專利名稱：雙層膜狀組織修補材料及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于組織工程的生物材料技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種雙層膜狀組 織修補材料及其制備方法。
背景技術(shù)：
皮膚是覆蓋和保護體表的重要組織器官。由于炎癥、潰瘍、外傷、燒 傷、腫瘤術(shù)后以及先天性畸形等原因常造成皮膚的缺損和異常。對于暴露 的皮膚創(chuàng)面，在傳統(tǒng)上使用最多的就是紗布。紗布多由棉花、軟麻布和亞 麻布加工而成，屬于惰性材料，對創(chuàng)面的愈合無直接促進作用。隨著對傷口
愈合研究的深入，人們認識到不僅要覆蓋創(chuàng)面，還必須幫助傷口愈合。由細 胞外基質(zhì)構(gòu)成的生物材料就是其中比較理想的一類產(chǎn)品，其主要成分包括 膠原、非膠原糖蛋白、彈力纖維、糖胺多糖、蛋白聚糖、與基質(zhì)代謝相關(guān)
的酶及細胞因子；為細胞的生存及活動提供適宜的場所，不僅是細胞的機 械支持組織，而且是供給營養(yǎng)和免疫應(yīng)答的場所，決定細胞的粘附與遷移, 在創(chuàng)傷修復(fù)和纖維化、細胞的生長、分化、代謝和腫瘤發(fā)生及轉(zhuǎn)移中起重 要作用，并作為組織替代材料用于臨床研究，在多種組織器官的修復(fù)中發(fā) 揮著重要的作用。
組織修補材料的促愈合作用表現(xiàn)在具有一定的止血促凝作用，還可 誘導(dǎo)多種細胞增殖分化；膠原蛋白不但可作為傷口凝血塊的基底，而且是 粒細胞、巨噬細胞、纖維母細胞的趨化性物質(zhì)，為各種細胞的游走、附著、
增殖提供支架。組織修補材料在創(chuàng)面最終降解為機體修復(fù)細胞所必需的氨 基酸，為創(chuàng)面修復(fù)提供營養(yǎng)物質(zhì)。
目前已商品化的雙層膜狀生物材料有Integra (Integra LifeSciences公 司生產(chǎn))，為雙層基質(zhì)的人工皮膚，真皮部分由牛肌腱的膠原蛋白及硫酸軟 骨素制成具有一定孔洞大小的支架，表皮層則由硅膠膜組成，可以控制傷口 水氣的蒸散，在傷口愈合過程，真皮層會與傷口結(jié)合，表皮層的硅膠膜可以 在真皮層愈合后去除，再進一步做自體皮膚移植，美國FDA已在1996年 核準Integra在燒燙傷治療使用；其不足主要在于，由于其表面有不可降 解的硅膠膜，不易觀察創(chuàng)面早期的感染情況，不利于創(chuàng)緣表皮細胞的爬行和 創(chuàng)面的封閉，后期揭掉硅膠膜還需要二次手術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供一種雙層膜狀組織修補材料及其制備方法，具有
制備周期短、成本低、方法簡便、易于操作的優(yōu)點；所制備的雙層膜狀組織 修補材料具有止血、防止體液流失、保護創(chuàng)面并促進創(chuàng)面愈合的功能，有良 好的生物相容性，能用于修復(fù)皮膚缺損、控制創(chuàng)面感染、治療難愈性的創(chuàng)面， 同時還具有形狀、大小和厚度易于改變的優(yōu)點。
本發(fā)明所提出的雙層膜狀組織修補材料，其特征在于是由脫細胞膜狀
生物衍生材料作為表層，由成纖維細胞合成分泌的細胞外基質(zhì)和細胞生長因
子復(fù)合于生物支架材料內(nèi)部形成基層，兩者嵌合構(gòu)成；所述的脫細胞膜狀生 物衍生材料為天然生物組織經(jīng)脫細胞處理后所形成膜狀生物醫(yī)用材料,包括 脫細胞小腸粘膜下層、脫細胞真皮基質(zhì)、脫細胞筋膜、脫細胞膀胱粘膜下層、
脫細胞羊膜、脫細胞硬腦膜的任一種；所述的成纖維細胞為自體或異體來源
的成纖維細胞，或是可向成纖維細胞分化的干細胞，包括骨髓間充質(zhì)干細胞、 脂肪間充質(zhì)干細胞、造血干細胞、皮膚干細胞、間充質(zhì)干細胞、肌肉干細胞，
