專利名稱：地榆總皂苷及地榆皂苷i的制備方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及到一種分離純化地榆總皂苷及地榆皂苷I的方法，屬于醫(yī)藥技術(shù)領 域。
背景技術(shù)：
地榆是薔薇科植物，含有鞣質(zhì)、三萜、地榆皂苷等活性成分，具有清熱解毒、抗菌、 抗氧化等多種功效，是醫(yī)藥及化妝品的原料。目前地榆皂苷的提取方法較多，如將地榆粉 末用石油醚脫脂后，用無水乙醇提??；收集提取液，減壓回收；提取物用水溶解，水層用正 丁醇萃取，收集正丁醇層減壓回收得地榆皂苷粗品；粗品用水溶解，加氯化鈉飽和，再用正 丁醇萃取，然后水洗至水層呈淡黃色，收集正丁醇層減壓回收，干燥，暗黃色粉末即為皂苷 精制對照品原春蘭，李宗孝，楊佩云.地榆中熊果酸的提取[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2002， 33(10) :478。該方法采用溶劑萃取法，涉及多種有機溶劑，操作復雜，成本高，生產(chǎn)過程中 危險性高，且仍含有大量鞣質(zhì)，從藥物要求上講，使用過的有機溶劑均需在產(chǎn)物中作限度控 制，生產(chǎn)上難度加大。王滿力等報道了先將干燥地榆根塊70克，粉碎為粗粉，加入水_乙醇 (3 1)混合液浸泡1-2小時，重復9次，合并浸出液，減壓過液，再通過柱層析分離鞣質(zhì)和 皂甙王滿力等，從地榆提取鞣質(zhì)和皂甙，貴州工學院學報，1993年6月，第22卷第2期，該 法采用的是氧化鋁柱，用泵作動力，操作難度大，且得率為0. 86 %，柱填料價格遠高于本發(fā) 明使用的大孔樹脂，經(jīng)濟性差，大生產(chǎn)困難。申請?zhí)枮镃N200310119248. 1專利申請公開了 地榆總苷提取物新用途及其制備方法，提供了一種升高白細胞的化合物及其總苷混合物， 它是采用地榆，粉碎后用水、甲醇或乙醇，或含水醇類，室溫或加熱提取1-3小時，可重復提 取1-3次，然后濾去藥渣，濾液在常壓或減壓下濃縮至一定濃度，靜置備用；再將提取濃縮 液用聚酰胺柱吸附，然后用濃度為30-90%的乙醇洗脫柱子，洗脫液減壓回收后，可重復用 聚酰胺柱吸附1-3次，得浸膏，經(jīng)真空或冷凍干燥成干粉，該方法制備的地榆總皂苷含量為 總重量的55%。此外，堿性醇沉法也是除鞣質(zhì)常用的方法，“是將中藥的水煎液濃縮加入乙 醇，使其含醇量達80%或更高，冷處放置，濾除沉淀后，用40%氫氧化鈉調(diào)至pH為8，此時鞣 質(zhì)生成鈉鹽且不溶于乙醇而析出，經(jīng)放置，即可濾過除去”。該方法中醇提液的PH值不宜超 過8，否則活性成分容易受到破壞。目前，在生產(chǎn)上沒有一種較好的分離純化較高含量的地榆總皂苷的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了一種獲得高純度地榆總皂苷及地榆皂苷I的方法。本發(fā)明提供了一種分離純化地榆總皂苷的方法，它是按以下步驟進行a、提取地榆藥材用水或醇/水提取1次以上；b、合并提取液，用堿調(diào)節(jié)pH值為10 15，離心，得濾液；c、將濾液過大孔吸附樹脂、先用堿水或水或乙醇液洗脫，再用有機溶劑洗脫，收集 有機溶劑洗脫液、濃縮、靜置，過濾，收集沉淀，即得地榆總皂苷；
或?qū)V液加酸調(diào)pH值為4 6，濃縮至產(chǎn)生析出物，靜置，離心，收集沉淀，干燥，得 地榆總皂苷。其中，a步驟所述的提取是將地榆藥材切斷或打粉后用水或醇/水加熱回流或滲 漉提取，醇/水的濃度是10% v/V 90% v/v。其中，b步驟和c步驟中所述的堿包括氫氧化鈉、氫氧化鈣、氫氧化鎂、氫氧化鉀或 氨水，調(diào)堿的溫度為0-90°C。進一步優(yōu)選地，b步驟所述的堿為氫氧化鈣。其中，c步驟所述的濾液流經(jīng)大孔吸附樹脂柱床的速度為0. 5V柱 5Vtt/小時；堿 水或水的體積為柱體積的2 15倍；乙醇的體積濃度為10-30%。其中，所述的乙醇的體積濃度為30%。其中，c步驟中所述的大孔吸附樹脂柱為非極性和/或弱極性大孔吸附樹脂，包括 苯乙烯骨架組成的樹脂HPD100、HPD300、D101、HPD100A、HPD700、LD140中的一種或兩種以
