專利名稱：藥物轉(zhuǎn)運控制用經(jīng)肺給藥脂質(zhì)體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及 一 種藥物或基因的轉(zhuǎn)運控制性優(yōu)異、適用于經(jīng)肺給 藥的脂質(zhì)體。進(jìn)而，本發(fā)明涉及一種在該脂質(zhì)體中封入藥物或基因 而形成的脂質(zhì)體制劑。
背景技術(shù)：
脂質(zhì)體是具有脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)的封閉小嚢。由于脂質(zhì)體可以通過 雙分子膜將藥物或基因以與外界隔開的狀態(tài)封入，所以能夠保護(hù)被 封入的藥物或基因免于分解或代謝。另外，由于通過控制脂質(zhì)體膜 的組成可以使其附著于細(xì)胞膜或粘膜上，所以能夠使被封入的藥物 或基因向細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運。脂質(zhì)體因上述保護(hù)功能和轉(zhuǎn)運功能而作為藥 物或基因的搬運體(載體)備受關(guān)注。通常要求疾病治療中使用的藥物或基因到達(dá)靶作用部位，并在 該處發(fā)揮所希望的藥理作用。為了提高藥物及基因在靶作用部位的 轉(zhuǎn)運性，人們嘗試?yán)弥|(zhì)體。目前為止公開了一種方法，所述方 法為了給脂質(zhì)體賦予對靶作用部位的選擇輸送性能，控制構(gòu)成脂質(zhì) 的種類或組成比、表面電荷等。但是，現(xiàn)狀是上述現(xiàn)有方法無法充 分地控制藥物的轉(zhuǎn)運性。特別是適用于肺組織的藥物或基因根據(jù)其 作用機制的方式有時希望滯留在肺組織的表面(例如支氣管肺泡的 表面等)、有時希望將其導(dǎo)入肺組織內(nèi)部，要求高度控制藥物或基 因的生物體內(nèi)行為。但是，尚未確立控制肺組織內(nèi)藥物或基因的生 物體內(nèi)4亍為的才支術(shù)。另一方面，目前為止報道了將脂質(zhì)體的表面用聚合物等高分子進(jìn)行修飾的技術(shù)(例如參見非專利文獻(xiàn)1及2)。但是，至今仍不十 分清楚通過脂質(zhì)體的表面修飾控制肺組織內(nèi)的生物體內(nèi)行為的技術(shù)。非專利文獻(xiàn)1: Takeuchi H et al.,"Effectiveness of submicron-sized, chitosan-coated liposomes in oral administration of peptide drugs.", InU Pharm., 2005 Oct 13;303(1 - 2):160 - 170.非專利文獻(xiàn)2: Takeuchi H et al./'Evaluation of circulation profiles of liposomes coated with hydrophilic polymers having different molecular weights in rats."， J Control Release., 2001 Jul 10;75(1 - 2):83 - 91.發(fā)明內(nèi)容因此，本發(fā)明的目的在于解決上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題。具 體而言，本發(fā)明的目的在于提供一種藥物或基因的轉(zhuǎn)運控制性優(yōu)異、 適用于經(jīng)肺給藥的脂質(zhì)體、及在該脂質(zhì)體中封入藥物或基因的經(jīng)肺 給藥用脂質(zhì)體制劑。進(jìn)而，本發(fā)明提供一種使用上述脂質(zhì)體制劑治 療肺組織疾病的方法。本發(fā)明人等為了解決上述課題，進(jìn)行了深入地研究，發(fā)現(xiàn)通過 用末端疏水化聚乙烯醇及/或脫乙酰殼多糖修飾脂質(zhì)體的表面，可以 適當(dāng)?shù)卣{(diào)節(jié)被封入脂質(zhì)體內(nèi)的藥物或基因在肺組織表面的滯留性、 或向肺組織或肺表面細(xì)胞內(nèi)的遷移性，從而控制其生物體內(nèi)4亍為。 本發(fā)明是基于上述發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步反復(fù)改良而完成的。即，本發(fā)明提供下述方案的發(fā)明項1、 一種經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體，其特征在于，脂質(zhì)體的表面被選 自末端疏水化聚乙烯醇及脫乙酰殼多糖中的至少 一 種聚合物修飾。