專利名稱：：黑曲霉zjut712及其在固態(tài)發(fā)酵炮制牛蒡子中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一株新的P-葡萄糖苷酶產(chǎn)生菌——黑曲霉(v^/wg/〃ww/取。ZJUT712，及其在固態(tài)發(fā)酵炮制牛蒡子中的應(yīng)用。(二)
背景技術(shù)：
牛蒡子是菊科植物牛蒡(ArctiumLappaL.)的干燥成熟果實。牛蒡子苷及牛蒡子苷元是牛蒡子發(fā)揮藥效的重要成分，具有利尿、瀉下，擴張血管及抑制K+攣縮，降血壓，抗癌抗突變，抗腎炎活性，抗血小板聚集，抗老年性癡呆，治療急性腎炎和腎病綜合癥等作用。牛蒡子的主要藥效功能與牛蒡子苷的體內(nèi)代謝過程具有相關(guān)性，牛蒡子苷(分子式C27H340，分子量534.55)在消化道中，一皮腸道菌轉(zhuǎn)變?yōu)榭嘣拿摷谆衔?，此脫甲基化合物在肝臟兒茶酚-O-曱基轉(zhuǎn)移酶(COMT)的作用下恢復(fù)為苷元，牛蒡子苷元被血液輸送到各個器官發(fā)揮作用。牛蒡子苷元(分子式C21H2406,分子量372.41)是可以直接被人體吸收發(fā)揮藥效的物質(zhì)。將牛蒡子苦在體外轉(zhuǎn)化為牛蒡子苷元有助于提高牛蒡子的藥效。(3-葡萄糖苷酶(beta-Glucosidase)系統(tǒng)名稱為p-D-葡萄糖苷葡萄糖水解酶(beta-D-glucosideglucohydrolase;EC3,2.1.21)。廣泛存在于才直物、酵母、曲霉菌、木酶菌及細菌體內(nèi)。p-葡萄糖苷酶可以催化牛蒡子苷轉(zhuǎn)化為牛蒡子苷元。所以利用產(chǎn)P-葡萄糖苷酶菌林固態(tài)發(fā)酵法炮制牛蒡子可以有效提高牛蒡子有效成分的溶出率。發(fā)酵中藥技術(shù)是現(xiàn)代生物技術(shù)和中藥研究的完美結(jié)合,依靠微生物發(fā)酵來生產(chǎn)發(fā)酵中藥為中藥的發(fā)展開辟了新空間。微生物可以利用中藥中的氨基酸、蛋白質(zhì)、微量元素、維生素等多種營養(yǎng)成分，并將苷類物質(zhì)降解生成的糖作為營養(yǎng)物質(zhì)，進行自我繁殖。對微生物來說，若以苷的糖為碳源，就相適應(yīng)地被誘導(dǎo)產(chǎn)生出用于分解該種苷類的酶。微生物在發(fā)酵過程中可以分泌幾十種胞外酶到培養(yǎng)基中，而微生物進行生理活動所產(chǎn)生的胞內(nèi)酶更是成百上千，這些豐富而強大的酶系是使中藥發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的物質(zhì)基礎(chǔ)，可將藥物成分分解轉(zhuǎn)化形成新成分。通過^:生物生長代謝和生命活動來炮制中藥，可以比一般的物理或化學(xué)的炮制手段更大幅度地改變藥性，提高療效，降低毒副作用，擴大適應(yīng)癥。苷類中藥經(jīng)孩t生物發(fā)酵轉(zhuǎn)化，苷元含量顯著提高，中藥原有組織結(jié)構(gòu)變得較疏+>,利于中藥中間體——苷元的分離提取。同時使中藥中間體的生產(chǎn)工藝簡化、成本降低、產(chǎn)值增加，還可利用得到的中藥中間體制備新劑型——注射劑等，使中藥更易于臨床應(yīng)用。臨床上，牛蒡子多用炮制品?？疾炫］蜃优谥频臍v史沿革發(fā)現(xiàn)牛蒡子的傳統(tǒng)炮制方法有單炒、酒炒、酒拌蒸、隔紙炒等方法，以清炒為主流。樣t生物發(fā)酵法炮制牛蒡子是現(xiàn)代生物技術(shù)與傳統(tǒng)中藥炮制技術(shù)相結(jié)合的產(chǎn)物。隨著現(xiàn)代生活節(jié)奏的加快，在臨床上人們越來越需要一些起效迅速的新藥，利用微生物發(fā)酵后的炮制品或中藥中間體制備其他劑型新藥，可使有效物質(zhì)進入人體后被迅速吸收，在短時間內(nèi)達到所需的血藥濃度，快速起效。微生物發(fā)酵法炮制牛蒡子技術(shù)是綠色環(huán)保技術(shù)，與化學(xué)法轉(zhuǎn)化苷類中藥相比，不會因使用強酸強堿對環(huán)境造成污染，整個工藝過程沒有"三廢，，產(chǎn)生，對環(huán)境、能源不會造成太大壓力。微生物發(fā)酵法炮制牛蒡子能夠促進中藥產(chǎn)品邁向國際市場。