專利名稱：：中藥復(fù)方五子抵瘤抗腫瘤活性有效部位組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于中藥制劑
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及含有抗腫瘤的中藥復(fù)方組成、有效部位及其制備方法；更進(jìn)一步涉及中藥復(fù)方有效部位的藥物組合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。技術(shù)背景'隨著人類生活環(huán)境和水平的不斷變化，惡性腫瘤已經(jīng)成為當(dāng)今世界上威脅人類健康的最嚴(yán)重疾病之一，其發(fā)病率和死亡率位居榜首，成為人類健康的頭號大敵。因此預(yù)防和治療惡性腫瘤疾病藥物的研發(fā)日益成為醫(yī)藥界的研究熱點，由于臨床常用的化療藥物本身的缺陷，使具有抗腫瘤活性的傳統(tǒng)中藥越來越受到科研人員的高度重視。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為由于人體正氣內(nèi)虛，臟腑功能失調(diào)，以致邪毒乘虛而入，蘊(yùn)及于經(jīng)絡(luò)臟腑，使得機(jī)體陰陽失調(diào)，氣血功能障礙，導(dǎo)致氣滯，血瘀，痰凝，毒聚相互結(jié)交的一系列病理變化，日久而形成腫瘤。因此，中醫(yī)治療腫瘤的方法，主要為扶正和祛邪兩個方面。扶正的方法有補(bǔ)氣，補(bǔ)血，滋陰溫陽等；祛邪的方法有清熱解毒，化瘀軟堅等。中醫(yī)藥治療癌癥有其獨特優(yōu)勢g卩"祛邪不傷正"因而避免了一些風(fēng)險大，復(fù)發(fā)率高、后遺癥多的手術(shù)；也沒有化療藥物的毒副反應(yīng)和難以耐受的弊端，從而提高了部分患者的生存質(zhì)量和生存率，在與癌癥的斗爭中，中醫(yī)藥顯示了不可忽視的作用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的之一提供一種抗腫瘤中藥復(fù)方及其組成和劑量配比。本發(fā)明的目的之二是提供一種抗腫瘤有效部位及其制備方法。本發(fā)明的目的之三是提供以所述有效部位的藥物組合的各種制劑。本發(fā)明的目的之四是提供所述有效部位在制備抗腫瘤及其相關(guān)藥物中的應(yīng)用。中藥復(fù)方一般以藥材(飲片)入藥，存在著劑量大，服用不方便等諸多不利因素。提取中藥復(fù)方有效部位，對其藥理活性進(jìn)行驗證，進(jìn)一步將有效部位復(fù)配，制成有效部位復(fù)方是一條可行的路子。本發(fā)明涉及的中藥復(fù)方含有總木脂素、總皂苷、總多糖、總鞣質(zhì)中的一種或多種有效部位，這些有效部位因其結(jié)構(gòu)特點，表現(xiàn)出抗腫瘤，抗病毒，抗菌消炎，增強(qiáng)免疫功能等多方面的生物活性。在研究中藥復(fù)方及其組成和劑量配比的基礎(chǔ)上，尋找和發(fā)現(xiàn)中藥復(fù)方抗腫瘤有效部位及其制備方法及其應(yīng)用十分必要。因此，本發(fā)明提供了含有抗腫瘤活性成分的中藥有效部位組合物，由五味子1050g，山茱萸1060g，金櫻子1080g，訶子為530g，白及1020g中的總木脂素、總皂苷、總多糖、總鞣質(zhì)中的一種或多種有效部位組成。本發(fā)明所述的有效部位可以總木脂素、總皂苷、總多糖、總鞣質(zhì)中的一種或多種有效部位組成以及藥學(xué)上可接受的載體混合制成各種制劑。例如口服液、注射液、混懸劑、丸劑、片劑、膠囊、散劑、顆粒劑或滴丸劑。本發(fā)明所述含有抗腫瘤活性成分的中藥有效部位組合物的制備方法，其特征在于該有效部位是由下述方法制備而成(1)將山茱萸藥材用8倍量90。/。的乙醇浸泡4h后，回流提取2h，同樣方法再重復(fù)提取2次，合并濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至無醇味，常壓50'C干燥，最后稱重得浸膏，取浸膏適量，溶于水后，過濾，沉淀用蒸餾水洗3次，干燥后得粗總皂苷；(2)金櫻子和訶子等量，粉碎過10目篩。裝入滲漉桶，用l:6丙酮-水(4:l)浸泡4天，然后開始以2ml/min的速度進(jìn)行滲漉，并不斷填加新的滲漉溶劑，至滲濾液澄清，減壓回收溶劑只有很少固形物，明膠實驗也基本沒有沉淀為止，滲漉液減壓濃縮回收溶劑至基本不含丙酮，濃縮液有沉淀析出，減壓抽濾，濾液回收，沉淀水洗干燥得淡黃色粉末，定性鑒別為總鞣質(zhì)；(3)五味子藥材，加8倍量95%的乙醇溶液，浸泡過夜，回流提取2h，同法重復(fù)提取2次，合并濾液，減壓回收溶劑，得提取浸膏，浸膏于4(TC真空干燥2d，稱取浸膏，加氯仿超聲溶解，加少量硅膠拌勻，在硅膠柱表面均勻鋪上樣品。先用石油醚洗脫，至回收后沒有殘留物，合并石油醚洗脫產(chǎn)物，除色素。再用氯仿洗脫，洗脫液回收濃縮，合并，減壓蒸干溶劑得總木脂素；(4)白及藥材，磨碎成粉，加8倍水浸泡ld。轉(zhuǎn)移入滲漉桶，以7ml/min的流速進(jìn)行滲漉，至流出液不再粘稠。滲漉液加熱濃縮至藥材/滲濾液1:1，加無水乙醇沉淀，使混合液中含醇量約85%，白及多糖充分沉淀后，減壓抽濾，固體再依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗掉脂溶性雜質(zhì)。充分干燥后，得到白色的白及多糖粉末；(5)其中所述有效部位總皂苷采用的大孔吸附樹脂純化，經(jīng)過靜態(tài)吸附和動態(tài)吸附兩個方面，篩選出HPD-300型大孔吸附樹脂分離、純化總皂苷效果較好，洗脫溶媒為50%-70%乙醇；所述有效部位總鞣質(zhì)的純化采用梯度萃取法，結(jié)果表明氯仿、乙醚部位主要是脂溶性雜質(zhì)和色素，鞣質(zhì)集中在乙酸乙酯萃取部位，且純度較高；所述有效部位總多糖選用的MG-1大孔吸附樹脂脫色效果明顯，Sevag法除蛋白。本發(fā)明同時也提供了一種抗腫瘤中藥復(fù)方制劑及其組成和劑量配比它五味子五味子1050g，山茱萸1060g，金櫻子1080g，訶子為530g，白及1020g中的總木脂素、總皂苷、總多糖、總鞣質(zhì)中的一種或多種有效部位與藥學(xué)上可接受的載體組成。