專利名稱：：白蛋白兩親性衍生物及其藥學(xué)組合物的制備和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，涉及一種生物可降解性兩親性白蛋白衍生物作為藥物載體，本發(fā)明還涉及該載體的制備方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：難溶性藥物的給藥(特別是注射給藥)的最大障礙是溶解度低，難于制備適宜的制劑。往往需要采取各種增加溶解度的方法，如將藥物制備成鹽、加入潛溶劑、加入助溶劑以及加入表面活性劑增溶。由于成鹽往往需要強(qiáng)酸或強(qiáng)堿條件，對許多藥物往往不適用，生理安全的潛溶媒很少，且用量有所限制；通過與藥物形成絡(luò)合物而增加藥物溶解度的助溶劑的安全性不易保證，因此，通過表面活性劑膠束增溶往往成為首選。例如紫杉醇是一種作用很強(qiáng)的抗腫瘤藥物，體外實(shí)驗(yàn)表明紫杉醇對各種腫瘤均具有明顯的抑制作用，臨床上適用于治療乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌等。然而紫杉醇在水中溶解度極低(<1pg/ml)，口服幾乎不吸收，目前臨床用制劑，如Taxol⑧[美國BristolMyersSquibb(BMS)公司]、Anzatax(澳大利亞Faulding公司)以及國產(chǎn)的紫素@、泰素②等均以聚氧乙烯蓖麻油(CremophorEL)-無水乙醇(50:50,v/v)作為紫杉醇復(fù)合溶媒，該增溶方法存在以下的缺陷①CremophorEL的臨界膠束濃度(Criticalmicellarconcentration,CMC)較高，臨床稀釋時(shí)膠束容易解離，導(dǎo)致藥物析出，因此輸液管必須有在線濾過裝置；②處方中的CremophorEL會引起體內(nèi)組織胺釋放，給藥后數(shù)分鐘，部分病人會出現(xiàn)藥物性皮疹、呼吸急促、支氣管痙攣、低血壓等過敏反應(yīng)，即使同時(shí)使用氫化可地松，過敏反應(yīng)的發(fā)生率仍達(dá)到10%~30%，另外CremophorEL還會引起腎毒性、神經(jīng)毒性、心臟毒性等副反應(yīng)；③注射液中的CremophorEL與聚氯乙烯塑料管和輸液袋接觸可浸提出大量的塑化劑鄰苯二甲酸二乙基乙酯(DEHP)，引起毒性。同樣的情況也出現(xiàn)在喜樹堿、依托泊苷等抗腫瘤藥物的注射液中，例如依托泊苷注射劑由乙醇、丙二醇、聚山梨酯80組成，用前稀釋，注射時(shí)刺激性較大。鑒于普通表面活性劑膠束的高CMC和可能的毒副作用，聚合物膠束是近年來發(fā)展起來的藥物載體，由兩親性高分子在水中自組裝形成，其疏水部分互相纏繞形成"內(nèi)核"，而親水性部分則環(huán)繞在外，形成柔韌的親水性"外殼"，疏水性的內(nèi)核作為藥物的載體或儲庫為疏水性藥物提供了一個(gè)穩(wěn)定的微環(huán)境，親水性的外殼使納米膠束能夠穩(wěn)定地存在于水溶液中和體液中，能夠避免MPS吞噬系統(tǒng)的吞噬，具有長循環(huán)特征。另外，聚合物膠束還可利用腫瘤組織的EPR效應(yīng)滯留于腫瘤組織。如NakanishiT等(NakanishiT，F(xiàn)ukushimaS,KO.Developmentofthepolymermicellecarriersystemfordoxorubicin[J]./Co"/ro/.Je/eoe,200〗,74(l-3):295-302)制備的阿霉素PEO-b-P(Asp)-DOX制劑，血漿AUC可提高高達(dá)28.9倍，腫瘤AUC可提高3.4倍，抗腫瘤活性顯著提高。目前對生物降解聚合物膠束的研究主要集中在合成高分子材料，主要是兩親性A-B嵌段、A-B-A嵌段共聚物或接枝共聚物。A為親水性組分，B為疏水性組分。由于可供共聚A、B組分及可生物降解的組分較少，在選擇時(shí)存在較大困難，故疏水性組分通常為聚內(nèi)酯，如聚丙交酉旨(PLA)、聚乙交酯(PGA)、聚(丙交酯-乙交酯)(PLGA)或聚氨基酸如聚天冬氨酸、聚谷氨酸等；親水性組分則多為聚乙二醇(PEG)。然而，現(xiàn)有的載藥聚合物膠束存在載藥量低、穩(wěn)定性差的問題，且隨著載藥量的增加，穩(wěn)定性呈降低趨勢，這限制了聚合物膠束的進(jìn)一步推廣和應(yīng)用。以紫杉醇為例，LeGarrecD等(LeGarrecD,GoriS,LuoL,o/,Poly(N-vinylpyrrolidone)-block-poly(D,L-lactide)asanewpolymericsolubilizerforhydrophobicanticancerdrags:invitroandinvivoevaluation[J].J"Ccmfra/及dease,2004,99(1):83-101)合成的PDLLA-b-PVP作為紫杉醇增溶載體，載藥量最高為5%,24h即出現(xiàn)沉淀。Zhang,Z.(Zhang,Z.,Feng,S.S，5z》wafm,a&,2006，27(2),262-70)等合成的poly(Iactide)/VitaminETPGScopolymer,其紫杉醇最高載藥量僅為5%(w/w)。D.LeGarrec(LeGarrec,D.,Gori,S.,/Cow/ra/99(1),83-101)制備了poly(N-vinylpyrrolidone)-block-poly(D,L-lactide)，其紫杉醇最高載藥量也僅為5%(w/w)。BurtHM等(BurtHM,ZhangX,ToleikisP,WDevelopmentofcopolymersofpoly(d,l-actide)andmethoxypolyeihylenegyco1asmicellarcarriersofpaclitaxel[J].Co//oicfr朋diSwy^ces5:別o/wto^3ces,1999,16(1-4):161.)制備的PGACL-MePEG作為紫杉醇載體，雖然載藥量可以達(dá)到22%(w/w),但是穩(wěn)定時(shí)間〈5h。目前，解決載藥聚合物膠束載藥量和穩(wěn)定性的方法主要是選擇更加合適的聚合物材料。白蛋白是一種天然的水溶性高分子，其在藥物制劑領(lǐng)域中的一個(gè)重要應(yīng)用就是作為藥物的載體材料，這主要是基于以下優(yōu)越性白蛋白化學(xué)性能穩(wěn)定、無免疫原性、生物相容性好，在體內(nèi)分子鏈中的肽鍵可被酶降解為小分子而被吸收，且白蛋白分子鏈上帶有較多的極性基團(tuán)，對很多藥物離子具有高度的親和力，能和藥物可逆的結(jié)合，為其高負(fù)載藥物提供可能；白蛋白二級結(jié)構(gòu)中含有約48。