傳統(tǒng)中藥中有效物質(zhì)基礎(chǔ)不清，作用機理不明是阻礙中藥現(xiàn)代化發(fā)展的關(guān)鍵，也是國際上對中藥產(chǎn)生懷疑態(tài)度的原因，利用微生物發(fā)酵轉(zhuǎn)化苷類中藥技術(shù)使中藥產(chǎn)品有效物質(zhì)基礎(chǔ)確定、作用機理明確，同時有效避免了傳統(tǒng)中藥制品"大、黑、多"的缺點。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的是提供一抹新的P-葡萄糖苷酶產(chǎn)生菌——黑曲霉ZJUT712,以及利用黑曲霉ZJUT712固態(tài)發(fā)酵炮制牛蒡子的方法。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是黑曲霉Uwew/〃MW取r)ZJUT712,保藏于中國樣i生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址北京市朝陽區(qū)大屯路中科院微生物研究所，保藏編號CGMCCNo.2594,保藏日期2008年7月15日。所述黑曲霉ZJUT712菌落特征菌落在查氏培養(yǎng)基上25。C培養(yǎng)7~10天，直徑50~80mm。菌絲絨毛狀，分生孢子結(jié)構(gòu)呈黑色，無滲出液，無氣^^未。菌落反面略帶淺黃色，有同心圓褶皺23圈，輻射狀褶皺56條。本發(fā)明還涉及所述的黑曲霉ZJUT712在固態(tài)發(fā)酵炮制牛蒡子中的應(yīng)用。具體的，所述的應(yīng)用為將黑曲霉ZJUT712菌種接種至含有牛蒡子粉的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，2050°C固態(tài)發(fā)酵炮制210天，優(yōu)選為5~9天，更優(yōu)選為7天，炮制結(jié)束后得到牛蒡子固態(tài)發(fā)酵炮制品，所述牛蒡子固態(tài)發(fā)酵炮制品可以按照常規(guī)方法分離純化得到牛蒡子苷元，進一步用于后續(xù)藥物的制備。常用分離純化牛蒡子苷元的方法將牛蒡子固態(tài)發(fā)酵炮制品干燥去除水分，加入10倍體積曱醇，減壓蒸干，殘留物加入氯仿溶解，取氯仿液，加無水硫酸鈉脫水、過濾、減壓蒸干得到主要含有牛蒡子苷元的混合物，再用硅膠柱分離牛蒡子苦元，洗脫劑為氯仿/曱醇(100:0~95:5)，并用曱醇等有機溶劑重結(jié)晶獲得高純度的牛蒡子苷元。樣品檢測方法將牛蒡子固態(tài)發(fā)酵炮制品樣品過濾，取濾渣干燥除去水分，加入十倍量曱醇回流，提取液轉(zhuǎn)移至容量瓶中，用曱醇定容至25mL。取適量用0.45iim微孔濾膜過濾后用液相色譜分析牛蒡子苷和牛蒡子苷元含量。分析條件為色譜柱KromasilODSC18柱(4.6mmx250mm:5pm)。流動相為曱醇-乙腈-水-四氫呋喃(10:24:65:i至io:39:50:1線性梯度)，流速lmL/min,檢測波長220nm,分析時間15min。所述固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基可為常規(guī)適用于黑曲霉的培養(yǎng)基添加牛蒡子粉獲得，碳源可選稻草粉、大麥粉、甘蔗渣、玉米芯、玉米淀粉或稻谷殼等，氮源可選蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、黃豆餅粉、尿素、(NH4)2S04或NaN03等，本發(fā)明中，所述固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基推薦按如下組成配制牛蒡子粉0.5~6.0g，麩皮25g,甘蔑渣l3g,蛋白胨0.10.5g，Mandels營養(yǎng)液5~12mL，以蒸餾水調(diào)節(jié)固液比為l:1.5~5.0,pH3.010.0。所述固液比是指培養(yǎng)基中所加入固體物質(zhì)(牛蒡子并分+麩皮+甘蔗渣+蛋白胨)與液體物質(zhì)(Mandels營養(yǎng)液+蒸餾水)的質(zhì)量之比。優(yōu)選的，所述固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基按如下組成配制牛蒡子粉0.5g,麩皮3g,甘蔗渣2g,蛋白胨0.3g,Mandels營養(yǎng)液10mL,蒸餾水10mL,pH自然。