一種高生物利用度的姜黃素納米脂質(zhì)載體的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域和生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高生物利用度的姜 黃素納米脂質(zhì)載體。
【背景技術(shù)】
[0002]姜黃素(Curcumin, Cur)為中藥姜黃的主要成分，現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)表明姜黃素除了具 有抗炎、抗癌、抗氧化作用外，還具有保護(hù)腎臟、抑制肺纖維化、抑制肝纖維化等作用，美國 國立腫瘤研究所已將其列為第三代癌化學(xué)預(yù)防藥，并于2000年列入美國藥典。姜黃素雖然 具有廣泛的藥理活性，但它在水中溶解度差，藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，其口服給藥生物利用度低。 提高姜黃素的口服生物利用度是提高姜黃素臨床療效的關(guān)鍵。因此，尋求一種能夠有效提 高姜黃素溶解度、促進(jìn)姜黃素口服吸收的新劑型是人們長期以來一直渴望解決的問題。
[0003] 目前，為提高姜黃素的口服生物利用度，國內(nèi)外已有姜黃素固體分散體、姜黃素脂 質(zhì)體、姜黃素乳劑、姜黃素自乳化給藥系統(tǒng)和納米粒等的研究報(bào)道。這些新技術(shù)的應(yīng)用，均 在一定程度上較混懸液提高了生物利用度。公告號為CN 102008439B，名稱為《一種姜黃素 包覆脂質(zhì)體制劑及其制備方法》的中國專利文獻(xiàn)授權(quán)了一種姜黃素包覆脂質(zhì)體制劑及其制 備方法。其利用帶正電荷的三甲基殼聚糖作為吸收促進(jìn)劑促進(jìn)姜黃素的口服吸收，但帶正 電荷的材料均具有一定的細(xì)胞毒性，服用時(shí)易帶來潛在的胃腸道安全性問題。按照50mg/kg 劑量進(jìn)行大鼠灌胃給藥后，姜黃素包覆脂質(zhì)體的Cmax為57.66yg/l，是未包覆脂質(zhì)體的1.8 倍，是姜黃素混懸液的5.31倍。姜黃素包覆脂質(zhì)體的AUC是未包覆脂質(zhì)體的2.28倍，是姜黃 素混懸液的23.12倍。公告號為CN 104042569A，名稱為《聚乙二醇維生素 E琥珀酸酯修飾的 姜黃素氯化殼聚糖脂質(zhì)體及其制備方法》的中國專利文獻(xiàn)公開了聚乙二醇維生素 E琥珀酸 酯修飾的姜黃素氯化殼聚糖脂質(zhì)體及其制備方法。其利用聚乙二醇維生素 E琥珀酸酯和氯 化殼聚糖作為吸收促進(jìn)劑，按照50mg/kg劑量進(jìn)行大鼠灌胃給藥后，聚乙二醇維生素 E琥珀 酸酯修飾的姜黃素氯化殼聚糖脂質(zhì)體的AUC為游離藥物的1.87倍，Cmax為游離藥物的1.78 倍。氯化殼聚糖也是帶正電荷的生物材料，使用時(shí)也會(huì)帶來潛在的胃腸道安全性問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為了解決姜黃素水溶性差，口服生物利用度低的問題，針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明 提供了一種高生物利用度的姜黃素納米脂質(zhì)載體，及其制備方法。
