專利名稱：：三七莖葉制備人參皂甙Rh2、Rg3的工藝方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及植物藥用有效成份提取工藝方法，具體涉及利用三七莖葉為原料制備人參皂甙Rh2、Rg3的方法。
背景技術(shù)：
：人參是馳名世界的中藥，早在4000多年前，我們的祖先就利用人參防治疾病了，上世紀(jì)90年代初，日本學(xué)者北川勛發(fā)現(xiàn)人參中的一種活性物質(zhì)一人參皂甙Rg3具有選擇性地抑制腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的作用。人參中共有40多種皂甙，但Rg3在新鮮的或自然干燥的人參藥材中并不存在，在紅參中的含量?jī)H為十萬(wàn)分之三。人參皂甙Rg3不僅具有防癌和抗癌的作用，還有提高免疫、保肝、抗疲勞、保護(hù)腦神經(jīng)細(xì)胞及抗血栓等藥理作用。隨著對(duì)人參研究的深入，日本學(xué)者首次從紅參中發(fā)現(xiàn)了人參皂甙Rh2。這種皂甙是一種次生甙，是鮮人參加工制成紅參時(shí)，由于某些二醇組皂甙受熱降解后生成的，其在紅參中的含量約在十萬(wàn)分之一左右。Rh2在十年前就被發(fā)現(xiàn)有抗癌活性，但是由于含量太少、提取不易、價(jià)格昂貴，因此一直未被利用。隨著臨床試驗(yàn)結(jié)果陸續(xù)被報(bào)導(dǎo)出來(lái)，Rh2對(duì)于抗癌的療效極為驚人的滿意，被視為當(dāng)今最具潛力的天然抗癌物質(zhì)。研究證明Rh2對(duì)癌細(xì)胞有抑制及抗轉(zhuǎn)移的效果，而且效果非常明顯。Rh2不但具有抑制所有癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、誘導(dǎo)分化癌細(xì)胞和抗轉(zhuǎn)移的功能，同時(shí)對(duì)人體無(wú)毒性。Rh2使癌細(xì)胞核枯萎、死亡的作用，不同于任何放化療方法及藥物。Rh2對(duì)人體尚有非常優(yōu)秀的提升各種免疫機(jī)能的作用，對(duì)人體健康細(xì)胞毫無(wú)毒副作用，只專攻擊癌細(xì)胞。三七[Panaxnotoginseng(BurK.)F.H.Chen]與人參同為五加科人參屬植物，有研究表明，三七莖葉也是人參皂甙_Rh2和人參皂甙Rg3的重要來(lái)源。據(jù)初步調(diào)查，目前每年采收的三七莖葉僅有約5%被利用，主要用于制備其它藥物的原料用途和制備化妝品等等，有一部分用于制備袋泡茶飲品，滋補(bǔ)養(yǎng)身，而大部分三七莖葉資源被丟棄。因此對(duì)三七莖葉的有效利用，從中提取寶貴的人參皂甙Rh2和人參皂甙Rg3，造福人類，具有很重要的現(xiàn)實(shí)意義。2004年2月出版的《化學(xué)研究與應(yīng)用》第16卷第1期“三七葉甙制備抗癌活性成分20(R)-人參皂甙-Rh2和人參皂甙Rg3”，技術(shù)表達(dá)為利用三七葉甙為原料，通過(guò)乙酸水解和柱層析分離得到。其工藝為12克三七葉總甙，加入300毫升50%乙酸水溶液中，70°C水浴加熱6小時(shí)，冷卻，攪拌下加入5%碳酸鈉溶液。過(guò)濾，濾液用正丁醇萃取。沉淀以甲醇-氯仿溶解，進(jìn)行硅膠柱層析，以氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水(2241，下層)洗脫，薄層層析檢查，合并相同組分，得到主含化合物1的組分，再以硅膠柱層析(氯仿-甲醇91)再分離純化等工藝方法。所公開(kāi)的利用三七莖葉為原料提取人參皂甙Rh2及Rg3的方法存在多方面的問(wèn)題，該方法各步驟使用了多種化學(xué)試劑，如碳酸鈉中和酸、正丁醇萃取、甲醇-氯仿溶解、以氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水(2241，下層)洗脫等，這些無(wú)/有機(jī)溶劑將會(huì)部分帶入產(chǎn)品中，影響產(chǎn)品質(zhì)量。工藝較復(fù)雜，成本較高也是客觀存在的。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種以三七莖葉為原料制備人參皂甙Rh2、Rg3的工藝方法，該工藝方法簡(jiǎn)單易行，提純率高，產(chǎn)品質(zhì)量好，符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。