其中Mandels營養(yǎng)液(1L)的組成為KH2P042g,(NH4)2S041.4g，尿素0.3g，MgS04.7H200.3g，CaCl20.3g,FeS04.7H205mg，MnS04.H201.56mg,ZnS041.4mg,CoCl20.2mg,蒸餾水定容至1L。優(yōu)選的，所述方法如下將黑曲霉ZJUT712菌種接種至含有牛蒡子粉的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，30。C下固態(tài)發(fā)酵炮制7天，得到牛蒡子固態(tài)發(fā)酵炮制品。所述固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基按如下組成配制牛蒡子粉0.5g,麩皮3g,甘蔗渣2g，蛋白胨0.3g，Mandels營養(yǎng)液10mL，蒸餾水10mL,pH自然。本發(fā)明所述黑曲霉ZJUT712可接種在斜面培養(yǎng)基上于2040。C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)510天得到斜面菌種，斜面菌種(不用時于4"C冰箱中保藏)再接種至含有牛蒡子粉的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中進行固態(tài)發(fā)酵炮制。所述的斜面培養(yǎng)基的配制方法推薦如下稱耳又馬鈴薯200g,洗凈去皮切碎，加水1000mL,煮沸半小時，紗布過濾，加20g葡萄糖和20g瓊脂，充分溶解后趁熱用紗布過濾，分裝，121。C滅菌20min。本發(fā)明采用P-葡萄糖苷酶產(chǎn)生菌黑曲霉ZJUT712固態(tài)發(fā)酵法炮制牛蒡子的機理如下牛蒡子昔牛蒡子苷元黑曲霉ZJUT712可以利用固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分生長繁殖，同時產(chǎn)生的P-葡萄糖苷酶用于水解牛蒡子苷生成牛蒡子苷元，提高牛蒡子中牛蒡子苷元的含量，使牛蒡子攝入人體后迅速起效。采用(3-葡萄糖苷酶產(chǎn)生菌黑曲霉ZJUT712固態(tài)發(fā)酵炮制牛蒡子與傳統(tǒng)的牛蒡子炮制方法相比具有如下優(yōu)點①炮制機理明確，將現(xiàn)代生物技術(shù)與中藥炮制技術(shù)相結(jié)合，提高了藥物的炮制效果，使牛蒡子經(jīng)本發(fā)明方法炮制后有效成分牛蒡子苷元的有效含量大大^R高；②綠色環(huán)保，沒有三廢污染；③生產(chǎn)工藝簡單，成本低廉；④適用于大規(guī)模推廣，提高中藥現(xiàn)代化生產(chǎn)規(guī)模。本發(fā)明有益效果主要體現(xiàn)在:提供了一林可供固態(tài)發(fā)酵法炮制牛蒡子的新菌4朱——p-葡萄糖苷酶產(chǎn)生菌黑曲霉ZJUT712;利用本發(fā)明方法固態(tài)發(fā)酵炮制牛蒡子，牛蒡子苷轉(zhuǎn)化為牛蒡子苷元的摩爾產(chǎn)率可以達到93.0%,牛蒡子的有效成分大幅度提高，促使牛蒡子攝入人體快速起效；炮制工藝簡單、成本低廉、節(jié)能環(huán)保、適用于大規(guī)4莫推廣。(四)圖1為本發(fā)明實施例1工藝流程圖。具體實施方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行進一步描述，但本發(fā)明的保護范圍并不僅限于此實施例1:工藝流程圖參見圖1。斜面培養(yǎng)基的配制稱取馬鈴薯200g，洗凈去皮切石爭，加水1000mL煮沸半小時，紗布過濾，耳又濾液加20g葡萄糖和20g瓊脂，充分溶解后趁熱用紗布過濾，取濾液分裝試管，15磅蒸汽(121。C)滅菌20min，擺放斜面，放置冷卻。固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的配制在250mL三角瓶中分別加入牛蒡子粉0.5、1、1.5、2、2.5、5和6g(每組2個平行樣，測量時取平均值)。上述三角瓶中均加入麩皮3g,甘蔗渣2g,蛋白胨0.3g,Mandels營養(yǎng)液10mL和蒸餾水10mL,pH自然(5.6)。1g牛蒡子粉含有牛蒡子苷和牛蒡子苷元分別為3.73mg和0.8mg。黑曲霉ZJUT712菌種斜面的制備將黑曲霉ZJUT712(CGMCCNo.2594)接種于斜面培養(yǎng)基上于30。C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7天。