肝臟干細胞、神經(jīng)干細胞的任一種；所述的生物支架材料是能為細胞生長提 供三維空間的支撐材料，包括纖維蛋白原、纖維蛋白、海藻酸鹽、膠原蛋白、 透明質(zhì)酸、硫酸軟骨素、殼聚糖、水凝膠、明膠、聚乳酸、聚羥基乙酸的任 一種或是幾種的混合。
本發(fā)明所述的雙層膜狀組織修補材料的制備方法，包括有細胞獲取、 脫細胞膜狀生物衍生材料制備以及雙層膜狀組織修補材料的構(gòu)建，具體步 驟如下
步驟l).成纖維細胞的獲取成纖維細胞來自人體組織，細胞按常規(guī) 的培養(yǎng)方法進行體外培養(yǎng)和大規(guī)模擴增培養(yǎng)；
步驟2).脫細胞膜狀生物衍生材料的制備將取自同種或異種的皮膚 真皮層、或筋膜、或小腸粘膜下層、或羊膜、或硬腦膜任一種膜狀生物材 料，置于含有過氧乙酸和乙醇的水溶液中浸泡消毒l小時以上，用磷酸鹽緩 沖液(PBS溶液)清洗；(若是釆用較厚的生物材料，如皮膚真皮層，此時需 置于-8(TC冷凍半小時以上，確保材料內(nèi)外溫度達到一致，取出后自然解凍， 如此反復(fù)凍融2~5次，使細胞完全破裂崩解，用PBS溶液清洗)；將其置 于O. 1 1M的Na0H溶液浸泡進行脫脂、脫細胞處理；再用PBS溶液浸洗至 pH中性，將其再置入含有DNA酶和oc-半乳糖苷酶的混合溶液中，37'C環(huán)境 下處理25分鐘以上，去除殘留的DNA和ot-gal天然抗原成分，降低免疫原
性，用PBS溶液清洗；為了使其與支架材料結(jié)合牢固，釆用機械方法在其材 料上均勻制孔，孔徑O. l~lmm,間距O. 5~5mm;將無孔的脫細胞生物衍生 材料與有孔的脫細胞生物衍生材料疊加壓緊使其緊密結(jié)合，干燥滅菌后成為
雙層脫細胞膜狀生物衍生材料，備用；
其中，所述的過氧乙酸和乙醇的體積終濃度分別為0. 1 ~ 0. 5%和2 ~ 10%; 所述DNA酶和a-半乳糖苷酶的終濃度分別為30~50U/ml和10~25U/ml;
步驟3).專用培養(yǎng)液的配制，其組分按體積百分比包括有商用最低必 需培養(yǎng)液DMEM 67. 5 %、商用培養(yǎng)液Fl2 22. 5%、胎牛血清5 ~ 15%，堿性成 纖維細胞生長因子2~100 ng/ml、表皮細胞生長因子2 ~ 100 ng/ml、胰島 素1~50 ng/ml、氫化可的松10 - 500 ng/ml、腺喋呤0. 2 ~ 0. 25 mM、轉(zhuǎn)鐵 蛋白1 ~ 10 jug/ml;
步驟4).雙層膜狀組織修補材料的構(gòu)建先配制生物支架材料的凝膠
溶液；將制備的雙層脫細胞生物衍生材料浸透凝膠溶液后，置于^x:環(huán)境
下預(yù)固化；將體外培養(yǎng)的成纖維細胞按104~106個/011的濃度混合于凝膠溶液 中，再按0. 1 lml/cm2滴加到預(yù)固化的脫細胞生物衍生材料的有孔面上，置 于5%0)2環(huán)境中37。C條件下固化；再置入專用培養(yǎng)液中培養(yǎng)2 3天后，將其 置于培養(yǎng)器皿內(nèi)的培養(yǎng)支架上繼續(xù)培養(yǎng)6 10天，培養(yǎng)期間每天換液，雙層膜 狀組織修補材料培養(yǎng)完成；上述的培養(yǎng)條件均為37°C, 5%()02環(huán)境；
其中，所述的生物支架材料的凝膠溶液可以按以下配制在4。C條件下，
按質(zhì)量比將膠原7-10 :殼聚糖o. 5-1 :透明質(zhì)酸2~3 :硫酸軟骨素
0. 5 ~ 1混合，用0. 1 ~ 0. 5M的醋酸將其配制成濃度為6 ~ 20mg/ml溶液，冰
浴下紫外線照射后，按其體積加入10%的胎牛血清，再加入DMEM培養(yǎng)基使 其終濃度達到10mg/ml,調(diào)節(jié)pH值至L 2~7.4，制成凝膠溶液；也可釆用 其他凝膠溶液的配方配制；
