專利名稱：以?shī)W曲肽為靶向配基的殼聚糖衍生物及其在藥劑中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及高分子化學(xué)領(lǐng)域及藥用輔料領(lǐng)域。具體涉及含有奧曲肽的靶向型殼聚糖衍生 物，特別是能形成兩親性聚合物分子的N-琥珀?；?N-垸基化殼聚糖衍生物和N-垸基化羧甲 基殼聚糖及其制備方法，本發(fā)明還涉及其作為難溶性藥物增溶劑的作用、對(duì)膠束和脂質(zhì)體等 載體的修飾作用，使其具有靶向功能以及含其的藥物組合物。
背景技術(shù)：
納米技術(shù)和可生物降解高分子材料是當(dāng)前藥物傳遞系統(tǒng)研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域。聚合物膠束融 合兩者的優(yōu)勢(shì)，既可生物降解，又可形成藥物納米載體，其作為藥物載體能提供一系列無(wú)可比擬的優(yōu)點(diǎn)增溶難溶性藥物，提高藥物的生物利用度，避免藥物的失活和變性，減少藥物毒副作用，能夠大量制備和工業(yè)化生產(chǎn)。聚合物膠束由親水的殼和疏水的核組成，既具備形成親水膠體的藥用性能，又適合疏水藥物的包裹和增容；而且，膠束粒徑小至納米級(jí)，其具 有的由親水殼和疏水核組成特征使其可以達(dá)到體內(nèi)長(zhǎng)循環(huán)、減少網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞吞噬的目的， 其可控制藥物釋放又可在體內(nèi)降解(M. Jones, J. Leroux, Eur. J. Pharm. Biopharm., 1999， 48 (2):101-111.)殼聚糖是可生物降解的天然來(lái)源的聚合物，具有良好的生物相容性，且來(lái)源廣泛，價(jià)格 便宜。殼聚糖結(jié)構(gòu)中含有2-NH2， 3-OH和6-OH，可進(jìn)行兩親性結(jié)構(gòu)改造，從而在水中自發(fā) 形成聚合物膠束。發(fā)明人在先期的授權(quán)專利CN03112981.1和CN200510095442.X中公開(kāi)了 一類N-長(zhǎng)鏈垸基-O-磺酸基殼聚糖和一類N-長(zhǎng)鏈烷基-N-季胺化殼聚糖，均可形成膠束且對(duì)難 溶性藥物具有增溶作用。生長(zhǎng)抑素受體(somatostatin receptor, SSTR)在多種腫瘤組織內(nèi)高密度、高親和力表達(dá)，與 正常組織相比，腫瘤組織及其轉(zhuǎn)移灶中SSTR表達(dá)水平高，與生長(zhǎng)抑素(somatostatin,SST)及其 類似物的親和力大，可以作為腫瘤診斷和治療分子水平的新的耙物質(zhì)。奧曲肽(octreotide) 是人工合成的生長(zhǎng)抑素(somatostatin， SST)類似物，其性質(zhì)與SST相似，且對(duì)酶的分解有很 強(qiáng)的抵抗力，生物半衰期長(zhǎng)，作用較天然的SST單一、持久，可與不同的SSTR亞型特異性 結(jié)合，可作為藥物遞送系統(tǒng)的主動(dòng)靶向基團(tuán)，將抗腫瘤藥物有效遞送到腫瘤部位。(Lamberts S., van der Lely A.， Herder W" Hofland L. New Engl. J. Med. 1996,334 (4): 246-254.)。