專利名稱：：一種含山藥的中藥組合物及其應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種含山藥的中藥組合物，及其在制備防治功能性消化不良藥物中的應用。(二)
背景技術(shù)：
：功能性消化不良(FunctionalDysp印sia，F(xiàn)D)是指具有餐后飽脹不適、早飽、噯氣、惡心、嘔吐、上腹痛或上腹燒灼感等癥狀，經(jīng)檢查排除引起這些癥狀的器質(zhì)性疾病的一組臨床綜合征，羅馬III標準將其分為餐后不適綜合征和上腹疼痛綜合征。其發(fā)病非常普遍，每個人的一生中幾乎都有過消化不良的癥狀。西方國家流行病學研究表明每年有15%20%的人經(jīng)歷過消化不良，國內(nèi)統(tǒng)計占正常人群的18.9%，占消化內(nèi)科病人數(shù)的40%左右，約占胃腸?？崎T診患者的1/3。而且隨著生活節(jié)奏日益加快，其發(fā)病愈來愈廣泛。FD雖然不危及人的生命，卻嚴重影響人們的學習工作和生活質(zhì)量，占用了相當高的醫(yī)療費用。盡管本病預后相對良好，但長期的消化不良會影響患者體質(zhì)，從而使免疫力下降，處于一種亞健康狀態(tài)，易于感染其他疾病，因而此病已逐漸成為現(xiàn)代社會中一個主要的醫(yī)療保健問題。此外，由于FD的發(fā)病機制尚未完全闡明，所以其治療方面尚無特效藥物，西醫(yī)多局限于對癥治療，療效不確切且易產(chǎn)生耐藥和副作用；中藥湯劑雖然療效好，但多為個體化治療方案，不易推廣。因而如何有效防治FD已成為目前臨床和科研的熱點。鑒于這種情況，臨床迫切需要一種既具備中藥的良好療效，又易于進行群體化治療，且服用方便的中成藥。(三)
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的是為了提供一種療效確切、服用方便、藥源豐富、價格低廉，無明顯毒副作用的能有效調(diào)節(jié)胃腸運動功能的含山藥的中藥組合物，以及這種中藥組合取物在制備防治功能性消化不良藥物中的應用。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是—種含山藥的中藥組合物，由質(zhì)量配比如下的組分組成山藥525傷、薏苡仁525份陳皮115份。優(yōu)選的，所述組合物質(zhì)量配比如下山藥10份薏該仁10份陳皮5份。其中山藥味甘，性平，歸脾、肺、腎經(jīng)，具有益氣養(yǎng)陰，補脾益胃之功效。現(xiàn)代藥理研究表明，山藥主要含有薯蕷皂苷元、尿囊素、多糖等成分，能調(diào)節(jié)機體免疫功能及胃腸運動功能。薏苡仁味甘淡，歸脾、胃、肺經(jīng)，具有利水滲濕，健脾益胃，清熱排膿除痹之功效，性微寒而不傷胃，益脾而不滋膩，是清補利濕之佳品。薏苡仁含薏苡仁脂、粗蛋白、脂類，還含葡3聚糖和多種揮發(fā)油，具有增強機體體液免疫、鎮(zhèn)痛、解熱、抗炎等作用。陳皮味苦、辛，性溫，歸肺、脾經(jīng)，具有理氣健脾，燥濕化痰之功效，陳皮主要含有揮發(fā)油、黃酮類、有機胺類及微量元素等成分，具有促進唾液淀粉酶活性，促進小鼠胃排空和腸推進的作用，其揮發(fā)油對消化道有緩和的剌激作用，利于胃腸積氣的排出。三藥合用，清補脾胃，健運中州，條暢氣機。此方組方思想明確，配伍精煉，力專效宏，充分體現(xiàn)了"健脾關(guān)鍵在運脾"主旨，切合胃腸運動功能障礙的主要病機——脾運失健，氣機失調(diào)。其臨床應用多年，在治療功能性消化道疾病上都取得良好的療效。所述中藥組合物的有效成分可按常規(guī)水提醇沉法進行，具體的，所述方法包括取配方量的山藥、薏苡仁和陳皮，加入質(zhì)量為山藥、薏苡仁和陳皮總質(zhì)量1.55倍質(zhì)量的水，回流提取13次、每次0.52小時，合并水提取液，過濾，取濾液減壓濃縮得清膏，清膏攪拌加入8095%(v/v)的乙醇至乙醇終濃度為6070%(v/v)，靜置24小時以上，取上清液，過濾取濾液減壓回收乙醇，濃縮，得中藥提取物。本發(fā)明還涉及所述的中藥組合物在制備防治功能性消化不良藥物中的應用。所述藥物可制成下列之一的劑型①膠囊劑、②顆粒劑、③粉劑、④片劑。功能性消化不良是一種胃腸動力障礙性疾病。