項2、如項1所述的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體，其中，含有磷脂作為脂 質(zhì)體膜的構(gòu)成脂質(zhì)。項3、如項1所述的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體，其中，含有磷脂酰膽堿、 膽甾醇及磷酸二烷基酯作為脂質(zhì)體膜的構(gòu)成脂質(zhì)。項4、如項1所述的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體，其中，所述脂質(zhì)體是被 末端疏水化聚乙烯醇進(jìn)行表面修飾而形成的，是以肺組織表面或肺組織表面細(xì)胞為耙作用部位的脂質(zhì)體。
項5、如項1所述的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體，其中，所述脂質(zhì)體是被 末端疏水化聚乙烯醇進(jìn)行表面修飾而形成的，是緩釋性經(jīng)肺給藥用 脂質(zhì)體。
項6、如項1所述的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體，其中，所述脂質(zhì)體是被 脫乙酰殼多糖進(jìn)行表面修飾而形成的，是以肺組織表面和內(nèi)部作為 耙作用部位的脂質(zhì)體。
項7、如項1所述的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體，其中，所述脂質(zhì)體是被 脫乙酰殼多糖進(jìn)行表面修飾而形成的，是速效性經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體。
項8、如項1所述的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體，其中，脂質(zhì)體的表面被 具有疏水性基團(tuán)的末端疏水化聚乙烯醇修飾，所述疏水性基團(tuán)由碳 原子教1 30的烷基、碳原子數(shù)1 ~30的烷氧基、碳原子數(shù)1~30 的羧基烷基、或碳原子數(shù)1 ~ 30的硫代烷基形成。
項9、 一種經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體制劑，是在項1所述的經(jīng)肺給藥用 脂質(zhì)體中封入藥物或基因而形成的。
項10、如項9所述的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體制劑，其中，所述脂質(zhì) 體是被末端疏水化聚乙烯醇進(jìn)行表面修飾而形成的，所述制劑是以 肺組織表面或肺組織表面細(xì)胞作為靶作用部位的制劑。
項11、如項9所述的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體制劑，其中，所述脂質(zhì) 體是被脫乙酰殼多糖對脂質(zhì)體表面修飾而形成的，所述制劑是以肺 組織表面和內(nèi)部作為靶作用部位的制劑。
項12、 一種經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體制劑的制備方法，所述方法包括 以下步驟(i)及(ii):
(i) 混合藥物或基因與脂質(zhì)體膜的構(gòu)成成分，得到藥物或基因 被封入的脂質(zhì)體的步驟；及
(ii) 混合所述步驟(i)中得到的藥物或基因被封入的脂質(zhì)體與 選自末端疏水化聚乙烯醇及脫乙酰殼多糖中的至少 一 種聚合物，將 所述脂質(zhì)體的表面用所述聚合物進(jìn)行修飾的步驟。
項13、選自末端疏水化聚乙烯醇及脫乙酰殼多糖中的至少一種聚合物在經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體的制造中的應(yīng)用。
項14、末端疏水化聚乙烯醇在緩釋性經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體的制造 中的應(yīng)用。
項15、脫乙酰殼多糖在速效性經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體的制造中的應(yīng)用。
項16、 一種治療肺組織疾病的方法，所述方法包括將項9所述 的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體制劑的治療有效量給予患有肺組織疾病的患者 的肺的步驟。
