專利名稱：：用于治療糖尿病并發(fā)癥的藥用組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：公開了一種用P-阻滯劑進(jìn)行給藥來(lái)治療糖尿病并發(fā)癥的方法。糖尿病并發(fā)癥是由糖尿病引起的，并對(duì)它存在很少或不存在治療選擇。本發(fā)明描述了(3-阻滯劑在糖尿病并發(fā)癥治療中的使用。本發(fā)明還描述了對(duì)作為糖尿病并發(fā)癥的主要誘發(fā)因素之一的醛糖還原酶的抑制作用。還提供了糖尿病傷口愈合的方法。公開了用來(lái)治療諸如糖尿病傷口的糖尿病并發(fā)癥的組合物。本發(fā)明包括施用P-阻滯劑外用制劑來(lái)改善糖尿病傷口愈合的過(guò)程，所述P-阻滯劑基本上不具有抗菌活性。本發(fā)明還涉及提高糖尿病個(gè)體在傷口上皮化組織(epithelializedtissue)愈合時(shí)膠原蛋白的累積速率。
背景技術(shù)：
：全球范圍內(nèi)發(fā)生的糖尿病從1985年估計(jì)的30,000,000位患者增加到2007年的估計(jì)245,000,000位患者，并將在2025年進(jìn)一步增加至380,000,000(來(lái)源國(guó)際糖尿病聯(lián)盟(InternationalDiabetesFederation))。沖唐尿病和糖尿病并發(fā)癥的治療費(fèi)用在2007年達(dá)到了232,000,000,000美元并預(yù)計(jì)到2025年時(shí)將超過(guò)302，500,000,000美元。慢性糖尿病導(dǎo)致了多種糖尿病并發(fā)癥，例如糖尿病神經(jīng)病變、糖尿病腎病、糖尿病心肌病、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、糖尿病性白內(nèi)障、糖尿病性膀胱病、糖尿病性角膜病變、糖尿病皮膚病變、糖尿病樣i血管病變、心肌梗死、黃斑水腫，神經(jīng)傳導(dǎo)受損和糖尿病傷口。糖尿病并發(fā)癥的治療依賴于對(duì)血糖水平的控制。因此，標(biāo)準(zhǔn)的抗糖尿病藥并不適合作為糖尿病并發(fā)癥的治療選擇。迫切需要用于糖尿病并發(fā)癥的新組合物和治療方式。面對(duì)糖尿病的主要潛在問(wèn)題之一即是被減弱的傷口愈合。所有患有糖尿病的人群(2,600,000)中的15%在其有生之年可能患上足部潰瘍。由于這些潰瘍不愈合或愈合極度緩慢，因此這些潰瘍實(shí)際上有發(fā)展為慢性的趨勢(shì)。目前，患有糖尿病足部潰瘍的患者在美國(guó)約有750,000人，歐洲約有980,000人，世界上其他地方約有110萬(wàn)人，總計(jì)約280萬(wàn)人。由于高達(dá)25。/。的糖尿病足部潰瘍患者最終需要進(jìn)行截肢，因此糖尿病足部潰瘍是嚴(yán)重的問(wèn)題。糖尿病傷口愈合的醫(yī)療重要性并沒有被過(guò)分夸大。進(jìn)行愈合的能力是人類健康的核心，由于傷口愈合能使患者克服外傷性損傷、外科手術(shù)以及由于例如糖尿病的代謝紊亂、微生物因素或其他的物理或化學(xué)因素所造成的傷口。傷口無(wú)法愈合在糖尿病中是一個(gè)嚴(yán)重的問(wèn)題，它使發(fā)病率增加(JJ.雷諾茲，英國(guó)皮膚病學(xué)雜志，112715-723(1985)(JJ.Reynolds，BritishJDermatol,112715-723(1985));J.A.加洛韋和C.R.舒曼,美國(guó)工業(yè)醫(yī)學(xué)期刊，34177-191(1963)(J.A.GallowayandCR.Shuman,AmJMed，34177-191(1963));以及S.H.珀?duì)柡虸.O.肯納特，足外科雜志，27,268-270(1988)(S.H.PearlandI.O.Kanat，JFootSurg,27，268-270(1988)))。傷口愈合中的修復(fù)應(yīng)答由多個(gè)細(xì)胞成分進(jìn)行協(xié)調(diào)，所述多個(gè)細(xì)胞成分通過(guò)多種途徑來(lái)共同發(fā)揮作用，包括由炎癥效應(yīng)細(xì)胞的損害的浸潤(rùn)。隨后，成纖維細(xì)胞組成與炎癥效應(yīng)細(xì)胞一起提供抗菌機(jī)制并促進(jìn)壞死組織的除去，同時(shí)產(chǎn)生新的結(jié)締組織。葡萄糖代謝基礎(chǔ)性紊亂可能擾亂這些復(fù)合物和互相作用的保護(hù)過(guò)程。早期的工作已經(jīng)指出糖尿病傷口愈合中的細(xì)胞功能障礙涉及有缺陷的中性粒細(xì)胞功能(J.D.巴格達(dá)蒂等人,糖尿病，27,677-681(1978)(J.D.Bagdadeetal.，Diabetes,27，677-681(1978);C.M.諾蘭等人，糖尿病，27，889-894(1978)(CM.Nolanetal.，Diabetes,27，889-894(1978));A.G.莫厄特和J.鮑姆,臨床研究期刊十二月刊，50，2541-2549(1971)(A.G.MowatandJ.Baum，J.ClinInvestDecember,50，2541-2549(1971)))、傷口的炎性細(xì)月包的延遲浸潤(rùn)(D.G.格林哈德等人，美國(guó)臨床病理學(xué)雜志，136,1235(1990)(D.G.Greenhalghetal.，AmJPathol，136,1235(1990))和法赫等人,外科學(xué)214,175-180(1991)(Faheyetal.，Surg214，175-180(1991)))、膠原蛋白產(chǎn)量的減少(W.H.古德森和T.K.漢特，分析學(xué)報(bào)，124,401-411(1977)(W.H.GoodsonandT.K.Hunt,JAnal,124,401-411(1977))和W.H.古德森和T.K.漢特，糖尿病四月刊，35，491-495(1986)(W.H.GoodsonandT.K.Hunt,DiabetesApr,35,491-495(1986)))和內(nèi)源性生長(zhǎng)因子(例如堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，它為肉芽組織的較緩慢的形成和傷口閉合提供基礎(chǔ))活性的降低。超過(guò)100種已知的生理因素造成了患有糖尿病的個(gè)體的傷口愈合缺陷(歐亞瑪?shù)热?，糖尿病研究與臨床實(shí)踐73,227-234(2006)(Oyama，etal.Diabetes:ResearchandClinicalPractice73，227-234(2006));H.布雷姆和M.托米奇-坎尼克，臨床研究期刊，117,1219-1222(2007)(H.BremandM.Tomic-Canic,J.Clin.Invest,117,1219-1222(2007)))。這些因素包括降低或減弱的生長(zhǎng)因子產(chǎn)量、血管生成應(yīng)答、巨噬細(xì)胞功能、膠原蛋白的累積、表皮屏障功能、肉芽組織的數(shù)量、角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的遷移和增殖、表皮神經(jīng)的數(shù)量、骨愈合、以及細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)組成的積累及其通過(guò)金屬蛋白酶(MMPs)進(jìn)行的重建之間的平衡。傷口愈合作為對(duì)損傷的細(xì)胞應(yīng)答而發(fā)生，并涉及角質(zhì)形成細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和血小板的活化。需要由這些細(xì)胞類型釋放的許多生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子相互配合并維持愈合的進(jìn)行。對(duì)患者表皮活檢進(jìn)行的分子分析已經(jīng)識(shí)別了與延遲的傷口愈合有關(guān)的病原體標(biāo)記物。它們包括c-myc的過(guò)度表達(dá)和p-連環(huán)蛋白的核定位。與表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)降低和異常定位以及糖皮質(zhì)激素途徑的活化相結(jié)合，抑制了角質(zhì)形成細(xì)胞的遷移。在糖尿病足部潰瘍(DFUs)的未愈合邊緣(胼胝)處，角質(zhì)形成細(xì)胞表現(xiàn)出不遷移、過(guò)度增殖和不完全分化。成纖維細(xì)胞顯示了表型轉(zhuǎn)化以及降低的遷移和增殖。糖尿病足部潰瘍的病因是復(fù)雜的，并且由于各種原因，傷口愈合通常不是非常成功的。糖尿病足部潰瘍的病因與外周血管疾病、自主神經(jīng)病變和內(nèi)皮功能障礙有關(guān)。非最適于傷口愈合的代謝條件(高血糖、高血脂癥、高胰島素血癥、促凝血狀態(tài))會(huì)愈發(fā)延遲該過(guò)程，并且也可能存在。傷口愈合是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，它以三個(gè)交迭的階段為特征炎癥、組織形成和組織重建(H.布雷姆和M..托米奇-坎尼克，臨床研究期刊，117,1219-1222(2007))。這一順序過(guò)程由真皮和表皮內(nèi)的細(xì)胞的互相作用而引發(fā)，伴隨著化學(xué)賦形劑從炎癥細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和角質(zhì)形成細(xì)胞釋放。在組織形成過(guò)程中，局部細(xì)胞和遷移細(xì)胞合成的生長(zhǎng)因子刺激成纖維細(xì)胞遷移進(jìn)入傷口，成纖維細(xì)胞在該傷口處進(jìn)行增殖并構(gòu)建細(xì)胞外基質(zhì)。已經(jīng)知道糖尿病與結(jié)締組織代謝的各種改變有關(guān)，結(jié)果糖尿病面臨傷口愈合不良的問(wèn)題。在大鼠的糖尿病傷口愈合過(guò)程中觀察到的普遍特征是炎癥，它是初始愈合階段的緩慢開始，其傾向于使愈合時(shí)間延長(zhǎng)，降低愈合區(qū)域的中性粒細(xì)胞的密度，以及導(dǎo)致發(fā)生愈合的區(qū)域內(nèi)不能進(jìn)行巨噬細(xì)胞對(duì)中性粒細(xì)胞的置換。皮膚傷口愈合是復(fù)雜且得到良好協(xié)調(diào)的生物過(guò)程，它需要角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞二者及其他細(xì)胞類型相互配合的遷移和增殖。表皮創(chuàng)傷產(chǎn)生細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、蛋白酶并啟動(dòng)細(xì)胞外基質(zhì)組成的合成，所有這些可以對(duì)上皮再形成所必須的角質(zhì)形成細(xì)胞遷移和增殖的過(guò)程進(jìn)行調(diào)節(jié)。與糖尿病有關(guān)的膠原蛋白的缺失可能是由于新合成的膠原蛋白的合成水平降低和/或其代謝增強(qiáng)所導(dǎo)致的。