專利名稱：具有抑制血管新生和mmp活性的香蜂草提取物,以及包含它的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有優(yōu)異的抑制血管新生和MMP活性的香蜂草乙酸乙酯提取物，以及包含它的組合物。更具體地，香蜂草的乙酸乙酯提取物的特征是用50-100% C1-C6醇提取香蜂草，濃縮，隨后將濃縮的醇提物懸浮在水中，用乙酸乙酯萃取，干燥，得到香蜂草的乙酸乙酯提取物。
背景技術(shù)：
香蜂草(Melissa officinalis)，唇形科多年生草本植物，民間也稱作蜜蜂草、香脂草或水腫植物(dropsy plant)。香蜂草的主要成分是黃酮、萜酸、揮發(fā)油、醇苷和酚苷化合物以及咖啡酸衍生物。 進(jìn)一步地，主要的黃酮成分有木犀草苷、秋英苷、瀉鼠李黃素和異櫟素，萜酸成分之一有熊果酸。含量最多的成分是咖啡酸衍生物迷迭香酸(大約4. 7% )，以及已知香蜂草提取物所含的揮發(fā)油成分有香葉醛、橙花醛、香茅醛和丁子香酚。迷迭香酸，香蜂草提取物中主要的無揮發(fā)性成分，具有較強(qiáng)的抗炎和退熱作用；精油也已用于抑郁、神經(jīng)性頭疼、記憶力減退、神經(jīng)痛、發(fā)燒，已知其具有鎮(zhèn)靜、抗菌、抗病毒、 抗氧化和抗激素的作用。近來，香蜂草提取物也被認(rèn)為可用作血液循環(huán)促進(jìn)劑，有助于外周血管的擴(kuò)張。血管新生是產(chǎn)生新的毛細(xì)血管的過程。血管新生是受到嚴(yán)格限制的，通常發(fā)生在胚胎發(fā)育、組織重塑、傷口愈合和黃體發(fā)育的周期循環(huán)期間(Folkman和Cotran，Relation of vascular proliferation to tumor growth, Int Rev Exp Pathol 16207-248,1976)。與身體的其它細(xì)胞相比，內(nèi)皮細(xì)胞的生長非常緩慢。然而，內(nèi)皮細(xì)胞的增殖受到活化的水解酶血管新生細(xì)胞因子的誘發(fā)，水解酶將從細(xì)胞外基質(zhì)釋放細(xì)胞生成介體或刺激血管新生因子。通常，血管新生的過程是血管底膜降解、內(nèi)皮細(xì)胞移動(dòng)以及經(jīng)內(nèi)皮細(xì)胞增殖和分化形成腔的過程。血管新生過程的一個(gè)主要事件是在形成毛細(xì)血管前細(xì)胞外基質(zhì)出現(xiàn)破裂。最重要的基質(zhì)降解酶是基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)。當(dāng)血管新生規(guī)律破壞或過激活MMP時(shí)，將出現(xiàn)與眾多疾病相關(guān)聯(lián)的病理性血管新生(Polverini PJ, Critical Reviews in Oral Biology, 6 (3), 230-247 (1995) ；Arup Das 等人，Progress in Retinal 禾口 Eye Research, 22 (2003) 721-748 ；Nick Di Girolamo 等人，I0VS,2001 年 8 月，Vol. 42，No. 9,1963-1968 ；Patricia Lee 等人，Survey of ophthalmology, Vol 43，No. 3，1998 年 11-12 月，245-269 ；D.B.Holland 等人，British Journal ofDermatology 2004,150,72-81 ；Anthony H Vagnucci Jr 等人，The Lancet, Vol 361,2003 年 2 月 15 日，605—608 ;Berislav V. 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Commun. ,329,2005,105-110等。)。腫瘤生長和轉(zhuǎn)移血管瘤、血管纖維瘤、血管畸形以及諸如動(dòng)脈粥樣硬化、血管狹窄、地方性硬化癥和狹窄癥的心血管疾??