將黑曲霉ZJUT7124從斜面接種于固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中于30。C分別轉(zhuǎn)化l、2、3、4、5、6、7、8和9天，每天耳又樣品過濾，耳又濾渣干燥除去水分，加入十倍量曱醇回流，提取液轉(zhuǎn)移至容量瓶中，用曱醇定容至25mL。取適量用0.45pm微孔濾膜過濾后用液相色譜分析牛蒡子苷和牛蒡子苷元含量。分析條件為色諳柱KromasilODSC18柱(4.6mmx250mm5)im)。流動相為甲醇-乙腈-水-四氫呋喃(10:24:65:i至io:39:50:1線性梯度)，流速1mL/min,檢測波長220nm,分析時間15min。計算摩爾產(chǎn)率，結(jié)果如表l所示1天內(nèi)牛蒡子苷沒有發(fā)生水解，隨著時間的延長產(chǎn)率提高，第7天產(chǎn)率達到較高值，第8、9天的產(chǎn)率與第7天相差不大，說明微生物產(chǎn)生的P-葡萄糖苷酶水解牛蒡子苷的能力在第7天較高，第8、9天酶的水解活力降低，水解速率降低。相關(guān)數(shù)據(jù)說明最佳的炮制時間為7天。表1:牛蒡子粉的用量和炮制時間不同對牛蒡子苷摩爾產(chǎn)率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實施例2:按照實施例1中的方法獲得黑曲霉ZJUT712菌種斜面。固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的配置在250mL三角瓶中分別加入2g甘蔗渣、稻草粉、大麥粉、玉米芯、玉米淀粉和稻谷殼(每組2個平行樣，測量時取平均值)。在上述三角瓶中均繼續(xù)加入牛蒡子粉0.5g,麩皮3g，蛋白胨0.3g,Mandels營養(yǎng)液10mL和蒸鎦水10mL,pH自然(5.6)。1g牛蒡子粉含有牛蒡子苷和牛蒡子苷元分別為3.73mg和0.8mg。將黑曲霉ZJUT712分別接種于上述轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，30。C轉(zhuǎn)化7天。產(chǎn)率測定及計算方法同實施例1,結(jié)果如表2所示。以2g甘蔗渣和3g麩皮為碳源可以獲得較高的產(chǎn)率，甘蔗渣可以使培養(yǎng)基的結(jié)構(gòu)更加疏松，有利于傳質(zhì)和氧的傳遞，有利于獲得較高的產(chǎn)率。表2:固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中不同的碳源對牛蒡子苷摩爾產(chǎn)率的影響碳源的種類(2g)稻草粉大麥粉甘蔗渣玉米芯玉米淀粉稻谷殼摩爾產(chǎn)率(％)87.582.193.072.670.281.5實施例3:按照實施例1中的方法獲得黑曲霉ZJUT712菌種斜面。固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的配置在250mL三角瓶中分別加入0.3g蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、黃豆餅粉、尿素、(NH4)2S04和NaN03(每組2個平行樣，測量時取平均值)。在上述三角瓶中均繼續(xù)加入牛蒡子粉0.5g，麩皮3g,甘蔗渣2g，Mandels營養(yǎng)液10mL和蒸餾水10mL，pH自然(5.6)。1g牛蒡子粉含有牛蒡子苷和牛蒡子苷元分別為3.73mg和0.8mg。將黑曲霉ZJUT712分別接種于上述轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，30。C轉(zhuǎn)化7天。產(chǎn)率測定及計算方法同實施例1,結(jié)果如表3所示。氮源種類不同對黑曲霉ZJUT712產(chǎn)生的P-葡萄糖苷酶水解活力不同。有機氮源有利于獲得較高產(chǎn)率。蛋白胨為較佳的氮源，其次分別為酵母膏、牛肉膏和黃豆餅粉。表3:固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中不同的氮源對牛蒡子苷摩爾產(chǎn)率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>實施例4:按照實施例1中的方法獲得黑曲霉ZJUT712菌種斜面。