專利名稱：：葒草和燈盞細(xì)辛組合物在制備治療腎臟疾病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及組合物在制備藥物中的應(yīng)用，特別是涉及葒草和燈盞細(xì)辛組合物在制備治療腎臟疾病藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：腎臟是泌尿系統(tǒng)的重要組成部分，腎臟生病首先影響泌尿功能。西醫(yī)除認(rèn)為腎臟為泌尿器官外，還有內(nèi)分泌功能，如能分泌促紅細(xì)胞生成素，能分泌腎素，能促進(jìn)骨化三醇的轉(zhuǎn)化，對(duì)人體有十分重要的作用。中醫(yī)認(rèn)為腎臟不但排尿，更有主骨生骷，主生殖的功能，通常將部分生殖系統(tǒng)疾病從腎論治而達(dá)到良好效果。腎臟疾病發(fā)病率高，致殘率高，對(duì)人民群眾的健康造成嚴(yán)重威脅。慢性腎功能衰竭(簡(jiǎn)稱慢性腎衰)又稱慢性腎功能不全，是指各種原因造成的慢性進(jìn)行性腎實(shí)質(zhì)損害，致使腎臟明顯萎縮，不能維持其基本功能，臨床表現(xiàn)為代謝產(chǎn)物潴留，水、電解質(zhì)、酸堿平衡失調(diào)，全身各系統(tǒng)受累，也稱為尿毒癥。本癥年發(fā)病率約占自然人群的50—200人/100萬(wàn)，預(yù)后嚴(yán)重。慢性腎衰的發(fā)病率占總?cè)丝诘娜f(wàn)分之三至五。1962年北京市統(tǒng)計(jì)，每年死于腎臟病者約為96人/百萬(wàn)人口。北京醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院曾統(tǒng)計(jì)1973年10月至1974年10月的1年中，尿毒癥的死亡例數(shù)占內(nèi)科死亡病例的13%。1983年貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院統(tǒng)計(jì)，慢性腎衰患者占內(nèi)科住院患者的26%，為內(nèi)科死亡中的第一位。貴陽(yáng)地區(qū)每年死于慢性腎衰者約為32人/百萬(wàn)人口。英國(guó)統(tǒng)計(jì)，每百萬(wàn)人口中，每年小兒35人死于腎衰。由此可見(jiàn)慢性腎衰的發(fā)病率和死亡率均高，而且患者的年齡段多為中、青年，嚴(yán)重地危害廣大人民群眾的健康，給千萬(wàn)個(gè)家庭帶來(lái)不幸，同時(shí)也嚴(yán)重影響社會(huì)生產(chǎn)力。慢性腎小球腎炎簡(jiǎn)稱慢性腎炎，系由多種原發(fā)性腎小球疾病所致的一組長(zhǎng)病程(一至數(shù)十年)的，以蛋白尿、水腫、高血壓為臨床表現(xiàn)的疾病。最終多發(fā)展成漸進(jìn)性慢性腎功能衰竭。急性腎小球腎炎簡(jiǎn)稱急性腎炎，是一種常見(jiàn)病，系指一組病因及發(fā)病機(jī)理不一，但臨床經(jīng)過(guò)上表博士現(xiàn)為急性起病，以血尿，蛋白尿，水腫，高血壓和腎小球?yàn)V過(guò)率下降為特點(diǎn)的腎小球疾病副主任，故也常稱為急性腎炎優(yōu)秀綜合征。臨床中心上多數(shù)發(fā)生在感染后，尤其是溶血性鏈球菌感染后，也可見(jiàn)于其他感染。是小兒時(shí)期最常見(jiàn)的一種腎臟病，年齡以38歲多見(jiàn)，2歲以下罕見(jiàn)，男女比例約為2:1。腎盂腎炎是指由致病菌感染引起的腎盂、腎盞金額腎實(shí)質(zhì)的炎癥，為尿路感染的常見(jiàn)病。一般伴下泌尿道炎癥臨床上不易嚴(yán)格區(qū)分。多發(fā)于20-40歲女性(男女發(fā)病比為l:10)。根據(jù)臨床病程及疾病腎盂腎炎可分為急性及慢性兩期慢性腎盂腎炎是導(dǎo)致慢性腎功能不全的重要原因。腎病綜合癥(n印hroticsyndrome,NS)是腎小球疾病中的一組臨床癥候群，它不是獨(dú)立性疾病。也是一種常見(jiàn)的兒科腎臟疾病，是由于多種病因造成緊小球基底膜通透性增高，大量蛋白從尿中丟失的臨床綜合征。典型表現(xiàn)為大量蛋白尿(每日〉3.5g/1.73m2體表面積)、低蛋白血癥(血漿白蛋白〈30g/L)、水腫伴或不伴有高脂血癥，診斷標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)為大量蛋白尿和低蛋白血癥。