/。的a-螺旋結(jié)構(gòu)，15。/。P-折疊片結(jié)構(gòu)，其余為無規(guī)線團(tuán)結(jié)構(gòu)，因此具有很多的網(wǎng)狀空隙，為攜帶藥物創(chuàng)造了有利的空間條件；另外，白蛋白是正常向細(xì)胞輸送營養(yǎng)的蛋白質(zhì)，快速生長的腫瘤可攝取和儲備白蛋白，白蛋白作為抗腫瘤藥物載體，可與腫瘤細(xì)胞膜上的白蛋白受體Gp60結(jié)合，顯著提高腫瘤細(xì)胞中藥物的分布，為其腫瘤靶向性提供了可能。目前，對于白蛋白在藥物遞送系統(tǒng)中的應(yīng)用主要集中于以下兩個(gè)方面①制備白蛋白納米粒作為藥物載體。CN1994291A公開的乳化加熱固化法制備白蛋白納米粒，需使用油、表面活性劑及較高的溫度(100~120°C)，且需使用大量有機(jī)溶劑洗除油性殘余物和表面活性劑，不僅易引起有機(jī)溶解的殘留，為納米粒的純化帶來困難，另外，加熱對于熱不穩(wěn)定的藥物也不利。CN1306955C公開的乳化化學(xué)交聯(lián)法不僅使用有機(jī)溶劑或油，而且使用較多的化學(xué)交聯(lián)劑如甲醛、戊二醛等，其殘留也將給制劑的使用帶來安全隱患。ArnedoA等(IntJPharm.2002,244(1-2):59-72)報(bào)道的凝聚-化學(xué)交聯(lián)法，除了使用化學(xué)交聯(lián)劑的缺陷外，粒徑同樣較難控制，且需進(jìn)行pH值調(diào)節(jié)，在高濃度蛋白質(zhì)存在條件下，以玻璃電極測定pH值的可靠性有限。EP1348431，CN1448128A公開的紫杉醇白蛋白納米顆粒的制備方法，通過向人血清白蛋白(HSA)與氯仿水溶液中加入粉末狀紫杉醇，得到的混合物進(jìn)行高壓均質(zhì)處理，然后真空蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，此方法可能造成制劑產(chǎn)品有機(jī)溶劑殘留，而且臨床稀釋穩(wěn)定性<24小時(shí)。US5439686、US549842、US5560933公開的采用超聲技術(shù)制備紫杉醇和HSA，得到的納米粒平均粒徑〈10jun，該粒徑不適合于血管內(nèi)給藥。US5916596、US6096331公開的制備方法是分別制備紫杉醇的溶液和含有HSA的水溶液，然后二相混合，高壓下進(jìn)行均質(zhì)處理，蒸去有機(jī)溶劑，過濾，凍干即得。該方法制備的納米粒粒徑0.2nm，放置12h即有沉淀傾向。②通過化學(xué)修飾將藥物化學(xué)鍵合到白蛋白分子鏈上邱曉航等(高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報(bào)，1999,20(7),1073-76)采用活性酯法和混合酸酐法將紫杉醇通過化學(xué)鍵結(jié)合到白蛋白分子鏈上，一個(gè)分子鏈可修飾1~9個(gè)紫杉醇分子，可顯著提高紫杉醇的水溶性?？梢姡壳爸苽浒椎鞍准{米粒的方法不可避免的使用較多的表面活性劑、有機(jī)溶劑、化學(xué)交聯(lián)劑等，而且所形成的納米載體包載藥物有限，穩(wěn)定性不佳。若將藥物化學(xué)鍵合到白蛋白分子鏈上，則存在產(chǎn)品收率低，原料藥損失嚴(yán)重，純化困難等缺陷。本發(fā)明者在CN101220093A公開了一類疏水改性的白蛋白衍生物，即于白蛋白分子鏈上引入一定的疏水基團(tuán)，發(fā)現(xiàn)其在水介質(zhì)中可自組裝為納米膠束，對難溶性藥物有很好的增溶效果，但疏水基團(tuán)的引入增加了白蛋白的免疫原性，如果使用的是非人源性白蛋白，免疫性更強(qiáng)，而不利于用藥的安全。針對以上問題，本專利將利用白蛋白分子鏈上有大量的游離氨基、羧基及巰基，在白蛋白分子鏈中引入合適的親水長鏈和疏水基團(tuán)，該兩親性衍生物具有以下特性1)由于白蛋白衍生物的兩親性性質(zhì)，在水溶液中可自組裝形成納米膠束，避免了有機(jī)溶劑、表面活性劑、交聯(lián)劑或加熱條件的使用；2)在疏水基團(tuán)和白蛋白分子鏈與藥物的雙重作用下，與未修飾的白蛋白相比，兩親性白蛋白可顯著提高藥物的載藥量，穩(wěn)定時(shí)間也非常顯著的延長；3)親水長鏈的引入，可以減少載體的免疫原性，適用于更多的蛋白修飾，另外還可增加納米膠束表面的親水性，從而提高載體在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間，更加有利于其對非吞噬系統(tǒng)組織(比如腫瘤)的靶向性。該類白蛋白自組裝納米膠束尚未見任何文獻(xiàn)和專利報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種生物可降解的白蛋白兩親性衍生物。該衍生物在水介質(zhì)中可自組裝形成納米膠束，可避免化學(xué)交聯(lián)劑、大量有機(jī)溶劑、加熱條件的使用，制備工藝簡單；并可利用白蛋白分子鏈以及疏水基團(tuán)和藥物的雙重作用包載藥物。該載體具有載藥量高、穩(wěn)定性好、免疫原性低、體內(nèi)長循環(huán)的特征。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述載體的制備方法。本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供上述載體在制藥中的應(yīng)用。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供一種新型藥物增溶載體，該載體是在白蛋白分子的游離氨基同時(shí)引入親水長鏈和疏水基團(tuán)，使其具有兩親性性質(zhì)，在水介質(zhì)中可自組裝為納米膠束。所述的藥物增溶載體，其中選用的白蛋白包括人血清白蛋白、牛血清白蛋白、豬血清蛋白。所述的藥物增溶載體，其中親水長鏈為聚乙二醇，分子量500~100000，主要取代在白蛋白的氨基，一個(gè)白蛋白分子鏈引入170個(gè)聚乙二醇親水長鏈。所述的藥物增溶載體，其中疏水基團(tuán)為碳原子數(shù)>2的烷(酰)基或(脫氧)膽酸，主要取代在白蛋白的氨基，一個(gè)白蛋白分子鏈引入170個(gè)垸(酰)基或(脫氧)膽酸。所述的藥物增溶載體的制備方法，包括下列步驟將白蛋白溶于或分散于水或有機(jī)溶劑的混合溶劑中，采用提供親水長鏈的物質(zhì)與白蛋白分子鏈上的氨基、羧基或巰基進(jìn)行取代反應(yīng)，得到親水長鏈修飾的白蛋白衍生物；采用提供疏水基團(tuán)的物質(zhì)進(jìn)一步與白蛋白分子鏈上的氨基或羧基進(jìn)行取代反應(yīng)，所得白蛋白衍生物即具有良好兩親性，在水介質(zhì)中可自發(fā)形成納米膠束。