奧曲肽放射性 核素標(biāo)記物被FDA批準(zhǔn)作為腫瘤的診斷試劑，其試劑合在腫瘤的定性及定量診斷上有重要應(yīng) 用 (Huang CM， AVu YT， Chen ST. Targeting delivery of paclitaxel into tumor cells via somatastatin receptorendocytosis. Chemistry and Biology 2000， 7: 453-457.武鳳玉，左書(shū)耀.放射性核素標(biāo)記奧曲肽腫瘤受體顯 像研究進(jìn)展.國(guó)外醫(yī)學(xué)腫瘤學(xué)分冊(cè)，2005， 32: 760-762.)。奧曲肽同時(shí)也是一種抗腫瘤藥物，對(duì)各種實(shí) 體瘤均有一定療效。有研究將奧曲肽與紫杉醇共價(jià)偶聯(lián)，用于非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞模型，表明 具有靶向性及細(xì)胞毒性(孫美麗，王秀問(wèn)，王樸，魏軍民，李蕾.紫杉醇-奧曲肽偶聯(lián)靶向治療 非小細(xì)胞肺癌.中國(guó)腫瘤生物治療雜志，2007, 14:368-372)。目前還沒(méi)有用奧曲肽修飾聚合物 材料和膠束、脂質(zhì)體等納米載體的研究報(bào)道。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明公開(kāi)了一類新的靶向型兩親性殼聚糖衍生物，以殼聚糖為骨架，在其2-NH2接枝 親水基琥珀?；褪杷L(zhǎng)鏈烷基，在其琥珀酰基末端接枝靶向基奧曲肽，或者在其2-NH2、 6-OH接枝親水基羧甲基，在其2-NH2接枝疏水基長(zhǎng)鏈烷基，在其羧甲基末端接枝靶向基奧曲 肽，形成新型的靶向型兩親性聚合物，可在水中自發(fā)形成聚合物膠束，達(dá)到對(duì)難溶性藥物增 溶的效果，同時(shí)由于靶向腫瘤部位的功能，獲得提高藥物遞送效率，降低藥物毒副作用的效 果。本發(fā)明的殼聚糖衍生物還可以用作為其它聚合物膠束和脂質(zhì)體等納米粒表面的修飾劑， 使其具有靶向功能。本發(fā)明的殼聚糖衍生物結(jié)構(gòu)為如下I或II:OH O-J octreotideoctreotide = D隱Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol1<formula>formula see original document page 6</formula>其中R卜R2、 R3、或R4各自獨(dú)立地代表H、 CH2COOH或CH2COO-octreotide，且R: R2、 R3和R4中至少有一個(gè)代表CH2COO-octreotide;octreotide = D-Phe隱Cys隱Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol上述式I或式II的殼聚糖衍生物粘均分子量為2k-70k，其中表示取代度的x， y， z， m， p分別是15。/。-650/。， 5%-40%， 15%-65%， 5%-40%， 10%-40%; n=6-ll。上述式I或式II的殼聚糖衍生物優(yōu)選的取代度是:x， y， z， m， p分別是55%-65%， 10%-15%， 35%誦45%， 10%-20%， 15%-35%。優(yōu)選11=7。本發(fā)明的殼聚糖衍生物I的制備方法包括先制得N-長(zhǎng)鏈烷基殼聚糖，再與丁二酸酐反 應(yīng)制得N-垸基-N-琥珀?；鶜ぞ厶牵ㄟ^(guò)琥珀?；┒唆然c奧曲肽進(jìn)行偶聯(lián)，即得。本發(fā)明的殼聚糖衍生物II的制備方法還可以是將O-羧甲基殼聚糖先制得N-長(zhǎng)鏈烷基 -O-羧甲基殼聚糖，再通過(guò)羧甲基末端羧基與奧曲肽進(jìn)行偶聯(lián)，即得。