根據(jù)其臨床表現(xiàn)可分為原發(fā)性與繼發(fā)性腎病綜合征。葒草和燈盞細(xì)辛組合物主要是由葒草和燈盞細(xì)辛兩味藥組成。其中葒草為蓼科植物紅蓼的全草或帶根全草，具有祛風(fēng)除濕，活血止痛的功效，可用于增加心臟冠脈流量，減緩氧耗，抗心肌缺血，抗支氣管痙攣等；燈盞細(xì)辛為菊科植物短葶飛蓬的干燥全草，具有解表散寒，活血舒筋，止痛消積的功效，具有抗血栓、改善微循環(huán)、抗心肌缺血、腦缺血、改善腎功能、抗肝纖維化、改善腎功能等廣泛的藥理作用。兩者合用更能增強(qiáng)抗冠心病心絞痛等耗氧、缺血方面心臟疾病的作用。本發(fā)明申請(qǐng)人的專利號(hào)為CN02128066.5、名稱為"治療冠心病心絞痛的中藥制劑及其制作方法"的發(fā)明專利和專利申請(qǐng)?zhí)枮镃N200610051009.0、名稱為"一種治療冠心病心絞痛的中藥制劑及其制備方法"的發(fā)明專利申請(qǐng)公開(kāi)了用葒草和燈盞細(xì)辛制備的治療冠心病心絞痛的中藥制劑及其制備方法。申請(qǐng)人在隨后的研究中還意外的發(fā)現(xiàn)了葒草和燈盞細(xì)辛組合物在治療其他疾病方面也具有確切的療效。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種葒草和燈盞細(xì)辛組合物的第二醫(yī)藥用途，即其在制備治療腎臟疾病藥物中的應(yīng)用。為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案葒草和燈盞細(xì)辛組合物在制備治療腎臟疾病藥物中的應(yīng)用。葒草和燈盞細(xì)辛組合物在制備治療腎炎藥物中的應(yīng)用。葒草和燈盞細(xì)辛組合物在制備治療腎病綜合癥藥物中的應(yīng)用。葒草和燈盞細(xì)辛組合物在制備治療慢性腎功能衰竭藥物中的應(yīng)用。葒草和燈盞細(xì)辛組合物在制備治療糖尿病腎病藥物中的應(yīng)用。葒草和燈盞細(xì)辛組合物在制備治療慢性腎小球腎炎藥物中的應(yīng)用。前述葒草和燈盞細(xì)辛組合物在制備藥物中的應(yīng)用所述葒草和燈盞細(xì)辛組合物是由中藥原料葒草和燈盞細(xì)辛合并后提取所得的提取物或分別提取后合并所得的提取物組成。按照重量份計(jì)算，上述葒草和燈盞細(xì)辛組合物是由中藥原料葒草110份和燈盞細(xì)辛1io份經(jīng)提取制備而成。前述的藥物為注射制劑、片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、懸浮劑或乳劑。所述藥物優(yōu)選為注射制劑。葒草和燈盞細(xì)辛組合物可以按照專利號(hào)為02128066.5中所述的合并煎煮、醇沉、樹(shù)脂分離的方法進(jìn)行提取，也可以按照專利申請(qǐng)?zhí)枮?00610051009.0中所述的單獨(dú)提取分離的方法進(jìn)行提取，還可以用常規(guī)的方法進(jìn)行提取。本發(fā)明中葒草具有散血、消積、止痛的功能，主要含黃酮類葒草素、葒草甙、葉綠醌等成分，可用于風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、心肌缺血、降血壓、腳氣瘡腫的治療，為主藥；燈盞細(xì)辛具有散寒解表，活血舒筋，止痛消積的功能，用于癱瘓、風(fēng)濕痹痛、胃痛、牙痛、急性腎功能衰竭、跌撲損傷等，為輔藥。本發(fā)明在研制過(guò)程中進(jìn)行了一系列的試驗(yàn)，為了使本領(lǐng)域普通技術(shù)人員更好的理解本發(fā)明，以下通過(guò)實(shí)驗(yàn)及實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步闡述本發(fā)明復(fù)方葒草制劑的組成、其制備方法及用途一、藥物的制備原料葒草7500g、燈盞細(xì)辛1500g制備方法取葒草加10倍水煎煮3次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮，加乙醇使含醇量達(dá)65%，靜置12小時(shí)，抽濾，取上清液過(guò)濾，濾液用醋酸乙酯萃取3次，棄去醋酸乙酯液，合并水層液，用鹽酸調(diào)pH值3，用水飽和