其發(fā)病與機體應激能力下降、胃腸激素[如胃動素(MTL)、血管活性腸肽(VIP)、一氧化氮(N0)等]失調(diào)、氧自由基清除系統(tǒng)功能及免疫功能下降密切相關(guān)。本發(fā)明所述的含山藥的中藥組合物不僅能提高機體的應激能力，還對不同狀態(tài)的胃腸運動起不同的調(diào)節(jié)作用即在正常情況下，對胃腸運動具有一定的抑制作用；而對功能性消化不良者，能提高其MTL的含量，使其VIP的含量明顯降低，降低血清中N0含量及N0S活力，降低MDA含量，升高SOD活力，能提高脾臟指數(shù)。通過胃腸激素、氧自由基清除系統(tǒng)及免疫功能多靶點、多途徑達到對功能性消化不良的治療作用。本發(fā)明所述的含山藥的中藥組合物的有益效果主要體現(xiàn)在(l)本發(fā)明提供的組合物配方合理，具有健脾理氣的作用，能有效調(diào)節(jié)胃腸運動功能；(2)能提高機體應激能力；(3)能調(diào)節(jié)功能性消化不良的胃腸激素水平和免疫功能；(4)能提高機體清除氧自由基的能力。具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行進一步描述，但本發(fā)明的保護范圍并不僅限于此實施例1:含山藥的中藥組合提取物的制備1、處方山藥100g薏苡仁100g陳皮50g2、制備方法取上述處方藥材，加水提取2次，第一次加3倍量水，浸泡0.5小時，提取1.5小時，第二次加1.5倍量水，提取1小時，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至0.8g/ml的清膏，取清膏，攪拌加入95%(v/v)的乙醇，使乙醇最終濃度為65%(v/v)，靜置24小時，取上清液，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至每毫升生藥含量12.5g。實施例2:1、處方山藥105g105g40g薏該仁陳皮2、制備方法取上述處方藥材，加水提取2次，第一次加3倍量水，浸泡0.5小時，提取1.5小時，第二次加1.5倍量水，提取1小時，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至0.9g/ml的清膏，取清膏，攪拌加入95%(v/v)的乙醇，使乙醇最終濃度為70%(v/v)，靜置24小時，取上清液，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至每毫升生藥含量12.5g。實施例3:1、處方山藥100g薏該仁95g陳皮55g2、制備方法取上述處方藥材，加水提取2次，第一次加2倍量水，浸泡1小時，提取2小時，第二次加1.5倍量水，提取1小時，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至0.8g/ml的清膏，取清膏，攪拌加入90%(v/v)的乙醇，使乙醇最終濃度為60%(v/v)，靜置24小時，取上清液，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至每毫升生藥含量12.5g。實施例4:1、處方山藥95g薏該仁105g陳皮50g2、制備方法取上述處方藥材，加水提取2次，第一次加3倍量水，浸泡1小時，提取2小時，第二次加2倍量水，提取1小時，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至0.8g/ml的清膏，取清膏，攪拌加入95%(v/v)的乙醇，使乙醇最終濃度為65%(v/v)，靜置24小時，取上清液，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至每毫升生藥含量12.5g。實施例5:含山藥的中藥組合提取物對離體腸運動作用的研究1、實驗動物健康日本大耳白兔，普通級，雌雄不拘，體重22.5Kg，由浙江中醫(yī)藥大學實驗動物研究中心提供。2、實驗藥品與試劑所述組合提取物按照實施例1制備；臺氏液用雙蒸水配成含有NaCl8.0g，KC10.2g，MgS047H200.26g，NaH2P042H200.065g，NaHC03l.Og，CaCl20.20g，葡萄糖1.0g的1000ml溶液，備用；制備臺氏液所用NaCl，KCl，MgS047H20，NaH2P042H20，NaHC03，CaCl2，葡萄糖均為分析純。