這些在性質(zhì)上和在數(shù)量上的異常使得在糖尿病病癥中觀察到被減弱的傷口愈合。已經(jīng)報(bào)道了糖尿病中細(xì)胞損傷的多種機(jī)制(酒田等人，動(dòng)脈粥樣硬化血栓癥雜質(zhì)，3,169-176(2000)(Sakataetal.,J.Atheroscler.Thromb.3,169-176(2000));D.K.維斯'M丄希茲,維生素與激素，60,149-193(2000)(D.K.Ways,M丄Sheetz，Vitam.Horm.60，149-193(2000);真島等人，脂血癥新見，4,411-418(2001)(Mashima，etal.,Curr.Opin.Lipidol.4,411-418(2001))),包括加速的糖化作用、提高的蛋白激酶C的活性以及增加的氧化應(yīng)激，但對(duì)于精確的機(jī)制并沒有得到完全的理解。崛田小組(N.坂本、J.H.木下、P.F.卡多爾、N.崛田，多元醇通路及其在糖尿病并發(fā)癥中的作用，艾斯維爾科學(xué)出版社B.V.,阿姆斯特丹，1988(N.Sakamoto,J.H.Kinoshita，P.F.Kador,N.Hotta，PolyolPathwayanditsRoleinDiabeticComplications,ElsevierScienceB.V.,Amsterdam,1988))認(rèn)為多元醇通路的參與是由高濃度葡萄糖誘導(dǎo)的多種器官損傷的機(jī)制。所述多元醇通路由兩步組成。第一步是葡萄糖向山梨糖醇的轉(zhuǎn)化，第二步是山梨糖醇向果糖的轉(zhuǎn)化。關(guān)鍵酶是將葡萄糖轉(zhuǎn)化為山梨糖醇的醛糖還原酶。在許多組織中發(fā)現(xiàn)了這種酶。高血糖增強(qiáng)了這種多元醇通路，結(jié)果使山梨糖醇在細(xì)胞內(nèi)累積。山梨糖醇在細(xì)胞內(nèi)的累積引起各種器官損傷。已經(jīng)認(rèn)為高滲透壓和高氧化應(yīng)激是多元醇通路參與細(xì)胞損傷的機(jī)制。然而，仍然沒有完全理解多元醇通路的精確機(jī)制。已經(jīng)觀察到，高葡萄糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損壞可以由伴隨有增強(qiáng)的氧化應(yīng)激的多元醇通路的活化介導(dǎo)。醛糖還原酶抑制劑的使用說(shuō)明了對(duì)多元醇通路的抑制可以防止糖尿病病癥下發(fā)生的內(nèi)皮細(xì)胞損壞。已知(3-腎上腺素能受體參與了傷口愈合的過(guò)程，而且激動(dòng)劑已經(jīng)表現(xiàn)出延遲傷口愈合過(guò)程。也已經(jīng)證實(shí)了P-腎上腺素能受體的誘導(dǎo)抑制角質(zhì)形成細(xì)胞遷移，這延遲了傷口愈合(陳等人，皮膚病學(xué)研究雜志，119,1261-8(2002)(Chenetal.，J.Invest.Dermatol.119,1261-8(2002)))。還有其他的文獻(xiàn)描述了水溶液形式或滴眼液(opthalmicdrops)形式的P-拮抗劑的外部應(yīng)用(雷迪等人，英國(guó)眼科學(xué)雜志,78,377-380(1994)(Reidyetal.,Br.J.Ophthalmol.78，377-380(1994))。傳田等人，皮膚病學(xué)研究雜志，121,142-148(2003)(Dendaetal.，J.Invest.Dermatol.121，142-148(2003)))。此外，卩-阻滯劑能夠增加梗塞的心臟處的血管生成說(shuō)明了它們促進(jìn)了血管生成，這在傷口愈合中可能是有用的(美國(guó)生理學(xué)雜志-心臟與循環(huán)生理學(xué)(AmJPhysiolHeartCircPhysiol.2005))。另夕卜，普萘洛爾(propranolol)通過(guò)控制cAMP和cGMP的比例顯示出增強(qiáng)肺膠原蛋白(RC林登斯米特和HP威特斯奇；藥理與實(shí)驗(yàn)治療，232,346-350(1985)(RCLindenschmidtandHPWitschi;PharmacologyandExperimentalTherapeutics,232，346-350(1985)))。然而，對(duì)于卩-腎上腺素能受體阻滯劑在糖尿病并發(fā)癥(例如糖尿病傷口愈合)中的用途未有報(bào)道，而且糖尿病傷口愈合涉及的病理與常規(guī)或外傷傷口愈合不同。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了通過(guò)用(3-腎上腺素能拮抗劑或(3-阻滯劑進(jìn)行給藥來(lái)治療由糖尿病引起的糖尿病并發(fā)癥的方法和組合物。本發(fā)明還提供了用來(lái)治療糖尿病患者的慢性糖尿病傷口的方法，該方法包括用治療劑量的試劑向患者進(jìn)行給藥，例如P-腎上腺素能阻滯劑，它對(duì)增強(qiáng)的醛糖還原酶活性進(jìn)行抑制，提高一氧化氮水平，促進(jìn)成纖維細(xì)胞的遷移，減少肉芽組織的形成并提高血管灌注，因此使向愈合的糖尿病傷口供給的氧氣增加。本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種治療哺乳動(dòng)物的糖尿病并發(fā)癥的方法，該方法包括將在治療上有效量的P-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽給藥于需要這種治療的患者。該在治療上有效量的P-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽在其藥用可接受載體、賦形劑或稀釋劑中被提供。優(yōu)選地，所述糖尿病并發(fā)癥選自由糖尿病神經(jīng)病變、糖尿病腎病、糖尿病心肌病、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、糖尿病性白內(nèi)障、糖尿病性膀胱病、糖尿病性角膜病變、糖尿病皮膚病變、糖尿病^f效血管病變、心肌梗死、黃斑水腫、神經(jīng)傳導(dǎo)受損和糖尿病傷口所組成的組。(3-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽可以以緩釋形式進(jìn)行給藥。所述哺乳動(dòng)物可以為靈長(zhǎng)類動(dòng)物、犬科動(dòng)物、貓科動(dòng)物、?？苿?dòng)物、綿羊、豬科動(dòng)物、^^駝科動(dòng)物、山羊、嚙齒動(dòng)物或馬科動(dòng)物。優(yōu)選地，所述哺乳動(dòng)物為人類?？梢酝ㄟ^(guò)用在治療上有效量的P-腎上腺素能阻滯劑進(jìn)行給藥來(lái)治療糖尿病并發(fā)癥，所述P-腎上腺素能阻滯劑可以包括但不限于醋丁洛爾(acebutolol)、阿普洛爾(alprenolol)、氨磺洛爾(amosulalol)、阿羅洛爾(arotinolol)、阿替洛爾(atenolol)、苯呋洛爾(befimolol)、倍他洛爾(betaxolol)、貝凡洛爾(bevantolol)、比索洛爾(bisoprolol)、波。引洛爾(bopindolol)、溴節(jié)銨(bretylol)、布庫(kù)洛爾(bucumolol)、布菲洛爾(bufetolol)、丁呋洛爾(bufUralol)、布尼洛爾(bunitrolol)、布引洛爾(buprandolol)、布拉洛爾(bup薩lol)、丁非洛爾(butofi固)、卡拉洛爾(ca畫lol)、卡替洛爾(carteolol)、卡維地洛(carvedilol)、塞利洛爾(celiprolol)、西他洛爾(cetamolol)、西那洛爾(cinamolol)、氯拉洛爾(cloranolol)、地來(lái)洛爾(dilevatol)、恩布洛爾(entbutolol)、依洋洛爾(epanolol)、艾司洛爾(esmolol)、呋洛爾(fUmolol)、茚諾洛爾(indenolol)、替莫洛爾(istalol)、拉貝洛爾(labetalol)、左倍他洛爾(levobetaxolol)、左布諾洛爾(levobunolol)、曱巧l洛爾(mepindolol)、美替》各爾(metipranolol)、美替普萘》各爾(metipropranolol)、美托洛爾(metoprolol)、莫普洛爾(moprolol)、納多洛爾(nadolol)、萘肝洛爾(nadoxolol)、奈比洛爾(nebivolol)、尼普地洛(nipradilol)、美替卜洛爾(optipranolol)、氧烯洛爾(oxprenolol)、噴布洛爾(penbutolol)、培布洛爾(perbutolol)、卩引咪洛爾(pindolol)、普拉洛爾(practolol)、萘心定(pronethalol)、普萘洛爾(propranolol),胡椒喘定(protokylol)、索他洛爾(sotalol)、磺千心定(sulfmalol)、他林地洛(talindol)、特他洛爾(tertatolol)、替索洛爾(tillisolol)、噻嗎洛爾(timolol)、托利洛爾(toliprolol)、抑肽酶(trasylol)、希苯洛爾(xibenolol)及其藥物可接受鹽或溶劑化物?？梢园疵啃r(shí)、每日、每周或每月進(jìn)行給藥。每日給藥可以為每天給藥l-6次。卩-腎上腺素能阻滯劑可以通過(guò)經(jīng)口、靜脈內(nèi)、腹腔內(nèi)、眼部、非消化道、外用、皮下、硬膜下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、鞘內(nèi)、腹腔內(nèi)、腦內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、病灶10內(nèi)、局部或肺部途徑進(jìn)行給藥。當(dāng)通過(guò)經(jīng)口途徑進(jìn)行給藥時(shí)，P-腎上腺素能阻滯劑的劑量?jī)?yōu)選為約lmg至1000mg。當(dāng)通過(guò)眼部途徑給藥時(shí)，(3-腎上腺素能阻滯劑的劑量?jī)?yōu)選為約0.001°/。至10.0%。當(dāng)通過(guò)外用途徑進(jìn)行給藥時(shí)，(3-腎上腺素能阻滯劑的劑量?jī)?yōu)選為約0.001%至50.0%.本發(fā)明還提供用于對(duì)需要治療的患者的糖尿病傷口愈合進(jìn)行治療的外用藥用組合物，該組合物包括在治療上有效量的(3-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽，以及藥用可接受外用載體、賦形劑或稀釋劑，其中，所述組合物的形式為乳膏(cream)、軟膏(ointment)、外用藥簽(topicalswab)、乳液(emulsion)、噴霧(spray)或洗劑(lotion)。本發(fā)明還提供一種用于對(duì)需要治療的患者的糖尿病傷口愈合進(jìn)行治療的外用藥用組合物，該組合物包括在治療上有效量的P-腎上腺素能阻滯劑艾司洛爾、其前藥或其藥物可接受鹽，以及藥用可接受外用載體、賦形劑或稀釋劑，其中，所述組合物的形式為乳膏、凝膠、外用液(topicalsolution)、皮膚貼(patch)、軟膏、外用藥簽、乳液、噴霧或洗劑。本發(fā)明還提供一種治療糖尿病傷口的方法，該方法包括向需要治療的患者用治療量的P-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽進(jìn)行外部給藥。