專利名稱：伊維菌素小單室脂質(zhì)體的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種伊維菌素脂質(zhì)體的制備方法。
背景技術(shù)：
伊維菌素(Ivermectin, IVM)是一種新型的由阿維鏈霉菌發(fā)酵產(chǎn)生的半合成大內(nèi)酯抗 生素類驅(qū)蟲藥，對多種寄生蟲均具有驅(qū)殺作用，目前關(guān)于獸用伊維菌素的制劑常見有片劑、 糊劑、注射液、乳劑、噴劑、預(yù)混劑、粉劑等，這些劑型藥效有效期短，需要重復(fù)給藥，不 僅增加了勞動成本和對動物的應(yīng)激，同時也容易產(chǎn)生耐藥性，甚至導(dǎo)致中毒，長期使用在動 物組織中產(chǎn)生的蓄積性殘留對生態(tài)平衡有著不容忽視的影響，對人類的身體健康亦不利，因 而有必要開發(fā)長效緩釋和控釋制劑，而現(xiàn)有的伊維菌素緩釋巨丸，雖然在整個放牧季節(jié)只需 給藥一次，但是該緩釋巨丸的輔料為不可降解的聚氯乙烯，所以該劑型要比其它常規(guī)給藥體 系毒性更大。伊維菌素澆潑劑雖然可以單次給藥，藥效持續(xù)時間較長，但該方法給藥量大， 藥物相對生物利用度一般不超過15%。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是為了解決現(xiàn)有伊維菌素制劑有效期短、需要重復(fù)給藥，伊 維菌素緩釋巨丸毒性大的問題，提供了一種伊維菌素小單室脂質(zhì)體的制備方法。
本發(fā)明伊維菌素小單室脂質(zhì)體的制備方法如下 一、將大豆卵磷脂與膽固醇溶解于有機(jī) 溶劑中，然后加入伊維菌素原粉，得到混懸液；二、將混懸液置于反應(yīng)器中在35'C、氣壓為 200hpa (百帕)、轉(zhuǎn)速為70r/min的條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至反應(yīng)器內(nèi)壁形成一層薄膜，停止 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，然后通氮?dú)?0min;三、將步驟二得到的薄膜溶解于pH值為7.0的PBS溶液中后靜 置lh，得到混合溶液，放入4 5枚玻璃珠，然后將含有玻璃珠的混合溶液置于回旋式震蕩器 內(nèi)，在洗膜震速為120r/min、水浴溫度為3(TC的條件下震搖洗膜lh后靜止lh，得到牛奶狀多 室脂質(zhì)體混懸液；四、將牛奶狀多室脂質(zhì)體混懸液在超聲強(qiáng)度為100Hz的臺式雙頻數(shù)控超聲 清洗器中超聲震蕩10min，即得伊維菌素小單室脂質(zhì)體；其中步驟一中的大豆卵磷脂與膽固 醇的質(zhì)量比為l :0.2;步驟一中大豆卵磷脂和膽固醇的總質(zhì)量與伊維菌素原粉的質(zhì)量比為
10 : 1;步驟一中的有機(jī)溶劑由甲醇和氯仿按照l : l的體積比組成；步驟三中PBS溶液中含有
質(zhì)量濃度為O. 3。/。的維生素E;步驟三所述玻璃珠粒徑為2mm 5mm。
采用本發(fā)明方法所得的伊維菌素小單室脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)類似于生物膜，在機(jī)體內(nèi)能生物降解，沒有有毒物質(zhì)產(chǎn)生，作為藥物載體，具有選擇性高，靶向性強(qiáng)的特點，能夠使包裹的藥物 選擇性地到達(dá)病變部位、組織和細(xì)胞，從而增加藥物療效，減少藥物的治療劑量，降低藥物 毒性；本發(fā)明方法所得的伊維菌素小單室脂質(zhì)體作為儲存形式包埋的藥物能緩慢、持續(xù)釋放 ，因此能延長藥物有效的水平周期，增加持續(xù)作用時間，減少給藥頻率，節(jié)省勞動成本，減 少對動物的應(yīng)激；本發(fā)明所得伊維菌素小單室脂質(zhì)體，分布均勻、大小較一致、其形態(tài)為形 態(tài)規(guī)則的類球形囊泡，粒徑在180nm 300nm之間，沒有團(tuán)聚發(fā)生，有利于減少藥物的滲漏量 ，同時能增加伊維菌素脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，本發(fā)明方法所得的伊維菌素小單室脂質(zhì)體在4"C的 條件下保存3個月后脂質(zhì)體的滲漏率均小于6%，本發(fā)明方法所得的伊維菌素小單室脂質(zhì)體包 封率為89. 5%。


圖l是具體實施方式
一所得伊維菌素小單室脂質(zhì)體的電鏡顯微照片；圖2是具體實施方式
一所得伊維菌素小單室脂質(zhì)體的在40X10倍顯微鏡下的照片；圖3是具體實施方式
五中不同
