專利名稱：鯊魚軟骨骨髓萃取組成物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種鯊魚軟骨萃取物，特別涉及一種鯊魚軟骨骨髓萃取組成物。
背景技術(shù)：
1983年，Lee和Langer 二位博士于科學(xué)期刊上發(fā)表鯊魚軟骨含有抑制癌細(xì)胞增生的新血管增生抑制劑(angiogenesis inhibitor)后，全世界隨即涌起一陣堇魚軟骨熱潮。Lee和Langer是以2M的胍(guanidine)萃取鯊魚鰭(fm)的可溶成分，使之與動(dòng)物肺瘤直接接觸，可以有效抑制腫瘤的新血管增生，通過切斷腫瘤細(xì)胞的營養(yǎng)成分供應(yīng)，從而間接消滅癌細(xì)胞。類似描述鯊魚軟骨抗癌功效的報(bào)告接踵而出有以鯊魚軟骨萃取的蛋白質(zhì)，于血管注射以抑制肺瘤細(xì)胞的增生；掃除活性氧分子(Reactive oxygen species)成為抗氧化劑；植入老鼠而抑制肺瘤細(xì)胞；抑制發(fā)炎反應(yīng)；口服也可抑制新血管增生。 一時(shí)間，鯊魚軟骨搖身一變，仿佛成了治療癌癥的新星，世界各地?zé)o數(shù)廠商、學(xué)校、醫(yī)院全力研究。雖然有對(duì)口服后的功效存疑的意見，美國NIH仍于1987年開始進(jìn)行人體試驗(yàn)，目前已進(jìn)行到phase III的測(cè)試。
而現(xiàn)有的對(duì)于鯊魚軟骨的處理， 一般僅將鯊魚軟骨打碎或研磨至粉狀，因此所獲取的產(chǎn)品不僅于氣味上殘留有濃烈的魚腥味，于顏色則呈現(xiàn)對(duì)消費(fèi)者不具吸引力的灰色或黑色，且無法萃取出其中的有效成分。
為解決上述問題，本發(fā)明的發(fā)明人已提出一解決方案。首先，利用壓碎裂、清洗、漂除雜質(zhì)、去除腥味以及加熱殺菌五步驟，來達(dá)到將豈魚軟骨處理從而獲得無腥味且色澤純白透明的萃取物的目的。此技術(shù)內(nèi)容已公開于發(fā)明人的臺(tái)灣發(fā)明專利公告號(hào)第467731號(hào)的"一種鯊魚軟骨的制造方法"專利案中。
隨后，發(fā)明人以上述方法為基礎(chǔ)，再提出一發(fā)明專利申請(qǐng)案(臺(tái)灣發(fā)明專利申請(qǐng)?zhí)柕?7117281號(hào))，其中公開了利用酵素溶解、水解、均質(zhì)化、沉淀以及分離等步驟來處理鯊魚軟骨骨髓的方法，從而獲得高純度的鯊魚軟骨骨髓萃取物，而本發(fā)明即是利用上述方法所獲得的最終的新穎萃取物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的在于提供一種以硫酸軟骨素(Chondroitin Sulfate)為主要活性成分的莖魚軟骨骨髓萃取組成物，具有抗黑色素瘤、中和胃酸以及促進(jìn)血液循環(huán)等功效。
為達(dá)上述目的，本發(fā)明提供一種鯊魚軟骨骨髓萃取組成物，其分子量介于21至100千道耳頓(KiloDaltons)，且含有重量百分比為50-60wt。/。的硫酸軟骨素(Chondroitin Sulfate)。
上述組成物優(yōu)選包括以下成分
辟b酸軟骨素，其重量百分比為56.3wt%;
總碳水化合物，其重量百分比為23.7wt%;
粗脂肪，其重量百分比為0.3wt%;
灰份，其重量百分比為11.8wt%;
水分，其重量百分比為7.7wt%;以及
鈉，其重量百分比為0.2wt%。
本發(fā)明的有益效果是口服鯊魚軟骨骨髓萃取組成物可明顯抑制癌細(xì)胞增生和轉(zhuǎn)移，延長注射癌細(xì)胞老鼠的壽命；對(duì)于抑制胃酸過度分泌以及保護(hù)消化系統(tǒng)功能方面的測(cè)試也有顯著的功效；還具有促進(jìn)血液循壞的功效。