式I的殼聚糖衍生物簡(jiǎn)單的合成路線為II ￡ ￡ = HIcIcIcIc—o R= H or CH2COOHRj、 R2、 R3或R4的定義同前。本發(fā)明式I的殼聚糖衍生物優(yōu)選的制備方法如下a. 取殼聚糖溶于2%醋酸溶液中，攪拌2h，升溫至30度，保溫2h。加入無(wú)水甲醇、乙 酸酐，保溫6h。用1 mol/LNaOH調(diào)pH至7，加入辛醛，反應(yīng)36h。加入KBH4，室溫還原 24h，調(diào)pH至7，過(guò)濾，用水、甲醇、乙醚洗滌，烘干，得N-烷基殼聚糖。b. 取N-烷基殼聚糖，懸浮于DMSO中攪拌1 h，加入丁二酸酐，升溫至80度反應(yīng)24h， lmol/LNaOH調(diào)pH至10，加1倍水稀釋，透析48h，凍干，得N-垸基-N-琥珀?；鶜ぞ厶?。c. 取N-烷基-N-琥珀酰基殼聚糖溶于水，攪拌0.5h，加入奧曲肽，對(duì)二甲胺基吡啶，15 min后加入l-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽，保溫30。C反應(yīng)48h，透析48 h，凍 干，得奧曲肽接枝N-烷基-N-琥珀酰基殼聚糖(I )。本發(fā)明式II的殼聚糖衍生物優(yōu)選的制備方法包括a.取羧甲基殼聚糖溶于水中，升溫至30。C，保溫2h。加入無(wú)水甲醇、乙酸酐，保溫6h。
用lmol/LNaOH調(diào)pH至7，加入辛醛，反應(yīng)36 h。加入KBH4，室溫還原24h，調(diào)pH至7， 過(guò)濾，用水、甲醇、乙醚洗滌，烘干，得N-長(zhǎng)鏈垸基羧甲基殼聚糖。b.取N-烷基羧甲基殼聚糖溶于水，攪拌0.5h，加入奧曲肽，對(duì)二甲胺基吡啶，15min 后加入l-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽，保溫30。C反應(yīng)48h，透析48h，凍干， 得奧曲肽接枝N-烷基羧甲基殼聚糖(11)。本發(fā)明的殼聚糖衍生物為白色至黃色粉末，易溶于水，溶液中均可以形成聚合物膠束， 其粒徑在100-150 nm之間。本發(fā)明的殼聚糖衍生物對(duì)難溶性藥物具有增溶作用，例如對(duì)于紫杉醇和阿霉素，其在聚 合物膠束中最大濃度為2.5 mg/mL左右。本發(fā)明還公開(kāi)了一種藥物組合物，其含有治療有效量的藥物和本發(fā)明的殼聚糖衍生物。 所述藥物優(yōu)選難溶性藥物，難溶性藥物優(yōu)選喜樹(shù)堿類(如喜樹(shù)堿、10-羥基喜樹(shù)堿、9-硝基 喜樹(shù)堿、SN-38等)、紫杉醇、多西紫杉醇、藤黃酸、環(huán)孢素A、足葉乙苷、替尼泊甙、依托泊 甙、長(zhǎng)春酰胺、尼莫地平、硝苯地平、尼群地平、阿霉素、柔紅霉素、絲裂霉素、甲氨喋呤、 冬凌草素、藤黃酸、三尖杉酯堿、高三尖杉酯堿、燈盞花素、銀杏內(nèi)酯、水飛薊素或靛玉紅， 本發(fā)明的殼聚糖衍生物對(duì)上述藥物均有很好的增溶作用。最優(yōu)選的藥物是紫杉醇、多烯紫 杉醇、阿霉素或喜樹(shù)堿。藥物與殼聚糖衍生物的重量比優(yōu)選l: 2~10，此時(shí)增溶效果較好，通過(guò)添加其它藥用輔料 制備成各種藥物制劑。本發(fā)明的殼聚糖衍生物還可用作其它聚合物膠束、脂質(zhì)體、脂質(zhì)納米粒的表面修飾劑等， 使其具有靶向功能。作為修飾劑時(shí)，本發(fā)明的殼聚糖衍生物與聚合物膠束、脂質(zhì)體或脂質(zhì)納 米粒的重量比優(yōu)選h 5~50。本發(fā)明用可生物降解的天然來(lái)源的殼聚糖作為原料，進(jìn)行化學(xué)結(jié)構(gòu)修飾，使其形成同時(shí) 具有親水殼和疏水核的兩親性聚合物，同時(shí)聚合物上載有腫瘤組織靶向基，在水中自發(fā)形成 靶向型膠束，適合用于藥物、與藥物組配或作為藥物載體，尤其是適宜用作靜脈注射抗腫瘤 藥物的優(yōu)良載體。這類殼聚糖衍生物還適合用作為其它聚合物膠束和脂質(zhì)體等納米粒表面的 修飾劑，使其具有靶向功能。