3、實驗器材微量多導離體器官水平浴槽及配套器材浙江中醫(yī)藥大學實驗動物研究中心提供；MedLab生物信號采集處理系統(tǒng)南京美易科技有限公司；調(diào)節(jié)張力換能器南京免疫公司。4、實驗研究(1)實驗方法取健康家兔，實驗之前禁食24h，自由飲水，擊昏后立即剖開腹腔，找出胃與十二指腸交界處，取出一段十二指腸腸段，找到距回盲部10cm處，取一段回腸，分離腸系膜并用臺氏液將其內(nèi)容物沖洗干凈，分別剪成23cm腸管，保存于低溫(46°C)含混合氣(95%02+5%C02)飽和的臺氏液中，備用。按離體腸平滑肌灌注實驗方法，以自動供氧器持續(xù)供給混合氣(95%02+5%C02)，將腸管一端固定于通氣鉤上，另一端連接固定于張力換能器并引至計算機接口。水浴保持浴槽內(nèi)溫(37±0.5)°C，通入混合氣6080個氣泡/min，標本負荷lg，紙速4mm/min，量程20mv，平衡3045min，標本穩(wěn)定期間每15min換新鮮臺氏液一次。記錄一段正常收縮曲線，開始加入被試藥品。藥物用微量注射器直接加入恒溫浴槽中。每次給藥體積O.lml，每項實驗完畢后，用臺氏液沖洗標本，每次間隔10min，共3次，待腸段收縮穩(wěn)定后才進行下一步實驗。(2)實驗內(nèi)容標本穩(wěn)定lh，產(chǎn)生規(guī)律恒定的自律性后，先記錄對照狀態(tài)平滑肌活動曲線5min，然后在浴槽中加入不同劑量的含山藥的中藥組合提取物，使其終濃度為(0.025g/ml，0.050g/ml，0.100g/ml，0.200g/ml)(以所含生藥量計)，每次加藥后觀察3min，記錄藥物發(fā)生作用的振幅、平均張力和頻率變化。(3)統(tǒng)計方法各項數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差G±S)表示，用SPSS軟件統(tǒng)計包對各組數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。兩組均數(shù)比較用t檢驗，多組間均數(shù)比較用方差分析，均數(shù)間兩兩比較用q檢驗。5、實驗結(jié)果結(jié)果表明，此組合提取物對兔離體十二指腸和回腸自發(fā)運動呈明顯抑制作用，表現(xiàn)為振幅減弱(P<0.01或P<0.05)，緊張性下降(P<0.01或P<0.05)，頻率減慢(P<0.01或P<0.05)，且隨劑量加大，作用加強。(1)對離體十二指腸自發(fā)運動振幅、張力、頻率的影響表1表明，與給藥前相比，組合提取物各劑量組的振幅均明顯降低(P<0.01);各劑量組之間呈明顯的量效關(guān)系，與0.025g/ml組比較，O.050g/ml、0.100g/ml和0.200g/ml組振幅明顯降低(P<0.01);與0.050g/ml組比較，O.100g/ml和0.200g/ml組振幅降低(P<0.01)。與給藥前相比，組合提取物各劑量組的張力均明顯降低(P<0.01或P<0.05);各劑量組之間呈明顯的量效關(guān)系，與0.025g/ml組比較，O.100g/ml和0.200g/ml組張力明顯降低(P<0.01或P<0.05);與O.050g/ml組比較，O.200g/ml組張力降低(P<0.01);與0.100g/ml組比較，O.200g/ml組張力降低(P<0.05)。與給藥前相比，濃度為0.200g/ml組的頻率降低(P<0.05);與0.025g/ml組比較，O.100g/ml和0.200g/ml組頻率明顯降低(P<0.01或P<0.05);與0.050g/ml組比較，O.lOOg/ml和0.200g/ml組頻率降低(P<0.01或P<0.05)。[OO69](2)對離體回腸自發(fā)運動振幅、張力、頻率的影響表2表明，與給藥前相比，各劑量組的振幅均明顯降低(P<0.01或P<0.05);各劑量組之間呈明顯的量效關(guān)系，與0.025g/ml組比較，O.050g/ml、0.lOOg/ml和0.200g/ml組振幅明顯降低(P<0.01);與0.050g/ml組比較，O.lOOg/ml和0.200g/ml組振幅降低(P<0.01或P<0.05)。