上混合。其中，步驟c中所述的有機溶劑包括乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷、氯仿、 正丁醇中的一種或兩種以上的混合物或與水的混合物。本發(fā)明還提供了一種制備地榆皂苷I的方法，它是將上述地榆總皂苷經(jīng)重結(jié)晶獲 得，其中，重結(jié)晶所用的溶劑包括甲醇、乙醇、乙酸乙酯、水中的一種或兩種以上的混合物。其中，地榆皂苷I的結(jié)構(gòu)式為地榆皂苷-I 3-0- a -L-阿拉伯糖基-19 a -羥基烏索-12烯_28_羧酸-28-O-0-D-葡萄糖基酯(ziyu-glycosideI)。 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點1、鞣質(zhì)去除較為干凈本方法利用加入堿的辦法，提高了地榆中主要的雜質(zhì)鞣質(zhì) 及多酚類物質(zhì)與皂苷的差異化，鞣質(zhì)及多酚類物質(zhì)在堿性條件下能成鹽，極性變大，不被大 孔吸附樹脂所吸附，而皂苷極性不變，仍能被吸附，因此通過堿液調(diào)節(jié)PH值，更有效的去除 了鞣質(zhì)及多酚類物質(zhì)；2、采用堿性醇沉法除鞣質(zhì)，pH為8時，在此條件下地榆總皂苷提取物中鞣質(zhì)完 全不能去除，皂苷的含量極低，在10%左右；本發(fā)明使用的地榆提取后，用堿調(diào)節(jié)pH值為 10 15的堿性醇沉法，突破了現(xiàn)有技術(shù)中堿性醇沉法去除鞣質(zhì)時pH值不宜過高(不超過 8)的偏見，在不破壞地榆總皂苷類成分結(jié)構(gòu)的情況下成功的分離提取了高含量的地榆總皂 苷；3、總皂苷富集度高經(jīng)此調(diào)堿處理后，富集物中的皂苷含量大大提高，約提高 20倍，洗脫下柱后經(jīng)濃縮、靜置析出地榆總皂苷，再經(jīng)重結(jié)晶獲得地榆皂苷I的含量大于 98% ；4、本發(fā)明工藝操作簡便，效率高，地榆總皂苷得率在3.0%以上。
4
5、成本低本發(fā)明方法克服了以前只能在實驗室利用硅膠分離柱小量制備地榆 總皂苷的缺陷，且較氧化鋁柱分離法大大降低了成本，柱床本身價格便宜，且可反復再生使用。6、為地榆總皂苷的工業(yè)化生產(chǎn)提供了一種新的分離純化方法。顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離 本發(fā)明的上述基本技術(shù)思想前提下，還可以作出其它多種形式的修改、替換和變更。以下通過實施例形式的具體實施方式
，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進一步的詳細說 明。但不應該將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi) 容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
具體實施例方式實施例1 地榆總皂苷的制備地榆飲片30kg，加入30%乙醇240L加熱回流提取lh，濾渣再用180L30%乙醇加 熱回流提取lh，合并濾液，加入600L水稀釋，攪拌下加入氫氧化鈉溶液(3. 5kg氫氧化鈉溶 于24L水中)，調(diào)pH值為14. 2，靜置，離心得濾液，通過D101型大孔吸附樹脂，流速為1. 5 柱體積/h，上完藥液后再用4個柱體積30 %乙醇洗脫，然后再用水洗脫至流出液無色，最后 用3倍柱床體積的70%乙醇洗脫，收集70%乙醇流出液，真空濃縮至有一定量物質(zhì)析出后， 停止?jié)饪s，靜置2小時以上，減壓抽濾，用40 %乙醇洗滌，抽干，取出濾餅，真空干燥，粉碎， 得地榆總苷粉末1. 05kg,收率為3. 50%。