步驟5).干燥保存將培養(yǎng)的雙層膜狀組織修補材料浸泡于冷凍保護 液中"分鐘以上，經(jīng)冷凍干燥后滅菌消毒，得到可長期保存的雙層膜狀組 織修補材料；所述的冷凍保護液為Hanks平衡鹽溶液中加有0. 1 ~ 10%葡萄 糖、0. 1~5%蔗糖、0.1~5%海藻糖、0.1-0. 5%人血清白蛋白(均為重量比)。
本發(fā)明的制備方法具有成本低、方法簡便、原料來源不受限制、提高 了產(chǎn)品的生物相容性、便于臨床使用的優(yōu)點；所制備的雙層膜狀組織修補 材料與已有的產(chǎn)品相比具有以下優(yōu)點具有表層和基層雙層結(jié)構(gòu)，表層結(jié) 構(gòu)與基層嵌合在一起，結(jié)合緊密；脫細胞膜狀生物衍生材料所形成的較致 密的表層結(jié)構(gòu)可以有效地減少水分、電解質(zhì)和蛋白質(zhì)由創(chuàng)面的丟失，有效 阻止細菌對受損創(chuàng)面的入侵、繁殖，防止創(chuàng)面感染，誘導(dǎo)創(chuàng)周表皮細胞向 創(chuàng)面的遷移，有利于上皮的增殖和生長；基層由與皮膚真皮成分接近的成 纖維細胞合成分泌的細胞外基質(zhì)和多種細胞生長因子構(gòu)成，可引導(dǎo)創(chuàng)周細 胞的長入、血管的生成、誘導(dǎo)干細胞向皮膚細胞的分化，因此可以明顯促 進創(chuàng)面的愈合；并可以促進創(chuàng)面皮膚的再生，增強創(chuàng)面愈合后的皮膚彈性、 柔韌性和機械耐磨性，減少瘢痕增生，控制攣縮，良好的生物相容性可改 善愈合質(zhì)量，同時保存期大大延長。
本發(fā)明所制備的雙層膜狀組織修補材料，大小厚度可以控制，生產(chǎn)周 期短，而且無明顯免疫排斥反應(yīng)以及良好的生物相容性。其在臨床應(yīng)用中
的主要作用有(1)作為皮膚大面積缺損患者的創(chuàng)面覆蓋和供皮區(qū)的覆蓋； (2)修復(fù)營養(yǎng)不良和感染創(chuàng)面；(3)治療慢性難愈性潰瘍創(chuàng)面；(4 )術(shù)后 創(chuàng)面的覆蓋和預(yù)防感染；(5)充當組織加強物，替代筋膜，修復(fù)膜性缺損。
具體實施例方式
以下結(jié)合實例對本發(fā)明技術(shù)方案做進 一 步的詳細說明。 實施例1:
步驟l).成纖維細胞的獲取取新生兒切除術(shù)后包皮組織，消毒后用磷 酸鹽緩沖液(PBS)沖洗，去除皮下脂肪及肌肉層，將皮膚剪成條狀，用4U/ml 中性蛋白酶液消化2小時；去除表皮層，將真皮組織剪碎，用625U/ml的膠 原酶液消化2.5小時，收獲成纖維細胞培養(yǎng)；將原代培養(yǎng)的成纖維細胞使用 細胞工廠、或旋轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)系統(tǒng)、或生物反應(yīng)器等方法進行擴大培養(yǎng)；
步驟2).雙層脫細胞小腸粘膜下層的制備將新鮮豬空腸用蒸餾水沖 洗干凈，切成所需片段，置于含有0.2%過氧乙酸和8%乙醇的水溶液中浸泡 消毒1小時，用PBS液漂洗；機械刮除小腸粘膜、肌層和漿膜，用PBS漂洗 干凈，獲得粘膜下層；再將其置入lM的NaOH溶液中，于4土2。C條件下浸泡 IO分鐘，用PBS液漂洗至pH中性；將其置入含有40U/ml DNA酶和10U/mlot -半乳糖苷酶的混合溶液中浸泡l小時，用PBS液漂洗干凈；獲得脫細胞小腸 粘膜下層；使用制孔機在其上均勻制孔，孔徑0.2mm，間距0.5mm，用無孔的 脫細胞小腸粘膜下層與有孔的脫細胞小腸粘膜下層各取相同大小疊加、壓緊 使其緊密結(jié)合，干燥后環(huán)氧乙烷滅菌，制成雙層脫細胞小腸粘膜下層；
步驟3).專用培養(yǎng)液的配制，各組分按體積百分比包括有商用最低必