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，水洗，減壓回收正丁醇，殘留物加80%乙醇溶解，上聚酰胺柱(500g，OScm，徑高比l:6，吸附流速1.5BV/h)，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草提取物；燈盞細(xì)辛加10倍水煎煮3次，每次0.5小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮，加乙醇使含醇量達(dá)55%，靜置12小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為l.10，用鹽酸調(diào)pH值至2，55。C保溫6小時(shí)，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗至pH3-4，微波真空干燥，得燈盞細(xì)辛提取物；將葒草提取物和燈盞細(xì)辛提取物合并，加1800毫升注射用水，攪拌使溶解，再加入適量甘油，混勻，用飽和碳酸鈉調(diào)pH值至6.87.8，補(bǔ)加注射用水至10000毫升，用O.45ym和0.22ym微孔濾膜濾過(guò)，無(wú)菌灌裝，每支10ml，105'C下滅菌60分鐘，即得復(fù)方葒草注射液IOOO支。需要說(shuō)明的是，以上僅僅是介紹一種制備提取物的方法及制備成注射制劑的方法，是為了闡釋本發(fā)明，而不是限制本發(fā)明。二、試驗(yàn)例1、治療慢性腎小球腎炎療效的觀察1.l試驗(yàn)藥物復(fù)方葒草注射液，10ml/支，按上述方法生產(chǎn)；燈盞細(xì)辛注射液，10ml/支，云南生物谷燈盞花藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。1.2試驗(yàn)對(duì)象與方法1.2.l對(duì)象選取96例慢性腎小球腎炎患者，均為內(nèi)科腎臟區(qū)住院病人，復(fù)方葒草組、燈盞細(xì)辛組每組各48例。其中男性55例，女性41例；年齡25-70歲，平均年齡44.65歲；病程1-5年；血壓〈140/90mmHg，血清肌酐〈176.8ymol/L。1.2.2方法所有患者入院后及治療結(jié)束時(shí)均連續(xù)2d測(cè)24h尿蛋白定量，取其平均值，以減少檢驗(yàn)誤差，血尿的標(biāo)本送檢與尿蛋白相同。在相差顯微鏡下計(jì)算紅細(xì)胞的數(shù)值，并同時(shí)送檢血液流變學(xué)檢査，在治療前后各l次。分別給予燈盞細(xì)辛注射液40ml、復(fù)方葒草注射液40ml，加入5。/。葡萄糖注射液250ml中稀釋后靜脈滴注l次/d，療程2周。不使用血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑及其它活血化瘀與血小板解聚藥，以免干擾結(jié)果。飲食控制、休息等，與常規(guī)治療方案相同。1.2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)應(yīng)用X士S表示，采用配對(duì)t檢驗(yàn)，P〈0.05為顯著性差異。1.3結(jié)果1.3.l治療前后尿蛋白變化燈盞細(xì)辛、復(fù)方葒草對(duì)慢性腎小球腎炎患者均有明顯降低尿蛋白作用。結(jié)果如表l:表l尿蛋白變化<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>蛋白尿完全轉(zhuǎn)陰患者24h尿蛋白定量〈150mg/d，各組與治療前后比較P〈0.05，差異顯著各組間比較無(wú)顯著性差異。1.3.2治療前后血尿的變化燈盞細(xì)辛、復(fù)方葒草對(duì)慢性腎小球腎炎患者均有明顯的降低血尿作用，結(jié)果如表2:表2血尿變化<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>血尿完全轉(zhuǎn)陰患者計(jì)數(shù)〈03/HP，治療前后比較P〈0.05，差異顯著，各組與治療前后比較P〈0.05，差異顯著；各組間比較無(wú)顯著性差異。1.3.3治療前后血液流變學(xué)指標(biāo)變化見(jiàn)表3。