與給藥前相比，各劑量組的張力均明顯降低(P<0.01或P<0.05);各劑量組之間的量效關(guān)系不明顯(P>0.05)。與給藥前相比，濃度為0.lOOg/ml和0.200g/ml組的頻率明顯降低(P<0.01);與0.025g/ml組比較，O.050g/ml、0.lOOg/ml和0.200g/ml組頻率明顯降低(P<0.01或P<0.05);與0.050g/ml組比較，O.lOOg/ml和0.200g/ml組頻率明顯降低(P<0.01)。6、結(jié)論含山藥的中藥組合提取物對離體十二指腸和回腸運動的振幅、張力、頻率均有明顯的抑制作用，并且呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，表明其在體外對胃腸運動具有調(diào)節(jié)作用。實施例6:含山藥的中藥組合提取物對小鼠胃排空、小腸推進作用的研究1、實驗動物清潔級昆明小鼠60只，雌雄各半，體重1822g，由浙江中醫(yī)藥大學實驗動物研究中心提供。2、實驗藥品所述組合提取物按照實施例1制備；含山藥的中藥組合物煎劑取處方藥材山藥、薏該仁、陳皮(2:2:l)適量，加水提取2次，第一次加3倍量水，浸泡0.5小時，提取1.5小時，第二次加1.5倍量水，提取1小時，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至0.8g/ml的煎劑，備用；香砂六君丸河南省宛西制藥股份有限公司，批號060602，用前用水調(diào)成0.1125g/ml混懸液，備用；自制半固體糊10g羧甲基纖維素，溶于250ml蒸餾水中，分別加入16g奶粉、8g糖、8g淀粉，2g活性炭末，每次加入攪拌均勻，配成300ml約300g的半固體糊，低溫冷藏備用。3、實驗器材小鼠灌胃器、天平、量筒、常規(guī)解剖手術(shù)器械浙江中醫(yī)藥大學實驗動物研究中心提供。4、動物選擇與分組按完全隨機設(shè)計法將60只小鼠分為6組，每組10只。分別為正常對照組、香砂六君丸組、煎劑組、提取物低、中、高劑量組。正常對照組灌服等體積生理鹽水(20ml/kg)，香砂六君丸組灌服香砂六君丸(2.25g/kg)，煎劑組灌服煎劑(20g/kg，以所含生藥量計)，提取物高、中、低劑量組分別灌服提取物5g/kg，10g/kg，20g/kg(以所含生藥量計)，每天1次，每次O.4ml。5、實驗步驟7(1)胃排空實驗將各組動物預養(yǎng)3天，觀察無異常情況后進入正式實驗。各組動物按上述劑量連續(xù)用藥14天后，禁食不禁水12小時，于第15天每鼠灌服自制半固體糊(0.2ml/10g)，半小時后脫頸椎處死動物，剖開腹腔，結(jié)扎胃賁門和幽門，取胃用濾紙拭干后稱全重，然后沿胃大彎剪開胃體，洗去胃內(nèi)容物后拭干，稱胃凈重，以胃全重和胃凈重的差值為胃殘留物重，以此與所給糊重的百分比為胃內(nèi)食物殘存率，進而得出胃排空率。計算公式如下胃排空率(％)=100%_(胃全重-胃凈重)+糊重X100%[OO91](2)小腸推進實驗將胃排空實驗中小鼠的消化道自幽門直至直腸末端完整摘出，不加牽引，自然伸直平鋪，測量幽門至回盲部距離(小腸總長度)，并記錄炭末的前沿到幽門的距離(小腸炭末推進長度)，以下列公式計算炭末推進百分率。小腸推進率(％)=炭末前沿至幽門距離+幽門至回盲部距離X100%6、統(tǒng)計方法各項數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差G±S)表示，用SPSS軟件統(tǒng)計包對各組數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。多組間均數(shù)比較用方差分析，均數(shù)間兩兩比較用q檢驗。7、實驗結(jié)果(1)對小鼠胃排空的影響結(jié)果表明與正常對照組比較，提取物中劑量組和煎劑組胃排空率明顯降低(P<0.01或P<0.05);提取物高劑量組胃排空率明顯高于香砂六君丸組、煎劑組(P<0.01或P〈0.05)提取物各組之間比較，高劑量組胃排空率明顯高于低劑量組和中劑量(P<0.01或P<0.05)。