其制備方法如下1)將山茱萸藥材用8倍量卯Q/。的乙醇浸泡4h后，回流提取2h，同樣方法再重復(fù)提取2次，合并濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至無醇味，常壓5(TC干燥，最后稱重得浸膏，取浸膏適量，溶于水后，過濾，沉淀用蒸餾水洗3次，千燥后得粗總皂苷；(2)金櫻子和訶子等量，粉碎過10目篩。裝入滲漉桶，用l:6丙酮-水(4:l)浸泡4天，然后開始以2ml/min的速度進(jìn)行滲漉，并不斷填加新的滲漉溶劑，至滲濾液澄清，減壓回收溶劑只有很少固形物，明膠實驗也基本沒有沉淀為止，滲漉液減壓濃縮回收溶劑至基本不含丙酮，濃縮液有沉淀析出，減壓抽濾，濾液回收，沉淀水洗干燥得淡黃色粉末，定性鑒別為總鞣質(zhì)；(3)五味子藥材，加8倍量95%的乙醇溶液，浸泡過夜，回流提取2h,同法重復(fù)提取2次，合并濾液，減壓回收溶劑，得提取浸膏，浸膏于40'C真空干燥2d，稱取浸膏，加氯仿超聲溶解，加少量硅膠拌勻，在硅膠柱表面均勻鋪上樣品。先用石油醚洗脫，至回收后沒有殘留物，合并石油醚洗脫產(chǎn)物，除色素。再用氯仿洗脫，洗脫液回收濃縮，合并，減壓蒸干溶劑得總木脂素；(4)白及藥材，磨碎成粉，加8倍水浸泡ld。轉(zhuǎn)移入滲漉桶，以7ml/min的流速進(jìn)行滲漉，至流出液不再粘稠。滲漉液加熱濃縮至藥材/滲濾液1:1，加無水乙醇沉淀，使混合液中含醇量約85%，白及多糖充分沉淀后，減壓抽濾，固體再依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗掉脂溶性雜質(zhì)。充分干燥后，得到白色的白及多糖粉末；7(5)將上述分離得到的5個有效部位中的一個或多個與藥學(xué)上可接受的載體混合制成復(fù)方制劑。本發(fā)明所涉及的抗腫瘤中藥復(fù)方制劑或含有有效部位的組合物，其組方由五味子、山茱萸、金櫻子、訶子、白及五味藥原料藥組成。中藥復(fù)方WZDL是根據(jù)中醫(yī)藥君臣佐使理論，優(yōu)選五種中藥組合而成。中醫(yī)藥在中國用于治療腫瘤己有悠久的歷史，并形成了自己獨有的一套完整體系。中醫(yī)藥治療腫瘤的方法主要有扶正固本、活血化淤、清熱解毒等，這些方法是針對腫瘤本身，起到抑制或殺滅腫瘤的作用。然而，腫瘤具有侵襲和轉(zhuǎn)移的特性，腫瘤發(fā)展到后期在人體內(nèi)形成多處轉(zhuǎn)移是腫瘤患者死亡的主要原因。因此，針對這一特性，擬研究收斂固澀法治療腫瘤轉(zhuǎn)移作用。復(fù)方WZDL由中藥中經(jīng)典的收斂固濯藥組成，君藥五味子"主益氣，咳逆上氣，勞傷羸痩，補(bǔ)不足，強(qiáng)陰，益男子精"(《本經(jīng)》)，"養(yǎng)五臟，除熱，生陰中肌"(《本經(jīng)》)，"補(bǔ)元氣不足，收耗散之氣"(李杲)；君藥山茱萸"壯元氣，秘精"(《雷公炮炙論》)，"主心下邪氣寒熱，溫中，逐寒濕痹，去三蟲"(《本經(jīng)》)；臣藥訶子"生用則能清金行氣，煨用則能暖胃固腸"(《本草通玄》)，"消痰，下氣，除煩治水，調(diào)中"(《日華子本草》)；佐藥金櫻子"收虛汗，斂虛火，益精髓，壯筋骨，補(bǔ)五藏，養(yǎng)血氣"(《本草正》)；使藥白及"治癆傷肺氣，補(bǔ)肺虛，止咳嗽，消肺癆咳血，收斂肺氣"(《滇南本草》)，"主癰疽惡瘡敗疽，傷陰死肌，胃中邪氣，賊風(fēng)痱緩不收"(《本經(jīng)》)[2]。諸藥合用，收斂固澀，收斂正氣，防止正氣耗散，糾正虛失固狀態(tài)；固澀癌毒，防止和減少癌毒的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移。本發(fā)明所述中藥復(fù)方組成或含有有效部位組合物制劑的制備方法如下使用標(biāo)準(zhǔn)和常規(guī)的技術(shù)，將本發(fā)明4個有效部位中的一個或多個與制劑學(xué)上可接受的固體或液體載體結(jié)合，以及使之任意地與制劑學(xué)上可接受的輔助劑和賦形劑結(jié)合制備成各種制劑。這些制劑形式包括口服液、注射液、混懸劑、丸劑、片劑、膠囊、散劑、顆粒劑或滴丸劑。所述的藥學(xué)上可接受的固體或液體載體，包括制劑中常規(guī)的稀釋劑、填充劑(如乳糖、聚乙二醇)，粘合劑(淀粉、微晶纖維素)，崩解劑(如羧甲基纖維素、低取代的羥丙基纖維素)，潤滑劑(如滑石粉、硬脂酸鎂)，濕潤劑(如丙二醇、乙醇)，穩(wěn)定劑(EDTA-2Na、硫代硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉、乙醇胺、碳酸氫鈉、煙酰胺)等等。其中固體劑型包括片劑、分散顆粒、膠囊、緩釋片、緩釋微丸等等。固體載體可以是至少一種物質(zhì)，其可以充當(dāng)稀釋劑、香味劑、增溶劑、潤滑劑、懸浮劑、粘合劑、崩解劑以及包裹劑。惰性固體載體包括磷酸鎂、硬脂酸鎂、滑粉糖、乳糖、果膠、丙二醇、干淀粉、聚山梨酯-80、糊精、淀粉、明膠、纖維素類物質(zhì)例如甲基纖維素、微晶纖維素、低熔點石蠟、聚乙二醇、甘露醇、可可脂等。液體劑型包括溶劑、懸浮液例如注射劑、粉劑等等。本發(fā)明所述中藥復(fù)方制劑或含有有效部位組合物以及單元劑型中含有的活性成份的量可以根據(jù)患者的病情、醫(yī)生診斷的情況特定的加以應(yīng)用，所用(活性成分的有效部位)的量或濃度在一個較寬的范圍內(nèi)調(diào)節(jié)，通常，活性成分的有效部位的量范圍為組合物的O.5%90%(重量)。另一優(yōu)選的范圍為0.5%-70%。本發(fā)明所涉及的復(fù)方藥材有效部位的具體提取方法如下(1)將山茱萸藥材用8倍量卯。/。的乙醇浸泡4h后，回流提取2h，同樣方法再重復(fù)提取2次，合并濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至無醇味，常壓50'C干燥，最后稱重得浸膏，取浸膏適量，溶于水后，過濾，沉淀用蒸餾水洗3次，干燥后得粗總皂苷；(2)金櫻子和訶子等量，粉碎過10目篩。