；眼部疾病諸如糖尿病視網(wǎng)膜病、黃斑變性(包括與年齡相關(guān)的黃斑變性)、翼狀胬肉、視網(wǎng)膜變性、角膜移植時(shí)的血管新生、血管新生性青光眼、血管新生性角膜病諸如角膜粘連和虹膜粘連、晶狀體后纖維增生、顆粒性結(jié)膜炎、角膜潰瘍、玻璃體增殖的視網(wǎng)膜病變、 早產(chǎn)嬰兒的視網(wǎng)膜病變、眼睛內(nèi)部的炎癥、圓錐形角膜、干燥綜合癥、近視、眼部腫瘤和角膜移植的排斥反應(yīng)；肥胖癥；慢性炎癥諸如關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎、MMP介導(dǎo)的整骨療法和關(guān)節(jié)外傷導(dǎo)致的變性軟骨損耗；炎癥疾病諸如中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥和炎癥性腸?。黄つw疾病諸如銀屑病、毛細(xì)管擴(kuò)張、膿性肉芽腫、脂溢性皮炎和痤瘡；早老性癡呆；角膜粘連、蛋白尿癥、腹主動(dòng)脈瘤、脫髓鞘的神經(jīng)組織、肝纖維癥、腎小球疾病、早產(chǎn)胎膜破裂、牙周病諸如牙齦炎和牙周炎。更具體地，血管新生在腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移中扮演了重要角色。新生血管不僅給快速生長的腫瘤細(xì)胞供應(yīng)營養(yǎng)和氧氣，還給轉(zhuǎn)移的發(fā)展提供了循環(huán)通道[Folkmana和 Tyler, Cancer Invasion and metastasis，Biologicmechanisms禾口Therapy (S· B· Day ed.) Raven press,紐約，94-103 (1977) ；Polverini PJ, Critical Reviews in Oral Biology, 6(3) ,230-247(1995)] ο腫瘤患者由于轉(zhuǎn)移而死亡，以及由于當(dāng)前用于腫瘤治療的化療法和免疫療法缺乏抗轉(zhuǎn)移的效果，無法拯救腫瘤患者。關(guān)節(jié)炎，一種眾所周知的炎癥疾病，如自身免疫性疾病般發(fā)作。然而，關(guān)節(jié)腔中脈管內(nèi)皮細(xì)胞的生長受到炎癥細(xì)胞因子激活，最終將損壞關(guān)節(jié)中的軟骨。換句話說，在誘發(fā)炎癥的細(xì)胞因子的幫助下，滑膜腔中滑膜細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞增殖將誘導(dǎo)血管新生和血管翳的形成，這在軟骨的破壞中扮演了重要角色(Kocb AE, Polverini PJ和Lcibovich SJ, Arth Rheum 29,471-479,1986 ；Stupack DG, Storgard CM 禾口 Cheresh DA Braz JMed BiolRes 32,578-581,1999 Koch AE，關(guān)節(jié)炎 Rheum 41，951-962，1998)。同時(shí)，已有顯示認(rèn)為關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)外部創(chuàng)傷中的基質(zhì)裂解素在膠原酶原的激活中起到重要作用，活化膠原酶[Murphy， G.等人，Biochem. J. 248，265-268 (1987)]。因此，MMP活性的下調(diào)可預(yù)防關(guān)節(jié)炎的發(fā)展。全世界許多人由于各種眼部疾病而失去了他們的視力。許多患者由于毛細(xì)血管血細(xì)胞浸潤入玻璃體液而變成盲人(Jeffrey MI和Takayuki A，J Clin Invest 103， 1231-1236，1999)。