專利名稱：：藏藥獨一味總黃酮提取物及其提取方法和用途的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術領域：
，涉及藏藥獨一味總黃酮提取物及其提取方法和用途。
背景技術：
：獨一味[L3/z/力7湖/si^&^(Benthl)kudo]是我國藏、蒙、納西等民族民間常用草藥之一，具有止血、鎮(zhèn)痛消腫、活血化瘀、補髓、行氣、續(xù)筋接骨之功效，臨床主要用于多種外科手術后的刀口疼痛、出血，外傷骨折,筋骨扭傷,風濕痹痛等癥。到目前為止，文獻報道獨一味中已知化學成分主要有黃酮類、環(huán)烯醚萜類、三萜皂苷類等，研究發(fā)現(xiàn),所含總黃酮類成分具有明顯的鎮(zhèn)痛止血作用。獨一味制劑包括獨一味膠囊、獨一味片、獨一味軟膠囊等。目前巿售獨一味制劑的制備工藝方法陳舊，均是由獨一味藥材經(jīng)過簡單提取后所得粗提物制備而成的制劑，有效成分含量低，日服劑量大。CN1559550A公開了獨一味提取物新劑型及其制備方法，釆用水煎煮、濃縮、干燥的方法制備其提取物，此方法所制備提取物有效成分含量低，服用劑量大。為減小服用劑量、提高藥效，達到安全、有效、可控的目的，本發(fā)明釆用新方法對獨一味進行提取分離，得到更高純度的提取物，以提高制劑中有效成分含量，減小了服用劑量，提高療效。對于天然產(chǎn)物的分離富集，大孔樹脂吸附法是一種非常有效的適用工業(yè)化生產(chǎn)的方法。本方法從樣品處理開始進行除雜，經(jīng)熱乙醇溶解法除去醇不溶性雜質，后經(jīng)石油醚萃取除去脂溶性雜質，經(jīng)上述兩步除雜后樣品上柱進行分離富集得到較高純度的樣品，總黃酮純度高達95%,高于所見文獻報道。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的在于提供一種從藏藥獨一味中提取的總黃酮及其提取方法和用途。本發(fā)明的目的是通過如下技術方案實現(xiàn)的獨一味總黃酮的提取方法，包括以下工藝步驟①取干燥，粉碎的獨一味藥材，用6-IO倍量濃度為5%-95%的乙醇溶液40-100。C水洛回流提取2-4次，過濾，濾液濃縮。②取上述濃縮物，用50-70%乙醇溶液加熱溶解，放冷。過濾除去醇不溶性雜質，保留濾液，除去乙醇，保留樣品溶液。③取上述樣品溶液加水并加熱溶解，放冷，用石油醚萃取2-4次除去脂溶性成分，保留水層上大孔樹脂柱吸附，靜置12h。④用0%-15%乙醇溶液洗脫大孔樹脂柱至洗脫液無色，后用10%-95%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，蒸至浸膏狀，真空干燥，粉碎，得獨一味提取物。步驟①所述的5%-95%的乙醇提取溶液可用pH值為7.5-10的氨水、氫氧化錦、碳酸鈉等弱堿性溶液配制。步驟③所述的大孔樹脂可為中低極性的大孔樹脂如D-101樹脂等。步驟④中所述的提取物中總黃酮的含量在50%-95%之間。所述獨一味提取物作為鎮(zhèn)痛和止血藥物的應用以總黃酮為活性成分，配以藥用輔料，用公知的方法可制備成藥劑學上的任何一種劑型。本發(fā)明考察了最佳提取工藝，首次重點考察了不同PH值的氨水、氫氧化鉤、碳酸鈉等弱堿溶液配制的乙醇溶液對提取結果的影響。結果顯示不同的弱堿及不同的pH值溶液配制的乙醇溶液對提取結果都有很大的影響，轉移率約從57%提高至91%、提取率約提高60%。