優(yōu)選地，所述P-腎上腺素能阻滯劑為艾司洛爾。用來(lái)治療糖尿病并發(fā)癥的艾司洛爾可以參與選自由以下機(jī)制所組成的組的機(jī)制誘導(dǎo)一氧化氮產(chǎn)生；提高糖尿病傷口處膠原蛋白的水平；通過(guò)增強(qiáng)糖尿病傷口處的新生血管來(lái)提高血管灌注；通過(guò)增強(qiáng)糖尿病傷口的血管灌注來(lái)增加氧供給；對(duì)糖尿病患者體內(nèi)提高的醛糖還原酶活性進(jìn)行抑制；增強(qiáng)在糖尿病傷口中的生長(zhǎng)因子，例如神經(jīng)生長(zhǎng)因子、上皮生長(zhǎng)因子、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、血小板衍生生長(zhǎng)因子，以及它們的組合?？梢砸匀楦?、軟膏、外用藥簽、乳液、噴霧或洗劑的形式外部施用P-腎上腺素能阻滯劑。當(dāng)所述p-腎上腺素能阻滯劑為艾司洛爾時(shí)，可以以乳膏、凝膠、外用液、皮膚貼、軟膏、外用藥簽、乳液、噴霧或洗劑的形式外部施用艾司洛爾。所述哺乳動(dòng)物可以為靈長(zhǎng)類動(dòng)物、犬科動(dòng)物、貓科動(dòng)物、?？苿?dòng)物、綿羊、豬科動(dòng)物、駱駝科動(dòng)物、山羊、嚙齒動(dòng)物或馬科動(dòng)物。優(yōu)選地，所述哺乳動(dòng)物為人類。本發(fā)明進(jìn)一步提供治療哺乳動(dòng)物中的由醛糖還原酶介導(dǎo)的糖尿病并發(fā)癥的方法，該方法包括向需要治療的患者用在治療上有效量的具有醛^f唐還原酶活性的(3-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽進(jìn)行給藥。優(yōu)選地，所迷(3-腎上腺素能阻滯劑為艾司洛爾、噻嗎洛爾或普萘洛爾(propanolol)。在治療上有效量的P-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽可以在其藥用可接受載體、賦形劑或稀釋劑中被提供。優(yōu)選地，由醛糖還原酶介導(dǎo)的糖尿病并發(fā)癥選自由糖尿病神經(jīng)病變、糖尿病腎病、糖尿病心肌病、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、糖尿病性白內(nèi)障、糖尿病性膀胱病、糖尿病性角膜病變、糖尿病皮膚病變、糖尿病微血管病變、心肌梗死、黃斑水腫、神經(jīng)傳導(dǎo)受損和糖尿病傷口所組成的組。具體實(shí)施例方式根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方式，使用下列縮寫和定義。應(yīng)該注意的是，當(dāng)使用于此時(shí)，單數(shù)形式"一個(gè)(a)"、"與"和"該(the)"包括多個(gè)被提及對(duì)象，除非上下文已經(jīng)明確表示是其他意思。因此，例如，對(duì)"劑量"的描述包括本領(lǐng)域公知的一種或多種劑量及其等效量。本文所討論的出版物在本申請(qǐng)的申請(qǐng)日之前單獨(dú)地提供它們公開的內(nèi)容。本文中沒有形成這樣的認(rèn)可本發(fā)明無(wú)權(quán)借助于在先發(fā)明而先于這些出版物。此外，所提供的出版物的日期可能與實(shí)際公開日期不同，這需要另外進(jìn)行確認(rèn)。本文使用的術(shù)語(yǔ)"受治療者(subject)"或"患者"表示包括哺乳動(dòng)物。所述哺乳動(dòng)物可以為靈長(zhǎng)類動(dòng)物、犬科動(dòng)物、貓科動(dòng)物、牛科動(dòng)物、綿羊、豬科動(dòng)物、駱駝科動(dòng)物、山羊、嚙齒動(dòng)物或馬科動(dòng)物。優(yōu)選地，所述哺乳動(dòng)物為人類。本文使用的術(shù)語(yǔ)"療效(efficacy)"表示的特定處理規(guī)則的有效性。對(duì)治療糖尿病并發(fā)癥和傷口的療效進(jìn)行評(píng)價(jià)的方法是治療和診斷醫(yī)療行業(yè)中公知的。短語(yǔ)"藥物可接受載體"和"藥物可接受賦形劑"是表示用于形成制劑中僅起到載體作用的部分的任意化合物。所述藥物可接受載體或賦形劑通常是安全無(wú)毒的，并且既不是生物劑也不會(huì)產(chǎn)生不期望的效果。本發(fā)明中使用的藥物可接受載體或賦形劑包括一種或多于一種的這種載體或賦形劑。本文使用的術(shù)語(yǔ)"治療"和"處理，，等通常表示獲得期望的藥理學(xué)和生理學(xué)的效果。更具體地說(shuō)，本文中描述的試劑用于治療患有糖尿病并發(fā)癥和/或糖尿病傷口的患者。可以通過(guò)醛糖還原酶或其他的作用機(jī)制(例如對(duì)醛糖還原酶活性增強(qiáng)進(jìn)行抑制、誘導(dǎo)一氧化氮產(chǎn)生；提高糖尿病傷口處膠原蛋白的水平；通過(guò)增強(qiáng)糖尿病傷口處的新生血管來(lái)提高血管灌注；通過(guò)增強(qiáng)糖尿病傷口的血管灌注來(lái)增加氧供給；對(duì)糖尿病患者體內(nèi)提高的醛糖還原酶活性進(jìn)行抑制；增強(qiáng)在糖尿病傷口中的生長(zhǎng)因子，例如神經(jīng)生長(zhǎng)因子、上皮生長(zhǎng)因子、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、血小板衍生生長(zhǎng)因子)來(lái)介導(dǎo)糖尿病并發(fā)癥。本文中使用的術(shù)語(yǔ)"處理"，包括了對(duì)哺乳動(dòng)物(特別是人類)的疾病進(jìn)行的任何處理。"在治療上有效量"表示當(dāng)用本文公開的劑(agent)、試劑、化合物、組合物或這些物質(zhì)的組合對(duì)哺乳動(dòng)物進(jìn)行給藥時(shí)，它們的足以有效地對(duì)抗糖尿病并發(fā)癥或糖尿病傷口的量。在美國(guó)，至少有17,000,000的人患有糖尿病，并且每年還會(huì)診斷出接近1,000,000的新增病例。糖尿病人口中的大部分被診斷有嚴(yán)重的糖尿病并發(fā)癥，包括糖尿病神經(jīng)病變、糖尿病腎病、糖尿病心"幾病、糖尿病性一見網(wǎng)膜病變、糖尿病性白內(nèi)障、糖尿病性膀胱病、糖尿病性角膜病變、糖尿病皮膚病變、糖尿病微血管病變、心肌梗死、黃斑水胂、神經(jīng)傳導(dǎo)受損和糖尿病傷口。目前對(duì)患有糖尿病并發(fā)癥的患者的治療選擇是有限的。因此，對(duì)于有效治療糖尿病并發(fā)癥的迫切需要就成為本發(fā)明的主要課題。糖尿病傷口患者通常表現(xiàn)出減少的傷口炎癥、傷口感染的復(fù)發(fā)、減少的皮膚微血管灌注、傷口膠原蛋白沉積不足以及疤痕化膿。血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)不足與慢性糖尿病潰瘍有關(guān),并引起減弱的愈合(HD畢爾，MT龍雅可，S沃納,皮膚病學(xué)研究雜志109，132(1997)(HDBeer,MTLongaker,SWerner,JInvestDermatol109，132(1997))。使用了瑞格蘭奈RTM(Regranex.RTM)的臨床試驗(yàn)僅在半數(shù)或更少的被評(píng)價(jià)患者中表現(xiàn)出了促進(jìn)慢性足部潰瘍愈合的療效(DL斯蒂德，血管外科雜志，21,71(1995)(DLSteed，JVaseSurg,21,71(1995))。對(duì)促使糖尿病傷口愈合減弱的通路進(jìn)行的調(diào)查揭示了一些造成不良愈合應(yīng)答的因子。大血管和小血管的動(dòng)脈粥樣硬化阻止氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)向傷口的輸送。神經(jīng)病變導(dǎo)致了保護(hù)性敏感性的損失和局部外傷。最終，有缺陷的免疫防御抑制了對(duì)死細(xì)胞的細(xì)胞吞噬作用并促進(jìn)了感染。高血糖本身導(dǎo)致了晚期糖基化終產(chǎn)物(AGE，s)的形成，它將細(xì)胞膜與外細(xì)胞間質(zhì)蛋白結(jié)合并阻止它們發(fā)揮作用。發(fā)現(xiàn)在糖尿病傷口處缺乏生長(zhǎng)因子(例如血小板衍生生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子卩和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子)，而在糖尿病傷口液體中的基質(zhì)金屬蛋白酶和過(guò)氧化物的水平上升。長(zhǎng)期升高的血糖水平導(dǎo)致了白細(xì)胞功能的降低和細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)不良，這引起了高的傷口感染率以及糖尿病患者中的相關(guān)愈合問(wèn)題。糖尿病足部潰瘍的發(fā)生也是多種其他因素的結(jié)果。這些因素包括足部的骨架結(jié)構(gòu)構(gòu)造的機(jī)械變化、外周神經(jīng)病變和動(dòng)脈粥樣硬化外周動(dòng)脈疾病，所有這些在糖尿病人口中具有高發(fā)頻率和強(qiáng)度。非酶糖化容易使韌帶變得僵硬。神經(jīng)病變?cè)斐赡_和腿中的保護(hù)性感覺喪失和肌肉群的協(xié)調(diào)喪失，這二者增加了行走過(guò)程中的機(jī)械應(yīng)力。也已知糖尿病與結(jié)締組織代謝中的各種變化有關(guān)，其結(jié)果是，糖尿病面臨著傷口愈合不良的問(wèn)題。與糖尿病有關(guān)的膠原蛋白的損失可能是由于新合成的膠原蛋白的合成水平降低或代謝增強(qiáng)，或同時(shí)由于這二者的原因所導(dǎo)致的。這些在性質(zhì)上和在數(shù)量上的異常使得在糖尿病病癥中觀察到減弱的傷口愈合。在上述描述的其他通路中，已經(jīng)反映出多元醇通路是由高濃度葡萄糖誘導(dǎo)的各種器官損傷(包括糖尿病足部潰瘍)的機(jī)制。病原學(xué)研究的結(jié)果表示高血糖通過(guò)山梨糖醇的累積和蛋白質(zhì)糖化作用而誘導(dǎo)了與糖尿病有關(guān)的并發(fā)癥。多元醇通路包括兩個(gè)步驟。第一步是葡萄糖向山梨糖醇的轉(zhuǎn)化，第二步是山梨糖醇向果糖的轉(zhuǎn)化。關(guān)鍵酶是將葡萄糖轉(zhuǎn)化為山梨糖醇的醛糖還原酶。在許多組織中發(fā)現(xiàn)了這種酶。現(xiàn)存的醛糖還原酶抑制劑包括例如托瑞司他(tolrestat)、唑泊司他(zopolrestat)、非達(dá)司他(fidarestat)、和依帕司他(epalrestat)的分子。本發(fā)明提供了特定p-腎上腺素能阻滯劑(例如艾司洛爾、普萘洛爾和噻嗎洛爾)的醛糖還原酶抑制活性的第一證據(jù)。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)的特定P-腎上腺素能阻滯劑的醛糖還原酶抑制活性使它們被定位成用來(lái)治療由醛糖還原酶介導(dǎo)的疾病(例如糖尿病并發(fā)癥)的藥物。