固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的配制在250mL三角瓶中分別加入0、10、20、30和40mL蒸餾水(每組2個平行樣，測量時取平均值)。在上述三角jf瓦中均繼續(xù)加入牛蒡子粉0.5g,麩皮3g,甘蔗渣2g,蛋白胨0.3g和Mandels營養(yǎng)液10mL,pH自然(5.6),配制成固液比分別為1:1.8、1:3.6、1:5.4、1:7.3和l:9的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基。1g牛蒡子粉含有牛蒡子苷和牛蒡子苦元分別為3.73mg和0.8mg。將黑曲霉ZJUT7124分別接種于上述轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，30。C轉(zhuǎn)化7天。產(chǎn)率測定及計算方法同實施例1,結(jié)果如表4所示。固液比不同時，黑曲霉ZJUT712產(chǎn)生的(3-葡萄糖苷酶水解活力不同，產(chǎn)率不同。水分含量過高，黑曲霉的菌絲浸沒在水中不易形成孢子，不利于菌體生長和產(chǎn)酶。沒有足夠的水分供給菌體生長也不利于菌體產(chǎn)酶。固液比為1:3.6時產(chǎn)率最高，說明牛蒡子苷可以在黑曲霉ZJUT712固態(tài)發(fā)酵過程中實現(xiàn)較好的轉(zhuǎn)化。表4:固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中不同的固液比對牛蒡子苷摩爾產(chǎn)率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>按照實施例1中的方法獲得黑曲霉ZJUT7124菌種斜面。固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的配置在250mL三角瓶中加入牛蒡子粉0.5g,麩皮3g,甘蔗渣2g，蛋白胨0.3g和Mandels營養(yǎng)液10mL，分別用稀鹽酸和氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基初始pH值分別為3、4、5、5.6、6、7、8、9和10(每組2個平4于樣，測量時取平均值)，并加蒸餾水調(diào)節(jié)固液比均為1:3.6。1g牛蒡子粉含有牛蒡子苷和牛蒡子苷元分別為3.73mg和0.8mg。將黑曲霉ZJUT712分別接種于上述轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，30。C轉(zhuǎn)化7天。產(chǎn)率測定及計算方法同實施例1,結(jié)果如表5所示。當(dāng)初始pH值為58之間時，產(chǎn)率相差不大。轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基的自然pH5.6可以確定為最佳初始pH值。表5:固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基初始pH值不同對牛蒡子苷摩爾產(chǎn)率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>實施例6:按照實施例1中的方法獲得黑曲霉ZJUT712菌種斜面。固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的配置在250mL三角瓶中加入牛蒡子粉0.5g，麩皮3g,甘蔗渣2g,蛋白胨0.3g,Mandels營養(yǎng)液10mL和蒸餾水10mL,pH自然(5.6)。1g牛蒡子粉含有牛蒡子苷和牛蒡子苷元分別為3.73mg和0.8mg。將黑曲霉ZJUT712分別接種于上述轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，分別于20、25、30、35、40、45和50。C的條件下轉(zhuǎn)化7天(每組2個平行樣，測量時:f又平均值)。產(chǎn)率測定及計算方法同實施例1,結(jié)果如表6所示。固態(tài)發(fā)酵的溫度不同黑曲霉ZJUT712產(chǎn)生的(3-葡萄糖苷酶活力不同，溫度在2035。C時產(chǎn)率相差不大，溫度高于40。C產(chǎn)率迅速下降，溫度升高p-葡萄糖苦酶的熱失活速率加快，不利于牛蒡子苷的轉(zhuǎn)化，最佳溫度為30。