經(jīng)比色法檢測，地榆總皂苷含量為87%，經(jīng)高效液 相色譜檢測地榆皂苷I的含量為70%，較提取液固形物中的含量提高了 20倍。實施例2 地榆總皂苷的制備地榆飲片30kg，加入60%乙醇300L加熱回流提取lh，濾過得濾液，加入450L水稀 釋，攪拌下加入氫氧化鉀溶液(2. 5kg氫氧化鈉溶于25L水中)調(diào)pH值是10. 5，靜置，離心 得濾液，通過大孔吸附樹脂HPD100，流速為1. 2柱體積/h，上完藥液后再用水洗脫至流出液 無色，然后用4倍柱床體積的丙酮洗脫，收集丙酮洗脫液，真空濃縮，真空烘箱干燥，粉碎， 得地榆總苷粉末1. 09kg，收率為3. 63%，經(jīng)比色法檢測，地榆總皂苷含量為71%，經(jīng)高效液 相色譜檢測地榆皂苷I的含量為43%，較提取液固形物中的含量顯著提高。實施例3 地榆總皂苷的制備地榆飲片30kg，加入45%乙醇240L加熱回流提取lh，濾渣再用180L30%乙醇加 熱回流提取lh，合并濾液，加入600L水稀釋，攪拌下加入氫氧化鈣混懸液(3kg氫氧化鈣懸 于30L水中)調(diào)pH值14，靜置，濾過得濾液，通過大孔吸附樹脂D101，流速為1.8柱體積/ h，藥液上完后再用4個柱體積1.0%氫氧化鈉溶液洗脫，接著再用水洗脫至流出液無色，然 后用3倍柱床體積的30%乙醇洗脫，最后用3倍柱床體積的75%乙醇洗脫，收集75%乙醇 洗脫液，真空濃縮，至無醇味，剩余濃縮物真空烘箱干燥，粉碎，得地榆總苷粉末1. 01kg,收 率為3. 37%。經(jīng)比色法檢測，地榆總皂苷含量為79%，經(jīng)高效液相色譜檢測地榆皂苷I的 含量為58%，較提取液固形物中的含量提高了 10多倍。實施例4 地榆總皂苷的制備地榆飲片30kg，加入450L水加熱回流提取lh，濾渣再用300L水加熱回流提取lh， 濾渣再用300L水加熱回流提取lh，合并濾液，攪拌下加入氫氧化鈣混懸液(2kg氫氧化鈣懸于20L水中)調(diào)pH值13，靜置，離心得濾液，用適量2M的鹽酸調(diào)pH至4 6，真空濃縮至 產(chǎn)生析出物(約50 60L體積)，放出，靜置2h以上，離心，收集沉淀，真空烘箱干燥，粉碎， 得地榆總苷粉末，經(jīng)比色法檢測，地榆總皂苷含量為53%，經(jīng)高效液相色譜檢測地榆皂苷I 的含量為39%，較提取液固形物中的含量顯著提高。實施例5 地榆皂苷I的制備將上述實施例1所得地榆總苷粉末用無水乙醇(lg 5ml)加熱回流lOmin，趁 熱過濾，待濾液冷至室溫，攪拌下滴加水，至出現(xiàn)渾濁，且不消失，停止，靜置12h，抽濾，用 30%乙醇洗滌沉淀，收集，真空干燥，粉碎，得第一次重結(jié)晶產(chǎn)物。再反復重結(jié)晶一至兩次， 得地榆皂苷I，經(jīng)高效液相色譜檢測地榆皂苷I的純度為99. 2%。實施例6 地榆皂苷I的制備將上述實施例2例所得地榆總苷粉末，用甲醇(lg 5ml)加熱回流lOmin，趁熱過 濾，待濾液冷至室溫，攪拌下滴加水，至出現(xiàn)渾濁，且不消失，停止，靜置12h，抽濾，用30% 乙醇洗滌沉淀，收集，真空干燥，粉碎，得第一次重結(jié)晶產(chǎn)物。再反復重結(jié)晶一至兩次，得地 榆皂苷I，經(jīng)高效液相色譜檢測地榆皂苷I的純度為99. 4%。實施例7本發(fā)明地榆總皂苷的制備方法與專利公開的方法的對比實驗專利申請?zhí)?00310119248. 1中涉及地榆總皂苷的含量低于本發(fā)明中制備得到的 總皂苷，關(guān)鍵在于柱前堿的運用，提高了鞣質(zhì)和皂苷的差異化。對比試驗數(shù)據(jù)如下 該試驗充分證明本發(fā)明方法明顯優(yōu)于對比專利公開的方法，通過堿與大孔吸附樹 脂的聯(lián)用大大的提高了地榆中總皂苷及皂苷I的含量，顯著地降低了主要的雜質(zhì)鞣質(zhì)的含量。
權(quán)利要求