由于本發(fā)明的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體可以通過調(diào)節(jié)末端疏水化聚乙 烯醇及/或脫乙酰殼多糖的量來控制被封入脂質(zhì)體內(nèi)的藥物或基因在 肺組織表面的滯留性及向肺組織內(nèi)的遷移性，所以可以對適用于肺 組織的藥物或基因賦予所希望的生物體內(nèi)行為。因此，通過本發(fā)明 的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體，可以在肺組織的靶作用部位有效地發(fā)揮由被 封入的藥物或基因產(chǎn)生的藥理作用。
另外，由于本發(fā)明的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體的表面修飾中使用的末 端疏水化聚乙烯醇及/或脫乙酰殼多糖具有生物適應(yīng)性或生物體內(nèi)分 解特性，所以認(rèn)為本發(fā)明的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體安全性比較高。另外， 根據(jù)本發(fā)明的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體，通過對脂質(zhì)體進(jìn)行表面修飾的末 端疏水化聚乙烯醇及/或脫乙酰殼多糖，可以保護(hù)脂質(zhì)體、抑制被封 入的藥物或基因的分解。因此，本發(fā)明的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體還有被 封入的藥物或基因的穩(wěn)定性高的優(yōu)點。


為表示在試驗例1中實施例1-2的聚合物修飾脂質(zhì)體及 比較例2的未修飾脂質(zhì)體在大鼠肺內(nèi)的行為的評價結(jié)果的圖。
具體實施例方式
以下，詳細(xì)地i兌明本發(fā)明。
本發(fā)明的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體只要是具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu)的封閉小嚢即可，對脂質(zhì)雙層數(shù)沒有特別限定，例如可以為小的單層膜脂
質(zhì)體(small unilamellar, vesicles: SUV )、大的單層膜脂質(zhì)體(large unilamellar vesicles: LUV)和多層月旨質(zhì)體(multilamellar vesicles: MLV)中的任一種。
在本發(fā)明的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體中，對構(gòu)成脂質(zhì)雙層的成分沒有 特別限定，只要是作為脂質(zhì)體膜的構(gòu)成成分通常使用的成分即可。 具體而言，作為脂質(zhì)體膜的構(gòu)成成分，可以舉出脂質(zhì)、膜穩(wěn)定劑、 帶電物質(zhì)、抗氧化劑、膜蛋白質(zhì)等。
作為脂質(zhì)體膜的構(gòu)成成分的脂質(zhì)是脂質(zhì)體膜的必須成分，作為 其具體例，可以舉出磷脂、糖脂質(zhì)、甾醇、飽和或不飽和脂肪酸等。
作為磷脂的具體例，可以舉出二月桂酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻
酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬酯酰磷脂酰膽堿、二油 酰磷脂酰膽堿、二亞油酰磷脂酰膽堿、肉豆蔻酰棕櫚酰磷脂酰膽堿、 肉豆蔻酰硬酯酰磷脂酰膽堿、棕櫚酰硬酯酰磷脂酰膽堿等磷脂酰膽 堿；二月桂酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂 酰甘油、二硬酯酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、二亞油酰磷脂 酰甘油、肉豆蔻酰棕櫚酰磷脂酰甘油、肉豆蔻酰硬酯酰磷脂酰甘油、 棕櫚酰硬酯酰磷脂酰甘油等磷脂酰甘油；二月桂酰磷脂酰乙醇胺、 二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二硬酯酰磷脂 酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺、二亞油酰磷脂酰乙醇胺、肉豆蔻 酰椋櫚酰磷脂酰乙醇胺、肉豆蔻酰硬酯酰磷脂酰乙醇胺、棕櫚酰硬 酯酰磷脂酰乙醇胺等磷脂酰乙醇胺；磷脂酰絲氨酸；磷脂酸；磷脂 酰肌醇；鞘磷脂；心磷脂；蛋黃卵磷脂；大豆卵磷脂；及它們的氫 化物等。