用通過考察所選用的提取方法提取，所得到的提取物中總黃酮的提取率和轉移率均高于所見文獻報道。本方法方便快捷，適合大生產(chǎn)。由于提取方法的優(yōu)化改進，提高了有效成分的轉移率，進而提高了藥材的利用率，有效地節(jié)約了大量的生產(chǎn)成本，具有很高的經(jīng)濟效益。具體實施方式實施例1:取獨一味藥材2kg,粉碎，過20目篩，加20000ml用pH值為9的氫氧化鉤溶液配制的體積分數(shù)為5%的乙醇溶液，回流提取l小時，過濾并保存濾液，重復操作4次，合并二次濾液，濾液濃縮。取上述濃縮物，用50%乙醇加熱溶解，放冷，過濾除去不溶性雜質，濾液旋蒸蒸去乙醇。取上述旋蒸液，用水溶解，用石油醚萃取四次，保留水層。母液上處理好(以95%乙醇浸泡12h后裝柱，再以95%乙醇洗脫2-4個體積，后以蒸餾水洗脫至洗脫液無醇味)的大孔樹脂柱，流速lml/min。用大量蒸餾水洗脫至洗脫液無色，用10%乙醇洗脫5個體積，收集10%乙醇的洗脫液，濃縮并干燥，得獨一味純化物，總黃酮含量約為55%。實施例2:取獨一味藥材2kg,粉碎，過20目篩，加20000ml用pH值為8的氫氧化鉤溶液配制的體積分數(shù)為10%的乙醇溶液，回流提取l小時，過濾并保存濾液，重復搡作4次，合并四次濾液，濾液濃縮。取上述濃縮物，用60%乙醇加熱溶解，放冷，過濾除去不溶性雜質，濾液旋蒸蒸去乙醇。取上述旋蒸液，用水溶解，用石油醚萃取二次，保留水層。母液上處理好(以95%乙醇浸泡12h后裝柱，再以95%乙醇洗脫2-4個體積，后以蒸餾水洗脫至洗脫液無醇味)的大孔樹脂柱，流速lml/min。用大量蒸餾水洗脫至洗脫液無色，用30%乙醇脫5個體積，收集30%乙醇的洗脫液，濃縮并干燥，得獨一味純化物，總黃酮含量約為66%。實施例3:取獨一味藥材2kg，粉碎，過20目篩，加20000ml用pH值為8的氨水溶液配制的體積分數(shù)為30%的乙醇溶液，回流提取l小時，過濾并保存濾液，重復操作4次，合并四次濾液，濾液濃縮。取上述濃縮物，用70%乙醇加熱溶解，放冷，過濾除去不溶性雜質，濾液旋蒸蒸去乙醇。取上述旋蒸液，用水溶解(黃酮含量約5mgm廠1),用石油醚萃取三次，保留水層。母液上處理好(以95%乙醇浸泡12h后裝柱，再以95%乙醇洗脫2-4個體積，后以蒸餾水洗脫至洗脫液無醇味)的大孔樹脂柱，流速lml/min。用大量蒸餾水洗脫至洗脫液無色，用30%乙醇洗脫5個體積，收集30%乙醇的洗脫液，濃縮并干燥，得獨一味純化物，總黃酮含量約為64%。實施例4:取獨一味藥材2kg,粉碎，過20目篩，加20000ml用pH值為9的氫氧化鉤溶液配制的體積分數(shù)為50%的乙醇溶液，回流提取l小時，過濾并保存濾液，重復操作4次，合并四次濾液，濾液濃縮。取上述濃縮物，用50%乙醇加熱溶解，放冷，過濾除去不溶性雜質，濾液旋蒸蒸去乙醇。取上述旋蒸液，用水溶解(黃酮含量約5mgm1—1)，用石油醚萃取三次，保留水層。母液上處理好(以95%乙醇浸泡12h后裝柱，再以95%乙醇洗脫2-4個體積，后以蒸餾水洗脫至洗脫液無醇味)的大孔樹脂柱，流速lml/min。用5%的乙醇溶液洗脫至洗脫液無色，用50%乙醇洗脫5個體積，收集50%乙醇的洗脫液，濃縮并干燥，得獨一味純化物，總黃酮含量約為74%。