裝入滲漉桶，用l:6丙酮-水(4:l)浸泡4天，然后開始以2ml/min的速度進(jìn)行滲漉，并不斷填加新的滲漉溶劑，至滲濾液澄清，減壓回收溶劑只有很少固形物，明膠實驗也基本沒有沉淀為止，滲漉液減壓濃縮回收溶劑至基本不含丙酮，濃縮液有沉淀析出，減壓抽濾，濾液回收，沉淀水洗干燥得淡黃色粉末，定性鑒別為總鞣質(zhì)；(3)五味子藥材，加8倍量95%的乙醇溶液，浸泡過夜，回流提取2h，同法重復(fù)提取2次，合并濾液，減壓回收溶劑，得提取浸膏，浸膏于4(TC真空干燥2d，稱取浸膏，加氯仿超聲溶解，加少量硅膠拌勻，在硅膠柱表面均勻鋪上樣品。先用石油醚洗脫，至回收后沒有殘留物，合并石油醚洗脫產(chǎn)物，除色素。再用氯仿洗脫，洗脫液回收濃縮，合并，減壓蒸干溶劑得總木脂素；(4)白及藥材，磨碎成粉，加8倍水浸泡ld。轉(zhuǎn)移入滲漉桶，以7ml/min的流速進(jìn)行滲漉，至流出液不再粘稠。滲漉液加熱濃縮至藥材/滲濾液1:1,加無水乙醇沉淀，使混合液中含醇量約85%，白及多糖充分沉淀后，減壓抽濾，固體再依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗掉脂溶性雜質(zhì)。充分干燥后，得到白色的白及多糖粉末；(5)將上述分離得到的5個有效部位中的一個或多個與藥學(xué)上可接受的載體混合制成復(fù)方制劑。本發(fā)明所述的復(fù)方有效部位系上述4個有效部位之一或各部位的自kl:l組合物。例如WZDLI與WZDLII，組合WZDLI與WZDLIII組合；WZDLI與WZDLII禾口WZDLm組合；WZDLII與WZDLIII組合；WZDLI與WZDLII和WZDLV組合；其中WZDLI、WZDLII、WZDLIII、WZDLV組合效果最好。本發(fā)明進(jìn)一步提供了各有效部位組合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用；其中的腫瘤包括人乳腺癌、肝癌、人食管癌細(xì)胞、肺癌。下面通過體內(nèi)、體外抗腫瘤實驗進(jìn)一步說明本發(fā)明各#效部位組合物的藥理活性。(1)體外抗腫瘤實驗分別以抑制MCF-7、H印-G2、9706、A549細(xì)胞增殖能力為指標(biāo)。取人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7、肝癌細(xì)胞系H印-G2、人食管癌細(xì)胞9706、肺癌A549細(xì)胞系在含10%小牛血清的RPMI—1640培養(yǎng)液，37°C，5%0)2培養(yǎng)箱中生長至細(xì)胞旺盛，取對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行實驗，經(jīng)0.25X胰酶后加入0.02XEDTA消化，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液均勻接種于96孔微量培養(yǎng)板中(細(xì)胞個數(shù)為2X10'個/孔)100y1，培養(yǎng)過夜，給藥組分別加入不同劑量的預(yù)處理好的藥物濃度，對照組加入相應(yīng)的培養(yǎng)液，終體積為200ul/孔，繼續(xù)培養(yǎng)48h，加2mg/mlMTT40ul(四甲基偶氮唑Sigma)，培養(yǎng)4h，棄去上清液,加二甲基甲酰胺(DMSO)150u1，于恒溫震蕩器震蕩3min，待藍(lán)色結(jié)晶體完全溶解，用酶標(biāo)儀在550nm波長處測定吸光度(OD)值，并按下列公式計算其抑制率。抑制率計算公式抑制率(%)=[(對照組00值-實驗組OD值)/對照組0D值]X10(m。有效部位對四種腫瘤細(xì)胞株的抑制作用結(jié)果以節(jié)土S表示。計算50%細(xì)胞殺傷時藥物濃度(IOo),IC5。采用加權(quán)直線回歸法處理。(2)體外抗腫瘤粘附實驗?zāi)[瘤自原發(fā)部位向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，首先要侵襲并粘附在毗鄰的細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜上，才能分泌一系列酶來降解基底膜繼而進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)；腫瘤細(xì)胞隨循環(huán)系統(tǒng)遷移，要在遠(yuǎn)處定居，首先也要能粘附在基底膜上。所以，粘附參與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的整個過程并起重要作用。細(xì)胞外基質(zhì)的成分纖維連接蛋白(FN)是腫瘤細(xì)胞粘附的重要靶點，本文的思路是以腫瘤細(xì)胞對FN的粘附性作為腫瘤轉(zhuǎn)移能力的一個指標(biāo)，篩選抗腫瘤轉(zhuǎn)移的藥效部位。本方法以各有效部位的腫瘤細(xì)胞毒性實驗結(jié)果為參照，在不殺死大部分腫瘤細(xì)胞的前提下設(shè)計藥物濃度。測定腫瘤細(xì)胞與基底膜成分的粘附能力，將FN鋪于96孔培養(yǎng)板中，然后加入腫瘤細(xì)胞，經(jīng)過一定時間的孵育后沖洗掉未粘附的細(xì)胞，粘附于FN上的細(xì)胞數(shù)量用MTT法測定的吸光值來反映。10具體操作步驟如下(1)用預(yù)冷的tip無菌操作吸取Fn，稀釋至20|il/ml。(2)96孔培養(yǎng)板每孔加入0.1ml(2)ig)稀釋后的Fn，于超凈臺內(nèi)室溫干燥備用。(3)加入2y。BSA20pl/孔封阻非特異性位點，置37'C培養(yǎng)箱，保溫1小時，PBS沖洗并棄去。(4)對數(shù)生長期的腫瘤細(xì)胞懸浮于含0.1%BSA的RPMI-1640培養(yǎng)基中，調(diào)整細(xì)胞濃度1Xl()6個/ml。(5)用不同濃度的藥物預(yù)處理腫瘤細(xì)胞24小時。(6)以含0.1%BSA的RPMI-1640無血清培養(yǎng)基懸浮腫瘤細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度，每孔加入4Xl(/個預(yù)處理的細(xì)胞，設(shè)3個復(fù)孔，對照組加等量的PBS，37'C孵育1小時。