相互作用的結(jié)構(gòu)域。 在另一實(shí)施方式中，(例如對于gC-l)，所述gC結(jié)構(gòu)域大致由AA 33-133組成。 在另一實(shí)施方式中，所述gC結(jié)構(gòu)域是本領(lǐng)域已知的干擾或抑制宿主C3b分子 結(jié)合或與宿主C5分子相互作用的任何其他gC結(jié)構(gòu)域。
每一重組gC-l或gC-2蛋白或其片段代表了本發(fā)明的一個單獨(dú)的實(shí)施方式。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的疫苗包含重組HSV-lgE蛋白。在另一實(shí)施 方式中，所述疫苗包含HSV-lgE蛋白的片段。在另一實(shí)施方式中，所述疫苗 包含HSV-2gE蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述疫苗包含HSV-2gE蛋白的片段。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物中所用的gE-l蛋白具有以下 序列MDRGAVVGFLLGVCVVSCLAGTPKTSWRRVSVGEDVSLLPAPGPTGRGPTQ KLLWAVEPLDGCGPLHPSWVSLMPPKQVPETVVDAACMRAPVPLAMAYAPPAPSA
PAPVPTPPPTPADYDEDDNDEGEGEDESLAGTPASGTPRLPPSPAPPRSWPSAPEVSH
VRGVTVRMETPEAILFSPGEAFSTNVSIHAIAHDDQTYTMDVVWLRFDVPTSCAEM
RIYESCLYHP(2LPECLSPADAPCAASTWTSRLAVRSYAGCSRTNPPPRCSAEAHMEP
(SEQIDNo:5)。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物中所用的gE-l蛋 白是SEQ ID No:5的同源物。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是SEQ ID No:5 的異構(gòu)體。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是SEQ ID No:5的變體。在另一實(shí) 施方式中，所述蛋白是SEQ ID No:5的片段。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白 是SEQ ID No:5的異構(gòu)體的片段。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是SEQ ID No:5 的變體的片段。
在另一實(shí)施方式中，編碼本發(fā)明的方法和組合物中所用的gE-l蛋白的核 酸序列在GenBank中給出，登錄號如下NC—001806、 X14112、 DQ889502、 X02138和AJ626469-AJ626498之一。在另一實(shí)施方式中，所述gE-l蛋白由 具有上述GenBank條目之一所示序列的核苷酸分子編碼。在另一實(shí)施方式中， 所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質(zhì)的同源物。在另一 實(shí)施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質(zhì)的異 構(gòu)體。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼 的蛋白質(zhì)的變體。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一所 示序列編碼的蛋白質(zhì)的片段。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是上述GenBank 條目之一所示序列編碼的蛋白質(zhì)的異構(gòu)體的片段。在另一實(shí)施方式中，所述 蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質(zhì)的變體的片段。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物中所用的gE-2蛋白具有以下 序列MARGAGLVFFVGVWVVSCLAAAPRTSWKRVTSGEDVVLLPAPAERTRAHK LLWAAEPLDACGPLRPSWVALWPPRRVLETVVDAACMRAPEPLAIAYSPPFPAGDE
PVPTPTPDDYDEEDDAGVTNARRSAFPPQPPPRRPPVAPPTHPRVIPEVSHVRGVTVH METLEAILFAPGETFGTNVSIHAIAHDDGPYAMDVVWMRFDVPSSCADMRIYEACL
WRAVKSRASATGPTYIRVADSELYADWSSDSEGERDGSLWQDPPERPDSPSTNGSG FEILSPTAPSVYPHSEGRKSRRPLTTFGSGSPGRRHSQASYPSVLW
(SEQIDNO:6)。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物中所用的gE-2蛋 白是SEQ ID No:6的同源物。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是SEQ ID No:6 的異構(gòu)體。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是SEQ ID No:6的變體。在另一實(shí) 施方式中，所述蛋白是SEQ ID No:6的片段。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白 是SEQ ID No:6的異構(gòu)體的片段。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是SEQ ID No:6 的變體的片段。
在另一實(shí)施方式中，編碼本發(fā)明的方法和組合物中所用的gE-2蛋白的核 酸序列在GenBank中給出，登錄號如下NC—001798、Z86099、D00026、X04798 和M 14886。在另一實(shí)施方式中，所述gE-2蛋白由具有上述GenBank條目之 一所示序列的核苷酸分子編碼。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是上述GenBank 條目之一所示序列編碼的蛋白質(zhì)的同源物。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是 上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質(zhì)的異構(gòu)體。在另一實(shí)施方式中， 所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質(zhì)的變體。在另一實(shí) 施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白質(zhì)的片段。 在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一所示序列編碼的蛋白 質(zhì)的異構(gòu)體的片段。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白是上述GenBank條目之一 所示序列編碼的蛋白質(zhì)的變體的片段。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物中所用的gE片段包含gE蛋 白的IgGFc結(jié)合結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí)施方式中，所述gE片段包含AA24-224。 在另一實(shí)施方式中，所述gE片段包含AA 24-224的一部分。在另一實(shí)施方式 中，所述部分足以引發(fā)阻斷gE蛋白的IgG Fc結(jié)合結(jié)構(gòu)域造成的免疫逃避的 抗體。在另一實(shí)施方式中，所述gE片段包含gE IgG Fc結(jié)合結(jié)構(gòu)域的一部分。 在另一實(shí)施方式中，(例如對于gE-l)，所述gE結(jié)構(gòu)域由大約第24-409位AA 組成。在另一實(shí)施方式中，所述結(jié)構(gòu)域由大約24-224組成。在替代性實(shí)施方 式中，所述gE結(jié)構(gòu)域包含或基本上由任何上述氨基酸殘基范圍組成。
在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 34-399。在另一實(shí)施方式中，所 述范圍是大約AA 54-379。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 74-359。 在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 94-339。在另一實(shí)施方式中，所述范 圍是大約AA 114-319。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 134-299。在 另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 154-279。在另一實(shí)施方式中，所述范 圍是大約AA 54-409。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 84-409。在另 一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 114-409。在另一實(shí)施方式中，所述范圍 是大約AA 144-409。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 174-409。在另 一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 204-409。在另一實(shí)施方式中，所述范圍 是大約AA 234-409。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 24-389。在另 一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 24-369。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是 大約AA24-349。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA24-329。在另一實(shí) 施方式中，所述范圍是大約AA 24-309。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約 AA 24-289。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 24-269。在另一實(shí)施方 式中，所述范圍是大約AA24-249。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 24-229。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 24-209。在另一實(shí)施方式中， 所述范圍是大約AA 24-189。在替代性實(shí)施方式中，所述gE結(jié)構(gòu)域包含或基 本上由任何上述氨基酸殘基范圍組成。
在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約223-396。在另一實(shí)施方式中，所述 范圍是大約AA 230-390。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 235-380。 在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 245-380。在另一實(shí)施方式中，所述 范圍是大約AA 255-380。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 265-380。 在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 275-380。在另一實(shí)施方式中，所述 范圍是大約AA 285-380。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 295-380。 在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 305-380。在另一實(shí)施方式中，所述 范圍是大約AA 235-370。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 235-370。 在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 235-360。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 235-350。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 235-340。 在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 235-330。在另一實(shí)施方式中，所述 范圍是大約AA 235-320。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 235-310。 在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 235-300。在另一實(shí)施方式中，所述 范圍是大約AA 322-359。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 327-359。 在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 332-359。在另一實(shí)施方式中，所述 范圍是大約AA 337-359。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 322-354。 在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 322-349。在另一實(shí)施方式中，所述 范圍是大約AA 322-344。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 327-354。 在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 332-349。在另一實(shí)施方式中，所述 gE結(jié)構(gòu)域包括AA380。在替代性實(shí)施方式中，所述gE結(jié)構(gòu)域包含或基本上 由任何上述氨基酸殘基范圍組成。
在另一實(shí)施方式中，所述gE蛋白以抗原性標(biāo)簽修飾。在另一實(shí)施方式中， 上述gE片段之一以抗原性標(biāo)簽修飾。在另一實(shí)施方式中，所述標(biāo)簽是組氨酸 ("His")標(biāo)簽。在另一實(shí)施方式中，所述His標(biāo)簽由5-6個組氨酸殘基組成。在 另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物中所用的gE片段大致是AA 24-409， 其C末端為6His標(biāo)簽。
在另一實(shí)施方式中，(例如對于gE-2)，所述gE結(jié)構(gòu)域大致由AA218-391 組成。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA223-386。在另一實(shí)施方式中， 所述范圍是大約AA 228-280。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 230-375。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 228-373。在另一實(shí)施方式 中，所述范圍是大約AA 238-373。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 248-373。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 258-373。在另一實(shí)施方式 中，所述范圍是大約AA 268-373。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 278-373。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 288-373。在另一實(shí)施方式 中，所述范圍是大約AA 298-373。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 308-373。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 228-363。在另一實(shí)施方式 中，所述范圍是大約AA 228-353。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 228-343。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 228-333。在另一實(shí)施方式 中，所述范圍是大約AA 228-323。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 228-313。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 228-303。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 238-363。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 248-353。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 258-343。在另一實(shí)施方式 中，所述gE范圍是大約AA 315-352。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約 AA 320-352。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 325-352。在另一實(shí)施 方式中，所述范圍是大約AA 330-352。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約 AA 335-352。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 315-347。在另一實(shí)施 方式中，所述范圍是大約AA 315-342。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約 AA 315-337。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 315-332。在另一實(shí)施 方式中，所述范圍是大約AA 320-347。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約 AA 325-347。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 320-342。在另一實(shí)施 方式中，所述范圍是大約AA 325-342。在另一實(shí)施方式中，所述gE結(jié)構(gòu)域包 括AA 373。在替代性實(shí)施方式中，所述gE結(jié)構(gòu)域包含或基本上由任何上述 氨基酸殘基范圍組成。
在另一實(shí)施方式中，所述gE結(jié)構(gòu)域是本領(lǐng)域已知的介導(dǎo)結(jié)合IgG Fc的 任何其他gE結(jié)構(gòu)域。
在另一實(shí)施方式中，所述gE蛋白包含參與細(xì)胞間播散的gE結(jié)構(gòu)域。在 另一實(shí)施方式中，所述gE結(jié)構(gòu)域大致由AA 256-291組成。在另一實(shí)施方式 中，所述gE結(jié)構(gòu)域大致由AA 348-380組成。在另一實(shí)施方式中，所述gE結(jié) 構(gòu)域包括AA 380。在另一實(shí)施方式中，所述gE結(jié)構(gòu)域是本領(lǐng)域己知的參與 細(xì)胞間播散的任何其他gE結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí)施方式中，已知所述gE結(jié)構(gòu)域 促進(jìn)細(xì)胞間播散。在另一實(shí)施方式中，已知所述gE結(jié)構(gòu)域是細(xì)胞間播散所需 的。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物中所用的gE片段是免疫原性 片段。在另一實(shí)施方式中，"免疫原性片段"指的是gE的一部分，其具有免疫 原性且當(dāng)施用于對象后引發(fā)保護(hù)性免疫應(yīng)答。在另一實(shí)施方式中，gE免疫保 護(hù)性抗原不需要是整個蛋白。在另一實(shí)施方式中，保護(hù)性免疫應(yīng)答通常包括 抗體應(yīng)答。在另一實(shí)施方式中，gE的突變體、序列保守性變體、和功能保守 性變體可用于本發(fā)明的方法和組合物，條件是所有此類變體保留了所需的免 疫保護(hù)效應(yīng)。
在另一實(shí)施方式中，免疫原性片段可包含來自任何HSV毒株的免疫保護(hù) 性gE抗原。在另一實(shí)施方式中，免疫原性片段可包含HSV的序列變體，如被感染個體中的那些變體。
在另一實(shí)施方式中，所述gE片段包含免疫逃避結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí)施方式 中，所述gE片段包含免疫逃避結(jié)構(gòu)域的一部分。在另一實(shí)施方式中，所述gE 片段是免疫逃避結(jié)構(gòu)域。在另一實(shí)施方式中，所述gE片段是免疫逃避結(jié)構(gòu)域
的一部分。在另一實(shí)施方式中，使用HSV-lgEAA序列。在另一實(shí)施方式中， 使用HSV-lgE蛋白或肽。
在另一實(shí)施方式中，(例如對于gE-l)，所述gE蛋白片段由大約組成AA 21-419。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 31-419。在另一實(shí)施方式中， 所述范圍是大約AA 41-419。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 61-419。 在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 81-419。在另一實(shí)施方式中，所述范 圍是大約AA 101-419。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 121-419。在 另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 141-419。在另一實(shí)施方式中，所述范 圍是大約AA 161-419。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 181-419。在 另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 201-419。在另一實(shí)施方式中，所述范 圍是大約AA 221-419。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 241-419。在 另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 261-419。在另一實(shí)施方式中，所述范 圍是大約AA 21-399。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 21-379。在另 一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 21-359。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是 大約AA21-339。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA21-319。在另一實(shí) 施方式中，所述范圍是大約AA 21-299。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約 AA 21-279。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 21-259。在另一實(shí)施方 式中，所述范圍是大約AA21-239。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 21-219。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 21-199。在另一實(shí)施方式中， 所述范圍是大約AA 21-179。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 21-159。 在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA21-139。在另一實(shí)施方式中，所述范 圍是大約AA 31-409。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 41-399。在另 一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 51-389。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是 大約AA 61-379。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 71-369。在另一實(shí) 施方式中，所述范圍是大約AA 81-359。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約 AA 91-349。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 101-339。在另一實(shí)施方 式中，所述范圍是大約AA 111-329。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA121-319。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 131-309。在另一實(shí)施方式 中，所述范圍是大約AA 141-299。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 151-279。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 161-269。在另一實(shí)施方式 中，所述范圍是大約AA 171-259。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 181-249。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是大約AA 191-239。在替代性實(shí)施方 式中，所述gE蛋白片段包含或基本上由任何所述氨基酸殘基組成。
在另一實(shí)施方式中，(例如對于gE-2)，所述gE蛋白片段由大約AA 21-416 組成。在另一實(shí)施方式中，所述范圍是前述段落中所提及的任何范圍。
每一重組gE-l或gE-2蛋白或其片段代表了本發(fā)明的一個單獨(dú)的實(shí)施方式。
在另一實(shí)施方式中，"免疫逃避結(jié)構(gòu)域"指的是結(jié)構(gòu)域干擾或降低抗HSV 抗體(例如抗gD抗體)的體內(nèi)抗HSV效力。在另一實(shí)施方式中，所述結(jié)構(gòu)域干 擾或降低抗HSV免疫應(yīng)答的體內(nèi)抗HSV效力。在另一實(shí)施方式中，所述結(jié) 構(gòu)域在后續(xù)感染過程中降低HSV蛋白(例如gD)的免疫原性。在另一實(shí)施方式 中，所述結(jié)構(gòu)域在后續(xù)攻擊過程中降低HSV蛋白的免疫原性。在另一實(shí)施方 式中，所述結(jié)構(gòu)域在后續(xù)攻擊過程中降低HSV的免疫原性。在另一實(shí)施方式 中，所述結(jié)構(gòu)域在正在發(fā)生的HSV感染中降低HSV蛋白的免疫原性。在另 一實(shí)施方式中，所述結(jié)構(gòu)域在正在發(fā)生的HSV感染中降低HSV的免疫原性。
本發(fā)明還提供HSV蛋白或多肽或其片段的類似物。類似物與天然存在的 蛋白或肽的不同之處在于保守性氨基酸序列取代或不影響序列的修飾或兩 者。
例如，可進(jìn)行保守性氨基酸改變，所述改變雖然改變了蛋白或肽的初級 序列，但不改變其功能。保守性氨基酸取代典型地包括以下各組中的取代(a) 甘氨酸、丙氨酸；(b)纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸；(C)天冬氨酸、谷氨酸； (d)天冬酰胺、谷氨酰胺；(e)絲氨酸、蘇氨酸；(f)賴氨酸、精氨酸；(g)苯
丙氨酸、酪氨酸。
修飾(通常不改變初級序列)包括多肽的體內(nèi)或體外的化學(xué)衍生化例如，乙 酰化或羧化。還包括糖基化修飾，例如，通過在多肽的合成和加工或進(jìn)一步
的加工步驟中改變多肽的糖基化模式而形成的修飾；例如，通過將多肽暴露 于影響糖基化的酶，例如，哺乳動物糖基化酶或去糖基化酶。還包括具有磷 酸化氨基酸殘基的序列，例如，磷酸酪氨酸、磷酸絲氨酸、或磷酸蘇氨酸。還包括采用普通分子生物學(xué)技術(shù)修飾的多肽，以便提高其對蛋白降解的 抗性或優(yōu)化其溶解性或使之更適合于作為治療劑。此類多肽的類似物包括那
些含有不同于天然存在的L-氨基酸的殘基的多肽，例如，D-氨基酸或非天然 存在的合成氨基酸。本發(fā)明的肽不限于本文所列的具體示例性方法的產(chǎn)物。
在一個實(shí)施方式中，本發(fā)明的疫苗包含佐劑，而在另一實(shí)施方式中，所 述疫苗包含佐劑。在另一實(shí)施方式中，"佐劑"指的是這樣的化合物，當(dāng)其被施 用于個體或在體外測試時，其在施用抗原的所述個體或測試系統(tǒng)中增強(qiáng)對所 述抗原的免疫應(yīng)答。在另一實(shí)施方式中，免疫佐劑增強(qiáng)針對如下抗原的免疫 應(yīng)答，所述抗原當(dāng)單獨(dú)施用時具有弱免疫原性，即所述抗原不誘導(dǎo)或誘導(dǎo)弱 抗體效價(jià)或細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。在另一實(shí)施方式中，所述佐劑升高對抗原 的抗體效價(jià)。在另一實(shí)施方式中，所述佐劑降低在個體中有效產(chǎn)生免疫應(yīng)答 的抗原的量。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物中所用的佐劑是含CpG的核 苷酸序列。在另一實(shí)施方式中，所述佐劑是含CpG的寡核苷酸。在另一實(shí)施 方式中，所述佐劑是含CpG的寡脫氧核苷酸(CpGODN)。在另一實(shí)施方式中， 所述佐劑是ODN 1826，在一個實(shí)施方式中，其獲自Coley Pharmaceutical Group o
在另一實(shí)施方式中，"含CpG的核苷酸"、"含CpG的寡核苷酸"、"CpG 寡核苷酸"和類似術(shù)語指的是長度為8-50個核苷酸的核苷酸分子，其含有非甲 基化的CpG部分。在另一實(shí)施方式中，其意欲包括所述術(shù)語在本領(lǐng)域己知的 任何其他定義。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物的含CpG的寡核苷酸是修飾 的寡核苷酸。在另一實(shí)施方式中，"修飾的寡核苷酸"指的是其中至少兩個其核 苷酸通過合成的核苷間連鍵(即，5'端的一個核苷酸和3'端的另一個核苷酸之 間的不同于磷酸二酯鍵的連鍵)共價(jià)相連的寡核苷酸。在另一實(shí)施方式中，將 通常不與核酸相關(guān)聯(lián)的化學(xué)基團(tuán)共價(jià)附著于所述寡核苷酸。在另一實(shí)施方式 中，所述合成的核苷間連鍵是硫代磷酸酯鍵。在另一實(shí)施方式中，所述合成 的核苷間連鍵是膦酸垸基酯鍵。在另一實(shí)施方式中，所述合成的核苷間連鍵 是二硫代磷酸酯鍵。在另一實(shí)施方式中，所述合成的核苷間連鍵是磷酸酯鍵。 在另一實(shí)施方式中，所述合成的核苷間連鍵是垸基硫代磷酸酯鍵。在另一實(shí) 施方式中，所述合成的核苷間連鍵是氨基磷酸酯鍵。在另一實(shí)施方式中，所述合成的核苷間連鍵是氨基甲酸酯鍵。在另一實(shí)施方式中，所述合成的核苷 間連鍵是碳酸酯鍵。在另一實(shí)施方式中，所述合成的核苷間連鍵是磷酸三酯
鍵。在另一實(shí)施方式中，所述合成的核苷間連鍵是乙酰亞胺酯連鍵(acetamidate linkage)。在另一實(shí)施方式中，所述合成的核苷間連鍵是甲基羧酸酯鍵。在另 一實(shí)施方式中，所述合成的核苷間連鍵是肽鍵.
在另一實(shí)施方式中，術(shù)語"修飾的寡核苷酸"指的是具有共價(jià)修飾的堿基和 /或糖的寡核苷酸。在另一實(shí)施方式中，修飾的寡核苷酸包括具有在3'位置共 價(jià)附著于除羥基以外的其他低分子量有機(jī)基團(tuán)而在5'位置共價(jià)附著于除磷酸 基團(tuán)以外的其他低分子量有機(jī)基團(tuán)的主鏈糖的寡核苷酸。在另一實(shí)施方式中， 修飾的寡核苷酸包括2'-0-烷基化核糖基。在另一實(shí)施方式中，修飾的寡核苷 酸包括非核糖的糖，例如阿拉伯糖。在另一實(shí)施方式中，修飾的寡核苷酸包 括鼠TLR9多肽連同藥用可接受載體。
在另一實(shí)施方式中，所述含CpG的寡核苷酸是雙鏈的。在另一實(shí)施方式 中，所述含CpG的寡核苷酸是單鏈的。在另一實(shí)施方式中，"核酸"和"寡核苷 酸"指的是多個核苷酸，S卩，包含連接于磷酸基團(tuán)和可替換的有機(jī)堿基的糖(例 如核糖或脫氧核糖)的分子，所述有機(jī)堿基是取代的嘧啶(例如胞嘧啶(C),胸腺 嘧啶(T)或尿嘧啶(U))或取代的嘌呤(例如腺嘌呤(A)或鳥嘌呤(G))或修飾的堿 基。在另一實(shí)施方式中，所述術(shù)語指的是寡核糖核苷酸以及寡脫氧核糖核苷 酸。在另一實(shí)施方式中，所述術(shù)語包括多核苷(即，多核苷酸去掉磷酸)和其他 任何含有機(jī)堿基的聚合物。在另一實(shí)施方式中，所述術(shù)語涵蓋本文所述的具 有共價(jià)修飾的堿基和/或糖的核酸或寡核苷酸。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物的含CpG的寡核苷酸包含取 代的嘌呤和嘧啶。在另一實(shí)施方式中，所述寡核苷酸包含標(biāo)準(zhǔn)的嘌呤和嘧啶 例如胞嘧啶以及堿基類似物，例如C-5丙炔取代的堿基。WagnerR Wet al， Nat Biotechnol 14:840-844 (1996)。在另一實(shí)施方式中，嘌呤和噴啶包括但不限于 腺嘌呤、胞嘧啶、鳥嘌呤、胸腺嘧啶、5-甲基胞嘧啶、2-氨基嘌呤、2-氨基-6-氯嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、次黃嘌呤、和其他天然存在的和非天然存在的核堿 基、取代的和非取代的芳香族部分。在另一實(shí)施方式中，含CpG的寡核苷酸 連接于堿基或核苷酸的聚合物。在另一實(shí)施方式中，"連接"指的是通過任何物 理化學(xué)方式彼此結(jié)合的兩個實(shí)體。
在另一實(shí)施方式中，所述CpG核苷酸分子是7909，在一個實(shí)施方式中，其是5' TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT。在另一實(shí)施方式中，所述CpG 核苷酸分子是2216 ，在一個實(shí)施方式中，其是5' GGGGGACGATCGTCGGGGGG。在另一實(shí)施方式中，所述CpG核苷酸分子 是8916。在另一實(shí)施方式中，所述CpG核苷酸分子是1826。在另一實(shí)施方式 中，所述CpG核苷酸分子是2007。在另一實(shí)施方式中，所述CpG核苷酸分 子是10104。在另一實(shí)施方式中，所述CpG核苷酸分子是2395。在另一實(shí)施 方式中，所述CpG核苷酸分子是2336。在另一實(shí)施方式中，所述CpG核苷 酸分子是2137。在另一實(shí)施方式中，所述CpG核苷酸分子是2138。在另一實(shí) 施方式中，所述CpG核苷酸分子是2243。在一個實(shí)施方式中，上文提及的 CpG核苷酸分子獲自Coley Pharmaceutical Group。在另一實(shí)施方式中，所述 含CpG的核苷酸分子的序列是CTAGACGTTAGCGT (SEQ ID NO:7)。在另一 實(shí)施方式中，所述含CpG的核苷酸分子的序列是TCAACGTT (SEQ ID No:8)。 在另一實(shí)施方式中，所述序列是TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT (SEQ ID No:9)(完全的硫代磷酸酯主鏈)。在另一實(shí)施方式中，所述序列是TCG TCG TTT CGT CGT TTT GTC GTT (SEQ ID No:lO)(完全的硫代磷酸酯主鏈)。在另 一實(shí)施方式中，所述序列是TCG TCG TTG TCG TTT TGT CGT T (SEQ ID No:ll)(完全的硫代磷酸酯主鏈)。在另一實(shí)施方式中，所述序列是TCGTCG TTT TCG GCG CGC GCC G (SEQ ID No:12)(完全的硫代磷酸酯主鏈)。在另一 實(shí)施方式中，所述序列是TGC TGC TTT TGT GCT TTT GTG CTT (SEQ ID No:13)(完全的硫代磷酸酯主鏈)。在另一實(shí)施方式中，所述序列是TCCATG AGC TTC CTG AGC TT (SEQ ID No:14)(完全的硫代磷酸酯主鏈)。在另一實(shí) 施方式中，所述序列是G*G*G GAC GAC GTC GTG G*G*G* G*G*G (SEQ ID No:15)(在本序列和下面的序列中，*指的是硫代磷酸酯鍵；其他為磷酸二酯 鍵)。在另一實(shí)施方式中，所述序列是G*G*G GGA GCA TGC TGG *G*G*G *G*G(SEQIDNo:16)。在另一實(shí)施方式中，所述含CpG的核苷酸分子的序列 是本領(lǐng)域已知的任何其他含CpG的序列。在另一實(shí)施方式中，所述CpG核苷 酸分子是本領(lǐng)域已知的任何其他含CpG的核苷酸分子。
在另一實(shí)施方式中，CpG寡核苷酸的劑量是10微克(微克)。在另一實(shí)施 方式中，所述劑量是15微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是20微克。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量是30微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50 微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是70微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是100微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是150微克。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是200微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是300微克。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是500微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是700 微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是lmg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是1.2mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是1.5 mg。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是2mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是3mg。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是5mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是大于5mg。
在另一實(shí)施方式中，所述CpG寡核苷酸的劑量是10-100微克。在另一實(shí) 施方式中，所述劑量是10-30微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是20-100 微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30-100微克。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是50-100微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是100-200微克。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是100-250微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是 50-250微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是150-300微克。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是200-400微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是250-500微 克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是300-600微克。在另一實(shí)施方式中，所述 劑量是500-1000微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是700-1500微克。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是0.25-2 mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.5-2 mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是l-2mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是1.5-2 mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2-3 mg。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是3-5mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5-8mg。