[0005] 本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的： 一種高生物利用度的姜黃素納米脂質(zhì)載體，原料藥為姜黃素，輔料包括:表面活性劑、 固態(tài)脂質(zhì)材料、液態(tài)脂質(zhì)材料和吸收促進(jìn)劑，其中，各組分的重量份數(shù)如下所示:姜黃素1-5 份;表面活性劑10-40份;固態(tài)脂質(zhì)材料1-10份;液態(tài)脂質(zhì)材料2-20份;吸收促進(jìn)劑1-10份。
[0006] 所述的固態(tài)脂質(zhì)材料包括:膽固醇油酸酯、三月桂酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯、硬 脂酸、甘油棕櫚酸硬脂酸酯和山崳酸甘油酯，優(yōu)選三月桂酸甘油酯和膽固醇油酸酯中的一 種或幾種。
[0007] 所述的液態(tài)脂質(zhì)材料包括:三油酸甘油酯、中鏈脂肪酸酯、中鏈甘油三酯、油酸聚 乙二醇甘油酯和辛癸酸甘油酯，優(yōu)選三油酸甘油酯和中鏈甘油三酯中的一種或幾種。
[0008] 所述的表面活性劑包括磷脂、吐溫80、泊洛沙姆188、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氫 化蓖麻油、乳化劑OP，優(yōu)選磷脂和吐溫80中的一種或幾種。
[0009] 所述吸收促進(jìn)劑為?；悄懰?聚乙二醇-單硬脂酸酯，優(yōu)選聚乙二醇長鏈個(gè)數(shù)為 100或聚乙二醇長鏈個(gè)數(shù)為40，優(yōu)選?；悄懰崤c聚乙二醇-單硬脂酸酯的摩爾比為1:1。
[0010] 本發(fā)明所述的吸收促進(jìn)劑不限于應(yīng)用在脂質(zhì)納米載體中，也可應(yīng)用于固體脂質(zhì)納 米粒、脂質(zhì)體，納米乳及膠束中。
[0011] 本發(fā)明還提供了一種用于提高脂質(zhì)載體生物利用度的吸收促進(jìn)劑，所述吸收促進(jìn) 劑為牛磺膽酸-聚乙二醇-單硬脂酸酯，優(yōu)選聚乙二醇長鏈個(gè)數(shù)為100或聚乙二醇長鏈個(gè)數(shù) 為40，優(yōu)選?；悄懰崤c聚乙二醇-單硬脂酸酯的摩爾比為1:1。
[0012] 本發(fā)明還提供了上述吸收促進(jìn)劑的制備方法，將牛磺膽酸溶于非質(zhì)子極性溶劑 中，加入縮合劑，后加入聚乙二醇-單硬脂酸酯反應(yīng)，蒸出溶劑后水合，再進(jìn)一步透析，干燥 即得?；悄懰?聚乙二醇-單硬脂酸酯。
[0013] 所述非質(zhì)子極性溶劑選自N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亞砜(DMSO)、乙腈、二 氯甲烷中的一種或幾種。
[0014] 所述縮合劑選1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(EDCI)、二環(huán)己基 碳二亞胺(DCC)、1_羥基苯并三唑(HOBT)中的一種或幾種。
[0015] 上述方法中，?；悄懰峥赏ㄟ^?；悄懰徕c進(jìn)行制備。一個(gè)優(yōu)選的方案，稱取牛磺膽 酸鈉溶于適量水中形成?；悄懰徕c水溶液。另取鹽酸溶液于燒杯中，加入適量冰水后，將牛 磺膽酸鈉水溶液緩慢滴加至鹽酸溶液中，并不斷攪拌至溶液中析出黃色固體。將反應(yīng)液進(jìn) 行抽濾、烘干，得?；悄懰?。
[0016] 上述吸收促進(jìn)劑的一個(gè)優(yōu)選的制備方法，稱取牛磺膽酸溶于無水DMF中，加入 EDCI，冰水浴反應(yīng)。將聚乙二醇-單硬脂酸酯溶于CH2Cl2中，緩慢滴加至上述反應(yīng)液中，冰水 浴反應(yīng)后，常溫反應(yīng)。旋蒸除去CH 2Cl2,透析除去未反應(yīng)完的牛磺膽酸和殘余溶劑DMF等小分 子雜質(zhì)(MfflOOO)，冷凍干燥得白色粉末，即?；悄懰?聚乙二醇-單硬脂酸酯。