(7)棄培養(yǎng)基，用PBS液輕輕沖洗2次，棄去未粘附細(xì)胞。(8)每孔加入MTT(lg/L),37。C繼續(xù)培養(yǎng)4小時。(9)吸取MTT，每孔加入100plDMSO用恒溫振蕩器振搖15分鐘，使甲臜完全溶解。(10)490nm波長酶標(biāo)儀測定處每孔的OD值，每實驗組均設(shè)立對照組，以殘留細(xì)胞計算出粘附抑制率。實驗結(jié)果粘附抑制率計算公式對照組OD值一藥物處理組OD值粘附抑制率(IR%)=X100%。對照組OD值有效部位對四種腫瘤細(xì)胞株的抗粘附作用結(jié)果以麗土S表示，計算出粘附抑制率。(3)體內(nèi)抗腫瘤實驗主要觀察各有效部位給藥后，對小鼠肝癌fc腫瘤的抑制作用。選擇腹腔接種68天，生長良好的荷H22肝癌小鼠，頸椎脫臼處死，無菌抽取腹水，以無菌生理鹽水按l:2比例稀釋成5.4X10MVml瘤細(xì)胞懸液，接種于健康小鼠右前肢腋部皮下，每只0.2mL，接種。接種次日，按體重隨機(jī)分組，對照組(水)，陽性對照組(順鉑)，有效部位總木脂素(WZDLI)、總皂苷(WZDLII)、總多糖(WZDLIII)、11總輮質(zhì)(WZDLV)小劑量，中劑量，大劑量及這四個有效部位等比例組合(1:1:1:1)，灌胃給予0.6ml受試藥物高、中、低劑量，每日1次，連續(xù)9天。對照組給予生理鹽水，每只0.3ml。陽性對照組腹腔注射順(5mgkg"cT1)，每次給藥0.2ml，隔天給藥l次，共給藥3次。每日觀察小鼠的一般活動、皮毛、糞便等情況。于末次給藥后24h頸椎脫臼處死小鼠，剝?nèi)∧[瘤組織，稱重，同時剖取小鼠肝、脾臟、胸腺，觀察小鼠的生理指標(biāo)，并按下列公式計算其抑瘤率。抑瘤率計算公式抑瘤率(%)=[(空白組瘤重值-給藥組瘤重值)/空白組瘤重值]X100%體內(nèi)抗腫瘤實驗整體解剖實驗觀察，得出數(shù)據(jù)結(jié)果采用SAS統(tǒng)計學(xué)軟件處理。結(jié)果表明各有效部位不同劑量對肝癌H22抑制作用不同，其中WZDLI和四組等比例組配抑制腫瘤的效果最好，分別為48.3%和50.9%，同時對免疫功能系統(tǒng)損傷小，起到保護(hù)作用。具體實施例方式以下所列實施例有助于本領(lǐng)域技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實施例1有效部位的制備方法:___重量(克)藥材-(1)(2)(3)(4)(5)五味子5015283020山茱萸3010202030金櫻子2018161016訶子1530251525白及2025152020五味子、山茱萸、金櫻子,.訶子、白及洗凈干燥后進(jìn)行有效部位的提取純化,實施例2將山茱萸藥材用8倍量90。/。的乙醇浸泡4h后，回流提取2h，同樣方法再重復(fù)提取2次，合并濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至無醇味，常壓50'C干燥，最后稱重得浸膏，取浸膏適量，溶于水后，過濾，沉淀用蒸餾水洗3次，干燥后采用的大孔吸附樹脂純化，經(jīng)過靜態(tài)吸附和動態(tài)吸附兩個方面，.篩選出HPD-300型大孔吸附樹脂分離、純化總皂苷效果較好，洗脫溶媒為50%-70%乙醇，純化后得到總皂苷WZDLII。實施例3金櫻子和訶子等量，粉碎過10目篩。裝入滲漉桶，用l:6丙酮-水(4:l)浸泡4天，然后開始以2ml/min的速度進(jìn)行滲漉，并不斷填加新的滲漉溶劑，至滲濾液澄清，減壓回收溶劑只有很少固形物，明膠實驗也基本沒有沉淀為止，滲漉液減壓濃縮回收溶劑至基本不含丙酮，濃縮液有沉淀析出，減壓抽濾，濾液回收，沉淀水洗干燥得淡黃色粉末，定性鑒別為鞣質(zhì)，總鞣質(zhì)的純化采用梯度萃取法，不同極性的有機(jī)溶劑萃取，結(jié)果表明氯仿、乙醚部位主要是脂溶性雜質(zhì)和色素，鞣質(zhì)集中在乙酸乙酯萃取部位，且純度較高，回收乙酸乙酯層得到有效部位WZDLV。實施例4五味子藥材，加8倍量95%的乙醇溶液，浸泡過夜，回流提取2h，同法重復(fù)提取2次，合并濾液，減壓回收溶劑，得提取浸膏，浸膏于4(TC真空干燥2d，稱取浸膏，加氯仿超聲溶解，加少量硅膠拌勻，在硅膠柱表面均勻鋪上樣品。先用石油醚洗脫，至回收后沒有殘留物，合并石油醚洗脫產(chǎn)物，除色素。再用氯仿洗脫，洗脫液回收濃縮，合并，減壓蒸干溶劑得總木脂素WZDLI;實施例5白及藥材，磨碎成粉，加8倍水浸泡ld。轉(zhuǎn)移入滲漉桶，以7ml/min的流速進(jìn)行滲漉，至流出液不再粘稠。滲漉液加熱濃縮至藥材/滲濾液l:1，加無水乙醇沉淀，使混合液中含醇量約85%,白及多糖充分沉淀后，減壓抽濾，固體再依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗掉脂溶性雜質(zhì)。充分干燥后，得到白色的白及多糖粉末，總多糖選用的MG-1大孔吸附樹脂脫色，Sevag法除蛋白后得到純化后的總多糖WZDLIII。實施例6:有效部位對人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7的抑制結(jié)果體外抗腫瘤活性實驗?zāi)[瘤細(xì)胞株人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7在含10%小牛血清的RPMI—1640培養(yǎng)液，溫度37。C，5%C02培養(yǎng)箱中生長至細(xì)胞旺盛，取對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行實驗，經(jīng)0.25%胰酶后加入0.02%EDTA消化，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液均勻接種于96孔微量培養(yǎng)板中(細(xì)胞個數(shù)為2X104個/孔)lOOul，培養(yǎng)過夜，給藥組分別加入不同劑量的有效部位，對照組加入相應(yīng)的培養(yǎng)液，終體積為200u1/孔，繼續(xù)培養(yǎng)48h，加2mg/mlMTT40ul,培養(yǎng)4小時，棄去上清液，加DMS0150u1，于恒溫震蕩器震蕩10min，待藍(lán)色結(jié)晶體完全溶解，用酶標(biāo)儀在550nm波長處測定吸光度(0D)值，并按下列公式計算其抑制率。