CpG寡核苷酸的使用方法是本領(lǐng)域熟知的并可參見，例如，Sur S et al. (Long term prevention of allergic lung inflammation in a mouse model of asthma by CpG oligodeoxynucleotides. J Immunol. 1999 May 15; 162(10):6284-93); Verthelyi D. (Adjuvant properties of CpG oligonucleotides in primates. Methods Mol Med. 2006; 127: 139-58);禾口 Yasuda K et al. (Role of immunostimulatory DNA and TLR9 in gene therapy. Crit Rev Ther Drug Carrier Syst. 2006; 23(2):89-l 10)。每一方法代表了本發(fā)明的一個單獨(dú)的實(shí)施方式。
在另一實(shí)施方式中，"核酸"或"核苷酸"指的是一串至少兩個堿基-糖-磷酸 的組合。在另一實(shí)施方式中，所述術(shù)語包括DNA和RNA。在一個實(shí)施方式 中，"核苷酸"指的是核酸聚合物的單體單元。在一個實(shí)施方式中，RNA的形 式為tRNA (轉(zhuǎn)移RNA)、 snRNA (小核RNA)、 rRNA (核糖體RNA)、 mRNA (信使RNA)、反義RNA、小抑制性RNA (siRNA)、微RNA (miRNA)和核酶。siRNA 和miRNA的用途已經(jīng)公開(Caudy AA et al.， Genes & Devel 16: 2491-96和其中 引用的文獻(xiàn))。在其他實(shí)施方式中，DNA的形式可以是質(zhì)粒DNA、病毒DNA、 線性DNA、或染色體DNA或這些組的衍生物。此外，這些形式的DNA和 RNA可以是單鏈、雙鏈、三鏈或四鏈的。在另一實(shí)施方式中，所述術(shù)語還包 括人工核酸，其含有其他類型的主鏈，但堿基相同。在一個實(shí)施方式中，所 述人工核酸是PNA(肽核酸)。PNA含有肽主鏈和核苷酸堿基，且在一個實(shí)施 方式中，其能夠結(jié)合DNA和RNA分子。在另一實(shí)施方式中，所述核苷酸被 環(huán)氧丙烷修飾。在另一實(shí)施方式中，所述核苷酸通過以硫代磷酸酯鍵置換一 或多個磷酸二酯鍵而修飾。在另一實(shí)施方式中，所述人工核酸含有任何其他 本領(lǐng)域已知的天然核酸磷酸主鏈的變體。硫代磷酸酯核酸和PNA的用途是本 領(lǐng)域已知的并可參見，例如，Neilsen PE, Curr Opin Struct Biol 9:353-57;和 Raz NK et al. Biochem Biophys Res Commun, 297: 1075-84。核酸的制備和用途 是本領(lǐng)域已知的并可參見，例如，Molecular Cloning, (2001)， Sambrook and Russell, eds禾卩Methods in Enzymology: Methods for molecular cloning in eukaryotic cells (2003) Purchio and G. C. Fareed。每一核酸衍生物代表了本發(fā)明 的一個單獨(dú)的實(shí)施方式。
每一類型的修飾的寡核苷酸代表了本發(fā)明的一個單獨(dú)的實(shí)施方式。 制備具有修飾主鏈的核酸的方法是本領(lǐng)域已知的并可參見例如 Hutcherson等的美國專利No. 5,723,335和5,663,153以及相關(guān)的PCT出版物 WO95/26204。每一方法代表了本發(fā)明的一個單獨(dú)的實(shí)施方式。
在另一實(shí)施方式中，所述佐劑是鋁鹽佐劑。在另一實(shí)施方式中，所述鋁 鹽佐劑鋁鹽沉淀疫苗。在另一實(shí)施方式中，所述鋁鹽佐劑鋁鹽吸附疫苗。鋁 鹽佐劑是本領(lǐng)域已知的并可參見，例如，Harlow, E.和D. Lane (1988; Antibodies: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory)禾口 Nicklas, W. (1992; Aluminum salts. Research in Immunology 143:489-493)。在另一實(shí)施方式中，所 述鋁鹽是水合氧化鋁。在另一實(shí)施方式中，所述鋁鹽是水化氧化鋁。在另一 實(shí)施方式中，所述鋁鹽是三水合氧化鋁(ATH)。在另一實(shí)施方式中，所述鋁 鹽是鋁的水合物。在另一實(shí)施方式中，所述鋁鹽是鋁的三水合物。在另一實(shí) 施方式中，所述鋁鹽是鋁膠。在另一實(shí)施方式中，所述鋁鹽是Superfos。在另 一實(shí)施方式中，所述鋁鹽是Amphogel。在另一實(shí)施方式中，所述鋁鹽是氫氧化鋁(m)。在另一實(shí)施方式中，所述鋁鹽是無定形氧化鋁。在另一實(shí)施方式中，
所述鋁鹽是三水合氧化鋁。在另一實(shí)施方式中，所述鋁鹽是氫氧化鋁。在另 一實(shí)施方式中，所述鋁鹽是任何其他本領(lǐng)域己知的鋁鹽。
在另一實(shí)施方式中，使用商品化的A1(0H)3 (例如鋁膠或Superfos，來自 Denmark/Accurate Chemical and Scientific Co., Westbury， NY)以50-200 g蛋白
/mg氫氧化鋁的比率來吸附蛋白質(zhì)。在另一實(shí)施方式中，蛋白質(zhì)的吸附取決于 所述蛋白質(zhì)的pi (等電點(diǎn)pH)和基質(zhì)的pH。具有較低pi的蛋白質(zhì)對帶正電荷 的鋁離子的吸附強(qiáng)于具有較高pi的蛋白質(zhì)。在另一實(shí)施方式中，鋁鹽建立起 緩慢釋放達(dá)2—3周以上的Ag庫、巨噬細(xì)胞非特異性活化和補(bǔ)體活化。
在另一實(shí)施方式中，所述鋁鹽的劑量是10微克。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是15微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是20微克。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是25微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30微克。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是50微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是70微 克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是100微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑 量是150微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是200微克。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是300微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是500微克。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是700微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是lmg。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是1.2mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是1.5 mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是 3mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是大于5mg。在一個實(shí)施方式中，上述鋁鹽的劑量以每微克重組蛋白計(jì)。
在另一實(shí)施方式中，所述鋁鹽的劑量是10-100微克。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是20-100微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30-100微克。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是50-100微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是 100-200微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是150-300微克。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是200-400微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是300-600微 克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是500-1000微克。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是700-1500微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是l-2mg。在另一實(shí) 施方式中，所述劑量是1.5-2 mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2-3 mg。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是3-5mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5-8 mg。在一個實(shí)施方式中，上述鋁鹽的劑量以每微克重組蛋白計(jì)。在另一實(shí)施方式中，所述佐劑是Montanide ISA佐劑。在另一實(shí)施方式 中，所述佐劑是補(bǔ)體成分C3d的三聚體。在另一實(shí)施方式中，所述三聚體共 價(jià)連接于蛋白質(zhì)免疫原。在另一實(shí)施方式中，所述佐劑是MF59。在另一實(shí)施 方式中，所述佐劑是粒細(xì)胞/巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)蛋白。在另一實(shí) 施方式中，所述佐劑是混合物，所述混合物包括GM-CSF蛋白。在另一實(shí)施 方式中，所述佐劑是編碼GM-CSF的核苷酸分子。在另一實(shí)施方式中，所述 佐劑是混合物，所述混合物包括編碼GM-CSF的核苷酸分子。在另一實(shí)施方 式中，所述佐劑是皂角苷QS21。在另一實(shí)施方式中，所述佐劑是混合物，所 述混合物包括皂角苷QS21。在另一實(shí)施方式中，所述佐劑是單磷酰脂質(zhì)A (MPL)。在另一實(shí)施方式中，所述佐劑是混合物，所述混合物包括MPL。在 另一實(shí)施方式中，所述佐劑是SBAS2。在另一實(shí)施方式中，所述佐劑是混合 物，所述混合物包括SBAS2。在另一實(shí)施方式中，所述佐劑是非甲基化的含 CpG的寡核苷酸。在另一實(shí)施方式中，所述佐劑是混合物，所述混合物包括 非甲基化的含CpG的寡核苷酸。在另一實(shí)施方式中，所述佐劑是免疫刺激細(xì) 胞因子。在另一實(shí)施方式中，所述佐劑是混合物，所述混合物包括免疫刺激 細(xì)胞因子。在另一實(shí)施方式中，所述佐劑是編碼免疫刺激細(xì)胞因子的核苷酸 分子。在另一實(shí)施方式中，所述佐劑是混合物，所述混合物包括編碼免疫刺 激細(xì)胞因子的核苷酸分子。在另一實(shí)施方式中，所述佐劑是混合物，所述混 合物包括quill glycoside在另一實(shí)施方式中，所述佐劑是混合物，所述混合 物包括細(xì)菌有絲分裂原。在另一實(shí)施方式中，所述佐劑是混合物，所述混合 物包括細(xì)菌毒素。在另一實(shí)施方式中，所述佐劑是混合物，所述混合物包括 本領(lǐng)域己知的任何其他佐劑。在另一實(shí)施方式中，所述佐劑是2種上述佐劑 的混合物。在另一實(shí)施方式中，所述佐劑是3種上述佐劑的混合物。在另一 實(shí)施方式中，所述佐劑是3種以上上述佐劑的混合物。在另一實(shí)施方式中， 所述佐劑是MPL與500昭鋁鹽的混合物。
在另一實(shí)施方式中，通過本發(fā)明的疫苗所引發(fā)的抗gC或抗gE抗體阻斷 免疫逃避使得能夠降低引發(fā)有效抗gD免疫應(yīng)答所需的佐劑劑量。在另一實(shí)施 方式中，本發(fā)明的疫苗引發(fā)有效抗HSV免疫應(yīng)答所需的佐劑的劑量較低。在 另一實(shí)施方式中，當(dāng)使用佐劑時引發(fā)有效抗HSV免疫應(yīng)答所需的疫苗的劑量 較低。
在另一實(shí)施方式中，所述佐劑是載體多肽。在另一實(shí)施方式中，"載體多肽"指的是可綴合或結(jié)合于本發(fā)明的HSV蛋白以增強(qiáng)所述多肽的免疫原性的 蛋白質(zhì)或其免疫原性片段。載體蛋白的實(shí)例包括但絕不限于鑰孔血藍(lán)蛋白
(KLH)、白蛋白、霍亂毒素、不耐熱腸毒素(LT)等等。在另一實(shí)施方式中， 所述兩個組分被制備為嵌合構(gòu)建體，以表達(dá)融合多肽。在另一實(shí)施方式中， 采用化學(xué)交聯(lián)將HSV蛋白連接于載體多肽。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物的疫苗包含重組HSV-1蛋白。 在另一實(shí)施方式中，所述疫苗包含重組HSV-2蛋白。在另一實(shí)施方式中，所 述疫苗包含HSV-1和HSV-2蛋白兩者。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物的含有重組HSV-l-蛋白的疫 苗還包含重組HSV-2蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述重組HSV-2蛋白是gD2 蛋白或其片段。在另一實(shí)施方式中，所述重組HSV-2蛋白是gC2蛋白或其片 段。在另一實(shí)施方式中，所述重組HSV-2蛋白是gE2蛋白或其片段。在另一 實(shí)施方式中，所述含有重組HSV-l-蛋白的疫苗還包含gD2蛋白和gC2蛋白或 其片段。在另一實(shí)施方式中，所述疫苗還包含gD2蛋白和gE2蛋白或其片段。 在另一實(shí)施方式中，所述疫苗還包含gE2蛋白和gC2蛋白或其片段。在另一 實(shí)施方式中，所述疫苗還包含gD2蛋白、gE2蛋白和gC2蛋白或其片段。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物的含有重組HSV-2-蛋白的疫 苗還包含重組HSV-1蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述重組HSV-1蛋白是gDl 蛋白或其片段。在另一實(shí)施方式中，所述重組HSV-l蛋白是gCl蛋白或其片 段。在另一實(shí)施方式中，所述重組HSV-l蛋白是gEl蛋白或其片段。在另一 實(shí)施方式中，所述含有重組HSV-2-蛋白的疫苗還包含gDl蛋白和gCl蛋白或 其片段。在另一實(shí)施方式中，所述疫苗還包含gDl蛋白和gEl蛋白或其片段。 在另一實(shí)施方式中，所述疫苗還包含gEl蛋白和gCl蛋白或其片段。在另一 實(shí)施方式中，所述疫苗還包含gDl蛋白、gEl蛋白和gCl蛋白或其片段。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的疫苗方案還包括給所述對象施用加強(qiáng)免疫 接種的步驟，其中所述加強(qiáng)免疫接種包括初始免疫接種所使用的重組HSV-1 gD蛋白或其免疫原性片段，但不包括初始免疫接種中的其他重組蛋白。在另 一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種同時含有HSV-1 gD蛋白和HSV-2 gD蛋白。 在另一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種不包含初始免疫接種中的重組HSV-1 gC蛋白或其片段。在另一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種不包含初始免疫接 種中的重組HSV-lgE蛋白或其片段。在另一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種不包含(a)重組HSV-l gC蛋白或其片段或(b)重組HSV-l gE蛋白或其片段，這 兩者均存在于初始免疫接種中。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的疫苗方案還包括給所述對象施用加強(qiáng)免疫 接種的步驟，其中所述加強(qiáng)免疫接種包括初始免疫接種所使用的重組HSV-1 gE蛋白或其免疫原性片段，但不包括初始免疫接種中的其他重組蛋白。在另 一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種同時含有HSV-1 gE蛋白和HSV-2 gE蛋白。 在另一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種不包含初始免疫接種中的重組HSV-1 gC蛋白或其片段。在另一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種不包含初始免疫接 種中的重組HSV-lgD蛋白或其片段。在另一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種 不包含(a)重組HSV-1 gC蛋白或其片段或(b)重組HSV-1 gD蛋白或其片段，這 兩者均存在于初始免疫接種中。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的疫苗方案還包括給所述對象施用加強(qiáng)免疫 接種的步驟，其中所述加強(qiáng)免疫接種包括初始免疫接種所使用的重組HSV-1 gC蛋白或其免疫原性片段，但不包括初始免疫接種中的其他重組蛋白。在另 一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種同時含有HSV-1 gC蛋白和HSV-2 gC蛋白。 在另一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種不包含初始免疫接種中的重組HSV-1 gD蛋白或其片段。在另一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種不包含初始免疫接 種中的重組HSV-lgE蛋白或其片段。在另一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種 不包含(a)重組HSV-1 gD蛋白或其片段或(b)重組HSV-1 gE蛋白或其片段，這 兩者均存在于初始免疫接種中。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的疫苗方案還包括給所述對象施用加強(qiáng)免疫 接種的步驟，其中所述加強(qiáng)免疫接種包括初始免疫接種所使用的重組HSV-2 gD蛋白或其免疫原性片段，但不包括初始免疫接種中的其他重組蛋白。在另 一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種同時含有HSV-1 gD蛋白和HSV-2 gD蛋白。 在另一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種不包含初始免疫接種中的重組HSV-2 gC蛋白或其片段。在另一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種不包含初始免疫接 種中的重組HSV-2gE蛋白或其片段。在另一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種 不包含(a)重組HSV-2 gC蛋白或其片段或(b)重組HSV-2 gE蛋白或其片段，這 兩者均存在于初始免疫接種中。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的疫苗方案還包括給所述對象施用加強(qiáng)免疫 接種的步驟，其中所述加強(qiáng)免疫接種包括初始免疫接種所使用的重組HSV-2gE蛋白或其免疫原性片段，但不包括初始免疫接種中的其他重組蛋白。在另 一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種同時含有HSV-1 gE蛋白和HSV-2 gE蛋白。 在另一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種不包含初始免疫接種中的重組HSV-2 gC蛋白或其片段。在另一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種不包含初始免疫接 種中的重組HSV-2 gD蛋白或其片段。在另一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種 不包含(a)重組HSV-2 gC蛋白或其片段或(b)重組HSV-2 gD蛋白或其片段，這 兩者均存在于初始免疫接種中。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的疫苗方案還包括給所述對象施用加強(qiáng)免疫 接種的步驟，其中所述加強(qiáng)免疫接種包括初始免疫接種所使用的重組HSV-2 gC蛋白或其免疫原性片段，但不包括初始免疫接種中的其他重組蛋白。在另 一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種同時含有HSV-1 gC蛋白和HSV-2 gC蛋白。 在另一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種不包含初始免疫接種中的重組HSV-2 gD蛋白或其片段。在另一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種不包含初始免疫接 種中的重組HSV-2 gE蛋白或其片段。在另一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種 不包含(a)重組HSV-2 gD蛋白或其片段或(b)重組HSV-2 gE蛋白或其片段，這 兩者均存在于初始免疫接種中。
在一個實(shí)施方式中，上述任一加強(qiáng)免疫接種在初始免疫接種之后施用， 所述初始免疫接種包含一或多個HSV-1蛋白或其免疫原性片段。在另一實(shí)施 方式中，上述任一加強(qiáng)免疫接種在初始免疫接種之后施用，所述初始免疫接 種包含一或多個HSV-2蛋白或其免疫原性片段。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的疫苗方案還包括給所述對象施用加強(qiáng)免疫 接種的步驟，其中所述加強(qiáng)免疫接種基本上由重組HSV-1 gD蛋白或其免疫原 性片段組成。在另一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種由重組HSV-1 gD蛋白或 其免疫原性片段和佐劑組成。在一個實(shí)施方式中，所述HSVgD蛋白或其免 疫原性片段是HSV-1 gD蛋白，而在另一實(shí)施方式中，其是HSV-2 gD蛋白，而 在另一實(shí)施方式中，其是HSV-1和HSV-2 gD蛋白兩者。在另一實(shí)施方式中， 所述加強(qiáng)免疫接種基本上由重組HSVgE蛋白或其免疫原性片段組成。在另一 實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種由重組HSV gE蛋白或其免疫原性片段和佐劑 組成。在一個實(shí)施方式中，所述HSV gE蛋白或其免疫原性片段是HSV-1 gE 蛋白，而在另一實(shí)施方式中，其是HSV-2 gE蛋白，而在另一實(shí)施方式中，其 是HSV-1和HSV-2 gE蛋白兩者。在另一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種基本上由重組HSV gC蛋白或其免疫原性片段組成。在另一實(shí)施方式中，所述 加強(qiáng)免疫接種由重組HSV gC蛋白或其免疫原性片段和佐劑組成。在一個實(shí) 施方式中，所述HSVgC蛋白或其免疫原性片段是HSV-l gC蛋白，而在另一 實(shí)施方式中，其是HSV-2 gC蛋白，而在另一實(shí)施方式中，其是HSV-1和HSV-2 gC蛋白兩者。
在另一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種在單次初始免疫接種之后進(jìn)行。 在另一實(shí)施方式中，"初始免疫接種"指的是包含以下(a)與(b)的混合物的免疫 接種(a)gD蛋白，(b)gC蛋白、gE蛋白、或其混合物。在另一實(shí)施方式中， 初始免疫接種指的是包含選自gD蛋白、gC蛋白和gE蛋白的兩種或多種重組 HSV蛋白的免疫接種。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語指的是最初施用的疫苗。 在另一實(shí)施方式中，在加強(qiáng)免疫接種之前施用2次初始免疫接種。在另一實(shí) 施方式中，在加強(qiáng)免疫接種之前施用3次初始免疫接種。在另一實(shí)施方式中， 在加強(qiáng)免疫接種之前施用4次初始免疫接種。
在另一實(shí)施方式中，在初始免疫接種之后施用單次加強(qiáng)免疫接種。在另 一實(shí)施方式中，在初始免疫接種之后施用2次加強(qiáng)免疫接種。在另一實(shí)施方 式中，在初始免疫接種之后施用3次加強(qiáng)免疫接種。
在一個實(shí)施方式中，在單一注射器中將gD和gE施用至同一部位，而在 另一實(shí)施方式中，在分開的注射器中將gD和gE施用至分開的部位，或在另 一實(shí)施方式中，gD和gE被同時施用至單一部位并繼以加強(qiáng)劑量的gD，而沒 有g(shù)E。
在一個實(shí)施方式中，在單一注射器中將gD和gC施用至同一部位，而在 另一實(shí)施方式中，在分開的注射器中將gD和gC施用至分開的部位，或在另 一實(shí)施方式中，gD和gC被同時施用至單一部位并繼以加強(qiáng)劑量的gD，而沒 有g(shù)C。
在一個實(shí)施方式中，在單一注射器中將gE和gC施用至同一部位，而在 另一實(shí)施方式中，在分開的注射器中將gE和gC施用至分開的部位，或在另 一實(shí)施方式中，gE和gC被同時施用至單一部位并繼以加強(qiáng)劑量的gE，而沒 有g(shù)C，或者在另一實(shí)施方式中，繼以加強(qiáng)劑量的gC，而沒有g(shù)E。
在一個實(shí)施方式中，在單一注射器中將gD、 gC、和gE施用至同一部位， 而在另一實(shí)施方式中，在分開的注射器中將gD、 gC、和gE施用至分開的部 位，或在另一實(shí)施方式中，gD、 gC、和gE被同時施用至單一部位并繼以加在另一實(shí)施方式中，免疫接種或加強(qiáng)免疫接種中使用的重組HSV gD-l 的劑量是，例如對于人類對象，20微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是10微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30微克/接種。在另一實(shí)施 方式中，所述劑量是25微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是22微克/ 接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是18微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是16微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是15微克/接種。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是14微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是 13微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是12微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是11微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是10微克/ 接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是9微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是8微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是7微克/接種。在另一 實(shí)施方式中，所述劑量是6微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5微 克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是4微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是3微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2微克/接種。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是1.5微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是l 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量小于1微克/接種。
在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.1微克/kg體重(每次接種)。在另一實(shí) 施方式中，所述劑量是0.2微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.15微 克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.13微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是0.12微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是O.ll微克/kg。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是0.09微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.08 微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.07微克/kg。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是0.06微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.05微克/kg。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.04微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是 0.03微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.02微克/kg。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量小于0.02微克/kg。
在另一實(shí)施方式中，所述劑量是l-2微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是2-3微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2-4微克/接種。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量是3-6微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是4-8微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5-10微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5-15微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是10-20 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是20-30微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是30-40微克/蛋白/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是40-60 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2-50微克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是3-50微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5-50微克/ 接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是8-50微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是10-50微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是20-50微克/接 種。
每一劑量的gD-l代表了本發(fā)明的一個單獨(dú)的實(shí)施方式。 在另一實(shí)施方式中，免疫接種或加強(qiáng)免疫接種中使用的重組HSV gD-2 劑量是10納克/接種，在一個實(shí)施方式中，其是用于人類對象的劑量。在另一 實(shí)施方式中，所述劑量是25納克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50 納克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是100納克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是150納克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是200納克/ 接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是250納克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是300納克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是400納克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是500納克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑 量是750納克/接種。
在另一實(shí)施方式中，所述劑量是20微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述 劑量是10微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30微克/接種。在另一 實(shí)施方式中，所述劑量是25微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是22 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是18微克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是16微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是15微克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是14微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是13微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是12微克/接種。在另一實(shí)施 方式中，所述劑量是ll微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是10微克/ 接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是9微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是8微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是7微克/接種。在另一 實(shí)施方式中，所述劑量是6微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5微 克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是4微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是3微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是1.5微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是l 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量小于l微克/接種。
在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.1微克/kg體重(每次接種)。在另一實(shí)
施方式中，所述劑量是0.2微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.15微 克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.13微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是0.12微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是O.ll微克/kg。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是0.09微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.08 微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.07微克/kg。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是0.06微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.05微克/kg。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.04微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是 0.03微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.02微克/kg。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量小于0.02微克/kg。
在另一實(shí)施方式中，所述劑量是500納克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述 劑量是1 .25微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2.5微克/kg。在另一實(shí) 施方式中，所述劑量是5微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是10微克/kg。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是12.5微克/kg。
在另一實(shí)施方式中，所述劑量是l-2微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是2-3微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2-4微克/接種。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量是3-6微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是4-8微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5-10微克/接種。在另一實(shí) 施方式中，所述劑量是5-15微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是10-20 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是20-30微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是30-40微克/蛋白/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是40-60 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2-50微克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是3-50微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5-50微克/ 接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是8-50微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是10-50微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是20-50微克/接 種。
每一劑量的gD-2代表了本發(fā)明的一個單獨(dú)的實(shí)施方式。 在另一實(shí)施方式中，免疫接種或加強(qiáng)免疫接種中使用的重組HSVgC-l劑 量是，例如對于人類對象，20微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是IO微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30微克/接種。在另一實(shí)施方式