表3治療前后血液流變學(xué)指標(biāo)比較(X±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注治療前后比較，P〈0.01，組間比較P〈0.05c表4治療前后尿蛋白、血尿數(shù)值改變<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注治療前后比較P〈0.05，組間比較P〉0.05。1.5結(jié)論慢性腎小球腎炎患者病程長(zhǎng)，病情迀延，血尿及蛋白尿長(zhǎng)期存在。本試驗(yàn)96例慢性腎小球腎炎患者分別使用燈盞細(xì)辛和復(fù)方葒草靜滴14d后，觀察血漿粘度、全血粘度、全血還原粘度、纖維蛋白原與治療前相比有顯著下降，血液高粘狀態(tài)得到改善；尿蛋白及血尿與治療前相比，下降顯著，P〈0.05，說(shuō)明兩者均具有降低慢性腎小球腎炎患者的蛋白尿及血尿的作用。但由數(shù)據(jù)結(jié)果可知復(fù)方葒草組療效略高于燈盞細(xì)辛組，說(shuō)明復(fù)方比單方好，達(dá)到了協(xié)同增效的效果。2、對(duì)大鼠試驗(yàn)性腎病尿蛋白的作用2.l試驗(yàn)藥物與試劑復(fù)方葒草注射液，10ml/支；燈盞細(xì)辛注射液，10ml/支，云南生物谷燈盞花藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；黃芪注射液，10ml/支，成都地奧九泓制藥廠生產(chǎn)；鹽酸阿霉素，10mg/支，明治醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)；白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液，40mg/ml，北京中生生物工程高技術(shù)公司生產(chǎn)。2.2試驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠，雄性，體重170190g，貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。2.3試驗(yàn)方法2.3.l模型制備與分組雄性6周齡Wistar大鼠50只，體重180士10g，隨機(jī)分為5組生理對(duì)照組、模型對(duì)照組、葒草組、黃芪組和燈盞細(xì)辛組。除生理對(duì)照組外，其余各組大鼠尾靜脈注射阿霉素7mg/kg，生理鹽水組靜脈注射生理鹽水O.2ml/只。注射后2周尿蛋白明顯時(shí)，開(kāi)始治療性腹腔注射給藥42d，用藥情況腹腔注射葒草組O.4mlkg—1d—、黃芪組O.4mlkg—1d—、燈盞細(xì)辛組O.24mlkg—1d—\每次腹腔注射容量一般〈1.Oml/只；生理對(duì)照組和模型對(duì)照組:每日每只腹腔注射生理鹽水O.5ml。2.3.2觀察指標(biāo)與方法:尿蛋白的測(cè)定靜脈注射阿霉素前以及第2、4、6、8周收集動(dòng)物的24h尿液，并采用溴酚藍(lán)法對(duì)尿蛋白進(jìn)行定量測(cè)定。2.3.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有測(cè)定結(jié)果用(x士s)表示，模型組與生理對(duì)照組比較用t檢驗(yàn)，治療組與模型組比較在同一時(shí)間點(diǎn)采用方差分析。2.4結(jié)果2.4.l—般情況:靜脈注射阿霉素后，大鼠出現(xiàn)精神不振、畏縮、活動(dòng)減少、食欲下降、體重減輕等癥狀，約70%的大鼠有斑禿性脫毛。葒草組脫毛發(fā)生的時(shí)間較晚，重新長(zhǎng)出新毛的時(shí)間較早較好。靜脈注射阿霉素后約2周時(shí)，40%的大鼠出現(xiàn)眼睛分泌物增加，部分大鼠眼睛分泌物慢慢凝固形成白色不透明結(jié)痂，出現(xiàn)單側(cè)或雙側(cè)失明。靜脈注射阿霉素第15天時(shí)，模型組、葒草組、黃芪組和燈盞細(xì)辛組雙目失明鼠數(shù)分別為3、1、1、2只，單目失明分別為4、2、2、2只。實(shí)驗(yàn)期間給阿霉素的大鼠共有12只死亡，其中模型對(duì)照組5只，葒草組2只，黃芪組2只，燈盞細(xì)辛組3只。與模型對(duì)照組比較，葒草組大鼠的病死率較低；葒草組大鼠的精神狀態(tài)恢復(fù)較快、活動(dòng)較多、體重的恢復(fù)較快。各組大鼠體重變化見(jiàn)表5。