有效部位對腫瘤細(xì)胞株的抑制作用結(jié)果以^士S表示。抑制率計算公式抑制率(%)=[(對照組OD值-實驗組OD值)/對照組OD值]X100%計算50%細(xì)胞殺傷時藥物濃度(IC50),IC50采用加權(quán)直線回歸法處理。對人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7的抑制結(jié)果總木脂素50yg/ml即達(dá)到84.7%的抑制率，且隨濃度升高抑制率有所提高，總皂苷和有效部位組合物的IC50分別為87.4ug/ml，495.3yg/ml。<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>實施例7有效部位對人乳腺癌細(xì)胞系HepG2的抑制結(jié)果體外抗腫瘤活性實驗?zāi)[瘤細(xì)胞株人乳腺癌細(xì)胞系HepG2在含10%小牛血清的RPMI—1640培養(yǎng)液,溫度37'C，5%C02培養(yǎng)箱中生長至細(xì)胞旺盛，取對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行實驗，經(jīng)0.25^胰酶后加入0.02WEDTA消化，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液均勻接種于96孔微量培養(yǎng)板中(細(xì)胞個數(shù)為2X104個/孔)100ul，培養(yǎng)過夜，給藥組分別加入不同劑量的有效部位，對照組加入相應(yīng)的培養(yǎng)液，終體積為200ul/孔，繼續(xù)培養(yǎng)48h，加2mg/mlMTT40u1,培養(yǎng)4小時，棄去上清液，加DMS0150y1，于恒溫震蕩器震蕩10min，待藍(lán)色結(jié)晶體完全溶解，用酶標(biāo)儀在550ran波長處測定吸光度(0D)值，并按下列公式計算其抑制率。有效部位對腫瘤細(xì)胞株的抑制作用結(jié)果以，土S表示。抑制率計算公式抑制率(%)=[(對照組OD值-實驗組OD值)/對照組OD值]X100%計算50Q^細(xì)胞殺傷時藥物濃度(IC50),IC50采用加權(quán)直線回歸法處理?？偰局睾涂傇碥仗査帉epG2的抑制率也很高，最低劑量5(Vg/ml時的分別為92.9%、67.4%，且隨著濃度增大，抑制率都不低于50%，有效部位組配藥的IC50分別為365.1jxg/ml。濃度Og/ml)總鞣質(zhì)總木脂素總多糖總皂苷有效部位組配01.27±0.171.41±0.091.61±0.131.9±0.301.54±0.08501.27±0.150.10±0.01(92.9)*1.63±0.030.62±0.25(67.4)**1.41±0.19(8.4)1001.23±0.230.16±0.02(88.7)*1.37±0.190.35土0.05(81.6)*1.39±0.29(9.7)2001.07±0.060.16±0駕(88.7)*1.27±0.290.38±0.11(80.0)*0.50±0.09(67.5)*4000.91±0.120.17±0.02(87.9)*1.37±0.260.54±0.07(71.6)*0.40±0.05(74)*6000.93±0.150.18±0.03(87.2)*1.13±0.130.47±0.12(75.3)*0.44±0.05(71.4)*8001.13±0.280.21±0.03(85.1)*1.12±0.100.53±0.09(72.1)*0.50±0.05(67.5)*與空白組比較，*P<0.01,林P〈0.05實施例8有效部位對人食管癌細(xì)胞系9706的抑制結(jié)果體外抗腫瘤活性實驗?zāi)[瘤細(xì)胞株人食管癌細(xì)胞系9706在含10X小牛血清的RPMI—1640培養(yǎng)液，溫度37'C，5%C02培養(yǎng)箱中生長至細(xì)胞旺盛，取對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行實驗，經(jīng)O.25^胰酶后加入0.02XEDTA消化，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液均勻接種于96孔微量培養(yǎng)板中(細(xì)胞個數(shù)為2X104個/孔)lOOul,培養(yǎng)過夜，給藥組分別加入不同劑量的有效部位，對照組加入相應(yīng)的培養(yǎng)液，終體積為200y1/孔，繼續(xù)培養(yǎng)48h，加2mg/mlMTT40n1，培養(yǎng)4小時,棄去上清液,加DMSO150y1,于恒溫震蕩器震蕩10min，待藍(lán)色結(jié)晶體完全溶解，用酶標(biāo)儀在550nm波長處測定吸光度(0D)值，并按下列公式計算其抑制率。有效部位對腫瘤細(xì)胞株的抑制作用結(jié)果以^土S表示。抑制率計算公式抑制率(％)=[(對照組0D值-實驗組0D值)/對照組0D值]X100%計算50%細(xì)胞殺傷時藥物濃度(IC50)，IC50采用加權(quán)直線回歸法處理。木脂素、總皂苷及有效部位組合物的IC50分別為625嗎/ml、262.5叫/ml、38.1嗎/ml。濃度(Hg/ml)總鞣質(zhì)總木脂素總多糖總皂苷有效部位組配02.55±0.452.51±0.132.30±0.082.30±0.113.10±0.19502.16±0.042.84±0.13(/)1.89±0.202.53±0.19(/)1.76±0.35(43.2)1000.31±0.122.30±0.66(8.4)1.