中，所述劑量是25微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是22微克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是18微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是16微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是15微克/接種。在另一實(shí)施 方式中，所述劑量是14微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是13微克/ 接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是12微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是ll微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是10微克/接種。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是9微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是8 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是7微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是6微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5微克/接種。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是4微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是3 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是1.5微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是l微克/接種。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量小于1微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是100微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是500微克/接種。在另一實(shí) 施方式中，所述劑量是400微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是300 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是220微克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是250微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是200微克/ 接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是180微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是160微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是150微克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是140微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑 量是130微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是120微克/接種。在另一 實(shí)施方式中，所述劑量是110微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是100 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是90微克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是80微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是70微克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是60微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是50微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是40微克/接種。
在另一實(shí)施方式中，所述劑量是O.l微克/kg體重(每次接種)。在另一實(shí) 施方式中，所述劑量是0.2微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.15微 克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.13微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是0.12微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是O.ll微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.09微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.08 微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.07微克/kg。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是0.06微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.05微克/kg。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.04微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是 0.03微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.02微克/kg。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量小于0.02微克/kg。
在另一實(shí)施方式中，所述劑量是10-100納克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是50-250納克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是10-250納克/ 接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是100-500納克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是200-300納克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是1-2微 克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2-3微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是2-4微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是3-6微克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是4-8微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑 量是5-10微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5-15微克/接種。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是10-20微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是20-30微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30-40微克/蛋白/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是40-60微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述 劑量是20-100微克展種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30-100微克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50-100微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述 劑量是80-100微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是20-200微克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30-200微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述 劑量是50-200微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是80-200微克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是100-200微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是20-300微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30-300微克/接 種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50-300微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是80-300微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是100-300微克 /接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是200-300微克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是20-500微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30-500 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50-500微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是80-500微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是100-500 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是200-500微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是300-500微克/接種。
每一劑量的gC-l代表了本發(fā)明的一個單獨(dú)的實(shí)施方式。 在另一實(shí)施方式中，免疫接種或加強(qiáng)免疫接種中使用的重組HSV gC-2劑 量是，例如對于人類對象，20微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.5 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是7.5微克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是10微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30微克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是25微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是22微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是18微克/接種。在另一實(shí)施 方式中，所述劑量是16微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是15微克/ 接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是14微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是13微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是12微克/接種。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是11微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是 10微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是9微克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是8微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是7微克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是6微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是5微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是4微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是3微克展種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2微克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是1.5微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑 量是l微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量小于1微克/接種。在另一實(shí) 施方式中，所述劑量是500微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是400 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是300微克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是220微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是250微克/ 接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是200微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是180微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是160微克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是150微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑 量是140微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是130微克/接種。在另一 實(shí)施方式中，所述劑量是120微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是110 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是100微克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是90微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是80微克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是70微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是60微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是40微克/接種。
在另一實(shí)施方式中，所述劑量是O.l微克/kg體重(每次接種)。在另一實(shí)
施方式中，所述劑量是0.2微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.15微 克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.13微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是0.12微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是O.ll微克/kg。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是0.09微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.08 微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.07微克/kg。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是0.06微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.05微克/kg。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.04微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是 0.03微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.02微克/kg。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量小于0.02微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是250微克/kg。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是25微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是 50微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是100微克/kg。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是200微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是300微克/kg。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是500微克/kg。
在另一實(shí)施方式中，所述劑量是l-2微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是2-3微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2-4微克/接種。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量是3-6微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是4-8微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5-10微克/接種。在另一實(shí) 施方式中，所述劑量是5-15微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是10-20 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是20-30微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是30-40微克/蛋白/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是40-60 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是20-100微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是30-100微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50-100 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是80-100微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是20-200微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30-200 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50-200微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是80-200微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是100-200 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是20-300微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是30-300微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50-300 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是80-300微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是100-300微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是200-300 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是20-500微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是30-500微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50-500 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是80-500微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是100-500微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是200-500 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是300-500微克/接種。 每一劑量的gC-2代表了本發(fā)明的一個單獨(dú)的實(shí)施方式。 在另一實(shí)施方式中，免疫接種或加強(qiáng)免疫接種中使用的重組HSVgE-l劑 量是，例如對于人類對象，20微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是IO 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30微克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是25微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是22微克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是18微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是16微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是15微克/接種。在另一實(shí)施 方式中，所述劑量是14微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是13微克/ 接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是12微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是ll微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是10微克/接種。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是9微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是8 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是7微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是6微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5微克/接種。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是4微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是3 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2微克傻種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是1.5微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是l微克/接種。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量小于1微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是500微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是400微克/接種。在另一實(shí) 施方式中，所述劑量是300微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是220 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是250微克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是200微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是180微克/ 接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是160微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是150微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是140微克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是130微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑 量是120微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是UO微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是100微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是90 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是80微克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是70微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是60微克準(zhǔn)種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是40微克/接種。
在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.1微克/kg體重(每次接種)。在另一實(shí) 施方式中，所述劑量是0.2微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.15微 克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.13微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是0.12微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是O.ll微克/kg。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是0.09微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.08 微克/kg。
在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.07微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述 劑量是0.06微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.05微克/kg。在另一 實(shí)施方式中，所述劑量是0.04微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.03 微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.02微克/kg。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量小于0.02微克/kg。
在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.5-2微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是0.5-10微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2.5-7.5微克/接 種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是l-2微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是2-3微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2-4微克/接種。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量是3-6微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是4-8微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5-10微克/接種。在另一實(shí) 施方式中，所述劑量是5-15微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是10-20 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是20-30微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是30-40微克/蛋白/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是40-60 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是20-100微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是30-100微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50-100 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是80-100微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是20-200微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30-200 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50-200微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是80-200微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是100-200微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是20-300微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是30-300微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50-300 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是80-300微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是100-300微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是200-300 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是20-500微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是30-500微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50-500 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是80-500微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是100-500微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是200-500 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是300-500微克/接種。 每一劑量的gE-l代表了本發(fā)明的一個單獨(dú)的實(shí)施方式。 在另一實(shí)施方式中，免疫接種或加強(qiáng)免疫接種中使用的重組HSV gE-2劑 量是，例如對于人類對象，20微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是IO 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30微克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是25微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是22微克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是18微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是16微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是15微克/接種。在另一實(shí)施 方式中，所述劑量是14微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是13微克/ 接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是12微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是ll微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是10微克/接種。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是9微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是8 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是7微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是6微克準(zhǔn)種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5微克/接種。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是4微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是3 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是l，5微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是l微克/接種。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量小于1微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是500微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是400微克/接種。在另一實(shí) 施方式中，所述劑量是300微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是220 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是250微克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是200微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是180微克/ 接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是160微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是150微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是140微克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是130微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑 量是120微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是110微克/接種。在另一 實(shí)施方式中，所述劑量是100微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是90 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是80微克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是70微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是60微克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是40微克/接種。
在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.1微克/kg體重(每次接種)。在另一實(shí) 施方式中，所述劑量是0.2微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.15微 克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.13微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是0.12微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是O.ll微克/kg。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是0.09微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.08 微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.07微克/kg。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是0.06微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.05微克/kg。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.04微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是 0.03微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.02微克/kg。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量小于0.02微克/kg。