表5靜脈注射阿霉素后各組大鼠體重變化(x士s)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注傘與鹽水組比較P〈0.01;tt與模型組比較P〈0.052.4.2尿蛋白實(shí)驗(yàn)前50只大鼠24h尿蛋白排出量均〈20mg，大鼠于靜脈注射阿霉素2周后均出現(xiàn)明顯的蛋白尿。各組大鼠24h尿蛋白排出量動(dòng)態(tài)觀察見(jiàn)表6。靜脈注射阿霉素后8周，模型對(duì)照組大鼠24h尿蛋白排出量平均為381mg;葒草組、黃芪組、細(xì)辛組分別為173.4mg(P〈0.05)、183mg(P〈0.05)和247mg(P〈0.05)，與模型對(duì)照組比較分別減少了54.5%、52.0%和35.2%。表6靜脈注射阿霉素后各組大鼠24h尿蛋白排出量(x士s)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注與模型對(duì)照組比較傘P〈0.01;ttP〈0.052.5結(jié)論腎病綜合征是多種腎小球疾病引起的一組癥狀和體征。本實(shí)驗(yàn)采用大鼠一次性靜脈注射阿霉素7mg/kg制造動(dòng)物腎病綜合征模型。靜注后的大鼠2周后均出現(xiàn)了嚴(yán)重的蛋白尿，24h尿蛋白排出量明顯增高，第8周末平均達(dá)381mg。與模型對(duì)照組比較葒草組、黃芪組、細(xì)辛組大鼠的24h尿蛋白排出量顯著降低，由實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可看出葒草組療效相當(dāng)于黃芪組，優(yōu)于燈盞細(xì)辛組。表明組方后的藥理效應(yīng)明顯增強(qiáng)，復(fù)方優(yōu)于單方。3、對(duì)大鼠梗阻性腎間質(zhì)纖維化的保護(hù)作用3.l試驗(yàn)藥物與試劑復(fù)方葒草注射液，10ml/支；丹參注射液10ml/支，上海第一制藥廠生產(chǎn)。3.2試驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠，雌性，體重260-280g，貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。3.3試驗(yàn)方法3.3.l模型制備與分組SD大鼠40只，隨機(jī)分為對(duì)照組、造模組、復(fù)方葒草組和丹參組，每組各10只。以戊巴比妥鈉45mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，行左側(cè)輸尿管結(jié)扎術(shù)。對(duì)照組只找到輸尿管并不結(jié)扎。在手術(shù)前24h復(fù)方葒草組大鼠給予0.4mlkg—1d—、丹參組給予O.8mlkg—1d—、腹腔注射。對(duì)照和造模組給以等量的生理鹽水。3.3.2檢測(cè)項(xiàng)目及方法在輸尿管梗阻術(shù)后第10天將各組大鼠斷頭處死，取術(shù)側(cè)腎組織一半置于10%福爾馬林固定液中，作病理切片和免疫組化染色，另一半置于液氮中冷凍保存，以備作RT-PCR檢測(cè)。腎小管間質(zhì)的病理改變將10%福爾馬林固定的腎組織常規(guī)石蠟包埋切片，經(jīng)HE、PAS染色后，光鏡下觀察腎小管間質(zhì)病變；免疫組織化學(xué)檢測(cè)采用SABC法；TGF-ennRNA測(cè)定。3.3.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)均采用(x士s)表示，組間差異比較用t檢驗(yàn)或方差分析。3.4結(jié)果3.4.l腎小管間質(zhì)的病理改變HE和PAS染色顯示，在UU0后第10d，造模組和治療組大鼠梗阻側(cè)腎組織可見(jiàn)部分腎小管不同程度擴(kuò)張、壞死，大量單核與淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，小管間質(zhì)區(qū)面積擴(kuò)大，小管細(xì)胞基底膜不同程度斷裂增厚，腎小球變化不明顯；對(duì)照組腎臟結(jié)構(gòu)正常。