作為糖脂質(zhì)的具體例，可以舉出二糖基二甘油酯 (diglycosyldiglyceride ) 、 二半乳糖基二甘油酯、半乳糖基二甘油酯、 糖基甘油酯等甘油糖脂質(zhì)；半乳糖腦苷脂、神經(jīng)節(jié)苷脂等鞘糖脂； 硬脂基葡糖苷(stearylglucoside)、酯化硬脂基葡糖普等。
作為甾醇的具體例，可以舉出膽甾醇、膽甾醇半琥珀酸酯、羊
8毛甾醇、二氫羊毛甾醇、鏈甾醇、二氫膽甾醇、植物甾醇、豆甾醇、 酵母甾醇、麥角甾醇、谷甾醇、菜油甾醇、菜子甾醇等。特別是該 甾醇有使脂質(zhì)體膜穩(wěn)定、調(diào)節(jié)脂質(zhì)體膜的流動性的作用，故優(yōu)選含 有該甾醇作為脂質(zhì)體膜的構(gòu)成脂質(zhì)。
作為飽和或不飽和脂肪酸的具體例，可以舉出癸酸、肉豆蔻酸、
棕櫚酸、硬酯酸、花生四烯酸、油酸、山崳酸等碳原子數(shù)為10~22 的飽和或不飽和脂肪酸。
上述脂質(zhì)體膜的構(gòu)成脂質(zhì)可以單獨使用一種，也可以組合兩種 以上使用。在上述脂質(zhì)體膜的構(gòu)成脂質(zhì)中，優(yōu)選舉出磷脂與甾醇的 組合，更優(yōu)選舉出磷脂酰膽堿與膽甾醇的組合。組合磷脂與甾醇的 情況下，對二者的比率沒有特別限定，例如可以舉出下述比率，即 相對于100摩爾磷脂，甾醇為1 ~ 100摩爾、優(yōu)選為5~50摩爾、更 優(yōu)選為10~30摩爾。
作為上述脂質(zhì)體膜的構(gòu)成脂質(zhì)的含量，沒有特別限定，例如可 以舉出下述含量，即相對于脂質(zhì)體膜的構(gòu)成成分的總量，以摩爾比 計為1 ~ 100%、優(yōu)選為60~95%、更優(yōu)選為70~90%。
另外，帶電物質(zhì)是為了調(diào)節(jié)脂質(zhì)體膜的電荷而含有的物質(zhì)，根 據(jù)需要作為脂質(zhì)體膜的構(gòu)成成分進(jìn)行使用。需要說明的是，此處所 謂帶電物質(zhì)是指除上述磷脂、糖脂質(zhì)及甾醇之外的具有電荷的膜構(gòu) 成成分。即，可以通過采用膽甾醇半琥珀酸酯、磷脂酰絲氨酸、磷 脂酰肌醇、磷脂酸等離子性磷脂作為成為脂質(zhì)體膜的構(gòu)成成分的脂 質(zhì)來調(diào)節(jié)脂質(zhì)體膜的電荷，也可以通過含有帶電物質(zhì)代替該離子性 磷脂或并用帶電物質(zhì)和該離子性磷脂來進(jìn)行調(diào)節(jié)。作為賦予正電荷 的帶電物質(zhì)，具體而言可以舉出月桂胺、肉豆蔻胺、棕櫚胺、硬酯 胺、油胺等脂肪族伯胺等。另外，作為賦予負(fù)電荷的帶電物質(zhì)，可 以舉出磷酸二鯨蠟酯等磷酸二烷基(C14~ 18)酯。在上述帶電物質(zhì) 中，磷酸二烷基酯、特別是磷酸二鯨蠟酯可以形成負(fù)電荷脂質(zhì)體， 由此可以有效地實施脂質(zhì)體的表面修飾，因此適用于本發(fā)明的經(jīng)肺 給藥用脂質(zhì)體。
9對脂質(zhì)體膜中含有的上述帶電物質(zhì)的比例沒有特別限定，例如 可以舉出下述比例，即相對于脂質(zhì)體膜的構(gòu)成成分的總量，以摩爾
比計為0~50%、優(yōu)選為5~40%、更優(yōu)選為10~25%。
另外，為了防止脂質(zhì)體膜的氡化，可以含有抗氧化劑，根據(jù)需 要作為脂質(zhì)體膜的構(gòu)成成分進(jìn)行使用。作為脂質(zhì)體膜的構(gòu)成成分使 用的抗氧化劑，例如可以舉出2, 6-二^又丁基對曱酚、沒食子酸丙 酯、生育酚、生育酚乙酸酯、生育酚濃縮混合物(tocopherol-enriched mixture)、維生素E、抗壞血酸、L-抗壞血酸硬脂酸酯、抗壞血酸 棕櫚酸酯、亞石克酸氫鈉、亞錄u酸鈉、乙二胺四乙酸鈉、異抗壞血酸、 檸檬酸等。
對脂質(zhì)體膜中含有的上述抗氧化劑的比例沒有特別限定，例如 可以舉出下述比例，即相對于脂質(zhì)體膜的構(gòu)成成分的總量，以摩爾 比計為0~40%、優(yōu)選為5~20%、更優(yōu)選為2.5~10%。
另外，為了給脂質(zhì)體膜附加功能或穩(wěn)定脂質(zhì)體膜的結(jié)構(gòu)，可以 含有膜蛋白質(zhì)，根據(jù)需要作為脂質(zhì)體膜的構(gòu)成成分進(jìn)行使用。作為 膜蛋白質(zhì)，例如可以舉出膜表面蛋白、膜整合蛋白、白蛋白、重組 白蛋白等。
對脂質(zhì)體膜中含有的上述膜蛋白質(zhì)的比例沒有特別限定，例如 可以舉出下述比例，即相對于脂質(zhì)體膜的構(gòu)成成分的總量，以摩爾 比計為0~20%、優(yōu)選為2.5~10%、更優(yōu)選為5~8%。