親水長鏈和疏水基的取代反應(yīng)次序可前后顛倒；一個(gè)白蛋白分子鏈上引入l-70個(gè)親水長鏈及l(fā)-70個(gè)疏水基團(tuán)即可。所述的制備方法，其中提供親水基團(tuán)的物質(zhì)是PEG活化物，其中包括PEG活化酯(PEG二氯三嗪衍生物、PEG三氟乙基磺酸酯、PEG琥珀酰亞胺碳酸酯、PEG苯并三唑碳酸酯、PEG對硝基苯碳酸酯、PEG三氯苯碳酸酯、PEG碳酰咪唑酯、PEG琥珀酰亞胺琥珀酸酯)、PEG異氰酸酯化物、PEG醛、PEG羧酸酯、PEG羧基；PEG馬來酰亞胺正己酸酯、PEG馬來酰亞胺、PEG乙酰砜、PEG碘代乙酰胺、PEG正吡啶基二硫化物、PEG鄰吡啶二硫醚；PEG-酰肼；PEG氨基等。所述的制備方法，其中提供疏水基團(tuán)的物質(zhì)是碳原子數(shù)均不小于2的鹵代烴、烷基醛、脂肪酸酐、脂肪酰鹵、脂肪酸和脫氧膽酸及膽酸。所述的藥物增溶載體的應(yīng)用，其特征在于可以用于血管內(nèi)或肌肉注射或口服、腔道或外用的藥學(xué)活性或藥理活性分子的載體。其中該藥學(xué)活性或藥理活性分子主要包括紫杉垸類、環(huán)孢素類、喜樹堿類、黃酮類、二氫吡啶類、小蘗堿類、長春堿類、蒽醌類、鬼臼毒素類抗腫瘤藥、甾體類或非甾體抗炎藥物、心血管藥物、抗生素、抗真菌藥物、抗病毒藥物、免疫調(diào)節(jié)劑中的任一物質(zhì)或其衍生物。該藥物增溶載體的制備方法操作步驟如下兩親性白蛋白衍生物與水按重量比為l50:1000的比例溶解，得到白蛋白衍生物的納米膠束；將治療有效量的難溶或微溶于水的有機(jī)藥物用藥學(xué)上可接受溶劑溶解后，與所述兩親性白蛋白衍生物納米膠束混合后，經(jīng)超聲或高壓均質(zhì)處理，溶液用透析袋透析或蒸餾或超濾等法除去有機(jī)溶劑和小分子，凍干制得粒徑為10~1000nm的納米膠束。具體方案如下在白蛋白的氨基或羧基引入親水長鏈(聚乙二醇)，同時(shí)引入疏水基團(tuán)(烷基或脂肪酰基或(脫氧)膽酸)，使其具有兩親性，在水介質(zhì)中可組裝成膠束，相對疏水的垸基或脂肪?；?脫氧)膽酸聚集成內(nèi)核，親水長鏈形成高度親水性的外殼，具有降低免疫原性、穩(wěn)定膠束、有效躲避生物體網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的捕捉的作用。因此這類高分子材料是一類優(yōu)良的藥物載體，尤其對于難溶性抗腫瘤藥物及其它難溶于水的非抗腫瘤藥物。該衍生物作為藥物載體，粒徑在101000nm可控，表面光滑，均勻度好，顆粒規(guī)則無粘連，再分散性好，載藥量和包封率高。該藥物載體可用于血管內(nèi)或肌肉注射、口服、腔道和外用。生物可降解白蛋申衍生物的合成及藥學(xué)或生理活性組合物制備方法詳細(xì)說明如下一、兩親性白蛋白衍生物的合成兩親性白蛋白衍生物即在白蛋白分子鏈上同時(shí)引入親水長鏈和疏水基團(tuán)，親水長鏈和疏水基團(tuán)的修飾反應(yīng)分別如1、2所示。白蛋白的兩親性修飾選自1中任一反應(yīng)和2中任一反應(yīng)，p和q分別為一個(gè)蛋白分子引入的疏水基團(tuán)和親水長鏈的個(gè)數(shù)，且親水長鏈和疏水基團(tuán)反應(yīng)先后次序不限。1疏水基團(tuán)修飾白蛋白的制備1)與烷基醛反應(yīng)白蛋白配成水溶液，加入烷基醛，反應(yīng)0.58h后，加入NaBH4水溶液，繼續(xù)攪拌12h,HCl液調(diào)pH7，純凈水透析3d，凍干即得烷基修飾的白蛋白。合成路線圖解如下NaBH4「iAL—瑪+M-CHO-AL"^麗一CIVM]p2)與鹵代垸反應(yīng)白蛋白配成水溶液，攪拌下加入鹵代烴，407(TC反應(yīng)412h，調(diào)反應(yīng)液pH7，純凈水透析3d，凍干即得烷基修飾的白蛋白。合成路線圖解如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>3)與酸酐反應(yīng)脂肪酸通過分子間脫水而得到酸酐，將白蛋白分散在一定比例的水和醇混合液中，攪拌下加入脂肪酸酐丙酮溶液，室溫反應(yīng)515h，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，反應(yīng)溶液透析3d，凍干即得烷?；揎椀陌椎鞍?。合成路線圖解如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>4)與酰鹵反應(yīng)脂肪酸與二氯亞砜、三氯化磷、五氯化磷、三溴化磷、五溴化磷中的一種反應(yīng)，制得脂肪酰鹵。將白蛋白分散在二甲亞砜中，攪拌下低價(jià)脂肪酰鹵，4050'C反應(yīng)512h，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，反應(yīng)溶液透析袋透析3d，凍干即得燒?；揎椀陌椎鞍住：铣陕肪€圖解如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>5)與脂肪酸反應(yīng)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>方法l:白蛋白配成水溶液，加入脂肪酸，加入EDC催化劑，反應(yīng)l24h,NaOH調(diào)節(jié)pH7，反應(yīng)液透析3d,凍干即得烷?；揎椀陌椎鞍?。方法2:在DCC催化下制備脂肪酸N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活性酯，加入白蛋白溶液，反應(yīng)l24h，NaOH調(diào)節(jié)pH7，反應(yīng)液透析3d,凍干即得烷?；揎椀陌椎鞍?。合成路線圖解如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>6)與烷基胺反應(yīng)方法l:白蛋白配成水溶液，加入烷基胺，加入EDC催化劑，反應(yīng)l24h,NaOH調(diào)節(jié)pH7，反應(yīng)液透析3d，凍干即得垸?；揎椀陌椎鞍?。方法2:在DCC催化下制備白蛋白NHS活性酯，加入垸基胺，反應(yīng)l24h，NaOH調(diào)節(jié)pH7，反應(yīng)液透析3d，凍千即得烷?；揎椀陌椎鞍?。合成路線圖解如下NHS,DCCAL—COOH+M—NH2-^-AL~^CO—NH-M]orEDCP7)脫氧膽酸修飾白蛋白的制備方法l:白蛋白配成水溶液，加入脫氧膽酸，加入EDC催化劑，反應(yīng)l24h，調(diào)節(jié)pH7，反應(yīng)液透析3d，凍干即得脫氧膽酸修飾白蛋白。