專利名稱：預(yù)防早產(chǎn)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通過施用松弛素在人類女性中降低宮頸擴(kuò)張(cervicaldilation)和早產(chǎn) 的方法。松弛素治療特別適于傾向于早產(chǎn)的對(duì)象。
背景技術(shù)：
松弛素是二硫鍵橋連的多肽激素，約6000道爾頓，在許多物種懷孕期間顯示濃 度顯著增加。一些研究顯示，松弛素在懷孕和分娩過程中通過重塑生殖道起到重要作 用。
在懷孕和非懷孕女性(female)中，松弛素主要由黃體產(chǎn)生，也存在于男性的 精液中(Bryant-Greenwood (1982)，Endocrine Reviews 3，62-90 ； Weisse (1984)，Ann. Rev.Physiol. 46, 43-52)。在女性中，其外周血中水平在促黃體生成素的周期中突增后 7到10天達(dá)到峰值，如果蛻膜產(chǎn)生另外的松弛素確實(shí)發(fā)生的話則繼續(xù)上升Mtewart等人 (1990)，J.Clin.Endo.Metab.70, 1771-1773)。在懷孕過程中，如同源放射免疫測(cè)定所 測(cè)量地，松弛素的血漿濃度在約第十周最高，隨后漸漸減少，在懷孕剩余期間保持在約 500pg/ml (Bell 等人，(1987)，Obstet.Gynecol.69，585-589)。已使用來自豬松弛素基因 的探針通過基因組克隆鑒定到人的松弛素基因形式(Hudson等人，(1983)，Nature 301, 628 ； Hudson 等人(1984)，EMBO J.3，2333 ；和美國(guó)專利 No.4,758,516 和 4,871,670)。 僅僅發(fā)現(xiàn)這些基因形式中的一種，稱為H2，在卵巢的黃體中轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，表明這是直接 涉及懷孕生理的序列。
在動(dòng)物中，已有描述稱松弛素重塑生殖道使得利于生產(chǎn)過程，包括子宮 頸成熟，妊娠子宮的子宮內(nèi)膜增厚，以及增加該區(qū)域的血管形式和調(diào)節(jié)膠原合成 (Sherwood (1994) The physiology of reproduction 第二版)。其也已與泌乳相關(guān)聯(lián)，一些報(bào) 告顯示松弛素對(duì)乳腺組織具有生長(zhǎng)促進(jìn)作用(Wright和Anderson (1982)，Adv.Exp.Med. Biol.143, 341)。
懷孕過程中人松弛素的作用尚不清楚。人松弛素作用的體外研究表明，其抑制 非懷孕子宮的子宮肌層收縮，但是不影響懷孕的子宮肌層(MacLennan(1991)，J.Reprod. Med.36, 630-34)。迄今為止，沒有報(bào)道人松弛素對(duì)子宮肌層的刺激作用。值得注意地， 豬松弛素已顯示出在人體中的作用，表明松弛素功能是物種特異性的。Evans等人在隨 機(jī)雙盲帶對(duì)照臨床試驗(yàn)中利用豬松弛素作為子宮頸管內(nèi)藥丸，在松弛素組中觀察到更多 的頸管消失(effacement，變薄)和更短的分娩時(shí)間(Evans等人，(1983)，Am J.Obstet. Gynecol. 147, 410-414)。使用類似的研究設(shè)計(jì)，MacLennan等人將豬松弛素或安慰劑作 為子宮頸管內(nèi)凝膠施用(MacLennan(1986)，Obstet.Gynecol.68，595-601)。松弛素治療組更可能進(jìn)入自然分娩，隨著松弛素的劑量增加子宮頸成熟有更大的變化。這些研究表 明，豬松弛素可用于女性的引產(chǎn)。但是，豬松弛素在女性中可能具有免疫原性。
已經(jīng)在對(duì)非懷孕女性的I期安全性研究中試驗(yàn)了陰道內(nèi)施用的人松弛素，但是 沒有顯示對(duì)子宮頸成熟有任何作用。該研究證明，人松弛素的施用安全且不良副作用 極小。重要地是，用松弛素處理的女性中松弛素血清水平?jīng)]有增加，表明松弛素對(duì)子 宮頸沒有作用可由劑量不夠或方法不當(dāng)來解釋(Bell等人(1993)，Obstet.Gynecol.82 328-333 ； Brennand 等人(1995)第二版 International congress on the hormone relaxin, 380-388)。根據(jù)松弛素在動(dòng)物中的功能以及所觀察到的豬松弛素能夠在人體中促進(jìn)子宮 頸成熟，已經(jīng)表明施用松弛素可用于在人體中促進(jìn)分娩。
從末次經(jīng)期日期算起(LMP)，大多數(shù)懷孕持續(xù)約40周的妊娠。在孕齡約37至 42周時(shí)出生的嬰兒認(rèn)為是足月的。美國(guó)約有12.5%的嬰兒(一年大于50萬)在妊娠37 周完成之前過早出生。早產(chǎn)是嚴(yán)重的健康問題，在美國(guó)占到新生兒發(fā)病率和死亡率的約 85%。其占據(jù)了大部分的新生兒醫(yī)療保健成本，大部分是由于2%的美國(guó)女性產(chǎn)下非常早 產(chǎn)的嬰兒，其在妊娠32周完成前出生。