圖1為本發(fā)明的豈魚軟骨骨髓萃取組成物的SDS/PAGE分析圖；圖2為實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組老鼠死亡累積數(shù)目與時(shí)間的線性關(guān)系圖；圖3為實(shí)驗(yàn)后實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的存活老鼠的紅血球與白血球含量比較圖；圖4A與4B為實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組老鼠的血液生化數(shù)值比較圖；圖5為實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組老鼠的解剖相片圖；圖6A為豬胃液體外實(shí)驗(yàn)中pH值與時(shí)間的關(guān)系圖；圖6B為豬胃液中和實(shí)驗(yàn)中pH值與時(shí)間的關(guān)系圖；圖7A為服用本發(fā)明的鯊魚軟骨骨髓萃取物前的微血管照相圖；圖7B為服用本發(fā)明的鯊魚軟骨骨髓萃取物后的微血管照相圖；圖8A為服用本發(fā)明的鯊魚軟骨骨髓萃取物前的頭皮微血管的超音波多普勒儀血流速測(cè)試結(jié)果；圖8B為服用本發(fā)明的鯊魚軟骨骨髓萃取物后的頭皮微血管的超音波多普勒儀血流速測(cè)試結(jié)果；
圖9A為服用本發(fā)明的鯊魚軟骨骨髓萃取物前的生殖器微血管的超音波多普勒儀血流速測(cè)試結(jié)果；
圖9B為服用本發(fā)明的豈魚軟骨骨髓萃取物后的生殖器微血管的超音波多普勒儀血流速測(cè)試結(jié)果；
圖10A為服用本發(fā)明的鯊魚軟骨骨髓萃取物前的乳房微血管的超音波多普勒儀血流速測(cè)試結(jié)果；
圖10B為服用本發(fā)明的鯊魚軟骨骨髓萃取物后的乳房微血管的超音波多普勒儀血流速測(cè)試結(jié)果。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合附圖，對(duì)本發(fā)明上述的和另外的技術(shù)特征和優(yōu)點(diǎn)作更詳細(xì)的說明。
本發(fā)明提供一種鯊魚軟骨骨髓萃取組成物，其分子量介于21至100千道耳頓(Kilo Daltons),含有重量百分比為50-60wt%的硫酸軟骨素(ChondroitinSulfate),且該組成物每一百克所含的熱量為300至350千卡路里。
上述組成物中，硫酸軟骨素的重量百分比優(yōu)選為56.3wt%,且該組成物包括如下所列的其它成分
總碳水化合物，其重量百分比為23.7wt%;
粗脂肪，其重量百分比為0.3wt%;
灰份，其重量百分比為11.8wt%;
水分，其重量百分比為7.7wt%;以及
鈉，其重量百分比為0.2wt%。
此外，上述組成物是白色細(xì)致粉末，且其每一百克所含的熱量為323千卡路里。
以下是以實(shí)施例驗(yàn)證本發(fā)明的鯊魚軟骨骨髓萃取組成物的功效。實(shí)施例1
本實(shí)驗(yàn)以鯊魚軟骨萃取物(SDS)喂食老鼠，并觀察黑色素皮膚癌(melanoma)在老鼠腹腔的生長情況，用來評(píng)估其抗癌作用。其步驟與方法如下所述一、黑色素癌細(xì)胞的增生與純化
黑色素癌細(xì)胞抹(B16)以含有2.5%胎牛血清(Fetus Bovine Serum)的
5Dulbelcco，s Modified Eagle Medium (DMEM),在37°C ， 5°/。 C02培養(yǎng)箱，培養(yǎng)至 90%的豐度(confluency),以1ml的1:10胰蛋白(trypsin; Gibco)將其消化5 min 后，再取出細(xì)胞并計(jì)算細(xì)胞數(shù)目。
二、 老鼠腹腔癌腫瘤的誘發(fā)
80只四周歲的BALB/C老鼠(臺(tái)灣大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心)分成兩組， 對(duì)照組喂食正常飼料，實(shí)驗(yàn)組則添加5%鯊魚軟骨骨髓萃取組成物。二周后，在 老鼠腹腔打入2.5xl(^黑色素癌細(xì)胞，14日后開始計(jì)算老鼠的死亡只數(shù)。死亡老 鼠加以解剖，將肺瘤組織分離后，取出臟器，加以比較、照相。死亡只數(shù)超過 半數(shù)以后，剩余的老鼠則以斷頸處理，并抽血作血球分析及血液生化分析。老 鼠血液加入肝素(Heparin)之后，進(jìn)行血球分析及血液生化分析。血球以Sysmex SE卯OO cell counter (Japan)分析，血液生化以Hitachi 7150分析。結(jié)果以 Kaleidagraph作分4斤、統(tǒng)計(jì)、畫圖。