[0017] 本發(fā)明所述的高生物利用度的姜黃素納米脂質(zhì)載體可以由以下方法制備： 方法一:將姜黃素、表面活性劑、固態(tài)脂質(zhì)材料、液態(tài)脂質(zhì)材料和上述吸收促進(jìn)劑，用乙 醇-氯仿（1:1)超聲溶解后，將溶液轉(zhuǎn)移至茄形瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，向茄形瓶中加 入10%甘油水溶液，37°C水合，探頭超聲后過0.45μπι的微孔濾膜，即得高生物利用度的姜黃 素納米脂質(zhì)載體； 方法二:將姜黃素、表面活性劑、固態(tài)脂質(zhì)材料和液態(tài)脂質(zhì)材料，用乙醇-氯仿（1:1)超 聲溶解后，將溶液轉(zhuǎn)移至茄形瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，向茄形瓶中加入溶有上述吸收 促進(jìn)劑的10%甘油水溶液，37°C水合，探頭超聲后過0.45μπι的微孔濾膜，即得高生物利用度 的姜黃素納米脂質(zhì)載體； 方法三:將姜黃素、表面活性劑、固態(tài)脂質(zhì)材料、液態(tài)脂質(zhì)材料和上述吸收促進(jìn)劑置于 表面皿中，50~60°C加熱熔融，在機(jī)械攪拌下加入同溫度的10 %甘油水溶液，形成乳劑后快 速至于冰浴中，探頭超聲后過〇.45μπι的微孔濾膜，即得高生物利用度的姜黃素納米脂質(zhì)載 體； 方法四：將姜黃素、表面活性劑、固態(tài)脂質(zhì)材料和液態(tài)脂質(zhì)材料置于表面皿中，50~60 °〇加熱熔融，在機(jī)械攪拌下加入同溫度的溶解有上述吸收促進(jìn)劑的10%甘油水溶液，形成 乳劑后快速至于冰浴中，探頭超聲后過〇.45μπι的微孔濾膜，即得高生物利用度的姜黃素納 米脂質(zhì)載體。
[0018] 本發(fā)明中，考慮到姜黃素在水中的溶解度很低(約0.4μg/ml)，但是研究發(fā)現(xiàn)，姜黃 素在油中的溶解度較水中高（如在Ll349中溶解度高達(dá)約5mg/ml)。納米脂質(zhì)載體是在固體 脂質(zhì)納米粒的基礎(chǔ)上，在固態(tài)脂質(zhì)中混入形態(tài)相異的液態(tài)脂質(zhì)作為混合類脂基質(zhì)得到的新 一代納米制劑，其具有較高的物理穩(wěn)定性、易于控制藥物釋放及易于表面修飾等特點(diǎn)，故本 發(fā)明將姜黃素制成納米脂質(zhì)載體。
[0019] 研究表明，膽汁酸是膽汁的重要成分，能增加消化道中脂質(zhì)和膽固醇的溶解性，解 除膽汁阻塞，抑制膽固醇結(jié)石的形成，增加膽汁流量等。膽汁酸在腸中通過兩種機(jī)理被人體 重新吸收，一種是在回腸的遠(yuǎn)端，由位于回腸遠(yuǎn)端柱狀上皮細(xì)胞頂端腔面的刷狀緣膜上的 轉(zhuǎn)運(yùn)體（即回腸頂端Na/膽汁酸聯(lián)合轉(zhuǎn)運(yùn)體)介導(dǎo)的跨細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)方式實(shí)現(xiàn)主動(dòng)運(yùn)輸，這是膽 汁酸吸收的主要途徑；另一種吸收機(jī)理主要發(fā)生在小腸和結(jié)腸，是利用簡單擴(kuò)散的被動(dòng)運(yùn) 輸方式進(jìn)行吸收，這種方式可在小腸的任何部位及結(jié)腸發(fā)生。?