工藝流程(1)提取三七葉總皂甙三七莖葉一水煮提取一吸附一洗脫一濃縮一三七葉總皂甙稀浸膏，將三七莖葉加水煎煮提取三次，每次時(shí)間1.5-5小時(shí)，溫度75100°C，提取完畢后過(guò)濾，合并三次濾液上ADS3大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，用水洗滌，10-95%乙醇溶液洗脫，洗脫液減壓濃縮至無(wú)醇味，即得三七葉總皂甙稀浸膏，(2)二醇組皂甙的制備三七葉總皂甙稀浸膏一吸附一洗脫一濃縮一干燥一粉碎一二醇組皂甙，三七葉總皂甙稀浸膏加水1-5倍稀釋，上AB8樹(shù)脂柱吸附，水洗至中性，用70-80%乙醇洗脫，洗脫液濃縮干燥即得二醇組皂甙，(3)酸水解二醇組皂甙一酸水解一吸附一水洗一洗脫一濃縮干燥一含人參皂甙Rg3和人參皂甙Rh2的混合物，將二醇組皂甙進(jìn)行酸水解，酸水解條件如下采用醋酸或草酸或鹽酸或硫酸或磷酸中的一種，其中，以醋酸或草酸為常用，濃度為0.1-lOmol/L，溫度2095°C，時(shí)間1小時(shí)5天，酸水解完畢后，上樹(shù)脂柱AB8吸附，水洗至中性，可以是PH6.5-PH7.5，按濃度由低至高順序用10%至95%乙醇洗脫，洗脫液混合，濃縮干燥，所得產(chǎn)品即為含人參皂甙Rg3和人參皂甙Rh2混合物。二醇組皂甙中Rf2在適宜條件下酸水解轉(zhuǎn)變成Rh2，二醇組皂甙中Rbl、Rb2、Rb3、Re、Rb在適宜條件下酸水解后改變結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化為Rg3。其反應(yīng)式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>RblRl=GLC2-GLCR2=GLC6-GLCRb2Rl=GLC2-GLCR2=GLC6-Ara(P)RcRl=GLC2-GLCR2=GLC6-Ara(+)RdRl=GLC2-GLCR2=GLCRF2Rl=GLCR2=GLC人參皂甙Rh2結(jié)構(gòu)式[結(jié)構(gòu)式]由于其C-20位的空間構(gòu)型不同，人參皂甙Rh2在20位均有兩種構(gòu)型，即20(R)型和20(S)型。結(jié)構(gòu)式如圖<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>20(S)-人參皂甙Rh220(R)-人參皂甙Rh2[分子式]C36H62O8[物理性狀]無(wú)色針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)mp°c218220，比旋度[a]22D(在甲醇中)+21.8(0.93)，紅外光譜、kBr)cnf1:二易溶于甲醇、乙醇等有機(jī)溶劑中。人參皂甙Rg3結(jié)構(gòu)式[結(jié)構(gòu)式]由于其C-20位的空間構(gòu)型不同，人參皂甙Rg3在20位均有兩種構(gòu)型，即20(R)型和20(S)型。其結(jié)構(gòu)式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>20(5)_人參皂甙收220(R)-人參皂甙Rg3[分子式]C42H72O13[物理性狀]無(wú)色針狀結(jié)晶，20(S)-人參皂甙Rg3易溶于甲醇，而20(R)-人參皂甙Rg3難溶于甲醇，易溶于吡啶。從下表可以看出，本發(fā)明的技術(shù)方案所制備的產(chǎn)品符合相關(guān)國(guó)家和行業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量要求。主要技術(shù)指標(biāo)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明，但不限于實(shí)施例。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1、(1)提取三七葉總皂甙三七莖葉一水煮提取一吸附一洗脫一濃縮一三七葉總皂甙稀浸膏，將三七莖葉加水煎煮提取三次，每次時(shí)間2小時(shí)，溫度90°C，提取完畢后過(guò)濾，合并三次濾液上ADS3大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，用水洗滌，70%乙醇溶液洗脫，洗脫液減壓濃縮至無(wú)醇味，即得三七葉總皂甙稀浸膏，(2)二醇組皂甙的制備三七葉總皂甙稀浸膏一吸附一洗脫一濃縮一干燥一粉碎一二醇組皂甙，三七葉總皂甙稀浸膏加水3倍稀釋，上AB8樹(shù)脂柱吸附，水洗至中性，用70%乙醇進(jìn)行洗脫，洗脫液濃縮干燥即得二醇組皂甙，(3)酸水解二醇組皂甙一酸水解一吸附一水洗一洗脫一濃縮干燥一含人參皂甙Rg3和人參皂甙Rh2的混合物，將二醇組皂甙進(jìn)行酸水解，酸水解條件如下采用醋酸濃度為lmol/L，溫度95°C，時(shí)間2小時(shí)，酸水解完畢后，上樹(shù)脂柱AB8吸附，水洗至PH7.0，順序用30%、50%、60%、75%、85%乙醇進(jìn)行洗脫，洗脫液混合，濃縮干燥，所得產(chǎn)品即為含人參皂甙Rg3和人參皂甙Rh2混合物。