三、 結(jié)果分析
1、 鯊魚軟骨可溶性成分SDS PAGE分析
如圖l所示，鯊魚軟骨經(jīng)過均質(zhì)后，離心取上層液進(jìn)行SDS PAGE分析， 其主要成分分布于21-100 kDalton。
2、 攝食鯊魚軟骨骨髓萃取組成物明顯延長腹水癌老鼠壽命。 四十只實(shí)驗(yàn)組老鼠喂食添加有5%豈魚軟骨骨髓萃取組成物的飼料，兩組對(duì)
照組老鼠(各四十只)喂食一般飼料，喂食2周后，在腹腔施打2.5x106melanoma cells。經(jīng)2-3周后，由于melanoma在腹腔內(nèi)部大量增生，形成腫瘤組織，轉(zhuǎn)移 并擠壓內(nèi)臟，造成老鼠臟器萎縮、變黑最后窒息死亡。記錄每日死亡只數(shù)，統(tǒng) 計(jì)之后畫圖比較。如圖2所示，以到達(dá)半數(shù)死亡所需日數(shù)為準(zhǔn)，攝食5%鯊魚軟 骨骨髓萃取組成物的實(shí)驗(yàn)組為19.5日，對(duì)照組平均為17.8日，顯示有明顯的差 異。注射melanoma 24日之后，各組死亡數(shù)目均超過半數(shù)，存活的老鼠則以斷 頸處理，并抽血作血球分析及血液生化分析。在血球分析方面，如圖3所示， 白血球和紅iu求含量并無顯著差異。血液生化方面，如圖4A所示，血紅素(HGB)、 血容比(HCT)、紅血球平均體積(MCV)、平均血球血紅素量(MCH)以及紅血球 血紅素平均濃度(MCHC)等值并無顯著差異；然而，如圖4B所示，谷氨酸草乙 酸轉(zhuǎn)氨酶/天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(glutamic oxaloacetic transaminase/aspartate aminotransferase、 GOT /AST)以及谷氨酸丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶/丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(glutamic pyruvic transaminase/alanine aminotransferase、 GPT/ALT)的j直貝'J均有顯著差異。
6在人體血液生化分析中，GOT/AST及GPT/ALT同時(shí)增加可判定肝臟功能受損。 由于本品是老鼠的正常范圍無法得知，因此難以GOT/AST及GPT/ALT的差異 來判定肝臟是否受損，以及其相對(duì)受損程度。
3、 死亡老鼠肺瘤組織及臟器的比較。
對(duì)于死亡的老鼠，經(jīng)解剖之后，比較其肺瘤組織及臟器(心臟、腎臟、脾 臟、肝臟)大小及色澤，我們無法以肉眼區(qū)別腫瘤組織及臟器大小及色澤。
4、 皮下注射melanoma的比較。
喂食鯊魚軟骨的實(shí)驗(yàn)組老鼠在注射腫瘤細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，有較長的存活，由于 無法以解剖之后比較其腫瘤組織大小，我們決定以腹部皮下注射肺瘤細(xì)胞比較 其腫瘤組織增生的差異。老鼠喂食含有5%鯊魚軟骨骨髓萃取組成物飼料及正常 飼料，經(jīng)12日后，在腹部皮下施打105 melanoma cells,經(jīng)過二周后以斷頸處理， 解剖、照相、并比較腫瘤的大小。如圖5所示，喂食正常銅料老鼠的解剖結(jié)果 可以發(fā)現(xiàn)，肺瘤組織除明顯較大以外，還有轉(zhuǎn)移進(jìn)入腹腔的情況發(fā)生。相比而 言，實(shí)驗(yàn)組中的癌腫瘤明顯較小，且無明顯轉(zhuǎn)移現(xiàn)象。因此可知，攝食本發(fā)明 的鯊魚軟骨骨髓萃取組成物可抑制皮下黑色素癌細(xì)胞增長效果并抑制腫瘤轉(zhuǎn) 移。