典型的血管新生相關(guān)的眼部疾病有與年齡相關(guān)的黃斑變性，糖尿病視網(wǎng)膜病、早產(chǎn)嬰兒的視網(wǎng)膜病、血管新生性青光眼、血管新生性角膜病(Adamis AP,Aiello LP 和D' Amato RA, Angiogenesis 3，9-14(1999))。糖尿病視網(wǎng)膜病，糖尿病的一種并發(fā)癥， 被認(rèn)為是毛細(xì)管破裂以及出血覆蓋在視網(wǎng)膜表面而導(dǎo)致的。已經(jīng)顯示膠原酶、明膠酶和基質(zhì)裂解素將損壞角膜的細(xì)胞外基質(zhì)。這被認(rèn)為是多數(shù)潰瘍性眼部疾病尤其是那些感染或化學(xué)損傷所導(dǎo)致的眼部疾病的病態(tài)和視力損害的重要機(jī)制(Burns, F. R.等人，Invest Opthalmoland Visual Sci，32，1569-1575，1989)。潰蕩形成期間眼睛中存在的MMP要么是內(nèi)源性來自浸潤的白細(xì)胞或成纖維細(xì)胞，要么是外源性來自于微生物。銀屑病由角化細(xì)胞的異?；钚栽鲋乘鶎?dǎo)致?？焖偕L的細(xì)胞需要大量的血液供應(yīng)，并且銀屑病中將反常地誘發(fā)血管新生(Folkman J.，J InvestDermatol 59,40-48, 1972)。炎癥刺激和微生物分泌的膠原酶將分解牙齦結(jié)締組織中的膠原，并最終導(dǎo)致牙周炎。從發(fā)炎齒齦分離出的成纖維細(xì)胞中還鑒別出了膠原酶和基質(zhì)裂解素活性以及酶的水平與觀察到的牙齦炎的嚴(yán)重程度相關(guān)(Beeley，N. R. A等人，supra Overall, CM.等人，J Periodontal Res，22，81—88，1987)。MMP與CNS(中樞神經(jīng)系統(tǒng))的發(fā)病機(jī)理相關(guān)，破壞髓磷脂或血腦屏障。還報(bào)道了 MMP與早老性癡呆中的淀粉狀β蛋白的積累相關(guān)[Yong，VW等人，Trends Neurosci 21(2), 75-80(1998)]。腦脊髓液中過度水平的明膠酶-B與多發(fā)性硬化和其他神經(jīng)障礙的發(fā)病率相關(guān) [Beeley, N. R. A.等人，supra ;Miyazaki，K.等人，Nature 362，839-841 (1993)]，將導(dǎo)致淀粉狀 β 蛋白降解和累積[Backstrom JR 等人，Jneurosci 16 (24), 7910-9 (1996) ] 近來的報(bào)道已經(jīng)顯示早老性癡呆的大腦中MMP-I活性被極大地誘發(fā)，激發(fā)MMP酶原的ΜΜΡ-3也被囊括入該疾病的病理生理學(xué)中(LeakeA,Morris CM,&ffhateley, J Neurosci Lett 291,201-3,2000 ；YoshiyamaY, Asahina Μ, &Hattori Τ, Acta Neuropathol (berl), 99，91-5，2000)。MMP引起的底膜降解是腫瘤入侵、轉(zhuǎn)移以及血管新生的非常重要的步驟。因此，MMP 的過表達(dá)可刺激血管新生、腫瘤入侵和轉(zhuǎn)移。在腺癌中，浸潤性近端胃癌細(xì)胞表達(dá)72-kD形式的IV型膠原酶[ktwartz， G. K.等人，Cancer 73,22-27(1994)]。由 Ha-ras 和 v-myc 致癌基因或僅由 Ha-ras 轉(zhuǎn)化的大鼠胚胎細(xì)胞在無胸腺小鼠中具有轉(zhuǎn)移性，并釋放出92kDa明膠酶/膠原酶(MMP-9) [Bernhard, EJ.等人，Proc. Natl. Acad, ki 91,4293-4597 (1994) ] 因此，血管新生抑制劑或MMP抑制劑可用作這些疾病的治療劑。關(guān)于這點(diǎn)，本發(fā)明人在KR登記號10-550,298中公開了香蜂草提取物在體外實(shí)驗(yàn)諸如HUVEC(人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞)管腔成形和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)諸如小鼠膜基質(zhì)模型和CAM檢測中具有抗血管新生作用。此外，本發(fā)明人在KR登記號10-473,688中還公開了香蜂草提取物具有MMP (基質(zhì)金屬蛋白酶)抑制作用，這將在血管新生過程中降解底膜起到重要作用