從有效且牢固地實施脫乙酰殼多糖修飾的觀點出發(fā)，優(yōu)選在脂 質(zhì)體膜的構(gòu)成成分中含有具有負(fù)電荷的成分。優(yōu)選舉出作為膜的構(gòu) 成成分含有磷脂、甾醇及賦予負(fù)電荷的帶電物質(zhì)的脂質(zhì)體，更優(yōu)選 含有磷脂酰膽堿、膽甾醇及磷酸二烷基酯的脂質(zhì)體。通過含有上述 膜的構(gòu)成成分的脂質(zhì)體可以有效且牢固地進(jìn)行脂質(zhì)體的表面修飾， 并且可以更有效地控制在肺組織表面的滯留性及向肺組織內(nèi)的遷移 性。
另外，本發(fā)明的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體中使用的脂質(zhì)體本身的粒徑 (即未經(jīng)表面修飾狀態(tài)下的脂質(zhì)體的粒徑)可以根據(jù)使用的脂質(zhì)的種類、表面修飾中使用的聚合物的種類等適當(dāng)?shù)卦O(shè)定，例如可以舉
出20~ 1000nm、優(yōu)選為50~ 500nm、更優(yōu)選為100 200nm左右。
脂質(zhì)體的粒徑由動態(tài)光散射法測定得到。
脂質(zhì)體可以采用例如薄膜水合法、超聲波處理法、乙醇注入法、醚注入法、逆向蒸發(fā)法、表面活性劑法、冷凍.融化法、薄膜水合-超聲波法等公知的方法進(jìn)行制備。另外，脂質(zhì)體的粒徑可以通過擠出法、弗氏壓碎器(French press )法、均化法等公知的方法來調(diào)節(jié)。
本發(fā)明的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體的脂質(zhì)體表面被選自末端疏水化聚乙烯醇及脫乙酰殼多糖中的至少一種聚合物(以下，有時稱為表面修飾聚合物)修飾。在本發(fā)明的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體中，上述表面修飾聚合物通過疏水鍵、氫鍵或靜電鍵結(jié)合在脂質(zhì)體表面，由此脂質(zhì)體的表面被上述聚合物修飾。
此處，末端疏水化聚乙烯醇是指疏水性基團(tuán)鍵合在聚乙烯醇的末端而形成的聚合物。作為末端疏水化聚乙烯醇，具體而言可以舉出選自烷基、烷氧基、羧基烷基及硫代烷基的疏水性基團(tuán)與聚乙烯醇的末端鍵合形成的聚合物。其中，優(yōu)選疏水性基團(tuán)為硫代烷基。此處，作為構(gòu)成疏水性基團(tuán)的烷基、烷氧基、羧基烷基及硫代烷基，使用碳原子數(shù)為1-30左右、優(yōu)選為5 25左右、更優(yōu)選為10~20左右的基團(tuán)。另外，構(gòu)成疏水性基團(tuán)的烷基、烷氧基、羧基烷基及硫代烷基可以為直鏈狀或支鏈狀中的任一種，優(yōu)選直鏈狀。作為本發(fā)明中使用的末端疏水化聚乙烯醇的疏水基團(tuán)，優(yōu)選舉出碳原子數(shù)為1~30的硫代烷基、更優(yōu)選舉出碳原子數(shù)為5~25的直鏈硫代烷基、特別優(yōu)選舉出碳原子數(shù)為10~20的直鏈硫代烷基。本發(fā)明中使用的末端疏水化聚乙烯醇只要在聚乙烯醇的末端碳原子上鍵合有疏水基團(tuán)即可，例如疏水基團(tuán)為硫代烷基時，只要該硫代烷基的硫原子與聚乙烯醇的末端碳原子共價鍵合即可。
另外，作為末端疏水化聚乙烯醇的聚乙烯醇部分的皂化度，例如可以舉出70 - 95摩爾％、優(yōu)選為80~95摩爾％、更優(yōu)選為82 ~93摩爾％。進(jìn)而，作為末端疏水化聚乙烯醇的聚乙烯醇部分的聚合
ii度，可以舉出100 ~ 1000、優(yōu)選為200~ 800、更優(yōu)選為300 ~ 600。
在本發(fā)明中，末端疏水化聚乙烯醇可以單獨使用一種結(jié)構(gòu)，另外也可以組合兩種以上進(jìn)行使用。
末端疏水化聚乙烯醇是公知的化合物，可以購買市售品或通過公知的制備方法而得到。
另外，脫乙酰殼多糖是氨基葡糖殘基通過pi -4鍵結(jié)合的多糖。作為脂質(zhì)體的表面修飾中使用的脫乙酰殼多糖的聚合度，可以舉出2~ 1000、優(yōu)選為50~ 900、更優(yōu)選為100~ 800(以分子量計約2萬~15萬)。另外，對該脫乙酰殼多糖的脫乙?；纫矝]有特別限定，例如可以舉出60%以上、 <尤選為70~100%、更優(yōu)選為80~100%。
