專利名稱：一種青蒿琥酯納米乳藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于獸藥領(lǐng)域，涉及一種高效殺滅瘧原蟲、牛羊泰勒焦蟲的抗寄 生蟲藥物，具體是指一種青蒿琥酯納米乳藥物及其制備方法。
背景技術(shù)：
青蒿琥酯(Artesunate)，化學(xué)名為二氫青蒿素-1，2-a-琥珀酸單酯，是具有 倍半萜結(jié)構(gòu)的抗瘧藥青蒿素的衍生物，呈無色結(jié)晶或白色結(jié)晶性粉末，無臭， 幾乎無味。微溶于水，易溶于乙醇、丙酮、氯仿。青蒿琥酯作為一有效的抗 瘧藥，對間日瘧、惡性瘧、腦型瘧均有效。獸醫(yī)臨床主要用于治療牛、羊泰 勒焦蟲病及雙芽fe蟲病。青蒿琥酯的傳統(tǒng)片劑不能克服肝臟的首過效應(yīng)，而 且，市售的青蒿號酯粉針劑在人醫(yī)臨床肌注時(shí)病人有疼痛感。此外，由于青 蒿琥酯在水中溶解性差，難以有效地被輸送至病變部位及細(xì)胞內(nèi)，另外，其 鈉鹽穩(wěn)定性差，進(jìn)而造成其生物利用度低，病人用藥次數(shù)頻繁，耐受性差， 藥效差，大大限制其臨床應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
針對青蒿琥酯粉針劑現(xiàn)有劑型的缺陷和技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于 提供一種青蒿琥酯納米乳藥物組合物。將藥物增溶到納米乳體系中制成獸醫(yī) 臨床用于抗泰勒焦蟲及雙芽焦蟲的含青蒿琥酯納米乳劑。本發(fā)明將青蒿琥酯 制成納米乳，極大地增強(qiáng)了青蒿琥酯的效力，同時(shí)也解決了青蒿琥酯水溶性 差，而鈉鹽穩(wěn)定性差等缺點(diǎn)。
由于納米乳基質(zhì)屬于納米級乳液，可以使藥物增溶到納米乳體系中，提 高其穩(wěn)定性，可最大化地提高其藥物的利用率，故本發(fā)明將青蒿琥酯增溶于 納米乳基質(zhì)，制成納米級藥物，旨在通過該發(fā)明為獸醫(yī)臨床上提供新型的抗 寄生蟲藥物，起到對動(dòng)物寄生蟲病的治療和預(yù)防作用。
本發(fā)明的另一 目的是提供青蒿琥酯納米乳藥物組合物的制備方法。
3本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)-
一種青蒿琥酯納米乳藥物組合物，其配方組分用量在下述重量百分比范 圍都具有較好的效果 配方
油酸乙酯 1.6% 8%;
Tween-80 13.2 30%; 正丁醇 10°/。 18。/0; 超純水 50.4% 74%; 青蒿琥酯 0.5% 11%。 配方
油酸乙酯1.6 6.5%、 Tween畫80 13.2 27%、正丁醇10% 13.2%、青蒿 琥酯0.5°/。 5%、超純水50.4°/。 60%; 配方
油酸乙酯6%、 Tween-80 24%、正丁醇11.5%、超純水53.5%、青蒿琥 酯5%。
制備青蒿琥酯納米乳藥物的方法，包括以下步驟 一種制備青蒿琥酯納米乳藥物的方法，包括以下步驟
a) 稱取各藥物組分油酸乙酯、Tween-80、正丁醇、超純水、青蒿琥酯備
用；
b) 在室溫條件下，將a)稱取的油酸乙酯、Tween-80、正丁醇、青蒿琥 酯置于恒溫磁力，覺拌器上以200 400rpm攪拌混勻，攪拌至藥物溶于體系中；
c) 向混合物中緩慢滴加超純水，邊滴加邊攪拌；開始時(shí)體系黏度較小， 隨著水量的增加；體系逐漸變得黏稠，當(dāng)體系出現(xiàn)液晶相或W/0 (油包水型) 納米乳，繼續(xù)滴加超純水并不斷的攪拌，當(dāng)水量達(dá)到一定量時(shí)，體系呈透亮 變稀，即是0/W型納米乳；再將超純水加到足夠量，納米乳呈現(xiàn)澄清透亮、 淡黃色的液體。
本發(fā)明是將青蒿琥酯增溶于納米乳基質(zhì)制備成青蒿琥酯納米乳藥物，并 可以根據(jù)實(shí)際需要用超純水稀釋成不同濃度的青蒿琥酯納米乳液。
青蒿琥酯納米乳藥物經(jīng)透射電鏡檢測，按配方制成的納米乳外觀呈現(xiàn)澄清透亮，淡黃色的液體；納米乳滴粒徑分布在50 70nm之間》平均粒徑60nm (見圖1)。