見(jiàn)表7表7各組大鼠腎皮質(zhì)相對(duì)間質(zhì)容積(x士s)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注與對(duì)照組比較，*P〈0.01;與造模組比較，AP〈0.013.4.2免疫組織化染色結(jié)果3.4.2.1TGF-{3l染色在正常腎臟中，少量TGF-{31陽(yáng)性染色出現(xiàn)于腎小管上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)，腎小球內(nèi)幾乎無(wú)表達(dá)。3.4.2.2a-SMA染色A組顯示，a-SMA只在正常腎組織血管壁上表達(dá)，小球和小管中無(wú)陽(yáng)性染色；B組和C組除血管壁上有表達(dá)外，可見(jiàn)大量的陽(yáng)性的細(xì)胞出現(xiàn)在腎間質(zhì)細(xì)胞胞漿中，同時(shí)部分小管上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)也出現(xiàn)陽(yáng)性染色顆粒。各組大鼠腎小球內(nèi)均無(wú)明顯a-SMA陽(yáng)性染色。3.4.2.3I型膠原染色A組顯示，I型膠原只在腎間質(zhì)中有少量表達(dá)，小管細(xì)胞及小球中無(wú)陽(yáng)性染色。見(jiàn)表8。表8各組大鼠免疫組化半定量測(cè)定值(x士s)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注與對(duì)照組比較，*P〈0.01;與造模組比較，AP〈0.05，AAP〈0.013.4.3TGF-ennRNA測(cè)定結(jié)果對(duì)照組腎皮質(zhì)TGF-PimRNA僅微弱表達(dá)，UU0后第10d造模組鼠腎皮質(zhì)TGF-{3imRNA表達(dá)明顯升高(與A組比較P〈0.01)，復(fù)方葒草和丹參組TGF-{3諷RNA表達(dá)較造模組明顯低(P〈0.01)，較對(duì)照組升高(P〈0.05)。見(jiàn)表9。表9各組大鼠腎皮質(zhì)TGF-βlmRNA相對(duì)光密度值<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注與對(duì)照組比較*P〈0.05，**P〈0.01;與造模組比較，ΔP〈0.013.5結(jié)論表型轉(zhuǎn)化在腎間質(zhì)纖維化發(fā)病機(jī)制中起重要作用，以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，葒草組合物能抑制小管間質(zhì)細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化，起到延緩腎間質(zhì)纖維化的作用，可降低阿霉素大鼠所致腎臟皮質(zhì)IV型膠原和層粘連蛋白的含量，減輕阿霉素所致腎小球硬化程度。其作用效果與丹參注射液比較無(wú)顯著差異，表明療效與丹參注射液相當(dāng)。通過(guò)以上一系列的動(dòng)物試驗(yàn)證實(shí)本發(fā)明的葒草組合物可以治療腎臟疾病，可使血清免疫性腎炎模型大鼠腎重量增加，升高血小板數(shù)和白細(xì)胞數(shù)，降低血清肌醉、尿素氮含量，改善血清免疫性腎炎腎功能不全大鼠腎功能；能加強(qiáng)腎小管細(xì)胞分解尿液中蛋白質(zhì)的作用，降低阿霉素所致蛋白尿水平；同時(shí)能降低阿霉素大鼠腎臟皮質(zhì)IV型膠原和層粘連蛋白的含量，減輕腎小球硬化程度，延緩腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生。單獨(dú)使用本發(fā)明的葒草組合物對(duì)腎病綜合11征和慢性腎功能不全的治療作用幾乎相當(dāng)于單獨(dú)使用黃芪和丹參的治療作用，并且療效優(yōu)于單獨(dú)使用燈盞細(xì)辛注射液，表明組方后的藥理效應(yīng)明顯增強(qiáng)，復(fù)方優(yōu)于單方。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供了葒草和燈盞細(xì)辛組合物的一種新的醫(yī)藥用途，即該組合物在制備治療腎臟疾病藥物方面的應(yīng)用，并通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)證實(shí)了葒草和燈盞細(xì)辛組合物對(duì)腎臟疾病的治療具有確切的療效，為腎臟疾病的治療提供了一種新的藥物，為患者提供了一種新的用藥選擇。