提高的醛糖還原酶活性導(dǎo)致了山梨糖醇累積的加劇，引起了多種糖尿病并發(fā)癥。本發(fā)明提供了對(duì)p-腎上腺素能阻滯劑的醛糖還原酶抑制活性的發(fā)現(xiàn)，以及它們?cè)谥委熤T如糖尿病傷口愈合的糖尿病并發(fā)癥中的應(yīng)用。山梨糖醇在細(xì)胞內(nèi)的累積？1起各種細(xì)胞損傷，這種細(xì)胞損傷又引起了皮膚微血管病變。糖尿病可以通過(guò)多種機(jī)制導(dǎo)致微血管病變。這些機(jī)制包括過(guò)量的山梨糖醇的形成、增加的糖基化終產(chǎn)物、氧化性損壞和蛋白激酶C過(guò)度活動(dòng)。所有這些過(guò)程都在皮膚內(nèi)發(fā)生，并且糖尿病皮膚微血管病變的存在已經(jīng)得到了完全地證實(shí)。這些^f敖血管病變的變化與皮膚血流量的異常有關(guān)。因?yàn)槠つw起到體溫調(diào)節(jié)的作用，所以在正常皮膚內(nèi)存在大量的毛細(xì)血管富余(capillaryredundancy)。在糖尿病患者中，毛細(xì)血管的損失與灌注儲(chǔ)量的減少有關(guān)。相關(guān)的微血管灌注不能滿足皮膚代謝的要求可能導(dǎo)致患有糖尿病例如糖尿病傷口的患者的各種皮膚損害。神經(jīng)病變是另一種常見的糖尿病并發(fā)癥，它由多元醇通路的活化導(dǎo)致。糖尿病足部潰瘍患者在足底、足內(nèi)側(cè)和足外側(cè)表面幾乎都患有臨床意義上的外周神經(jīng)病變。因而發(fā)生的神經(jīng)損壞顯示了外周神經(jīng)病變，這易使患者患上糖尿病潰瘍。糖尿病神經(jīng)病變的病理學(xué)涉及氧化應(yīng)激、晚期糖基化終產(chǎn)物、多元醇通路流量以及蛋白激酶C活化，這些都促進(jìn)糖尿病傷口中所見的微血管病變和神經(jīng)功能障礙。已經(jīng)提出將滲透壓和氧化應(yīng)激的增加作為多元醇通路參與細(xì)胞和組織損傷的其他機(jī)制。因此，醛糖還原酶抑制劑改善皮膚灌注，誘導(dǎo)神經(jīng)再生并降低氧化應(yīng)激，從而促進(jìn)糖尿病傷口愈合。設(shè)計(jì)本發(fā)明的方法和組合物，其基于在控制條件下對(duì)來(lái)自患者的樣本中的一氧化氮(NO)的合成進(jìn)行測(cè)量，來(lái)檢測(cè)、治療和監(jiān)控具有不良傷口愈合能力的糖尿病患者。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)糖尿病患者表現(xiàn)了NO合成能力的連續(xù)譜，并且在譜的較低端的糖尿病患者具有被減弱的傷口愈合功能。對(duì)于NO在傷口發(fā)炎、組織修復(fù)和微血管穩(wěn)態(tài)(microvascularhomeostasis)中的作用的近期研究表明，NO是傷口愈合的主要調(diào)節(jié)因子(D布魯赫-吉哈爾茲，T魯茨卡，V科爾布-巴霍芬，皮膚病學(xué)研究雜志，110，1(1998)(DBruch隱Gerharz，TRuzicka，VKolb畫Bachofen.JInvestDermatol.110，1(1998));MR謝弗等人，外科學(xué)，121,513(1997)(MRSchafferetal.，Surgery121，513(1997)))。已經(jīng)在所有的糖尿病中觀察到了內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的NO的全身性不足(A維弗斯等人，糖尿病，47，457(1998);(AVevesetal.,Diabetes,47,457(1998));M胡斯卡等人，血栓形成研究，86(2),173(1997)(MHuszkaetal.,ThrombosisRes,86(2),173(1997));SB威廉斯，JA庫(kù)斯科，MA羅迪，MT漢斯頓，MA克里格，美國(guó)心臟學(xué)會(huì)雜志，27(3),567(1996)(SBWilliams,JACusco，MARoddy,MTHohnston,MACreager,J.Am.Col.Cardiol.，27(3)，567(1996))),這反映了在慢性的、難愈性的下肢潰瘍(LEU)的發(fā)病機(jī)制中NO發(fā)揮了基礎(chǔ)作用。因此，需要將糖尿病病人的傷口愈合能力與NO的產(chǎn)量聯(lián)系起來(lái)。這種聯(lián)系使得可能開發(fā)出基于糖尿病病人的NO產(chǎn)量來(lái)預(yù)測(cè)他們的傷口愈合能力的方法，并可能提供一種有用的臨床指標(biāo)，該臨床指標(biāo)可以起到選擇適當(dāng)療法的基礎(chǔ)的作用。NO是小的疏水性氣態(tài)自由基，它是用于自主功能(例如血管舒張、神經(jīng)傳遞和腸蠕動(dòng))的重要的生理介體。NO通過(guò)活化其輩巴分子鳥普酸環(huán)化酶而揭:供細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)，所述鳥苷酸環(huán)化酶提高了環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)的細(xì)胞內(nèi)濃度(JS貝克曼，一氧化氮，J.蘭卡斯特，初級(jí)版(學(xué)術(shù)出版社，紐約)第一章(JSBeckman，inNitricOxide,J.Lancaster,Jr"Ed.(AcademicPress,N.Y.),chap.1)。細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的進(jìn)行不需要通道或細(xì)胞膜受體的介導(dǎo)，依賴于細(xì)胞環(huán)境中的NO濃度。NO在生物組織中的半衰期約5秒。它由一氧化氮合酶(NOS)的三種亞型產(chǎn)生，所述一氧化氮合酶將L-精氨酸和分子氧代謝產(chǎn)生瓜氨酸和NO。這三種亞型中的兩種為結(jié)構(gòu)酶系統(tǒng)(cNOS)，^皮描述在神經(jīng)元細(xì)胞(nNOS)和內(nèi)皮細(xì)胞(eNOS)中(D布魯赫-吉哈爾茲，T魯茨卡，V科爾布-巴霍芬，皮膚病學(xué)研究雜志，110,1(1998)(DBruch-Gerharz，TRuzicka，VKolb-Bachofen.JInvestDermatol.110,1(1998))。由于這些亞型，細(xì)胞內(nèi)的釣通過(guò)4丐調(diào)蛋白對(duì)酶進(jìn)行活化。4丐依賴性cNOS系統(tǒng)產(chǎn)生低(皮摩爾)濃度的NO。第三種系統(tǒng)為可誘導(dǎo)亞型(iNOS)，它是不依賴于鈣的。iNOS的表達(dá)是通過(guò)組織特異性的刺激(例如炎性細(xì)胞因子或細(xì)菌脂多糖(LPS))而被誘導(dǎo)。所述可誘導(dǎo)的亞型以比cNOS高得多(納摩爾(nanomolar))的濃度釋放NO，并具有有力的細(xì)胞毒作用。cNOS酶參與調(diào)解并保持皮膚穩(wěn)態(tài)(S蒙卡達(dá)，A希格斯，新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志，329,2002(1993)(SMoncada,AHiggs,NEngJMed329,2002(1993))。類皮膚中，角質(zhì)形成細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞具有cNOS和iNOS這兩種亞型。傷口巨噬細(xì)胞和角質(zhì)形成細(xì)胞具有iNOS亞型。在傷口愈合研究中顯示，當(dāng)受到損傷并且產(chǎn)生巨噬細(xì)胞成為主要的細(xì)胞來(lái)源之后，發(fā)生NO合成以延長(zhǎng)期間(10-14天)(MR謝弗，U唐翠，RA范韋瑟普，A巴布爾，外科研究雜志，71，25(1997)(MRSchaffer,UTantry，RAvanWesep，ABarbul,JSurgRes,71,25(1997)))。作為組織修復(fù)的介體，NO被證實(shí)為促進(jìn)血管生成(A帕帕沛丘珀魯斯，G加西亞-卡登那，JAA馬德瑞，WC西薩，臨床研究雜志，100(12),3131(1997)(APapapetropoulos,GGarcia-Cardena，JAAMadri，WCSissa.JClinInvest,100(12)，3131(1997)))和細(xì)胞遷移(志津子等人，美國(guó)生理學(xué)雜志，279:C794(1996)(Noirietal.,Am.J.Physiol.279:C794(1996)))，增加傷口膠原蛋白沉積和膠原蛋白交聯(lián)(MR謝弗，U唐翠，SS格羅斯，HL瓦瑟堡，A巴布爾，外科研究雜志，63,237(1996)(MRSchaffer，UTantry,SSGross,HLWasserburg,ABarbul.JSurgRes,63,237(1996)))，調(diào)節(jié)微血管穩(wěn)態(tài)(血管舒張)(D布魯赫-吉哈爾茲，T魯茨卡，V科爾布-巴霍芬，皮膚病學(xué)研究雜志，110，1(1998)(DBruch-Gerharz,TRuzicka，VKolb-Bachofen.JInvestDermatol.110，1(1998))，抑制血小板聚集(JS貝克曼，一氧化氮，J.蘭卡斯特，初級(jí)版(學(xué)術(shù)出版社，紐約)第一章(JSBeckman，inNitricOxide,J.Lancaster,Jr.,Ed.(AcademicPress,N.Y.),chap.1)，抑制內(nèi)皮-白細(xì)胞粘附的形成(AM勒夫爾，DJ勒夫爾，心血管研究，32,743(1996)(AMLefer，DJLefer,CardiovascularRes.32，743(1996))),調(diào)節(jié)內(nèi)皮的增殖和細(xì)胞凋亡(YH沈，XL王，DE威爾卡克，生化學(xué)會(huì)通訊，433(1-2)，125(1998)(YHShen，XLWang,DEWilcken，F(xiàn)EBSLett,433(l畫2)，125(1998))),提高隨意皮瓣(randomcutaneousflaps)的活力(SC厄姆等人，整形外科，101785(1998)(SCUmetal.,PlastReconstrSurg.101785(1998));GF皮爾斯等人,美國(guó)科學(xué)院院刊，86,2229(1989)(GFPierceetal"ProcNatlAcadSciUSA.86，2229(1989)))，以及增強(qiáng)細(xì)胞免疫調(diào)控和細(xì)菌細(xì)胞毒性(JS貝克曼，一氧化氮，J.蘭卡斯特，初級(jí)版(學(xué)術(shù)出版社，紐約)第一章(JSBeckman，inNitricOxide,J.Lancaster,Jr.,Ed.(AcademicPress,N.Y.),chap.1)。糖尿病中，正常的傷口修復(fù)可能受到嚴(yán)重威脅。通常來(lái)說(shuō)，在傷口愈合過(guò)程中，NO提供增強(qiáng)的組織氧的可利用度、修復(fù)機(jī)制的炎性介導(dǎo)和傷口基質(zhì)的發(fā)展和重建。