實施例5:取獨一味藥材2kg,粉碎，過20目篩，加20000ml用pH值為9的氫氧化鈣溶液配制的體積分數(shù)為70%的乙醇溶液，回流提取l小時，過濾并保存濾液，重復操作4次，合并四次濾液，濾液濃縮。取上述濃縮物，用60%乙醇加熱溶解，放冷，過濾除去不溶性雜質，濾液旋蒸蒸去乙醇。取上述旋蒸液，用水溶解(黃酮含量約5mgml—1),用石油醚萃取四次，保留水層。母液上處理好(以95%乙醇浸泡12h后裝柱，再以95%乙醇洗脫2-4個體積，后以蒸餾水洗脫至洗脫液無醇味)的大孔樹脂柱，流速lml/min。用10%乙醇溶液洗脫至洗脫液無色，用70%乙醇洗脫5個體積，收集70%乙醇的洗脫液，濃縮并千燥，得獨一味純化物，總黃酮含量約為82%。實施例6:取獨一味藥材2kg，粉碎，過20目篩，加20000ml用pH值為10的氬氧化鈣溶液配制的體積分數(shù)為90%的乙醇溶液，回流提取l小時，過濾并保存濾液，重復操作4次，合并四次濾液，濾液濃縮。取上述濃縮物，用70%乙醇加熱溶解，放冷，過濾除去不溶性雜質，濾液旋蒸蒸去乙醇。取上述旋蒸液，用水溶解(黃酮含量約5mgmr1),用石油醚萃取四次，保留水層。母液上處理好(以95%乙醇浸泡12h后裝柱，再以95%乙醇洗脫2-4個體積，后以蒸餾水洗脫至洗脫液無醇味)的大孔樹脂柱，流速lml/min。用15%的乙醇溶液洗脫至洗脫液無色，用95%乙醇洗脫5個體積，收集95%乙醇的洗脫液，濃縮并干燥，得獨一味純化物，總黃酮含量約為88%。實施例7:取獨一味藥材2kg，粉碎，過20目篩，加20000ml用pH值為10的碳酸鈉溶液配制的體積分數(shù)為90%的乙醇溶液，回流提取l小時，過濾并保存濾液，重復操作4次，合并四次濾液，濾液濃縮。取上述濃縮物，用70%乙醇加熱溶解，放冷，過濾除去不溶性雜質，濾液旋蒸蒸去乙醇。取上述旋蒸液，用水溶解(黃酮含量約5mgml—用石油醚萃取四次，保留水層。母液上處理好(以95%乙醇浸泡12h后裝柱，再以95%乙醇洗脫2-4個體積，后以蒸餾水洗脫至洗脫液無醇味)的大孔樹脂柱，流速lml/min。用15%的乙醇溶液洗脫至洗脫液無色，用95%乙醇洗脫5個體積，收集95%乙醇的洗脫液，濃縮并干燥，得獨一味純化物，總黃酮含量約為92%。實施例8:獨一味總黃酮類有效部位活性的篩選釆用水提取法得到提取物F1(lg提取物相當于生藥材4.0g)、堿性醇溶液提取法得到提取物F2(lg提取物相當于生藥材3.0g)、大孔樹脂分離純化法得到純化物F3(lg提取物相當于生藥材20.9g)。釆用熱板法和扭體法試驗模型對其進行鎮(zhèn)痛藥理活性篩選。1)、醋酸扭體法組一、取昆明小鼠(20±2g)50只，隨機分組，實驗組小鼠分別給予水提取法得到提取物Fl,堿性醇溶液提取法得到提取物F2,和大孔樹脂分離純化法得到純化物F3,其中Fl290mg.kg人F2390mg'kg—1，F(xiàn)356mg'kg—1;陽性藥物對照組和溶媒對照組小鼠分別給予阿斯匹林100mgkf和同體積蒸餾水，10ml.kg—〗容積灌胃給藥，連續(xù)給藥5天。末次給藥30min后進行測定，記錄15min內的扭體次數(shù)。組二、取昆明小鼠(20土2g)50只，雌雄各半，隨機分成5組，實驗組小鼠分別給予高、中、低三個劑量的大孔樹脂分離純化法得到純化物F3，分別為112mgkg—1、56mgkg—1,28mgkg—1;陽性藥物對照組和溶媒對照組小鼠分別給予阿斯匹林IOOmgkg—i和同體積蒸餾水，10mlkg—'容積灌胃給藥，連續(xù)給藥5天。