在另一實(shí)施方式中，所述劑量是l-2微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是2-3微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2-4微克/接種。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量是3-6微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是4-8微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5-10微克/接種。在另一實(shí) 施方式中，所述劑量是5-15微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是10-20 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是20-30微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是30-40微克/蛋白/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是40-60 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是20-100微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是30-100微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50-100 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是80-100微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是20-200微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30-200 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50-200微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是80-200微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是100-200微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是20-300微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是30-300微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50-300 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是80-300微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是100-300微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是200-300 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是20-500微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是30-500微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50-500 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是80-500微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是100-500微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是200-500 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是300-500微克/接種。 每一劑量的gE-2代表了本發(fā)明的一個單獨(dú)的實(shí)施方式。 在另一實(shí)施方式中，所述加強(qiáng)免疫接種包含佐劑。在另一實(shí)施方式中， 所述佐劑包含a CpG寡核苷酸。在另一實(shí)施方式中，所述佐劑包含鋁鹽。在 另一實(shí)施方式中，所述佐劑包含CpG寡核苷酸和鋁鹽兩者。在另一實(shí)施方式 中，所述佐劑包含任何其他上述佐劑。在另一實(shí)施方式中，所述佐劑包含上 述佐劑的任意組合。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的免疫接種或加強(qiáng)免疫接種中的CpG寡核苷 酸的劑量是10微克(微克)。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是15微克。在另一 實(shí)施方式中，所述劑量是20微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30微克。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是70 微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是100微克。在另一實(shí)施方式中，所述 劑量是150微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是200微克。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是300微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是500微克。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量是700微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是lmg。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是1.2mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是1.5 mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是 3mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是大于5 mg。
在另一實(shí)施方式中，所述CpG寡核苷酸的劑量是10-100微克。在另一實(shí) 施方式中，所述劑量是20-100微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30-100 微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50-100微克。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是100-200微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是150-300微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是200-400微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是 300-600微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是500-1000微克。在另一實(shí)施 方式中，所述劑量是700-1500微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是l-2mg。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是1.5-2 mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是 2-3 mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是3-5 mg。在另一實(shí)施方式中，所述 劑量是5-8 mg。
在另一實(shí)施方式中，加強(qiáng)免疫接種中的鋁鹽的劑量是10微克。在另一實(shí) 施方式中，所述劑量是15微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是20微克。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50 微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是70微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑 量是100微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是150微克。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是200微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是300微克。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是500微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是700 微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是l mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是1.2mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是1.5mg。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是2mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是3mg。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是5mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是大于5mg。
在另一實(shí)施方式中，所述鋁鹽的劑量是10-100微克。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是20-100微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30-100微克。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是50-100微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是 100-200微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是150-300微克。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是200-400微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是300-600微 克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是500-1000微克。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是700-1500微克。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是l-2mg。在另一實(shí) 施方式中，所述劑量是1.5-2 mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2-3 mg。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是3-5mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5-8 mg。
在另一實(shí)施方式中，所述鋁鹽的劑量是10微克/微克重組蛋白。在另一實(shí) 施方式中，所述劑量是15微克/微克重組蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是20微克/微克重組蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30微克/微克重組 蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50微克/微克重組蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是70微克/微克重組蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是
100微克/微克重組蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是150微克/微克重組 蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是200微克/微克重組蛋白。在另一實(shí)施 方式中，所述劑量是300微克/微克重組蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是500微克/微克重組蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是700微克/微克重 組蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是lmg。在另一實(shí)施方式中，所述劑 量是1.2mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是1.5 mg。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是2mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是3mg。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是5mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是大于5mg。
在另一實(shí)施方式中，所述鋁鹽的劑量是10-100微克/微克重組蛋白。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是20-100微克/微克重組蛋白。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是30-100微克/微克重組蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50-100 微克/微克重組蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是100-200微克/微克重組 蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是150-300微克/微克重組蛋白。在另一 實(shí)施方式中，所述劑量是200-400微克/微克重組蛋白。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是300-600微克/微克重組蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是 500-1000微克/微克重組蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是700-1500微克 /微克重組蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是l-2mg。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是1.5-2 mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2-3 mg。在另一實(shí)施 方式中，所述劑量是3-5mg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5-8mg。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的疫苗引發(fā)的抗體抑制gD與細(xì)胞受體的結(jié) 合。在另一實(shí)施方式中，所述受體是皰疹病毒進(jìn)入介導(dǎo)物A(HveA/HVEM)。 在另一實(shí)施方式中，所述受體是柄蛋白-1 (HveC)。在另一實(shí)施方式中，所述 受體是柄蛋白-2 (HveB)。在另一實(shí)施方式中，所述受體是修飾型的硫酸乙酰 肝素。在另一實(shí)施方式中，所述受體是硫酸乙酰肝素蛋白聚糖。在另一實(shí)施 方式中，所述受體是本領(lǐng)域已知的任何其他gD受體。
在另一實(shí)施方式中，在所述疫苗中納入本發(fā)明的gC蛋白、gE蛋白、和/ 或佐劑增加由所述疫苗引發(fā)的抗gD抗體的功效。在另一實(shí)施方式中，納入本 發(fā)明的gC蛋白、gE蛋白、和/或佐劑升高引發(fā)抑制gD與細(xì)胞受體結(jié)合的抗 體的所需的重組gD的劑量(圖19)。在另一實(shí)施方式中，當(dāng)與gC蛋白(圖20A) 或gE蛋白分開施用一劑gD時，本發(fā)明的gC蛋白、gE蛋白、和/或佐劑降低引發(fā)抑制gD與細(xì)胞受體結(jié)合的抗體所需的重組gD的劑量。
在另一實(shí)施方式中，在所述疫苗中納入本發(fā)明的gC蛋白、gE蛋白、和/
或佐劑增強(qiáng)先天性免疫應(yīng)答的作用。在另一實(shí)施方式中，所述先天性免疫應(yīng) 答是抗體介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。在另一實(shí)施方式中，所述先天性免疫應(yīng)答是非抗
體介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。在另一實(shí)施方式中，所述先天性免疫應(yīng)答是NK(天然殺 傷)細(xì)胞應(yīng)答。在另一實(shí)施方式中，所述先天性免疫應(yīng)答本領(lǐng)域已知的任何其 他先天性免疫應(yīng)答。
在一個實(shí)施方式中，在所述疫苗中納入gC-l蛋白、和/或佐劑有助于抵抗 疾病和死亡，而在另一實(shí)施方式中，在所述疫苗中納入gC-2蛋白有助于抵抗 疾病和死亡(例如，圖22-26)。在一個實(shí)施方式中，接種和帶狀皰疹樣部位疾 病評分降低的最大降幅是使用5微克的劑量而得到的。在另一實(shí)施方式中， 所述接種和帶狀皰疹樣部位疾病評分的降幅是使用2微克的劑量而得到的。 在一個實(shí)施方式中，所述接種和帶狀皰疹樣部位疾病評分的降幅是使用1微 克的劑量而得到的。在另一實(shí)施方式中，所述接種和帶狀皰疹樣部位疾病評 分的降幅是使用0.5微克的劑量而得到的。在一個實(shí)施方式中，所述用于人類 的疫苗中的gC-2的劑量是如現(xiàn)有技術(shù)所知的那樣根據(jù)小鼠實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)估計(jì)的。
在一個實(shí)施方式中，在所述疫苗中納入gD-l蛋白、和/或佐劑有助于抵抗 疾病和死亡，而在另一實(shí)施方式中，在所述疫苗中納入gD-2蛋白有助于抵抗 疾病和死亡(例如，圖27-31)。在一個實(shí)施方式中，接種和帶狀皰疹樣部位疾 病評分降低的最大降幅是使用250 ng的劑量而得到的。在一個實(shí)施方式中， 所述接種和帶狀皰疹樣部位疾病評分的降幅是使用100 ng的劑量而得到的。 在另一實(shí)施方式中，所述接種和帶狀皰疹樣部位疾病評分的降幅是使用50ng 的劑量而得到的。在一個實(shí)施方式中，所述接種和帶狀皰疹樣部位疾病評分 的降幅是使用25ng的劑量而得到的。在另一實(shí)施方式中，所述接種和帶狀皰 疹樣部位疾病評分的降幅是使用10ng的劑量而得到的。在一個實(shí)施方式中， 所述用于人類的疫苗中的gD-2的劑量是如現(xiàn)有技術(shù)所知的那樣根據(jù)小鼠實(shí)驗(yàn) 數(shù)據(jù)估計(jì)的。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的疫苗還包含另一種參與細(xì)胞結(jié)合和/或細(xì)胞 進(jìn)入的HSV糖蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述糖蛋白是gH。在另一實(shí)施方 式中，所述糖蛋白是gL。在另一實(shí)施方式中，所述糖蛋白是gB。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的疫苗還包含額外的HSV糖蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述糖蛋白是gM。在另一實(shí)施方式中，所述糖蛋白是gN。在另
一實(shí)施方式中，所述糖蛋白是gK。在另一實(shí)施方式中，所述糖蛋白是gG。
在另一實(shí)施方式中，所述糖蛋白是gl。在另一實(shí)施方式中，所述糖蛋白是gj。
在一個實(shí)施方式中，本發(fā)明的疫苗和組合物包含單一的重組HSV糖蛋白， 在一個實(shí)施方式中，其是gC、 gE、或gD，以及任選地，佐劑。在一個實(shí)施 方式中，所述HSV糖蛋白是HSV-1糖蛋白，而在另一實(shí)施方式中，所述HSV 糖蛋白是HSV-2糖蛋白。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供重組疫苗載體，其 編碼重組HSV糖蛋白。
在另一實(shí)施方式中，在所述疫苗中納入本發(fā)明的gC蛋白、gE蛋白、和/ 或佐劑增加針對上述糖蛋白之一的疫苗引發(fā)的抗體的功效。在另一實(shí)施方式 中，當(dāng)一劑所述糖蛋白之一與其他糖蛋白分開施用時(圖20A)，本發(fā)明的gC 蛋白、gE蛋白、和/或佐劑降低引發(fā)抑制所述糖蛋白結(jié)合于其細(xì)胞受體的抗體 所需的上述糖蛋白之一的劑量(圖19)。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的疫苗是重組核苷酸疫苗。在另一實(shí)施方式 中，所述疫苗是重組DNA疫苗。在另一實(shí)施方式中，所述DNA疫苗編碼HSV gC蛋白和HSV gD蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述DNA疫苗編碼HSV gE 蛋白和HSV gD蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述DNA疫苗編碼HSV gE蛋白、 HSVgC蛋白、和HSVgD蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述重組蛋白是HSV-2 蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述重組蛋白是HSV-1蛋白。在另一實(shí)施方式中， 所述蛋白包含HSV-1和HSV-2蛋白兩者。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的疫苗包含加載了本發(fā)明的HSV抗原的樹突 細(xì)胞(DC)。在另一實(shí)施方式中，所述DC已經(jīng)被暴露于本發(fā)明的HSV抗原。 在另一實(shí)施方式中，所述DC加載了編碼本發(fā)明的HSV抗原的核苷酸。在另 一實(shí)施方式中，所述DC已經(jīng)被活化。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供免疫原性組合物包含本發(fā)明的重組HSV 蛋白的組合。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供免疫原性組合物，其包含編碼 本發(fā)明的重組HSV蛋白的核苷酸分子。在另一實(shí)施方式中，所述免疫原性組 合物還包含佐劑。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供重組疫苗載體，其編碼本發(fā)明的重組HSV 蛋白。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供重組疫苗載體，其包含本發(fā)明的重組 HSV蛋白在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供重組疫苗載體，其包含本發(fā)明的核苷酸 分子。在另一實(shí)施方式中，所述表達(dá)載體是質(zhì)粒。在另一實(shí)施方式中，本發(fā) 明提供用于將本發(fā)明的核苷酸分子引入細(xì)胞的方法。構(gòu)建和使用重組載體的
方法是本領(lǐng)域已知的并可參見，例如，Sambrook et al. (2001， Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York)禾口 Brent et al. (2003, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York)。
在另一實(shí)施方式中，所述載體是細(xì)菌載體。在其他實(shí)施方式中，所述載體選 自沙門菌屬、志賀菌屬、BCG、單核增生李斯特氏菌(￡. mom qytoge"a)和格 氏鏈球菌OS. goWom'0。在另一實(shí)施方式中，所述重組HSV蛋白由重組細(xì)菌載 體輸送，所述載體被改良以逃避吞噬溶酶體融合并在細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中存活。 在另一實(shí)施方式中，所述載體是病毒載體。在其他實(shí)施方式中，所述載體選 自牛痘病毒、鳥痘病毒、腺病毒、AAV、牛痘病毒NYVAC、改良的牛痘Ankara 株(MVA)、西門利克森林病毒、委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒、皰疹病毒和反轉(zhuǎn)錄病 毒。在另一實(shí)施方式中，所述載體是裸DNA載體。在另一實(shí)施方式中，所述 載體本領(lǐng)域己知的任何其他載體。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的核苷酸可操縱地于在載體所引入的細(xì)胞中 驅(qū)動所編碼的肽表達(dá)的啟動子/調(diào)節(jié)序列。可用于驅(qū)動基因組成型表達(dá)的啟動 子/調(diào)節(jié)序列是本領(lǐng)域熟知的，包括但不限于，例如，巨細(xì)胞病毒立即早期啟 動子/增強(qiáng)子序列、SV40早期啟動子和勞斯肉瘤病毒啟動子。在另一實(shí)施方式 中，通過將編碼肽的核酸置于誘導(dǎo)型或組織特異性啟動子/調(diào)節(jié)序列控制下可 實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的編碼肽的核酸的誘導(dǎo)型和組織特異性表達(dá)。可用于此目的的組 織特異性或誘導(dǎo)型啟動子/調(diào)節(jié)序列的實(shí)例包括但不限于MMTV LTR誘導(dǎo)型 啟動子和SV40晚期增強(qiáng)子/啟動子。在另一實(shí)施方式中，使用應(yīng)答于誘導(dǎo)劑 而被誘導(dǎo)的啟動子，所述誘導(dǎo)劑例如例如為金屬、糖皮質(zhì)激素等等。因此， 可以理解，本發(fā)明包括使用能夠驅(qū)動與之可操縱地連接的所需蛋白質(zhì)的表達(dá) 的任何啟動子/調(diào)節(jié)序列，無論是已知的還是未知的。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供包含本發(fā)明的載體的細(xì)胞。用于產(chǎn)生包 含載體和/或外來核酸的細(xì)胞的方法是本領(lǐng)域熟知的。見例如，Sambrook et al. (1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York)禾口 Ausubel et al. (1997， Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York)。在其他實(shí)施方式中，上述任何方法的所述疫苗均具有本發(fā)明的疫苗和組 合物的任何特征。每一特征代表了本發(fā)明的一個單獨(dú)的實(shí)施方式。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供抑制對象的原發(fā)性HSV感染的方法，所 述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。在另一實(shí)施方式中，本發(fā) 明提供治療對象的HSV感染的方法，所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的
疫苗的步驟。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供降低對象的HSV感染發(fā)生率的
方法，所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。在另一實(shí)施方式
中，本發(fā)明提供抑制對象的原發(fā)性HSV感染之后的潮紅的方法，所述方法包 括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。
在一個實(shí)施方式中，"潮紅"或"復(fù)發(fā)"指的是在潛伏的神經(jīng)元HSV感染之 后皮膚組織再次感染。在另一實(shí)施方式中，所述術(shù)語指的是潛伏期過后HSV 再活化。在另一實(shí)施方式中，所述術(shù)語指的是無癥狀潛伏期之后的癥狀性HSV 病變。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供抑制HSV播散的方法。在一個實(shí)施方式 中，從DRG到皮膚的播散被抑制。在一個實(shí)施方式中，細(xì)胞間HSV播散被 抑制。在一個實(shí)施方式中，順行播散被抑制。在一個實(shí)施方式中，逆行播散 被抑制。在一個實(shí)施方式中，"DRG"指的是神經(jīng)元細(xì)胞體，而在另一實(shí)施方 式中，其含有神經(jīng)纖維的神經(jīng)元細(xì)胞體。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語指的是 本領(lǐng)域所使用的"DRG"的任何其他定義。在另一實(shí)施方式中，抑制HSV播散 至神經(jīng)組織。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供抑制對象的原發(fā)性HSV感染之后的復(fù)發(fā) 的方法，所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。在另一實(shí)施方 式中，本發(fā)明提供預(yù)防對象的原發(fā)性HSV感染之后的復(fù)發(fā)的方法，所述方法
包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供抑制對象的原發(fā)性HSV感染之后的HSV 唇皰疹的方法，所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供預(yù)防HSV感染復(fù)發(fā)的方法，所述方法包 括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供減 輕HSV感染復(fù)發(fā)的嚴(yán)重程度的方法，所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的 疫苗的步驟。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供降低HSV感染復(fù)發(fā)的頻率的方 法，所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。在一個實(shí)施方式中，本發(fā)明給感染HIV的對象提供任一上述方法。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供治療對象的HSV腦炎的方法，所述方法
包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供
降低對象的HSV腦炎的發(fā)生率的方法，所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明 的疫苗的步驟。在一個實(shí)施方式中，"HSV腦炎"指的是由單純皰疹病毒-1(HSV) 引起的腦炎。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語指的是HSV相關(guān)性腦炎。在另一實(shí) 施方式中，該術(shù)語指的是本領(lǐng)域已知的任何其他類型的HSV介導(dǎo)的腦炎。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供治療或減輕對象的HSV新生兒感染的方 法，所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。
應(yīng)該理解，在此提到HSV時，在一個實(shí)施方式中，其指的是HSV-1，而 在另一實(shí)施方式中，指的是HSV-2，而在另一實(shí)施方式中，指的是HSV-1和 HSV-2。
在另一實(shí)施方式中，"HSv-r指的是單純皰疹病毒-i。在另一實(shí)施方式中，
該術(shù)語指的是KOS毒株。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語指的是F毒株。在另一 實(shí)施方式中，該術(shù)語指的是NS毒株。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語指的是CL101 毒株。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語指的是"17"毒株。在另一實(shí)施方式中，該術(shù) 語指的是"17+syn"毒株。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語指的是MacIntyre毒株。 在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語指的是MP毒株。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語指 的是HF毒株。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語指的是本領(lǐng)域已知的任何其他 HSV-1毒株。
在另一實(shí)施方式中，"HSV-2"指的是單純皰疹病毒-2。在另一實(shí)施方式中， 該術(shù)語指的是HSV-2 333毒株。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語指的是2.12毒株。 在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語指的是HG52毒株。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語 指的是MS毒株。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語指的是G毒株。在另一實(shí)施方 式中，該術(shù)語指的是186毒株。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語指的是本領(lǐng)域已 知的任何其他HSV-2毒株。
在另 一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供給對象進(jìn)行抗HSV感染免疫接種的方法， 所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。在另一實(shí)施方式中，本 發(fā)明提供壓制對象的HSV感染的方法，所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明 的疫苗的步驟。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供阻止對象的HSV感染的方法， 所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供阻止對象的原發(fā)性HSV感染的方法，所述方法包括給所述對象施用
本發(fā)明的疫苗的步驟。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供阻止對象的神經(jīng)元HSV
播散的方法，所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。
在另一實(shí)施方式中，所述術(shù)語"阻止HSV感染"和"阻止原發(fā)性HSV感染" 指的是將感染性病毒的效價(jià)降低90%。在另一實(shí)施方式中，所述效價(jià)被降低 50%。在另一實(shí)施方式中，所述效價(jià)被降低55%。在另一實(shí)施方式中，所述 效價(jià)被降低60%。在另一實(shí)施方式中，所述效價(jià)被降低65%。在另一實(shí)施方 式中，所述效價(jià)被降低70%。在另一實(shí)施方式中，所述效價(jià)被降低75%。在 另一實(shí)施方式中，所述效價(jià)被降低80%。在另一實(shí)施方式中，所述效價(jià)被降 低85%。在另一實(shí)施方式中，所述效價(jià)被降低92%。在另一實(shí)施方式中，所 述效價(jià)被降低95%。在另一實(shí)施方式中，所述效價(jià)被降低96%。在另一實(shí)施 方式中，所述效價(jià)被降低97%。在另一實(shí)施方式中，所述效價(jià)被降低98%。 在另一實(shí)施方式中，所述效價(jià)被降低99%。在另一實(shí)施方式中，所述效價(jià)被 降低超過99%。
在另一實(shí)施方式中，所述術(shù)語指的是將病毒復(fù)制的程度降低90%。在另 一實(shí)施方式中，復(fù)制被降低50%。在另一實(shí)施方式中，復(fù)制被降低55%。在 另一實(shí)施方式中，復(fù)制被降低60%。在另一實(shí)施方式中，復(fù)制被降低65%。 在另一實(shí)施方式中，復(fù)制被降低70%。在另一實(shí)施方式中，復(fù)制被降低75%。 在另一實(shí)施方式中，復(fù)制被降低80%。在另一實(shí)施方式中，復(fù)制被降低85%。 在另一實(shí)施方式中，復(fù)制被降低92%。在另一實(shí)施方式中，復(fù)制被降低95%。 在另一實(shí)施方式中，復(fù)制被降低96%。在另一實(shí)施方式中，復(fù)制被降低97%。 在另一實(shí)施方式中，復(fù)制被降低98%。在另一實(shí)施方式中，復(fù)制被降低99%。 在另一實(shí)施方式中，復(fù)制被降低超過99%。
確定HSV復(fù)制和HSV感染程度的方法是本領(lǐng)域熟知的，并可參見例如， Lambiase A et al. (Topical treatment with nerve growth factor in an animal model of herpetic keratitis. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 2007 May 4)、 Ramaswamy M et al. (Interactions and management issues in HSV and HIV coinfection. Expert Rev Anti Infect Ther. 2007 Apr; 5(2):23 l誦43)禾卩Jiang C et al. (Mutations that decrease DNA binding of the processivity factor of the herpes simplex virus DNA polymerase reduce viral yield, alter the kinetics of viral DNA replication, and decrease the fidelity of DNA replication. J Virol. 2007 Apr;81(7):3495-502)。每一方法代表了本發(fā)明的一個單獨(dú)的實(shí)施方式。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供降低對象的HSV介導(dǎo)的皰疹性眼病的發(fā) 生率的方法，所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。在另一實(shí) 施方式中，本發(fā)明提供治療對象的HSV-1角膜感染或皰疹角膜炎的方法，所 述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。在另一實(shí)施方式中，本發(fā) 明提供降低對象的HSV-1角膜感染或皰疹角膜炎的發(fā)生率的方法，所述方法 包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。
用于確定皰疹性眼病、角膜感染、皰疹角膜炎的存在和程度的方法是本 領(lǐng)域熟知的，并可參見例如，Labetoulle M et al. (Neuronal propagation of HSVl from the oral mucosa to the eye. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2000 Aug; 41(9):2600-6)禾口 Majumdar S et al (Dipeptide monoester ganciclovir prodrugs for treating HSV-1-induced corneal epithelial and stromal keratitis: in vitro and in vivo evaluations. J Ocul Pharmacol Ther. 2005 Dec; 21(6):463-74)。每一方法代 表了本發(fā)明的一個單獨(dú)的實(shí)施方式。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供用于治療、壓制或抑制HSV生殖道感染 的方法，所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。在另一實(shí)施方 式中，本發(fā)明提供用于治療、壓制或抑制復(fù)發(fā)性HSV感染的任何表現(xiàn)的方法， 所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供降低對象的HSV介導(dǎo)的生殖道潰瘍疾病 的發(fā)生率的方法，所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。在另 一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供阻止對象發(fā)生潛伏HSV感染的方法，所述方法包 括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供降低對象的HSV介導(dǎo)的腦炎的發(fā)生率的 方法，所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法所治療或預(yù)防的皰疹介導(dǎo)的腦炎是局 灶皰疹性腦炎。在另一實(shí)施方式中，所述皰疹介導(dǎo)的腦炎是新生兒皰疹性腦 炎。在另一實(shí)施方式中，所述皰疹介導(dǎo)的腦炎是本領(lǐng)域己知的任何其他類型 的皰疹介導(dǎo)的腦炎。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供治療對象的HSV介導(dǎo)的腦炎相關(guān)性或繼 發(fā)性疾病、疾患或癥狀或降低其發(fā)生率的方法，所述方法包括給所述對象施 用本發(fā)明的疫苗的步驟。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供治療對象的單純皰疹病毒(HSV) 感染、降低其發(fā)病、改善其癥狀、改善其繼發(fā)癥狀、降低其發(fā)生率、延長到 其復(fù)發(fā)的潛伏期的方法，包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。
根據(jù)本發(fā)明的任一方法，在一個實(shí)施方式中，所述對象是人。在另一實(shí) 施方式中，所述對象是鼠，在一個實(shí)施方式中，其是小鼠，而在另一實(shí)施方 式中，其是大鼠。在另一實(shí)施方式中，所述對象是犬、貓、牛、羊或豬。在 另一實(shí)施方式中，所述對象是哺乳動物。在另一實(shí)施方式中，所述對象是任 何易于被HSV感染的生物體。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供保護(hù)對象免于人類對象形成帶狀皰疹樣 病灶或類似爆發(fā)的方法。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供抑制人類對象形成 HSV帶狀皰疹樣病灶或類似爆發(fā)的方法。