NO的主要代謝途徑是變成硝酸鹽和亞硝酸鹽，它們是組織、血漿和尿液中的穩(wěn)定的代謝物(S蒙卡達(dá),A希格斯，新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志，329,2002(1993)(SMoncada，AHiggs,NEngJMed329,2002(1993))。人類中的示蹤研究已經(jīng)證實(shí)了體內(nèi)硝酸鹽/亞硝酸鹽的總量的50%產(chǎn)生自NO合成的底物L(fēng)精氨酸(PM羅德斯，AM利昂，PL弗朗西斯，AD史特瑟斯，S蒙卡達(dá)，生物藥學(xué)生理研究通訊，209,590(1995)(PMRhodes,AMLeone，PLFrancis,ADStruthers,SMoncada，BiomedBiophysRes.Commun.209,590(1995));L卡斯蒂略等人，美國(guó)學(xué)院院刊,90，193(1993)(LCastilloetal.，ProcNatlAcadSciUSA90，193(1993)))。雖然硝酸鹽和亞硝酸鹽不是具有生物活性的NO的度量，但是從經(jīng)歷適當(dāng)?shù)慕称诤蟛⒖蛇x地進(jìn)行飲食控制之后(低硝酸鹽/低精氨酸)的受治療者所獲得的血漿和尿液樣品允許使用硝酸鹽和亞硝酸鹽作為NO活性指數(shù)(C貝利斯，P瓦倫斯,腎與高血壓當(dāng)前觀點(diǎn),7，59(1998)(CBaylis,PVallance,CurrOpinNephrolHypertens7,59(1998))。本發(fā)提供了確定糖尿病受治療者是否為傷口愈合糖尿病病人或難愈性傷口糖尿病病人的方法。"傷口愈合糖尿病病人，，指的是糖尿病受治療者的傷口愈合能力大約與非糖尿病受治療者相同。"難愈性傷口糖尿病病人"指的是糖尿病受治療者的傷口愈合能力比非糖尿病受治療者低，并因此處于下肢潰瘍(LEU)的風(fēng)險(xiǎn)中。例如，在一個(gè)臨床研究中，認(rèn)為非傷口愈合糖尿病病人是那些具有一次或多次糖尿病足部潰瘍病史的患者，在Regranex.RTM治療20周后仍未完全愈合?；加刑悄虿〔“Y的人或動(dòng)物是血漿葡萄糖濃度的調(diào)節(jié)有缺陷的人或動(dòng)物，這通常是胰島素產(chǎn)生不足或抗胰島素生理效果的結(jié)果。例如，該受治療者可以為由內(nèi)科醫(yī)生診斷為患有I型或II型糖尿病的人類患者。根據(jù)本發(fā)明的受治療者可以為任意的患有糖尿病病癥(例如糖尿病)的人或動(dòng)物。所述動(dòng)物可以為哺乳動(dòng)物。所述哺乳動(dòng)物可以為靈長(zhǎng)類動(dòng)物、犬科動(dòng)物、貓科動(dòng)物、?？苿?dòng)物、綿羊、豬科動(dòng)物、駱駝科動(dòng)物、山羊、嚙齒動(dòng)物或馬科動(dòng)物。優(yōu)選地，所述受治療者為人。給藥方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明的一個(gè)方面是(3-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽在治療包括由任意形式的糖尿病引起的糖尿病并發(fā)癥的病癥中的應(yīng)用。P-腎上腺素能阻滯劑可以包括但不限于醋丁洛爾、阿普洛爾、氨磺洛爾、阿羅洛爾、阿替洛爾、苯呋洛爾、倍他洛爾、貝凡洛爾、比索洛爾、波吲洛爾、溴芐銨、布庫(kù)洛爾、布菲洛爾、丁呋洛爾、布尼洛爾、布引洛爾、布拉洛爾、丁非洛爾、卡拉洛爾、卡替洛爾、卡維地洛、塞利洛爾、西他洛爾、西那洛爾、氯拉洛爾、癸酰(decanoyl)、十二酰(dodecanoyl)、地來(lái)洛爾、恩布洛爾、依泮洛爾、艾司洛爾、呋洛爾、茚諾洛爾、替莫洛爾、拉貝洛爾、左倍他洛爾、左布諾洛爾、曱吲洛爾、美替洛爾、美替普萘洛爾、美托洛爾、莫普洛爾、十四酰(myristoyl)、納多洛爾、萘肟洛爾、奈比洛爾、尼普地洛、辛酰(octanoyl)、美替卜洛爾、氧烯洛爾、十六酰(palmitoyl)(美國(guó)專利No.4897417)、噴布洛爾、培布洛爾、。引哚洛爾、普拉洛爾、萘心定、普萘洛爾、胡椒喘定、索他洛爾、康力龍(stanozolol)、磺千心定、他林地洛、特他洛爾、替索洛爾、噻嗎洛爾、托利洛爾、抑肽酶、希苯洛爾、腎上腺素能阻斷劑、它們的前藥或它們的藥用可接受鹽。它們的前藥包括能夠在體內(nèi)代謝中釋放P-腎上腺素能阻滯劑的所有(3-腎上腺素能阻滯劑衍生物。例如，能夠在代謝中釋放艾司洛爾的所有艾司洛爾衍生物都是潛在的艾司洛爾前藥。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)艾司洛爾通過(guò)各種機(jī)制治療例如糖尿病傷口的糖尿病并發(fā)癥，所述機(jī)制包括但不限于誘導(dǎo)一氧化氮產(chǎn)生；提高糖尿病傷口處膠原蛋白的水平；通過(guò)增強(qiáng)糖尿病傷口處的新生血管來(lái)提高血管灌注；通過(guò)增強(qiáng)糖尿病傷口的血管灌注來(lái)增加氧供給；對(duì)糖尿病患者體內(nèi)提高的醛糖還原酶活性進(jìn)行抑制；增強(qiáng)在糖尿病傷口中的生長(zhǎng)因子，例如神經(jīng)生長(zhǎng)因子、上皮生長(zhǎng)因子、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、血小板衍生生長(zhǎng)因子、或他們的組合。本發(fā)明的P-腎上腺素能阻滯劑可以具有介導(dǎo)醛糖還原酶活性。所述具有介導(dǎo)醛糖還原酶活性的p-腎上腺素能阻滯劑包括但不限于艾司洛爾、噻嗎洛爾或普萘洛爾。具有介導(dǎo)醛糖還原酶活性的p-腎上腺素能阻滯劑在對(duì)糖尿病并發(fā)癥的治療中特別有用。例如，艾司洛爾是優(yōu)選的用于糖尿病傷口愈合治療的|3-腎上腺素能阻滯劑。然而，所有的P-腎上腺素能阻滯劑在任意預(yù)想的糖尿病并發(fā)癥的治療中都可以是有用的。用于傷口愈合的P-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其鹽優(yōu)選在生理可接受載體內(nèi)向受治療者進(jìn)行外部給藥。然而，對(duì)于除了糖尿病傷口以外的糖尿病并發(fā)癥的治療，(3-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽可以以多種方式進(jìn)行給藥，給藥方式包括但不限于經(jīng)口給藥、經(jīng)眼部給藥、非消化道給藥(包括外用、皮下(s.c.)、硬膜下、靜脈注射(i.v.)、肌肉注射(i.m.)、鞘內(nèi)、腹腔注射(i.p.)、腦內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)或病灶內(nèi)給藥途徑)、局部(例如外科施用或外科栓劑(surgicalsuppositoiy))和肺部(例如，噴霧劑、吸入劑或粉末)，將在下文中進(jìn)一步描述。含有具有P-腎上腺素能受體拮抗劑的化合物的藥用組合物的正確劑量將根據(jù)藥物制劑、施用模式以及特定位點(diǎn)、寄主以及所治療的糖尿病并發(fā)癥而不同。包括年齡、體重、性別、飲食、給藥時(shí)間、排泄率、寄主病癥、聯(lián)合用藥、反應(yīng)敏感度和疾病的嚴(yán)重程度的其它因素是治療的專業(yè)人員或本領(lǐng)域技術(shù)人員可以很容易地考慮到的?？梢栽谧畲竽褪軇┝康姆秶鷥?nèi)持續(xù)地或周期性地進(jìn)行給藥。例如，根據(jù)需要，可以每小時(shí)進(jìn)行給藥、每?jī)尚r(shí)給藥一次、每三小時(shí)給藥一次、每六小時(shí)給藥一次、每12小時(shí)給藥一次、每日進(jìn)行給藥、每周進(jìn)行給藥、每?jī)芍苓M(jìn)行給藥、每三周進(jìn)行給藥或每月進(jìn)行給藥。給藥的外用途徑是治療諸如難愈合糖尿病傷口的糖尿病并發(fā)癥的優(yōu)選途徑。適于外部給藥的組合物可以包括乳膏、洗劑、肥皂、香波(shampoo)、氣霧劑、香月旨(balm)、凝月交、血清、摩絲(mousse)、皮膚貼、泵式噴霧劑(pumpspray)、走珠(roll-on)、外用液、棒、濕巾(towelette)、護(hù)足產(chǎn)品、軟膏、濕紙巾(wipe)、乳液、潤(rùn)膚劑、外用藥簽和它們的任意組合。因此，本發(fā)明提供了用于外部給藥的藥用組合物，用于治療糖尿病傷口愈合，該組合物包括P-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽，以及藥用可接受外用載體、賦形劑或稀釋劑。所述外用組合物的形式優(yōu)選為乳膏、軟膏、外用藥簽、乳液、噴霧或洗劑。該組合物可以以緩釋的形式被提供。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)艾司洛爾在糖尿病傷口愈合的治療中是有用的。因此，本發(fā)明提供了用于外部給藥的藥用組合物，用于治療糖尿病傷口愈合，該組合物包括艾司洛爾、其前藥或其藥物可接受鹽，以及藥用可接受外用載體、賦形劑或稀釋劑。包括艾司洛爾的外用組合物的形式優(yōu)選為凝膠、皮膚貼、外用液、乳膏、軟膏、外用藥簽、乳液、噴霧或洗劑。該組合物可以以緩釋的形式被提供。根據(jù)攝入方式，可以以各種方式配制P-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽。用于外部給藥的制劑中的治療活性成分的濃度可以在約0.001%至50.0%的濃度范圍內(nèi)變化。優(yōu)選地，用于外部給藥的制劑中的治療活性成分的濃度可以在約0.01°/。至40.0%的濃度范圍內(nèi)變化。更優(yōu)選地，用于外部給藥的制劑中的治療活性成分的濃度可以在約0.001%至20.0%的濃度范圍內(nèi)變化。有文獻(xiàn)記載了現(xiàn)存的用來(lái)治療高眼壓(IOP)的滴眼液(滴劑)和眼用凝膠形式的P-阻滯劑的外用制劑。用于治療心臟病的P-阻滯劑的經(jīng)皮貼劑(國(guó)際專利公布No.WO/2000/035439/美國(guó)專利No.5362757)也已經(jīng)被制造出來(lái)了。然而，并沒有文獻(xiàn)記載外部施用于皮膚或真皮的(3-腎上腺素能阻滯劑的制劑。本發(fā)明提供了作為外部施用的P-腎上腺素能阻滯劑(例如艾司洛爾)的制劑。在例如糖尿病傷口的糖尿病并發(fā)癥的治療中，含有鹽酸艾司洛爾作為活性成分的組合物可以以外用制品的方式方便地向需要治療的受治療者進(jìn)行給藥，所述外用制品具有約0.001%至50.0%的鹽酸艾司洛爾濃度。優(yōu)選地，所述|3-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽被配制為用于在合適的惰性載體內(nèi)進(jìn)行外部給藥。例如，所述卩-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽在載體溶液中的濃度通常為約0.1%至約50.0%。通過(guò)給藥途徑來(lái)確定給藥劑量。用于經(jīng)口給藥的制劑中的治療活性成分的濃度可以在約1mg到1000mg的濃度范圍內(nèi)變化。用于眼部給藥的制劑中的治療活性成分的濃度可以在約0.001%到10.0%的濃度范圍內(nèi)變化。