需培養(yǎng)液DMEM 67.5%、商用培養(yǎng)液F12 22. 5%、胎牛血清10%,堿性成纖維 細胞生長因子IO ng/ml、表皮細胞生長因子5 ng/ml、胰島素5 ng/ml、氫 化可的松20 ng/ml、腺嘌呤O. 25 mM、轉(zhuǎn)鐵蛋白5 ju g/ml。
步驟4).雙層膜狀組織修補材料的構(gòu)建在4。C條件下，按質(zhì)量比將膠
原io:殼聚糖i :透明質(zhì)酸2 :硫酸軟骨素o. 5混合，用o. im的醋酸將其配
制成濃度為10mg/ml的溶液，冰洛下紫外線照射，按其體積加入10%的胎牛 血清，再加入DMEM培養(yǎng)基使其終濃度為10mg/ml，調(diào)節(jié)pH值7. 2 ~ 7. 4,成 為凝膠溶液；將制備的雙層脫細胞小腸粘膜下層浸透凝膠溶液，于37。C環(huán)境 下預(yù)固化30分鐘；將體外培養(yǎng)的成纖維細胞按106個/1111的濃度混合于上述 凝膠溶液中，再按lml/cm2滴加到預(yù)固化的雙層脫細胞小腸粘膜下層的有孔 面上，于5%0)2環(huán)境中37。C條件下固化30分鐘后，加入專用培養(yǎng)液培養(yǎng)3 天后，再將其置于培養(yǎng)器皿內(nèi)的培養(yǎng)支架上繼續(xù)培養(yǎng)6天，期間每天換液， 雙層膜狀組織修補材料培養(yǎng)完成；上述的培養(yǎng)條件均為37°C， 5%002環(huán)境； 步驟5).干燥保存將完成培養(yǎng)后的雙層膜狀組織修補材料浸泡于冷凍 保護液中30分鐘，冷凍保護液為Hanks平衡鹽溶液中加有1%葡萄糖、2% 蔗糖、1°/ 海藻糖、0. 1%人血清白蛋白(均為重量比)，再將其冷凍干燥后， 鈷60滅菌消毒。
本實例制備的雙層膜狀組織修補材料包含有人成纖維細胞所合成、分泌 的細胞外基質(zhì)和生長因子，可直接參與創(chuàng)面的修復(fù)，適于皮膚組織缺損的修 復(fù)材料；其經(jīng)細胞失活處理后可長期保存，便于臨床使用。 實施例2:
步驟1).成纖維細胞的獲取參照文獻Dermal matrix as a carrier for in vivo delivery of human adipose—derived stem cells. Biomaterials. 2008 Apr; 29 (10): 1431-42.已證明脂肪間充質(zhì)干細胞可以分化為成纖維細 胞。取手術(shù)中廢棄的健康脂肪組織，消毒后用磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗， 剪碎脂肪組織，用625U/ml的膠原酶液消化150分鐘，將收獲的脂肪間充質(zhì) 干細胞接種至培養(yǎng)瓶培養(yǎng)；再用細胞工廠、或旋轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)系統(tǒng)、或生物反應(yīng) 器的方法進行擴大培養(yǎng)；
步驟2).脫細胞真皮制備將新鮮豬皮膚用蒸餾水沖洗干凈，機械去除表 皮層和皮下組織層，切成0.4mm厚度、5cm2大小，置于含有0. 2% ( v/v )過氧 乙酸和5M(v/v)乙醇的水溶液中浸泡消毒l小時，用PBS漂洗；再置于-80 'C冷凍半小時，確保材料內(nèi)外溫度達到一致，取出后自然解凍，如此反復(fù)凍 融3次，使細胞完全破裂崩解，用PBS溶液清洗；將其置入0. 3 M的Na0H溶 液中，于4士2。C條件下浸泡30分鐘，用PBS漂洗至pH中性；再將其置入含 有30U/ml DNA酶和20U/mla-半乳糖苷酶的溶液中浸泡1小時，用PBS漂洗 干凈，獲得脫細胞真皮；使用制孔機在脫細胞真皮上均勻制孔，孔洞直徑lmm， 間距3 mm，再用無孔的脫細胞真皮與有孔的脫細胞真皮各取相同大小疊加、 壓緊使其緊密結(jié)合，干燥后環(huán)氧乙烷滅菌，形成雙層脫細胞真皮；