本發(fā)明熱力學(xué)穩(wěn)定性好，貯存穩(wěn)定性好，久置不分層，甚至在離心加速 試驗(yàn)中12000rpm離心30min不分層。本發(fā)明防腐性能較好，不需要另加防腐 劑，所以比市售同類產(chǎn)品具有更好的防腐和防霉變能力，保質(zhì)期時(shí)間長。
含量測定
將制備好的青蒿琥酯納米乳用HPLC法進(jìn)行含量測定，采用安捷侖1100 系歹U高效液相色譜儀(Agilent 1100 series ); 色譜柱ODS柱 (4.6xl00mm,5um);檢測器G1314A紫外可變波長檢測器；泵G1311A 四元泵；柱溫箱G1316A;流動(dòng)相乙腈冰(65:35,用稀醋酸調(diào)PH二3.8); 柱溫為室溫；檢測波長210nm;進(jìn)樣量；20ui
標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立精密稱取青蒿琥酯標(biāo)準(zhǔn)品:lOmg，置100ml容量瓶中， 用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，配成lOOpg/ml的青蒿琥酯對照品儲備液，精密 吸取青蒿琥酯對照品儲備液lOml， 8ml， 6ml， 4ml， 2ml， lml，分別置于10ml 容量品中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，配置成濃度分別為100pg/ml， 80pg/ml， 60ng/ml,40|ig/ml, 20jig/ml， lOpg/ml系列的青蒿琥酯標(biāo)準(zhǔn)液，分別量取20pl 注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計(jì)算峰面積，以峰面積A對青蒿琥酯濃度C 進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程A=34961C- 36.725(r=0.9999)，表明 青蒿琥酯在10 100pg/ml濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。
含量測定精密量取己知含量的青蒿琥酯納米乳O.lml,置100ml容量瓶 中，以乙腈一水(63:35)稀釋至刻度，超聲混合均勻，靜置10min，過濾， 取續(xù)濾液用微孔濾膜(0.45pm)濾過，進(jìn)樣20ji1,記錄色譜圖，計(jì)算峰面積， 由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算藥物含量，結(jié)果見表l。
表l青蒿琥酯納米乳含量測定結(jié)果(n=3) Table 1 Contents of Artesunate nanoemulsion (n=3)
批號，相當(dāng)標(biāo)示量(％)RSD(%)
A100.361.23
B99.890.79
C99.520.98
5急性毒性試驗(yàn)
將制備好的納米乳以15g/kg灌胃，結(jié)果小鼠均無死亡，按照藥物急性毒 性分級標(biāo)準(zhǔn)，該K方青蒿琥酯納米乳屬于實(shí)際無毒。 綜上所述，本發(fā)明具有如下的有益效果-
1.傳統(tǒng)的青蒿琥酯注射劑為青蒿琥酯鈉，放置不穩(wěn)定，需要現(xiàn)用現(xiàn)配， 很不方便。本發(fā)明劑型為青蒿琥酯納米級乳液，給藥方便，能有效殺滅動(dòng)物 體內(nèi)外寄生蟲，大大提高療效(詳見試驗(yàn)例)。
i青蒿琥酯納米乳安全、高效，是一種有一定緩釋作用的抗寄生蟲納米 級藥物。
3. 本發(fā)明熱力學(xué)穩(wěn)定性好，貯存穩(wěn)定性好，久置不分層，甚至在離心加 速試驗(yàn)中也不會(huì)分層，保質(zhì)期時(shí)間長。
4. 本發(fā)明屬于納米級藥物，外觀澄清透明，乳液滴粒徑平均為60nm,分 散度良好，可用超純水稀釋成為不同濃度梯度的納米乳液。
5. 通過上述方法制備納米乳基質(zhì)工藝簡單，便于操作，而且所需原料價(jià) 格適中。


圖1為青蒿琥酯納米乳藥物透射電鏡圖。
具體實(shí)施例方式
以下通過試驗(yàn)例來闡述本發(fā)明所述藥物的有益效果，這些試驗(yàn)例包括了本 發(fā)明藥物的藥效學(xué)試驗(yàn)和臨床療效觀察試驗(yàn)。