在一個實(shí)施方式中，"帶狀皰疹樣"指的是HSV感染、尤其是再活化感染 過程中的皮膚病灶特征，在一個實(shí)施方式中，其起初為皮疹，然后在節(jié)皮區(qū) (dermatome)附近分布，通常以條狀或帶狀形式出現(xiàn)。在一個實(shí)施方式中，所 述皮疹演變?yōu)樾∷捇虺錆M漿液的小的大水皰。在一個實(shí)施方式中，小鼠因 接觸HSV之后形成帶狀皰疹樣病灶。在另一實(shí)施方式中，人因接觸HSV之 后形成帶狀皰疹樣病灶。在一個實(shí)施方式中，"帶狀皰疹樣播散"指的是HSV 感染從神經(jīng)節(jié)播散至節(jié)皮區(qū)內(nèi)的繼發(fā)肌膚部位。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語 指的是在與最初感染部位相同的節(jié)皮區(qū)內(nèi)播散。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語 指的是本領(lǐng)域己知的"帶狀皰疹樣播散"的任何其他定義。在另一實(shí)施方式中， "爆發(fā)"指的是疾病癥狀或疾病的播散或流行的突然增加，且在一個實(shí)施方式 中，指的是帶狀皰疹樣病灶突然增加，而在另一實(shí)施方式中，"爆發(fā)"指的是帶 狀皰疹樣病灶突然出現(xiàn)皮疹。
在一個實(shí)施方式中，本發(fā)明提供阻止對象形成節(jié)皮區(qū)病變或類似情況的 方法。在一個實(shí)施方式中，因接觸HSV之后形成節(jié)皮區(qū)病灶。在另一實(shí)施方 式中，當(dāng)神經(jīng)節(jié)中潛伏的病毒再次活化時最常出現(xiàn)節(jié)皮區(qū)病灶，而在一個實(shí) 施方式中，沿神經(jīng)向下播散，在一個實(shí)施方式中，引起反復(fù)感染。
應(yīng)該理解，本發(fā)明的方法可用于治療、抑制、壓制因?qū)ο蟊┞队贖SV之 后的HSV感染或與這種感染相關(guān)的原發(fā)或繼發(fā)癥狀。在另一實(shí)施方式中，所 述對象在免疫接種之前已經(jīng)被HSV感染。在另一實(shí)施方式中，所述對象是處 于發(fā)生HSV感染的風(fēng)險(xiǎn)中。在另一實(shí)施方式中，無論免疫接種時對象是否已經(jīng)感染HSV，通過本發(fā)明的方法進(jìn)行免疫接種均可有效治療、抑制、壓制HSV
感染或與這種感染相關(guān)的原發(fā)或繼發(fā)癥狀。
在一個實(shí)施方式中，"治療"指的是治療或預(yù)防或防止措施，其目的是預(yù)防 或減輕所針對的上述疾病狀態(tài)或疾患。因此，在一個實(shí)施方式中，治療可包 括直接影響或治愈、壓制、抑制、預(yù)防所述疾病、疾患、病變、或減輕其嚴(yán) 重程度、延緩其發(fā)作、減輕其相關(guān)癥狀、或其組合，等等。因此，在一個實(shí) 施方式中，"治療"指的是延緩進(jìn)展、加速緩解、誘導(dǎo)緩解、促進(jìn)緩解、加快恢 復(fù)、增強(qiáng)各種治療劑的效力或降低對各種治療劑的抗藥性、或其組合，等等。 在一個實(shí)施方式中，"預(yù)防"指的是延緩癥狀出現(xiàn)、預(yù)防疾病復(fù)發(fā)、降低復(fù)發(fā)數(shù) 量或頻率、延長癥狀發(fā)作期之間的潛伏期、或其組合，等等。在一個實(shí)施方 式中，"壓制"或"抑制"指的是減輕癥狀嚴(yán)重程度、減輕急性發(fā)作的嚴(yán)重程度、 減少癥狀的數(shù)量、降低疾病相關(guān)癥狀的發(fā)生率、減少潛伏癥狀、改善癥狀、 減少繼發(fā)癥狀、減少繼發(fā)感染、延長患者生存、或其組合，等等。
在一個實(shí)施方式中，癥狀是原發(fā)性的，而在另一實(shí)施方式中，癥狀是繼 發(fā)性的。在一個實(shí)施方式中，"原發(fā)"指的是直接由對象感染病毒所致的癥狀， 在一個實(shí)施方式中，"繼發(fā)"指的是原發(fā)因素引起的或?qū)е碌陌Y狀。在一個實(shí)施
方式中，用于本發(fā)明的所述組合和毒株治療HSV感染相關(guān)性原發(fā)或繼發(fā)癥狀 或繼發(fā)的并發(fā)癥。
在另一實(shí)施方式中，"癥狀"可以是HSV感染的任何表現(xiàn)，包括大水皰、
潰瘍、或女性的尿道、宮頸、大腿、禾n/或肛門處的病變以及男性的陰莖、尿
道、陰囊、大腿和肛門處的病變、炎癥、腫脹、發(fā)熱、流感樣癥狀、口腔疼 痛、咽喉疼痛、咽炎、疼痛、舌頭、口唇的大水皰、潰瘍、唇皰疹(cold sores)、 頸部疼痛、淋巴結(jié)腫大、發(fā)紅、出血、搔癢、排尿困難、頭痛、肌痛、或其組合。
在另一實(shí)施方式中，所述疾病、疾患、或癥狀是發(fā)熱。在另一實(shí)施方式 中，所述疾病、疾患、或癥狀是頭痛。在另一實(shí)施方式中，所述疾病、疾患、 或癥狀是頸強(qiáng)直。在另一實(shí)施方式中，所述疾病、疾患、或癥狀是癲癇發(fā)作。 在另一實(shí)施方式中，所述疾病、疾患、或癥狀是部分癱瘓。在另一實(shí)施方式 中，所述疾病、疾患、或癥狀是木僵。在另一實(shí)施方式中，所述疾病、疾患、 或癥狀是昏迷。在另一實(shí)施方式中，所述疾病、疾患、或癥狀是本領(lǐng)域已知 的任何其他皰疹介導(dǎo)的腦炎相關(guān)性或繼發(fā)性疾病、疾患或癥狀。確定皰疹介導(dǎo)的腦炎的存在和嚴(yán)重程度的方法是本領(lǐng)域熟知的，并可參
見例如，Bonkowsky JL et al. (Herpes simplex virus central nervous system relapse during treatment of infantile spasms with corticotropin. Pediatrics. 2006 May; 1 17(5》el045-8)禾口 Khan OA, et al. (Herpes encephalitis presenting as mild aphasia: case report. BMC Fam Pract. 2006 Mar 24; 7:22)。每一方法代表了本發(fā)明的一個 單獨(dú)的實(shí)施方式。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供治療與對象的HSV感染有關(guān)的疾病、疾 患或癥狀或降低其發(fā)生率的方法，所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的疫 苗的步驟。
在另一實(shí)施方式中，所述繼發(fā)于HSV感染的疾病、疾患、或癥狀是口腔 病變。在另一實(shí)施方式中，所述疾病、疾患、或癥狀是生殖道病變。在另一 實(shí)施方式中，所述疾病、疾患、或癥狀是口腔潰瘍。在另一實(shí)施方式中，所 述疾病、疾患、或癥狀是生殖道潰瘍。在另一實(shí)施方式中，所述疾病、疾患、 或癥狀是發(fā)熱。在另一實(shí)施方式中，所述疾病、疾患、或癥狀是頭痛。在另 一實(shí)施方式中，所述疾病、疾患、或癥狀是肌痛。在另一實(shí)施方式中，所述 疾病、疾患、或癥狀是腹股溝區(qū)淋巴結(jié)腫大。在另一實(shí)施方式中，所述疾病、 疾患、或癥狀是排尿疼痛。在另一實(shí)施方式中，所述疾病、疾患、或癥狀是 陰道排出物。在另一實(shí)施方式中，所述疾病、疾患、或癥狀是發(fā)水皰。在另 一實(shí)施方式中，所述疾病、疾患、或癥狀是流感樣不適。在另一實(shí)施方式中， 所述疾病、疾患、或癥狀是角膜炎。在另一實(shí)施方式中，所述疾病、疾患、 或癥狀是皰疹性甲溝炎。在另一實(shí)施方式中，所述疾病、疾患、或癥狀是貝 爾麻痹。在另一實(shí)施方式中，所述疾病、疾患、或癥狀是皰疹性多形紅斑。 在另一實(shí)施方式中，所述疾病、疾患、或癥狀是腰背部癥狀(例如麻木、臀部 或肛周區(qū)域發(fā)麻、尿潴留、便秘和陽痿)。在另一實(shí)施方式中，所述疾病、疾 患、或癥狀是局部皰疹性濕疹。在另一實(shí)施方式中，所述疾病、疾患、或癥 狀是播散性皰疹性濕疹。在另一實(shí)施方式中，所述疾病、疾患、或癥狀是外 傷性皰疹。在另一實(shí)施方式中，所述疾病、疾患、或癥狀是皰疹性須瘡。在 另一實(shí)施方式中，所述疾病、疾患、或癥狀是食道癥狀(例如吞咽困難或燒心、 吞咽時喉部壓榨性疼痛、體重下降、吞咽時上胸部或胸骨后疼痛)。在另一實(shí) 施方式中，所述疾病、疾患、或癥狀是本領(lǐng)域己知的任何其他疾病、疾患或 癥狀。每一疾病、疾患和癥狀代表了本發(fā)明的一個單獨(dú)的實(shí)施方式。因此，在一個實(shí)施方式中，本發(fā)明的組合物和方法本身治療、壓制、抑 制感染、或降低其發(fā)生率，而在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的組合物和方法治 療、壓制、抑制感染的原發(fā)癥狀、或降低其發(fā)生率，而在另一實(shí)施方式中， 本發(fā)明的組合物和方法治療、壓制、抑制感染的繼發(fā)癥狀、或降低其發(fā)生率。 應(yīng)該理解，本發(fā)明的組合物和方法可影響所述感染、感染引起的原發(fā)癥狀和 感染相關(guān)性繼發(fā)癥狀的任何組合。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物治療或改善的HSV感染是生 殖器HSV感染。在另一實(shí)施方式中，所述HSV感染是口腔HSV感染。在另 一實(shí)施方式中，所述HSV感染是眼HSV感染。在另一實(shí)施方式中，所述HSV 感染是皮膚HSV感染。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供降低對象的播散性HSV感染的發(fā)生率的 方法，所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供降低對象后代的新生兒HSV感染的發(fā)生 率的方法，所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供降低HSV感染從對象傳播給其后代的方 法，所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。
在另一實(shí)施方式中，所述后代是嬰兒。在另一實(shí)施方式中，所述被降低 或抑制的傳播是分娩過程中的傳播。在另一實(shí)施方式中，降低或抑制哺乳過 程中的傳播。在另一實(shí)施方式中，所述被降低或抑制的傳播是本領(lǐng)域已知的 任何其他類型的母嬰傳播。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供降低對象后代的新生兒HSV感染的嚴(yán)重 程度的方法，所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。
在一個實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種在感染HIV的對象中治療、壓制、 抑制HSV感染或降低HSV感染的發(fā)生率的方法，所述方法包括給所述對象 施用疫苗的步驟，所述疫苗包含(a)重組HSV gC蛋白或其片段；(b)重組 HSVgE蛋白或其片段；和(c)佐劑。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種在 感染HIV的對象中治療、壓制、抑制HSV感染或降低HSV感染的發(fā)生率的 方法，所述方法包括給所述對象施用疫苗的步驟，所述疫苗包含(a)重組 HSVgC蛋白或其片段，其中所述片段包含其C3b結(jié)合結(jié)構(gòu)域、其備解素干擾 結(jié)構(gòu)域、其C5干擾結(jié)構(gòu)域、或所述C3b結(jié)合結(jié)構(gòu)域、備解素干擾結(jié)構(gòu)域、或 C5干擾結(jié)構(gòu)域的片段；(b)重組HSV gE蛋白或其片段，其中所述片段包含AA 24-409或其片段;和(c)佐劑。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供治療感染了 HIV的對象的HSV感染的方 法，所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。在另一實(shí)施方式中， 本發(fā)明提供壓制感染了 HIV的對象的HSV感染的方法，所述方法包括給所述 對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供抑制感染了 HIV的對象的HSV感染的方法，所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗 的步驟。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供降低感染了fflV的對象的HSV感染 的發(fā)生率的方法，所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。在另 一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供預(yù)防HIV感染的方法，所述方法包括給所述對象 施用本發(fā)明的HSV疫苗的步驟。在一個實(shí)施方式中，HSV感染增加HIV感 染的風(fēng)險(xiǎn)，而保護(hù)對象免于HSV感染降低HIV感染的風(fēng)險(xiǎn)。因此，在一個實(shí) 施方式中，本發(fā)明提供降低HIV感染風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括給所述對象 施用本發(fā)明的疫苗的步驟。
在一個實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法所使用的疫苗引發(fā)針對HSV的免疫應(yīng) 答。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法所使用的疫苗引發(fā)針對HSV-1的免疫 應(yīng)答。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法所使用的疫苗引發(fā)針對HSV-2的免 疫應(yīng)答。在另一實(shí)施方式中，所述疫苗包含重組gD和gC蛋白。在另一實(shí)施 方式中，所述疫苗包含重組gE和gD蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述疫苗包 含重組gC和gE蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述疫苗包含重組gE、 gD和gC 蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述疫苗包含重組gE、 gD或gC蛋白。在另一實(shí) 施方式中，所述重組蛋白是HSV-1蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述重組蛋白 是HSV-2蛋白。在另一實(shí)施方式中，所述蛋白保護(hù)HSV-1和HSV-2蛋白兩 者。
應(yīng)該理解，在一個實(shí)施方式中，根據(jù)本文所述的任一實(shí)施方式的對象可 以是感染HSV的對象，或在另一實(shí)施方式中，其易于感染HSV。在一個實(shí)施 方式中，對象可以是感染至少一種其他病原體的對象，或在另一實(shí)施方式中， 其易于感染至少一種其他病原體。在一個實(shí)施方式中，對象可以是免疫受損 的對象。在一個實(shí)施方式中，所述對象感染了 HSV，而在另一實(shí)施方式中， 所述對象具有感染HSV的風(fēng)險(xiǎn)，在一個實(shí)施方式中，其是新生兒對象，在另 一實(shí)施方式中，是免疫受損的對象，在另一實(shí)施方式中，是老年對象，而在 另一實(shí)施方式中，是免疫受損的新生兒或免疫受損的老年對象。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的組合物或疫苗及其相關(guān)用途可壓制、抑制、 預(yù)防或治療對象的HIV感染。在一個實(shí)施方式中，本發(fā)明的組合物或疫苗及 其相關(guān)用途可治療HIV感染的繼發(fā)并發(fā)癥，在一個實(shí)施方式中，所述并發(fā)癥 是機(jī)會性感染、腫瘤、神經(jīng)系統(tǒng)異常、或進(jìn)行性免疫損害。在另一實(shí)施方式
中，所述方法包括治療獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)。在另一實(shí)施方式中， 所述方法包括治療CD4+ T淋巴細(xì)胞數(shù)量下降。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供減少HIV-1傳播至后代的方法，所述方 法包括給對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。本領(lǐng)域已知，HSV-2感染增加HIV-1 病毒在生殖道分泌物中的脫落(Nagot N et al., Reduction of HIV-1 RNA levels with therapy to suppress herpes simplex virus. N Engl J Med. 2007 Feb 22; 356(8):790-9)。因此，本發(fā)明的抑制HSV-2感染的方法也有效減少HIV-1傳 播至后代。在另一實(shí)施方式中，所述突變體HSV毒株是HSV-1毒株。在另一 實(shí)施方式中，所述突變體HSV毒株是HSV-2毒株。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供減少HIV-1傳播給性伴侶的方法，所述 方法包括給對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。本領(lǐng)域已知，HSV-2感染增加 HIV-1病毒在生殖道分泌物中的脫落。因此，本發(fā)明的抑制HSV-2感染的方 法也有效減少HIV-1傳播給性伴侶。在另一實(shí)施方式中，所述突變體HSV毒 株是HSV-1毒株。在另一實(shí)施方式中，所述突變體HSV毒株是HSV-2毒株。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供降低對HIV-1的易感性的方法，所述方 法包括給對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。本領(lǐng)域已知，HSV-2感染增加HIV-1 復(fù)制(Ouedraogo A et al， Impact of suppressive herpes therapy on genital HTV-1 RNA among women taking antiretroviral therapy: a randomized controlled trial. AIDS. 2006 Nov 28;20(18):2305-13)。因此，本發(fā)明的抑制HSV-2感染的方法 也有效降低對HIV-1的易感性。在另一實(shí)施方式中，所述突變體HSV毒株是 HSV-1毒株。在另一實(shí)施方式中，所述突變體HSV毒株是HSV-2毒株。
因此，在一個實(shí)施方式中，本發(fā)明提供抑制感染HIV的對象的原發(fā)性HSV 感染的方法，包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。在另一實(shí)施方式中， 本發(fā)明提供治療感染HIV的對象的HSV感染或降低其發(fā)生率的方法，包括給 所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供抑制感 染HIV的對象的原發(fā)性HSV感染之后的潮紅、復(fù)發(fā)或HSV唇皰疹的方法， 所述方法包括給所述對象施用本發(fā)明的疫苗的步驟。在一個實(shí)施方式中，施用本發(fā)明的疫苗引發(fā)抗HSV免疫應(yīng)答。
應(yīng)該理解，在一個實(shí)施方式中，根據(jù)本文所述的任一實(shí)施方式的對象可
以是感染Hiv的對象，或在另一實(shí)施方式中，其易于感染mv。在另一實(shí)施
方式中，根據(jù)本文所述的任一實(shí)施方式的對象是HIV陽性對象。在一個實(shí)施
方式中，本發(fā)明的組合物或疫苗及其相關(guān)用途可壓制、抑制、預(yù)防或治療感
染HIV的對象的HSV感染。在一個實(shí)施方式中，所述感染HIV的對象的CD4 T-細(xì)胞計(jì)數(shù)可低于200/^1，在另一實(shí)施方式中，所述感染HIV的對象的CD4 T-細(xì)胞計(jì)數(shù)可在200-5004d之間，或在另一實(shí)施方式中，所述感染HIV的對象 的CD4T-細(xì)胞計(jì)數(shù)高于500/^11。在一個實(shí)施方式中，感染HIV的對象具有高 溶血性血清補(bǔ)體(CH50)水平，而在另一實(shí)施方式中，感染HIV的對象具有低 CH50水平。
在一個實(shí)施方式中，感染fflV的對象可通過特征性的癥狀和/或病理學(xué)被 鑒定，且在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的疫苗和方法可緩解與HIV感染相關(guān)的 一或多種癥狀和/或病理學(xué)。在一個實(shí)施方式中，與HIV感染或病理學(xué)(例如， 疾病)有關(guān)的或其導(dǎo)致的癥狀非限制性的實(shí)例包括發(fā)熱、乏力、頭痛、咽痛、 淋巴結(jié)腫大、體重下降、皮疹、布、疣、鵝口瘡、帶狀皰疹、慢性或急性盆 腔炎性疾病(PID)、咳嗽和氣短、癲癇發(fā)作和協(xié)調(diào)性差、吞咽困難或疼痛、神 經(jīng)心理學(xué)癥狀例如意識模糊和健忘、嚴(yán)重和持續(xù)腹瀉、發(fā)熱、視力下降、惡 心、腹部絞痛、和嘔吐、昏迷、干咳、挫傷、出血、麻木或癱瘓、肌無力、 機(jī)會性疾病、神經(jīng)損害、腦病、癡呆和死亡。在另一實(shí)施方式中，所述對象 還可易于發(fā)生各種癌癥，特別是那些由病毒引起的癌癥，例如Kaposi肉瘤和 宮頸癌或淋巴瘤。
在另一實(shí)施方式中，與HIV感染或病理學(xué)有關(guān)的或由其導(dǎo)致的病理學(xué)的 非限制性的實(shí)例包括機(jī)會性感染(例如細(xì)菌、病毒、真菌和寄生蟲感染)，例如 支氣管、氣管、肺或食道的煙曲霉菌病、念珠菌病、白色念珠菌病、宮頸癌、 球孢菌病、隱球菌病、新型隱球菌病、隱孢子蟲病、桿菌性血管瘤病、巨細(xì) 胞病毒(CMV)、巨細(xì)胞病毒視網(wǎng)膜炎、皰疹病毒、肝炎病毒、乳頭瘤病毒、 組織胞漿菌病、等孢子球蟲病、Kaposi肉瘤、Burkitt淋巴瘤、免疫母細(xì)胞淋 巴瘤、鳥分枝桿菌病、結(jié)核分枝桿菌病、卡氏肺囊蟲肺炎、進(jìn)行性多病灶腦 白質(zhì)病(PML)、沙門氏菌病、弓形蟲病、消耗綜合征和淋巴樣間質(zhì)性肺炎/肺 淋巴結(jié)型。HIV感染或病理學(xué)的其他癥狀和病理學(xué)(例如，疾病)是本領(lǐng)域己知的，且本發(fā)明提供了對它們的治療。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的疫苗引發(fā)抗gC中和抗體。在另一實(shí)施方 式中，所述抗體能夠抑制玫瑰花結(jié)形成。在另一實(shí)施方式中，所述抗體抑制 玫瑰花結(jié)形成。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的疫苗引發(fā)的免疫應(yīng)答相對于僅含有g(shù)D的疫
苗是增強(qiáng)的。在另一實(shí)施方式中，使用本發(fā)明的佐劑能夠增強(qiáng)抗gD免疫應(yīng)答。 在另一實(shí)施方式中，通過將gD與誘導(dǎo)阻斷gC的免疫逃避功能的抗體的gC 免疫原相組合能夠增強(qiáng)抗gD免疫應(yīng)答。在另一實(shí)施方式中，通過將gD與本 發(fā)明的佐劑和誘導(dǎo)阻斷gC的免疫逃避功能的抗體的gC免疫原這兩者相組合 可進(jìn)一步增強(qiáng)抗gD免疫應(yīng)答。
在一個實(shí)施方式中，gC遮蔽了中和抗體所針對的病毒糖蛋白上的表位。 在另一實(shí)施方式中，gE遮蔽了中和抗體所針對的病毒糖蛋白上的表位。
在另一實(shí)施方式中，使用本發(fā)明的佐劑能夠增強(qiáng)抗HSV免疫應(yīng)答。在另 一實(shí)施方式中，通過將gD與誘導(dǎo)阻斷gC的免疫逃避功能的抗體的gC免疫 原相組合能夠增強(qiáng)抗HSV免疫應(yīng)答。在另一實(shí)施方式中，通過將gD與本發(fā) 明的佐劑和誘導(dǎo)阻斷gC的免疫逃避功能的抗體的gC免疫原這兩者相組合能 夠進(jìn)一步增強(qiáng)抗HSV免疫應(yīng)答。
在另一實(shí)施方式中，通過將gD與誘導(dǎo)阻斷gE的免疫逃避功能的抗體的 gE免疫原相組合能夠增強(qiáng)抗gD免疫應(yīng)答。在另一實(shí)施方式中，通過將gD與 本發(fā)明的佐劑和誘導(dǎo)阻斷gE的免疫逃避功能的抗體的gE免疫原這兩者相組 合能夠進(jìn)一步增強(qiáng)抗gD免疫應(yīng)答。
在另一實(shí)施方式中，通過將gD與誘導(dǎo)阻斷gE的免疫逃避功能的抗體的 gE免疫原相組合能夠增強(qiáng)抗HSV免疫應(yīng)答。在另一實(shí)施方式中，通過將gD 與本發(fā)明的佐劑和誘導(dǎo)阻斷gE的免疫逃避功能的抗體的gE免疫原這兩者相 組合能夠進(jìn)一步增強(qiáng)抗HSV免疫應(yīng)答。
在另一實(shí)施方式中，通過將gD與誘導(dǎo)阻斷gE的免疫逃避功能的抗體的 gE免疫原以及誘導(dǎo)阻斷gC的免疫逃避功能的抗體的gC免疫原這兩者相組合 能夠進(jìn)一步增強(qiáng)抗gD免疫應(yīng)答。在另一實(shí)施方式中，通過將gD與(a)本發(fā)明 的佐劑、(b)誘導(dǎo)阻斷gE的免疫逃避功能的抗體的gE免疫原以及(c)誘導(dǎo)阻斷 gC的免疫逃避功能的抗體的gC免疫原相組合能夠進(jìn)一步增強(qiáng)抗gD免疫應(yīng) 答。在另一實(shí)施方式中，通過將gD與誘導(dǎo)阻斷gE的免疫逃避功能的抗體的 gE免疫原以及誘導(dǎo)阻斷gC的免疫逃避功能的抗體的gC免疫原這兩者相組合 能夠進(jìn)一步增強(qiáng)抗HSV免疫應(yīng)答。在另一實(shí)施方式中，通過將gD與(a)本發(fā) 明的佐劑、(b)誘導(dǎo)阻斷gE的免疫逃避功能的抗體的gE免疫原以及(c)誘導(dǎo)阻 斷gC的免疫逃避功能的抗體的gC免疫原相組合能夠進(jìn)一步增強(qiáng)抗HSV免疫 應(yīng)答。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物的中所用的重組HSV gD蛋 白的劑量是20微克/接種。在一個實(shí)施方式中，"蛋白質(zhì)"指的是重組HSV糖 蛋白，或在另一實(shí)施方式中，指的是它的片段。在另一實(shí)施方式中，所述劑 量是10微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30微克/接種。在另一實(shí) 施方式中，所述劑量是25微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是22微 克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是18微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是16微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是15微克/接種。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量是14微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是 13微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是12微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是11微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是10微克/ 接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是9微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是8微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是7微克/接種。在另一 實(shí)施方式中，所述劑量是6微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5微 克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是4微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是3微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2微克/接種。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是1.5微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是l 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量小于l微克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是10納克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是25納克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50納克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是100納克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是150納克/接種。在另一實(shí) 施方式中，所述劑量是200納克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是250 納克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是300納克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是400納克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是500納克/ 接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是750納克/接種。
在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.1微克/kg體重(每次接種)。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.2微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.15微 克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.13微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是0.12微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是O.ll微克/kg。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是0.09微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.08 微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.07微克/kg。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是0.06微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.05微克/kg。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.04微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是 0.03微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.02微克/kg。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是低于0.02微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是500納克 /kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是1.25微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述 劑量是2.5微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5微克/kg。在另一實(shí)施 方式中，所述劑量是10微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是12.5微克/kg。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是l-2微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是2-3微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2-4微克/接種。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量是3-6微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是4-8微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5-10微克/接種。在另一實(shí) 施方式中，所述劑量是5-15微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是10-20 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是20-30微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是30-40微克/蛋白/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是40-60 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2-50微克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是3-50微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5-50微克/ 接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是8-50微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是10-50微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是20-50微克/接 種。
在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.01-0.02微克/kg體重(每次注射)。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是0.02-0.03微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是0.02-0.04微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.03-0.06微克/kg。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.04-0.08微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑 量是0.05-0.1微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.05-0.15微克/kg。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.1-0.2微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是0.2-0.3微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.3-0.4微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.4-0.6微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是 0.5-0.8微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.8-1微克/kg。
在另一實(shí)施方式中，通過從動物研究推定出人的數(shù)據(jù)而確定用于人類免 疫接種的gD蛋白的劑量。在另一實(shí)施方式中，通過使用在人與小鼠的對比研 究中發(fā)現(xiàn)的有效的蛋白比率而確定gD蛋白的劑量。在另一實(shí)施方式中，所述 比率是1:400 (本申請實(shí)施例中所用的gD-l蛋白與人類免疫接種所采用的 gD-2之間的比率)。在另一實(shí)施方式中，所述比率是1:100。在另一實(shí)施方式 中，所述比率是1:150。在另一實(shí)施方式中，所述比率是1:300。在另一實(shí)施 方式中，所述比率是1:500。在另一實(shí)施方式中，所述比率是1:600。在另一 實(shí)施方式中，所述比率是1:700。在另一實(shí)施方式中，所述比率是1:800。在 另一實(shí)施方式中，所述比率是1:900。在另一實(shí)施方式中，所述比率是1:1000。 在另一實(shí)施方式中，所述比率是1:1200。在另一實(shí)施方式中，所述比率是 1:1500。在另一實(shí)施方式中，所述比率是1:2000。在另一實(shí)施方式中，所述比 率是1:3000。在另一實(shí)施方式中，所述比率是1:4000。在另一實(shí)施方式中， 經(jīng)驗(yàn)性確定用于人類免疫接種的gD蛋白的劑量。在另一實(shí)施方式中，所述比 率是1:5000。
在另一實(shí)施方式中，總重組gD蛋白(gD-l蛋白和gD-2蛋白)的劑量是上 述量之一。在另一實(shí)施方式中，采用本發(fā)明的佐劑能夠獲得較低的gD的有效 劑量。在另一實(shí)施方式中，通過將gD與誘導(dǎo)阻斷gC的免疫逃避功能的抗體 的gC免疫原相組合，能夠獲得較低的gD的有效劑量。在另一實(shí)施方式中， 通過將gD與本發(fā)明的佐劑和誘導(dǎo)阻斷gC的免疫逃避功能的抗體的gC免疫 原這兩者相組合，能夠獲得更為較低的gD的有效劑量。
在另一實(shí)施方式中，通過將gD與誘導(dǎo)阻斷gE的免疫逃避功能的抗體的 gE免疫原相組合，能夠獲得較低的gD的有效劑量(例如，在人類每劑需要IO 微克，而非20微克)。在另一實(shí)施方式中，需要15微克，而非20微克。在另 一實(shí)施方式中，需要12微克，而非20微克。在另一實(shí)施方式中，需要8微 克，而非20微克。在另一實(shí)施方式中，需要7微克，而非6微克。在另一實(shí) 施方式中，需要5微克，而非20微克。在另一實(shí)施方式中，需要3微克，而 非20微克。在另一實(shí)施方式中，所述需要量的降低是在此所述的任何量。
在另一實(shí)施方式中，通過將gD與本發(fā)明的佐劑和誘導(dǎo)阻斷gE的免疫逃 避功能的抗體的gE免疫原這兩者相組合能夠獲得較低的gD的有效劑量。在另一實(shí)施方式中，通過將gD與誘導(dǎo)阻斷gE的免疫逃避功能的抗體的
gE免疫原和誘導(dǎo)阻斷gC的免疫逃避功能的抗體的gC免疫原這兩者相組合能 夠獲得較低的gD的有效劑量。在另一實(shí)施方式中，通過將gD與(a)本發(fā)明的 佐劑、(b)誘導(dǎo)阻斷gE的免疫逃避功能的抗體的gE免疫原和(c)誘導(dǎo)阻斷gC 的免疫逃避功能的抗體的gC免疫原這兩者相組合能夠獲得更為較低的gD的 有效劑量。
在另一實(shí)施方式中，在本發(fā)明的初始免疫接種中使用上述gD劑量之一。 在另一實(shí)施方式中，上述gD劑量可指的是gD-l、 gD-2、或其組合的劑量。 每一可能性和每一劑量的gD代表了本發(fā)明的一個單獨(dú)的實(shí)施方式。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物的中所用的重組HSV gC蛋 白的劑量20微克/接種。在一個實(shí)施方式中，"蛋白質(zhì)"指的是重組HSV糖蛋 白，或在另一實(shí)施方式中，指的是它的片段。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是25微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30微克/接種。在另一實(shí)施 方式中，所述劑量是40微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50微克/ 接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是60微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是70微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是80微克/接種。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是90微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是 100微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是110微克/接種。在另一實(shí)施 方式中，所述劑量是100微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是120微 克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是130微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是140微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是150微克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是160微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑 量是170微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是180微克/接種。在另一 實(shí)施方式中，所述劑量是200微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是220 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是250微克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是270微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是300微克/ 接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是350微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是400微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是450微克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是500微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑 量是10微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30微克/接種。在另一實(shí) 施方式中，所述劑量是25微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是22微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是18微克/接種。在另一實(shí)施方式中，