；悄懰崾悄懰岬聂然c牛 磺酸的氨基以酰胺鍵相連的一種結(jié)合型膽汁酸，其分子量515.6,它是膽汁酸的主要成分之 一。本發(fā)明合成了一種吸收促進(jìn)劑，即?；悄懰?聚乙二醇-單硬脂酸酯。聚乙二醇-單硬脂 酸酯具有親水的聚乙二醇長鏈及親脂的硬脂酸端基，脂溶性硬脂酸鏈段可插入納米脂質(zhì)載 體的脂質(zhì)內(nèi)核中，而親水性的聚乙二醇鏈段伸展于納米粒表面，本發(fā)明將聚乙二醇-單硬脂 酸酯的聚乙二醇鏈段功能化，引入?；悄懰?。本發(fā)明所述的高生物利用度的姜黃素納米脂 質(zhì)載體，即利用功能化的?；悄懰?聚乙二醇-單硬脂酸酯將牛磺膽酸修飾在載姜黃素的納 米脂質(zhì)載體的外表，利用牛磺膽酸在小腸內(nèi)可以通過被動(dòng)擴(kuò)散和主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)的方式被機(jī)體吸 收的特點(diǎn)，可以有效提高藥物在整個(gè)小腸上皮細(xì)胞的吸收，提高姜黃素口服吸收利用度。本 實(shí)驗(yàn)中所采取的載體材料、表面活性劑、吸收促進(jìn)劑以及凍干保護(hù)劑等均為藥劑學(xué)上廣泛 應(yīng)用的藥劑輔料，具有無毒、無刺激性、生物相容性好的特點(diǎn)。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有 益效果在于:本發(fā)明的牛磺膽酸-聚乙二醇-單硬脂酸酯為小分子兩親性材料，合成工藝簡 單，由于其兩親性的性質(zhì)，可以通過簡單的方法賦予更多納米載體(如脂質(zhì)體、固體脂質(zhì)納 米粒粒，納米乳及膠束)具有口服給藥促吸收的特點(diǎn)，能顯著提高難吸收藥物的口服生物利 用度。在本發(fā)明中，牛磺膽酸-聚乙二醇-單硬脂酸酯作為吸收促進(jìn)劑，大大提高了姜黃素的 吸收和口服生物利用度，同時(shí)也為難吸收藥物的促吸收研究提供了一種新的思路。
【附圖說明】
[0020] 圖1為大鼠灌胃不同納米制劑后姜黃素的血濃經(jīng)時(shí)曲線（其中?為本發(fā)明所述牛 磺膽酸修飾的載姜黃素的納米脂質(zhì)載體，□為未修飾?；悄懰岬妮d姜黃素的納米脂質(zhì)，▲ 為姜黃素溶液)。 具體實(shí)施方案 下面通過實(shí)施例對本發(fā)明加以進(jìn)一步的說明，但下述實(shí)施例并不限制本專利的權(quán)利范 圍。
[0021] 實(shí)施例1?；悄懰?聚乙二醇-單硬脂酸酯的合成。
[0022] (1)稱取約0.5g?；悄懰徕c(0.93mmol)溶于適量水中形成?；悄懰徕c水溶液。另 取1.4ml鹽酸溶液（lmol/L)于50ml燒杯中，加入適量冰水后，將?；悄懰徕c水溶液緩慢滴加 至鹽酸溶液中，并不斷攪拌至溶液中析出黃色固體。將反應(yīng)液進(jìn)行抽濾、烘干，得?；悄懰帷?[0023] (2)稱取約0 · 2g?；悄懰幔? · 39mmol)溶于5ml無水DMF中，加入0 · 12gEDCI，冰水浴 反應(yīng)lh。將1.8g聚乙二醇-單硬脂酸酯溶于25mlCH2Cl2中，緩慢滴加至上述反應(yīng)液中，冰水浴 反應(yīng)Ih后，常溫反應(yīng)24h。旋蒸除去CH2Cl2,透析除去未反應(yīng)完的?；悄懰岷蜌堄嗳軇〥MF等 小分子雜質(zhì)(MfflOOO