步驟3).專用培養(yǎng)液的配制，各組分按體積百分比包括有商用最低必需 培養(yǎng)液DMEM 67. 5 %、商用培養(yǎng)液F12 22.5%、胎牛血清10%,堿性成纖維細 胞生長因子10ng/ml、表皮細胞生長因子10ng/ml、胰島素5 ng/ml、氫化 可的松20 ng/ml、腺嘌呤O. 15 mM、轉(zhuǎn)鐵蛋白5pg/ml;
步驟4).雙層膜狀組織修補材料的構(gòu)建在rC條件下，按質(zhì)量比將膠原
8 :殼聚糖l :透明質(zhì)酸3:硫酸軟骨素i混合，用o. 3M的醋酸將其配制成
濃度為6mg/ml溶液，冰浴下紫外線照射，按其體積加入10。/。的胎牛血清，再 加入DMEM培養(yǎng)基使其終濃度達到10mg/ml，調(diào)節(jié)pH值為7. 2 ~ 7. 4，成為凝 膠溶液；將制備的雙層脫細胞真皮浸透凝膠溶液后，于37'C環(huán)境下預(yù)固化； 將體外培養(yǎng)的脂肪間充質(zhì)干細胞按5 x 105個/ml的濃度混合于凝膠溶液中， 再將該凝膠溶液按lml/cm2滴加到預(yù)固化的雙層脫細胞真皮的有孔面上，置 于5%0)2環(huán)境37。C條件下固化后，加入專用培養(yǎng)液培養(yǎng)2天，再將其置于 培養(yǎng)器皿內(nèi)的培養(yǎng)支架上繼續(xù)培養(yǎng)9天，期間每天換液，雙層膜狀組織修補 材料培養(yǎng)完成；上述的培養(yǎng)條件均為37°C, 5%0)2環(huán)境；
步驟5).干燥保存將完成培養(yǎng)后的雙層膜狀組織修補材料浸泡于冷凍 保護液中60分鐘，冷凍保護液為Hanks平衡鹽溶液中加5%葡萄糖、0.5% 蔗糖、4%海藻糖、0.2%人血清白蛋白(均為重量比)，再經(jīng)冷凍干燥后，環(huán) 氧乙烷滅菌消毒。
本實例制備的雙層膜狀組織修補材料包含有人脂肪間充質(zhì)干細胞所合 成、分泌的細胞外基質(zhì)和生長因子，適于皮膚組織缺損的修復(fù)材料，同時具 有脂肪間充質(zhì)干細胞來源不受限制、增殖旺盛、分泌能力強的優(yōu)點。經(jīng)冷 凍干燥處理后可長期保存12個月，便于臨床使用。
權(quán)利要求
1、一種雙層膜狀組織修補材料，其特征在于，其是由脫細胞膜狀生物衍生材料作為表層，由成纖維細胞合成分泌的細胞外基質(zhì)和細胞生長因子復(fù)合于生物支架材料內(nèi)部形成基層，兩者嵌合構(gòu)成；所述的脫細胞膜狀生物衍生材料為天然生物組織經(jīng)脫細胞處理所形成的膜狀生物醫(yī)用材料；所述的成纖維細胞為自體或異體來源的成纖維細胞，或是可向成纖維細胞分化的干細胞；所述的生物支架材料是能為細胞生長提供三維空間的支撐材料。
2、 制備權(quán)利要求l所述雙層膜狀組織修補材料的方法，包括有細胞獲 取、脫細胞膜狀生物衍生材料制備的步驟，其特征在于，具體步驟如下-.步驟l).成纖維細胞的獲取成纖維細胞來自人體組織，按常規(guī)的培養(yǎng) 方法進行體外培養(yǎng)和大規(guī)模擴增；步驟2).脫細胞膜狀生物衍生材料的制備釆用皮膚真皮層、筋膜、小 腸粘膜下層、羊膜、硬腦膜的任一種膜狀生物材料制備；將材料置于含有過 氧乙酸和乙醇的水溶液中浸泡消毒不低于l小時，用磷酸鹽緩沖液清洗；將 其置于NaOH溶液浸泡處理；用磷酸鹽緩沖液浸洗至pH中性，再將其置入含 有DNA酶和ct-半乳糖苷酶的混合溶液中，37'C環(huán)境下處理25分鐘以上，用 磷酸鹽緩沖液浸洗后，在其上均勻制孔，再將無孔的與有孔的脫細胞生物衍生 材料疊加壓緊使其緊密結(jié)合，干燥滅菌，成為雙層脫細胞膜狀生物衍生材料；步驟3).專用培養(yǎng)液的配制，其組分按體積百分比包括有商用最低必 需培養(yǎng)液DMEM 67. 5%、商用培養(yǎng)液F12 22.5%、胎牛血清5 ~ 15%，堿性成纖 維細胞生長因子2-100 ng/ml、表皮細胞生長因子2 ~ 100 ng/ml、 胰島素 1~50 ng/ml、氫化可的松10 - 500 ng/ml、腺嘌呤0. 