專利名稱：超聲造影劑及其制備方法
超聲造影劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種超聲造影劑及其制備方法，尤其涉及一種微泡超聲造影劑及其制
備方法。背景技術(shù)：
隨著超聲診斷成像技術(shù)的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)微小的氣泡能夠有效改善超聲圖像的對 比質(zhì)量，由此發(fā)展出中間含氣的微泡形式存在的超聲造影劑。超聲造影劑用于增強心肌、 肝、腎、腦等實質(zhì)器官的二維超聲影像和血流多普勒信號，明顯提高超聲對于病變區(qū)形態(tài)和 類型分辨能力，增強超聲診斷的敏感性和特異性。 目前國外FDA批準臨床應用的超聲造影劑有以白蛋白為泡膜結(jié)構(gòu)的Albunex和 0ptison，以糖類為泡膜結(jié)構(gòu)的Levovist，和以磷脂為泡膜結(jié)構(gòu)的Sonovue，其中我國衛(wèi)生 部批準臨床應用的超聲造影劑是Sonovue，至今尚無國產(chǎn)的超聲造影劑上市。
專利02133720. 9公開了一種脂質(zhì)體超聲造影劑，其成膜材料包括磷脂類分子、非 離子表面活性劑、聚乙二醇4000、高滲糖或醇類；所述成膜材料中，磷脂類分子占有的比例 為0. 1-5重量％，非離子表面活性劑的比例為0. 01-0. 05重量％，高滲糖或醇類的比例為 1-30重量％，聚乙二醇4000的比例為5-30重量％，其余為水溶液，每毫升成膜材料中加入 生物活性氣體O. 15-0. 5ml。 專利200310122421. 3公開了一種以磷脂類成分為成膜材料的超聲造影劑組合 物及其制備方法，該造影劑組合物由成膜材料和氟碳類惰性氣體組成，成膜材料由磷脂 類成分、起泡劑、聚合物和穩(wěn)定劑組成，成膜材料中各組分的重量百分比，磷脂類成分為 1 % -10 % ，起泡劑為5 % -15 % ，穩(wěn)定劑為0. 5 % -10 % ，聚合物為70 % -90 % ，每一單位劑量 中含有氟碳類惰性氣體的量為0. 15-0. 5ml。 專利申請200480002975. 2涉及一種制備凍干基質(zhì)，并在重建該基質(zhì)的基礎(chǔ)上獲 得注射用造影劑的方法，該造影劑包含主要由磷脂穩(wěn)定的充氣微氣泡的液體水溶性混懸 液。該方法包括從一種水溶液介質(zhì)、磷脂和水不混溶有機溶劑中制備一種乳劑，然后將該乳 劑凍干，接著在充氣微氣泡的水溶性混懸液中重建。 專利申請200510057375. 2公開了使用機械振蕩的方法制備含氟碳氣體的微泡懸
液，然后通過凍干方法去除懸液內(nèi)水份再導入氟碳氣體制備超聲微泡。 專利申請200710119440. 9涉及一種內(nèi)含氟碳/氮氣混合氣體的脂質(zhì)微泡超聲造
影粉劑，該微泡成膜材料由磷脂類成分，保護劑和聚合物組成，其中磷脂類成分選自磷脂酰
膽堿和磷脂酰乙醇胺，保護劑選自中、高分子量輕乙基淀粉，和聚合物選自泊洛沙姆188或
者其它藥學上可接受的用于靜脈注射的表面活性劑。通過將脂質(zhì)成膜材料包裹氟碳液體形
成乳劑微粒，經(jīng)瞬時高溫法使液態(tài)氟碳氣化形成中空的脂質(zhì)微球，進一步導入氟碳/氮氣
混合氣體，得到一種穩(wěn)定的可用于超聲顯像的脂質(zhì)微球。 超聲造影劑還具有一定的包載能力，可以作為藥物或基因的載體。由于氟碳類惰 性氣體分子量大、在血液中的溶解度和彌散性差、穩(wěn)定性好等特點，因此新一代的超聲造影
3劑多以氟碳類惰性氣體為微泡中的充填氣體。按照包裹氟碳類惰性氣體材料的不同，超聲造影劑可以分為磷脂類、白蛋白類、表面活性劑類、高分子多聚物類等。其中以磷脂類成分為泡膜結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)微泡具有很多優(yōu)點，如與DNA結(jié)合力強、無免疫原性、可生物降解、易于