所述劑量是16微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是15微克/接種。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量是14微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是 13微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是12微克/接種。在另一實(shí)施方 式中，所述劑量是11微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是10微克/ 接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是9微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是8微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是7微克/接種。在另一 實(shí)施方式中，所述劑量是6微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5微 克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是4微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是3微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2微克/接種。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是1.5微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是l 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.5微克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量小于1微克/接種。
在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.1微克/kg體重(每次接種)。在另一實(shí) 施方式中，所述劑量是0.2微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.15微 克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.13微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是0.12微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是O.ll微克/kg。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是0.09微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.08 微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.07微克/kg。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是0.06微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.05微克/kg。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.04微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是 0.03微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.02微克/kg。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量小于0.02微克/kg。
在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30-60微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是40-80微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50-100微克/ 接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50-150微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是100-200微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是200-300微 克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是300-400微克/蛋白/接種。在另一實(shí) 施方式中，所述劑量是1-2微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2-3 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2-4微克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是3-6微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是4-8微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5-10微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所
述劑量是5-15微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是10-20微克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是20-30微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述 劑量是30-40微克/蛋白/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是40-60微克/接 種。
在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.01-0.02微克/kg體重(每次注射)。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是0.02-0.03微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是0.02-0.04微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.03-0.06微克/kg。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.04-0.08微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑 量是0.05-0.1微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.05-0.15微克/kg。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.1-0.2微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是0.2-0.3微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.3-0.4微克/kg。在另一 實(shí)施方式中，所述劑量是0.4-0.6微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是 0.5-0.8微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.8-1微克/kg。
在另一實(shí)施方式中，通過從動物研究推定出人的數(shù)據(jù)而確定用于人類免 疫接種的gC蛋白的劑量。在另一實(shí)施方式中，通過使用在人與小鼠的對比研 究中發(fā)現(xiàn)的有效的蛋白比率而確定用于人類的所述劑量。在另一實(shí)施方式中， 所述比率是1:400。在另一實(shí)施方式中，所述比率是1:100。在另一實(shí)施方式 中，所述比率是1:150。在另一實(shí)施方式中，所述比率是1:300。在另一實(shí)施 方式中，所述比率是1:500。在另一實(shí)施方式中，所述比率是1:600。在另一 實(shí)施方式中，所述比率是1:700。在另一實(shí)施方式中，所述比率是1:800。在 另一實(shí)施方式中，所述比率是1:900。在另一實(shí)施方式中，所述比率是1:1000。 在另一實(shí)施方式中，所述比率是1:1200。在另一實(shí)施方式中，所述比率是 1:1500。在另一實(shí)施方式中，所述比率是1:2000。在另一實(shí)施方式中，所述比 率是1:3000。在另一實(shí)施方式中，所述比率是1:4000。在另一實(shí)施方式中， 經(jīng)驗(yàn)性確定用于人類免疫接種的gC蛋白的劑量。在另一實(shí)施方式中，所述比 率是1:5000。
在另一實(shí)施方式中，總重組gC蛋白(gC-l蛋白和gC-2蛋白)的劑量是上 述量之一。在另一實(shí)施方式中，釆用本發(fā)明的佐劑能夠獲得較低的總重組gC 蛋白的有效劑量。
在另一實(shí)施方式中，使用本發(fā)明的佐劑能夠獲得較低的gC的有效劑量。在另一實(shí)施方式中，通過將gC與誘導(dǎo)阻斷gE的免疫逃避功能的抗體的gE 免疫原相組合，能夠獲得較低的gC的有效劑量。在另一實(shí)施方式中，通過將
gC與本發(fā)明的佐劑和誘導(dǎo)阻斷gE的免疫逃避功能的抗體的gE免疫原這兩者 相組合，能夠獲得更為較低的gC的有效劑量。
在另一實(shí)施方式中，在本發(fā)明的初始免疫接種中使用上述gC劑量之一。 在另一實(shí)施方式中，上述gC劑量可指的是gC-l、 gC-2、或其組合的劑量。 每一可能性和每一劑量的gC代表了本發(fā)明的一個單獨(dú)的實(shí)施方式。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物的中所用的重組HSVgE蛋白 的劑量20微克/接種。在一個實(shí)施方式中，"蛋白質(zhì)"指的是重組HSV糖蛋白， 或在另一實(shí)施方式中，指的是它的片段。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是25 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30微克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是40微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50微克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是60微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是70微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是80微克/接種。在另一實(shí)施 方式中，所述劑量是90微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是100微克 /接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是110微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是100微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是120微克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是130微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑 量是140微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是150微克/接種。在另一 實(shí)施方式中，所述劑量是160微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是170 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是180微克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是200微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是220微克/ 接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是250微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是270微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是300微克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是350微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑 量是400微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是450微克/接種。在另一 實(shí)施方式中，所述劑量是500微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是IO 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30微克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是25微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是22微克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是18微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是16微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是15微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是14微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是13微克/
接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是12微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是ll微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是io微克/接種。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是9微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是8 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是7微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是6微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5微克/接種。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是4微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是3 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是1.5微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是l微克/接種。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量小于1微克/接種。
在另一實(shí)施方式中，所述劑量是O.l微克/kg體重(每次接種)。在另一實(shí) 施方式中，所述劑量是0.2微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.15微 克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.13微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是0.12微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是O.ll微克/kg。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是0.09微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.08 微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.07微克/kg。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是0.06微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.05微克/kg。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.04微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是 0.03微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.02微克/kg。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量小于0.02微克/kg。
在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30-60微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是40-80微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50-100微克/ 接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是50-150微克/接種。在另一實(shí)施方式中， 所述劑量是100-200微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是200-300微 克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是300-400微克/蛋白/接種。在另一實(shí) 施方式中，所述劑量是1-2微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2-3 微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是2-4微克/接種。在另一實(shí)施方式 中，所述劑量是3-6微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是4-8微克/接 種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是5-10微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所 述劑量是5-15微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是10-20微克/接種。 在另一實(shí)施方式中，所述劑量是20-30微克/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是30-40微克/蛋白/接種。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是40-60微克/接 種。
在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.01-0.02微克/kg體重(每次注射)。在另 一實(shí)施方式中，所述劑量是0.02-0.03微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是0.02-0.04微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.03-0.06微克/kg。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.04-0.08微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑 量是0.05-0.1微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.05-0.15微克/kg。在 另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.1-0.2微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量 是0.2-0.3微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.3-0.4微克/kg。在另一 實(shí)施方式中，所述劑量是0.4-0.6微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是 0.5-0.8微克/kg。在另一實(shí)施方式中，所述劑量是0.8-1微克/kg。
在另一實(shí)施方式中，通過從動物研究推定出人的數(shù)據(jù)而確定用于人類免 疫接種的gE蛋白的劑量。在另一實(shí)施方式中，通過使用在人與小鼠的對比研 究中發(fā)現(xiàn)的有效的蛋白比率而確定用于人類的所述劑量。在另一實(shí)施方式中， 所述比率是1:400。在另一實(shí)施方式中，所述比率是1:100。在另一實(shí)施方式 中，所述比率是1:150。在另一實(shí)施方式中，所述比率是1:300。在另一實(shí)施 方式中，所述比率是1:500。在另一實(shí)施方式中，所述比率是1:600。在另一 實(shí)施方式中，所述比率是1:700。在另一實(shí)施方式中，所述比率是1:800。在 另一實(shí)施方式中，所述比率是1:900。在另一實(shí)施方式中，所述比率是1:1000。 在另一實(shí)施方式中，所述比率是1:1200。在另一實(shí)施方式中，所述比率是 1:1500。在另一實(shí)施方式中，所述比率是1:2000。在另一實(shí)施方式中，所述比 率是1:3000。在另一實(shí)施方式中，所述比率是1:4000。在另一實(shí)施方式中， 經(jīng)驗(yàn)性確定用于人類免疫接種的gE蛋白的劑量。在另一實(shí)施方式中，所述比 率是1:5000。
在另一實(shí)施方式中，總重組gE蛋白(gE-l蛋白和gE-2蛋白)的劑量是上 述量之一。在另一實(shí)施方式中，采用本發(fā)明的佐劑能夠獲得較低的總重組gE 蛋白的有效劑量。
在另一實(shí)施方式中，使用本發(fā)明的佐劑能夠獲得較低的gE的有效劑量。 在另一實(shí)施方式中，通過將gE與誘導(dǎo)阻斷gC的免疫逃避功能的抗體的gC 免疫原相組合，能夠獲得較低的gE的有效劑量。在另一實(shí)施方式中，通過將 gE與本發(fā)明的佐劑和誘導(dǎo)阻斷gC的免疫逃避功能的抗體的gC免疫原這兩者相組合，能夠獲得更為較低的gE的有效劑量。
在另一實(shí)施方式中，在本發(fā)明的初始免疫接種中使用上述gE劑量之一。
在另一實(shí)施方式中，上述gE劑量可指的是gE-l、 gE-2、或其組合的劑量。每 一可能性和每一劑量的gE代表了本發(fā)明的一個單獨(dú)的實(shí)施方式。
在另一實(shí)施方式中，重組gE蛋白的劑量是上述量之一。在另一實(shí)施方式 中，使用本發(fā)明的佐劑能夠獲得較低的gE的有效劑量。在另一實(shí)施方式中， 通過將gE與誘導(dǎo)阻斷gC的免疫逃避功能的抗體的gC免疫原相組合，能夠 獲得較低的gE的有效劑量。在另一實(shí)施方式中，通過將gE與本發(fā)明的佐劑 和誘導(dǎo)阻斷gC的免疫逃避功能的抗體的gC免疫原這兩者相組合，能夠獲得 更為較低的gE的有效劑量。每一可能性和每一劑量的gE代表了本發(fā)明的一 個單獨(dú)的實(shí)施方式。
在另一實(shí)施方式中，糖蛋白的"有效劑量"指的是引發(fā)在后續(xù)攻擊過程中明 顯阻斷HSV病毒的免疫逃避功能的抗體所需的劑量。在另一實(shí)施方式中，該 術(shù)語指的是引發(fā)在后續(xù)攻擊過程中有效阻斷HSV病毒的免疫逃避功能的抗體 所需的劑量。在另一實(shí)施方式中，該術(shù)語指的是引發(fā)在后續(xù)攻擊過程中明顯 降低HSV病毒的感染性的抗體所需的劑量。
每一重組糖蛋白的每一劑量及其各種組合代表了本發(fā)明的一個單獨(dú)的實(shí) 施方式。
用于(例如在人類對象中)測定免疫原的劑量的方法是本領(lǐng)域熟知的，且包 括，例如，劑量升級試驗(yàn)。每一方法代表了本發(fā)明的一個單獨(dú)的實(shí)施方式。
在另一實(shí)施方式中，將本文所證實(shí)的策略用于另一種病毒和/或另一種病 原體。在另一實(shí)施方式中，使用聯(lián)合亞單位疫苗，其既含有在感染中起作用 的第一蛋白質(zhì)，也含有一種(多于一種)具有免疫逃避功能的第二蛋白質(zhì)，由此， 所述疫苗引發(fā)的針對所述第二蛋白質(zhì)的抗體阻斷免疫逃避功能。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供用于改進(jìn)現(xiàn)有的HSV-1疫苗的方法，所 述方法包括以下步驟(1)篩選能夠阻斷gC-l的免疫逃避特性的重組gC-l蛋 白與佐劑的組合；和(2)加入重組gD蛋白，并將所得疫苗與僅含有佐劑和 gD蛋白的疫苗進(jìn)行比較。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供用于改進(jìn)現(xiàn)有的HSV-1疫苗的方法，所 述方法包括以下步驟(1)篩選能夠阻斷gE-l的免疫逃避特性的重組gE-l蛋 白與佐劑的組合；禾口 (2)加入重組gD蛋白，并將所得疫苗與僅含有佐劑和gD蛋白的疫苗進(jìn)行比較。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供用于改進(jìn)現(xiàn)有的HSV-1疫苗的方法，所
述方法包括以下步驟(1)篩選能夠阻斷gC-l和gE-l的免疫逃避特性的重組
gC-l蛋白、重組gE-l蛋白和佐劑的組合；和(2)加入重組gD蛋白，并將所 得疫苗與僅含有佐劑和gD蛋白的疫苗進(jìn)行比較。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供用于改進(jìn)現(xiàn)有的HSV-2疫苗的方法，所 述方法包括以下步驟(1)篩選能夠阻斷gC-2的免疫逃避特性的重組gC-2蛋 白與佐劑的組合；和(2)加入重組gD蛋白，并將所得疫苗與僅含有佐劑和 gD蛋白的疫苗進(jìn)行比較。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供用于改進(jìn)現(xiàn)有的HSV-2疫苗的方法，所 述方法包括以下步驟(1)篩選能夠阻斷gE-2的免疫逃避特性的重組gE-2蛋 白與佐劑的組合；禾Q (2)加入重組gD蛋白，并將所得疫苗與僅含有佐劑和 gD蛋白的疫苗進(jìn)行比較。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供用于改進(jìn)現(xiàn)有的HSV-2疫苗的方法，所 述方法包括以下步驟(1)篩選能夠阻斷gC-2和gE-2的免疫逃避特性的重組 gC-2蛋白、重組gE-2蛋白和佐劑的組合；和(2)加入重組gD蛋白，并將所 得疫苗與僅含有佐劑和gD蛋白的疫苗進(jìn)行比較。
在一些實(shí)施方式中，任何本發(fā)明的HSV疫苗和用于本發(fā)明的方法的HSV 疫苗將包含本文所述的任何形式或?qū)嵤┓绞街械谋景l(fā)明的HSV蛋白或HSV 蛋白的組合。在一些實(shí)施方式中，任何所述HSV疫苗和用于所述方法的HSV 疫苗將由本文所述的任何形式或?qū)嵤┓绞街械谋景l(fā)明的HSV蛋白或HSV蛋 白的組合組成。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的HSV疫苗將基本上由本文所述 的任何形式或?qū)嵤┓绞街械谋景l(fā)明的HSV蛋白或HSV蛋白的組合組成。在 一些實(shí)施方式中，術(shù)語"包含"指的是包括其他重組HSV蛋白以及包括本領(lǐng)域 已知的其他蛋白質(zhì)。在一些實(shí)施方式中，術(shù)語"基本上由...組成"指的是具有特 定HSV蛋白或其片段的疫苗。不過，還可包括不直接參與HSV蛋白的使用 的其他肽。在一些實(shí)施方式中，術(shù)語"由...組成"指的是具有本文所述的任何形 式或?qū)嵤┓绞街械谋景l(fā)明的具體HSV蛋白或片段或HSV蛋白或片段的組合 的疫苗。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供用于治療HSV-1或其癥狀或表現(xiàn)的組合 物，所述組合物包含本發(fā)明的疫苗。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供用于治療HSV-2或其癥狀或表現(xiàn)的組合
物，所述組合物包含本發(fā)明的疫苗。
在本發(fā)明的方法的另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的疫苗僅施用一次。在另一
實(shí)施方式中，所述疫苗施用2次。在另一實(shí)施方式中，所述疫苗施用3次。 在另一實(shí)施方式中，所述疫苗施用4次。在另一實(shí)施方式中，所述疫苗施用 至少4次。在另一實(shí)施方式中，所述疫苗施用4次以上。在另一實(shí)施方式中， 所述疫苗被施用于分開的部位，其中將gD與gC或gE分開。在另一實(shí)施方 式中，所述疫苗以1周的間隔施用。在另一實(shí)施方式中，所述疫苗以2周的 間隔施用。在另一實(shí)施方式中，所述疫苗以3周的間隔施用。在另一實(shí)施方 式中，所述疫苗以4周的間隔施用。在另一實(shí)施方式中，所述疫苗以1個月 的間隔施用。
應(yīng)該理解，本發(fā)明的組合物/疫苗和方法同樣可用于非HSV皰疹病毒，在 一個實(shí)施方式中，所述非HSV皰疹病毒包含gD、 gE、或gC蛋白，在一個實(shí) 施方式中，它們與HSV-l的gD、 gE、或gC蛋白，或在另一實(shí)施方式中，與 HSV-2的gD、 gE、或gC蛋白具有70。/。的同源性，在另一實(shí)施方式中，具有 80°/。的同源性，在另一實(shí)施方式中，具有85%的同源性，在另一實(shí)施方式中， 具有90%的同源性，在另一實(shí)施方式中，具有95%的同源性，在另一實(shí)施方 式中，具有98%的同源性，而在另一實(shí)施方式中，具有100%的同源性。在一 個實(shí)施方式中，此類疫苗可用于壓制、抑制、預(yù)防、或治療癌癥，或在另一 實(shí)施方式中，可用于壓制、抑制、預(yù)防、或治療腫瘤。在一個實(shí)施方式中， 非HSV皰疹病毒包括水痘帶狀皰疹病毒(VZV)、 Epstein-Barr病毒(EBV)、 EBNA、巨細(xì)胞病毒(CMV)、和人皰疹病毒-6(HHV-6)。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的重組蛋白與本文前面給出的序列(無論是直 接給出還是引用GenBank登錄號)具有同源性。所述術(shù)語"同源性"、"同源"等， 當(dāng)其涉及任何蛋白或肽時，在一個實(shí)施方式中其指的是，在將序列對齊并在 必要時引入缺口以達(dá)到最大百分比同源性后，且不將保守性取代視為序列相 同性的一部分的情況下，候選序列上與相應(yīng)的天然多肽的殘基相同的AA殘 基的百分比。用于比對的方法和算法是本領(lǐng)域已知的。
在另一實(shí)施方式中，采用本領(lǐng)域熟知的方法通過用于序列比對的計(jì)算機(jī) 算法確定同源性。例如，核酸序列同源性的計(jì)算機(jī)算法分析包括使用已有的 任何軟件包，例如，BLAST、 DOMAIN、 BEAUTY (BLAST Enhanced AlignmentUtility)、 GENPEPT和TREMBL軟件包。
在另一實(shí)施方式中，"同源性"指的是與選自SEQIDNo:l-6的序列的相同 性大于70%。在另一實(shí)施方式中，"同源性"指的是與選自SEQIDNo:l-6的序 列的相同性大于72%。在另一實(shí)施方式中，"同源性"指的是與SEQIDNo:l-6 之一的相同性大于75%。在另一實(shí)施方式中，"同源性"指的是與選自SEQID No:l-6的序列的相同性大于78%。在另一實(shí)施方式中，"同源性"指的是與SEQ IDNo:l-6之一的相同性大于80%。在另一實(shí)施方式中，"同源性"指的是與SEQ IDNo:l-6之一的相同性大于82。/。。在另一實(shí)施方式中，"同源性"指的是與選 自SEQ ID No:l-6的序列的相同性大于83%。在另一實(shí)施方式中，"同源性" 指的是與SEQIDNo:l-6之一的相同性大于85n/。。在另一實(shí)施方式中，"同源 性"指的是與SEQ ID No:l-6之一的相同性大于87%。在另一實(shí)施方式中，" 同源性"指的是與選自SEQ ID No:l-6的序列的相同性大于88%。在另一實(shí)施 方式中，"同源性"指的是與SEQIDNo:l-6之一的相同性大于900/。。在另一實(shí) 施方式中，"同源性"指的是與SEQIDNo:l-6之一的相同性大于92%。在另一 實(shí)施方式中，"同源性"指的是與選自SEQ ID No:l-6的序列的相同性大于93%。 在另一實(shí)施方式中，"同源性"指的是與SEQIDNo:l-6之一的相同性大于95。/。。 在另一實(shí)施方式中，"同源性"指的是與選自SEQIDNo:l-6的序列的相同性大 于96%。在另一實(shí)施方式中，"同源性"指的是與SEQIDNo:l-6之一的相同性 大于97%。在另一實(shí)施方式中，"同源性"指的是與SEQIDNo:l-6之一的相同 性大于98%。在另一實(shí)施方式中，"同源性"指的是與SEQIDNo:l-6之一的相 同性大于99%。在另一實(shí)施方式中，"同源性"指的是與SEQIDNo:l-6之一的 相同性為100%。
在另一實(shí)施方式中，通過確定候選序列的雜交而確定同源性，其中的方 法在現(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)公開(見例如，"Nucleic Acid Hybridization" Hames, B. D., and Higgins S. J., Eds。 (1985); Sambrook et al., 2001， Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, N. Y.; 禾卩Ausubel et al., 1989, Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishing Associates and Wiley Interscience, N. Y)。在其他實(shí)施方式中，在對于編碼天然caspase肽的DNA的 互補(bǔ)體而言是中等至嚴(yán)格性條件下進(jìn)行雜交方法。雜交條件為，例如，在以 下溶液中溫育過夜，42°C，所述溶液包含10-20%甲酰胺、5XSSC(150mM NaCl, 15mM枸櫞酸鈉)、50mM磷酸鈉(pH 7.6)、 5X登哈特溶液、10%硫酸葡聚糖、和20pg/ml變性的剪切的鮭精DNA。
在另一實(shí)施方式中，蛋白質(zhì)和/或肽與本文所述的任何AA序列的同源性 可通過本領(lǐng)域熟知的方法確定，這些方法包括免疫印跡分析，或通過計(jì)算機(jī) 算法分析AA序列，采用任何已有軟件包以及成熟的方法。這些軟件包中的 一些包括FASTA、 BLAST、 MPsrch或Scanps軟件包，且在另一實(shí)施方式中， 例如，使用Smith和Waterman的算法、和/或global/local或BLOCKS算法。 每一種用于確定同源性的方法代表了本發(fā)明的 一個單獨(dú)的實(shí)施方式。
在一個實(shí)施方式中，"變體"指的是如下所述的氨基酸或核酸序列(或在其 他實(shí)施方式中，指的是生物體或組織)，所述序列不同于群體中的大多數(shù)，但 仍與共同模式具有足夠的相似性，且因此被認(rèn)為是該群體中的一個，例如剪 接變體。在一個實(shí)施方式中，所述變體可以是序列保守性變體，而在另一實(shí) 施方式中，所述變體可以是功能保守性變體。在一個實(shí)施方式中，變體可包 含1個氨基酸的添加、缺失或取代。在一個實(shí)施方式中，變體可包含2個氨 基酸的添加、缺失、取代或它們的組合。在一個實(shí)施方式中，變體可包含3 個氨基酸的添加、缺失或取代或它們的組合。在一個實(shí)施方式中，變體可包 含4個氨基酸的添加、缺失或取代或它們的組合。在一個實(shí)施方式中，變體 可包含5個氨基酸的添加、缺失或取代或它們的組合。在一個實(shí)施方式中， 變體可包含7個氨基酸的添加、缺失或取代或它們的組合。在一個實(shí)施方式 中，變體可包含10個氨基酸的添加、缺失或取代或它們的組合。在一個實(shí)施 方式中，變體可包含2-15個氨基酸的添加、缺失或取代或它們的組合。在一 個實(shí)施方式中，變體可包含3-20個氨基酸的添加、缺失或取代或它們的組合。 在一個實(shí)施方式中，變體可包含4-25個氨基酸的添加、缺失或取代或它們的 組合。
在一個實(shí)施方式中，"異構(gòu)體"指的是分子(例如，蛋白質(zhì))的這樣一種形式， 其與同一蛋白質(zhì)的另一種異構(gòu)體僅有微小的差異。在一個實(shí)施方式中，異構(gòu) 體可由不同但相關(guān)的基因產(chǎn)生，或在另一實(shí)施方式中，可由同一基因通過替 代性剪接而產(chǎn)生。在另一實(shí)施方式中，異構(gòu)體由單核苷酸多態(tài)性產(chǎn)生。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法和組合物使用嵌合分子，其包含重組 HSV蛋白與標(biāo)簽多肽的融合體，所述標(biāo)簽多肽提供被抗標(biāo)簽抗體選擇性結(jié)合 的表位。在其他實(shí)施方式中，表位標(biāo)簽被置于該蛋白質(zhì)的氨基末端或羧基末 端，或置于其內(nèi)部的位置處。在另一實(shí)施方式中，使用抗所述標(biāo)簽多肽的抗體來檢測此類表位標(biāo)記形式的重組HSV蛋白的存在。在另一實(shí)施方式中，納
入表位標(biāo)簽使得重組HSV蛋白能夠通過親和純化被容易地純化，其中使用抗
標(biāo)簽抗體或結(jié)合表位標(biāo)簽的其他類型的親和基質(zhì)。本領(lǐng)域已知多種標(biāo)簽多肽
及其相應(yīng)的抗體。實(shí)例包括多組氨酸(poly-his)或多組氨酸甘氨酸(poly-his-gly) 標(biāo)簽；流感HA標(biāo)簽多肽及其抗體12CA5 (Field et al, Mol. Cell. Biol.， 8: 2159-2165 (1988)); c-myc標(biāo)簽及其8F9、 3C7、 6E10、 G4、 B7和9E10抗體 (Evan et al， Molecular and Cellular Biology, 5: 3610-3616 (1985));和單純皰疹病 毒糖蛋白D (gD)標(biāo)簽及其抗體(Paborsky et al, Protein Engineering, 3(6): 547-553 (1990))。其他標(biāo)簽多肽包括Flag-肽(Hopp et al, BioTechnology， 6: 1204-1210 (1988》;KT3表位肽(Martin et al, Science, 255: 192-194 (1992));微 管蛋白表位肽(Skinner et al， J. Biol. Chem.， 266:15163-15166 (1991));和T7基 因10蛋白肽標(biāo)簽(Lutz-Freyermuth et al， Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87: 6393-6397 (1990))。在另一實(shí)施方式中，所述嵌合分子包含重組HSV蛋白與 免疫球蛋白或免疫球蛋白的特定部分的融合體。構(gòu)建融合蛋白的方法是本領(lǐng) 域熟知的，并可參見例如，LaRochelle et al, J. Cell Biol" 139(2): 357-66 (1995); Heidaran et al, FASEB J" 9(1): 140-5 (1995); Ashkenazi et al， Int. Rev. Immunol" 10(2-3): 219-27 (1993)和Cheon et al， PNAS USA， 91(3): 989-93 (1994)。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供試劑盒，其包含用于實(shí)施本發(fā)明的方法 的疫苗。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明提供試劑盒，其包含本發(fā)明的疫苗。
在另一實(shí)施方式中，"施用"指的是通過注射或其他方式將本發(fā)明的組合物 直接引入對象。在另一實(shí)施方式中，"施用"指的是使對象免疫系統(tǒng)的細(xì)胞與疫 苗或重組HSV蛋白或它們的混合物相接觸。
藥物組合物和施用方法
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法包括施用重組HSV蛋白和藥用可接受 載體。在另一實(shí)施方式中，可通過任何本領(lǐng)域已知的方法將含有疫苗的藥物 組合物施用于對象，例如通過胃腸外、經(jīng)粘膜、經(jīng)皮、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮 內(nèi)、鼻內(nèi)、皮下、腹腔內(nèi)、腦室內(nèi)、顱內(nèi)、或陰道內(nèi)。在另一實(shí)施方式中， 通過表皮注射而施用本發(fā)明的疫苗，在另一實(shí)施方式中，通過肌肉注射，在 另一實(shí)施方式中，通過皮下注射，而在另一實(shí)施方式中，通過呼吸道內(nèi)粘膜 注射。在本發(fā)明的方法和組合物的另一實(shí)施方式中，口服施用所述藥物組合物， 且因此所述藥物組合物被配制為適合于口服施用的形式，即，固體或液體制 劑。合適的固體口服配制品包括片劑、膠囊、丸劑、顆粒劑、藥丸等等。合 適的液體口服配制品包括溶液、懸液、分散劑、乳劑、油劑等等。在本發(fā)明 的另一實(shí)施方式中，疫苗被配制為膠囊。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的組合 物包括硬凝膠化膠囊。
在另一實(shí)施方式中，通過靜脈、動脈、或肌肉內(nèi)注射液體制劑而施用所 述藥物組合物。合適的液體配制品包括溶液、懸液、分散劑、乳劑、油劑等 等。在另一實(shí)施方式中，所述藥物組合物通過靜脈施用且因此被配制為適合 于靜脈施用的形式。在另一實(shí)施方式中，所述藥物組合物通過動脈內(nèi)施用且 因此被配制為適合于動脈內(nèi)施用的形式。在另一實(shí)施方式中，所述藥物組合 物通過肌肉內(nèi)施用且因此被配制為適合于肌肉內(nèi)施用的形式。