圖1 S麗C-7721細(xì)胞對(duì)各種納米粒載體攝取的影響(A是阿霉素脂質(zhì)體；B是本發(fā)明奧曲肽 殼聚糖衍生物(NONSOC)修飾的阿霉素脂質(zhì)體；C是NONSC阿霉素膠束；D是本發(fā)明奧曲肽殼聚 糖衍生物修飾(NONSOC)的阿霉素膠束，E是本發(fā)明奧曲肽殼聚糖衍生物(N0NS0C)與未用奧 曲肽修飾的殼聚糖衍生物(NONSC)的阿霉素組合膠束)
具體實(shí)施例方式殼聚糖脫乙酰度90%以上，粘均分子量70kD;透析袋的截留分子量為IOOOO (MWCO 10000)。實(shí)施例11. N-辛基殼聚糖的制備(NOC)500mL三頸瓶中加入3. 5g殼聚糖，105mL水，2. 2mL乙酸攪拌2小時(shí)，升溫至3(TC，保 溫?cái)嚢? h。向三頸瓶中加入105 mL無(wú)水甲醇，lmL乙酸酐，保溫反應(yīng)6 h，用1 molL NaOH 調(diào)反應(yīng)液pH至7。加入10.6 mL辛醛，室溫反應(yīng)36 h，緩慢加入5 g KBH4，室溫還原反應(yīng) 24 h，調(diào)反應(yīng)液pH至7，過(guò)濾，用水洗2次，甲醇洗4次，乙醚洗2次，烘干，得黃色粉末 4.0g (辛基取代度65%)。2. N-辛基-N-琥珀?；鶜ぞ厶堑闹苽?NONSC)取1 g N—辛基殼聚糖，懸浮于50 niL 二甲亞砜中，攪拌1 h，加入丁二酸酐0.56 g， 80。C劇烈攪拌反應(yīng)24 h，反應(yīng)液用1 mol/L NaOH調(diào)pH至10，加入1倍量體積水稀釋，透析 48 h，凍干，得淡黃色粉末0. 7 g。3. 奧曲肽接枝N-辛基-N-琥珀酰基殼聚糖的制備(NONSOC)取0. 3 g N-辛基-N-琥珀?；鶜ぞ厶侨苡?0 mL水，攪拌0. 5 h，向反應(yīng)液中加入0. 29 g 奧曲肽，0.18 g對(duì)二甲胺基吡啶，攪拌15 min后加入0.08 g l-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳 二亞胺鹽酸鹽，保持反應(yīng)體系pH小于7. 5，保溫30。C反應(yīng)48 h，透析48 h，凍干，得淡黃 色粉末0.39 g。 NONSOC:FT-IR: 3426， 2952， 2869, 1726， 1668, 1658, 1557,1422,1383,1315， 1258， 1232， 1152,1114,1069, 1032, 868 cm".NMR (500 MHz， D20): 7.4-6.9 (arom Phe), 4.6-4.5 (Ha Thr,Ha Lys, H!), 4.2 (Hp Thr), 4.1-4.0 (Hp Thr-ol)， 4.0-3.3 (H3， H4， H5， H6), 3.2 (-NH-CH2-(CH2)6-CH3), 3.1-2.6 (Hp Phe， Hp Tip, H(3 Cys: He Lys), 2.6-2.2 (陽(yáng)NH-CO-CH2-CH2-COOH), 2.0 (NH-CO-CHs), 1.7 (H(3 Lys), 1.5 (HS Lys), 1.4-0.9 (-NH-CH2-(CH2)6-CH3,Thr,Thr隱ol,Lys), 0.8 (-NH-CH2-(CH2)6-CH3).