PEG化修飾、安全性較高等，因此應用最為廣泛。 專利申請200510127996. 3涉及一種載基因或藥物的超聲造影劑，包括微泡、氟碳氣體、基因或藥物，微泡壁由脂質(zhì)雙分子層構(gòu)成，其內(nèi)包裹氟碳氣體，基因或藥物包埋在微泡包膜內(nèi)，其制備是由適當比例的二硬脂酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、司盤-60、甘油、磷酸鹽緩沖液和基因或藥物，采用機械振蕩方式混合制成。 上述專利或?qū)＠暾埶苽涞某曃⑴萁M成材料均為磷脂成分，其它輔料略有不同，構(gòu)成成膜材料的成分較為單一，泡膜結(jié)構(gòu)較為單薄，存在許多不足或問題，如體內(nèi)循環(huán)時間較短、載藥空間較小、載藥能力較低、與藥物結(jié)合的方式有限、耐壓能力較差等。
專利申請200610103942. 8涉及一種乳劑噴霧干燥法批量制備超聲造影劑的方法，將酯溶于水中，攪拌加入全氟己烷液體制得液態(tài)氟碳初乳，均質(zhì)化后加入等量含6-10%羥乙基淀粉的生理相容性溶液，混合，通過噴霧干燥法制得脂質(zhì)體微泡，通入氟碳氮氣混合氣體，經(jīng)消毒后得到穩(wěn)定的超聲造影劑。該專利申請所用的酯可以為磷脂酰膽堿或糖脂。但該種方法制備的超聲造影劑穩(wěn)定性、耐壓性和載藥能力仍不夠理想。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有超聲造影劑的不足之處，提供一種超聲造影劑，其具備更好穩(wěn)定性、耐壓性和載藥能力。 本發(fā)明要解決的另一個技術(shù)問題是要提供一種具備更好穩(wěn)定性、耐壓性和載藥能力的超聲造影劑的制備方法。 —種超聲造影劑，其特征在于該超聲造影劑由磷脂成分和糖脂成分主要組成復合脂膜，所述復合脂膜中填充有氣體，所述的磷脂成分選自氫化磷脂、合成磷脂及其聚乙二醇修飾衍生物中的一種或幾種。
—種超聲造影劑的制備方法，其特征在于該制備方法包括如下步驟
步驟(a)磷脂類成分加入到熱的乙醇溶液中溶解，轉(zhuǎn)入到含有糖脂的水溶液中，利用超聲、振蕩或攪拌作用使其充分混勻，形成粒徑均勻且物理性質(zhì)穩(wěn)定的乳狀溶液；
步驟(b)利用減壓蒸發(fā)方法除去步驟(a)得到的溶液中的乙醇，利用冷凍干燥方法得到復合脂膜凍干品； 步驟(c)在步驟(b)得到的復合脂膜凍干品中充入特定的氣體即得超聲造影劑。
上述超聲造影劑具有下述優(yōu)點(l)微泡無毒副作用，泡膜結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，載藥空間較大。(2)制備工藝簡便可控。(3)具有很好的聲學響應能力，可以作為有效的超聲造影劑。(4)適用面廣，可以作為藥物或基因的載體和制劑。
具體實施方式
為解決上述技術(shù)問題，發(fā)明人通過大量試驗發(fā)現(xiàn)，糖脂成份和磷脂成份可以依靠異性電荷相吸、氫鍵、范德華力、離子鍵等一種或多種物理化學作用結(jié)合成性質(zhì)更穩(wěn)定的復合脂膜。依靠糖脂成份和磷脂成份為主要組成成分制備的復合脂膜微泡超聲造影劑，其泡膜結(jié)構(gòu)比不含糖脂成分的微泡超聲造影劑更加穩(wěn)定，耐壓性和載藥能力更好。本發(fā)明采用以下的技術(shù)方案 —種超聲造影劑，由磷脂成分和糖脂成分主要組成，磷脂成分和糖脂成分形成復合脂膜含氣微泡。 上述磷脂成分選自氫化磷脂、合成磷脂和其聚乙二醇修飾衍生物其中的一種或幾種，氫化磷脂包括氫化蛋黃磷脂和氫化大豆磷脂；合成磷脂和其聚乙二醇修飾衍生物包括二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酸其中一種或幾種以及它們的聚乙二醇修飾衍生物。 上述的氣體選自空氣、氮氣、二氧化碳、氧化亞氮、六氟化硫、氟碳氣體其中的一種或幾種。 上述超聲造影劑的復合脂膜中，磷脂和糖脂的重量百分比可以為任意比例，其重量百分比例與超聲造影劑的造影強度和載藥能力有關(guān)，可根據(jù)需要進行調(diào)節(jié)，本發(fā)明的實施例中其重量百分比為磷脂成分為0. 1 %至99. 9% ，糖脂成分為0. 1 %至99. 9 % ，較優(yōu)的重量百分比為磷脂成分為10%至90%，糖脂成分為10%至90%。