對(duì)于非腸道給藥，本發(fā)明的P-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽可以以可注射劑量的在具有藥用可接受載體的生理可接受稀釋劑中的物質(zhì)的溶液或懸浮液的形式進(jìn)行給藥，所述具有藥用可接受載體的生理可接受稀釋劑可以為無(wú)菌液，例如添加有或未添加有表面活性劑的水和油。其它可接受稀釋劑包括動(dòng)物油、才直物油或合成油，例如，花生油、大豆油和礦物油。通常來(lái)說(shuō)，二醇類(例如丙二醇或聚乙二醇(PEG))是優(yōu)選的液體載體，特別是對(duì)于可注射溶液而言。本發(fā)明的(3-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽可以以儲(chǔ)庫(kù)型注射(depotinjection)或植入制品的方式進(jìn)行給藥，它們可以以允許活性成分控制或緩釋的方式被配制根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，P-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽可以被單獨(dú)給藥，或者與其他以上討論的試劑的組合給藥以治療和/或改善由任意形式糖尿病引起的諸如糖尿病并發(fā)癥的病癥。這些試劑也可以用于制備對(duì)患者進(jìn)行治療所用的藥劑中。用于治療與糖尿病有關(guān)的病癥的治療劑給藥可以在給藥p-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽之前、同時(shí)或之后進(jìn)行。對(duì)受治療者用P-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽進(jìn)行的給藥可以在任意其他的糖尿病治療形式之前、同時(shí)或之后進(jìn)行。基于傷口的嚴(yán)重程度和熟練的醫(yī)療服務(wù)提供者公知的其他因素，可以根據(jù)需要以每小時(shí)、每日、每周或每月向受治療者進(jìn)行p-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽的給藥。優(yōu)選地，以每周進(jìn)行p-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽的給藥，給藥一周或更多周。治療的優(yōu)選規(guī)則是連續(xù)地或間歇地外部施用優(yōu)選的制劑，這根據(jù)每個(gè)患者的情況和糖尿病傷口的位置和嚴(yán)重程度而不同。含有(3-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽的藥用組合物還可以包括藥用可接受的無(wú)毒的載體或稀釋劑，它們是通常用來(lái)配制對(duì)動(dòng)物或人類進(jìn)行給藥的藥用組合物的賦形劑。制劑也可以包括傳統(tǒng)的添加劑、例如助溶劑、等滲劑(isotonicagents)、懸浮劑、乳化劑、穩(wěn)定劑和防腐劑。所述組合物可以被配制為緩釋。本發(fā)明的所述P-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽可以以緩釋形式進(jìn)行給藥，例如，儲(chǔ)庫(kù)型注射、植入制品、或滲透泵，它們可以以允許活性成分緩釋的方式來(lái)配制。緩釋制劑的植入劑是本領(lǐng)域公知的。植入劑被配制為微球體、片等，具有可生物降解的或不可生物降解的聚合物。例如，乳酸和/或乙醇酸的聚合物形成易蝕的聚合物，寄主對(duì)該易蝕的聚合物具有良好耐受性的。本發(fā)明還提供治療由醛糖還原酶介導(dǎo)的糖尿病并發(fā)癥的方法，該方法包括將在治療上有效量的具有趁糖還原酶活性的P-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽進(jìn)行給藥。優(yōu)選地，所述(3-腎上腺素能阻滯劑為艾司洛爾、噻嗎洛爾或普萘洛爾。所述由醛糖還原酶介導(dǎo)的糖尿病并發(fā)癥可以包括但不限于糖尿病神經(jīng)病變、糖尿病腎病、糖尿病心肌病、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、糖尿病性白內(nèi)障、糖尿病性膀胱病、糖尿病性角膜病變、糖尿病皮膚病變、糖尿病微血管病變、心力幾梗死、黃斑水腫、神經(jīng)傳導(dǎo)受損和糖尿病傷口。實(shí)施例實(shí)施例1醛糖還原酶(AR)抑制作用研究為了研究酶抑制作用，使用甘油酪作為底物，通過(guò)分光光度分析法，用提純的人類重組醛糖還原酶(在大腸桿菌(￡.co//)中表達(dá))來(lái)測(cè)試(3-腎上腺素能拮抗劑的醛糖還原酶(AR)抑制活性(分子視界,2004,10，148-154(Mol.Vis.2004,10,148-154))。材料DL-甘油醛、葡萄糖、硫酸鋰、2-巰基乙醇、NADPH(還原型輔酶11)、二甲基亞砜，TC-199培養(yǎng)基(M-3769)、山梨糖醇、山梨糖醇脫氫酶、NAD(煙酰胺腺噤呤二核苷酸)和谷胱甘肽還原酶購(gòu)自西格瑪化學(xué)公司(圣路易斯，密蘇里)(SigmaChemicalCompany(St.Louis,MO))。用于實(shí)驗(yàn)的包括噻嗎洛爾、艾司洛爾、索他洛爾、奈比洛爾、卡維地洛、美托洛爾和拉貝洛爾的卩-腎上腺素能拮抗劑是作為純活性藥用成分(APIs)從當(dāng)?shù)毓?yīng)商獲得的。用于實(shí)驗(yàn)的P-拮抗劑的鹽為馬來(lái)酸噻嗎洛爾、鹽酸索他洛爾、鹽酸拉貝洛爾、酒石酸美托洛爾、鹽酸奈比洛爾、鹽酸艾司洛爾和鹽酸普萘洛爾。大鼠晶狀體醛糖還原酶從大鼠晶狀體制備粗醛糖還原酶(AR)。將獲得自國(guó)家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(全國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)，海德^i巴，印度)的9周大的WNIN雄性大鼠的眼球取出。動(dòng)物護(hù)理和方案符合動(dòng)物倫理委員會(huì)(InstitutionalAnimalEthicsCommittee)并受到其認(rèn)可。用后路手術(shù)將晶狀體切開并且在10體積的lOmM的磷酸鉀緩沖液(pH6.2)中均質(zhì)。將勻漿在4。C以15,000xg離心分離30分鐘，并將得到的上清液用作AR來(lái)源。重組人類醛糖還原酶的提純從細(xì)菌培養(yǎng)物中提純重組人類醛糖還原酶。提取來(lái)自表達(dá)培養(yǎng)物(expressioncultures)的酶，并基本按照在先描述(生物化學(xué)雜志1992;267:24833-40(JBiolChem1992;267:24833-40))進(jìn)行純化，不同的是，使用親和色譜代替藍(lán)膠(AffiGelBlue)(伯樂(Bio-Rad))作為最后的提純步驟。醛糖還原酶(AR)分析根據(jù)由海曼(Hayman)和木下(Kinoshita)(生物化學(xué)雜志，1965;240:877-82(JBiolChem1965;240:877-82))所描述的方法來(lái)分析AR活性。1ml的分析混合物包含50的磷酸鉀緩沖液(pH6.2)、0.4mM的硫酸鋰、5拜的2-巰基乙醇、10岸的DL-甘油醛、0.1(iM的NADPH和酶制品(大鼠晶狀體或重組酶)。使用合適的空白組進(jìn)行校正。將分析混合物在37。C恒溫培育并通過(guò)在37。C加入NADPH來(lái)啟動(dòng)。在卡瑞生物100(CaryBio100)分光光度計(jì)中檢測(cè)到由于NADPH氧化而發(fā)生的在340nm處吸光度的改變。抑制作用的研究為了研究抑制作用，在水中制備P-腎上腺素能拮抗劑、噻嗎洛爾、艾司洛爾、索他洛爾、奈比洛爾、卡維地洛、美托洛爾和拉貝洛爾的濃縮原料。將作為測(cè)試化合物的不同濃度的(3-腎上腺素能拮抗劑加入分析混合物中，并在進(jìn)行如以上所述地由NADPH引發(fā)的反應(yīng)之前進(jìn)行5-10分鐘的恒溫培育。將不存在抑制劑時(shí)AR活性考慮為100%,從而計(jì)算具有測(cè)試化合物的抑制的百分?jǐn)?shù)。然后評(píng)價(jià)產(chǎn)生50%抑制(IC5Q)的各個(gè)測(cè)試樣品的濃度。表l:P-腎上腺素能拮抗劑的醛糖還原酶抑制劑IC50值(pM)<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>實(shí)施例2血紅細(xì)胞內(nèi)山梨糖醇的估算測(cè)試表現(xiàn)出有效的醛糖還原酶抑制作用的化合物(艾司洛爾、噢嗎洛爾、普萘洛爾)的抑制山梨糖醇在血紅細(xì)胞(RBC)內(nèi)形成的潛力。將細(xì)胞在體外用30mM的葡萄糖進(jìn)行恒溫培育。通過(guò)由馬龍等人，糖尿病，1980;29:861-864(Malone,etal.Diabetes;1980;29:861-864)所報(bào)道的方法估算山梨糖醇。表2:RBC內(nèi)的山梨糖醇濃度<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>實(shí)施例3動(dòng)物實(shí)驗(yàn)糖尿病傷口愈合將韋斯大鼠(Wistarrat)裝在具有能任意采食食物(哈蘭德特克蘭德輻照嚙齒動(dòng)物伺料)和無(wú)菌水的標(biāo)準(zhǔn)消毒的嚙齒動(dòng)物籠里。將大鼠關(guān)在靜止于微隔離器中的哈蘭特克片?；募?HarlanTek-chippelletedpaper)上，微隔離器被保持在72。F，濕度60%和12小時(shí)的光周期下。將動(dòng)物買來(lái)后裝在該設(shè)備中飼養(yǎng)IO天以適應(yīng)環(huán)境。通過(guò)連續(xù)五天腹腔注射50mg/kg體重的鏈脲佐菌素在大鼠內(nèi)誘導(dǎo)糖尿病。用扭曲的刮痕器在動(dòng)物背部皮膚上制造深0.57-0.62mm的2mm的切口，從而在大鼠身上造成傷口。在使用刮痕器前，剪去該部分的毛發(fā)并用標(biāo)準(zhǔn)魯戈氏》典液進(jìn)行清潔?；衔锝o藥和傷口處理鹽酸艾司洛爾(10%)每天給藥三次，或在標(biāo)準(zhǔn)治療對(duì)照中直接將試劑涂抹在傷口上。所使用的陽(yáng)性對(duì)照為可商購(gòu)得到的血小板衍生生長(zhǎng)因子。持續(xù)治療直至被治療的鼠的傷口完全愈合。將傷口用標(biāo)準(zhǔn)生理鹽水進(jìn)行漂洗，收集沖洗傷口的液體并在2500rpm下，在高倍顯微鏡下觀察任意異常細(xì)胞的存在。此外，將沉淀物物質(zhì)在1nil的RPMI450中稀釋，使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器來(lái)確定巨噬細(xì)胞的數(shù)量。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果粗略地，可以從圖l看出，用賦形劑處理的大鼠中的初始傷口的大部分在產(chǎn)生傷口后(27天)仍然有痂，而在被治療的動(dòng)物的皮膚上的傷口已經(jīng)完全愈合(參見圖1B)。