在脂質(zhì)體的表面存在越多的末端疏水化聚乙烯醇，可以使脂質(zhì)體在肺組織表面(例如支氣管肺泡表面)滯留越長時間，另一方面，在脂質(zhì)體的表面存在越多的脫乙酰殼多糖，可以使脂質(zhì)體越快地遷移到肺組織內(nèi)。即，在脂質(zhì)體的表面末端疏水化聚乙烯醇的量越多，可以^吏封入脂質(zhì)體的物質(zhì)越有效率地作用于肺組織表面或表面細(xì)胞。另外，在脂質(zhì)體的表面脫乙酰殼多糖的量越多，越可以提高封入脂質(zhì)體的物質(zhì)向肺組織內(nèi)的遷移性。因此，被末端疏水化聚乙烯醇表面修飾而形成的脂質(zhì)體作為緩釋性經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體、或以肺組織表面或肺組織表面細(xì)胞為靶的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體是有用的。另外，被脫乙酰殼多糖表面修飾而形成的脂質(zhì)體作為速效性經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體、或以肺組織表面和內(nèi)部為靶的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體、特別是以肺組織內(nèi)部為靶的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體是有用的。
也可以考慮上述向肺組織內(nèi)的遷移性和在肺組織表面的滯留性，基于目標(biāo)肺內(nèi)行為，適當(dāng)設(shè)定本發(fā)明的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體中的上述表面修飾聚合物的種類。本發(fā)明可以僅被末端疏水化聚乙烯醇或脫乙酰殼多糖中的任一聚合物進(jìn)行表面修飾，另外也可以組合雙方聚合物進(jìn)行表面修飾。
也可以考慮向上述向肺組織內(nèi)的遷移性和在肺組織表面的滯留性，基于目標(biāo)生物體內(nèi)行為，適當(dāng)設(shè)定本發(fā)明的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體中的上述表面修飾聚合物的量。例如可以以下述比率使用，即相對
于100重量份脂質(zhì)體膜的構(gòu)成成分的總量，表面修飾聚合物為1~300重量份、優(yōu)選為5 250重量份、更優(yōu)選為10~ 200重量份。
通過在蒸餾水或緩沖液中充分混合表面修飾聚合物與脂質(zhì)體，用表面修飾聚合物對脂質(zhì)體進(jìn)行表面修飾。具體而言，通過等量混合含有0.1 ~ 10重量°/。左右表面修飾聚合物的水溶液與含有1~10重量％左右脂質(zhì)體的水溶液，于4~ 10。C下攪拌0.5~ 1小時，生成被表面修飾聚合物表面修飾的脂質(zhì)體。另外，可以使被表面修飾聚合物表面修飾的脂質(zhì)體在固液分離后再次分散于蒸餾水或緩沖劑中。
本發(fā)明的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體封入要求在肺組織內(nèi)發(fā)揮藥理作用的藥物、或用于肺組織中的基因治療的基因，作為用于經(jīng)肺給藥的載體進(jìn)行使用。需要說明的是，在本發(fā)明中，基因包括siRNA、mRNA、rRNA、 miRNA(微RNA)、核酶、反義寡核苷酸、誘斜寡核苷酸(decoyoligonucleotides )、質(zhì)粒DNA、肽核酸、三鏈形成性寡核苷酸(TriplexForming Oligonucleotide, TFO )、適體、離沖斤的DNA (isolated DNA )等核酸。被封入脂質(zhì)體內(nèi)的藥物或基因的量基于藥物或基因的種類和給藥量等適當(dāng)設(shè)定。
另外，在被表面修飾聚合物修飾的脂質(zhì)體內(nèi)封入藥物或基因的方法也可以采用公知的、本領(lǐng)域通常使用的方法。具體而言，通過使用含有藥物或基因的溶液與脂質(zhì)體膜的構(gòu)成成分，形成脂質(zhì)體，將藥物或基因封入脂質(zhì)體內(nèi)。更具體而言，在本發(fā)明的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體中封入了藥物或基因的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體制劑可以按以下步驟(i)及(ii)進(jìn)行制備
(i) 混合藥物或基因與脂質(zhì)體膜的構(gòu)成成分，得到藥物或基因被封入的脂質(zhì)體的步驟；及
(ii) 混合如此得到的藥物或基因被封入的脂質(zhì)體與表面修飾聚合物，將該脂質(zhì)體的表面用表面修飾聚合物進(jìn)行修飾的步驟。
進(jìn)而，藥物或基因被封入本發(fā)明的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體中的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體制劑也可以通過混合藥物或基因、脂質(zhì)體膜的構(gòu)成成 分及表面修飾聚合物進(jìn)行制備。