方法2:在DCC催化下制備脫氧膽酸NHS活性酯，加入白蛋白溶液，反應(yīng)l~24h，調(diào)pH7，反應(yīng)液透析3d，溶液凍干即得脫氧膽酸修飾白蛋白。合成路線圖解如下AL—NH:8)膽酸修飾白蛋白的制備方法1:白蛋白配成水溶液，加入膽酸，加入EDC催化劑，反應(yīng)l~24h，NaOH調(diào)節(jié)pH7，反應(yīng)液透析3d，凍千即得膽酸修飾白蛋白。方法2:在DCC催化下制備膽酸NHS活性酯，加入白蛋白溶液，反應(yīng)l24h，調(diào)pH7，反應(yīng)液透析3d，溶液凍干即得膽酸修飾白蛋白。合成路線圖解如下:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>2親水長鏈修飾白蛋白采用活化PEG和白蛋白的氨基、羧基或巰基發(fā)生取代反應(yīng)。1)與PEG醛反應(yīng)將白蛋白溶于緩沖液中，加入PEG醛，反應(yīng)0.58h后，加入NaCNBH4水溶液，繼續(xù)攪拌12h,HCl液調(diào)pH7，反應(yīng)液透析或經(jīng)離子交換柱純化，凍干即得PEG修飾的白蛋白。合成路線圖解如下-<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>2)與PEG二氯三嗪衍生物反應(yīng)將白蛋白溶于緩沖液中，加入PEG二氯三嗪衍生物，反應(yīng)1224h，反應(yīng)液透析或經(jīng)離子交換柱純化，凍干即得PEG修飾的白蛋白.。合成路線圖解如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>3)與PEG三氟乙基磺酸酯反應(yīng)將白蛋白溶于緩沖液中，加入PEG三氟乙基磺酸酯，反應(yīng)0.512h后，加入甘氨酸或L-賴氨酸等終止反應(yīng)，反應(yīng)液透析或經(jīng)離子交換柱純化，凍干即得PEG修飾的白蛋白。合成路線圖解如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>將白蛋白溶于緩沖液中，加入PEG琥珀酰亞胺碳酸酯，反應(yīng)0.512h后，加入甘氨酸或L-賴氨酸等終止反應(yīng)，反應(yīng)液透析或經(jīng)離子交換柱純化，凍干即得PEG修飾的白蛋白。合成路線圖解如下OIIPEG—0—C—O—N+AL—NH2OIIPEG_0—C—NH-陽ALq5)與PEG苯并三唑碳酸酯反應(yīng)將白蛋白溶于緩沖液中，加入PEG苯并三唑碳酸酯，反應(yīng)0.512h后，加入甘氨酸或L-賴氨酸等終止反應(yīng)，反應(yīng)液透析或經(jīng)離子交換柱純化，凍干即得PEG修飾的白蛋白。合成路線圖解如下OPEG—O—C—0~N丄+AL—NH2OIIPEG—O—C—NH—ALq6)與PEG對硝基苯碳酸酯反應(yīng)將白蛋白溶于緩沖液中，加入PEG對硝基苯碳酸酯，反應(yīng)0.512h后，加入甘氨酸或L-賴氨酸等終止反應(yīng)，反應(yīng)液透析或經(jīng)離子交換柱純化，凍干即得PEG修飾的白蛋白。合成路線圖解如下OIIPEG_0—C—O么》NO，+AL—NH2OIIPEG—O—C—N葉AL7)與PEG三氯苯碳酸酯反應(yīng)將白蛋白溶于緩沖液中，加入PEG三氯苯碳酸酯，反應(yīng)0.512h后，加入甘氨酸或L-賴氨酸等終止反應(yīng)，反應(yīng)液透析或經(jīng)離子交換柱純化，凍干即得PEG修飾的白蛋白。合成路線圖解如下oIIPEG—O—C一O+AL—NH2OIIPEG—O—C一NH--AL」q8)與PEG碳酰咪唑酯反應(yīng)將白蛋白溶于緩沖液中，加入PEG碳酰咪唑酯，反應(yīng)12~72h，反應(yīng)液透析或經(jīng)離子交換柱純化，凍干即得PEG修飾的白蛋白。合成路線圖解如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>9)與PEG琥珀酰亞胺琥珀酸酯反應(yīng)將白蛋白溶于緩沖液中，加入PEG琥珀酰亞胺琥珀酸酯，反應(yīng)0.512h后，加入甘氨酸或L-賴氨酸等終止反應(yīng)，反應(yīng)液透析或經(jīng)離子交換柱純化，凍干即得PEG修飾的白蛋白。合成路線圖解如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>OOIIIIPEG—0~C—CH2CH2—C—NH+ALq10)與PEG酰肼反應(yīng)方法l:將白蛋白配溶于緩沖液中，加入PEG酰肼，在EDC催化下，反應(yīng)1~24h，調(diào)節(jié)pH7，反應(yīng)液透析或經(jīng)離子交換柱純化，凍干即得PEG修飾的白蛋白。方法2:在DCC催化下白蛋白上羧基與N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)生成活性酯，加入PEG酰肼，反應(yīng)0.512h，調(diào)節(jié)pH7，反應(yīng)液透析或經(jīng)離子交換柱純化，凍干即得PEG修飾的白蛋白。合成路線圖解如下OIIPEG—C—NH—CH2-NH2+AL—COOHNHS,DCCorEDCOOIIIIPEG—C—NH—CH2-NH—0|"AL11)與PEG馬來酰亞胺反應(yīng)將白蛋白溶于緩沖液中，加入PEG馬來酰亞胺，反應(yīng)0.512h，反應(yīng)液透析或經(jīng)離子交換柱純化，凍干即得PEG修飾的白蛋白。合成路線圖解如下13<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>12)與PEG乙烯基砜反應(yīng)將白蛋白溶于緩沖液中，加入PEG乙烯基砜，反應(yīng)0.512h，反應(yīng)液透析或經(jīng)離子交換柱純化，凍干即得PEG修飾的白蛋白-。合成路線圖解如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>13)與PEG吡啶二硫醚反應(yīng)將白蛋白溶于緩沖液中，加入PEG吡啶二硫醚，反應(yīng)0.512h，反應(yīng)液透析或經(jīng)離子交換柱純化，凍干即得PEG修飾的白蛋白。合成路線圖解如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>二、白蛋白納米膠束的制備方法按每1ml水中溶解330mg的兩親性白蛋白衍生物的比例，將制得的兩親性白蛋白衍生物溶于水中，經(jīng)超聲或高壓均質(zhì)處理，制備成粒徑為lCK1000nm的白蛋白膠束。