重組人血管內(nèi)皮抑制素在制備治療眼表新生血管性疾病藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明屬于生物制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及重組人血管內(nèi)皮抑制素在制備治療眼表 新生血管性疾病藥物中的應(yīng)用。 技術(shù)背景：
[0002] 恩度（Endostar)的通用名為重組人血管內(nèi)皮抑制素注射液，是我國學(xué)者自主研 發(fā)的一種新型重組人血管內(nèi)皮抑制藥物，Endostar是以重組DNA技術(shù)生產(chǎn)，采用大腸桿菌 作為蛋白表達(dá)體系生產(chǎn)出的重組人血管內(nèi)皮抑制素。恩度的作用機(jī)制在于抑制腫瘤新生血 管形成，阻斷腫瘤細(xì)胞的營養(yǎng)供應(yīng)，最終達(dá)到"餓死"腫瘤細(xì)胞的目的。恩度是國家一類新 藥，不屬于化療藥物，腫瘤在體內(nèi)生長達(dá)到2mm 3以上時，必需形成自身的血管網(wǎng)絡(luò)輸送營養(yǎng) 物質(zhì)，否則不能繼續(xù)生長。抑制腫瘤血管形成，切斷其營養(yǎng)供應(yīng)，一段時間后腫瘤就會處于 休眠狀態(tài)，長期作用的結(jié)果是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡，這種治療方法稱為腫瘤饑餓療法。所有的 抗腫瘤血管生成的藥物都?xì)w屬于該療法。
[0003] 眼部新生血管是眼部由于組織缺血、缺氧而導(dǎo)致新生血管形成為病理改變的疾 病。由于新生血管形態(tài)和功能的異常，其伴隨出現(xiàn)的滲出、增殖、出血等病變，會導(dǎo)致正常眼 部結(jié)構(gòu)和功能的破壞，造成嚴(yán)重的視功能損害。其中眼表新生血管性疾病可發(fā)生于角膜化 學(xué)傷、破裂傷、感染性炎癥、免疫性眼病、暴露性角膜炎、翼狀胬肉、倒睫、角膜變性、營養(yǎng)不 良及既往眼表手術(shù)包括角膜移植術(shù)等多種病理情況下，是常見的致盲眼病之一。其具體的 發(fā)病機(jī)制尚不明確，主要的原因為眼內(nèi)促血管生成因子（血管內(nèi)皮生長因子、成纖維細(xì)胞 生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子β 1、白細(xì)胞介素1等）與血管生長抑制因子（基質(zhì)金屬蛋白、氧化 氮合酶、內(nèi)源性內(nèi)皮抑制素、硫酸肝素等）之間調(diào)控機(jī)制失衡，與角膜水腫、炎癥、缺氧等有 關(guān)。
[0004] 眼表新生血管的治療是一大難題，迄今還沒有特效藥物及特效的治療方法。目前 臨床上應(yīng)用的主要方法有激光光凝、光動力療法、手術(shù)；常用的藥物主要為激素、血管內(nèi)皮 生長因子拮抗劑、中成藥等。這些治療雖有一定療效，但也存在著損傷正常組織、療效有限 的弊端。激光、手術(shù)均只能在局部范圍開展，激素的長期應(yīng)用會帶來一系列副反應(yīng)，光動力 療法、血管因子拮抗劑價格昂貴而常需多次治療，無法逆轉(zhuǎn)已產(chǎn)生的病變，不能產(chǎn)生遠(yuǎn)期的 視力改善。眼表新生血管對患者視力構(gòu)成嚴(yán)重威脅，需要更有效的治療方法和藥物。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0005] 本發(fā)明的目的在于提供重組人血管內(nèi)皮抑制素在制備治療眼表新生血管性疾病 藥物中的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：
[0007] 重組人血管內(nèi)皮抑制素在制備治療眼表新生血管性疾病藥物中的應(yīng)用。
[0008] 所述的眼表新生血管性疾病為眼表各種原因造成新生血管侵入透明角膜，包括眼 表化學(xué)傷、角膜穿通傷、感染性角膜炎、熱燒傷、沙眼、流行性角結(jié)膜炎、暴露性角膜炎、免疫 性眼病、Terrien邊緣性變性、角膜破裂傷、角膜變性、角膜營養(yǎng)不良、長期佩戴隱形眼鏡、角 膜移植手術(shù)及既往其它角膜手術(shù)產(chǎn)生的角膜新生血管、翼狀胬肉、圓錐角膜、角膜葡萄種、 倒睫以及Stevens-Johnson綜合征；或者為視網(wǎng)膜新生血管等。尤其是眼表化學(xué)傷、角膜穿 通傷、感染性角膜炎、角膜手術(shù)形成的新生血管、翼狀胬肉以及Stevens-Johnson綜合征。