一種分離純化地榆總皂苷的方法，其特征在于按以下步驟進行a、提取地榆藥材用水或醇/水提取1次以上；b、合并提取液，用堿調(diào)節(jié)pH值為10～15，離心，得濾液；c、將濾液過大孔吸附樹脂，先用堿水或水或乙醇液洗脫，再用有機溶劑洗脫，收集有機溶劑洗脫液、濃縮、靜置，過濾，收集沉淀，即得地榆總皂苷；或?qū)V液加酸調(diào)pH值為4～6，濃縮至產(chǎn)生析出物，靜置，離心，收集沉淀，干燥，得地榆總皂苷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的地榆總皂苷的制備方法，其特征在于a步驟所述的提取是 將地榆藥材切斷或打粉后用水或醇/水加熱回流或滲漉提取，醇/水的濃度是10% ν/ν 90% ν/ν。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的地榆總皂苷的制備方法，其特征在于b步驟和c步驟中所述 的堿包括氫氧化鈉、氫氧化鈣、氫氧化鎂、氫氧化鉀或氨水，調(diào)堿的溫度為0-90°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的地榆總皂苷的制備方法，其特征在于b步驟所述的堿為氫氧 化鈣。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的地榆總皂苷的制備方法，其特征在于c步驟所述的濾液流經(jīng) 大孔吸附樹脂柱床的速度為0. 5Vtt 5Vtt/小時；堿水或水的體積為柱體積的2 15倍； 乙醇的體積濃度為10-30%。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的地榆總皂苷的制備方法，其特征在于所述的乙醇的體積濃 度為30%。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的地榆總皂苷的制備方法，其特征在于c步驟中所述的大孔 吸附樹脂柱為非極性和/或弱極性大孔吸附樹脂，包括苯乙烯骨架組成的樹脂HPD100、 HPD300、DlOl、HPD100A、HPD700、LD140 中的一種或兩種以上混合。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的地榆總皂苷的制備方法，其特征在于步驟c中所述的有機 溶劑包括乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷、氯仿、正丁醇中的一種或兩種以上的混合 物或與水的混合物。
9.一種制備地榆皂苷I的方法，它是將權(quán)利要求1制備的地榆總皂苷經(jīng)重結(jié)晶獲得，其 中，重結(jié)晶所用的溶劑包括甲醇、乙醇、乙酸乙酯、水中的一種或兩種以上的混合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用堿性藥液通過大孔樹脂分離純化地榆總皂苷及地榆皂苷I的方法。它以中藥地榆為原料，切斷后經(jīng)水或乙醇/水熱回流提取或滲漉1次以上，提取液經(jīng)堿處理調(diào)pH值為10～15；過濾后經(jīng)大孔吸附樹脂吸附分離，并用堿水或水及約30％乙醇液洗脫，除去雜質(zhì)，最后用有機溶劑解吸附洗脫，減壓濃縮洗脫液、濃縮、靜置，過濾，收集沉淀，即得地榆總皂苷；或直接堿用沉淀，濾過后，調(diào)藥液pH至4～6，濃縮回收乙醇；靜置析出獲得地榆總苷混合物，洗脫后的樹脂用有機溶劑沖洗后復用；地榆總苷混合物再經(jīng)醇水重結(jié)晶可獲得含量98％以上的地榆皂苷I。該方法將皂苷與其它雜質(zhì)分離和提取出來，成本低廉、高效、簡便、適合工業(yè)化生產(chǎn)，可獲得高純度的地榆總皂苷及地榆皂苷I。
文檔編號A61K36/739GK101862385SQ200910082470
公開日2010年10月20日 申請日期2009年4月20日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月20日
發(fā)明者劉智勇, 姬建新, 李伯剛, 李啟發(fā), 白紅艷, 陳洪超, 黎秀麗 申請人:成都地奧制藥集團有限公司