具體實(shí)施例方式本制備實(shí)施例僅僅是介紹一種制備組合物的方法，是為了闡釋本發(fā)明，而不是限制本發(fā)明。實(shí)施例l:注射液的制備原料葒草7500g、燈盞細(xì)辛1500g制備方法取葒草加10倍水煎煮3次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮，加乙醇使含醇量達(dá)65%，靜置12小時(shí)，抽濾，取上清液過(guò)濾，濾液用醋酸乙酯萃取3次，棄去醋酸乙酯液，合并水層液，用鹽酸調(diào)pH值3，用水飽和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，水洗，減壓回收正丁醇，殘留物加80%乙醇溶解，上聚酰胺柱(500g，OScm，徑高比l:6，吸附流速1.5BV/h)，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草提取物；燈盞細(xì)辛加10倍水煎煮3次，每次0.5小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮，加乙醇使含醇量達(dá)55%，靜置12小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為l.10，用鹽酸調(diào)pH值至2，55。C保溫6小時(shí)，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗至pH3-4，微波真空干燥，得燈盞細(xì)辛提取物；將葒草提取物和燈盞細(xì)辛提取物合并，加1800毫升注射用水，攪拌使溶解，再加入適量甘油，混勻，用飽和碳酸鈉調(diào)pH值至6.87.8，補(bǔ)加注射用水至10000毫升，用O.45ym和0.22ym微孔濾膜濾過(guò)，無(wú)菌灌裝，每支10ml，105'C下滅菌60分鐘，即得復(fù)方葒草注射液IOOO支。對(duì)腎臟疾病有確切的療效。注射液的用量60mg生藥/kg體重/天。對(duì)腎臟疾病有確切的療效。實(shí)施例2:片劑的制備原料葒草1000g、燈盞細(xì)辛5000g制備方法取葒草，力Q4倍量水煎煮一次，煎煮0.5小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.05(50°C)，加乙醇使含醇量達(dá)20%，攪拌均勻，靜置6小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.04(50°C)，用飽和碳酸鈉調(diào)pH值至4.7，充分?jǐn)嚢瑁o置l小時(shí)，取上清液濾過(guò)，濾液用1/4倍量的醋酸乙酯萃取1次，棄去醋酸乙酯液，合并水層液，用鹽酸調(diào)pH值至l，用l/4倍量水飽和的正丁醇提取2次，合并正丁醇液，用1/16倍量水洗1次，減壓回收正丁醇，殘留物加45%乙醇溶解，上聚酰胺柱(10g，直徑4cm，徑高比l:2，吸附流速0.5BV/h)，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草提取物燈盞細(xì)辛加4倍量水煎煮1次，每次0.2小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.09(50°C)，加乙醇使含醇量達(dá)20%，不斷攪拌，靜置6小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.10(50°C)，用鹽酸調(diào)pH值至l，55。C保溫2小時(shí)，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗至pH值至2，真空干燥，得燈盞細(xì)辛提取物；取葒草提取物和燈盞細(xì)辛提取物，混合均勻，加入輔料，制粒，壓片，即得。用法用量口服，50mg生藥/kg體重/天。對(duì)腎臟疾病有確切的療效。實(shí)施例3:膠囊劑的制備取葒草100g和燈盞細(xì)辛1000g，粉碎，混勻，加水煎煮，過(guò)濾，濾液減壓濃縮成浸膏，加入膠囊劑的常規(guī)輔料，按常規(guī)制劑工藝制備膠囊劑。用法用量口服75mg生藥/kg體重/天。對(duì)腎臟疾病有確切的療效。