發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問題本發(fā)明人通過研究得到活性更顯著的香蜂草提取物，具有優(yōu)異的抑制血管新生和 MMP活性，由此完成本發(fā)明。技術(shù)方案本發(fā)明的目的是提供具有優(yōu)異的抑制血管新生和MMP活性的香蜂草乙酸乙酯提取物，以及包含它的組合物。


圖1是示出ALS-L1023抑制MMP活性的作用的曲線圖。圖2是示出ALS-L1023抑制HUVEC管腔成形的作用的圖。圖3是顯示小鼠膜基質(zhì)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果的圖，該結(jié)果可用于分析ALS-L1023抑制血管新生的作用。圖4是肝臟組織的顯微圖，示出與溶劑對照組相比，給與高劑量ALS-L1023的高脂肪飲食喂食誘發(fā)肥胖的小鼠中肝脂質(zhì)沉著和炎性細(xì)胞浸潤出現(xiàn)減少。圖5是示出與溶劑對照組相比，給與中和高劑量ALS-L1023的高脂肪飲食喂食誘發(fā)肥胖的小鼠中腹膜后脂肪組織的脂肪面積出現(xiàn)減少的圖。圖6是示出口服給與ALS-L1023對滲出性與年齡相關(guān)的黃斑變性級數(shù)的抑制作用的圖。圖7是示出依據(jù)毒性實(shí)驗(yàn)按2000mg/kg給與口服單劑量的ALS-L1023的小鼠體重的變化圖。圖8是示出依據(jù)毒性實(shí)驗(yàn)按2000mg/kg給與口服單劑量的ALS-L1023的小鼠體溫的變化圖；以及圖9是示出依據(jù)毒性實(shí)驗(yàn)按2000mg/kg給與口服單劑量的ALS-L1023、以總體重百分比顯示的相對器官重量值的圖。
具體實(shí)施例方式因此，本發(fā)明提供了具有優(yōu)異抑制血管新生和基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)活性的香蜂草乙酸乙酯提取物。本發(fā)明還提供了包含香蜂草乙酸乙酯提取物的組合物，可用于治療或預(yù)防血管新生相關(guān)的疾病和由MMP介導(dǎo)的疾病。以下將詳細(xì)描述本發(fā)明。依據(jù)本發(fā)明的香蜂草乙酸乙酯提取物的特征是用50-100% C1-CJi提取香蜂草， 濃縮，隨后將濃縮的醇提物懸浮在水中，用乙酸乙酯萃取，干燥，得到香蜂草乙酸乙酯提取物。在依據(jù)本發(fā)明的制備香蜂草乙酸乙酯提取物的方法中，可使用干燥的或不干燥的或兩者混合的香蜂草。為了提高提取效率，香蜂草可切成小塊或經(jīng)粉碎。香蜂草的醇提物可根據(jù)常規(guī)方法提取，這里，使用的提取溶劑可以是香蜂草5-10 倍體積的50-100%醇，優(yōu)選70-80%醇。醇可以是C1-C6醇，優(yōu)選甲醇、乙醇或其混合物。在本發(fā)明的實(shí)施例中，香蜂草75 %乙醇提取物懸浮在水中，用乙酸乙酯萃取，干燥，得到香蜂草乙酸乙酯提取物(稱為ALS-L1023)。用50-100%醇作為提取溶劑可有效地提取出水溶性物質(zhì)和水不溶性物質(zhì)。這個(gè)方法也可有效地獲得溶于乙酸乙酯但不溶于水的物質(zhì)?？紤]到產(chǎn)率、殘?jiān)亩拘院蛥⒄瘴锏南鄬?，選擇乙酸乙酯為第二提取溶劑。為了大量生產(chǎn)具有優(yōu)異抗血管新生活性的香蜂草提取物，將香蜂草50-100%醇提物懸浮在水中，用乙酸乙酯萃取，干燥，得到香蜂草乙酸乙酯提取物(下列實(shí)施例中稱作 ALS-L1023)。也可用50-100% C1-C6醇提取香蜂草，干燥，將醇提物懸浮在水中，用乙酸乙酯萃取，干燥，將乙酸乙酯提取物再懸浮在水中，干燥，得到香蜂草的乙酸乙酯提取物。