在另一實(shí)施方式中，所述藥物組合物局部施用于肌體表面且因此被配制 為適合于局部施用的形式。合適的局部配制品包括凝膠、軟膏、乳膏劑、洗 劑、滴劑等等。
在另一實(shí)施方式中，所述藥物組合物作為栓劑施用，例如直腸栓劑或尿 道栓劑。在另一實(shí)施方式中，所述藥物組合物通過皮下植入藥丸而施用。在 另一實(shí)施方式中，所述藥丸在一段時間內(nèi)提供抗原劑的控制釋放。
在另一實(shí)施方式中，所述疫苗被置于囊泡例如脂質(zhì)體內(nèi)輸送。
在其他實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法中使用的載體或稀釋劑包括，但不限 于，樹膠、淀粉(例如玉米淀粉、預(yù)膠化淀粉)、糖(例如乳糖、甘露醇、蔗糖、 葡萄糖)、纖維素材料(例如微晶纖維素)、丙烯酸酯(例如聚甲基丙烯酸酯)、碳 酸鈣、氧化鎂、滑石粉、或其混合物。
在其他實(shí)施方式中，用于液體配制品的藥用可接受載體是水性或非水性 溶液、懸液、乳劑或油劑。非水性溶劑的實(shí)例是丙二醇、聚乙二醇、和注射 用有機(jī)酯例如油酸乙酯。水性載體包括水、醇/水溶液、乳劑或懸液，包括鹽 和緩沖介質(zhì)。油劑的實(shí)例是那些動物、植物或合成來源的油，例如，花生油、 大豆油、橄欖油、葵花子油、魚肝油、其他海魚油、或來自乳或卵的脂質(zhì)。
在另一實(shí)施方式中，胃腸外載體(用于皮下、靜脈、動脈內(nèi)、或肌肉注射) 包括氯化鈉溶液、林格葡萄糖、葡萄糖和氯化鈉、乳酸鹽林格和非揮發(fā)性油。 靜脈載體包括體液和營養(yǎng)補(bǔ)充液、電解質(zhì)補(bǔ)充液例如那些基于林格葡萄糖的溶液等等。實(shí)例為無菌液體，例如水和油，添加或未添加表面活性劑和其他 可藥用佐劑。通常，水、鹽、水性葡萄糖和相關(guān)的糖溶液、以及醇例如丙二 醇或聚乙二醇是優(yōu)選的液體載體，特別適合于注射用溶液。油劑的實(shí)例為那 些來自動物、植物或合成來源的油，例如，花生油、大豆油、橄欖油、葵花 子油、魚肝油、其他海魚油、或來自乳或卵的脂質(zhì)。
在其他實(shí)施方式中，所述組合物還包括粘合劑(例如阿拉伯膠、玉米淀粉、 明膠、卡波姆、乙基纖維素、瓜爾膠、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、 聚維酮)、崩解劑(例如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、海藻酸、二氧化硅、交聯(lián)羧甲 纖維素鈉、交聚維酮、瓜爾膠、淀粉羥乙酸鈉)、各種pH和離子強(qiáng)度的緩沖
液(例如Tris-HCl、乙酸、磷酸)、用于防止吸附于表面的添加劑例如白蛋白或 明膠、去垢劑(例如吐溫20、吐溫80、普流尼克F68、膽汁酸鹽類)、蛋白酶 抑制劑、表面活性劑(例如十二烷基硫酸鈉)、滲透促進(jìn)劑、增溶劑(例如甘油、 聚乙二醇)、抗氧化劑(例如抗壞血酸、偏亞硫酸氫鈉、丁羥茴醚)、穩(wěn)定劑(例 如羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素)、增粘劑(例如卡波姆、膠體二氧化硅、 乙基纖維素、瓜爾膠)、甜味劑(例如阿司帕坦、檸檬酸)、防腐劑(例如硫柳汞、 苯甲醇、對羥苯甲酸類)、潤滑劑(例如硬脂酸、硬脂酸鎂、聚乙二醇、十二垸 基硫酸鈉)、助流劑(例如膠體二氧化硅)、成形劑(例如酞酸二乙酯、擰檬酸三 乙酯)、乳化劑(例如卡波姆、羥丙基纖維素、十二烷基硫酸鈉)、高分子包衣(例 如泊洛沙姆或poloxamines)、包衣和膜形成劑(例如乙基纖維素、丙烯酸鹽類、 聚甲基丙烯酸酯)和/或佐劑。每一上述賦形藥代表了本發(fā)明的一個單獨(dú)的實(shí)施 方式。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物組合物是控釋組合物，即，該組合物 中的抗原在施用后的一段時間內(nèi)釋放?？蒯尰蚓忈尳M合物置于親脂長效劑(例 如脂肪酸、石蠟、油)中的配制品。在另一實(shí)施方式中，所述組合物是即時釋 放組合物，即，該組合物中的所有抗原在施用后立即釋放。
在另一實(shí)施方式中，所述藥物組合物置于控釋系統(tǒng)內(nèi)輸送。在另一實(shí)施 方式中，采用靜脈輸注、植入型滲透泵、透皮貼劑、脂質(zhì)體或其他施用方式 施用所述藥劑。在另一實(shí)施方式中，使用泵(參見，Langer，見上；Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201 (1987); Buchwald et al， Surgery 88:507 (1980); Saudeketal， N.Engl. J. Med. 321:574(1989)。在另一實(shí)施方式中，使用高分子 材料；例如置于微球或置于植入物內(nèi)。在另一實(shí)施方式中，組合物還包括將活性物質(zhì)摻入聚合化合物的顆粒制 劑內(nèi)部或上面，例如聚乳酸、聚乙醇酸、水凝膠類等等，或摻入至脂質(zhì)體、 微乳劑、微膠粒、單層或多層囊泡、血影、或球粒體上面。此類組合物將影 響物理狀態(tài)、溶解性、穩(wěn)定性、體內(nèi)釋放速度、和體內(nèi)清除速度。
本發(fā)明還包括聚合物(例如泊洛沙姆或poloxamines)包衣的顆粒組合物， 且化合物偶聯(lián)于針對組織特異性受體、配體或抗原的抗體，或偶聯(lián)于組織特 異性受體的配體。
本發(fā)明還包括通過與水溶性聚合物例如聚乙二醇、聚乙二醇和聚丙二醇 的共聚物、羧甲基纖維素、右旋糖酐、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯垸酮或聚脯氨 酸共價(jià)附著而修飾的化合物。已知與相應(yīng)的非修飾的化合物相比，所述修飾 的化合物在靜脈注射后展現(xiàn)出顯著更長的血液半衰期(Abuchowski et al, 1981; Newmarketal, 1982;和Katre et al, 1987)。在另一實(shí)施方式中，此類修飾還包 括增加所述化合物在水溶液內(nèi)的溶解性，消除凝集，增強(qiáng)化合物的物理和化 學(xué)穩(wěn)定性，并極大地降低化合物的免疫原性和反應(yīng)性。在另一實(shí)施方式中， 通過更低頻率地施用此類聚合物-化合物加合物或相對于未修飾化合物而言施 用較低的劑量，即可實(shí)現(xiàn)所需的體內(nèi)生物學(xué)活性。
含有活性成分的藥物組合物的制備是本領(lǐng)域熟知的，例如通過混合、粒 化、或壓片處理。在另一實(shí)施方式中，將活性成分在組合物中配制為中性的 可藥用鹽的形式?？伤幱名}包括酸加成鹽(與多肽或抗體分子的游離氨基形 成)，其可以是與無機(jī)酸形成的，例如鹽酸或磷酸，或者是與有機(jī)酸形成的， 例如乙酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等等。所述鹽也可以是游離羧基與無機(jī)堿 和有機(jī)堿形成的，無機(jī)堿例如氫氧化鈉、鉀、銨、鈣或鐵，而有機(jī)堿例如異 丙胺、三甲胺、2-乙氨基乙醇、組氨酸、普魯卡因、等等。
每一上述添加劑、賦形劑、配制品和施用方法代表了本發(fā)明的一個單獨(dú) 的實(shí)施方式。
應(yīng)該理解，本發(fā)明還涵蓋組合物，如本文所述的疫苗那樣，其包含一或 多種重組單純皰疹病毒(HSV)蛋白質(zhì)，所述蛋白質(zhì)選自gD蛋白、gC蛋白和 gE蛋白。
實(shí)驗(yàn)詳情部分實(shí)施例1: HSV-1 gC-l亞單位疫苗可保護(hù)抵抗HSV-1感染
材料和方法(實(shí)施例1-2)
玫魄乾結(jié)抑刮武獫
用WT HSV-1以感染復(fù)數(shù)(MOI)為2感染Vero細(xì)胞20小時。向感染的細(xì) 胞加入IgG， l小時，室溫。加入C3b包被的綿羊紅細(xì)胞，l小時，37°C，光 學(xué)顯微鏡觀察玫瑰花結(jié)。計(jì)算形成C3b包被的紅細(xì)胞的玫瑰花結(jié)的細(xì)胞百分 數(shù)，如下(結(jié)合了4個或更多個紅細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)/計(jì)數(shù)的細(xì)胞總數(shù))x100。/。。 C3b包被的玫瑰花結(jié)被抑制表明存在阻斷C3b結(jié)合于gC-l的抗體。
氛側(cè)屣部棋型
5-7周齡的BALB/c或C57B1/6雌性小鼠(Charles River, Wilmington, MA) 或C3敲除小鼠被麻醉，將小鼠側(cè)腹部剔毛并化學(xué)脫毛。16-20小時后，通過 加入10 pl含有5 X 104或5 X 105 PFU的純化的HSV-1 WT病毒并用30號針 頭的斜面刮擦皮膚而感染小鼠。對接種部位的疾病進(jìn)行評分紅斑或腫脹但 無小水皰為0.5分，而每一單個的小水皰評為1分，最高每日總評分為5。如 果病灶融合，則基于病變的大小最高評為5分。帶狀皰疹樣疾病的評分與此 類似，不同之處在于最高每日評分為10，因?yàn)樵诟蟮氖芾燮つw面積上能夠 計(jì)數(shù)到更多的病灶。對于以HSV-2進(jìn)行的一些實(shí)驗(yàn)(圖16A和16B)，評分系 統(tǒng)進(jìn)行了改進(jìn)，以便區(qū)分開疾病譜的嚴(yán)重端的動物，因?yàn)镠SV-2導(dǎo)致的側(cè)腹 部疾病比HSV-1更加嚴(yán)重。在接種部位，評分分為0-3，其中O代表無疾病， l代表發(fā)紅或孤立的病變，2代表潰瘍，而3代表具有組織壞死的區(qū)域。在帶 狀皰疹樣部位，評分分為0-4，其中O代表無疾病，l代表孤立的病變，2代 表融合的病變，3代表潰瘍，而4代表具有組織壞死的區(qū)域。
疚結(jié)
疫苗含有重組HSV-1 bac-gD-l(306t) (AA 26-306，具有C-末端6 His標(biāo)簽) 和HSV-1 bac-gC-l片段(AA 26-457，以5 His標(biāo)簽修飾)。
結(jié)果
gC-l亞單位疫苗的最佳劑量:本實(shí)驗(yàn)通過測定抑制C3b結(jié)合于gC-l， 確定了產(chǎn)生能夠阻斷免疫逃避的抗gC抗體的gC-l免疫的劑量。小鼠被假免 疫或用O.l、 1、或10嗎的gC-l免疫，并采用玫瑰花結(jié)形成試驗(yàn)測試所得血 清阻斷C3b結(jié)合的能力(圖1，左側(cè))。以10嗎的gC-l免疫的小鼠產(chǎn)生的抗gC抗體阻斷了 85%玫瑰花結(jié)形成(圖1，右側(cè))。然后以致死量的HSV-1攻擊 小鼠，并在攻擊后3至7天對接種部位和帶狀皰疹樣部位的疾病進(jìn)行評分(圖 2A和B)。 gC-l免疫每一顯著改變接種部位的疾病，但與假免疫小鼠相比帶 狀皰疹樣疾病減少(P < .001)。
攻擊后14天對假免疫和gC-l免疫的小鼠的存活率進(jìn)行評分。lO嗎gC-l 組40%存活，而更低劑量組無存活。因此，以10 pg gC-l免疫可產(chǎn)生保護(hù)小 鼠免于帶狀皰疹樣疾病和死亡的抗體。
實(shí)施例2:聯(lián)合gC-l/gD-l疫苗賦予比僅含gD-l或gC-l的疫苗更優(yōu)越的保護(hù) gD-l亞單位疫苗的最佳劑量:使用小鼠側(cè)腹部模型來確定部分保護(hù)小鼠 免于疾病的gD-l劑量，以模擬部分保護(hù)性gD-l亞單位疫苗?；谶@些研究， 選擇50 ng的gD-l劑量；該劑量在接種部位提供輕微的保護(hù)，并提供針對帶 狀皰疹樣疾病的中等的保護(hù)(結(jié)果見圖3)。
gD-l和gC-l聯(lián)合亞單位疫苗:小鼠被假免疫或僅以gD-l(50ng)免疫或 以gD-l (50 ng)和gC-l (10 pg)兩者免疫，并以致死量的HSV-1攻擊(圖3)。在 施用gD-l/gC-l聯(lián)合疫苗的小鼠中，接種部位的疾病嚴(yán)重程度顯著降低(P < 0.02)，而帶狀皰疹樣部位疾病被完全預(yù)防，與僅gD-l或僅gC-l (圖2A和2B) 免疫相比，該結(jié)果具有顯著差異(P O.OOl)。此外，聯(lián)合疫苗組小鼠的存活率 為100% (圖4)。
因此，與含有僅gD-l或僅gC-l的疫苗相比，聯(lián)合gC-l/gD-l疫苗賦予更 優(yōu)越的保護(hù)。
實(shí)施例3:聯(lián)合gC-l/gD-l疫苗預(yù)防后根神經(jīng)節(jié)感染 材料和方法
感染后5天收集DRG。小鼠被安樂死，并在放大解剖顯微鏡下鑒定支配 接種處皮膚的神經(jīng)節(jié)。取出神經(jīng)節(jié)并在DMEM中勻漿，通過噬斑分析滴定神 經(jīng)節(jié)內(nèi)的病毒。
結(jié)果
HSV-1在后根神經(jīng)節(jié)(DRG)內(nèi)的神經(jīng)元細(xì)胞體內(nèi)潛伏。為測試以gD-l和 gC-l免疫是否預(yù)防DRG感染，致死量的HSV-1攻擊后5天(峰效價(jià)時間)收集DRG。以gD-l和gC-l免疫的小鼠無感染性病毒，而在假免疫或gD-l免疫的 小鼠中回收到病毒(圖5)。
因此，與僅以gD-l或gC-l免疫相比，聯(lián)合gC-l/gD-l疫苗更好地保護(hù)小 鼠免于疾病、死亡和DRG感染。
實(shí)施例4:以gD-l和gC-l免疫的小鼠中抗gC-l IgG介導(dǎo)的保護(hù)依賴于C3b 材料和方法 側(cè)服卻棋型
進(jìn)行實(shí)驗(yàn)證實(shí)抗gC-l IgG對小鼠的保護(hù)是通過阻斷gC-l與C3b之間的 相互作用而產(chǎn)生的。通過3次肌注混合了 CpG (# 1826， Coley Pharmaceuticals Group) (50 pg/小鼠)禾口鋁鹽(25 pg/jig蛋白)(Accurate Chemicals and Scientific Corp)的5嗎的gC-l對小鼠進(jìn)行免疫。第三次免疫后2周獲取血清，免疫印 跡顯示血清與gC-l蛋白相互作用(結(jié)果未顯示)，并阻斷HSV-1感染的細(xì)胞上 形成C3b玫瑰花結(jié)(見圖1)。在蛋白G柱(Hi-TrapTM, Amersham Biosciences, Uppsala， Sweden)上從小鼠血清純化IgG，并測試其中和抗體活性?？筭Dl單 克隆抗體DL11 (Eisenberg, RJ et al. J. Virol 53: 634-644， 1985)、抗gC-l單克隆 抗體1C8 (其結(jié)合gC-l上的與C3b相互作用并阻斷C3b與HSV-1感染的細(xì)胞 形成玫瑰花結(jié)的結(jié)構(gòu)域)(Judson KA et al. J Virol 77: 12639-45， 2003)、和非免 疫鼠IgG用作對照。將大約80PFU的HSV-1 NS株與獲取自免疫的小鼠的抗 gC-lIgG、或與DLll、 1C8或非免疫鼠IgG溫育1小時，37°C。然后通過在 Vero細(xì)胞上的噬斑分析測定病毒效價(jià)。
為了測試抗gC-l IgG保護(hù)小鼠的能力，以抗gC-l IgG對補(bǔ)體完好的小鼠 (C57Bl/6)或C3敲除小鼠(C3KO)進(jìn)行被動免疫，200 pg/小鼠，24小時后以5 x 105 HSV-1進(jìn)行側(cè)腹部感染。評價(jià)小鼠的接種部位和帶狀皰疹樣部位的疾病， 進(jìn)行11天。對照包括被動轉(zhuǎn)移1C8 (200嗎/小鼠)或非免疫鼠IgG (200 pg/小 鼠)。用于接種部位的疾病的評分系統(tǒng)為0是無疾病，以及根據(jù)接種部位病 變的大小評為1-5分。用于帶狀皰疹樣部位的疾病的評分系統(tǒng)為0是無疾病， 每一處病變評為l分，直至最高10分。在實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)前死亡的動物被賦予研究 過程中最后一次評價(jià)的分值。
結(jié)果DL11即便在0.1 pg/ml仍能高效中和HSV-1 ，而抗gC-l IgG在100 ng/ml (濃度高出3個logK))未能中和HSV-1 (圖6)?？筭C-l單克隆抗體1C8和非免 疫鼠IgG也未能中和HSV-l。小鼠抗gC-l IgG未能中和HSV-l，說明該抗體 所提供的保護(hù)作用不能歸于其中和活性。
圖7顯示了以抗gCl IgG或單克隆抗gC-l 1C8對補(bǔ)體完好的C57B1/6小 鼠或C3敲除(C3KO)小鼠進(jìn)行被動免疫的保護(hù)作用。以抗gCl IgG或單克隆 抗gC-l 1C8進(jìn)行被動免疫對接種部位疾病幾乎沒有影響(與非免疫IgG無統(tǒng)計(jì) 學(xué)差異)；不過，抗gClIgG或單克隆抗gC-l lC8極大減輕了C57Bl/6小鼠帶 狀皰疹樣部位的疾病(抗gC-l或1C8與非免疫IgG相比，P < .001)。與此不同， 抗gC-l IgG或1C8對C3KO小鼠幾乎沒有影響(比較抗gC-l或1C8與非免疫 IgG的接種部位或帶狀皰疹樣部位，沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異)。
從這些實(shí)驗(yàn)我們得出結(jié)論，抗gC-lIgG并不中和HSV-l，在補(bǔ)體完好的 小鼠中所檢測到的保護(hù)作用依賴于補(bǔ)體。這些結(jié)果支持圖l-5所給出的結(jié)果， 即，在gD-l免疫中加入gC-l，通過預(yù)防gC介導(dǎo)的免疫逃避提高了疫苗的功 效。
實(shí)施例5:來自多種毒株的gC2保護(hù)HSV-2免于受到正常人血清的補(bǔ)體介導(dǎo) 的中和作用
材料和方法(實(shí)施例5-11)
細(xì)胞和病嗇
非洲綠猴腎細(xì)胞(Vero)生長在DMEM培養(yǎng)基中，補(bǔ)充了 10%熱滅活的胎 牛血清，10 mM HEPES (pH 7.3), 2 mM L-谷氨酰胺，20 |ig/ml慶大霉素和1 (ig/ml兩性霉素B (Life Technologies, Rockville, MD)。通過以感染復(fù)數(shù)0.005 感染Vero細(xì)胞制備純化病毒集合物。收集感染后48小時的無細(xì)胞病毒上清 液，并在5%至70%蔗糖梯度上離心。
HSV-1 gC缺失突變體NS-gCnull衍生自NS株，稱為NS-gClnull。 gCl 蛋白編碼區(qū)被替換為置于HSV-1感染細(xì)胞蛋白6 (ICP6)早期啟動子控制下的 卩-半乳糖苷酶表達(dá)盒(Friedman et al., 1996. J. Virol. 70:4253-4260; Goldstein and Weller， 1988. J. Virol. 62:2970-2977)。野生型HSV-2毒株包括HSV-2(G)、 HSV-2(333)、和HSV-2.12，后者是分離自一 18歲女性的生殖道病變的低傳代 HSV-2分離物。HSV-2 gC缺失突變體衍生自HSV-2毒株G和毒株333，并分別稱為G-gC2null和333-gC2A。 G-gC2nu11病毒含有P-半乳糖苷酶基因，其取 代了gC2，而333-gC2A病毒在gC2中含有130-堿基對的缺失，相應(yīng)于0.613 至0.626圖距單位，這導(dǎo)致無gC2蛋白表達(dá)。通過以HSV-2.12 DNA和表達(dá) ICP6::lacZ表達(dá)盒的側(cè)翼序列載體共轉(zhuǎn)染Vero細(xì)胞而從HSV-2.12構(gòu)建 gC2-nul1毒株，其中ICP6::lacZ表達(dá)盒的側(cè)翼為gC2序列5，端的848 bp和gC2 序列3'端的738 bp，該表達(dá)盒取代了gC2蛋白編碼區(qū)的絕大部分，從起始位 點(diǎn)前的-lbp開始并延伸至終止位點(diǎn)前的16bp。產(chǎn)生了重組病毒，并通過藍(lán)斑 篩選分離到2.12-gC2nu11，且在使用前進(jìn)行三次噬斑純化。 補(bǔ)體武刮
補(bǔ)體來源是獲取自4名健康成年志愿者的HSV-l-非免疫人血清和HSV-2-非免疫人血清(稱為正常人血清[NHS])。血液在室溫凝固20分鐘并在4。C過夜， 然后分離血清，分裝，-80。C冷凍。通過在Children's Hospital of Philadelphia 的Clinical Virology Laboratory進(jìn)行HSV酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)以及本文 所述的病毒中和測定，確認(rèn)了不存在HSV-l-特異性IgG抗體和HSV-2-特異性 IgG抗體。經(jīng)Hospital of the University of Pennsylvania的Clinical Immunology Laboratory測定，來自各供者的血清具有正常的免疫球蛋白濃度。對于供者1， IgA為131 mg/dl (正常值為50至500 mg/dl); IgG為984 mg/dl (正常值為650 至2,000 mg/dl);和IgM為55 mg/dl (正常值為40至270 mg/dl)。對于供者2， IgA為147 mg/dl; IgG為1023 mg/dl;和IgM為205 mg/dl。對于供者3， IgA 為170 mg/dl; IgG為905 mg/dl;和IgM237mg/dl。對于供者4， IgA為253 mg/dl; IgG為1,140 mg/dl;和IgM為155 mg/dl。
當(dāng)指出時，NHS被加熱至56。C達(dá)30分鐘以滅活補(bǔ)體。為了鑒定負(fù)責(zé)不 當(dāng)中和的補(bǔ)體途徑，用lOmMEDTA處理NHS以滅活經(jīng)典途徑、甘露聚糖結(jié) 合型植物凝集素途徑(mannan-binding lectin pathway)和替代途徑；8 mM EGTA 和2 mM MgS+處理以滅活經(jīng)典途徑和甘露聚糖結(jié)合型植物凝集素途徑；以及 用100 mM D-甘露糖處理以干擾甘露聚糖結(jié)合型植物凝集素途徑的活化。為 了干擾C3活化，用濃度為40pM的小合成肽Compstatin(4W9A; Hook，etal. 2006. J. Virol. 80:4038-4046; Sahu， et al. 1996, J. Immunol. 157:884-891; Kase, et al. 1999, Immunology 97:385-392; Klepeis, et al. 2003, J. Am. Chem. Soc. 125:8422-8423)處理NHS，而40 [iM線性Compstatin用作無活性對照。
耗竭NHS中的IgM和補(bǔ)體成分通過加入30 mM EDTA并將血清通過抗人IgM柱(Sigma， St. Louis， MO) 而耗竭NHS中的IgM。IgM純化重復(fù)2次以耗竭90至95%的IgM。用含1 mM EDTA的磷酸緩沖鹽(PBS)透析血清以降低EDTA濃度，在用于中和實(shí)驗(yàn)之前 補(bǔ)充1 mM Mg2+和2 mM Ca2+。
為了耗竭NHS的補(bǔ)體成分Clq、 C5、和C6，將針對Clq、 C5、或C6制 備的綿羊或山羊抗血清的IgG級份以10 mg/ml的IgG終濃度偶聯(lián)于溴化氰 -Sepharose (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway， NJ)，制備免疫吸附齊U柱。 濃縮分離的蛋白級份，并用含O.l mM EDTA的PBS透析血清以降低EDTA 濃度，并去除疊氮化鈉。用透析緩沖液恢復(fù)血清的原始體積，使用前補(bǔ)充1 mM Mg"和2 mM Ca2+。以550 pg/ml IgM、 100 jig/ml Clq、 75 pg/ml C5、或60 jig/ml C6 (Sigma， St. Louis, MO)重建補(bǔ)體耗竭的NHS以恢復(fù)生理學(xué)濃度。
純化的IgM
用抗IgM柱(Sigma, St. Louis, MO)自NHS純化IgM。集合含蛋白級份， 用PBS在4°C透析，使用50-kDa截?cái)嘀档哪こ匐x心進(jìn)行濃縮，分裝后存放 于-80。C。
中和測走
純化的病毒與NHS或與熱滅活或EDTA滅活的血清或作為對照的PBS 溫育l小時，37°C。通過在Vero細(xì)胞上進(jìn)行噬斑分析測定病毒效價(jià)。 測走經(jīng)典補(bǔ)體逄徑逸血活性
通過將系列成倍稀釋的血清與抗體致敏的綿羊紅細(xì)胞(EA) (Sigma, St. Louis, MO)在96-孔微滴定板內(nèi)37°C溫育45分鐘而測定NHS或補(bǔ)體成分耗竭 的血清的總?cè)苎a(bǔ)體活性(CH5c)。 120 x g離心3分鐘去除完好的EA，上清液 轉(zhuǎn)移至新的96-孔板，通過分光光度法在405 nm測定溶解EA的百分比。
ELISA測定IgM與G-gC2null病毒的結(jié)合
將Dulbecco's PBS (pH 7.1)中的蔗糖梯度純化的G-gC2null病毒以2 x 106 PFU/孔加至96-孑LHigh Binding Costar微滴定板(Corning Incorporated, Corning: NY)，溫育2小時，室溫，以5。/。(wt/voI)去脂乳4。C過夜封閉。將PBS/0.05% 吐溫20系列成倍稀釋的熱滅活的NHS添加至病毒包被的孔或以PBS-吐溫中 的去脂乳包被的對照孔中，溫育1小時，37°C。使用過氧化物酶綴合的山羊 F(ab')2 IgG抗人IgM n-鏈(Sigma, St. Louis, MO)，以405 nm的光密度檢測結(jié)合 的IgM。終點(diǎn)效價(jià)為產(chǎn)生大于O.l、且至少是對照孔光密度的2倍的光密度的血清稀釋度。
免度印逸分析
對感染的細(xì)胞提取物進(jìn)行4至15n/。十二垸基硫酸鈉(SDS)-聚丙烯酰氨凝 膠電泳(PAGE)，轉(zhuǎn)移至Immobilon-P轉(zhuǎn)移膜(Millipore Corp., Bedford, MA)， 與兔抗gC2抗體R81和兔抗VP5抗體反應(yīng)。
統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
使用曲線下面積(AUC)比較病毒中和百分?jǐn)?shù)。使用Student氏t檢驗(yàn) (Microsoft Excel軟件)確定P值。概率(P) <0.05被認(rèn)為結(jié)果具有顯著性。
結(jié)果
在包括毒株G、 333、和2.12在內(nèi)的多種HSV-2毒株中檢查gC2所賦予 的保護(hù)作用。免疫印跡證實(shí)gC2表達(dá)于野生型感染的細(xì)胞而不是gC2-nul1感 染的細(xì)胞(圖8A)。將各種病毒與漸增濃度的作為補(bǔ)體來源的NHS溫育1小 時，37。C，進(jìn)行中和測定。與PBS的病毒作為對照。與gC2-mill病毒相比， 所有三種野生型HSV-2病毒均對補(bǔ)體介導(dǎo)的中和作用具有更高的抗性(圖8B 至D)。用HSV-1野生型和gCl-皿ll病毒得到了類似的結(jié)果(圖8E)。盡管在 NHS濃度為20。/。時，幾乎沒有產(chǎn)生或沒有產(chǎn)生HSV-2野生型病毒的中和，但 333-gCA、 2.12-gC2null和G-gC2null的效價(jià)卻分別降低大約25%、 75%和85% (圖8B至D)。 gC2-rml1病毒對補(bǔ)體中和的升高的易感性在所評價(jià)的補(bǔ)體濃度 范圍內(nèi)都存在。通常，與gC2-mi11病毒相比，對野生型病毒的中和要達(dá)到類 似的水平則需要4倍或更高濃度的NHS。這些結(jié)果說明gC2保護(hù)病毒免于補(bǔ) 體介導(dǎo)的中和作用。
實(shí)施例6: gC-null病毒的中和涉及Clq
為了確定Clq，即經(jīng)典補(bǔ)體途徑的第一成分，是否是中和HSV-1或HSV-2 gC-null病毒所必需的，自NHS中耗竭Clq，這導(dǎo)致總?cè)苎a(bǔ)體活性降低，而 以Clq重建后總?cè)苎a(bǔ)體活性可恢復(fù)(圖9A)。盡管95%的Clq已經(jīng)被耗竭， 但這種耗竭Clq的血清仍顯示出殘余的活性，說明相對小量的Clq濃度即足 以起始經(jīng)典補(bǔ)體級聯(lián)并溶解抗體包被的紅細(xì)胞。進(jìn)行中和實(shí)驗(yàn)以比較20% NHS、 Clq耗竭的NHS、以及Clq重建的Clq耗竭的NHS。作為對照，將病 毒與已經(jīng)被熱滅活的20% NHS溫育。耗竭Clq的血清沒有中和NS-gClnull或G-gC2null，而以Clq重建的血清恢復(fù)了中和作用(圖9B)。因此，gC-皿ll 病毒的中和涉及Clq并通過活化經(jīng)典補(bǔ)體途徑而發(fā)生。
實(shí)施例7:來自多個供者的NHS中和gC-null病毒
使用4名HSV-1和HSV-2血清陰性的人類供者測定NS-gClnull和 G-gC2nu11的補(bǔ)體中和，以確定對象中的NHS中和是否不同。所有樣品在20% NHS均中和了 gC-null病毒，而熱滅活的NHS未能中和；因此，所有樣品顯 示出補(bǔ)體介導(dǎo)的gC-null病毒中和作用(圖10)。
實(shí)施例8: gC-null病毒的中和涉及C3活化
C3是所有3種補(bǔ)體途徑的成分。高濃度的C3存在于NHS，這使得很難 將其耗竭；因此，使用Compstatin抑制C3活化，并確定C3是否是中和gC-null 病毒所必需的。Compstatin (4W9A)是小合成肽，其在低濃度即可通過結(jié)合C3 而干擾補(bǔ)體，防止其活化。在經(jīng)過20。/。NHS或以活性(4W9A)或無活性(線性) Compstatin處理的20% NHS處理之后，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以檢査中和情況。以未經(jīng)處 理的病毒作為對照。經(jīng)NHS或以無活性Compstatin處理的NHS處理后， NS-gClnull和G-gC2null病毒被中和(圖11)。以活性Compstatin處理的NHS 沒有降低病毒效價(jià)，說明gC-nuU病毒的中和涉及C3活化。
實(shí)施例9: G-gC2nul病毒的中和涉及C5
下一步確定G-gC2rmll中和是否涉及C5-依賴性的抗體-非依賴性補(bǔ)體中 和作用。自NHS耗竭C5降低了總?cè)苎钚?，而在C5重建后總?cè)苎钚曰謴?fù) (圖12A)。 NS-gClnull和G-gC2null與20% NHS、耗竭C5的血清、和C5重 建的血清溫育。耗竭C5的血清沒有中和病毒，而NHS和重建的血清中和了 病毒(圖12B)。因此，G-gC2null中和涉及C5。
進(jìn)一步的研究顯示，G-gClnull和G-gC2null病毒的中和不需要活化替代 補(bǔ)體途徑、甘露聚糖結(jié)合型植物凝集素補(bǔ)體途徑、或C6(C6結(jié)果見圖12C和 12D)。
實(shí)施例10:天然IgM抗體殘余中和gC-null病毒
當(dāng)Clq結(jié)合于病毒體表面上的IgM或兩個IgG分子時可活化經(jīng)典補(bǔ)體途徑。當(dāng)Clq直接結(jié)合于病毒膜蛋白時也會活化，在人巨細(xì)胞病毒和人T細(xì)胞 親淋巴病毒中有過這樣的報(bào)道。研究了天然IgM抗體在介導(dǎo)補(bǔ)體中和中的作 用。從NHS中耗竭IgM，這并不導(dǎo)致總?cè)苎a(bǔ)體活性降低，說明經(jīng)典補(bǔ)體途 徑成分沒有隨IgM —起被耗竭(圖13A)。在經(jīng)過20% NHS、耗竭IgM的20% NHS、和IgM-恢復(fù)的NHS處理之后，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以比較中和情況。耗竭IgM 的血清沒有中和NS-gClnull或G-gC2null，而NHS或IgM-重建的NHS中和 了這些病毒(圖13B)。因此，IgM和補(bǔ)體均殘余中和gC-null病毒。
實(shí)施例ll: IgM抗體結(jié)合G-gC2null病毒
采用ELISA測定熱滅活的NHS中的IgM與G-gC2null的結(jié)合。從20% NHS開始系列成倍稀釋的血清與G-gC2null或?qū)φ湛诇赜?。檢測到來自4個 供者中的每一個的NHS中的IgM均結(jié)合G-gC2null (圖13C-F)。 4個供者的終 點(diǎn)效價(jià)有所不同(供者l， 1:20;供者2和3， 1:320;供者4， 1:80)，這與血 清中的IgM濃度有關(guān)(供者1， 55 mg/dl;供者2， 205 mg/dl;供者3， 237 mg/dl; 供者4， 155mg/dl)。因此，IgM結(jié)合G-gC2null病毒。
實(shí)施例12:鑒定參與Fc受體活性的gE結(jié)構(gòu)域
FcyR (IgG Fc受體)活性和病毒播散是gE的兩個功能，這兩個功能是由重 疊但不同的結(jié)構(gòu)域行使的。HSV-1 gE介導(dǎo)病毒在上皮細(xì)胞之間播散并在神經(jīng) 元內(nèi)轉(zhuǎn)移。為了表征HSVFc丫R在復(fù)發(fā)性感染中的作用，使用了一種突變體病 毒，其FcyR活性具有缺陷，但播散功能是完好的；即，在gE氨基酸264之 后插入了 4個AA (ALEG)的HSV-1 gE突變體病毒(NS-gE264)。
鼠側(cè)腹部模型中的NS-gE264突變體:鼠側(cè)腹部模型測量病毒播散而不考 虛FcyR功能，因?yàn)槭驣gG Fc不結(jié)合HSV-1 FcyR。因此，HSV-1 FqR表型對 病毒在小鼠中的毒力沒有影響。以來自人或兔的IgG被動免疫小鼠，由此對 鼠側(cè)腹部模型加以改進(jìn)，以便用于評價(jià)FcyR功能，這是因?yàn)槿撕屯玫腎gG的 Fc結(jié)構(gòu)域結(jié)合HSV-1 FcyR。在沒有被動免疫的情況下，帶狀皰疹樣疾病可用 作病毒播散表型的指標(biāo)。因此，如果NS-gE264引起類似于WT病毒的帶狀皰 疹樣疾病，則播散表型是完好的。NS-gE264沒有FcYR，這可由感染NS-gE264 的細(xì)胞周圍沒有IgG包被的紅細(xì)胞形成玫瑰花結(jié)這一點(diǎn)證明。在小鼠側(cè)腹部 模型中評價(jià)NS-gE264的播散表型。小鼠在側(cè)腹部接種5 x 105 PFU的NS-gE264或拯救NS-gE264，后者恢復(fù) 了 WTgE基因。在感染后(pi)3-7天對動物的帶狀皰疹樣疾病評分，每一病變 給予1分，直至每天最高10分。NS-gE264展現(xiàn)出完好的播散表型，因?yàn)閹?狀皰疹樣疾病評分與突變體和拯救株類似(圖14A)。為了評價(jià)FqR活性，以 人免疫(抗HSV) IgG (能夠通過F(ab')2結(jié)構(gòu)域結(jié)合于HSV抗原，并通過Fc結(jié) 構(gòu)域結(jié)合于HSV-l FcYR，其阻斷IgG Fc活性)或以作為對照的非免疫人IgG (僅能夠通過Fc結(jié)構(gòu)域結(jié)合于FcyR)對小鼠進(jìn)行被動免疫。16小時后感染小鼠， 并在感染后3-7天評價(jià)帶狀皰疹樣疾病。用人抗HSV IgG被動免疫的感染 NS-gE264的小鼠出現(xiàn)的疾病少于用人抗HSV IgG被動免疫的感染拯救 NS-gE264的小鼠出現(xiàn)的疾病(圖14B)。因此，HSV抗體對FcyR突變體比對 拯救株更加有效。非免疫人IgG對任一病毒均無作用(圖14C)。
因此，NS-gE264具有完好的播散表型，但FcyR表型受損，且因缺乏FcyR 導(dǎo)致病毒易于被HSV抗體清除。
實(shí)施例13: gC-l造成體內(nèi)的毒力
在鼠側(cè)腹部模型中，病毒從接種部位播散至DRG內(nèi)的神經(jīng)元，復(fù)制并播 散至鄰近的神經(jīng)元，然后回到皮膚產(chǎn)生帶狀(帶狀皰疹樣)分布病灶。在補(bǔ)體完 好的小鼠中，具有C3b結(jié)合缺陷的HSV-l突變體毒株(NS-gCAC3; A275-367) 引起的側(cè)腹部接種部位和帶狀皰疹樣部位的病變比WT病毒輕，而在C3KO 小鼠中，接種部位和帶狀皰疹樣部位的疾病均與WT病毒相當(dāng)。
為了確定原發(fā)性(急性)感染過程中g(shù)C在病毒感染DRG中所起的作用， 通過在側(cè)腹部刮擦接種5 x 105 PFU的WT病毒(NS)或NS-gCAC3而感染 Balb/C小鼠，其中NS-gCAC3是HSV-l突變體病毒，其缺乏gC-l (AA 275-367) 且不結(jié)合C3b。感染后第3和4天，小鼠被安樂死，收集DRG并滴定組織的 感染性病毒(圖15)。到第4天，從DRG回收到3個1og,。值的WT病毒，但 沒有檢測到gC突變體病毒。將NS-gCAC3的接種效價(jià)升高至3xl06 PFU并在 第5天與以5 x 105 PFU接種的NS相比。以較大的量接種時，在DRG中檢測 到了 NS-gCAC3;但其效價(jià)仍比NS低1000倍，說明gC至少提供了增大三個 數(shù)量級的保護(hù)作用，使得病毒能夠感染DRG。
因此，在所使用的條件下，補(bǔ)體解釋了DRG感染的減少，而gC介導(dǎo)的 免疫逃避解釋了 gC-l促成毒力。實(shí)施例14: gC-2促成HSV-2在體內(nèi)的毒力
為了確定HSV-2 gC在體內(nèi)保護(hù)病毒免遭補(bǔ)體攻擊中的作用，補(bǔ)體完好的 C57B1/6或C3KO小鼠通過側(cè)腹部刮擦接種5 x 105 PFU WT HSV-2毒株2.12 或gC-2 null突變體2.12-gCnu11，然后在感染后3-7天對接種和帶狀皰疹樣部 位疾病評分。改進(jìn)評分系統(tǒng)以區(qū)分疾病譜嚴(yán)重端的動物，因?yàn)镠SV-2引起的 側(cè)腹部疾病比HSV-1更加嚴(yán)重。在接種部位，評分范圍是0-3，其中0代表 無疾病，1代表發(fā)紅或孤立的病變，2代表潰瘍，而3代表具有組織壞死的區(qū) 域。在帶狀皰疹樣部位，評分范圍為0-4，其中0代表無疾病，l代表孤立的 病變，2代表融合的病變，3代表潰瘍，而4代表具有組織壞死的區(qū)域。在補(bǔ) 體完好的小鼠中，2.12-gCnull的疾病評分與2.12相比顯著降低(圖16A)，但 在C3KO小鼠中則與WT病毒相當(dāng)(圖16B)。
因此，HSV-2gC在體內(nèi)介導(dǎo)了免疫逃避，包括逃避補(bǔ)體。
實(shí)施例15:以gE-l免疫誘導(dǎo)的抗體結(jié)合gE并阻斷gE免疫逃避結(jié)構(gòu)域 材料和方法 細(xì)胞培養(yǎng)物和病毒抹
COS-l生長在DMEM培養(yǎng)基中，37°C， 5%(^02的濕化培養(yǎng)箱，培養(yǎng)基 補(bǔ)充了 10%熱滅活的胎牛血清，20ng/ml慶大霉素和20mMHEPES(pH7.3)。 以HSV-1野生型毒株，即NS，感染細(xì)胞。使用非洲綠猴腎(Vero)細(xì)胞制備病
毒集合物。
枸走bac-gE24-224、 bac-gE225-398和bac-gE24-409為素 采用ThermalAce DNA聚合酶(Invitrogen Corp., Carlsbad, CA)從 pCMV3-gE中PCR擴(kuò)增gE AA 24-224、 225-398和24-409，構(gòu)建桿狀病毒 bac-gE24-224、 bac-gE225-398和bac-gE24-409。將6組氨酸-標(biāo)簽摻入終止密 碼子前方的3'引物中。分別在5'和3'引物上引入BamHl和Pstl序列，并使用 快速DNA連接試劑盒(Roche Diagnostics, Indianapolis, IN)將BamHl-Pstl片段 克隆入pVT-Bac。這一亞克隆策略將gE24-224、 gE225-398和gE24-409序列 置于蜜蜂毒素信號序列的立即3'處，并處于桿狀病毒多角體蛋白 (baculopolyhedrin)啟動子的控制下。以pVT-Bac構(gòu)建體和Baculogold DNA (PharMingen, San Diego, CA)共轉(zhuǎn)染Sf9昆蟲細(xì)胞(Gibco BRL， Grand Island,NY)，產(chǎn)生bac-gE24-224、 bac-gE225-398和bac-gE24-409病毒。 gE24-224、 gE225-398和gE24-409的純化和墨走
桿狀病毒首先在Sf9昆蟲細(xì)胞中生長傳代3次，然后生長在H5昆蟲細(xì)胞 (Gibco BRL)中以便在第4代獲得更高產(chǎn)量的蛋白表達(dá)。通過免疫印跡測定來 自被感染的H5細(xì)胞的150 ml上清液中的蛋白表達(dá)，并用于純化蛋白。使上 清液通過鎳柱(QIAGEN Inc., Valencia, CA)，并以50-250 mM咪唑洗脫。使用 Ultrafree-15⑧離心過濾裝置(Millipore Corp., Bedford, MA)濃縮洗脫的片段，并 在4-15% SDS-PAGE上進(jìn)行鑒定，使用GelCode Blue Stain Reagent (Pierce)。 純化蛋白的樣品在4-15% SDS-PAGE上電泳，轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜，使用小 鼠抗His標(biāo)簽單克隆抗體(MAb) 1BA10 (該抗體識別gE序列的AA 103-120) 或針對gE AA 1-409的兔多克隆抗體R575進(jìn)行探測。
以gE片段逸行免度
給5只8-9周齡雌性Balb/C小鼠(Charles River Laboratories, Wilmington, MA)腹腔內(nèi)注射10嗎純化的gE24-224、 gE225-398或gE24-409進(jìn)行免疫， 給3只小鼠注射PBS作為對照。初始免疫使用完全弗氏佐劑，而加強(qiáng)注射使 用不完全弗氏佐劑，間隔10至14天。第3-5次免疫后2周收集血清。以純化 的gE24-224、gE225畫398或gE24畫409 (COCALICO Biologicals， Inc., Reamsto猶， PA)免疫2只兔子，第4-6次免疫后收集血清。
ELISA拾測抗體
以Dulbecco磷酸緩沖鹽(DuPBS) (pH 7.1)將純化的gE24-224、 gE225-398 和gE24-409片段稀釋至2 pg/ml，使用200 ng包被Covalink NH 96孔-微滴 定板(Nalge Nunc International, Naperville, IL)。包被的板在4°C溫育過夜并以 DuPBS中的5% (w/v)去脂乳在37°C封閉2小時。IgG在DuPBS和0.1% BSA 中稀釋至2 jig/100 W。在DuPBS和0.01% BSA中制備1:1000稀釋的過氧化 物酶(HRPO)-綴合的、親和純化的驢抗兔IgG(H+L)或綿羊抗小鼠IgG(H+L) (Amersham Life Science, Piscataway， NJ)。通過加入緩沖液中的1 mg/ml ABTS (Roche, Mannheim, Germany)在室溫反應(yīng)10分鐘，使用ELISA讀板器(Dynatech, Chantilly， VA)測定405 nm處的光密度(OD)。
d式細(xì)應(yīng)術(shù)測走
確定抗體是否阻斷IgG Fc結(jié)合于HSV-1感染的細(xì)胞的測定法包括兩個部 分；首先測定抗體是否結(jié)合于HSV-1感染的細(xì)胞，然后確定該結(jié)合的抗體是否阻斷生物素標(biāo)記的非免疫人IgG結(jié)合于HSV-1 FcYR。對于抗體結(jié)合，以 M.O.I為2的野生型病毒感染COS-1細(xì)胞16小時，使用細(xì)胞消化液(Life Technologies Inc.， Rockville， MD)分散細(xì)胞，并以0.05 U神經(jīng)氨酸酶(Sigma Chemical Co., St. Louis，MO)處理，后者增強(qiáng)IgG Fc的結(jié)合。使用抗小鼠或兔 IgG或抗兔IgG F(ab')2片段的異硫氰酸熒光素(FITC)綴合的F(ab')2片段測定 IgG抗體與HSV-1感染的細(xì)胞表面的結(jié)合。以1%多聚甲醛固定細(xì)胞并以 FACScan流式細(xì)胞術(shù)(Becton-Dickinson， San Jose， CA)分析。以平均熒光強(qiáng)度 (MFI)反映抗體的結(jié)合。對于測定阻斷IgG結(jié)合的測定方法，將神經(jīng)氨酸酶處 理的HSV-1感染的細(xì)胞與IgG或F(ab')2片段溫育，然后加入10嗎的生物素 標(biāo)記的非免疫人IgG，后者可通過使用抗生蛋白鏈菌素-及-藻紅蛋白(PE) (Sigma)來檢測。如下計(jì)算阻斷百分?jǐn)?shù):((無阻斷抗體的MFI-有阻斷抗體的MFI) /無阻斷抗體的MFI)x100。
結(jié)果
在桿狀病毒內(nèi)產(chǎn)生gE片段。為了確定gE免疫是否能夠誘導(dǎo)通過F(ab')2 結(jié)構(gòu)域結(jié)合于gE的抗體，制備了 3個gE片段，gE24-224、 gE225-398和 gE24-409，它們幾乎跨越了整個gE胞外結(jié)構(gòu)域。gE225-398片段跨越IgG Fc 結(jié)構(gòu)域的大部分或者或許是全部IgG Fc結(jié)構(gòu)域。gE24-409含有每一較小片段 中所包括的序列。