試驗(yàn)例本發(fā)明對羔羊進(jìn)行血孢子蟲病防治試驗(yàn)
試驗(yàn)材料'
選本發(fā)明藥物青蒿琥酯納米乳(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所農(nóng) 業(yè)部新獸藥工程重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室制備，載藥量27.52mg/g)，焦蟲凈(粉針劑， 0.2g/支，專用溶媒2.5ml/支，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所提供， 批號980910)試驗(yàn)方法-
選擇己感染患病且年齡、體重接近的羔羊i20只作為試驗(yàn)病例。將血孢子 蟲病羔羊按試驗(yàn)點(diǎn)分組，每個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)選30只羔羊，隨即分為4組(兩個(gè)試驗(yàn) 組和兩個(gè)焦蟲凈對照組)。試驗(yàn)組納米乳以2個(gè)劑量(0.1mg/kg與0.4mg/kg) 肌肉注射，每天1次，連用2 3天。焦蟲凈對照組以0.5mg/kg和1mg/kg深 部肌注，每天1次，連用3 4天。治療后以用藥次數(shù)、體重變化、治愈時(shí)間、 治愈率、平均用藥成本等指標(biāo)進(jìn)行療效綜合評估，詳見表2。
表2青蒿琥酯納米乳和焦蟲凈治療羔羊血孢子蟲病試驗(yàn)結(jié)果
藥物劑量 /mg.kg小動(dòng)物數(shù)/ 只月齡試驗(yàn)前體 淑g試驗(yàn)后體 ——一漁g —治愈率/%治愈時(shí)間/d
納米乳0.3306 78.9±3.08.7±1.997.5%4
納米乳0.7306 78.6±2.68.5±2.3100%3
焦蟲凈0.5306 78.7±2.78.5±2.296.7%
焦蟲凈1.0306 78.8±3.1100%4
經(jīng)過對試驗(yàn)點(diǎn)使用青蒿琥酯納米乳和焦蟲凈治療羔羊血孢子蟲病結(jié)果比
較分析(見表2)，青蒿琥酯納米乳治愈所需時(shí)間短，治愈率較高，以青蒿琥 酯納米乳高劑量組為佳。
下面，再通過實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)一步予以說明 實(shí)施例l
1) 稱取油酸乙酯6g、 Tween-80 22g、正丁醇11.5g、青蒿琥酯3g、超純 水57.5g備用；
2) 在室溫4件下，將上所述重量的油酸乙酯、Tween-80、正丁醇、青蒿 琥酯置于恒溫磁力攪拌器上200 400rpm攪拌混勻，攪拌至藥物溶于體系中。
3) 向混合物中緩慢滴加超純水，邊滴加邊攪拌；開始時(shí)體系黏度較小， 隨著水量增加至16ml時(shí)，體系逐漸變得黏稠，此時(shí)體系可能出現(xiàn)液晶相或 W/0 (油包水型)納米乳，繼續(xù)滴加并不斷的攪拌，當(dāng)水量達(dá)到32ml時(shí)，體 系會(huì)突然變透亮變稀，此時(shí)產(chǎn)生的即是O/W型納米乳，將超純水加到57.5ml， 體系流動(dòng)性良好，制備成澄清透明的OAV型納米乳。
實(shí)施例2 :
71) 稱取各藥物組分油酸乙酯4,6g、 Tween-80 13.2g、正丁醇8。7g、青蒿 琥酯2g、超純水71.5g備用。
2) 在室溫條件下，將上所述重量的油酸乙酯、Tween-80、正丁醇、超純 水、青蒿琥酯置于恒溫磁力攪拌器上200 400rpm攪拌混勻，攪拌至藥物溶 于上述體系中。
3) 向混合物中緩慢滴加超純水，邊滴加邊攪拌；開始時(shí)體系黏度較小， 隨著水量增加，體系逐漸變得黏稠，此時(shí)體系可能出現(xiàn)液晶相或W/0 (油包 水型)納米乳，繼續(xù)滴加并不斷的攪拌，當(dāng)水量達(dá)到50ml時(shí)，體系會(huì)突然變 透亮變稀，此時(shí)產(chǎn)生的即是0/W型納米乳，將超純水加到71.5ml，體系流動(dòng) 性良好，制備成澄清透明的O/W型納米乳。