綜合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，口服鯊魚軟骨骨髓萃取組成物可明顯抑制癌細(xì)胞增生 和轉(zhuǎn)移，延長注射癌細(xì)胞老鼠的壽命。雖然大部份的文獻(xiàn)是以注射或是手術(shù)的 技術(shù)將鯊魚軟骨萃取物和腫瘤組織直接接觸以彰顯其作為新血管形成抑制劑 (angiogenesis inhibitor)的效果，以攝食的方式，經(jīng)過腸胃道消化吸收，仍然可以 測(cè)出其抗癌的效杲。
實(shí)施例2
以離乳三個(gè)月藍(lán)瑞斯和藍(lán)嶼迷你豬混種豬為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。如圖6A所示，于空 腹時(shí)抽取胃液所測(cè)得的pH值為2.2;而將所抽取的胃液在體外與篁魚軟骨骨髓 萃取物混合后，其pH值明顯上升至3.4。此外，如圖6B所示，于活體實(shí)驗(yàn)中以 綠茶灌入豬胃中，每隔20分鐘抽取胃液，胃液的pH值有下降趨勢(shì)。經(jīng)灌入液 狀均質(zhì)的鯊魚軟骨骨髓萃取組成物后，胃液pH值明顯上升，畫魚軟骨有明顯延 遲胃液pH值因喝綠茶而降低的作用。
因此可見，鯊魚軟骨骨髓萃取組成物對(duì)胃液有中和作用，對(duì)于抑制胃酸過 度分泌以及保護(hù)消化系統(tǒng)功能方面的測(cè)試也有顯著的功效。
實(shí)施例將上述組成物以乳劑涂抹于表皮層開始作用時(shí)，會(huì)促使人體微細(xì)血管擴(kuò)張 開啟生物電流水通道，因而增加血液流速并提升循環(huán)代謝，使得人體末梢表皮
層的溫度升高以形成熱效應(yīng)。由于人體中水分體液約占總體積70%,因此當(dāng)表 層熱效應(yīng)產(chǎn)生時(shí)，水分及體液會(huì)出擾動(dòng)現(xiàn)象，水分子因動(dòng)能增加互相撞擊、共 振而出現(xiàn)深層熱效應(yīng)。
理論上通常人體必須經(jīng)由不停的運(yùn)動(dòng)方能產(chǎn)生此種深層熱效應(yīng)，而使動(dòng)能 轉(zhuǎn)變成熱能，并消耗體脂肪代謝為糖類運(yùn)用而排出體外。通過分子共振以及深 層熱效應(yīng)，并輔以不同方式以及不同物質(zhì)，對(duì)于解決人體因血液循環(huán)不良所產(chǎn) 生的功能性障礙，都將會(huì)產(chǎn)生具體的成效。
圖7A與7B所示為微血管的照相圖，由圖可看出對(duì)于微血管血流流速測(cè)試 的結(jié)果;其中，圖7A與7B分別為服用本發(fā)明的鯊魚軟骨骨髓萃取組成物前后 的照片。比較兩圖可以發(fā)現(xiàn)，服用本發(fā)明的組成物后，微血管的血液流速可增 力口至三倍。
此外，圖8A與8B則為服用上述組成物前后對(duì)頭皮微血管所進(jìn)行的超音波 多普勒4義血流速測(cè)試，由圖可知，J良用上述組成物后，孩史血管血流流速有顯著 的提升。
率，以解除因血液供輸失衡引起頭部不適，強(qiáng)化頭皮組織避免污染源傷害，延 緩老化、退化的掉發(fā)現(xiàn)象，并得以供應(yīng)毛嚢充足營養(yǎng)素培育新發(fā)。因此，本發(fā) 明組成物在復(fù)發(fā)方面具有顯著效能。
圖9A與9B所示為服用上述組成物前后對(duì)生殖器微血管所進(jìn)行的超音波多 普勒4義血流速測(cè)試，由圖可知，服用上述組成物后，該處4敫血管的血流流速有 顯著的提升。
由此結(jié)果可知，通過服用本發(fā)明的組成物，得以開啟生物電流開關(guān)以恢復(fù) 神經(jīng)纖維叢訊號(hào)暢通，從而排除障礙。此外，還可增加人體基礎(chǔ)溫度提升新陳 代謝率，通過加快微血管的血液流速來幫助男性生殖器官迅速充血，使女性生 殖器官富有彈性以及增加潤滑液的提供。總而言之，可排除生殖泌尿系統(tǒng)以及 代謝系統(tǒng)的功能性障礙，并可抗衰老、退化。