用得到的香蜂草乙酸乙酯部分進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床前實(shí)驗(yàn)。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)與其他溶劑部分得到的其他提取物相比，本發(fā)明的香蜂草乙酸乙酯提取物具有優(yōu)異的抑制血管新生和MMP的活性。MMP抑制實(shí)驗(yàn)、HUVEC管腔成形實(shí)驗(yàn)和小鼠膜基質(zhì)移植實(shí)驗(yàn)顯示香蜂草的乙酸乙酯提取物具有極其有效和優(yōu)異的血管新生抑制作用。 本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)該提取物能通過減小脂肪組織、脂肪細(xì)胞尺寸以及誘發(fā)與脂肪酸氧化相關(guān)的基因表達(dá)來抑制肥胖癥。因此，很清楚地，依據(jù)本發(fā)明的香蜂草乙酸乙酯提取物可用作抗血管新生劑和MMP 抑制劑，用于治療或預(yù)防與血管生產(chǎn)相關(guān)的疾病和由MMP介導(dǎo)的疾病。因此，本發(fā)明提供了包含香蜂草乙酸乙酯提取物的組合物。本發(fā)明的組合物能治療或預(yù)防的血管新生相關(guān)的疾病和由MMP介導(dǎo)的疾病包括但不限于腫瘤生長和轉(zhuǎn)移、血管瘤、血管纖維瘤、血管畸形、以及心血管疾病諸如動(dòng)脈粥樣硬化、血管狹窄、edemic sclerosis和狹窄癥；眼部疾病諸如糖尿病視網(wǎng)膜病、黃斑變性 (包括與年齡相關(guān)的黃斑變性)、翼狀胬肉、視網(wǎng)膜變性、角膜移植中的血管新生、血管新生性青光眼、血管新生性角膜疾病諸如角膜粘連和虹膜粘連、晶狀體后纖維增生、顆粒性結(jié)膜炎、角膜潰瘍、玻璃體增殖的視網(wǎng)膜病變、早產(chǎn)嬰兒的視網(wǎng)膜病變、眼睛內(nèi)部的炎癥、圓錐形角膜、干燥綜合癥、近視、眼部腫瘤和角膜移植的排斥反應(yīng)；肥胖癥；慢性炎癥諸如關(guān)節(jié)炎、 風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎；炎癥諸如中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥和炎癥性腸?。籑MP 介導(dǎo)的整骨療法和變性軟骨損耗(regressive cartilage loss)；皮膚疾病諸如銀屑病、 毛細(xì)管擴(kuò)張、膿性肉芽腫、脂溢性皮炎和痤瘡；早老性癡呆；角膜粘連、蛋白尿癥、腹主動(dòng)脈瘤、脫髓鞘的神經(jīng)組織、肝纖維癥、腎小球疾病、早產(chǎn)胎膜破裂、牙周病諸如牙齦炎和牙周炎。本發(fā)明的組合物可與已知的抗血管生產(chǎn)劑或已知的MMP抑制劑聯(lián)用。在本發(fā)明中，包含可用作治療或預(yù)防與血管新生相關(guān)的疾病和由MMP介導(dǎo)的疾病的藥劑的香蜂草乙酸乙酯提取物的組合物可以是藥物組合物或食物組合物。本發(fā)明的藥物組合物還可包括制藥學(xué)和生理學(xué)上可允許的添加劑，諸如稀釋劑、 懸浮劑、表面活性劑、溶劑、崩解劑、甜味劑、粘合劑、包衣劑、發(fā)泡劑、潤滑劑、助流劑或芳香劑。包含本發(fā)明的香蜂草乙酸乙酯提取物作為活性成分的藥物組合物可以與制藥學(xué)上可接受的賦形劑、載體或稀釋劑組合使用。本發(fā)明的藥物組合物可制成任意形式，諸如顆粒、粉末、片、包衣片、膠囊、丸、糖漿、滴劑、液體劑、溶液、懸浮液、乳濁液或可注射的溶液。例如，在片劑或膠囊劑的組合物中，活性成分可與制藥學(xué)上可接受的非活性和無毒性載體組合使用。需要的話可加入適當(dāng)?shù)恼澈蟿?、潤滑劑、崩解劑和染色劑。適宜的粘合劑的例子包括但不限于淀粉、明膠、糊精、麥芽糊精、天然糖諸如葡萄糖或β -乳糖、玉米甜味劑、阿拉伯樹膠、天然和合成樹膠諸如黃芪膠、以及油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、醋酸鈉、氯化鈉。