卯±0.281.40±0.08(39.1)1.51±0.21(51.3)*2001.96±0.271.23±0.46(51.0)*1.79±0.130.65±0.02(71.7)1.13±0.40(63.5)*承柳2.35±0.171.45±0.20(42.2)*1.83±0.160.33±0.03(85.7)0.45±0.03(85.5)*6001.77±0.331.55±0.36(38.2)*1.74±0200.29±0.02(87.4)0.38±0.07(87.7)*8001.98±0.310.93±0.39(62.9)**1.74±0.280.38±0.21(83.5)承0.31±0.01(卯.0)*與空白組比較，*P<0.01，**P<0.05實施例9有效部位對人食管癌細(xì)胞系9706的抑制結(jié)果體外抗腫瘤細(xì)胞粘附實驗細(xì)胞外基質(zhì)的成分纖維連接蛋白(FN)是腫瘤細(xì)胞粘附的重要靶點，本方法以各有效部位的腫瘤細(xì)胞毒性實驗結(jié)果為參照，在不殺死大部分腫瘤細(xì)胞的前提下設(shè)計藥物濃度。測定腫瘤細(xì)胞與基底膜成分的粘附能力，將FN鋪于96孔培養(yǎng)板中，然后加入腫瘤細(xì)胞，經(jīng)過一定時間的孵育后沖洗掉未粘附的細(xì)胞，粘附于FN上的細(xì)胞數(shù)量用MTT法測定的吸光值來反映。實驗步驟用預(yù)冷的tip無菌操作吸取Fn，稀釋至20)il/ml，96孔培養(yǎng)板每孔加入0.1ml(2pg)稀釋后的Fn,于超凈臺內(nèi)室溫干燥備用。加入2o/。BSA20^il/孔封阻非特異性位點，置37'C培養(yǎng)箱，保溫l小時，PBS沖洗并棄去。對數(shù)生長期的腫瘤細(xì)胞懸浮于含O.P/。BSA的RPMI-1640培養(yǎng)基中，調(diào)整細(xì)胞濃度1X10e個/ml。用不同濃度的藥物預(yù)處理腫瘤細(xì)胞24小時，加藥后的各藥物的終濃度見下表。以含0.1%BSA的RPMI-1640無血清培養(yǎng)基懸浮腫瘤細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度，每孔加入4乂104個預(yù)處理的細(xì)胞，設(shè)3個復(fù)孔，對照組加等量的PBS，37。C孵育1小時。棄培養(yǎng)基，用PBS液輕輕沖洗2次，棄去未粘附細(xì)胞。每孔加入50^1MTT(lg/L),37'C繼續(xù)培養(yǎng)4小時。吸取MTT,每孔加入100,ulDMSO用恒溫振蕩器振搖15分鐘，使甲臜完全溶解。490nm波長酶標(biāo)儀測定處每孔的OD值，每實驗組均設(shè)立對照組，以殘留細(xì)胞計算出粘附抑制率。實驗結(jié)果粘附抑制率計算公式-對照組OD值一藥物處理組OD值粘附抑制率(IR%)=-X100%。對照組OD值有效部位對人食管癌細(xì)胞系9706粘附能力的抑制結(jié)果以節(jié)土S表示。()內(nèi)為各濃度下相應(yīng)有效部位的粘附抑制率，(采用t檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，*p<0.01)?？偰局亍⒖傇碥占坝行Р课唤M配物的IC50分別為625ng/ml、262.5嗎/ml、38.1嗎/ml。濃度(|ig/ml)木脂素總皂苷總多糖有效部位組配00.42±0.040.48±0.070.34±0.0880.428±0.152500.08±0.01(83.33)0.21±0.009(56.25)*0.19±0.085(44.11)*0.194±0.031(54.67)1000.048±0.003(88.57)0.11±0.01(77.08)*0.058±0.006(82.94)*0.067±0.012(84.35)2000.054±0.007(87.14)0.08±0.003(83.33)*0.070±0.009(79.41)*0.081士0.003(81.07)4000.047±0.01(88.81)0.07±0.009(85.42)*0.054±0.007(84.11)*0.068±0,006(84.11)6000.047±0扁(88.81)0.056±0據(jù)(88.33)*0.05±0.006(85.29)*0.075±0.007(82.48)與空白組比較，*P<0.01，**P<0.05實施例10:復(fù)方有效部位體內(nèi)抗腫瘤活性實驗復(fù)方WZDL為原生藥1:1組合而成，復(fù)方中各藥經(jīng)提取、純化得到四個有效部位等比例組合，復(fù)配得到的復(fù)方高、中、低劑量組濃度分別為0.45gKg-'、0.225g.Kg—1、0.13g.Kg'1。實驗方法選擇腹腔接種68天，生長良好的荷H22肝癌小鼠，頸椎脫臼處死，無菌抽取腹水，以無菌生理鹽水按l:2比例稀釋成5.4Xl(^個/ml瘤細(xì)胞懸液，接種于健康小鼠右前肢腋部皮下，每只0.2mL，接種50只。接種次日，按體重隨機(jī)分為5組，灌胃給予0.6ml受試藥物高、中、低劑量，每日1次，連續(xù)9天。對照組給予生理鹽水，每只0.3ml。陽性對照組腹腔注射順(5mg'kg—1'd—i)，每次給藥0.2ml，隔天給藥1次，共給藥3次。每日觀察小鼠的一般活動、皮毛、糞便等情況。于末次給藥后24h頸椎脫臼處死小鼠，剝?nèi)∧[瘤組織，稱重，同時剖取小鼠肝、脾臟、胸腺，稱重。檢測指標(biāo)抑瘤率(^;h;i-t/c)xioox(t:治療組平均瘤重，c:對照組平均瘤重)采用t檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，以lts表示，總復(fù)方對H22的抑瘤結(jié)果見表。中藥復(fù)方WZDL的低劑量組即表現(xiàn)出對腫瘤的抑制作用，抑瘤率29.4%，中、高劑量組表現(xiàn)出顯著的抑瘤作用，從整體看出WZDL對小鼠體內(nèi)H22肝癌具有明顯的抗腫瘤作用，且抑瘤作用有劑量依賴效應(yīng)。組別給藥量(g/kg)平均瘤重(g)抑瘤率(％)對照組生理鹽水2.67±0.710順鉑組0.0050.74±0.51*72.2高劑量組0.451.32±0.52*50.6中劑量組0.2251.68±0.37*37.1低劑量組0.151.88±0.25**29.4與對照組比較+P〈0.001，**P<0.05。實施例lh藥物制劑劑型的研究(1)片劑不同含量(WZDLI:WZDLII:WZDLIII:WZDLV=2:1:2:3)，包衣提取物壓片制成片劑的使用，用作賦型劑的輔料有MgS04、玉米淀粉、滑石粉(規(guī)格:100mg、150mg、200mg、300mg)。