上述超聲造影劑的制備方法是這樣實現(xiàn)的 (a)磷脂成分加入到熱乙醇溶液中溶解，轉(zhuǎn)入到含有糖脂的水溶液中，利用超聲、
振蕩或攪拌作用使其充分混勻，形成粒徑均勻且物理性質(zhì)穩(wěn)定的乳狀溶液； (b)利用減壓蒸發(fā)方法除去步驟(a)得到的溶液中的乙醇，加入適量的骨架支持
劑、穩(wěn)定劑和/或表面活性劑，利用冷凍干燥方法得到復合脂膜凍干品； (c)將步驟(b)得到的復合脂膜凍干品分裝于小瓶中，充入特定的氣體，即得超聲
造影劑，封蓋保存； 當用于超聲造影或藥物載體時，用臨床常用的注射溶媒或含有藥物的水溶液加入到步驟(c)得到的裝有超聲造影劑的小瓶中，輕微振搖，即可。 可以理解，其中的骨架支持劑、穩(wěn)定劑和、或表面活性劑是用來增強復合脂膜的穩(wěn)定性和均勻性，在制備過程中亦可省略。 上述超聲造影劑的超聲造影強度和載藥能力可以通過改變磷脂成分和糖脂成分比例，糖脂成分種類和分子量、微泡粒徑和微泡膜厚度來調(diào)節(jié)。
現(xiàn)結(jié)合下列實例來進一步描述本發(fā)明。
實施例1 : 本發(fā)明的第一個實施方案制備用于增強超聲顯影分辨率的超聲造影劑，其中磷脂成分選自氫化磷脂，氣體選自六氟化硫，選用泊洛沙姆188作為骨架支持劑和表面活性劑，以保證脂膜在冷凍干燥過程中保持均勻分散的狀態(tài)。 氫化蛋黃磷脂O. 08g加入到120ml 50-6(TC無水乙醇溶液中溶解，轉(zhuǎn)入到150ml同溫度的含有0. 02g糖脂水溶液中，利用搖床振蕩使其形成粒徑均勻且物理性質(zhì)穩(wěn)定的乳狀溶液。在35-4(TC利用減壓蒸發(fā)儀除去溶液中的乙醇，加入1. 5-2g的泊洛沙姆188，混勻后利用冷凍干燥方法得到復合脂膜凍干品，分裝于10ml西林瓶中，每瓶200mg，充入六氟化硫飽和，即得到超聲造影劑，封蓋放置。 以兔為模型動物，采用耳緣靜脈推注方法進行腎臟超聲顯影效果觀察，并對比市售的超聲造影劑產(chǎn)品Levovist，使用前用2ml生理鹽水溶液加入到裝有超聲造影劑的小瓶中，輕微振搖，即可用于推注。實驗結(jié)果表明本實施例制得的超聲造影劑顯影效果明顯，顯影增強時間超過300s，比市售的超聲造影劑產(chǎn)品Levovist顯影時間長，說明本實施例制得的超聲造影劑能夠作為有效的超聲造影劑。
實施例2 : 本發(fā)明第二個實施方案還是制備用于增強超聲顯影分辨率的超聲造影劑，磷脂成分選自合成磷脂和/或其聚乙二醇修飾衍生物，氣體選自氟碳氣體，選用海藻糖作為骨架支持劑和穩(wěn)定劑，吐溫80為表面活性劑，以保證脂膜在冷凍干燥過程中保持均勻分散的狀態(tài)。
二棕櫚酰磷脂酰膽堿聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(9 : Do.05g加入
到120ml 50-6(TC無水乙醇溶液中溶解，轉(zhuǎn)入到150ml同溫度的含有0. 05g糖脂的水溶液中，利用磁力攪拌600-750rpm 30min使其形成粒徑均勻且物理性質(zhì)穩(wěn)定的乳狀溶液。在35-4(TC利用減壓蒸發(fā)儀除去溶液中的乙醇，加入1. 5-2g的海藻糖和0. 1_0. 2g吐溫80，混勻后利用冷凍干燥方法得到復合脂膜凍干品，分裝于10ml西林瓶中，每瓶200mg，充入全氟丙烷飽和，即得到超聲造影劑，封蓋放置。 以兔為模型動物，采用實施例1的方法進行腎臟超聲顯影效果觀察，結(jié)果表明本實施例制得的超聲造影劑顯影效果明顯，顯影增強時間超過300s。
實施例3 : 本發(fā)明第三個實施方案制備包載藥物的超聲造影劑，磷脂類成分選自氫化磷脂，氣體選自空氣、氮氣或二氧化碳，以牛血清白蛋白為模型藥，選用泊洛沙姆188作為骨架支持劑，蔗糖脂肪酸酯為表面活性劑，以保證脂膜在冷凍干燥過程中保持均勻分散的狀態(tài)。