所得產(chǎn)品Rg3和Rh2含量分別在30%和40%，此產(chǎn)品即為人參皂甙Rg3和Rh2。實(shí)施例2、(1)提取三七葉總皂甙三七莖葉一水煮提取一吸附一洗脫一濃縮一三七葉總皂甙稀浸膏，將三七莖葉加水煎煮提取三次，每次時(shí)間5小時(shí)，溫度75°C，提取完畢后過(guò)濾，合并三次濾液上ADS3大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，用水洗滌，20%乙醇溶液洗脫，洗脫液減壓濃縮至無(wú)醇味，即得三七葉總皂甙稀浸膏，(2)二醇組皂甙的制備三七葉總皂甙稀浸膏一吸附一洗脫一濃縮一干燥一粉碎一二醇組皂甙，三七葉總皂甙稀浸膏加水5倍稀釋，上AB8樹(shù)脂柱吸附，水洗至中性，用80%乙醇進(jìn)行洗脫，洗脫液濃縮干燥即得二醇組皂甙，(3)酸水解二醇組皂甙一酸水解一吸附一水洗一洗脫一濃縮干燥一含人參皂甙Rg3和人參皂甙Rh2的混合物，將二醇組皂甙進(jìn)行酸水解，酸水解條件如下采用草酸濃度為8mol/L，溫度35°C，時(shí)間4天，酸水解完畢后，上樹(shù)脂柱AB8吸附，水洗至PH6.8，順序用10%、60%、80%、95%乙醇進(jìn)行洗脫，洗脫液混合，濃縮干燥，所得產(chǎn)品即為含人參皂甙Rg3和人參皂甙Rh2混合物。所得產(chǎn)品Rg3和Rh2含量分別在30%和40%，此產(chǎn)品即為人參皂甙Rg3和Rh2。經(jīng)按國(guó)家及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)，符合國(guó)家及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。權(quán)利要求三七莖葉制備人參皂甙Rh2、Rg3的工藝方法，其特征在于按以下工藝流程制備(1)提取三七葉總皂甙三七莖葉→水煮提取→吸附→洗脫→濃縮→三七葉總皂甙稀浸膏，將三七莖葉加水煎煮提取三次，每次時(shí)間1.5-5小時(shí)，溫度75～100℃，提取完畢后過(guò)濾，合并三次濾液上ADS3大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，用水洗滌，10-95％乙醇溶液洗脫，洗脫液減壓濃縮至無(wú)醇味，即得三七葉總皂甙稀浸膏，(2)二醇組皂甙的制備三七葉總皂甙稀浸膏→吸附→洗脫→濃縮→干燥→粉碎→二醇組皂甙，三七葉總皂甙稀浸膏加水1-5倍稀釋，上AB8樹(shù)脂柱吸附，水洗至中性，用70-80％乙醇洗脫，洗脫液濃縮干燥即得二醇組皂甙，(3)酸水解二醇組皂甙→酸水解→吸附→水洗→洗脫→濃縮干燥→含人參皂甙Rg3和人參皂甙Rh2的混合物，將二醇組皂甙進(jìn)行酸水解，酸水解條件如下采用醋酸或草酸或鹽酸或硫酸或磷酸中的一種，濃度為0.1-10mol/L，溫度20～95℃，時(shí)間1小時(shí)～5天，酸水解完畢后，上樹(shù)脂柱AB8吸附，水洗至中性，按濃度由低至高順序用10％至95％乙醇洗脫，洗脫液混合，濃縮干燥，所得產(chǎn)品即為含人參皂甙Rg3和人參皂甙Rh2混合物。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三七莖葉制備人參皂甙Rh2、Rg3的工藝方法，其特征在于酸水解選用醋酸或草酸。全文摘要本發(fā)明涉及三七莖葉為原料制備人參皂甙Rh2、Rg3的工藝方法，工藝流程(1)提取三七葉總皂甙三七莖葉→水煮提取→吸附→洗脫→濃縮→三七葉總皂甙稀浸膏；(2)二醇組皂甙的制備三七葉總皂甙稀浸膏→吸附→洗脫→濃縮→干燥→粉碎→二醇組皂甙；(3)酸水解二醇組皂甙→酸水解→吸附→水洗→洗脫→濃縮干燥→含人參皂甙Rg3和人參皂甙Rh2的混合物。該工藝方法簡(jiǎn)單易行，提純率高，產(chǎn)品質(zhì)量好，符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。文檔編號(hào)A61P7/02GK101830957SQ20091009419公開(kāi)日2010年9月15日申請(qǐng)日期2009年3月12日優(yōu)先權(quán)日2009年3月12日發(fā)明者張凱,張吉華申請(qǐng)人:云南黑藥植物科技開(kāi)發(fā)有限公司