C。表6:炮制溫度不同對牛蒡子苷摩爾產(chǎn)率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>權(quán)利要求1.黑曲霉(Aspergillusniger)ZJUT712，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址北京市朝陽區(qū)大屯路中科院微生物研究所，保藏編號CGMCCNo.2594，保藏日期2008年7月15日。2.如權(quán)利要求1所述的黑曲霉ZJUT712在固態(tài)發(fā)酵炮制牛蒡子中的應(yīng)用。3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的應(yīng)用為將黑曲霉ZJUT712菌種接種至含有牛蒡子粉的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，20~50°C固態(tài)發(fā)酵炮制210天，得到牛蒡子固態(tài)發(fā)酵炮制品。4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基按如下組成配制牛蒡子粉0.56.0g，麩皮25g,甘蔗渣13g，蛋白胨0.1~0.5g,Mandels營養(yǎng)液512mL,以蒸鎦水調(diào)節(jié)固液比為1:1.5~5.0，pH3.0~10.0。5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基按如下組成配制牛蒡子粉0.5g，麩皮3g,甘蔗渣2g,蛋白胨0.3g，Mandels營養(yǎng)液10mL,蒸餾水lOmL,pH自然。6.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述方法如下將黑曲霉ZJUT712菌種接種至含有牛蒡子粉的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，30。C下固態(tài)發(fā)酵炮制7天，得到牛蒡子固態(tài)發(fā)酵炮制品；所述固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基按如下組成配制牛蒡子粉0.5g,麩皮3g,甘蔗渣2g,蛋白胨0.3g,Mandds營養(yǎng)液10mL,蒸餾水10mL，pH自然。7.如權(quán)利要求3~6所述的應(yīng)用，其特征在于所述黑曲霉ZJUT712接種至斜面培養(yǎng)基上于20~40。C下510天得到斜面菌種，所述斜面菌種再接種至含有牛蒡子粉的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中進行固態(tài)發(fā)酵炮制；所述的斜面培養(yǎng)基按如下方法配置稱取馬鈴薯200g,洗凈去皮切碎，加水1000mL,煮沸半小時，紗布過濾，加20g葡萄糖和20g瓊脂，充分溶解后趁熱用紗布過濾，分裝，121。C滅菌20min，冷卻得斜面培養(yǎng)基。全文摘要本發(fā)明提供了一株新的β-葡萄糖苷酶產(chǎn)生菌——黑曲霉ZJUT712，及其在固態(tài)發(fā)酵炮制牛蒡子中的應(yīng)用。黑曲霉(Aspergillusniger)ZJUT712，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址北京市朝陽區(qū)大屯路中科院微生物研究所，保藏編號CGMCCNo.2594，保藏日期2008年7月15日。本發(fā)明有益效果主要體現(xiàn)在提供了一株可供固態(tài)發(fā)酵法炮制牛蒡子的新菌株——β-葡萄糖苷酶產(chǎn)生菌黑曲霉ZJUT712；利用本發(fā)明方法固態(tài)發(fā)酵炮制牛蒡子，牛蒡子苷轉(zhuǎn)化為牛蒡子苷元的摩爾產(chǎn)率可以達到93.0％，牛蒡子的有效成分大幅度提高，促使牛蒡子攝入人體快速起效；炮制工藝簡單、成本低廉、節(jié)能環(huán)保、適用于大規(guī)模推廣。文檔編號A61K36/185GK101358173SQ20081012090公開日2009年2月4日申請日期2008年9月4日優(yōu)先權(quán)日2008年9月4日發(fā)明者海馮,楊根生,歐志敏申請人:浙江工業(yè)大學(xué)