2 ~ 0. 25 mM、轉(zhuǎn)鐵蛋 白1 ~ 10 ju g/ml;步驟4).雙層膜狀組織修補材料的構(gòu)建先配制生物支架材料的凝膠 溶液；將制備的雙層脫細胞膜狀生物衍生材料浸透凝膠溶液后，置于37°C 環(huán)境下預(yù)固化；將體外培養(yǎng)的成纖維細胞按104~106個/1111的濃度混合于凝膠 溶液中，再按0. 1 lml/cm2滴加到預(yù)固化的脫細胞膜狀生物衍生材料的有孔 面上，置于5%0)2環(huán)境中37'C條件下固化；再置入專用培養(yǎng)液中培養(yǎng)2 3天 后，將其置于培養(yǎng)器皿內(nèi)的培養(yǎng)支架上繼續(xù)培養(yǎng)6 10天，培養(yǎng)期間每天換液， 培養(yǎng)完成；上述的培養(yǎng)條件均為37°C， 5%(:02環(huán)境；步驟5).干燥保存將培養(yǎng)的雙層膜狀組織修補材料浸泡于冷凍保護 液中25分鐘以上，經(jīng)冷凍干燥后滅菌消毒，得到雙層膜狀組織修補材料。
3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟2)中在所述脫 細胞膜狀生物衍生材料制孔的孔徑為0. 1 ~ lmm，間距為0. 5 ~ 5mm。
4、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，在步驟2)中所述的 過氧乙酸和乙醇的體積終濃度分別為0. 1 ~ 0. 5%和2 ~ 10%;所述DM酶和a-半乳糖苷酶的終濃度分別為30~50U/ml和10~25U/ml。
5、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，在步驟2)中所述的浸 泡消毒清洗后，NaOH溶液浸泡前，將材料置于-80。C冷凍半小時以上，取出后 自然解凍，如此反復(fù)凍融2 ~ 5次,用磷酸鹽緩沖液清洗后再于NaOH溶液浸泡。
6、根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，在步驟5)中所述的冷 凍保護液為Hanks平衡鹽溶液中按重量比加有0. 1~10%葡萄糖、0. 1 ~ 5% 蔗糖、0. 1~5%海藻糖、0. 1~0. 5%人血清白蛋白。
全文摘要
一種雙層膜狀組織修補材料及其制備方法，本發(fā)明是由脫細胞膜狀生物衍生材料作為表層，由成纖維細胞復(fù)合于生物支架材料內(nèi)部形成基層，兩者嵌合構(gòu)成；其致密的表層結(jié)構(gòu)可有效地減少水分、電解質(zhì)和蛋白質(zhì)由創(chuàng)面的丟失，阻止細菌對受損創(chuàng)面的入侵、繁殖，防止創(chuàng)面感染，有利于上皮增殖和生長；基層可直接修復(fù)創(chuàng)面，促進創(chuàng)周細胞的長入和血管的生成、誘導(dǎo)干細胞向皮膚細胞的分化，對創(chuàng)面愈合具有促進作用；與已有產(chǎn)品相比本發(fā)明有以下優(yōu)點可促進創(chuàng)面皮膚的再生，增強創(chuàng)面愈合后皮膚的彈性、柔韌性和機械耐磨性，減少瘢痕增生，控制攣縮，有良好的生物相容性，提高移植的成功率，改善愈合質(zhì)量；材料來源廣泛、生產(chǎn)方法簡單；所制備的雙層膜狀組織修補材料適用于炎癥、潰瘍、燒燙傷、醫(yī)源性等原因造成的皮膚缺損的臨床治療。
文檔編號A61L27/26GK101361989SQ20081015078
公開日2009年2月11日 申請日期2008年9月3日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月3日
發(fā)明者王愛軍 申請人:陜西瑞盛生物科技有限公司