感染桿狀病毒的細(xì)胞的上清液產(chǎn)生6-8 mg/L的片段gE24-224、gE225-398 和gE24-409,它們經(jīng)鎳柱純化，濃縮至1 mg/ml。經(jīng)GelCode Blue⑧在 SDS-PAGE上染色證實(shí)，純度> 95%。gE24-224和gE24-409片段與抗His MAb、 抗gE MAb 1BA10和兔多克隆抗體R575反應(yīng)。片段gE225-398與抗His MAb、 兔多克隆抗體R575反應(yīng)，且如所預(yù)期的那樣，不與MAblBA10反應(yīng)，后者 識別103和120之間的AA序列。
以桿狀病毒gE免疫小鼠。為了確定所引發(fā)的抗體是否阻斷IgG Fc結(jié)合 于HSV-1 FcyR，以gE24-224、 gE225-398、 gE24-409免疫小鼠，或小鼠被假 免疫，作為對照。以gE24-224和gE225-398第5次免疫之后或以gE24-409 第3次免疫之后收集小鼠血清，通過ELISA測定針對相應(yīng)免疫原的抗體效價(jià)。 免疫的小鼠產(chǎn)生了與免疫用抗原反應(yīng)的抗體，假免疫的小鼠則沒有。針對 gE24-409片段的抗體水平最高(圖17)。使用小鼠抗體阻斷HSV-1 FcyR。感染后16小時進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)測定以 評價(jià)抗體是否結(jié)合感染HSV-1的細(xì)胞上表達(dá)的gE。來自用gE24-224和 gE24-409免疫的小鼠的抗體結(jié)合于gE (圖18A),而來自用gE225-398免疫的 小鼠的抗體展現(xiàn)出較低水平的結(jié)合。不同于人類或兔的IgG，鼠IgGFc不結(jié) 合HSV-lFcyR;因此，小鼠抗體的結(jié)合只能是通過IgG F(ab')2結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)的。 因此，感染細(xì)胞上表達(dá)的gE結(jié)合由gE24-224和gE24-409引發(fā)的抗體的F(ab')2 結(jié)構(gòu)域，且與gE225-398相比，結(jié)合程度較低。在所采用的統(tǒng)條件下，要么 是表達(dá)于感染細(xì)胞上的gE225-398表位的構(gòu)象不同于桿狀病毒片段內(nèi)的gE 構(gòu)象，要么是該表位在感染的細(xì)胞上是隱藏的。
測試來自免疫的小鼠的未稀釋血清阻斷生物素標(biāo)記的非免疫人IgG與 HSV-1 FqR結(jié)合的能力。由gE24-224和gE24-409引發(fā)的抗體阻斷了 HSV畫1 FcyR (阻斷中位值分別為76%和80%)，而針對gE2M-398的抗體顯示出幾乎 沒有阻斷(阻斷中位值為17%)(圖18B)。因此，針對gE24J24和gE24409的 抗體通過它們的F(ab')2結(jié)構(gòu)域結(jié)合gE，并阻斷IgG Fc與HSV-1 FqR的結(jié)合。
實(shí)施例16:確定HSV-1 gD和gC的有效免疫劑量和方案 材料和方法
Balb/C小鼠腹腔接種3劑gD (10納克/劑)加或不加gC (10微克(嗎)/劑)或 3劑gD (50納克/劑)加或不加gC (10 pg/劑)，以14天的間隔注射。首次接種 使用弗氏完全佐劑，后兩次接種使用弗氏不完全佐劑。假接種的小鼠(OgD或 0 gC)僅接受佐劑。三次接種后取血清，通過ELISA分析抗gD和抗gC抗體 應(yīng)答。如實(shí)施例所述進(jìn)行玫瑰花結(jié)抑制試驗(yàn)。
結(jié)果
接種50 ng的gD但不接種gC產(chǎn)生了強(qiáng)抗gD抗體應(yīng)答，當(dāng)10嗎的gC 與gD—起施用時，應(yīng)答降低(圖19)。為了增強(qiáng)抗gD應(yīng)答，給小鼠接種第4 劑50nggD，無gC。兩周后收集血清，分析針對gD和gC的抗體應(yīng)答。第4 劑gD顯著增強(qiáng)了抗gD抗體應(yīng)答(圖20A，最右側(cè)條形圖)。此外，第4劑之 后誘導(dǎo)的gC抗體能夠阻斷C3b結(jié)合，因?yàn)橄鄬τ诩倜庖呓M而言，對玫瑰花結(jié) 形成的抑制達(dá)到85-90% (圖20B)，進(jìn)一步證實(shí)了該疫苗方案的效果。
因此，以重組gC +第二HSV抗原進(jìn)行接種，繼以單獨(dú)接種第二抗原，是一種誘導(dǎo)抗HSV抗體應(yīng)答的有效方法?；蛘?，gC蛋白與所述第二抗原可
施用于分開的部位或在分開的時間施用。
實(shí)施例17:使用CpG+鋁鹽作為gD + gC的佐劑 材料和實(shí)驗(yàn)方法
給小鼠接種3次(間隔14天)，每次接種2嗎的gC (濃度比前面使用弗氏 佐劑的情況低5倍)，每次接種50嗎的CpG (ODN no. 1826)，以及鋁鹽 (Alhydragel (氫氧化鋁凝膠佐齊U) Accurate Chemical and Scientific Corp., Westbury NY, 115卯)(每昭接種蛋白質(zhì)使用該鋁鹽25嗎，最終的量為50嗎 鋁鹽)。第2和3次接種后收集血清。
結(jié)果
測試gC+鋁鹽+CpG寡核苷酸疫苗引發(fā)抗gC抗體的能力。經(jīng)測定，疫苗 在第2和3次接種后均引發(fā)強(qiáng)抗體應(yīng)答(圖21A)。此外，抗血清顯示出能夠有 效阻斷C3b結(jié)合部位形成玫瑰花結(jié)(圖21B)。
因此，重組HSV蛋白與鋁鹽+CpG寡核苷酸疫苗相組合的免疫接種是引 發(fā)抗gC抗體的有效方式。此外，與使用其他佐劑相比，重組HSV蛋白與鋁 鹽+ CpG寡核苷酸聯(lián)合使得能夠以較低的抗原劑量實(shí)現(xiàn)有效的免疫接種。
實(shí)施例18:聯(lián)合gC-2/gD-2疫苗比僅含有g(shù)D-2的疫苗產(chǎn)生更優(yōu)越的保護(hù) 材料和方法
如實(shí)施例2-3就gC-l/gD-l疫苗所述的那樣，給小鼠施用含有g(shù)C-2和gD-2 (例如，具有C-末端6 His標(biāo)簽的gC-2的AA 27-426和具有C-末端6 His標(biāo)簽 的gD-2的AA 26-306)的聯(lián)合疫苗。如實(shí)施例14所述評價(jià)毒力。給陰道內(nèi)感 染5xl05HSV-2毒株2.12的小鼠施用250 ng的gD-2和5昭的gC-2。對小鼠 的存活率和陰道病變進(jìn)行評分。攻擊后1-11天進(jìn)行陰道拭子以檢查病毒效價(jià)， 并在攻擊后第5天評價(jià)免疫是否減少了神經(jīng)節(jié)的HSV-2感染。
結(jié)果
比較聯(lián)合gC-2/gD-2疫苗和僅含有g(shù)D-2或僅含有g(shù)C-2的疫苗賦予抗 HSV-2保護(hù)作用的能力。聯(lián)合疫苗產(chǎn)生的保護(hù)作用優(yōu)于gD-2或gC-2疫苗。實(shí)施例19:聯(lián)合gC-l/gD-l疫苗預(yù)防感染HSV-1的對象的復(fù)發(fā)性感染
在小鼠側(cè)腹部模型中評價(jià)聯(lián)合gC-l/gD-l疫苗(例如實(shí)施例2-3所述的疫 苗)預(yù)防復(fù)發(fā)性HSV-1感染(例如通過潮紅的出現(xiàn)而評價(jià))的能力。感染后，以 gC-l/gD-l疫苗或僅含有g(shù)C-l或僅含有g(shù)D-l的疫苗對小鼠進(jìn)行多達(dá)5次免疫， 或?qū)π∈筮M(jìn)行假免疫，然后監(jiān)測復(fù)發(fā)性感染。認(rèn)為聯(lián)合gC-l/gD-l疫苗產(chǎn)生的 保護(hù)作用優(yōu)于gC-l或gD-l疫苗。
實(shí)施例20:聯(lián)合gC-2/gD-2疫苗預(yù)防感染HSV-2的對象的復(fù)發(fā)性感染
評價(jià)聯(lián)合gC-2/gD-2疫苗(例如實(shí)施例2-3所述的疫苗)預(yù)防復(fù)發(fā)性HSV-2 感染(例如通過潮紅的出現(xiàn)而評價(jià))的能力。感染后，以gC-2/gD-2疫苗或僅含 有g(shù)C-2或僅含有g(shù)D-2的疫苗對小鼠進(jìn)行多達(dá)5次免疫，或?qū)π∈筮M(jìn)行假免 疫，然后監(jiān)測復(fù)發(fā)性感染。認(rèn)為聯(lián)合gC-2/gD-2疫苗產(chǎn)生的保護(hù)作用優(yōu)于gC-2 或gD-2疫苗。
實(shí)施例21: gE-l/gD-l疫苗具有免疫原性并具有抗HSV-1感染的保護(hù)性 材料和方法
如實(shí)施例2-3禾tl 13就gC-l/gD-l疫苗所述的那樣，給小鼠施用聯(lián)合 gE-l/gD-l疫苗(例如，具有C-末端6 His標(biāo)簽的gE-l的AA 24-409和具有C-末端6 His標(biāo)簽的gD-l的AA 26-306)，并評價(jià)其免疫原性。
結(jié)果
比較聯(lián)合gE-l/gD-l疫苗與僅含有g(shù)E-l或僅含有g(shù)D-l的疫苗的免疫原 性。聯(lián)合疫苗的免疫原性優(yōu)于gE-l或gD-l疫苗。隨后，比較疫苗賦予抗HSV-l 的保護(hù)作用的能力。認(rèn)為聯(lián)合疫苗產(chǎn)生的保護(hù)作用優(yōu)于gE-l或gD-l疫苗。
隨后，比較聯(lián)合gE-l/gD-l/gC-1疫苗與gE-l/gD-l和gD-l/gC-1疫苗的免 疫原性。認(rèn)為gE-l/gD-l/gC-1聯(lián)合疫苗的免疫原性優(yōu)于gE-l/gD-l和gD-l/gC-1 疫苗。隨后，比較疫苗賦予抗HSV-1的保護(hù)作用的能力。認(rèn)為gE-l/gD-l/gC-1 聯(lián)合疫苗產(chǎn)生的保護(hù)作用優(yōu)于gE-l/gD-l和gD-l/gC-1疫苗。
實(shí)施例22: gE-2/gD-2亞單位疫苗具有抗HSV-2感染的保護(hù)作用比較聯(lián)合gE-2/gD-2疫苗(例如，具有C-末端6 His標(biāo)簽的gE-2的AA 24-409和具有C-末端6 His標(biāo)簽的gD-2的AA 26-306)與僅含有g(shù)E-2或僅含 有g(shù)D-2的疫苗的免疫原性。認(rèn)為聯(lián)合疫苗的免疫原性優(yōu)于gE-2或gD-2疫苗。 隨后，比較疫苗賦予抗HSV-2的保護(hù)作用的能力。認(rèn)為聯(lián)合疫苗產(chǎn)生的保護(hù) 作用優(yōu)于gE-2或gD-2疫苗。
隨后，比較聯(lián)合gE-2/gD-2/gC-2疫苗與gE-2/gD-2和gD-2/gC-2疫苗的免 疫原性。認(rèn)為gE-2/gD-2/gC-2聯(lián)合疫苗的免疫原性優(yōu)于gE-2/gD-2和gD-2/gC-2 疫苗。隨后，比較疫苗賦予抗HSV-2的保護(hù)作用的能力。認(rèn)為gE-2/gD-2/gC-2 聯(lián)合疫苗產(chǎn)生的保護(hù)作用優(yōu)于gE-2/gD-2和gD-2/gC-2疫苗。
實(shí)施例23: HSV-2 gC-2亞單位疫苗在鼠側(cè)腹部和陰道HSV-2模型中具有抗 HSV-2感染的保護(hù)作用 柏:I腹部棋型
以0,5、 1 、 2、或5昭的gC-2與CpG (50 ^g/小鼠)和鋁鹽(25嗎/嗎蛋白) 通過腓腸肌肌注(IM)免疫Balb/C小鼠，或以CpG (50嗎/小鼠)和鋁鹽(25嗎/嗎) 但無gC-2進(jìn)行假免疫，IM進(jìn)行3次，間隔為兩周。第3次免疫后14天，通 過在剔毛并化學(xué)脫毛的側(cè)腹部刮擦接種4xl05 PFU的HSV-2毒株2.12攻擊小 鼠。記錄0-14天的存活率，并在3-14天對動物接種部位和帶狀皰疹樣部位的 疾病嚴(yán)重程度進(jìn)行評分(N^5只小鼠/組)。用于接種部位和帶狀皰疹樣部位的 疾病的評分系統(tǒng)與抗gC-l被動轉(zhuǎn)移試驗(yàn)中所述一樣。
卩月道棋型
Balb/C小鼠在腓腸肌肌注CpG (# 1826, Coley Pharmaceuticals Group) (50 嗎/小鼠)和鋁鹽(25嗎/嗎蛋白)(Accurate Chemicals)進(jìn)行假免疫，或以1、 2、 或5 pg的gC-2與CpG和鋁鹽免疫，間隔為兩周。各組的5只動物均免疫3 次， 一組例外，其中以5嗎的劑量免疫2次[標(biāo)記為5嗎(2x)，以區(qū)別于標(biāo)記 為5 )ig(3x)的一組]。第3次免疫后第9天或5嗎(2x)免疫后第23天，給小鼠 IP注射Depo Provera (Pfizer提供的150 mg注射用長效醋酸甲羥孕酮的水性 懸液；2mg/小鼠)以便同步化發(fā)情周期。5天后，以2xl05 PFU的HSV-2毒株 2.12陰道內(nèi)攻擊小鼠。
觀察動物在攻擊后0-14天的死亡率，以及攻擊后3-14天的疾病評分。在 用于陰道病變的評分系統(tǒng)中，下列各項(xiàng)每項(xiàng)1分發(fā)紅或腫脹、排出物、陰道和肛周區(qū)域脫毛、和壞死。每日最高的評分為4分。在實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)前死亡的 動物被賦予研究過程中最后一次評價(jià)的分值。從l-ll天每日進(jìn)行陰道拭子檢
査。將拭子置于1 ml DMEM中，通過在Vero細(xì)胞上進(jìn)行噬斑分析測定病毒 效價(jià)。
結(jié)果
對于側(cè)腹部接種，各個gC-2免疫劑量與假免疫小鼠相比均保護(hù)小鼠抵抗 死亡。不過，僅在5嗎劑量組(所測試的最大劑量)觀察到100%的存活率(圖 22)。
圖23說明，與假免疫小鼠相比，經(jīng)0.5嗎、1嗎、2 [ig和5嗎的gC-2 免疫的小鼠在攻擊后3-14天接種部位和帶狀皰疹樣部位的疾病評分降低，其 中5嗎劑量組帶狀皰疹樣部位的疾病評分降低最多(比較劑量組與假免疫小鼠 接種部位和帶狀皰疹樣部位的曲線下面積，P<.01)。
對于陰道內(nèi)接種，假免疫小鼠全部死亡，而以gC-2 5路(3x)免疫提供了 最佳的抗死亡保護(hù)作用。所有以gC-2 5嗎(2x)免疫的小鼠均死亡，不過，與 假免疫小鼠相比，死亡的時間倍延遲。與假免疫小鼠相比，以1或2昭免疫 3次的小鼠存活時間略長，死亡較少，但保護(hù)作用沒有g(shù)C-2 5(ig(3x)組那么好 (圖24)。
圖25給出了以2xl05 PFU的HSV-2毒株2.12陰道內(nèi)攻擊的假免疫小鼠 或gC-2免疫的小鼠的疾病評分。假免疫組的所有小鼠在第8天時均己經(jīng)死亡; 因此，將末次評價(jià)的評分用于第9-14天。以l昭或2嗎gC-2免疫幾乎沒有提 供對抗陰道疾病的保護(hù)作用，而以gC-2 5嗎(3x)免疫提供了明顯的保護(hù)作用， P<.01。
攻擊后1-11天每日獲取陰道拭子(圖26)。所示結(jié)果為每組3只小鼠的平 均效價(jià)。以gC-2免疫使得攻擊后第1天的陰道效價(jià)降低了 1-2個logu)，但在 隨后的天數(shù)中則幾乎沒有作用。
實(shí)施例24: HSV-2 gD-2亞單位疫苗在鼠側(cè)腹部和陰道HSV-2模型中具有抗 HSV-2感染的保護(hù)作用
材料和方法
側(cè)屣部模型Balb/C小鼠被假免疫或如前面就gC-2所述的那樣通過3次腓腸肌IM進(jìn) 行免疫，不同之處在于gD-2的劑量為10、 25、 50、或100ng，并與CpG(50 1ig/小鼠)和鋁鹽(25昭4ig蛋白)聯(lián)合。以4x 105 PFU/10ml的HSV-2毒株2.12 攻擊小鼠。每組接種5只小鼠。
陰道棋型
以50、 100、或250 ng的gD畫2 IM 3次(3x)或以250 ng的gD-2 IM 2次(2x) 免疫Balb/C小鼠。gD-2與CpG (50 )ig/小鼠)和鋁鹽(25 pg/嗎蛋白)聯(lián)合，然后 接種2xl05 PFU的HSV-2毒株2.12。以Depo Provera⑧處理小鼠，并如前面就 gC-2免疫所述那樣進(jìn)行攻擊，評價(jià)存活率和疾病嚴(yán)重程度。每一組包括5只 動物。攻擊后l-ll天每日獲取陰道拭子，每組3只小鼠。
結(jié)果
對于側(cè)腹部接種，在以100nggD-2免疫的小鼠中觀察到最高的存活率， 然后是以50 ng免疫的小鼠(圖27)。
以10 ng和25 ng劑量的gD-2免疫對接種部位或帶狀皰疹樣部位疾病提 供了輕微的保護(hù)；但50 ng和100 ng劑量組的疾病評分顯著降低(假免疾組與 50 ng劑量組在接種部位和帶狀皰疹樣部位相比P < .01，假免疫組與100 ng 劑量組在接種部位和帶狀皰疹樣部位相比P < .001)(圖28)。
對于陰道內(nèi)接種，假免疫組小鼠在第9天后無一存活(圖29)。以50ng、 100 ng和250 ng的gD-2免疫2次的組提供了一些保護(hù)作用；而250 ng 3x提 供了完全的抗死亡保護(hù)作用。
僅以gD-2 250 ng 3x免疫的小鼠得到了顯著的抗陰道疾病保護(hù)作用(假免 疫與gD-2 250 ng 3x的曲線下面積相比P < 0.001)(圖30)。
以gD-2 250 ng 3x免疫使得攻擊后1-7天的陰道病毒效價(jià)降低了 1 log10 (P< 0.001，與假免疫小鼠相比)，而其他劑量與假免疫小鼠相比作用較小(p值 無顯著差異)(圖31)。
本實(shí)驗(yàn)揭示了能夠保護(hù)小鼠免于HSV-2介導(dǎo)的死亡以及在HSV-2的側(cè)腹 部和陰道模型中保護(hù)小鼠免于接種部位和帶狀皰疹樣部位疾病的gC-2 (5 pg) 和gD-2 (250ng)免疫劑量。
實(shí)施例25:測試人抗gC-2抗體阻斷C3b結(jié)合于gC-2的能力采用ELISA方法確定gC-2疫苗(例如實(shí)施例2-3所描述的那些)引發(fā)的人 抗體是否阻斷C3b結(jié)合于gC-2。以400 ng純化的C3b包被96-孔板過夜，4°C。 將Bac-gC2(426t)蛋白(gC-2 AA 27-426) (300 ng)與來自用bac-gC2(426t)免疫的 人的IgG溫育1小時，4°C。將IgG-gC-2混合物加至C3b包被的3個復(fù)孔中， 使用兔抗gC-2 IgG檢測結(jié)合的gC-2。
實(shí)施例26: CpG寡核苷酸使得較小劑量的重組HSV糖蛋白成為可能
測試CpG ODN是否能夠使得較小劑量的HSV糖蛋白成為可能。給小鼠 施用10嗎的gC-l (例如按照前面實(shí)施例所述)，并與2嗎gC-l 、 10嗎gC-l + ODN 1826、和2嗎gC-l + ODN 1826比較它們誘導(dǎo)產(chǎn)生阻斷gC-l的免疫逃 避的抗體的能力。預(yù)期CpG ODN降低抑制免疫逃避所需的HSV gC的劑量。
實(shí)施例27:在感染fflV的對象中由HSV糖蛋白gC-和gE-介導(dǎo)的免疫逃避 材料和方法 清分窩
從University of Pennsylvania Genter for AIDS Research的Clinical Core Laboratory取得來自不同HIV疾病階段(CD4計(jì)數(shù)< 200/|il， 200-500/^1，>500~1) 的HIV對象的血清。HerpeSelectTM 1和2 ELISA IgG (Focus Technologies, Cypress, CA)是一種基于gG的測定法，可檢測類型特異性IgG抗體，通過該 測定法檢測血清中針對HSV-1和HSV-2的抗體。對象中75%為男性；56% 為非洲裔美國人，35%為高加索人，7%為西班牙人，2%為其他；平均年齡41 歲。HIV感染患病風(fēng)險(xiǎn)因素包括51%為男性同性戀性行為者，5%為靜脈吸 毒者，41%為異性戀，3%未知。HIV血清陰性血清取自參與GlaxoSmithKline HSV-2 gD2疫苗臨床試驗(yàn)的健康志愿者。入選對象為在接受gD2疫苗或僅佐 劑(安慰劑組)之前對HIV、 HSV-1和HSV-2血清陰性。
IgG純化
使用HiTrapTM蛋白G柱根據(jù)生產(chǎn)商的說明(Amersham Biosciences, Uppsala, Sweden)從血清中純化患者的IgG。集合含有蛋白質(zhì)的級份，用PBS 透析，4°C，濃縮、分裝并存放于-20。C。兔IgG純化自免疫前(pre-immune) 兔血清或純化自接種了純化的桿狀病毒蛋白gB、 gD、或gH/gL的兔。
經(jīng)典樸體速徑逸血活性(CHW)測定測定HIV對象(CD4 T-細(xì)胞計(jì)數(shù)< 2004il、 200-5004d和> 500 1)和未感 染HIV的對照的血清總?cè)苎a(bǔ)體活性(CH50)。將系列稀釋的血清與抗體致敏 的綿羊紅細(xì)胞在96-孔微滴定板中溫育1小時，37。C。將板120Xg離心3分 鐘，上清液轉(zhuǎn)移至新的板中，以分光光度法在405nm測定溶血程度。
抗體和補(bǔ)體中和測定
將大約10"筮斑形成單位(PFU)的純化的病毒與IgG、 HSVH/2-血清、以 EDTA處理以便滅活補(bǔ)體的HSV 1+/2-血清、或PBS溫育1小時，37°C。通 過在Vero細(xì)胞上進(jìn)行噬斑分析來確定殘留的病毒效價(jià)。根據(jù)當(dāng)病毒與PBS和 EDTA處理的血清(僅抗體)、或PBS和無EDTA的血清(抗體和補(bǔ)體)溫育時的 效價(jià)差來計(jì)算抗體單獨(dú)介導(dǎo)的或抗體和補(bǔ)體介導(dǎo)的中和作用。
結(jié)果
在入選Center for AIDS Research Clinical Core數(shù)據(jù)庫的前133個對象中測 試血清中針對HSV-1和HSV-2的抗體，從這些對象可獲得血清和CD4 T-細(xì) 胞計(jì)數(shù)以便鑒定出共感染1^丫-1(1^￥1+/2-)的111￥對象?？傮w而言，39%的 CD4 T國細(xì)胞計(jì)數(shù)〉500/^1， 28% 200-500/|xl， 33% < 200/pl。 69%為HSV-1血 清陽性(41% HSV 1+/2+和28% HSV 1+/2-),而64%為HSV-2血清陽性(41% HSV 1+/2+和23% HSV 1-/2+)。 8%的對象為HSV-1和HSV-2兩者血清陰性。 選擇HSV 1+/2-對象的血清進(jìn)行進(jìn)一步的研究。
測定了沒有感染HIV的HSV 1+/2-對象或具有不同HIV疾病階段的 HIV/HSV-1共感染的對象的總?cè)苎匝逖a(bǔ)體(CH50)水平(圖32A)。即便是病 情嚴(yán)重的HIV/HSV-1共感染的對象也保持了血清總?cè)苎匝a(bǔ)體水平。
隨后，使用經(jīng)EDTA處理以滅活補(bǔ)體的1%血清來測定抗體介導(dǎo)的中和作 用。在所有HIV疾病階段，包括CD4T細(xì)胞〈200/pl的對象，抗體中和了 WT 病毒和gC/gE突變體病毒(圖32B，灰色條形)。
使用1%血清和活性補(bǔ)體(無EDTA處理)比較了抗體和補(bǔ)體在中和WT病 毒和gC/gE突變體病毒方面的作用。在HIV陰性對照和所有CD4 T-細(xì)胞計(jì)數(shù) 水平的HIV感染對象中，對gC/gE突變體病毒的中和作用均高于WT病毒(圖 32B，黑色條形)。這些結(jié)果是出乎預(yù)料的，因?yàn)橄惹暗难芯繄?bào)道了 gC和gE 通過抑制補(bǔ)體活化而抑制病毒的中和(Lubinski et al.， Seminars in Cell & Developmental Biology 9:329-37; Nagashunmugam et al., J Virol 72:5351-9)。因此，進(jìn)行了進(jìn)一步的研究以評價(jià)gC和gE通過何種其他機(jī)制介導(dǎo)免疫逃避。
實(shí)施例28:病毒糖蛋白上的HSV gC和gE表位通過阻斷抗體接近參與病毒進(jìn) 入的糖蛋白而之增強(qiáng)免疫逃避效應(yīng)
材料和方法
細(xì)胞和病秦
非洲綠猴腎細(xì)胞(Vero)生長在DMEM培養(yǎng)基中，其中補(bǔ)充了 10%熱滅活 的胎牛血清，2 mM L-谷氨酰胺，10 mM HEPES (pH 7.3), 20 |ig/ml慶大霉素和1 嗎/ml兩性霉素B (Life Technologies, Rockville, MD)。以2-5的感染復(fù)數(shù)感染 Vero細(xì)胞制備純化的病毒集合物。收集感染后24小時的無細(xì)胞病毒上清液離 心至5°/。-70%蔗糖梯度上。分離含病毒級份并以含Ca2+和Mg2+的Dulbecco 磷酸緩沖鹽(PBS)透析，分裝、存放于-70。C。
WT毒株HSV-1NS是低傳代臨床分離物，得自一名被感染的兒童。先前 已經(jīng)描述了來自該NS毒株的突變體病毒NS-gCAC3、 NS-gE339和雙突變體 NS-gCAC3,gE339。 gC突變體病毒NS-gCAC3缺失了氨基酸275至367，導(dǎo)致 不能結(jié)合C3b。 gE突變體病毒NS-gE339在gE氨基酸339處具有4個氨基酸 插入，導(dǎo)致不能結(jié)合IgGFc。 gC/gE雙突變體病毒NS-gCAC3，gE339在一個病 毒中含有g(shù)C和gE的兩種突變。
抗體和補(bǔ)體中和測走
大約IOS噬斑形成單位(PFU)的純化的病毒與集合人IgG (Michigan State Health Laboratories)溫育或使用針對純化的桿狀病毒蛋白gB、 gC、 gD、 gH/gL、 或gl的兔抗體。使用桿狀病毒表達(dá)的gl氨基酸24-264 (HMF，未發(fā)表)作為抗 原在兔中產(chǎn)生抗gl抗體。
免度印速和光密灰測走法分析
大約2 X 106 PFU的純化的病毒進(jìn)行4-15% SDS-PAGE，轉(zhuǎn)移至 Immobilon-P轉(zhuǎn)移膜(Millipore Corp., Bedford, MA)，并使用針對gB、 gC、 gD、 gE、 gH/gL、 gl和VP5的多克隆兔抗體進(jìn)行檢測。使用過氧化物酶綴合的山 羊抗兔IgG和增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法(Amersham Pharmacia, Piscataway, NJ)顯色初級 抗體。使用ScanMaker i900 (Microtek Lab Inc., Carson, CA)進(jìn)行光密度測定法 分析來比較蛋白質(zhì)水平。
病奪EL1SA大約106 PFU的純化的WT或NS-gCAC3，gE339病毒稀釋于50jil PBS， 加至Costar⑧高結(jié)合性96-孔板中，4。C溫育過夜。作為對照， 一些孔與50|Lil 無病毒的PBS溫育。以含5%乳和0.05%吐溫20的PBS室溫封閉孔2小時。 制備封閉緩沖液中的抗gB、 gD、 gH/gL的純化兔IgG或免疫前兔IgG系列稀 釋物，并以逐漸降低的濃度(從2ug至0.015ug，溶于50(^1的封閉緩沖液)添加。 將抗體在室溫溫育1小時，以含0.05%吐溫20的PBS洗滌3次，與1:1,000 稀釋于封閉緩沖液中的過氧化物酶綴合的驢抗兔IgG (Amersham Bioscience) 溫育30分鐘。板用含0.05。/。吐溫20的PBS洗漆兩次并用PBS洗滌一次，然 后加入ABTS底物(Roche)， 25分鐘后在405nm讀板。在一些實(shí)驗(yàn)中，將來自 雞的抗gD血清用于病毒ELISA。用桿狀病毒-gD構(gòu)建體免疫雞并加強(qiáng)4次， 獲得的血清作為IgY抗體的來源。通過在gD包被的板上進(jìn)行ELISA，測定到 該血清對gD具有高抗體效價(jià)。
結(jié)果
在純化的WT病毒和gC/gE突變體病毒的免疫印跡上進(jìn)行光密度分析以 評價(jià)糖蛋白的相對濃度，這些糖蛋白包括病毒進(jìn)入所必需的gB、 gD、 gH/gL。 將HSV-1殼體蛋白VP5納入分析，以確保加入到膠上的WT病毒和gC/gE突 變體病毒顆粒具有可比性。檢測到WT病毒和gC/gE突變體病毒上表達(dá)的 HSV-1糖蛋白的相對濃度存在一些差異(圖33);不過，gC/gE突變體上的gB、 gD和gH/gL的濃度略高于WT病毒，這提示更高的中和活性不是由突變體病 毒上較低濃度的靶糖蛋白引起的。
圖34A示意了 HSV-1 FqR可干擾抗體中和的可能的機(jī)制。通過結(jié)合IgG 的Fc結(jié)構(gòu)域，WT病毒上的HSV-1 FqR可防止F(ab')2結(jié)構(gòu)域與其靶抗原相 互作用(WT模型的左側(cè))。與此不同，gC/gE病毒中的gE突變消除了Fc丫R活 性，這可促進(jìn)F(ab')2結(jié)構(gòu)域與抗體靶的相互作用，導(dǎo)致更高的中和作用。
為了評價(jià)這種可能性，從HIV陰性人類供者集合IgG，并用于比較FcyR 活性具有缺陷的gE突變體病毒(NS-gE339)和具有完好的FqR但在gC中具有 突變的突變體病毒(NS-gCAC3)的中和作用。病毒與PBS或100嗎集合人IgG (作為HSV抗體的來源)溫育。抗體同等有效地中和FcYR完好的病毒和FqR 缺陷型病毒，而且對gC/gE雙突變體病毒(NS-gCAC3,gE339)甚至具有更高的 活性(圖34B)。由于gC/gE雙突變體病毒比任一其從中衍生而來的單突變體病毒被更快地中和，我們認(rèn)為gC和gE的突變均促成gC/gE突變體病毒中和抗
體具有更高的易感性。
我們隨后評價(jià)了 gC和gE突變是否將其他病毒糖蛋白上以前被遮蔽的表 位暴露于中和抗體，這可能是由病毒體包膜上的糖蛋白構(gòu)象改變所導(dǎo)致的。 進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以比較在與選擇性地與gB、 gC、 gD、 gH/gL、或gl相互作用的兔抗 體溫育后，WT病毒和gC/gE突變體病毒的中和情況。如所預(yù)料的那樣，針對 gB、 gD、 gH/gL的抗體中和了病毒，因?yàn)檫@些糖蛋白是病毒進(jìn)入所必需的； 不過，這些病毒之間的差異并不顯著。針對gC和gl的抗體不是進(jìn)入所必需 的，它們未能中和任一病毒。
由于圖32B和34B中所使用的人血清含有針對多種糖蛋白的抗體，我們 使用針對gB、 gD和gH/gL的抗體的組合來進(jìn)行中和實(shí)驗(yàn)(圖35B)。當(dāng)組合使 用時，檢測到對gC/gE突變體的中和作用比對WT病毒更強(qiáng)，這提示gC和 gE中的突變暴露了多種糖蛋白上的中和表位。無論是否將gH/gL抗體納入中 和反應(yīng)，WT病毒和gC/gE突變體病毒之間的差異均相當(dāng)，說明被封閉的表位 主要位于gB和gD上。
使用WT病毒和gC/gE突變體病毒進(jìn)行病毒ELISA以進(jìn)一步評價(jià)gC/gE 突變體病毒上的突變是否暴露了 gB、 gD和gH/gL上的表位。與WT病毒相 比，gC/gE突變體病毒結(jié)合更高濃度的gD(圖36A)、 gB (圖36B)和gH/gL (圖 24C)抗體。使用雞抗gD抗體進(jìn)行額外的實(shí)驗(yàn)。雞產(chǎn)生的IgY抗體不具有結(jié)合 Fc受體的結(jié)構(gòu)域。這些抗體被用于評價(jià)病毒FcYR在ELISA實(shí)驗(yàn)中的潛在影 響。將雞抗gD抗體加至WT病毒或gC/gE突變體病毒后，檢測到對gC/gE 突變體的結(jié)合強(qiáng)于WT病毒(圖36D)。這些結(jié)果說明抗體結(jié)合的差異的產(chǎn)生不 依賴于Fc與病毒FcYR的結(jié)合，因此支持這樣一種假設(shè)，即gC和gE阻斷病 毒糖蛋白上對于進(jìn)入所必需的表位，特別是gB和gD上的表位。
gC和gE中的突變使得抗體能夠接近病毒糖蛋白，包括gB、gD和gH/gL， 這提示W(wǎng)T病毒上的gC和gE遮蔽了病毒糖蛋白上表位，使得中和抗體不能 接近(見模型圖37)。
HIV對象在HIV感染過程中保持高水平的中和抗體和補(bǔ)體。因此，通過 亞單位疫苗阻斷gC和gE上的免疫逃避結(jié)構(gòu)域可允許內(nèi)源性抗體和補(bǔ)體更有 效地抵抗HIV患者中的HSV。
權(quán)利要求
1.一種疫苗，其包含a.重組HSV gD蛋白或其免疫原性片段；b.重組HSV gC蛋白或其片段，其中所述片段包含所述蛋白的C3b結(jié)合結(jié)構(gòu)域、備解素干擾結(jié)構(gòu)域、C5干擾結(jié)構(gòu)域、或所述C3b結(jié)合結(jié)構(gòu)域、備解素干擾結(jié)構(gòu)域或C5干擾結(jié)構(gòu)域的片段；c.重組HSV gE蛋白或其片段，其中所述片段包含AA 24-409或其片段；和d.佐劑。
2. 權(quán)利要求l的疫苗，其中所述佐劑包含含CpG的核苷酸分子、鋁鹽佐 劑、或其組合。
3. 權(quán)利要求l的疫苗，其中所述重組HSV gD蛋白或其免疫原性片段的 量為2-10微克/劑。
4. 權(quán)利要求l的疫苗，其中所述重組HSV gD蛋白或其免疫原性片段的 量為10-250納克/劑。
5. 權(quán)利要求l的疫苗，其中所述重組HSVgC蛋白或其片段的量為0.5-100微克/劑。
6. 權(quán)利要求l的疫苗，其中所述重組HSVgE蛋白或其片段的量為2-100 微克/劑。
7. 權(quán)利要求l的疫苗，其中所述重組HSV蛋白是重組HSV-1蛋白。
8. 權(quán)利要求7的疫苗，還包含重組HSV-2蛋白，所述HSV-2蛋白選自 gD2蛋白、gC2蛋白、和gE2蛋白。
9. 權(quán)利要求l的疫苗，其中所述重組HSV蛋白是重組HSV-2蛋白。
10. 權(quán)利要求9的疫苗，還包含重組HSV-1蛋白，所述HSV-1蛋白選自 gD2蛋白、gC2蛋白、和gE2蛋白。
11. 一種在對象中誘導(dǎo)抗HSV免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括給所述對 象施用權(quán)利要求1的疫苗的步驟。
12. 權(quán)利要求11的方法，還包括給所述對象施用加強(qiáng)免疫接種的步驟， 其中所述加強(qiáng)免疫接種(a)包括所述重組HSV gD蛋白或其免疫原性片段； (b)不包括重組HSVgC蛋白或其片段；和(c)不包括所述重組HSVgE蛋白或其片段。
13. 權(quán)利要求12的方法，其中所述重組HSV gD蛋白或其免疫原性片段 在所述加強(qiáng)免疫接種中的量是2-10微克/劑。
14. 一種治療、壓制、抑制對象的HSV感染或降低HSV感染的發(fā)生率的 方法，所述方法包括給所述對象施用權(quán)利要求1的疫苗的步驟。
15. 權(quán)利要求14的方法，其中所述HSV感染是HSV-1感染。
16. 權(quán)利要求14的方法，其中所述HSV感染是HSV-2感染。
17. 權(quán)利要求14的方法，其中所述HSV感染是原發(fā)性HSV感染。
18. 權(quán)利要求14的方法，其中所述HSV感染是原發(fā)性HSV感染之后的 潮紅、復(fù)發(fā)或HSV唇皰疹。
19. 權(quán)利要求14的方法，其中所述HSV感染是HSV腦炎。
20. 權(quán)利要求14的方法，其中所述HSV感染是HSV新生兒感染。
21. 權(quán)利要求14的方法，其中所述對象感染了HIV。
22. —種疫苗，其包含a. 重組HSVgD蛋白或其免疫原性片段；b. 重組HSVgC蛋白或其片段，其中所述片段包含所述蛋白的C3b結(jié)合 結(jié)構(gòu)域、備解素干擾結(jié)構(gòu)域、C5干擾結(jié)構(gòu)域、或所述C3b結(jié)合結(jié)構(gòu)域、備解 素干擾結(jié)構(gòu)域、或C5干擾結(jié)構(gòu)域的片段；禾口c. 佐劑；其中給人類對象施用所述疫苗引發(fā)抗HSV gC抗體，所述抗體阻斷相應(yīng) 于所述重組HSV gC蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。
23. 權(quán)利要求22的疫苗，其中所述佐劑包含含CpG的核苷酸分子、鋁鹽 佐劑、或其組合。
24. 權(quán)利要求22的疫苗，其中所述重組HSV gD蛋白或其免疫原性片段 的量為2-10微克/劑。
25. 權(quán)利要求22的疫苗，其中所述重組HSV gD蛋白或其免疫原性片段 的量為10-250納克/劑。
26. 權(quán)利要求22的疫苗，其中所述重組HSV gC蛋白或其片段的量為 0.5-100微克/劑。
27. 權(quán)利要求22的疫苗，其中所述重組HSV蛋白是重組HSV-1蛋白。
28. 權(quán)利要求27的疫苗，還包含重組HSV-2蛋白，所述HSV-2蛋白選自gD2蛋白、gC2蛋白、和gE2蛋白。
29. 權(quán)利要求22的疫苗，其中所述重組HSV蛋白是重組HSV-2蛋白。
30. 權(quán)利要求29的疫苗，還包含重組HSV-1蛋白，所述HSV-1蛋白選 自gD2蛋白、gC2蛋白、和gE2蛋白。
31. —種在對象中誘導(dǎo)抗HSV免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括給所述對 象施用權(quán)利要求22的疫苗的步驟。
32. 權(quán)利要求31的方法，還包括給所述對象施用加強(qiáng)免疫接種的步驟， 其中所述加強(qiáng)免疫接種(a)包括所述重組HSV gD蛋白或其免疫原性片段； 和(b)不包括重組HSVgC蛋白或其片段。
33. 權(quán)利要求32的方法，其中所述重組HSV gD蛋白或其免疫原性片段 在所述加強(qiáng)免疫接種中的量是2-10微克/劑。
34. —種治療、壓制、抑制對象的HSV感染或降低HSV感染的發(fā)生率的 方法，所述方法包括給所述對象施用權(quán)利要求22的疫苗的步驟。
35. 權(quán)利要求34的方法，其中所述HSV感染是HSV-1感染。
36. 權(quán)利要求34的方法，其中所述HSV感染是HSV-2感染。
37. 權(quán)利要求34的方法，其中所述HSV感染是原發(fā)性HSV感染。
38. 權(quán)利要求34的方法，其中所述HSV感染是原發(fā)性HSV感染之后的 潮紅、復(fù)發(fā)或HSV唇皰疹。
39. 權(quán)利要求34的方法，其中所述HSV感染是HSV腦炎。
40. 權(quán)利要求34的方法，其中所述HSV感染是HSV新生兒感染。
41. 權(quán)利要求34的方法，其中所述對象感染了 HIV。
42. —種疫苗，其包含a. 重組HSVgD蛋白或其免疫原性片段；b. 重組HSVgE蛋白或其片段，其中所述片段包含AA 24-409或其片段;和c. 佐劑，其中給人類對象施用所述疫苗引發(fā)抗HSV gE抗體，所述抗體阻斷相應(yīng)于 所述重組HSV gE蛋白的HSV蛋白的免疫逃避功能。
43. 權(quán)利要求42的疫苗，其中所述佐劑包含含CpG的核苷酸分子、鋁鹽 佐劑、或其組合。
44. 權(quán)利要求42的疫苗，其中所述重組HSVgD蛋白或其片段的量為2-10微克/劑。
45. 權(quán)利要求42的疫苗，其中所述重組HSV gD蛋白或其片段的量為 10-250納克/劑。
46. 權(quán)利要求42的疫苗，其中所述重組HSV gE蛋白或其片段的量為 2-100微克/劑。
47. 權(quán)利要求42的疫苗，其中所述重組HSV蛋白是重組HSV-1蛋白。
48. 權(quán)利要求47的疫苗，還包含重組HSV-2蛋白，所述HSV-2蛋白選 自gD2蛋白、gC2蛋白、和gE2蛋白。
49. 權(quán)利要求42的疫苗，其中所述重組HSV蛋白是重組HSV-2蛋白。
50. 權(quán)利要求49的疫苗，還包含重組HSV-1蛋白，所述HSV-1蛋白選 自gD2蛋白、gC2蛋白、和gE2蛋白。
51. —種在對象中誘導(dǎo)抗HSV免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括給所述對 象施用權(quán)利要求42的疫苗的步驟。
52. 權(quán)利要求51的方法，還包括給所述對象施用加強(qiáng)免疫接種的步驟， 其中所述加強(qiáng)免疫接種(a)包括所述重組HSV gD蛋白或其免疫原性片段； (b)不包括所述重組HSVgE蛋白或其片段。
53. 權(quán)利要求52的方法，其中所述重組HSV gD蛋白或其免疫原性片段 在所述加強(qiáng)免疫接種中的量是2-10微克/劑。
54. —種治療、壓制、抑制對象的HSV感染或降低HSV感染的發(fā)生率的 方法，所述方法包括給所述對象施用權(quán)利要求42的疫苗的步驟。
55. 權(quán)利要求54的方法，其中所述HSV感染是HSV-1感染。
56. 權(quán)利要求54的方法，其中所述HSV感染是HSV-2感染。
57. 權(quán)利要求54的方法，其中所述HSV感染是原發(fā)性HSV感染。
58. 權(quán)利要求54的方法，其中所述HSV感染是原發(fā)性HSV感染之后的 潮紅、復(fù)發(fā)或HSV唇皰疹。
59. 權(quán)利要求54的方法，其中所述HSV感染是HSV腦炎。
60. 權(quán)利要求54的方法，其中所述HSV感染是HSV新生兒感染。
61. 權(quán)利要求54的方法，其中所述對象感染了HIV。
62. —種疫苗，其包含a.重組HSVgC蛋白或其片段，其中所述片段包含所述蛋白的C3b結(jié)合 結(jié)構(gòu)域、備解素干擾結(jié)構(gòu)域、C5干擾結(jié)構(gòu)域、或所述C3b結(jié)合結(jié)構(gòu)域、備解素干擾結(jié)構(gòu)域或C5干擾結(jié)構(gòu)域的片段；b. 重組HSVgE蛋白或其片段，其中所述片段包含AA 24-409或其片段；和c. 佐劑。
63. 權(quán)利要求62的疫苗，其中所述佐劑包含含CpG的核苷酸分子、鋁鹽 佐劑、或其組合。
64. 權(quán)利要求62的疫苗，其中所述重組HSV gC蛋白或其片段的量為 0.5-100微克/劑。
65. 權(quán)利要求62的疫苗，其中所述重組HSV gE蛋白或其片段的量為 2-100微克/劑。
66. 權(quán)利要求62的疫苗，其中所述重組HSV蛋白是重組HSV-1蛋白。
67. 權(quán)利要求66的疫苗，還包含重組HSV-2蛋白，所述HSV-2蛋白選 自gD2蛋白、gC2蛋白、禾口gE2蛋白。
68. 權(quán)利要求62的疫苗，其中所述重組HSV蛋白是重組HSV-2蛋白。
69. 權(quán)利要求64的疫苗，還包含重組HSV-1蛋白，所述HSV-1蛋白選 自gD2蛋白、gC2蛋白、禾BgE2蛋白。
70. —種在對象中誘導(dǎo)抗HSV免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括給所述對 象施用權(quán)利要求62的疫苗的步驟。
71. 權(quán)利要求70的方法，還包括給所述對象施用加強(qiáng)免疫接種的步驟， 其中所述加強(qiáng)免疫接種(a)包括所述重組HSV gD蛋白或其免疫原性片段； (b)不包括所述重組HSV gE蛋白或其片段。
72. 權(quán)利要求71的方法，其中所述重組HSV gD蛋白或其免疫原性片段 在所述加強(qiáng)免疫接種中的量是2-10微克/劑。
73. —種治療、壓制、抑制對象的HSV感染或降低HSV感染的發(fā)生率的 方法，所述方法包括給所述對象施用權(quán)利要求62的疫苗的步驟。
74. 權(quán)利要求73的方法，其中所述HSV感染是HSV-1感染。
75. 權(quán)利要求73的方法，其中所述HSV感染是HSV-2感染。
76. 權(quán)利要求73的方法，其中所述HSV感染是原發(fā)性HSV感染。
77. 權(quán)利要求73的方法，其中所述HSV感染是原發(fā)性HSV感染之后的 潮紅、復(fù)發(fā)或HSV唇皰疹。
78. 權(quán)利要求73的方法，其中所述HSV感染是HSV腦炎。
79. 權(quán)利要求73的方法，其中所述HSV感染是HSV新生兒感染。
80. 權(quán)利要求73的方法，其中所述對象感染了HIV。
81. —種在感染HIV的對象中治療、壓制、抑制HSV感染或降低HSV 感染的發(fā)生率的方法，所述方法包括給所述對象施用疫苗的步驟，所述疫苗 包含a. 重組HSVgC蛋白或其片段，其中所述片段包含所述蛋白的C3b結(jié)合 結(jié)構(gòu)域、備解素干擾結(jié)構(gòu)域、C5干擾結(jié)構(gòu)域、或所述C3b結(jié)合結(jié)構(gòu)域、備解 素干擾結(jié)構(gòu)域或C5干擾結(jié)構(gòu)域的片段；b. 重組HSVgE蛋白或其片段，其中所述片段包含AA 24-409或其片段；和c. 佐劑。
82. 權(quán)利要求79的方法，其中所述降低HSV感染的發(fā)生率包括預(yù)防HSV 感染復(fù)發(fā)。
83. 權(quán)利要求79的方法，其中所述壓制HSV感染包括減輕HSV感染復(fù) 發(fā)的嚴(yán)重程度。
84. 權(quán)利要求79的方法，其中所述降低HSV感染的發(fā)生率包括降低HSV 感染復(fù)發(fā)的頻率。
全文摘要
本發(fā)明提供疫苗，所述疫苗包含兩種或多種重組單純皰疹病毒(HSV)蛋白質(zhì)，所述蛋白質(zhì)選自gD蛋白、gC蛋白和gE蛋白；并提供對對象進(jìn)行抗HSV免疫接種的方法和用于治療、阻止、抑制、壓制HSV感染或其癥狀或表現(xiàn)或降低其發(fā)生率的方法，所述方法包括施用本發(fā)明的疫苗。
文檔編號A61K39/245GK101616688SQ200780051860
公開日2009年12月30日 申請日期2007年12月27日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月28日
發(fā)明者H·弗里德曼, J·盧賓斯基, S·阿瓦斯蒂 申請人:賓夕法尼亞大學(xué)理事會