圖IOA與10B為服用上述組成物前后對(duì)乳房微血管所進(jìn)行的超音波多普勒 儀血流速測(cè)試。如圖所示，服用上述組成物后，該處微血管的血流流速有顯著 的提升。由此結(jié)果可知，通過服用本發(fā)明的組成物，可以增加血液循環(huán)速度，由此 激發(fā)組織分子熱效應(yīng)提升新陳代謝率，可產(chǎn)生類運(yùn)動(dòng)效果以改善發(fā)育不良現(xiàn)象。 此類運(yùn)動(dòng)的效果可增加胸大肌以刺激激素產(chǎn)生，從而協(xié)助乳房的第二次發(fā)育運(yùn) 動(dòng)，使胸部更為挺拔。
綜合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，本發(fā)明的鯊魚軟骨骨髓萃取組成物有促進(jìn)血液循環(huán)的 功效。
綜上所述，根據(jù)上文所揭示的內(nèi)容，本發(fā)明確實(shí)可達(dá)到發(fā)明的預(yù)期目的，
提供一種以硫酸軟骨素(Chondroitin Sulfate)為主要活性成分，并具有抗黑色素 瘤、中和胃酸以及促進(jìn)血液循環(huán)等功效的鯊魚軟骨骨髓萃取組成物。
以上說明對(duì)本發(fā)明而言只是說明性的，而非限制性的，本領(lǐng)域普通技術(shù)人 員理解，在不脫離所附權(quán)利要求所限定的精神和范圍的情況下，可做出許多修 改，變化，或等效，但都將落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1、一種鯊魚軟骨骨髓萃取組成物，其特征在于其分子量介于21至100千道耳頓，且含有重量百分比為50-60wt％的硫酸軟骨素。
2、 如權(quán)利要求1所述的鯊魚軟骨骨髓萃取組成物，其特征在于所述組成物每一百克所含的熱量是為300至350千卡路里。
3、 如權(quán)利要求1所述的鯊魚軟骨骨髓萃取組成物，其特征在于所述硫酸軟骨素的重量百分比為56.3wt°/。，且該組成物還包括以下成分總碳水化合物，其重量百分比為23.7wt%;粗脂肪，其重量百分比為0.3wt%;灰份，其重量百分比為11.8wt%;水分，其重量百分比為7.7wt%;以及鈉，其重量百分比為0.2wt%。
4、 如權(quán)利要求3所述的鯊魚軟骨骨髓萃取組成物，其特征在于所述組成物每一百克所含的熱量是為323千卡路里。
5、 如權(quán)利要求1所述的鯊魚軟骨骨髓萃取組成物，其特征在于所述組成物為白色細(xì)致粉末。
6、 權(quán)利要求l-5所定義的鯊魚軟骨骨髓萃取組成物，在制備抑制癌細(xì)胞增生和轉(zhuǎn)移的藥物中的應(yīng)用。
7、 權(quán)利要求1-5所定義的鯊魚軟骨骨髓萃取組成物，在制備抑制胃酸過度分泌、保護(hù)消化系統(tǒng)功能的藥物中的應(yīng)用。
8、 權(quán)利要求1-5所定義的鯊魚軟骨骨髓萃取組成物，在制備促進(jìn)血液循環(huán)的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種鯊魚軟骨骨髓萃取組成物，其主要活性成分是重量百分比為50-60wt％的硫酸軟骨素(Chondroitin Sulfate)，該組成物的分子量介于21至100千道耳頓(Kilo Daltons)，而每一百克組成物所含的熱量介于300至350千卡路里。該鯊魚軟骨骨髓萃取組成物具有抗黑色素瘤、中和胃酸以及促進(jìn)血液循環(huán)等作用。
文檔編號(hào)A61K35/56GK101669971SQ200810212348
公開日2010年3月17日 申請(qǐng)日期2008年9月10日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月10日
發(fā)明者陳俊源 申請(qǐng)人:陳俊源