崩解劑包括但不限于淀粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤土、黃胞膠等。在液體劑溶液類型的組合物中，制藥學(xué)上可接受的載體有鹽水、無菌水、林格氏溶液、緩沖鹽水、白蛋白注射液、右旋糖溶液、麥芽糊精溶液、甘油、乙醇或混合溶液。通常的添加劑如抗氧劑、緩沖溶液、抑菌劑等可加入到組合物中。使用常規(guī)方法或Remington' s pharmaceutical Science -^Hidic； (Mack Publishing co, Easton PA)白勺力夕去，
明的組合物根據(jù)疾病或成分制成任意需要的形式。同時(shí)，包含本發(fā)明的香蜂草乙酸乙酯提取物為活性成分的食物組合物可用作功能性食品、飲食補(bǔ)給物或食物添加劑。在食物添加劑的情況中，本發(fā)明的食物組合物可加入到肉、飲用水、巧克力、雜貨、小吃、披薩、方便面、面條、口香糖、冰激凌、酒精飲料、維生素復(fù)合物或健康食品中。發(fā)明提供了包含香蜂草乙酸乙酯提取物的組合物用于治療或預(yù)防與血管新生相關(guān)的疾病和由MMP介導(dǎo)的疾病的用途。本發(fā)明的組合物可用于治療或預(yù)防與血管新生相關(guān)的疾病和由MMP介導(dǎo)的疾病的食物和藥物中。本發(fā)明還提供了治療或預(yù)防與血管新生相關(guān)的疾病和由MMP介導(dǎo)的疾病的方法， 包括向哺乳動(dòng)物給與治療有效量的香蜂草乙酸乙酯提取物。這里的用于治療目的的“哺乳動(dòng)物”指的是任意被分類入哺乳動(dòng)物的動(dòng)物，優(yōu)選地，哺乳動(dòng)物為人。這里使用“治療有效量”指的是將誘發(fā)經(jīng)給藥的動(dòng)物或人產(chǎn)生生物的或醫(yī)學(xué)反應(yīng)的量。本領(lǐng)域普通醫(yī)生可確定治療有效量，以及適當(dāng)?shù)慕o藥劑量和頻率以獲得最佳的臨床效果。治療有效量常根據(jù)不同因素而不同，諸如疾病的種類、患者體征的嚴(yán)重度、成分含量、 單個(gè)患者的年齡、體重、性別、飲食、給藥時(shí)間、給藥途徑、組合物比例、治療周期和其他聯(lián)合給藥的藥物。本發(fā)明的組合物可單劑量給藥，也可作為給藥體系的一部分，諸如多劑量給藥，香蜂草的乙酸乙酯提取物的優(yōu)選劑量是^rig/kg 250mg/kg/天。本發(fā)明的組合物可以各種方式給藥，例如但不限于口服、直腸給藥、靜脈給藥、動(dòng)脈給藥、腹膜內(nèi)給藥、肌肉給藥、粘膜內(nèi)給藥、皮下給藥、皮內(nèi)給藥、經(jīng)皮給藥、由皮給藥、陰道給藥、直腸內(nèi)給藥、經(jīng)鼻給藥、經(jīng)眼給藥和/或腸內(nèi)給藥。
實(shí)施例下列實(shí)施例意在進(jìn)一步說明本發(fā)明。然而，示出的實(shí)施例和實(shí)驗(yàn)例僅是為了更好地理解本發(fā)明，而不意在限定本發(fā)明的范圍。[實(shí)施例]實(shí)施例1.香蜂草乙酸乙酯提取物的制備為了制備具有有效的抗血管新生活性的香蜂草提取物，用蒸餾水、50%乙醇水溶液、75%乙醇水溶液、100%乙醇和甲醇分別提取香蜂草。粗提物經(jīng)離心分離、過濾、濃縮、凍干，得到提取物粉末。將粉末在4°C下儲(chǔ)存直至使用。用HUVEC管腔成形實(shí)驗(yàn)在50 μ g/ ml的濃度下檢測提取物的抗血管新生作用。如表1所示，包括水、50^^75^^100%乙醇和 100%甲醇提取物的所有提取物在HUVEC管腔成形實(shí)驗(yàn)中顯示具有抑制作用。尤其，75%乙醇提取物與其他提取物相比具有較好的抑制活性，因此選擇75%乙醇為第一提取溶劑。表 1[表 1][表]香蜂草提取物對HUVEC管腔成形的作用
權(quán)利要求
1.香蜂草乙酸乙酯提取物，具有抑制血管新生和MMP活性。