三、以白蛋白衍生物作為載體，制備含難溶藥物的藥物組合物白蛋白兩親性衍生物溶于水，濃度0.1%~5%(w/w),將難溶性藥物如紫杉醇用適當(dāng)溶劑溶解，經(jīng)超聲或高壓均質(zhì)處理，通過透析或減壓蒸餾或超濾的方法除去有機(jī)溶劑及小分子，制得粒徑為10~1000nm的納米膠束。所謂適當(dāng)溶劑，指藥學(xué)上使用的能溶解該藥物的溶劑。四、采用白蛋白衍生物作為載體制備藥物組合物，可對藥物有效負(fù)載。可使用該兩親性白蛋白衍生物作為載體的藥物有紫杉醇、環(huán)孢素、替尼泊甙、羥基喜樹堿、喜樹堿、長春酰胺、依托泊甙、尼莫地平、阿霉素、多西紫杉醇，燈盞花素、銀杏內(nèi)酯、水飛薊素、柔紅霉素、絲裂霉素、氨甲喋呤、吲哚美辛、布洛芬、酮洛芬、萘普生、硝異梨酯、二氫吡啶、尼莫地平、非諾貝特、伊曲康唑、兩性霉素B、聯(lián)苯雙酯、孕酮、二氫睪酮、氟哌啶醇、利哌利酮等，但并不局限于這些所列藥物。本發(fā)明較現(xiàn)有技術(shù)所具有的優(yōu)點(diǎn)一、自組裝技術(shù)制備白蛋白納米膠束較目前文獻(xiàn)專利報(bào)道的制備白蛋白納米粒的方法，如:乳化熱固化法和乳化化學(xué)交聯(lián)法，可避免交聯(lián)劑和大量有機(jī)溶劑或油的使用，后處理簡單，安全性高。二、較低的臨界膠束濃度(Criticalmic;elleconcentrations,CMC):實(shí)施例18中白蛋白衍生物的CMC皆在l100mg/L范圍內(nèi)，預(yù)示它有極好的稀釋穩(wěn)定性。三、對有機(jī)藥物、水不溶性或難溶性藥物和兩親性藥物具有較好的負(fù)載，例如，對紫杉醇的負(fù)載高達(dá)30.5%(w/w)，對吲哚美辛的負(fù)載高達(dá)16.9%(w/w)，對伊曲康唑的負(fù)載高達(dá)21.9%(w/w)，對尼莫地平的負(fù)載高達(dá)18.9%(w/w)，對環(huán)孢素A的負(fù)載高達(dá)22.2°/。(w/w)，對氟哌啶醇的負(fù)載高達(dá)16.4%(w/w)，對阿奇霉素的負(fù)載高達(dá)16.8%(w/w)。四、良好的穩(wěn)定性實(shí)施例1016中所制備的紫杉醇、吲哚美辛、伊曲康唑、尼莫地平、環(huán)孢素A、氟哌啶醇、阿奇霉素白蛋白納米膠束，稀釋至13mg/ml，置于25t:，穩(wěn)定性分別>3d,其中紫杉醇白蛋白納米粒膠束穩(wěn)定性"d?？梢姡椎鞍啄z束不僅具有極高的載藥量，還具有非常優(yōu)越的穩(wěn)定性。五、低(或無)免疫原性豚鼠過敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，親水長鏈的引入可以大大降低載體的免疫原性，從而可以拓寬白蛋白的可選擇范圍。六、本發(fā)明輔料亦可用于血管內(nèi)或肌肉注射、口服、腔道或外用。本載體材料具有高度安全性，比如人血清白蛋白在臨床上作為血漿代用品，單劑量為5g，載體本身粒徑可控制在10~1000nm，不僅可肌肉注射、口服、外用等，還符合靜脈注射要求。親水長鏈的引入可明顯降低材料的免疫原性，提高了用藥的安全性。綜上所述，本發(fā)明用可生物降解的白蛋白作為原料，進(jìn)行化學(xué)結(jié)構(gòu)修飾，在水介質(zhì)中自發(fā)形成納米膠束，在體內(nèi)具有良好的生物相容性、生物可降解性和稀釋穩(wěn)定性，對藥物有較好的負(fù)載。本發(fā)明研究的兩親性白蛋白衍生物，可以在水中自發(fā)形成納米膠束，不但可用于藥物的包載，控制藥物釋放，而且由于其親水的殼和疏水的核組成的納米膠束結(jié)構(gòu)，可以延長體內(nèi)循環(huán)、減少網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞的吞噬，增加腫瘤靶向，達(dá)到減少毒副作用，增加療效的目的。本發(fā)明提供的兩親性白蛋白衍生物的臨界聚集濃度低，載藥量高、藥物包封率高，納米膠束穩(wěn)定。本輔料毒性小、可作為難溶性有機(jī)藥物的載體，以納米級分散體系用于注射、口服和外用。本發(fā)明制備方怯簡單，工藝成熟，適于大規(guī)模連續(xù)生產(chǎn)。圖l:N-辛基-N-聚乙二醇-牛血清白蛋白的粒徑圖譜。圖2:載有紫杉醇的N-辛基-N-聚乙二醇-牛血清白蛋白的粒徑圖譜。具體實(shí)施例方式下面通過實(shí)施例對本發(fā)明加以進(jìn)一步的說明，但下述實(shí)施例并不限制本專利的權(quán)利范圍。實(shí)施例1:N-聚乙二醇-N-辛基人血清白蛋白的制備1)N-聚乙二醇人血清白蛋白的制備lg人血清白蛋白分散在水中，加入13.8g聚乙二醇丙醛(分子量5000)，反應(yīng)2h后，加入NaBH4或NaCNBH3水溶液，繼續(xù)攪拌12h，HC1液調(diào)pH7，蒸餾水透析3d(MWCO1200014000)，凍干即得。元素分析結(jié)果表明一個(gè)白蛋白分子鏈引入了18個(gè)PEG。2)N-聚乙二醇-N-辛基人血清白蛋白的制備lgN-聚乙二醇人血清白蛋白溶于水中，加入0.5g正辛醛，反應(yīng)lh后，加入NaBH4或NaCNBH3水溶液，繼續(xù)攪拌12h，HCl液調(diào)pH7，蒸餾水透析3d(MWCO=12000~14000)，凍干即得。元素分析結(jié)果表明一個(gè)白蛋白分子鏈引入了30個(gè)辛基。實(shí)施例2:N-聚乙二醇-N-辛基牛血清白蛋白的制備反應(yīng)條件同實(shí)施例1，以牛血清白蛋白代替人血清白蛋白。一個(gè)牛血清白蛋白分子引入15個(gè)PEG親水長鏈，引入27個(gè)疏水辛基。實(shí)施例3:N-聚乙二醇-N-辛基豬血清白蛋白的制備反應(yīng)條件同實(shí)施例1，以豬血清白蛋白代替人血清白蛋白。一個(gè)豬血清白蛋白分子引入15個(gè)PEG親水長鏈，引入32個(gè)疏水辛基。實(shí)施例4:N-聚乙二醇-N-辛酰基豬血清白蛋白的制備1)N-辛?；i血清白蛋白3.6g正辛酸(0.05mo1),滴入4ml醋酸酐，12(TC蒸出醋酸，得到正辛酸酐。將豬血清白蛋白lg分散在水/甲醇中，攪拌下滴加正辛酸酐，40'C反應(yīng)8h，反應(yīng)液透析，凍干即得。元素分析測得一個(gè)豬血清白蛋白分子引入24個(gè)疏水辛基。2)N-聚乙二醇-N-辛?；i血清白蛋白反應(yīng)條件同實(shí)施例1中1)，以N-辛?；i血清白蛋白代替豬血清白蛋白，元素分析測得一個(gè)豬血清白蛋白分子引入16個(gè)PEG長鏈。