(見表3)(2)對小鼠小腸推進的影響結(jié)果表明與正常對照組比較，各藥物干預組小腸推進率明顯降低(P<0.01和P<0.05);其中提取物高劑量組和香砂六君丸組小腸推進率明顯降低(P〈0.01和P<0.05);提取物高劑量組小腸推進率明顯低于煎劑組(P<0.01);提取物各組之間比較，高劑量組小腸推進率明顯低于低劑量組(P<0.05)。(見表3)表3:各組小鼠胃排空率及小腸推進率的比較組別胃排空率(％)小腸推進率(％)正常對照組10香^f少六君丸組10煎劑組io提取物低劑量組10提取物中劑量組10提取物高劑量組io72.33±10.5562.55±17.7659.04±11.12*61.78±16.2651.54±7.61**74.85±7.45***'79.51±10.1767.29±13參76.73±7.7173.77±11.2271.63±11.8163.32±11.99**"A注與正常對照組比較眾P<0.05，☆☆P<0.01;與香砂六君丸組比較*P<0.05;與煎劑組比較★★P<0.01;與提取物低劑量組比較▲P<0.05;與提取物中劑量組比較■■P<0.01。8、結(jié)論整體實驗表明，含山藥的中藥組合提取物中劑量組能明顯抑制胃排空，高劑量組能抑制小腸推進，提示其可以緩解胃腸道痙攣，降低胃腸道的緊張性，從而調(diào)節(jié)胃腸道的運動。實施例7:含山藥的中藥組合提取物調(diào)整小鼠應激能力的實驗研究1、實驗動物清潔級昆明種小鼠120只，體重20士2g，雌雄各半，浙江中醫(yī)藥大學動物實驗中心提供。2、實驗藥品含山藥的組合提取物按實施例1制備，臨用前用蒸餾水配成濃度分別為0.25g/m1、0.5g/ml、1.Og/ml(以所含生藥量計)的灌胃液，分別為低、中、高劑量藥液；含山藥的組合物煎劑按實施例6中制備方法制備，臨用前用蒸餾水配成濃度為2.Og/ml(以所含生藥量計)的灌胃液；香砂六君丸河南省宛西制藥股份有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品比號050105，臨用前研細用蒸餾水調(diào)成0.2g/ml的灌胃液。鈉石灰上海五四化學試劑有限公司提供，產(chǎn)品編號Q/VAEN1-2006。凡士林南昌白云藥業(yè)有限公司提供，產(chǎn)品批號20080306。3、實驗器材小鼠灌胃器、250ml廣口瓶、秒表、鉛絲、水浴槽、秒表、電子天平等。4、實驗方法(1)動物選擇與分組取清潔級昆明種小鼠120只，雌雄各半，體重20士2g，隨機分為6組正常對照組、香砂六君丸組、煎劑組、提取物低劑量組、提取物中劑量組、提取物高劑量組。9(2)實驗步馬聚常規(guī)飼養(yǎng)3天后，各藥物組按0.2ml/10g體重，分別灌服香砂六君丸混懸液、煎劑、提取物低、中、高劑量藥液，正常對照組給予等量蒸餾水灌胃，每天1次，連續(xù)給藥7天。于末次給藥lh后，各組分別取10只小鼠，將其放入盛有15g鈉石灰的250ml廣口瓶內(nèi)(每瓶1只)，用凡士林涂抹瓶口，蓋嚴，使之不漏氣，開始計時，觀察并記錄小鼠因缺氧而窒息性死亡的時間。此外，各組剩余10只小鼠，每鼠尾部系以體重10%的負荷放入水深30cm、溫度20±2°C的浴槽中游泳，觀察并記錄小鼠嘴部位于水面以下，即出現(xiàn)死亡的時間。5、統(tǒng)計學方法(1)統(tǒng)計描述采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理。數(shù)據(jù)處理計量資料用均數(shù)±標準差G±S)表示；(2)統(tǒng)計推斷數(shù)據(jù)統(tǒng)計采用單因素方差分析。組間兩兩比較，方差齊性時用LSD檢驗，方差不齊時用D皿nettT3檢驗。P<0.05作為差異顯著性標準，P<0.01作為差異非常顯著性標準。6、實驗結(jié)果結(jié)果顯示與正常對照組比較，提取物高、中劑量組小鼠耐缺氧時間明顯延長(P<0.01)，香砂六君丸組和煎劑組小鼠耐缺氧時間延長(P<0.05)。(見表4)結(jié)果顯示與正常對照組比較，提取物高、中劑量組、煎劑組小鼠游泳時間明顯延長(P<0.01)，提取物低劑量組和香砂六君丸組小鼠游泳時間延長(P<0.05)。