實(shí)施例4:顆粒劑的制備取葒草1000g和燈盞細(xì)辛100g，粉碎，混勻，加水煎煮、過(guò)濾，濾液減壓濃縮成浸膏，用乙醇沉淀處理，減壓回收乙醇，調(diào)pH值至中性，放置，取上清液用乙酸乙酯提取，水層液調(diào)pH值至酸性，用正丁醇提取，減壓回收正丁醇，殘留物用乙醇溶解，聚酰胺柱分離，用5095%的乙醇洗脫，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥得葒草和燈盞細(xì)辛混合提取物，加入乙醇制軟材，制粒，干燥，包裝，得顆粒劑。用法用量沖服，40mg生藥/kg體重/天。對(duì)腎臟疾病有確切的療效。實(shí)施例5:將實(shí)施例l、2、3或4中得到的葒草和燈盞細(xì)辛提取物，用制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備成丸劑。實(shí)施例6:將常規(guī)提取(水煮醇沉或醇回流提取精制)方法得到的葒草提取物和燈盞細(xì)辛提取物，用制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備成懸浮劑或乳劑。實(shí)施例7:將實(shí)施例l得到的葒草提取物和燈盞細(xì)辛提取物混合，用制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備成輸液劑。實(shí)施例7:將實(shí)施例l、2、3、4或6得到的葒草和燈盞細(xì)辛提取物，用制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備成凍干粉針劑。權(quán)利要求1.葒草和燈盞細(xì)辛組合物在制備治療腎臟疾病藥物中的應(yīng)用。6.葒草和燈盞細(xì)辛組合物在制備治療糖尿病腎病藥物中的應(yīng)用。權(quán)利要求6葒草和燈盞細(xì)辛組合物在制備治療慢性腎小球腎炎藥物中的應(yīng)用7.按照權(quán)利要求1一6任一所述葒草和燈盞細(xì)辛組合物在制備藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述葒草和燈盞細(xì)辛組合物是由中藥原料葒草和燈盞細(xì)辛合并后提取所得的提取物或分別提取后合并所得的提取物組成。8.按照權(quán)利要求7所述葒草和燈盞細(xì)辛組合物在制備藥物中的應(yīng)用，其特征在于按照重量份計(jì)算，所述葒草和燈盞細(xì)辛組合物是由中藥原料葒草110份和燈盞細(xì)辛110份經(jīng)提取制備而成。9.按照權(quán)利要求1一6任一所述葒草和燈盞細(xì)辛組合物在制備藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述藥物為注射制劑、片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、懸浮劑或乳劑10.按照權(quán)利要求9所述葒草和燈盞細(xì)辛組合物在制備藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述藥物為注射制劑。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種葒草和燈盞細(xì)辛組合物在制備治療腎臟疾病藥物中的應(yīng)用，所述腎臟疾病包括腎炎、腎病綜合癥、慢性腎功能衰竭、糖尿病腎病、慢性腎小球腎炎等，其中，葒草和燈盞細(xì)辛組合物是由中藥原料葒草和燈盞細(xì)辛合并后提取或分別提取后合并所得的組合物，本發(fā)明提供了一種葒草和燈盞細(xì)辛組合物的新的醫(yī)藥用途，即該組合物在制備治療腎臟疾病藥物方面的應(yīng)用，并通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)證實(shí)了葒草和燈盞細(xì)辛組合物對(duì)腎臟疾病的治療具有確切的療效，為腎臟疾病的治療提供了一種新的藥物，為患者提供了一種新的用藥選擇。文檔編號(hào)A61K9/08GK101306091SQ200810302530公開(kāi)日2008年11月19日申請(qǐng)日期2008年7月4日優(yōu)先權(quán)日2008年7月4日發(fā)明者周黎亞,竇啟玲申請(qǐng)人:貴州益佰制藥股份有限公司