末次給藥30min后進行測定，記錄15min內的扭體次數(shù)。實驗數(shù)據(jù)以平均值±標準偏差表示，計量資料的組間顯著性檢驗采用單因素方差分析，兩兩比較采用t檢驗，P<0.05為有顯著性差異，P<0.01為有非常顯著性差異，結果見表一、表二。醋酸扭體法實驗結果，陽性對照藥物阿斯匹林在所試劑量下表現(xiàn)了明顯的鎮(zhèn)痛活性，給藥后與對照組比較差異有高度顯著性(P〈0.01)。實驗，所試臨床等效劑量的不同工藝提取獨一味成分給藥后均表現(xiàn)了不同程度的鎮(zhèn)痛活性，其中F2和F3與對照組比較差異有高度顯著(P〈0.01)，F(xiàn)l有顯著性(P<0.05)。試驗結果，獨一味F3成分試驗所用劑量較低，鎮(zhèn)痛作用較強且穩(wěn)定。實驗，獨一味F3不同實驗劑量給藥后均表現(xiàn)了不同程度的鎮(zhèn)痛活性，其中高劑量和中劑量與對照組比較差異有髙度顯著(P〈0.01)，低劑量有顯著性(P<0.05)。2)、熱板試驗組一、選取痛閾值在5-30s的雌性昆明小鼠50只，隨機分為5組，實驗組小鼠別給予水提取法得到提取物F1，堿性醇溶液提取法得到提取物F2，和大孔樹脂分離純化法得到純化物F3，其中F1290mg.kg"、F2390mg.kg—1，F(xiàn)356mgkg—1;陽性藥物對照組和溶媒對照組小鼠分別給予阿斯匹林IOOmgkg—'和同體積蒸餾水，10ml.kg—!容積灌胃給藥，連續(xù)給藥5天。末次給藥30min后進行測定，以小鼠舔后足為"疼痛"的反應指標，觀察給藥后小鼠對熱板痛反應的時間。組二、選取痛閾值在5-30s的雌性昆明小鼠50只，隨機分為5組，實驗組小鼠分別給予高、中、低三個劑量的大孔樹脂分離純化法得到純化物F3，分別為112mgkg—\56mgkg—1，28mgkg—1;陽性藥物對照組和溶媒對照組小鼠分別給予阿斯匹林IOOmgkg-i和同體積蒸餾水,10mlkf容積灌胃給藥，連續(xù)給藥5天。末次給藥30min后進行測定，以小鼠舔后足為"疼痛"的反應指標，觀察給藥后小鼠對熱板痛反應的時間。實驗數(shù)據(jù)以平均值土標準偏差表示，計量資料的組間顯著性檢驗采用單因素方差分析，兩兩比較釆用t檢驗，P<0.05為有顯著性差異，P<0.01為有非常顯著性差異，結果見表三、表四。熱板法實驗結果，陽性對照藥物阿斯匹林在所試劑量下表現(xiàn)了明顯的鎮(zhèn)痛活性，藥后與對照組比較差異有高度顯著性(P〈0.01)。實驗，所試臨床等效劑量的不同工藝提取獨一味成分給藥后均表現(xiàn)了不同程度的鎮(zhèn)痛活性，其中F2和F3與對照組比較差異有高度顯著(P〈0.01),Fl有顯著性(P<0.05)。試驗結果，獨一味F3成分試驗所用劑量較低，鎮(zhèn)痛作用較強且穩(wěn)定。實驗，獨一味F3不同實驗劑量給藥后均表現(xiàn)了不同程度的鎮(zhèn)痛活性，其中高劑量和中劑量與對照組比較差異有顯著性和高度顯著(P〈0.01),低劑量未見顯著性。表l:不同提取工藝得獨一味提取物扭體法鎮(zhèn)痛活性實驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注:與溶媒對照組比較4PO.05,**P<0.01。