根據(jù)元素分析數(shù)據(jù)，可以計(jì)算出N-辛基殼聚糖中辛基取代度為63。/。；根據(jù)&NMR中H 的積分面積可以計(jì)算出琥珀酰基和奧曲肽的取代度分別為31°/。和10%。 實(shí)施例21. N-壬基殼聚糖的制備(NNC)用殼聚糖同乙酸酐、壬酸進(jìn)行反應(yīng)，用KBH4還原，即得，制備方法同實(shí)施例1中NOC 的制備。2. N-壬基-N-琥珀?；鶜ぞ厶堑闹苽?NNNSC)用N—壬基殼聚糖與丁二酸酐反應(yīng)制備，制備方法同實(shí)施例1中NONSC的制備。3. 奧曲肽接枝N-壬基-N-琥珀酰基殼聚糖的制備(NNNSOC)用N-壬基-N-琥珀?；鶜ぞ厶桥c奧曲肽反應(yīng)制備，制備方法同實(shí)施例1中NONSOC的制備。NNNSOC:FT-IR: 3428, 2951， 2871， 1728, 1669, 1656， 1551, 1426， 1381， 1315， 1258, 1231， 1151, 1116, 1071， 1036, 868 cm-1.!H NMR (500 MHz, D20): 7.5-6.9 (arom Phe), 4.6-4.5 (Ha Thr,Ha Lys， H)，4.2 (Hp Thr), 4.1-4.0 (Hp Thr-ol), 4.0-3.4 (H3， H4， H5, H6)， 3.2 (-NH-CH2-(CH2)7-CH3)， 3.1-2.6 (Hp Phe， H(3 Tip, H(3 Cys: He Lys)， 2.6-2.1 (-NH-CO-CH2-CH2-COOH)， 2.0-1.9 (NH-CO-CH3), 1.7 (H|3 Lys)， 1.5 (HS Lys)， 1,4-1.0 (-NH-CH2-(CJi2)7-CH3，Thr，Thr-ol, Hy Lys)， 0.8 (-NH-CH2-(CH2)7-Cg3).根據(jù)元素分析數(shù)據(jù)，可以計(jì)算出N-壬基殼聚糖中壬基取代度為61。/。；根據(jù)iHNMR中H 的積分面積可以計(jì)算出琥珀酰基和奧曲肽的取代度分別為33%和12%。實(shí)施例31. N沖二烷基殼聚糖的制備(NLC)用殼聚糖同乙酸酐、月桂醛進(jìn)行反應(yīng)，用KBH4還原，即得，制備方法同實(shí)施例1中NOC 的制備。2. N-十二烷基-N-琥珀?；鶜ぞ厶堑闹苽?NLNSC)用N-十二烷基殼聚糖與丁二酸酐反應(yīng)制備，制備方法同實(shí)施例1中NONSC的制備。3. 奧曲肽接枝N-十二垸基-N-琥珀酰基殼聚糖的制備(NLNSOC)用N-十二垸基-N-琥珀?；鶜ぞ厶桥c奧曲肽反應(yīng)制備，制備方法同實(shí)施例1中NONSOC 的制備。 NLNSOC:FT-IR: 3423, 2956, 2863， 1729， 1668, 1656， 1549， 1420， 1381， 1316， 1259, 1236， 1158, 1112, 1066, 1033,869 cm懇1.& NMR (500 MHz， D20): 7.5-6.9 (arom Phe)， 4.6-4.5 (Ha Thr,Ha Lys, HQ, 4.2 (H卩Thr), 4.1-4.0 卿Thr-ol), 4.0-3.3 (H3, H4, H5, H6), 3.2 (-NH-CH2-(CH2)i0-CH3)， 3.1-2.6卿Phe， H卩Trp, Hp Cys, Hs Lys), 2.6-2.3 (-NH-CO-CH2-Qi2-COOH)， 2.0 (NH-CO-CH3), 1.7 (H卩Lys), 1.6-1.0 (-NH-CHr(CH2)io-CH3， Thr, HY Thr-ol, Lys, HS Lys), 0.8 (-NH-CH2-(CH2)10-Qi3).