條件下伊維菌素小單室脂質(zhì)體的滲透率曲線圖，表示4"C的條件下伊維菌素小單室脂
質(zhì)體的滲透率曲線，"*"表示室溫下伊維菌素小單室脂質(zhì)體的滲透率曲線。
具體實施例方式
本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實施方式
，還包括各具體實施方式
間的任意組合。
具體實施方式
一本實施方式中伊維菌素小單室脂質(zhì)體的制備方法如下 一、將大豆卵 磷脂與膽固醇溶解于有機(jī)溶劑中，然后加入伊維菌素原粉，得到混懸液；二、將混懸液置于 反應(yīng)器中在35。C、氣壓為200hpa、轉(zhuǎn)速為70r/min的條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至反應(yīng)器內(nèi)壁形成 一層薄膜，停止旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，然后通氮?dú)?0min;三、將步驟二得到的薄膜溶解于pH值為7.0的 PBS溶液中后靜置lh，得到混合溶液，放入4 5枚玻璃珠，然后將含有玻璃珠的混合溶液置 于回旋式震蕩器內(nèi)，在洗膜震速為120r/min、水浴溫度為3(TC的條件下震搖洗膜lh后靜止 lh，得到牛奶狀多室脂質(zhì)體混懸液；四、將牛奶狀多室脂質(zhì)體混懸液在超聲強(qiáng)度為100Hz的 臺式雙頻數(shù)控超聲清洗器中超聲震蕩10min，即得伊維菌素小單室脂質(zhì)體；其中步驟一中的 大豆卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為l :0.2;步驟一中大豆卵磷脂和膽固醇的總質(zhì)量與伊維菌素 原粉的質(zhì)量比為io : 1;步驟一中的有機(jī)溶劑由甲醇和氯仿按照l : l的體積比組成；步驟三 中PBS溶液中含有質(zhì)量濃度為O. 3。/。的維生素E。
本實施方式步驟三中所用的回旋式震蕩器是日本生產(chǎn)的型號為NTS-4000BH的回旋式震蕩 器；步驟四中所用的臺式雙頻數(shù)控超聲清洗器是江蘇省昆山超聲波儀器公司生產(chǎn)KH-200SP臺式雙頻數(shù)控超聲清洗器。
具體實施方式
二本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟三所述玻璃珠粒徑為2mm 5mm。其它與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
三本實施方式測試具體實施方式
一所得伊維菌素小單室脂質(zhì)體包封率的 方法如下 一、將4mL具體實施方式
一所得伊維菌素小單室脂質(zhì)體置于離心超濾管(截留相對 分子量為10KD)的內(nèi)管中，以3000r/min的速度離心30min，然后取超濾液l. OmL，用流動相定 容至IO mL，然后用0.22ym濾膜過濾；二、量取IO y L步驟一所得的濾液，采用美國Waters 公司生產(chǎn)的型號為2695的高效液相色譜儀對濾液平行測定3次，取平均值，得游離的伊維菌 素含量，g卩W游離；三、量取具體實施方式
一所得伊維菌素小單室脂質(zhì)體1.0mL，然后加入質(zhì) 量濃度為5。/。的Triton-X100乙醇溶液2 mL超聲10 min破乳，然后用流動相定容至10mL，以 15000r/min的速度離心10min，再將上清液用O. 22 y m濾膜過濾；四、量取10yL步驟三所得 濾液，采用美國Waters公司生產(chǎn)的型號為2695的高效液相色譜儀對濾液平行測定3次，取平 均值，得伊維菌素脂質(zhì)體總藥量，S卩W總；五、按照以下公式計算脂質(zhì)體的包封率(EE%):
EE%= (C總-C游離)X100%/ C總，得到具體實施方式
一所得伊維菌素小單室脂質(zhì)體包封率 為89. 5%(RSD=2. 3)。
本實施方式步驟一或步驟三中所用流動相由乙腈、甲醇和水組成，其中乙腈甲醇水 的體積比為60: 32: 8。
具體實施方式
四本實施方式將O. luL 0. 3uL具體實施方式
一所得伊維菌素小單室脂質(zhì) 體夾于雙層銅片之間，然后將夾有伊維菌素小單室脂質(zhì)體的雙層銅片浸入液態(tài)丙烷冷凍、切 片電子顯微鏡觀察。
從圖l可以看出具體實施方式
一所得伊維菌素小單室脂質(zhì)體，其形態(tài)為形態(tài)規(guī)則的類球 形囊泡，粒徑在180nm 300nm之間，沒有發(fā)生團(tuán)聚，有利于減少藥物的滲漏量，同時能增加 伊維菌素脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。由圖2可知其脂質(zhì)體分布均勻、大小一致、外觀如球形、橢圓形 的粒子。