實(shí)施例5:N-聚乙二醇-N-辛基酰胺豬血清白蛋白的制備1)N-辛基酰胺豬血清白蛋白白蛋白配成水溶液，加入正辛胺，加入EDC催化劑，反應(yīng)8h，調(diào)節(jié)pH7，反應(yīng)液透析3d，凍干即得烷基氨酰白蛋白。元素分析測得一個(gè)白蛋白分子鏈引入17個(gè)辛棊。2)N-聚乙二醇-N-辛基酰胺豬血清白蛋白反應(yīng)條件同實(shí)施例1中1)，以N-辛基酰胺豬血清白蛋白代替人血清白蛋白，元素分析測得一個(gè)豬血清白蛋白分子引入16個(gè)PEG長鏈。實(shí)施例6:N-聚乙二醇-N-十二烷基豬血清白蛋白的制備1)N-十二烷基豬血清白蛋白lg豬血清白蛋白溶于水中，加入1.47g十二烷基醛，反應(yīng)lh后，加入NaBH4水溶液，繼續(xù)攪拌12h，HC1液調(diào)pH7，蒸餾水透析3d(MWCO=12000~14000)，凍干即得。元素分析測得一個(gè)白蛋白分子鏈引入28個(gè)十二烷基鏈。2)N-聚乙二醇-N-十二垸基豬血清白蛋白反應(yīng)條件同實(shí)施例1中1),以N-十二烷基豬血清白蛋白代替人血清白蛋白，元素分析測得一個(gè)豬血清白蛋白分子引入15個(gè)PEG長鏈。實(shí)施例7:N-聚乙二醇-N-脫氧膽酸豬血清白蛋白的制備1)N-脫氧膽酸豬血清白蛋白lg豬血清白蛋白配成水溶液，加入脫氧膽酸，加入EDC催化劑，反應(yīng)12h，NaOH調(diào)節(jié)pH7，反應(yīng)液透析3d,凍干即得脫氧膽酸修飾白蛋白。元素分析測得一個(gè)豬血清白蛋白分子鏈引入了6個(gè)脫氧膽酸。2)N-聚乙二醇-N-脫氧膽酸豬血清白蛋白反應(yīng)條件同實(shí)施例1中1)，以N-脫氧膽酸豬血清白蛋白代替人血清白蛋白，元素分析測得一個(gè)豬血清白蛋白分子引入16個(gè)PEG長鏈。實(shí)施例8:N-聚乙二醇-N-膽酸豬血清白蛋白的制備1)N-聚乙二醇豬血清白蛋白反應(yīng)條件同實(shí)施例l中l(wèi)),以豬血清白蛋白代替人血清白蛋白，元素分析測得一個(gè)豬血清白蛋白分子引入15個(gè)PEG長鏈。2)N-聚乙二醇-N-膽酸豬血清白蛋白lg人血清白蛋白配成水溶液，加入膽酸，加入EDC催化劑，反應(yīng)12h，NaOH調(diào)節(jié)pH7，反應(yīng)液透析3d，凍干即得膽酸修飾白蛋白。元素分析測得一個(gè)白蛋白分子鏈引入了6個(gè)膽酸。實(shí)施例9:白蛋白衍生物納米膠束的制備和表征1、白蛋白納米粒的制備實(shí)施例中1-8白蛋白兩親性衍生物40mg溶解在7ml水中于5CTC攪拌2h,然后冰浴下超聲或高壓均質(zhì)后，0.45nm濾膜過濾，即得。2、粒徑Zetasizer3000HSinstrument(MalvernInstruments,Malvern,UK)在633nm、25。C、He-Ne激光測定樣品粒徑，結(jié)果見表l。3、CMC:采用最為靈敏的熒光探針法測定CMC。以芘為熒光探針，芘是一種疏水性芳香化合物，對環(huán)境極性極敏感。當(dāng)兩親性分子的濃度低于CMC時(shí)，溶液中不會形成膠束，芘溶解在極性的水中；隨著兩親性分子的濃度高于CMC，膠束形成。芘相向膠束內(nèi)核的疏水部分分配，從而進(jìn)入非極性環(huán)境，繼而在其熒光廣譜中可以觀察到一系列變化，如熒光強(qiáng)度將增加，放射光譜中振動精細(xì)結(jié)構(gòu)(thevibrationalfinestructureoftheemissionspectra)發(fā)生變化，激光光譜中(0，0)波段紅移。因此，通過以芘的發(fā)射光譜中的h/l3比(在固定的激發(fā)波長下掃描，h、l3分別代表發(fā)射光譜中第一和第三強(qiáng)峰的熒光強(qiáng)度比)或激發(fā)光譜中l(wèi)338/1333比(激發(fā)光譜中波長分別為338nm和333nm的熒光強(qiáng)度比)對兩親分子的濃度作圖即可獲得兩親性分子的表觀CMC，結(jié)果見表1。表l白蛋白衍生物納米膠束的表征白蛋白兩親性衍生物制備工藝粒徑(nm)CMC(mg/L)實(shí)施例1冰浴超聲14235實(shí)施例1高壓均質(zhì)137實(shí)施例2冰浴超聲15428實(shí)施例3冰浴超聲14639實(shí)施例4冰浴超聲17368實(shí)施例5冰浴超聲18674實(shí)施例6冰浴超聲16849實(shí)施例7冰浴超聲171124實(shí)施例8冰浴超聲184106實(shí)施例10:包含紫杉醇兩親性白蛋白衍生物自組裝納米粒組合物的制備和表征1、制備工藝(1)探頭超聲法白蛋白兩親性衍生物51mg溶解在9ml水中攪拌2h。紫杉醇30mg溶解在乙醇(甲醇、乙腈)中。然后二者溶液混合，冰浴超聲30min后，用透析袋(MWCO12000~14000)在蒸餾水中室溫透析2h或減壓蒸除有機(jī)溶劑，離心3000rpm5min，用0.45fxm濾膜過濾，冷凍干燥°(2)高壓均質(zhì)法白蛋白兩親性衍生物51mg溶解在9ml水中攪拌2h。紫杉醇30mg溶解在乙醇(甲醇、乙腈)中。然后二者溶液混合，高壓均質(zhì)，用透析袋(MWCO1200014000)在蒸餾水中室溫透析12h或減壓蒸除有機(jī)溶劑，離心3000rpm5min，用0.45，濾膜過濾，冷凍干燥。(3).溶劑揮發(fā)法白蛋白兩親性衍生物51mg溶解在9ml水中攪拌2h。紫杉醇30mg溶解在氯仿中。然后二者溶液混合，探頭超聲，繼續(xù)攪拌過夜，使氯仿?lián)]發(fā)，離心(3000rpm)5min，用0.45^un濾膜過濾，冷凍干燥。2、兩親性白蛋白衍生物自組裝納米粒中紫杉醇含量的測定用HPLC(LC-2010C,Shimadzu,J鄰an)方法進(jìn)行含量測定。流動相為甲醇:水=75:25(v/v),色譜柱為LichrospherC!s(150x4.6mm)，柱子粒徑為5^mi。流速為1.0mL/min，檢測波長為227nm(SPD-10A，UVdetector,Shimadzu，Japan),柱溫為30°C，注射樣品體積為20^1。以公式(1)計(jì)算樣品的載藥量。。一一"。井汰獸,。八膠束中的藥物量，載藥量(%)=載藥膠束總量x100實(shí)施例1~8載有紫杉醇的白蛋白自組裝納米粒見表2。表2載有紫杉醇的白蛋白自組裝納米粒白蛋白兩親性衍生物制備工藝載藥量(％)實(shí)施例1冰浴超聲30.5實(shí)施例1高壓均質(zhì)28.2實(shí)施例1溶劑揮發(fā)法27.4實(shí)施例2冰浴超聲28.5實(shí)施例3冰浴超聲27.4實(shí)施例4冰浴超聲27.6實(shí)施例5冰浴超聲21.9實(shí)施例6冰浴超聲26.4實(shí)施例7冰浴超聲18.2實(shí)施例8冰浴超聲20.9實(shí)施例11:包含吲哚美辛兩親性白蛋白衍生物自組裝納米粒組合物的制備和表征1、制備工藝白蛋白兩親性衍生物51mg溶解在9ml水中于5(TC攪拌2h。