實(shí)施例3
1) 稱取各藥物組分油酸乙酯6g、 Tween-80 24g、正丁醇11.5g,超純水 53.5g、青蒿琥酯5g備用。
2) 在室溫條件下，將上所述重量的油酸乙酯、Tween-80、正丁醇、超純 水、青蒿琥酯置于恒溫磁力攪拌器上200 400rpm攪拌混勻，攪拌至藥物溶 于上述體系中。
3) 向混合物中緩慢滴加超純水，邊滴加邊攪拌；開始時(shí)體系黏度較小， 隨著水量增加至，體系逐漸變得黏稠，此時(shí)體系可能出現(xiàn)液晶相或W/O (油 包水型)納米乳，繼續(xù)滴加并不斷的攪拌，當(dāng)水量達(dá)到28ml時(shí)，體系會(huì)突然 變透亮變稀，此時(shí)產(chǎn)生的即是0/W型納米乳，將超純水加到53.5ml，體系流 動(dòng)性良好，制備成澄清透明的0/W型納米乳。
上述三個(gè)實(shí)施例中，以實(shí)施例3的配方比例最佳，載藥量最高。三個(gè)實(shí) 施例中制備的納米乳其顏色，透明度無明顯變化，0'C 6(TC放置均很穩(wěn)定。
權(quán)利要求
1.一種青蒿琥酯納米乳藥物組合物，由下列重量百分比的原料組成油酸乙酯1.6％～8％；Tween-8013.2～30％；正丁醇 10％～18％；超純水 50.4％～74％；青蒿琥酯0.5％～11％。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的青蒿琥酯納米乳藥物，其中各原料優(yōu)選的重量百分比為油酸乙酯1.6 6.5°/o、 Tween-80 13.2 27%、正丁醇10% 13。2%、超純 水50.4% 60%、青蒿琥酯0.5% 5%。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的青蒿琥酯納米乳藥物，其中各原料最佳的重量百分比為油酸乙酯'6%、 Tween-80 24%、正丁醇11.5%、超純水53.5%、青蒿琥 酯5%。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1 3所述的--種青蒿琥酯納米乳藥物，其特征在于 所述的納米乳藥物的乳液滴粒徑為10 100nm。
5. —種制備權(quán)利要求1所述的青蒿琥酯納米乳藥物的方法，包括以下步 驟 ，a) 稱取各藥物組分油酸乙酯、Tween-80、正丁醇、超純水、青蒿琥酯備用；b) 在室溫舉件下，將a)稱取的油酸乙酯、Tween-80、正丁醇、青蒿琥 酯置于恒溫磁力揮拌器上以200 400rpm攪拌混勻，攪拌至藥物溶于體系中；c)向混合物中緩慢滴加超純水，邊滴加邊攪拌；開始時(shí)體系黏度較小， 隨著水量的增加，體系逐漸變得黏稠，當(dāng)體系出現(xiàn)液晶相或W/0 (油包水型) 納米乳，繼續(xù)滴加超純水并不斷的攪拌，當(dāng)水量達(dá)到一定量時(shí)，體系呈透亮 變稀，即是0/W型納米乳；再將超純水加到足夠量，納米乳呈現(xiàn)澄清透亮、 淡黃色的液體。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種青蒿琥酯納米乳藥物，由油酸乙酯、Tween-80、正丁醇、超純水、青蒿琥酯組成的O/W型(水包油型)納米乳體系。該納米乳藥物有效地克服了傳統(tǒng)片劑在肝臟的首過效應(yīng)，注射無疼痛感，極大地提高了原青蒿琥酯的殺蟲驅(qū)蟲作用。同時(shí)該納米乳體系具有較高的載藥量，放置穩(wěn)定，與市售青蒿琥酯注射劑相比有一定的緩釋作用，而且給藥方便，極大地提高了生物利用度。此外，通過對小鼠的急性毒性實(shí)驗(yàn)和臨床藥效試驗(yàn)表明，該納米乳無明顯毒副作用，是一種安全、可靠、高效的納米級抗寄生蟲藥物。
文檔編號A61K9/107GK101623255SQ20081015035
公開日2010年1月13日 申請日期2008年7月8日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月8日
發(fā)明者吳培星, 周緒正, 張繼瑜, 李劍勇, 李金善, 牛建榮, 胡宏偉, 魏小娟 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所