具體實施方式
五本實施方式中對具體實施方式
一所得的伊維菌素小單室脂質(zhì)體的穩(wěn)定 性進(jìn)行測試，測試方法如下
將6份等量的具體實施方式
一所得的伊維菌素小單室脂質(zhì)體放置于4"C的冰箱中密封保存 ，再將6份等量的具體實施方式
一所得的伊維菌素小單室脂質(zhì)體在室溫中保存，然后在放置 時間為1天、7天、20天、30天、60天、90天、120天的條件下分別測定伊維菌素小單室脂質(zhì) 體的滲漏率，每組實驗重復(fù)三次，求其平均值，脂質(zhì)體滲漏率的計算公式如下滲漏率^w包一Wit) xioox/w包，其中w包、we分別為制備時的包封量和貯存一定時間 后的包封量。
由圖3可知，4'C冰箱保存3個月后脂質(zhì)體的滲漏率均小于6X，而室溫條件下保存脂質(zhì)體 的滲漏率較大。由于脂質(zhì)體的膜材成分磷脂中不飽和基團(tuán)容易發(fā)生氧化，隨著溫度的升高， 氧化反應(yīng)速率加快，所以室溫條件下保存脂質(zhì)體的滲漏率較大。
權(quán)利要求
1.伊維菌素小單室脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于伊維菌素小單室脂質(zhì)體如下一、將大豆卵磷脂與膽固醇溶解于有機(jī)溶劑中，然后加入伊維菌素原粉，得到混懸液；二、將混懸液置于反應(yīng)器中在35℃、氣壓為200hpa、轉(zhuǎn)速為70r/min的條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至反應(yīng)器內(nèi)壁形成一層薄膜，停止旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，然后通氮?dú)?0min；三、將步驟二得到的薄膜溶解于pH值為7.0的PBS溶液中后靜置1h，得到混合溶液，放入4～5枚玻璃珠，然后將含有玻璃珠的混合溶液置于回旋式震蕩器內(nèi)，在洗膜震速為120r/min、水浴溫度為30℃的條件下震搖洗膜1h后靜止1h，得到牛奶狀多室脂質(zhì)體混懸液；四、將牛奶狀多室脂質(zhì)體混懸液在超聲強(qiáng)度為100Hz的臺式雙頻數(shù)控超聲清洗器中超聲震蕩10min，即得伊維菌素小單室脂質(zhì)體；其中步驟一中的大豆卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為1∶0.2；步驟一中大豆卵磷脂和膽固醇的總質(zhì)量與伊維菌素原粉的質(zhì)量比為10∶1；步驟一中的有機(jī)溶劑由甲醇和氯仿按照1∶1的體積比組成；步驟三中PBS溶液中含有質(zhì)量濃度為0.3％的維生素E。
2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的伊維菌素小單室脂質(zhì)體的制備方法，其特征 在于步驟三所述玻璃珠粒徑為2mm 5mm。
全文摘要
伊維菌素小單室脂質(zhì)體的制備方法，它涉及一種伊維菌素脂質(zhì)體的制備方法。本發(fā)明解決了現(xiàn)有伊維菌素制劑有效期短、需要重復(fù)給藥，伊維菌素緩釋巨丸毒性大的問題。本發(fā)明方法如下向大豆卵磷脂和膽固醇的有機(jī)溶液中加入伊維菌素原粉，然后將得到的混懸液減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至反應(yīng)器內(nèi)壁形成一層薄膜，再將薄膜溶解于PBS溶液后，放入玻璃珠，回旋式震蕩器內(nèi)，震搖洗膜1h后靜止1h，再超聲震蕩，即得伊維菌素小單室脂質(zhì)體。本發(fā)明方法所得的脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)類似于生物膜，在機(jī)體內(nèi)能生物降解，沒有有毒物質(zhì)產(chǎn)生，作為儲存形式包埋的藥物能緩慢、持續(xù)釋放，因此能延長藥物有效的水平周期，減少給藥頻率，伊維菌素小單室脂質(zhì)體包封率為89.5％。
文檔編號A61K9/127GK101664389SQ20091030784
公開日2010年3月10日 申請日期2009年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月28日
發(fā)明者何書海, 佘永新, 巴桑旺堆, 拉巴次旦, 楊德全, 珠 色, 董祿德, 趙好信, 陳裕祥 申請人:西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所