根據(jù)元素分析數(shù)據(jù)，根據(jù)元素分析數(shù)據(jù)，可以計(jì)算出N-十二基殼聚糖中十二垸基取代度 為56%;根據(jù)>H NMR中H的積分面積可以計(jì)算出琥珀?；蛫W曲肽的取代度分別28%為和 9%。實(shí)施例41. N-辛基羧甲基殼聚糖的制備(NOS)用羧甲基殼聚糖(羧甲基取代度80%)溶于水，同乙酸酐、辛醛進(jìn)行反應(yīng)，用KBH4還原， 即得，制備方法同實(shí)施例1中NOC的制備。2. 奧曲肽接枝N-辛基羧甲基殼聚糖的制備(NOSOC)用N-辛基羧甲基殼聚糖與奧曲肽反應(yīng)制備，制備方法同實(shí)施例1中NONSOC的制備。 NOSOC:FT-IR: 3426, 2952， 2869, 1718, 1668, 1658, 1557， 1406， 1383， 1301, 1258, 1232， 1152， 1114, 1069, 1032, 868 cm".!H NMR (500 MHz， D20): 7.4-6.9 (arom Phe), 4.6-4.5 (Ha Thr,Ha Lys, H!), 4.3 (O-CHa-COOH), 4.2 (H卩Thr), 4.1-4.0 (Hp Thr-ol), 4.0-3.3 (H3, H4， H5, H6), 3.2 (-NH-CH2-(CH2)6-CH3), 3.1-2.6 (H卩 Phe,邵Trp,邵Cys， Hs Lys), 2.1 (NH-CO-Qi3)， 1.7卿Lys), 1.5 (H5 Lys), 1.4-0.9 (-NH-CH2-(CH2)6-CH3，Thr,Thr-ol,Lys), 0.8 (-NH-CH2-(CH2)6-CH3).根據(jù)元素分析數(shù)據(jù)，可以計(jì)算出N-辛基羧甲基殼聚糖中辛基取代度為63%;根據(jù)^NMR 中H的積分面積可以計(jì)算出奧曲肽的取代度為12%。實(shí)施例51. N-十二烷基羧甲基殼聚糖的制備(NLS)用羧甲基殼聚糖(羧甲基取代度80%)溶于水，同乙酸酐、月桂醛進(jìn)行反應(yīng)，用KBH4 還原，即得，制備方法同實(shí)施例l中NOC的制備。2. 奧曲肽接枝N-十二烷基羧甲基殼聚糖的制備(NLSOC)用N-十二垸基羧甲基殼聚糖與奧曲肽反應(yīng)制備，制備方法同實(shí)施例1中NONSOC的制備。NLSOC:FT-IR: 3426， 2956， 2868, 1716, 1668, 1656, 1559, 1406, 1382， 1306, 1258, 1233, 1151， 1115, 1069, 1032, 863 cm曙1.& NMR (500 MHz, D20): 7.4-6.9 (arom Phe)， 4.6-4.5 (Ha Thr,Ha Lys, HQ, 4.3 (O-CH2-COOH)， 4.2 (Hp Thr), 4.1-4.0 (H|3 Thr-ol)， 4.0-3.3 (H3， H4， H5， H6)， 3.2 (-NH-CH2-(CH2)6-CH3), 3.1-2.6 (Hp Phe， Hp Trp, H卩Cys, Hs Lys), 2.1 (NH-CO-CH3), 1.7 (Hp Lys), 1.5 (HS Lys)， 1.6-0.9 (-NH-CH2-(CH2)i0-CH3， Thr, Thr-ol， Hy Lys), 0.8 (-NH-CH2-(CH2)10-CH3).根據(jù)元素分析數(shù)據(jù)，可以計(jì)算出N-辛基羧甲基殼聚糖中辛基取代度為61%;根據(jù)iHNMR 中H的積分面積可以計(jì)算出奧曲肽的取代度為10%。實(shí)施例6奧曲肽接枝N-烷基-N-琥珀?