[0009] 所述的藥物包括重組人血管內(nèi)皮抑制素和藥學(xué)上可接受的載體或者常規(guī)使用的 輔料。
[0010] 所述藥物的劑型為注射制劑。
[0011] 本發(fā)明的有益效果：
[0012] 研宄表明，重組人血管內(nèi)皮抑制素能顯著的抑制眼表新生血管的形成，且安全無 毒，無耐藥性，在治療眼表抗新生血管藥物具有廣闊的應(yīng)用前景。
【具體實施方式】：
[0013] 為了更好的說明本發(fā)明，下面結(jié)合藥物實驗、動物實驗以及臨床實驗說明其在制 備眼表抗新生血管藥物中的用途，如無特別說明，下文中所涉及的實驗用材料均可通過商 業(yè)途徑獲得。
[0014] 1、重組人血管內(nèi)皮抑制素注射液（恩度）對血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響
[0015] I. 1實驗材料
[0016] 細(xì)胞：人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株ECV304由中科院上海細(xì)胞庫提供。
[0017] 主要生化試劑：重組人血管內(nèi)皮抑制素注射液（恩度），山東先聲麥得津生物制藥 有限公司生產(chǎn)
[0018] 1.2實驗方法
[0019] 將人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株ECV304進(jìn)行復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代及鑒定，取對數(shù)生長期細(xì)胞， 用PBS緩沖液稀釋成5X IOVmL密度接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔100 μ L，分別向孔中加 入 PBS 稀釋的不同稀釋度（5000 μ g/mL、2500 μ g/mL、1250 μ g/mL、625 μ g/m、313 μ g/mL、 125 μ g/mL)的重組人血管內(nèi)皮抑制素溶液100 μ L/孔，每組均設(shè)6個復(fù)孔，對照組不添加 重組人血管內(nèi)皮抑制素，添加同等體積有血清培養(yǎng)液。于37°C、5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h， 48h，72h天后使用MTT (四甲基偶氮唑鹽）法染色，在酶標(biāo)儀490nm處測定實驗組與對照組 吸光度，并計算細(xì)胞增殖抑制率，結(jié)果見表1。
[0020] 表1重組人血管內(nèi)皮抑制素對ECV304的細(xì)胞增殖抑制率
[0021]
【主權(quán)項】
1. 重組人血管內(nèi)皮抑制素在制備治療眼表新生血管性疾病藥物中的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述的眼表新生血管性疾病為由眼表化 學(xué)傷、角膜穿通傷、感染性角膜炎、熱燒傷、沙眼、流行性角結(jié)膜炎、暴露性角膜炎、免疫性眼 病、Terrien邊緣性變性、角膜破裂傷、角膜變性、角膜營養(yǎng)不良、長期佩戴隱形眼鏡及角膜 手術(shù)所形成的角膜新生血管、翼狀胬肉、圓錐角膜、角膜葡萄種、倒睫及Stevens-Johnson 綜合征；或者為視網(wǎng)膜新生血管。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物包括重組人血管內(nèi)皮抑制素和 藥學(xué)上可接受的載體或者常規(guī)使用的輔料。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物的劑型為注射制劑。
【專利摘要】重組人血管內(nèi)皮抑制素在制備治療眼表新生血管性疾病藥物中的應(yīng)用，研究表明，重組人血管內(nèi)皮抑制素能顯著的抑制眼表新生血管的形成，且安全無毒，無耐藥性，在治療眼表抗新生血管藥物具有廣闊的應(yīng)用前景。
【IPC分類】A61P9-10, A61K38-17, A61P27-02
【公開號】CN104548067
【申請?zhí)枴緾N201410814133
【發(fā)明人】沈婷, 洪朝陽
【申請人】浙江省人民醫(yī)院, 江蘇先聲藥業(yè)有限公司
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2014年12月23日