(見表4)表4:各組小鼠耐缺氧及負重游泳時間比較(；士S，min:s)組另'Jn.耐缺氧時間負重游泳時間正常對照組109.41±2.476.22±0.35香砂、六君丸組1012.24±1.15*7.47±0.28*煎劑組1012.18±1.29*8.9±1.58**提取物低劑量組1011.21±2.498.3±1.55A提取物中劑量組1013.7±2.00^8.46士1.13眾眾提耳又物高劑量組1014.13±2.41*眾8.34±1.51AA注與正常對照組比較眾P<0.05，眾眾P<0.01。7、結(jié)論實驗結(jié)果說明，含山藥的中藥組合提取物能提高小鼠的應激能力，進而可以推測其對FD的防治作用可能是通過提高機體的應激能力來實現(xiàn)的。實施例8:含山藥的中藥組合提取物防治功能性消化不良的實驗研究1、實驗動物清潔級健康成年Wistar大鼠70只，雌雄各半，體重200±20克，浙江中醫(yī)藥大學動物實驗中心提供。2、實驗藥品含山藥的組合提取物按實施例1制備，臨用前用蒸餾水配成濃度分別為0.125g/ml、0.25g/ml、0.5g/ml(以所含生藥量計)的灌胃液為低、中、高劑量藥液。含山藥的組合物煎劑按實施例6制備方法制備，臨用前用蒸餾水配成濃度為1.0g/ml(以所含生藥量計)的灌胃液。香砂六君丸河南省宛西制藥股份有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號050105，臨用前研細用蒸餾水調(diào)成O.lg/ml的灌胃液。番瀉葉由浙江省中醫(yī)院中藥房提供，用前用9(TC熱水浸泡兩次，每次30分鐘，合并浸液，制備成生藥濃度為0.3g/ml的番瀉葉浸劑。3、主要實驗試劑及儀器設(shè)備血管活性腸肽(VIP)放免試劑盒北京華英生物技術(shù)研究所提供，批號20081028;胃動素(MTL)放免試劑盒北京華英生物技術(shù)研究所提供，批號20081028;—氧化氮(NO)試劑盒，南京建成生物工程研究所提供，批號20081028;—氧化氮合酶(NOS)試劑盒，南京建成生物工程研究所提供，批號20081028;丙二醛(MDA)試劑盒，南京建成生物工程研究所提供，批號20081028;超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒，南京建成生物工程研究所提供，批號20081028;0.9%氯化鈉注射液，上海百特醫(yī)療用品有限公司提供，批號S0807161;10%水合氯醛浙江省中醫(yī)院藥劑科提供；10%中性甲醛溶液浙江中醫(yī)藥大學動物實驗中心提供；r_911全自動放免計數(shù)儀中國科技大學實業(yè)總公司生產(chǎn)；TGL-16G型高速冷凍離心機上海安亭科學儀器廠生產(chǎn)；FJ-200高速分散均質(zhì)機上海標本模型廠生產(chǎn)；Nikoneslipse80i顯微鏡Nikon公司；STP120型旋轉(zhuǎn)式組織處理機Microm公司；AP280-2型石蠟包埋機Microm公司；DW_FL208型超低溫冰箱中科美菱公司4、動物選擇和分組取清潔級健康成年Wistar大鼠70只，雌雄各半，體重200±20克，隨機分為7組正常對照組、模型對照組、香砂六君丸組、煎劑組、提取物低、中、高劑量組。5、動物造模(1)造模方法除正常對照組外的所有動物參照郭氏適度夾尾剌激法[4]結(jié)合番瀉葉灌胃制造肝郁脾虛型FD模型用夾子夾大鼠尾巴根處，以不破皮為度，令其暴怒而與其它大鼠撕打，從而激怒全籠大鼠，每次連續(xù)不斷地剌激30min，每隔3h剌激1次，每天4次，連續(xù)剌激7天，隨著打斗的加劇，大鼠可能被抓傷，為避免炎癥干擾，可用0.5%的碘伏涂擦受傷部位，控制感染以避免炎癥干擾。與此同時，每天每只大鼠予番瀉葉浸劑2ml灌胃，每日2次，造模7天，造模期間對實驗動物的進食、飲水不予限制。[OH2](2)模型評價造模時通過夾大鼠尾根部的方法激怒全籠大鼠，引發(fā)相互間撕打，打斗后，大鼠前肢離地抬高，豎立對峙，并發(fā)出"呼呼"的怒叫，半小時內(nèi)始終保持暴怒狀態(tài)。