(2)膠囊(活性成分WZDLI:WZDLII:WZDLIII=4:1:2)普通及腸溶膠囊，不同規(guī)格。(3)散劑(活性成分WZDLI:WZDLII:WZDUII=4:1:3)藥物提取后加入一定輔料后，干燥研粉。(4)顆粒沖劑(WZDLI:WZDLII:WZDLIII=2:5:3)袋裝速溶顆粒劑。18(5)滴丸劑(活性成分WZDLI:WZDLII:WZDLV=2:5:2)增加吸收率和吸收速度，起效快。(6)注射劑(活性成分WZDLIII:WZDLII:WZDLV=1:1:l)過濾，除菌，除熱源，用注射用水按一定比例溶解完全均勻，吸收效果好，起效快。(7)凍干粉針(活性成分WZDLIII:WZDLII:WZDLV=4:2:l)便于貯存。各種藥物制劑的制備具體操作如下(1)按配置總量計稱取含1070%有效部位提取物，加入3090%的填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、矯味劑等，充分?jǐn)嚢杌旌现瞥深w粒，在607(TC干燥24小時后，壓制成片，使每片含有效部位提取物50150mg。(2)將制成的顆粒直接充填入各種空膠囊殼中，使每粒膠囊含提取物50200mg，為膠囊劑。當(dāng)然各制劑配比及輔料選用會有所差異。(3)按配置總量計稱取含2070%提取物，加入30-80%的助溶劑如糊精、矯味劑等，溶解均勻后干燥，磨細(xì)粉裝袋，即得粉劑。(4)按配置總量計稱取含10%60%提取物，加入40%90%的填充劑、崩解劑、矯味劑等，充分?jǐn)嚢杌旌嫌?214目篩制成顆粒。在607(TC干燥充分后裝袋，使每克顆粒劑含提取物100500mg。(5)按配置總量計稱取含10%60%提取物，加入40%90%的助溶劑聚乙二醇、抗氧劑等，加熱熔融溫度(4090°C)，使原料和輔料充分混溶，滴制成丸，使每粒滴丸含提取物520mg。(6)取水溶性提取物30g，加入適量的注射用水，攪拌并水浴6(TC加熱使之溶解，以5%Na2C03溶液調(diào)pH值到6.5-8.0，加入0.1%活性炭加熱煮沸15min，以脫色除去熱源，待稍冷后過濾，注射用水加至全量5000ml，微孔濾膜過濾后熔封于5ml安瓿中，105°C加熱滅菌即得。(7)取水溶性提取物30g，加入適量的注射用水，攪拌并水浴6(TC加熱使之溶解，以5%Na2C03溶液調(diào)pH值為6.5-8.0，加入0.1%活性炭加熱煮沸15min，以脫色除去熱源，待稍冷后過濾，注射用水加至全量2500ml，微孔濾膜過濾后分裝于西林瓶中，每瓶中裝2.5ml。凍干條件預(yù)凍溫度-25'C，預(yù)凍時間3小時，升華時間為10小時，第一次干燥溫度2CTC，干燥時間為4小時，第二次干燥溫度40°C，干燥時間為6-8小時，105'C加熱滅菌即得。實施例12用下述成分制備硬明膠膠囊活性成分(WZDLI:WZDLII:WZDLIII:WZDLV四個有效部位等比例組成)320mg，干淀粉200mg，硬脂酸鎂10mg，將上述成分混合后，以扭Omg填充入硬明膠膠囊中。實施例13活性成分(WZDLI:WZDLII:WZDLIII:WZDLV=1:2:1:1組成)10mg，淀粉45mg，羧甲基淀粉鈉鹽4.5mg，硬脂酸鎂0.5mg，滑石粉1mg。將原輔料預(yù)先干燥，過IOO目篩備用。先將處方量的輔料充分混勻。將原料藥以遞增稀釋法加到輔料中，每次加時充分混勻2—3次，保證藥與輔料充分混勻，過20目篩，在55'C通風(fēng)烘箱中干燥2h，干顆粒過16目篩整理，測定中間體含量，混合均勻，在壓片機(jī)上壓片。實施例14注射液的制備活性成分(WZDLII:WZDLIII:WZDLV=1:1:1)200mg，丙二醇100mg，聚山梨300ml。取活性成分加入到已溶解山梨醇和丙二醇的注射用水中，加入藥用堿調(diào)節(jié)PH值至4一8使其溶解。加入活性炭，攪拌吸附30分鐘，除炭、精濾、灌封、滅菌。實施例15活性成分(WZDLI:WZDLII:WZDLIII:WZDLV=1:1:2:1)100mg，藥用堿1-7%，甘露醇55_85%。取活性成分加入注射用水，用藥用堿調(diào)節(jié)PH值至4-8使其溶解。再加入甘露醇，按注射劑的要求進(jìn)行高壓滅菌，加入活性炭，采用微孔濾膜過濾，濾液進(jìn)行分裝，采用冷凍干燥法，制得疏松塊狀物，封口即得。綜上所述，本發(fā)明的內(nèi)容并不局限在的實施例中，相同領(lǐng)域內(nèi)的有識之士可以在本發(fā)明的技術(shù)指導(dǎo)思想之內(nèi)可以輕易提出其他的實施例，但這種實施例都包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。權(quán)利要求1、一種含有抗腫瘤活性成分的中藥有效部位組合物，其特征在于該組合物由五味子、山茱萸、金櫻子、訶子、白及五味藥原料藥組成的WZDL復(fù)方有效部位組成；其中所述的復(fù)方有效部位包括總木脂素(WZDLI)、總皂苷(WZDLII)、總多糖(WZDLIII)、總鞣質(zhì)(WZDLV)的一種或多種的組合物。2、如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于該組合物由五味子1050g，山茱萸1060g，金櫻子1080g，訶子為530g，白及1020g中的總木脂素(WZDLI)、總皂苷(WZDLII)、總多糖(WZDLIII)、總鞣質(zhì)(WZDLV)中的一種或多種有效部位組成。3、如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于有效部位總木脂素(WZDLI)、總皂苷(WZDLII)、總多糖(WZDLIII)、總鞣質(zhì)(WZDLV)與藥學(xué)上可接受的載體混合制成各種制劑。4、如權(quán)利要求3所述的組合物，各種制劑包括口服液、注射液、混懸劑、丸劑、片劑、膠囊、散劑、顆粒劑或滴丸劑。5、一種制備權(quán)利要求1或2所述組合物的方法，其特征在于該有效部位是由下述方法制備而成(1)將山茱萸藥材用8倍量90%的乙醇浸泡4h后，回流提取2h，同樣方法再重復(fù)提取2次，合并濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至無醇味，常壓5(TC干燥，最后稱重得浸膏，取浸膏適量，溶于水后，過濾，沉淀用蒸餾水洗3次，干燥后得粗總皂苷WZDLII;(2)金櫻子和訶子等量，粉碎過10目篩。