表2:不同量獨一味純化物扭體法鎮(zhèn)痛活性實驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注:與溶媒對照組比較*<0.05,**P<0.01。表3:不同提取工藝得獨一味提取物熱板法鎮(zhèn)痛活性實驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注:與溶媒對照組比較*<0.05,**P<0.01。表4:不同量獨一味純化物熱板法鎮(zhèn)痛活性實驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注:與溶媒對照組比較+PO.05，**P<0.01。權利要求1、藏藥獨一味總黃酮提取物，其特征在于所述總黃酮提取物中總黃酮的含量在50％-95％之間。2、根據(jù)權利要求l所述的獨一味總黃酮提取物，其特征在于該總黃酮提取物可以和藥學上可接受的載體制成臨床上可接受的制劑。3、一種如權利要求1所述的藏藥獨一味總黃酮提取物的制備方法，其特征在于其包括如下步驟①取干燥、粉碎的獨一味藥材，用6-10倍量，濃度為5%-95%的乙醇溶液，40-10(TC水洛回流提取2-4次，過濾，濾液濃縮；②取上述濃縮物，用50-70%乙醇溶液加熱溶解，放冷，過濾除去醇不溶性雜質，保留濾液，除去乙醇，保留樣品溶液；③取上述樣品溶液加水適量并加熱溶解，放冷，用石油醚萃取2-4次除去脂溶性成分，保留水層上大孔樹脂柱吸附，靜置12h;④用0%-15%乙醇溶液洗脫大孔樹脂柱至洗脫液無色，后用10%-95%的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，蒸至浸膏狀，真空干燥，粉碎，得獨一味提取物。4、如權利要求3所述的藏藥獨一味總黃酮提取物的制備方法，其特征在于步驟③所述的大孔樹脂為中低極性的大孔樹脂。5、如權利要求3所述的藏藥獨一味總黃酮提取物的制備方法，其特征在于所述的大孔樹脂優(yōu)選D-101樹脂。6、如權利要求3所述的藏藥獨一味總黃酮提取物的制備方法，其特征在于步驟①中所述的乙醇溶液為用pH值為7.5-1Q的氨水、氫氧化鈣、碳酸鈉等弱堿溶液配制。7、獨一味總黃酮提取物和其制劑在制備鎮(zhèn)痛和止血類藥物中的應用。全文摘要本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術領域：
，提供一種藏藥獨一味總黃酮提取物及其提取方法和用途。該方法采用藏藥獨一味為原料，以不同pH值的弱堿性溶液配制的乙醇為溶劑，采用回流法提取，提取液經(jīng)兩步除雜，上大孔樹脂分離富集，得到總黃酮類成分純度在50-95％之間。在分離富集過程中，樣品經(jīng)兩步除雜后上柱進行分離富集得到較高純度的樣品，樣品中總黃酮純度最高可達95％，高于所見文獻報道。本發(fā)明還提供了總黃酮類成分作為鎮(zhèn)痛和止血類藥物中的應用。本文對提取方法進行了優(yōu)化改進，提高了有效成分的轉移率，進而提高了藥材的利用率，有效的節(jié)約大量生產(chǎn)成本，有很高的經(jīng)濟效益。文檔編號A61K36/185GK101380356SQ200810228070公開日2009年3月11日申請日期2008年10月14日優(yōu)先權日2008年10月14日發(fā)明者周國勤,瑞楊,王淑君,寧邱申請人:沈陽藥科大學