吲哚美辛30mg溶解在乙醇(甲醇、乙腈)中。然后二者溶液混合，冰浴超聲30min后，用透析袋(MWCO12000~14000)在蒸餾水中室溫透析12h或減壓蒸除有機(jī)溶劑，離心3000rpm5min，用0.45pm濾膜過濾，冷凍干燥。2、兩親性白蛋白衍生物自組裝納米粒中吲哚美辛含量的測定用HPLC(LC-2010C，Shimadzu,Japan)方法進(jìn)行含量測定。流動相為甲醇水乙酸=75:25:0.1(v/v)，色譜柱為LichrospherC18(150x4.6mm)，柱子粒徑為5nm。流速為1.0mL/min,檢測波長為260nm(SPD-10A，UVdetector,Shimadzu,Japan),柱溫為25°C，注射樣品體積為20nl。以公式(1)計(jì)算樣品的載藥量。實(shí)施例1~8載有吲哚美辛的白蛋白自組裝納米粒見表3。表3載有吲哚美辛的白蛋白自組裝納米粒<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>實(shí)施例12:包含伊曲康唑兩親性白蛋白衍生物自組裝納米粒組合物的制備和表征.1、制備工藝白蛋白兩親性衍生物51mg溶解在9ml水中于5(TC攪拌2h。伊曲康唑30mg溶解在乙醇(甲醇、乙腈)中。然后二者溶液混合，冰浴超聲30min后，用透析袋(MWCO12000~14000)在蒸餾水中室溫透析12h或減壓蒸除有機(jī)溶劑，離心3000rpm5min，用0.45pm濾膜過濾，冷凍干燥。2、兩親性白蛋白衍生物自組裝納米粒中伊曲康唑含量的測定用HPLC(LC-2010C,Shimadzu,Japan)方法進(jìn)行含量測定。流動相為甲醇:水-75:25(v/v)，色譜柱為LichrospherC18(150x4.6mm)，柱子粒徑為5|im。流速為1.0niL/min,檢測波長為263nm(SPD-1OA,UVdetector,Shimadzu,Japan),柱溫為25°C，注射樣品體積為20pl。以公式(1)計(jì)算樣品的載藥量。實(shí)施例1~7載有伊曲康唑的白蛋白自組裝納米粒見表4。表4載有伊曲康唑的白蛋白自組裝納米粒的表征白蛋白兩親性衍生物制備工藝載藥量(％)實(shí)施例1冰浴超聲21.9實(shí)施例2冰浴超聲18.8實(shí)施例3冰浴超聲19.4實(shí)施例4冰浴超聲16.9<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>實(shí)施例13:包含尼莫地平兩親性白蛋白衍生物自組裝納米粒組合物的制備和表征1、制備工藝白蛋白兩親性衍生物51mg溶解在9ml水中于50'C攪拌2h。尼莫地平30mg溶解在乙醇(甲醇、乙腈)中。然后二者溶液混合，冰浴超聲30min后，用透析袋(MWCO12000—14000)在蒸餾水中室溫透析12h或減壓蒸除有機(jī)溶劑，離心3000rpm5min,用0.45濾膜過濾，冷凍干燥。2、兩親性白蛋白衍生物自組裝納米粒中尼莫地平含量的測定用HPLC(LC-2010C,Shimadzu，Japan)方法進(jìn)行含量測定。流動相為甲醇:水=65:35(v/v)，色譜柱為LichrospherC18(150x4.6mm)，柱子粒徑為5^im。流速為1.0mL/min,檢測波長為237ran(SPD-10A,UVdetector,Shimadzu,Japan)，柱溫為25°C，注射樣品體積為20^1。以公式(1)計(jì)算樣品的載藥量。實(shí)施例1~8載有尼莫地平的白蛋白自組裝納米粒見表5。表5載有尼莫地平的白蛋白自組裝納米粒<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>實(shí)施例14:包含環(huán)孢素A兩親性白蛋白衍生物自組裝納米粒組合物的制備和表征1、制備工藝白蛋白兩親性衍生物51mg溶解在9ml水中于5(TC攪拌2h。環(huán)孢素A30mg溶解在乙醇(甲醇、乙腈、氯仿)中。然后二者溶液混合，冰浴超聲30min后，用透析袋(MWCO1200014000)在蒸餾水中室溫透析12h或減壓蒸除有機(jī)溶劑，離心3000rpm5min，用0.45^irn濾膜過濾，冷凍干燥。2、兩親性白蛋白衍生物自組裝納米粒中環(huán)孢素A含量的測定用HPLC(LC-2010C，Shimadzu,Japan)方法進(jìn)行含量測定。流動相為乙腈:甲醇:水:異丙醇=900:450:50:0,5(v/v),色譜柱為LichrospherC18(150x4.6mm)，柱子粒徑為5j^in。流速為1.0mL/min,檢測波長為225nm(SPD-10A,UVdetector,Shimadzu,Japan),柱溫為7CTC，注射樣品體積為20nl。以公式(1)計(jì)算樣品的載藥量。實(shí)施例1~8載有環(huán)孢素A的白蛋白自組裝納米粒見表6。表6載有環(huán)孢素A的白蛋白自組裝納米粒白蛋白兩親性衍生物制備工藝~載藥量(％)實(shí)施例1冰浴超聲22.2實(shí)施例2冰浴超聲20.1實(shí)施例3冰浴超聲19.5實(shí)施例4冰浴超聲16.3實(shí)施-例5冰浴超聲18.6實(shí)施例6冰浴超聲17.1實(shí)施例7冰浴超聲2.8實(shí)施例8冰浴超聲14.6實(shí)施例15:包含氟哌啶醇兩親性白蛋白衍生物自組裝納米粒組合物的制備和表征1、制備工藝白蛋白兩親性衍生物51mg溶解在9ml水中于5CTC攪拌2h。氟哌啶醇30mg溶解在氯仿中。然后二者溶液混合，冰浴超聲30min后，用透析袋(MWCO1200014000)在蒸餾水中室溫透析12h或減壓蒸除有機(jī)溶劑，離心3000rpm5min，用0.45pm濾膜過濾，冷凍干燥。2、兩親性白蛋白衍生物自組裝納米粒中氟哌啶醇含量的測定用HPLC(LC-2010C，Shimadzu,Japan)方法進(jìn)行含量測定。流動相為乙腈甲醇:0.025mol/L磷酸二氫鉀=45:5:50(v/v)，色譜柱為LichrospherC18(150x4.6mra)，柱子粒徑為5nm。流速為1.0mL/min,檢測波長為248nm(SPD-1OA,UVdetector,Shimadzu,Japan)，柱溫為25°C，注射樣品體積為20^11。以公式O)計(jì)算樣品的載藥量。實(shí)施例18載氟哌啶醇的白蛋白自組裝納米粒見表7。