；鶜ぞ厶?NONSOC)增溶紫杉醇將20 mg NONSOC (實(shí)施例1中所制備)溶解在3 mL蒸餾水中，同時(shí)將10 mg紫杉醇 溶解在0.4mL無(wú)水乙醇中，攪拌條件下將紫杉醇溶液加入載體溶液中，蒸餾水透析12h， 0.8 Hm微孔濾膜過(guò)濾，得到紫杉醇聚合物膠束溶液。用HPLC法測(cè)定溶液中藥物平均含量為2.5 mg/mL.實(shí)施例7粒徑的測(cè)定將不同垸基取代的殼聚糖衍生物及其紫杉醇凍干品16 mg，溶于5 mL純水，室溫超聲30 min后用Zetasizer 3000 HS instrument(Malvern Instruments, Malvern, UK )在633 nm, 25。C, He-Ne激光測(cè)定粒徑。結(jié)果見(jiàn)表l表l:不同垸基取代殼聚糖衍生物載藥膠束粒徑(nm)衍生物NONSOCNNNSOCNLNSOCNOSOC載藥膠束粒徑115.3116.2118.6112.6實(shí)施例8N0NS0C膠束增溶阿霉素將實(shí)施例1中制備的N0NS0C 20mg溶解在3 mL蒸餾水中，同時(shí)將10 mg阿霉素溶解在O. 5 mL 無(wú)水甲醇中，加入適量三乙胺進(jìn)行攪拌，將阿霉素溶液加入載體溶液中，蒸餾水透析12 h，
0.45 i:m微孔濾膜過(guò)濾，得到阿霉素聚合物膠束溶液。用HPLC法測(cè)定溶液中藥物含量為2.3 mg/mL.平均粒徑為120nm左右。實(shí)施例9NONSOC與N-辛基-N-琥珀?；鶜ぞ厶?NONSC)組合膠束增溶阿霉素將NONSOC和NONSC (實(shí)施例1中所制備)以分別10: 1、 8: 1、 5: 1 (w/w)溶解在3 mL蒸餾水中，同時(shí)將10 mg阿霉素溶解在0.5mL無(wú)水甲醇中，加入適量三乙胺進(jìn)行攪拌， 將阿霉素溶液加入載體溶液中，蒸餾水透析12h， 0.45pm微孔濾膜過(guò)濾，得到紫杉醇聚合物 膠束溶液。用HPLC法測(cè)定溶液中藥物含量為3.8 mg/mL.平均粒徑為120nm。實(shí)施例10阿霉素脂質(zhì)體的制備卵磷脂和膽固醇按照2:1 (摩爾比)溶于溶于有機(jī)溶劑(氯仿甲醇為2:1)， 50 'C減壓 下旋轉(zhuǎn)蒸除去溶劑，形成磷脂薄膜250 mrac)l/L硫酸銨溶液適量，渦旋振蕩，水浴超聲。所得脂 質(zhì)體裝于透析袋中，置盛有PBS ( pH7.4) 100 mL的燒杯中，室溫下透析5次，每次l h。得空白脂質(zhì)體。按照2.5%的藥脂比(重量比)加入阿霉素，60 t:水浴孵育i h,振蕩l h，即得阿霉素脂質(zhì)體。奧曲肽的修飾阿霉素脂質(zhì)體將奧曲肽接枝N-烷基-N-琥珀?；鶜ぞ厶?NONSOC)和卵磷脂按照l(shuí):20(重量比)的比 例共孵2 h后。倒入阿霉素脂質(zhì)體溶液中，室溫下振蕩2 h，室溫孵育24 h，即得奧曲肽的 修飾阿霉素脂質(zhì)體。實(shí)施例10腫瘤細(xì)胞攝取作用N-辛基-N-琥珀?；鶜ぞ厶?NONSC)阿霉素膠束的制備將N0NS0C 20mg溶解在3 mL蒸餾水中，同時(shí)將IO mg阿霉素溶解在O. 5 mL無(wú)水甲醇中，加 入O. 5 mL三乙胺進(jìn)行攪拌，將阿霉素溶液加入載體溶液中，蒸熘水透析12 h， 0.45 u m微孔 濾膜過(guò)濾，得到阿霉素聚合物膠束溶液。用HPLC法測(cè)定溶液中藥物含量為2.3 mg/mL.平均粒 徑為120nm左右。