2.依據(jù)權(quán)利要求1的香蜂草乙酸乙酯提取物，其中用50-100%C1-C6醇提取香蜂草，濃縮，隨后將濃縮的醇提物懸浮在水中，用乙酸乙酯萃取，干燥，得到香蜂草的乙酸乙酯提取物。
3.依據(jù)權(quán)利要求2的香蜂草乙酸乙酯提取物，其中C1-C6醇是70-80%的C1-C6醇。
4.依據(jù)權(quán)利要求3的香蜂草乙酸乙酯提取物，其中C1-C6醇是乙醇或甲醇。
5.一種預(yù)防或治療肥胖癥的組合物，其包含權(quán)利要求1的香蜂草乙酸乙酯提取物。
6.一種預(yù)防或治療糖尿病視網(wǎng)膜病、黃斑變性(包括與年齡相關(guān)的黃斑變性)、翼狀胬肉、視網(wǎng)膜變性、角膜移植血管新生、新生血管性青光眼、新生血管性角膜疾病、晶體后纖維增生癥、沙眼、角膜潰瘍、增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變、未成熟的視網(wǎng)膜病變、眼部炎癥、圓錐形角膜、干燥綜合癥、近視、眼部腫瘤或角膜移植術(shù)后移植排斥反應(yīng)的組合物，其包含權(quán)利要求1的香蜂草乙酸乙酯提取物。
7.一種預(yù)防或治療腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的組合物，其包含權(quán)利要求1的香蜂草乙酸乙酯提取物。
8.一種預(yù)防或治療血管瘤、血管纖維瘤、血管畸形、動(dòng)脈硬化、脈管粘連、硬皮病或再狹窄的組合物，其包含權(quán)利要求1的香蜂草乙酸乙酯提取物。
9.一種預(yù)防或治療關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎、MMP介導(dǎo)的骨質(zhì)減少或關(guān)節(jié)外部創(chuàng)傷導(dǎo)致的變性軟骨損耗的組合物，其包含權(quán)利要求1的香蜂草乙酸乙酯提取物。
10.一種預(yù)防或治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥或炎癥性腸病的組合物，其包含權(quán)利要求1的香蜂草乙酸乙酯提取物。
11.一種預(yù)防或治療銀屑病、毛細(xì)管擴(kuò)張、膿性肉芽腫、脂溢性皮炎或痤瘡的組合物，其包含權(quán)利要求1的香蜂草乙酸乙酯提取物。
12.一種預(yù)防或治療早老性癡呆的組合物，其包含權(quán)利要求1的香蜂草乙酸乙酯提取物。
13.一種預(yù)防或治療異常傷口愈合、蛋白尿癥、腹主動(dòng)脈瘤、脫髓鞘的神經(jīng)組織、肝纖維癥、腎小球疾病、早產(chǎn)胎膜破裂或牙周病的組合物，其包含權(quán)利要求1的香蜂草乙酸乙酯提取物。
14.依據(jù)權(quán)利要求5-13任一項(xiàng)的組合物，其中組合物可制成顆粒、粉末、片劑、包衣片、 膠囊、丸、糖漿、滴劑、液體劑、溶液、懸浮液、乳濁液或可注射的溶液的劑量形式。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有優(yōu)異的抑制血管新生和MMP活性的香蜂草乙酸乙酯提取物，以及包含它的組合物。更具體地，香蜂草的乙酸乙酯提取物的特征是用50-100％C1-C6醇提取香蜂草，濃縮，隨后將濃縮的醇提物懸浮在水中，用乙酸乙酯萃取，干燥，得到香蜂草的乙酸乙酯提取物。本發(fā)明的香蜂草乙酸乙酯提取物具有強(qiáng)烈的和優(yōu)異的抑制血管新生和MMP活性。因此，包含本發(fā)明的香蜂草乙酸乙酯提取物的組合物可用作治療或預(yù)防血管新生的相關(guān)疾病和由MMP介導(dǎo)的疾病的藥物。
文檔編號A61K36/53GK102316884SQ200880103608
公開日2012年1月11日 申請日期2008年8月25日 優(yōu)先權(quán)日2007年8月23日
發(fā)明者咸鐘千, 樸殷圭, 樸秉永, 李熙錫, 金敏英 申請人:血管實(shí)驗(yàn)室公司, 金敏英