表7載有氟哌啶醇的白蛋白自組裝納米粒白蛋白兩親性衍生物制備工藝~載藥量(％)實(shí)施例1冰浴超聲16.4實(shí)施例2冰浴超聲16.2實(shí)施例3冰浴超聲17.1實(shí)施例4冰浴超聲12.9實(shí)施例5冰浴超聲14.5實(shí)施例6冰浴超聲15.7實(shí)施例7冰浴超聲10.1實(shí)施例8冰浴超聲12.6實(shí)施例16:包含阿奇霉素兩親性白蛋白衍生物自組裝納米粒組合物的制備和表征1、制備工藝白蛋白兩親性衍生物51mg溶解在9ml水中于5(TC攪拌2h。阿奇霉素30mg溶解在氯仿中。然后二者溶液混合，冰浴超聲30min后，用透析袋(MWCO1200014000)在蒸餾水中室溫透析12h或減壓蒸除有機(jī)溶劑，離心3000rpm5min，用0.45jam濾膜過濾，冷凍干燥。2、兩親性白蛋白衍生物自組裝納米粒中阿奇霉素含量的測定用HPLC(LC-2010C,Shimadzu,Japan)方法進(jìn)行含量測定。流動相為乙腈:0.1%三乙胺水溶液-30:70(v/v)，用磷酸調(diào)節(jié)pH至4.0，色譜柱為LichrospherC18(150x4.6mm)，柱子粒徑為5pm，流速為1.2mL/min,檢測波長為205nm(SPD-1OA,UVdetector,Shimadzu，Japan),柱溫為40°C，注射樣品體積為20^1。以公式(1)計(jì)算樣品的載藥量。實(shí)施例1~8載阿奇霉素的白蛋白自組裝納米膠束的理化性質(zhì)見表8。表8載有阿奇霉素的白蛋白自組裝納米粒白蛋白兩親性衍生物制備工藝載藥量(％)實(shí)施例1冰浴超聲16,8實(shí)施例2冰浴超聲14.4買施例3沐浴超戸16.8實(shí)施例4冰浴超聲13.7實(shí)施例5冰浴超聲12.4實(shí)施例6冰浴超聲13.5實(shí)施例7冰浴超聲5.8實(shí)施例8冰浴超聲6.權(quán)利要求1.一種藥物增溶載體，其特征在于該載體是在白蛋白分子的氨基、羧基或巰基引入親水長鏈和疏水基團(tuán)，使其具有兩親性性質(zhì)，在水介質(zhì)中可自組裝為納米膠束。2.根據(jù)權(quán)利1所述的藥物增溶載體，其特征在于，所述白蛋白包括人血清白蛋白、牛血清白蛋白、豬血清蛋白。3.根據(jù)權(quán)利1或2所述的藥物增溶載體,.其特征在于，親水長鏈為聚乙二醇(PEG),分子量500-100000,取代在白蛋白的氨基、羧基或巰基，一個(gè)白蛋白分子鏈引入1~70個(gè)聚乙二醇親水長鏈。4.根據(jù)權(quán)利1或2所述的藥物增溶載體，其特征在于，疏水基團(tuán)為碳原子數(shù)>2的垸(酰)基或(脫氧)膽酸，主要取代在白蛋白的氨基，一個(gè)白蛋白分子鏈引入1~70個(gè)垸(酰)基或(脫氧)膽酸。5.權(quán)利要求1或2所述的藥物增溶載體的制備方法，其特征在于包括下列步驟將白蛋白溶于或分散于水或有機(jī)溶劑的混合溶劑中，采用提供親水長鏈的物質(zhì)與白蛋白分子鏈上的氨基、羧基或巰基進(jìn)行取代反應(yīng)，得到親水長鏈修飾的白蛋白衍生物；采用提供疏水基團(tuán)的物質(zhì)進(jìn)一步與白蛋白分子鏈上的氨基或羧基進(jìn)行取代反應(yīng)，所得白蛋白衍生物即具有良好兩親性，在水介質(zhì)中可自發(fā)形成納米膠束。親水長鏈和疏水基的取代反應(yīng)次序可前后顛倒；一個(gè)白蛋白分子鏈上引入l-70個(gè)親水長鏈及1-70個(gè)疏水基團(tuán)即可。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于提供親水基團(tuán)的物質(zhì)是PEG話化物，包括PEG活化酯(PEG二氯三嗪衍生物、PEG三氟乙基磺酸酯、PEG琥珀酰亞胺碳酸酯、PEG苯丙三唑碳酸酯、PEG對硝基苯碳酸酯、PEG三氯苯碳酸酯、PEG碳酰咪唑酯、PEG琥珀酰亞胺琥珀酸酯)、PEG異氰酸酯化物、PEG醛、PEG羧酸酯、PEG羧基；PEG馬來酰亞胺正己酸酯、PEG馬來酰亞胺、PEG乙酰砜、PEG碘代乙酰胺、PEG正吡啶基二硫化物、PEG二硫吡啶；PEG-酰肼；PEG氨基等。7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于提供疏水基團(tuán)的物質(zhì)是碳原子數(shù)均不小于2的鹵代烴、烷基醛、脂肪酸酐、脂肪酰卣、脂肪酸和脫氧膽酸及膽酸。8.權(quán)利要求1所述的藥物增溶載體的應(yīng)用，其特征在于可以用于血管內(nèi)或肌肉注射或口服、外用的藥學(xué)活性或藥理活性分子的載體。9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用'，其特征在于所述的藥學(xué)活性或藥理活性分子選自紫杉烷類、環(huán)孢素類、喜樹喊類、黃酮類、二氫吡啶類、小蘗堿類、長春堿類、蒽醌類、鬼臼毒素類抗腫瘤藥、甾體類或非甾體抗炎藥物、心血管藥物、抗生素、抗真菌藥物、抗病毒藥物、免疫調(diào)節(jié)劑中的任一物質(zhì)或其衍生物。10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于該藥物增溶載體的制備方法包括以下步驟兩親性白蛋白衍生物與水按重量比為150:1000的比例溶解，得到白蛋白衍生物的納米膠束;將治療有效量的難溶或微溶于水的有機(jī)藥物用藥學(xué)上可接受溶劑溶解后，與所述兩親性白蛋白衍生物納米膠束混合后，經(jīng)超聲或高壓均質(zhì)處理，溶液用透析袋透析或蒸餾或超濾等法除去有機(jī)溶劑和小分子，凍干制得粒徑為10~1000nm的納米膠束。全文摘要本發(fā)明涉及一種生物可降解白蛋白兩親性衍生物及其藥學(xué)組合物。這類衍生物在白蛋白骨架引入親水長鏈聚乙二醇以及烷(酰)基或(脫氧)膽酸，使其具有兩親性，在水中自組裝形成納米膠束，其特征包括1)可通過疏水基團(tuán)和白蛋白分子鏈與藥物的雙重作用將藥物包裹，顯著提高白蛋白包裹藥物的能力；2)親水長鏈既可降低白蛋白免疫原性，又可提高膠束表面親水性，從而提高膠束在水性介質(zhì)中穩(wěn)定性，并在體內(nèi)具有長循環(huán)特征。該輔料可作為有機(jī)藥物、水不溶性或難溶性藥物和兩親性藥物的載體，用于血管內(nèi)或肌肉注射、口服、腔道或外用途徑給藥。本發(fā)明制備方法簡單，工藝成熟，適于大規(guī)模連續(xù)生產(chǎn)。文檔編號A61K47/42GK101543630SQ20091003094公開日2009年9月30日申請日期2009年4月20日優(yōu)先權(quán)日2009年4月20日發(fā)明者周建平,勇張,靜李,霍美蓉,健龔申請人:中國藥科大學(xué)