氫化大豆磷脂O. 7g加入到120ml 50-6(TC無水乙醇溶液中溶解，轉(zhuǎn)入到含有0. 3g蔗糖脂肪酸酯水溶液中，機械攪拌600-750rpm 30min以上，使其充分混勻，形成粒徑均勻且物理性質(zhì)穩(wěn)定的乳狀溶液。在35-4(TC利用減壓蒸發(fā)儀除去溶液中的乙醇，加入1. 5-2g的泊洛沙姆188和0. 5g蔗糖脂肪酸酯，混勻后利用冷凍干燥方法得到復合脂膜凍干品，分裝于10ml西林瓶中，每瓶200mg，充入氮氣飽和，封蓋放置。 以牛血清白蛋白為模型藥，配成O. 5mg/ml的水蛭素水溶液2ml，隔塞注入到裝有超聲造影劑的小瓶中，輕微振搖，即可形成包載牛血清白蛋白的含氮氣的復合脂膜微泡，轉(zhuǎn)入離心管中應用300rpm低速離心5分鐘，包載牛血清白蛋白的復合脂膜微泡浮于溶液上層，利用考馬斯亮藍G-250染色法測定離心后下層溶液中游離牛血清白蛋白的濃度，利用"包封率(％)=[(牛血清白蛋白總量-游離牛血清白蛋白的量)/牛血清白蛋白總量]X100"公式計算，得到的包封率達到65%以上，表明本實施例制得的超聲造影劑能夠作為藥物載體，應用于藥物制劑中。 在上述實施例中，僅對本發(fā)明進行了示范性描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員在閱讀本專利申請后可以在不脫離本發(fā)明的精神和范圍的情況下對本發(fā)明進行各種修改。
權(quán)利要求
一種超聲造影劑，其特征在于該超聲造影劑由磷脂成分和糖脂成分主要組成復合脂膜，所述復合脂膜中填充有氣體，所述的磷脂成分選自氫化磷脂、合成磷脂及其聚乙二醇修飾衍生物中的一種或幾種。
2. 權(quán)利要求1所述的超聲造影劑，其特征在于所述氫化磷脂包括氫化蛋黃磷脂和/ 或氫化大豆磷脂。
3. 權(quán)利要求1所述的超聲造影劑，其特征在于所述合成磷脂及其聚乙二醇修飾衍生 物包括二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰 磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酸其中一種或幾種 以及它們的聚乙二醇修飾衍生物。
4. 權(quán)利要求1所述的超聲造影劑，其特征在于所述復合脂膜中填充的氣體選自空氣、 氧氣、氮氣、二氧化碳、六氟化硫、氟碳氣體其中的一種或幾種。
5. 如權(quán)利要求l-4任意一項所述的超聲造影劑，其特征在于按重量百分比復合脂膜中磷脂成分為O. 1%至99.9%，糖脂成分為0. 1%至99.9%。
6. 權(quán)利要求5任意一項所述的超聲造影劑，其特征在于按重量百分比復合脂膜中磷脂成分為10%至90%，糖脂成分為10%至90%。
7. —種超聲造影劑的制備方法，其特征在于該制備方法包括如下步驟步驟(a)磷脂類成分加入到熱的乙醇溶液中溶解，轉(zhuǎn)入到含有糖脂的水溶液中，利用 超聲、振蕩或攪拌作用使其充分混勻，形成粒徑均勻且物理性質(zhì)穩(wěn)定的乳狀溶液；步驟(b)利用減壓蒸發(fā)方法除去步驟(a)得到的溶液中的乙醇，利用冷凍干燥方法得 到復合脂膜凍干品；步驟(c)在步驟(b)得到的復合脂膜凍干品中充入特定的氣體即得超聲造影劑。
8. 如權(quán)利要求7所述的超聲造影劑的制備方法，其特征在于其中所述的磷脂成分選 自氫化磷脂、合成磷脂及其聚乙二醇修飾衍生物中的一種或幾種。
9. 如權(quán)利要求7所述的超聲造影劑的制備方法，其特征在于按重量百分比復合脂膜 中磷脂成分為O. 1%至99.9%，糖脂成分為0. 1%至99.9%。
10. 權(quán)利要求7所述的超聲造影劑的制備方法，其特征在于其中步驟(b)還包括在除 去乙醇之后在冷凍干燥之前加入骨架支持劑、穩(wěn)定劑和/或表面活性劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種超聲造影劑，該復合脂膜微泡超聲造影劑由磷脂成分和糖脂成分主要組成，包裹氣體后形成穩(wěn)定的復合脂膜微泡，具有良好的聲學響應性質(zhì)和載藥能力，可以作為超聲造影劑、藥物載體和制劑。本發(fā)明還提供超聲造影劑的制備方法。
文檔編號A61K49/22GK101721719SQ20081021717
公開日2010年6月9日 申請日期2008年10月28日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月28日
發(fā)明者李校堃, 趙應征, 魯翠濤 申請人:溫州醫(yī)學院