從組織學(xué)水平來(lái)看，可以看出被治療的大鼠的皮膚比用賦形劑處理的大鼠有密得多的過(guò)渡性基質(zhì)(provisionalmatrix)。在被治療的皮膚內(nèi)有更多的紡錘體細(xì)胞。圖1C和ID所示的組織用蘇木精和伊紅(eosin)，X330進(jìn)行染色。用鹽酸艾司洛爾處理后的傷口組織形態(tài)示于圖2。所示的傷口底部顯示出由膠原蛋白薄層覆蓋的脂肪組織。在用賦形劑處理的傷口中沒有發(fā)現(xiàn)肉芽組織或上皮細(xì)胞。另一方面，在用鹽酸艾司洛爾治療的傷口內(nèi)發(fā)現(xiàn)了肉芽組織厚層和上脂肪組織通過(guò)中性粒細(xì)胞和微血管的浸潤(rùn)。首個(gè)十四天后，每隔7天殺死個(gè)體大鼠來(lái)得到逐步的組織學(xué)報(bào)道。收集傷口樣品，進(jìn)行組織病理診斷評(píng)估角質(zhì)形成細(xì)胞和傷口愈合。關(guān)于傷口閉合，將動(dòng)物保持不受損傷。如圖3所示，在用鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)糖尿病并用賦形劑或鹽酸艾司洛爾進(jìn)行外部治療8周后制備并檢驗(yàn)組織切片。用賦形劑處理的糖尿病皮膚的特征包括較薄的表皮、真皮基質(zhì)的組織瓦解和間質(zhì)細(xì)胞致密變化(見圖3A和3C)。被治療的皮膚(非糖尿病和糖尿病)的特征顯示出增厚的表皮和直接位于表皮之下的大量的紡錘體形間質(zhì)細(xì)胞(參見圖3B和3D)。在產(chǎn)生傷口后的第3天、第7天、第12天和第19天測(cè)量多個(gè)傷口愈合參數(shù)。這些參數(shù)在以下單獨(dú)的表中列出。每隔一天測(cè)量傷口大小和大鼠的體重。特別地，每隔一天用微游標(biāo)卡尺測(cè)量傷口的長(zhǎng)度和寬度，并記錄傷口邊緣處的抗張強(qiáng)度。由同一調(diào)查者在第3、12、19天時(shí)利用電子數(shù)字式游標(biāo)卡尺(B&D，普馬勒斯，新澤西(B&D,Pomanus,NJ))測(cè)量傷口直徑。在即將進(jìn)行測(cè)量前通過(guò)調(diào)零將卡尺進(jìn)行校準(zhǔn)。傷口直徑的減小記錄于表l中。表l:傷口直徑的減小第3天對(duì)照(MM)1.27+/-0.12陽(yáng)性對(duì)照1.16+/-0.12艾司5各爾1.28+/-0.12第12天3.78+/-0.241.35+/-0.191.37+/-0.17第19天7.89+/-0,311.47+/-0.340.79+/-0.28°/。減少536%998%用張力口徑測(cè)量器(i哈佛儀器，昆西，馬薩諸塞州(Harvardapparatus,Quincy,MA))測(cè)量傷口的收縮，結(jié)果示于表2。表2:傷口直徑收縮程度(°/。)第3天對(duì)照(畫)12.46+/-5.8陽(yáng)性^t照11.98+/-6.2艾司洛爾12.17+/-5.8第12天26.78+/-11.437.71+/-12.441.86+/-13.2第19天58.76+/-9.986.14+/-10.298.64+/-9.6用于評(píng)價(jià)的部分用艾本德(Eppendorf)IO號(hào)手術(shù)刀進(jìn)行切割，并將組織保存在10%的磷酸鹽緩沖的福爾馬林溶液中。將組織從福爾馬林溶液中取出并在100%的乙醇中浸沒6小時(shí)。再次將該組織取出并保存于10%的鮑音液(Bouinssolution)中以待評(píng)價(jià)。傷口的活才企參數(shù)列于表3。表3:糖尿病大鼠中傷口活檢評(píng)價(jià)第3天第7天第12天對(duì)照1.2+/-0.42.3+/-0.32.9+/-0.3陽(yáng)性對(duì)照1.3+/-0.21.5+/-0.41.4+/-0.4艾司洛爾1.3+/-0.31.3+/-0.21.4+/-0.3第19天4.5+/-0.41.5+/-0.51.5+/-0.3總計(jì)10.9+/-1.35.9+/-1.45.5+/-1.1基于在高倍顯微鏡觀察的傷口上發(fā)現(xiàn)的新的上皮細(xì)胞來(lái)測(cè)量上皮化。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)數(shù)字式游標(biāo)卡尺(B&D,Pomanus,NJ)測(cè)量疤痕形成得分。結(jié)果示于表4。表4:傷口完全閉合所花費(fèi)的時(shí)間、上皮化和疤痕形成的期間對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照艾司洛爾傷口閉合(天)未閉合24.7+/-3.419.6+/畫2.2上皮化時(shí)間(天)15.7+/-1.811.8+/-2.19.8+/-0.8疤痕形成(得分)4.9+/-0.52.1+/-0.51.3+/-0.4使用微量吸管(Eppendorf)測(cè)量來(lái)自傷口的滲出物的量。結(jié)果示于表5.表5:滲出物pl第3天第7天第12天第19天對(duì)照1.1+/-0.31.8+/-0.42.1+/-0.82.6+/-0.7陽(yáng)性對(duì)照1.2+/-0.32.3+/-0.33.2+/-0.34.8+/畫0.2艾司洛爾1.2+/-0.22,7+/-0.53.5+/-0.64.9+/-0.2總計(jì)7.6+/-1.911.5+/-0.9712.3+/-1.1通過(guò)觀察折射率來(lái)測(cè)量傷口的透明度。結(jié)果示于表6。表6:膜透明度第3天對(duì)照1.8+/-0.2陽(yáng)性對(duì)照1.7+/-0.3艾司洛爾1.7+/-0.3第7天2.7+/-0.43.1+/-0.32.3+/-0.4第12天3.7+/畫0.33.8+/-0.42.6+/-0.6第19天3.8+/-0.64.1+/-0.53.3+/-0.4總計(jì)11.0+/-1.212.3+/-0.99.9+/-1.1傷口粘附性示于表7。牢(Velcro)指數(shù)計(jì)測(cè)量。表7:傷口粘附力第3天對(duì)照2.7+/-0.3陽(yáng)性對(duì)照2.6+/-0.4艾司洛爾2.6+/-0.4粘附性是將傷口兩端附著在一起的強(qiáng)度，通過(guò)維可第7天2.3+/-0.53.2+/-0.43.3+/-0.3第12天2.8+/-0.93.7+/-0.63.9+/-0.5第19天3.1+/-0.84.3+/-0.64.7+/誦0.5總計(jì)10.9+/-1.413.8+/-1.114.5+/-0.9通過(guò)使用微量吸管根據(jù)從傷口獲得的液體體積測(cè)量積液，示于表8t表8:積液對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照艾司洛爾第3天2.3+/-0.32.4+/-0.32.3+/-0.4第7天2.8+/-0.42.8+/-0.32.7+/-0.5第12天3.5+/-0.43.1+/-0.42.6+/-0.7第19天3.8+/畫0.52.7+/-0.62.5+/-0.5總計(jì)12.4+/-0.911.0+/-0.810.1+/畫1.2用Velcro指數(shù)計(jì)測(cè)量傷口消失的容易性并示于表9。表9:傷口消失的容易性第3天第7天第12天第19天總計(jì)對(duì)照2.7+/-0.22.9+/-0.13.1+/-0.53.6+/-0.512.3+/-0.5陽(yáng)性對(duì)照2.6+/-0.42.8+/-0.32.8+/-0.42.5+/-0.310.7+〉-1.1艾司洛爾2.6+/-0.22.8+/-0.32.7+/-0.52.5+/-0.410.6+/-1.4傷口彈性通過(guò)同一動(dòng)物的正常皮膚與傷口區(qū)域的皮膚相比觀察到的平和度而測(cè)得，并示于表IO。表10:彈性第3天對(duì)照2.1+/-0.5陽(yáng)性對(duì)照2.2+/-0.6艾司洛爾2.3+/-0.2第7天2.7+/畫0.42.4+/-0.72.4+/-0.5第12天2.3+/-0.83.7+/-1.13.5+/國(guó)0.6第19天1.9+/-0.94.0+/畫0.73.9+/-0.8總計(jì)7.0+/-0.912.3+/畫3.212.1+/-2.9實(shí)施例4一氧化氮的測(cè)量將新鮮組織(約0.2g)加入到1ml的冷的均質(zhì)緩沖液(20mmol/1的羥乙基哌。秦乙磺酸-KOH(HEPES-KOH),pH7.9;25%的甘油；420mmol/1的NaCI;1.5mmol/1的MgCl2;0.2mmol/1的EDTA;0.5mmol/1的二硫蘇糖醇；0.2mmol/1的苯曱基磺酰氟)。將緩沖的組織以最大速度均質(zhì)5秒鐘并在水水中冷卻30秒。將該過(guò)程重復(fù)五次以確保組織完全破壞。這些進(jìn)行渦旋攪拌并在水上培養(yǎng)30分鐘。均勻混合物在4°C以12,000xg離心5分鐘，并將上清液轉(zhuǎn)移到冰上的新試管中用于NO測(cè)量。亞硝酸鹽/硝酸鹽的測(cè)量使用迅速應(yīng)答化學(xué)熒光分析器來(lái)測(cè)量總的氣相NO(硝酸鹽/亞硝酸鹽)。NO氣體與臭氧反應(yīng)，產(chǎn)生光形式的能量，該光與NO的存在量成比例。使用光度計(jì)測(cè)量光的發(fā)生以確定NO濃度。將樣品管牢固地連接到零點(diǎn)氣體過(guò)濾器(ZeroGasFilter)(西弗斯儀器(SieversInstruments))上，并將室內(nèi)空氣通過(guò)該裝置5分鐘。使用4次重復(fù)才交正(分別為空白、1、10、50、100和200mmol/l;<1nmol/1的下限用于本儀器)對(duì)分析器應(yīng)答的線性進(jìn)行插值。向用氦氣洗吹的含有0.8%的氯化釩的鹽酸的容器中注入該樣品(10ml),以將氣態(tài)NO從溶解的NO和亞硝酸鹽中釋放出來(lái)。然后將樣品在反應(yīng)器中暴露于臭氧下以形成活化的二氧化氮(N02)，它可以使用紅敏光電倍增管進(jìn)行檢測(cè)，并使用積分描筆式記錄器(integratingpenrecorder)記錄輸出結(jié)果。對(duì)于各個(gè)沖羊品，將曲線下的面積轉(zhuǎn)化為NO濃度。表ll:NO增加第3天第7天第12天第19天總計(jì)%增加對(duì)照12561243174517816025陽(yáng)性對(duì)照1179231724311927785430%艾司洛爾1219265732312115922253%實(shí)施例5膠原蛋白的測(cè)量與其他蛋白質(zhì)相同地，19種已知膠原蛋白的合成發(fā)生在細(xì)胞內(nèi)。膠原蛋白分子的特征在于Gly-X-Y的重復(fù)序列，其中X通常為脯氨酸而Y通常為羥脯氨酸。羥脯氨酸是膠原蛋白降解的最終產(chǎn)物。由于此原因，組織羥脯氨酸水平是組織膠原蛋白產(chǎn)量的間接而客觀的變量。在許多試驗(yàn)研究中，羥脯氨酸被用于評(píng)價(jià)組織膠原蛋白產(chǎn)量。通過(guò)使用高效液相色譜法(HPLC)從大鼠組織中分離并定量羥脯氨酸水平來(lái)測(cè)量組織中的膠原蛋白水平。使用反向諾瓦帕克(Nova-Pak)C18柱和溶劑體系(140mM的乙酸鈉、0.05°/。