細(xì)胞攝取試驗(yàn)人肝癌細(xì)胞系S羅C - 7721細(xì)胞按1X1Q5接種于蓋玻片，爬片48 h后用實(shí)施例8、 9與 IO制備的奧曲肽修飾后的NONSOC阿霉素膠束、NONSOC與NONSC組合阿霉素膠束、阿霉 素脂質(zhì)體，以及奧曲肽未修飾的NONSC阿霉素膠束與阿霉素脂質(zhì)體溶液(濃度均為6ug/ml) 進(jìn)行2小時(shí)的孵育，熒光顯微鏡(Olympus CX-31)下觀測(cè)，奧曲肽修飾前后殼聚糖衍生物對(duì) 阿霉素脂質(zhì)體與膠束的S薩C-7721細(xì)胞攝取攝取的影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖l(圖1經(jīng)反色處理)。 圖1顯示奧曲肽修飾的阿霉素膠束(D)、組合膠束(E)與脂質(zhì)體(B)比未修飾的膠束(C) 與脂質(zhì)體(A)具有顯著增強(qiáng)的攝取效果。
權(quán)利要求
1、下列結(jié)構(gòu)式I或II的殼聚糖衍生物其中x、y、z、m、p分別是15％-65％、5％-40％、15％-65％、5％-40％、10％-40％；n＝6-11；其中R1、R2、R3或R4各自獨(dú)立地代表H、CH2COOH或CH2COO-octreotide，且至少有一個(gè)代表CH2COO-octreotide；I或II殼聚糖衍生物的粘均分子量為2k～70k。
2、權(quán)利要求1的殼聚糖衍生物，其中x、 y、 z、 m、 p分別是55%-65%、 10%-15%、 35%-45%、 10%-20%、 15%-35%。
3、 權(quán)利要求1的殼聚糖衍生物，其中n=7。
4、 權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)殼聚糖衍生物的制備方法，包括先制得N-長(zhǎng)鏈烷基殼聚糖， 再與丁二酸酐反應(yīng)制得N-垸基-N-琥珀酰基殼聚糖，通過(guò)琥珀酰基末端羧基與奧曲肽進(jìn)行 偶聯(lián)，即得。
5、 權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)殼聚糖衍生物的制備方法，包括將O-羧甲基殼聚糖先制得N-長(zhǎng)鏈烷基-O-羧甲基殼聚糖，再通過(guò)羧甲基末端羧基與奧曲肽進(jìn)行偶聯(lián)，即得。
6、 一種藥物組合物，含有治療有效量的藥物及權(quán)利要求1的殼聚糖衍生物。
7、 權(quán)利要求6的藥物組合物，其中藥物是紫杉醇、多烯紫杉醇、阿霉素或喜樹(shù)堿。
8、 權(quán)利要求6的藥物組合物，其中藥物與殼聚糖衍生物的重量比為1: 2~10。
9、 權(quán)利要求l的殼聚糖衍生物作為聚合物膠束、脂質(zhì)體或脂質(zhì)納米粒的表面修飾劑的用途。
10、 權(quán)利要求9的用途，其中殼聚糖衍生物與聚合物膠束材料、脂質(zhì)體或脂質(zhì)納米粒的重量比 為l: 5~50。
全文摘要
本發(fā)明涉及高分子化學(xué)領(lǐng)域及藥用輔料領(lǐng)域。具體涉及含有奧曲肽的靶向型殼聚糖衍生物(I)或(II)，特別是能形成兩親性聚合物分子的N-琥珀酰化-N-烷基化殼聚糖衍生物和N-烷基化羧甲基殼聚糖及其制備方法，本發(fā)明還涉及其作為難溶性藥物增溶劑的作用、對(duì)膠束和脂質(zhì)體等載體的修飾作用，使其具有靶向功能以及含其的藥物組合物。
文檔編號(hào)A61K31/7028GK101396563SQ20081019513
公開(kāi)日2009年4月1日 申請(qǐng)日期2008年11月6日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月6日
發(fā)明者平其能, 燦 張, 鵬 張, 宇 王, 慰 申 申請(qǐng)人:中國(guó)藥科大學(xué)