藥物或基因被封入本發(fā)明的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體中的經(jīng)肺給藥用 脂質(zhì)體制劑用經(jīng)支氣管給藥、滴鼻給藥等給藥方法給予肺內(nèi)進(jìn)行使 用。具體而言，通過將含有對肺組織疾病的治療有效的藥物或基因 的該脂質(zhì)體制劑的治療有效量給予患有肺組織疾病的患者的肺，能 夠治療該肺組織疾病。
實施例
以下，基于實施例等詳細(xì)地說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不限定于此。
實施例1末端疏水化聚乙烯醇修飾脂質(zhì)體的制備
通過薄膜水合-超聲波法制備脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體的脂質(zhì)組成
為二硬酯酰磷脂酰膽堿膽甾醇磷酸二鯨蠟酯=8: 1: 2(摩爾比)， 且含有9-蒽曱酸膽甾醇酯(CA)作為熒光標(biāo)記物質(zhì)。具體而言， 使二硬酯酰磷脂酰膽堿(103.2 mg)、膽甾醇(6.3 mg)、磷酸二鯨 蠟酯(17.9 mg)及CA ( 1 mg)溶解于氯仿中，在40。C的條件下， 用蒸發(fā)儀蒸發(fā)2小時，得到脂質(zhì)薄膜。之后，使之減壓干燥一夜后， 通過用6.4mL的100mM的乙酸緩沖液將其水合來制備脂質(zhì)體。
對如此得到的脂質(zhì)體用末端疏水化聚乙烯醇(皂化度88%、 聚合度480、疏水性基團(tuán)C16H33S -)進(jìn)行表面修飾。具體而言， 通過等量混合以20g/L含有末端疏水化聚乙烯醇的100mM的乙酸緩 沖液與以20.1g/L含有上述所得脂質(zhì)體的lOOmM的乙酸緩沖液，于 l(TC培養(yǎng)1小時來制備末端疏水化聚乙烯醇修飾脂質(zhì)體。
實施例2脫乙酰殼多糖修飾脂質(zhì)體的制備
使用脫乙酰殼多糖(分子量15萬、脫乙?；?5%)代替末 端疏水化聚乙烯醇，用與上述實施例1同樣的方法進(jìn)行脂質(zhì)體的形 成及脂質(zhì)體的表面修飾，制備脫乙酰殼多糖修飾脂質(zhì)體。但是，因 為確認(rèn)使溶解了脫乙酰殼多糖的緩沖液與脂質(zhì)體懸浮液等量混合時粒徑增大，因此艱合后實施超聲波處理。 試驗例1大鼠中的肺內(nèi)行為評價
對Wistar系雄性大鼠(7周齡)經(jīng)支氣管給予(15.63 pg CA/大 鼠)實施例1或2的聚合物修飾脂質(zhì)體。用熒光光度計(HITACHI F3010)測定給予5小時后在肺組織內(nèi)、支氣管肺泡清洗后的回收液 中的細(xì)胞(BALF )、及支氣管肺泡清洗后的回收液中的細(xì)胞(BALC ) 中的CA濃度，求得相對于給藥量的殘留率(Dose %)。另外，作 為對照，使用聚合物未修飾脂質(zhì)體(膜組成、CA含量與實施例1相 同)代替聚合物修飾脂質(zhì)體，與上述同樣地進(jìn)行試驗(比較例1)。 結(jié)果示于圖1。
圖1表明實施例1的聚合物修飾脂質(zhì)體與比較例1相比，在支 氣管肺泡清洗液中才全測出較多來自CA的焚光。即，確定由于實施 例1的聚合物修飾脂質(zhì)體可以在肺組織表面長時間滯留，所以在肺 組織表面或表面細(xì)胞中發(fā)揮藥理作用的情況下有用。
另一方面，實施例2的聚合物修飾脂質(zhì)體與比較例1相比，觀 察到較多肺組織的來自CA的熒光，表明其大量遷移到肺組織內(nèi)。 即，表明由于實施例2的聚合物修飾脂質(zhì)體可以在短時間內(nèi)有效率 地向肺組織內(nèi)遷移，所以例如可以將難以向肺組織內(nèi)遷移的藥物等 有效率地轉(zhuǎn)運到肺組織內(nèi)。
1權(quán)利要求
1、一種經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體，其特征在于，脂質(zhì)體的表面被選自末端疏水化聚乙烯醇及脫乙酰殼多糖中的至少一種聚合物修飾。
2、 如權(quán)利要求1所述的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體，其中，含有磷脂作 為脂質(zhì)體膜的構(gòu)成脂質(zhì)。
3、 如權(quán)利要求1所述的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體，其中，含有磷脂酰 膽堿、膽甾醇及磷酸二烷基酯作為脂質(zhì)體膜的構(gòu)成脂質(zhì)。
4、 如權(quán)利要求1所述的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體，其中，所述脂質(zhì)體 是被末端疏水化聚乙烯醇進(jìn)行表面修飾而形成的，是以肺組織表面 或肺組織表面細(xì)胞為靶作用部位的脂質(zhì)體。