的三乙胺(TEA)、6%的乙腈)使羥脯氨酸完全分離。標(biāo)準(zhǔn)回收范圍為89-103%,批內(nèi)差異為<8%。此外，利用卩H]羥脯氨酸的測(cè)量來(lái)檢測(cè)用卩H]脯氨酸標(biāo)記并在10mM未被標(biāo)記的脯氨酸存在下進(jìn)行"追蹤，，的大鼠體內(nèi)的膠原蛋白轉(zhuǎn)換的變化。表12:膠原蛋白產(chǎn)量<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>雖然參考以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)描述，應(yīng)該理解的是，在不背離本發(fā)明的主旨的前提下可以對(duì)本發(fā)明做出各種修改，并且這種修改將是本領(lǐng)域技術(shù)人員易于知道的。權(quán)利要求1.一種治療哺乳動(dòng)物中的糖尿病并發(fā)癥的方法，該方法包括將在治療上有效量的β-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽給藥于需要所述治療的患者。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述在治療上有效量的p-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽在其藥用可接受的載體、賦形劑或稀釋劑中被提供。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述糖尿病并發(fā)癥選自由糖尿病神經(jīng)病變、糖尿病腎病、糖尿病心肌病、糖尿病性^L網(wǎng)膜病變、糖尿病性白內(nèi)障、糖尿病性膀胱病、糖尿病性角膜病變、糖尿病皮膚病變、糖尿病微血管病變、心肌梗死、黃斑水肺、神經(jīng)傳導(dǎo)受損和糖尿病傷口所組成的組。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述P-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽以緩釋形式進(jìn)行給藥。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述哺乳動(dòng)物為靈長(zhǎng)類動(dòng)物、犬科動(dòng)物、貓科動(dòng)物、?？苿?dòng)物、綿羊、豬科動(dòng)物、-膝駝科動(dòng)物、山羊、嚙齒動(dòng)物或馬一牛動(dòng)物。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中，所述靈長(zhǎng)類動(dòng)物為人類。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，通過(guò)用在治療上有效量的(3-腎上腺素能阻滯劑進(jìn)行給藥來(lái)治療糖尿病并發(fā)癥，其中所述P-腎上腺素能阻滯劑選自由醋丁洛爾、阿普洛爾、氨》黃洛爾、阿羅洛爾、阿替洛爾、苯呋洛爾、倍他洛爾、貝凡洛爾、比索洛爾、波吲洛爾、溴節(jié)銨、布庫(kù)洛爾、布菲洛爾、丁呋洛爾、布尼洛爾、布引洛爾(buprandolol)、布拉洛爾、丁非洛爾、卡拉洛爾、卡替洛爾、卡維地洛、塞利洛爾、西他洛爾、西那洛爾、氯拉洛爾、地來(lái)洛爾、恩布洛爾(entbutolol)、依泮洛爾、艾司洛爾、呋洛爾(fUmolol)、茚諾洛爾、替莫洛爾(istalol)、拉貝洛爾、左倍他洛爾、左布諾洛爾、曱吲洛爾、美替洛爾、美替普萘洛爾(metipropranolol)、美托洛爾、莫普洛爾、納多洛爾、萘肟洛爾、奈比洛爾、尼普地洛、美替卜洛爾(optipranolol)、氧烯洛爾、噴布洛爾、培布洛爾、吲哚洛爾、普拉洛爾、萘心定、普萘洛爾、胡椒喘定、索他洛爾、磺芐心定、他林地洛(talindol)、特他洛爾、替索洛爾、^塞嗎洛爾、托利洛爾、抑肽酶、希苯洛爾及其藥物可接受鹽或溶劑化物組成的組。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，按每小時(shí)、每日l(shuí)到6次、每周或每月進(jìn)行給藥。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述p-腎上腺素能阻滯劑通過(guò)經(jīng)口、靜脈內(nèi)、腹腔內(nèi)、眼部、非消化道、外用、皮下、硬膜下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、鞘內(nèi)、腹腔內(nèi)、腦內(nèi)、動(dòng)^l永內(nèi)、病灶內(nèi)、局部或肺部途徑進(jìn)4亍給藥。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述p-腎上腺素能阻滯劑通過(guò)經(jīng)口途徑以約1mg至1000mg的劑量向哺乳動(dòng)物給藥。11.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中，所述p-腎上腺素能阻滯劑通過(guò)眼部途徑以約0.001%至10.0%的濃度向哺乳動(dòng)物給藥。12.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中，所述(3-腎上腺素能阻滯劑通過(guò)外用途徑以約0.001%至50.0%的濃度向哺乳動(dòng)物給藥。13.—種外用藥用組合物，其用于對(duì)需要治療的患者的糖尿病傷口愈合進(jìn)行治療，該組合物包括在治療上有效量的P-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽，以及藥用可接受外用載體、賦形劑或稀釋劑，其中，所述組合物的形式為乳膏、軟膏、外用藥簽、乳液、噴霧或洗劑。14.一種外用藥用組合物，其用于對(duì)需要治療的患者的糖尿病傷口愈合進(jìn)行治療，該組合物包括在治療上有效量的(3-腎上腺素能阻滯劑艾司洛爾、其前藥或其藥物可接受鹽，以及藥用可接受外用載體、賦形劑或稀釋劑，其中，所述組合物的形式為乳膏、凝膠、外用液、皮膚貼、軟膏、外用藥簽、乳液、噴霧或洗劑。15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中，所述用來(lái)治療諸如糖尿病傷口的糖尿病并發(fā)癥的艾司洛爾參與選自由以下機(jī)制所組成的組中的機(jī)制誘導(dǎo)一氧化氮產(chǎn)生；提高糖尿病傷口處膠原蛋白的水平；通過(guò)增強(qiáng)糖尿病傷口處的新生血管來(lái)提高血管灌注；通過(guò)增強(qiáng)糖尿病傷口的血管灌注來(lái)增加氧供給；對(duì)糖尿病患者體內(nèi)提高的醛糖還原酶活性進(jìn)行抑制；增強(qiáng)在糖尿病傷口中的生長(zhǎng)因子，諸如神經(jīng)生長(zhǎng)因子、上皮生長(zhǎng)因子、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、血小板衍生生長(zhǎng)因子，以及它們的組合。16.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中，以乳膏、軟膏、外用藥簽、乳液、噴霧或洗劑的形式外部施用所述p-腎上腺素能阻滯劑。17.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，以乳膏、凝膠、外用液、皮膚貼、軟膏、外用藥簽、乳液、噴霧或洗劑的形式外部施用所述艾司洛爾。18.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中，所述哺乳動(dòng)物為靈長(zhǎng)類動(dòng)物、犬科動(dòng)物、貓科動(dòng)物、?？苿?dòng)物、綿羊、豬科動(dòng)物、駱駝科動(dòng)物、山羊、嚙齒動(dòng)物或馬一牛動(dòng)物。19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中，所述靈長(zhǎng)類動(dòng)物為人類。20.—種治療哺乳動(dòng)物中的由醛糖還原酶介導(dǎo)的糖尿病并發(fā)癥的方法，該方法包括將在治療上有效量的具有醛糖還原酶活性的P-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽給藥于需要治療的患者。21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中，所述P-腎上腺素能阻滯劑為艾司洛爾、p塞嗎洛爾或普萘洛爾。22.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中，所述在治療上有效量的P-腎上腺素能阻滯劑、其前藥或其藥物可接受鹽在其藥用可接受載體、賦形劑或稀釋劑中被提供。23.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中，所述由趁糖還原酶介導(dǎo)的糖尿病并發(fā)癥選自由糖尿病神經(jīng)病變、糖尿病腎病、糖尿病心肌病、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、糖尿病性白內(nèi)障、糖尿病性膀胱病、糖尿病性角膜病變、糖尿病皮膚病變、糖尿病微血管病變、心肌梗死、黃斑水腫、神經(jīng)傳導(dǎo)受損和糖尿病傷口所組成的組。24.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中，所述P-腎上腺素能阻滯劑通過(guò)經(jīng)口、靜脈內(nèi)、腹腔內(nèi)、眼部的、非消化道、外用、皮下、硬膜下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、鞘內(nèi)、腹腔內(nèi)、腦內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、病灶內(nèi)、局部或肺部途徑進(jìn)行給藥。全文摘要公開了一種用β-阻滯劑進(jìn)行給藥來(lái)治療糖尿病并發(fā)癥的方法。糖尿病并發(fā)癥是由糖尿病引起的，并對(duì)它存在很少或不存在治療選擇。本發(fā)明描述了β-阻滯劑在糖尿病并發(fā)癥治療中的使用。本發(fā)明還描述了對(duì)作為糖尿病并發(fā)癥的主要誘發(fā)因素之一的醛糖還原酶的抑制作用。還提供了糖尿病傷口愈合的方法。公開了用來(lái)治療諸如糖尿病傷口的糖尿病并發(fā)癥的組合物。本發(fā)明包括施用β-阻滯劑外用制劑來(lái)改善糖尿病傷口愈合的過(guò)程，所述β-阻滯劑基本上不具有抗菌活性。本發(fā)明還涉及提高糖尿病個(gè)體在傷口上皮化組織愈合時(shí)膠原蛋白的累積速率。文檔編號(hào)A61K31/00GK101616662SQ200880003337公開日2009年12月30日申請(qǐng)日期2008年1月24日優(yōu)先權(quán)日2007年1月29日發(fā)明者蘇普里特·K.·德什潘德,蘇迪爾·A.·庫(kù)卡爾尼,雷納·R.·格拉普迪申請(qǐng)人:V生命科學(xué)技術(shù)有限公司