造模動物自造模第2天出現(xiàn)進食量減少、排泄物穢臭，第3天起出現(xiàn)煩躁、易怒、肛周污穢，第5天反應遲鈍、喜扎堆、弓背，同時有毛色枯槁，光澤減少，并有緊張、焦慮等反應，第7天進食量已明顯減少。6、藥物干預復制FD動物模型結(jié)束次日起開始灌胃給藥，各組按2ml/100g體重，分別灌服香砂六君丸混懸液、煎劑、提取物低、中、高劑量藥液，正常對照組和模型對照組灌服等量的蒸餾水，每天2次，連續(xù)給藥7天。給藥期間正常進食及飲水。7、觀察指標(1)大體觀察觀察動物的體重、攝食量、被毛狀況、活動狀況、精神狀況及排便狀況等。(2)胃竇組織學觀察給藥第7天后禁食不禁水，于次日用10%水合氯醛(按4ml/kg體重)腹腔注射麻醉，麻醉大鼠后把胃打開，將胃內(nèi)容物沖洗干凈，再用濾紙將胃黏膜表層的水分吸掉，取部分胃竇，立即用生理鹽水沖洗，肉眼初步觀察有無器質(zhì)性病變，如糜爛、出血等，然后用大頭針將標本固定于塑料紙片上，以防其巻曲，10%的中性甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片，HE染色，光學顯微鏡下觀察各組大鼠胃竇一般組織學表現(xiàn)。(3)對胃組織中血管活性腸肽(VIP)含量的影響取靠近幽門的胃組織約100mg，稱重后置于煮沸的生理鹽水中(生理鹽水的體積總量應該是組織塊重量的9倍)煮沸3min，冷卻后分別加入lmol/L冰醋酸0.5ml，用勻漿機勻漿，加lmolNaNaOHO.5ml中和，4"C離心3500r/min，15min，取上清液在-8(TC低溫冰箱內(nèi)保存。按照放射免疫試劑盒說明進行操作，用組織蛋白定量的方式來檢測胃組織中VIP的含量。(4)對空腸組織中胃動素(MTL)含量的影響取上段空腸組織約150mg打開，將內(nèi)容物沖洗干凈，再用濾紙將黏膜表層的水分吸掉，稱重后加入煮沸的生理鹽水中(生理鹽水的體積總量應該是組織塊重量的9倍)煮沸3min，冷卻后加lmol/L冰醋酸0.5ml于勻漿器中制成勻漿，再用lmol/L的NaOH0.5ml中和，4t:離心3500r/min，15min，取上清液-80°〇低溫冰箱內(nèi)保存。按照放射免疫試劑盒說明進行操作，用組織蛋白定量的方式來檢測空腸組織中MTL的含量。(5)對大鼠血清N0、N0S、MDA、SOD含量的影響在灌胃給藥第7天下午予禁食不禁水，于次日用10%水合氯醛(按4ml/kg體重)腹腔注射麻醉，由腹腔下靜脈抽取10ml血液，靜置2h以上，3000r/min離心10min，吸取上清液，移至EP管中，封口，置_801:冰箱中保存待測。按照說明書測定血清N0、N0S、MDA、S0D的含量(6)對大鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、腎上腺指數(shù)的影響取血結(jié)束后，立即取出胸腺、脾臟，腎上腺，用濾紙吸干臟器表面的血水，用電子天平稱重，按公式臟器指數(shù)=臟器重量/體重*1000(單位mg/g)，計算臟器指數(shù)。8、統(tǒng)計學方法(1)統(tǒng)計描述采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理。數(shù)據(jù)處理計量資料用均數(shù)±標準差G±S)表示；(2)統(tǒng)計推斷數(shù)據(jù)統(tǒng)計采用單因素方差分析。組間兩兩比較，方差齊性時用LSD檢驗，方差不齊時用D皿nettT3檢驗。P<0.05作為差異顯著性標準，P<0.01作為差異非常顯著性標準。9、實驗結(jié)果(1)大體觀察正常對照組大鼠飲食、活動、大便性狀及毛發(fā)等均無異常，體重逐漸增加；模型對照組大鼠出現(xiàn)活動減少，毛發(fā)枯槁，弓背，體重明顯下降，食量減少，喜扎堆，大便稀溏等癥狀；提取物高、中、低三組和煎劑組、香砂六君丸組大鼠的一般癥狀及消化道癥狀隨著治療有不同程度的恢復。(2)胃竇組織學觀察肉眼觀察各組動物胃竇組織均無糜爛、出血等器質(zhì)性病變。光學顯微鏡下觀察結(jié)果顯示，胃竇黏膜層次清楚，黏膜上皮細胞排列緊密，無缺損，無潰瘍，固有層腺體未見萎縮。