裝入滲漉桶，用l:6丙酮-水(4:l)浸泡4天，然后開始以2ml/min的速度進(jìn)行滲漉，并不斷填加新的滲漉溶劑，至滲濾液澄清，減壓回收溶劑只有很少固形物，明膠實驗也基本沒有沉淀為止，滲漉液減壓濃縮回收溶劑至基本不含丙酮，濃縮液有沉淀析出，減壓抽濾，濾液回收，沉淀水洗干燥得淡黃色粉末，定性鑒別為總鞣質(zhì)WZDLV;(3)五味子藥材，加8倍量95%的乙醇溶液，浸泡過夜，回流提取2h，同法重復(fù)提取2次，合并濾液，減壓回收溶劑，得提取浸膏，浸膏于4(TC真空干燥2d，稱取浸膏，加氯仿超聲溶解，加少量硅膠拌勻，在硅膠柱表面均勻鋪上樣品。先用石油醚洗脫，至回收后沒有殘留物，合并石油醚洗脫產(chǎn)物，除色素。再用氯仿洗脫，洗脫液回收濃縮，合并，減壓蒸干溶劑得總木脂素WZDLI;(4)白及藥材，磨碎成粉，加8倍水浸泡ld。轉(zhuǎn)移入滲漉桶，以7ml/min的流速進(jìn)行滲漉，至流出液不再粘稠。滲漉液加熱濃縮至藥材/滲濾液l:1，加無水乙醇沉淀，使混合液中含醇量約85%,白及多糖充分沉淀后，減壓抽濾，固體再依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗掉脂溶性雜質(zhì)。充分干燥后，得到白色的白及多糖粉末WZDLIII;6、如權(quán)利要求5所述的制備方法，其中所述有效部位總皂苷采用的大孔吸附樹脂純化，經(jīng)過靜態(tài)吸附和動態(tài)吸附兩個方面，篩選出HPD-300型大孔吸附樹脂分離、純化總皂苷效果較好，洗脫溶媒為50%-70%乙醇；所述有效部位總鞣質(zhì)的純化采用梯度萃取法，結(jié)果表明氯仿、乙醚部位主要是脂溶性雜質(zhì)和色素，鞣質(zhì)集中在乙酸乙酯萃取部位，且純度較高；所述有效部位總多糖選用的MG-1大孔吸附樹脂脫色效果明顯，Sevag法除蛋白。7、權(quán)利要求14任一項所述組合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用；其中的腫瘤包括人乳腺癌、肝癌、卵巢癌、人子宮頸癌或肺癌。8、一種含有抗腫瘤藥物的中藥復(fù)方制劑，其特征在于，該復(fù)方由五味子1050g，山茱萸15~60g，金櫻子1580g,訶子為1530g，白及1020g的提取物與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體組成。9、權(quán)利要求8所述中藥復(fù)方制劑的制備方法，其特征在于該復(fù)方制劑由下述方法制備而成(1)將山茱萸藥材用8倍量90%的乙醇浸泡4h后，回流提取2h,同樣方法再重復(fù)提取2次，合并濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至無醇味，常壓5(TC干燥，最后稱重得浸膏，取浸膏適量，溶于水后，過濾，沉淀用蒸餾水洗3次，干燥后得粗總皂苷WZDLII;(2)金櫻子和訶子等量，粉碎過10目篩。裝入滲漉桶，用l:6丙酮-水(4:l)浸泡4天，然后開始以2ml/min的速度進(jìn)行滲漉，并不斷填加新的滲漉溶劑，至滲濾液澄清，減壓回收溶劑只有很少固形物，明膠實驗也基本沒有沉淀為止，滲漉液減壓濃縮回收溶劑至基本不含丙酮，濃縮液有沉淀析出，減壓抽濾，濾液回收，沉淀水洗干燥得淡黃色粉末，定性鑒別為總鞣質(zhì)WZDLV;(3)五味子藥材，加8倍量95%的乙醇溶液，浸泡過夜，回流提取2h，同法重復(fù)提取2次，合并濾液，減壓回收溶劑，得提取浸膏，浸膏于40'C真空干燥2d，稱取浸膏，加氯仿超聲溶解，加少量硅膠拌勻，在硅膠柱表面均勻鋪上樣品。先用石油醚洗脫，至回收后沒有殘留物，合并石油醚洗脫產(chǎn)物，除色素。再用氯仿洗脫，洗脫液回收濃縮，合并，減壓蒸干溶劑得總木脂素WZDLI;(4)白及和山茱萸、五味子、金櫻子和訶子醇提后的藥渣(晾干)混和，磨碎成粉，加8倍水浸泡ld。轉(zhuǎn)移入滲漉桶，以7ml/min的流速進(jìn)行滲漉，至流出液不再粘稠。滲漉液加熱濃縮至藥材/滲濾液l:1，加無水乙醇沉淀，使混合液中含醇量約85%，白及多糖充分沉淀后，減壓抽濾，固體再依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗掉脂溶性雜質(zhì)。充分干燥后，得到白色的白及多糖粉末WZDLIII;(5)將上述分離得到的4個有效部位中的一個或多個與藥學(xué)上可接受的載體混合制成復(fù)方制劑。10、如權(quán)利要求8或9所述的中藥復(fù)方制劑，包括口服液、注射液、混懸劑、丸劑、片劑、膠囊、散劑、顆粒劑或滴丸劑。全文摘要本發(fā)明提供一種由五味子、山茱萸、金櫻子、訶子、白及五味藥組成的中藥復(fù)方WZDL的藥物及其組合物。以及從該組合物中分離制備總木脂素(WZDLI)、總皂苷(WZDLII)、總多糖(WZDLIII)、總鞣質(zhì)(WZDLV)有效部位的方法及含有有效部位活性成分的組合物在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的有效部位制備方法，具有工藝簡單，收率高，經(jīng)濟(jì)且環(huán)境污染小，易于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)等特點。同時本發(fā)明制備含有抗腫瘤活性成分的中藥有效部位組合物經(jīng)體內(nèi)、體外藥理活性研究表明總木脂素(WZDLI)、總皂苷(WZDLII)、總多糖(WZDLIII)、總鞣質(zhì)(WZDLV)及其組合物均具有較好的抗腫瘤活性，有望研制成低毒高效的腫瘤治療的中藥復(fù)方制劑。文檔編號A61K9/10GK101579478SQ200810053138公開日2009年11月18日申請日期2008年5月15日優(yōu)先權(quán)日2008年5月15日發(fā)明者劉培勛,唐衛(wèi)生,秀沈,峰趙,靜高申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所