5、 如權(quán)利要求1所述的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體，其中，所述脂質(zhì)體 是被末端疏水化聚乙烯醇進(jìn)行表面修飾而形成的，是緩釋性經(jīng)肺給 藥用脂質(zhì)體。
6、 如權(quán)利要求1所述的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體，其中，所述脂質(zhì)體 是被脫乙酰殼多糖進(jìn)行表面修飾而形成的，是以肺組織表面和內(nèi)部 作為靶作用部位的脂質(zhì)體。
7、 如權(quán)利要求1所述的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體，其中，所述脂質(zhì)體 是被脫乙酰殼多糖進(jìn)行表面修飾而形成的，是速效性經(jīng)肺給藥用脂 質(zhì)體。
8、 如權(quán)利要求1所述的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體，其中，脂質(zhì)體的表 面被具有疏水性基團(tuán)的末端疏水化聚乙烯醇修飾，所述疏水性基團(tuán) 由碳原子數(shù)1 ~ 30的烷基、碳原子數(shù)1 ~ 30的烷氧基、碳原子數(shù)1 ~ 30的羧基烷基、或碳原子數(shù)1 ~ 30的硫代烷基形成。
9、 一種經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體制劑，是在權(quán)利要求1所述的經(jīng)肺給 藥用脂質(zhì)體中封入藥物或基因而形成的。
10、 如權(quán)利要求9所述的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體制劑，其中，所述 脂質(zhì)體是被末端疏水化聚乙烯醇進(jìn)行表面修飾而形成的，所述制劑 是以肺組織表面或肺組織表面細(xì)胞作為耙作用部位的制劑。
11、 如權(quán)利要求9所述的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體制劑，其中，所述 脂質(zhì)體是被脫乙酰殼多糖對脂質(zhì)體表面修飾而形成的，所述制劑是 以肺組織表面和內(nèi)部作為靶作用部位的制劑。
12、 一種經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體制劑的制備方法，所述方法包括以 下步驟(i)及(ii):(i) 混合藥物或基因與脂質(zhì)體膜的構(gòu)成成分，得到藥物或基因 被封入的脂質(zhì)體的步驟；及(ii) 混合所述步驟(i)中得到的藥物或基因被封入的脂質(zhì)體與 選自末端疏水化聚乙烯醇及脫乙酰殼多糖中的至少一種聚合物，將 所述脂質(zhì)體的表面用所述聚合物進(jìn)行修飾的步驟。
13、 選自末端疏水化聚乙烯醇及脫乙酰殼多糖中的至少一種聚 合物在經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體的制造中的應(yīng)用。
14、 末端疏水化聚乙烯醇在緩釋性經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體的制造中 的應(yīng)用。
15、 脫乙酰殼多糖在速效性經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體的制造中的應(yīng)用。
16、 一種治療肺組織疾病的方法，所述方法包括將權(quán)利要求9 所述的經(jīng)肺給藥用脂質(zhì)體制劑的治療有效量給予患有肺組織疾病的 患者的肺的步驟。
全文摘要
本發(fā)明的目的在于提供一種藥物或基因的肺內(nèi)轉(zhuǎn)運控制性優(yōu)異、適用于經(jīng)肺給藥的脂質(zhì)體。通過用末端疏水化聚乙烯醇及/或脫乙酰殼多糖修飾脂質(zhì)體的表面，能適當(dāng)調(diào)節(jié)被封入脂質(zhì)體內(nèi)的藥物或基因在肺組織表面的滯留性和向肺組織內(nèi)的遷移性，可以控制其生物體內(nèi)行為。
文檔編號A61K47/32GK101646462SQ200880010670
公開日2010年2月10日 申請日期2008年3月28日 優(yōu)先權(quán)日2007年3月30日
發(fā)明者中野浩士, 豐福秀一, 竹內(nèi)洋文 申請人:大塚制藥株式會社;竹內(nèi)洋文