(3)對肝郁脾虛型FD大鼠胃腸激素、氧自由基清除能力及免疫功能的影響與正常對照組比較，模型對照組大鼠胃組織中VIP的含量升高(P<0.05)，MTL的含量降低(P<0.05)，血清中NO含量、NOS活力、MAD含量顯著升高(P<0.01)，SOD活力顯著降低(P<0.01)，脾臟指數(shù)明顯降低(P<0.05)。胸腺指數(shù)和腎上腺指數(shù)差異均無顯著性意義(P>0.05)。與模型對照組比較，組合提取物各劑量組和香砂六君丸組VIP的含量明顯降低(P<0.01或P<0.05)，組合提取物、煎劑和香砂六君丸組MTL的含量明顯升高(P<0.01或P<0.05)，NO含量、NOS活力、MDA含量降低(P<0.01或P<0.05)，SOD活力升高(P<0.01或P<0.05)，脾臟指數(shù)升高(P<0.05)，組合提取物中各指標均以中劑量組較為顯著。與香砂六君丸組比較，提取物低、中劑量組MTL的含量升高(P<0.01或P<0.05)。與煎劑組比較，提取物中劑量組MTL的含量明顯升高(P<0.01)，NO含量明顯降低(P<0.01)。(見表5)10、結(jié)論含山藥的中藥組合提取物可以明顯改善肝郁脾虛型FD大鼠的各種癥狀，提高其空腸組織MTL含量、降低胃組織VIP含量，降低血清NO含量、NOS活力，表明其能有效調(diào)節(jié)肝郁脾虛型FD大鼠分泌紊亂的胃腸激素，促進胃腸動力，改善胃排空延遲引起的FD癥狀。同時，能明顯降低脾虛肝郁型FD大鼠血清MDA含量，提高SOD活力，從而提高機體清除氧自由基的能力，抑制胃腸組織中脂質(zhì)過氧化反應，減少體內(nèi)氧自由基的大量產(chǎn)生，減輕組織細胞受損程度，可能是其防治FD的作用途徑之一。還可提高脾虛肝郁型FD大鼠脾臟重量指數(shù)，提示其能增加FD大鼠免疫器官重量，增強淋巴細胞功能，從而具有調(diào)整免疫機能的作用。13<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>表5:各組大鼠VIP、MTL、NO、NOS、MDA、SOD含量及脾臟指數(shù)的比較(^士S,n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>注與正常對照組比較眾P〈0.05,PO.01;與模型對照組比較A尸〈0.05,AAP<0.01;與香砂六君丸組比較V〈0.05,**P<0.01;與煎劑組比較*/<0.05.★★P<0.01;與提取物低劑量組比較AP〈0.05，AAP0.01。權(quán)利要求一種含山藥的中藥組合物，由質(zhì)量配比如下的組分組成山藥5～25份薏苡仁5～25份陳皮1～15份。2.如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于所述組合物質(zhì)量配比如下山藥10份薏苡仁10份陳皮5份。3.如權(quán)利要求1所述中藥組合物的提取方法，其特征在于所述方法包括取配方量的山藥、薏苡仁和陳皮，加入質(zhì)量為山藥、薏苡仁和陳皮總質(zhì)量1.55倍質(zhì)量的水，回流提取13次、每次0.52小時，合并水提取液，過濾，取濾液減壓濃縮得清膏，清膏攪拌加入8095%的乙醇至乙醇終濃度為6070%，靜置24小時以上，取上清液，過濾取濾液減壓回收乙醇，濃縮，得中藥提取物。4.如權(quán)利要求1所述的中藥組合物在制備防治功能性消化不良藥物中的應用。5.如權(quán)利要求4所述的應用，其特征在于所述藥物制成下列之一的劑型①膠囊劑、②顆粒劑、③粉劑、④片劑。全文摘要本發(fā)明提供了一種含山藥的中藥組合物，由質(zhì)量配比如下的組分組成山藥5～25份，薏苡仁5～25份，陳皮1～15份。本發(fā)明所述的含山藥的中藥組合物的有益效果主要體現(xiàn)在(1)本發(fā)明提供的組合物配方合理，具有健脾理氣的作用，能有效調(diào)節(jié)胃腸運動功能；(2)能提高機體應激能力；(3)能調(diào)節(jié)功能性消化不良的胃腸激素水平和免疫功能；(4)能提高機體清除氧自由基的能力。文檔編號A61K9/16GK101716295SQ200910155748公開日2010年6月2日申請日期2009年12月25日優(yōu)先權(quán)日2009年12月25日發(fā)明者張永生,徐珊,朱飛葉,楊季國申請人:浙江中醫(yī)藥大學