早產(chǎn)嬰兒在其身體和器官系統(tǒng)完全發(fā)育之前出生。這些嬰兒經(jīng)常很小，出生體 重很低(小于2500克或5.5磅)，它們可能需要輔助呼吸、進(jìn)食、與感染作斗爭(zhēng)以及保持 溫暖。它們患新生兒健康綜合征和永久性殘疾的風(fēng)險(xiǎn)增加，例如智力遲鈍、腦性麻痹、 肺和胃腸問題、視力和聽力喪失以及甚至死亡。早產(chǎn)嬰兒比足月嬰兒更可能出現(xiàn)的常見 并發(fā)癥包括但不限于呼吸窘迫綜合征(RDS)、呼吸暫停、腦室內(nèi)出血(IVH)、動(dòng)脈導(dǎo)管 未閉、壞死性小腸結(jié)腸炎(NEC)、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病、黃疸、貧血、慢性肺病和感染。較 晚的早產(chǎn)兒通常問題較少或輕微，但是約32至34周妊娠之前出生的嬰兒可能具有很多并 發(fā)癥，從輕微的到嚴(yán)重的。早在M到27周出生的嬰兒有可能存活，但是這些嬰兒可能 面對(duì)終生的健康問題。
由于尚未完全了解的原因，美國(guó)早產(chǎn)率在最近25年里增加了 30%以上。這一增 加大部分是由于輔助生殖技術(shù)產(chǎn)生的多胎妊娠的增加。根據(jù)這些方法懷孕的所有妊娠中 約20%至25%導(dǎo)致雙胞胎妊娠，其處于特別增加的早產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)中。約50%的雙胞胎較早生 產(chǎn)，導(dǎo)致37周的平均妊娠期，而單胎妊娠為40周的平均妊娠期。
迄今為止，沒有可靠且安全的預(yù)防早產(chǎn)或提前分娩的處理。目前的方法包括自 我照顧的方法，以減少感染以及營(yíng)養(yǎng)學(xué)和心理學(xué)介入。此外，這些方法包括加強(qiáng)且頻繁 的出生前隨訪，以及控制早產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)因素。但是，這些方法無法顯示出早產(chǎn)的明顯減少。 就早產(chǎn)子宮收縮來說，通常進(jìn)行保胎(tocolytic)治療。已描述了具有不同成功率和副作 用的多種試劑例如硫酸鎂、硝苯地平和特布他林。一些藥物不是特別由食品與藥品管理 局(FDA)批準(zhǔn)用于停止提前分娩中子宮收縮的，而是不按標(biāo)簽注明使用的。收縮抑制 經(jīng)常僅僅是部分的，安胎(tocolytics)僅可依賴于將出生延遲幾天。該方法可用于為施 用糖皮質(zhì)激素藥物例如倍他米松爭(zhēng)取時(shí)間，其大大加速了胎兒肺成熟以降低呼吸窘迫綜 合征、腦室內(nèi)出血、壞死性小腸結(jié)腸炎、感染和嬰兒死亡的風(fēng)險(xiǎn)。糖皮質(zhì)激素藥物需要 一到兩天來發(fā)揮作用。也已經(jīng)研究了抗生素通過抵抗感染預(yù)防早產(chǎn)的能力，但是沒有證 明有效。此外，已測(cè)試了陰道孕酮的使用以及孕酮的天然代謝物17α-己酸羥孕酮的注 射(Fonseca 等人 Ο007)，NEJM, 357(5)，462-469 ； Romero (2007), UltrasoundObstet.Gynecol., 30，675-686)。該方法基于以下發(fā)現(xiàn)，分娩發(fā)作與孕酮的生理性撤退有關(guān)。 兩種處理都有效停止子宮收縮，但是，由于相關(guān)的流產(chǎn)和死胎的增加，17α-己酸羥孕 酮的安全性最近受到了 FDA及其專家組的質(zhì)疑(Meis等人，Q003)，NEJM 348 (24)， 2379-85 ；和 FDA advisorycommittees CDER 2006)。
因此，需要預(yù)防早產(chǎn)的安全有效的方法。本發(fā)明提供了這一方法以及額外的益 處。優(yōu)選實(shí)施方案簡(jiǎn)述
本發(fā)明提供了與通過施用松弛素降低宮頸擴(kuò)張相關(guān)的方法。這些方法可應(yīng)用于 降低早產(chǎn)和流產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)以及延長(zhǎng)妊娠期，其可導(dǎo)致嬰兒的出生體重增加。在過去的十年 中美國(guó)的醫(yī)院里早產(chǎn)的數(shù)目顯著增加。盡管預(yù)防這些早產(chǎn)進(jìn)行了努力，但是迄今為止尚 未發(fā)現(xiàn)無消極副作用的安全且有效的治療。一些方法集中在自我護(hù)理方法，其可能在一 些情況下有幫助，但是在另一些情況下不適用。因此，希望能提供安全有效的預(yù)防早產(chǎn) 的新方法，本發(fā)明滿足這一要求。因而，本發(fā)明提供了通過施用松弛素預(yù)防早產(chǎn)以及降 低其風(fēng)險(xiǎn)的方法。本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是在傾向于早產(chǎn)的女性中施用松弛素很少或沒有不 良副作用。另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是松弛素可與其他藥物聯(lián)合施用，例如安胎劑或孕酮，以提供 更有效的預(yù)防胎兒早產(chǎn)的方法。因?yàn)榘蔡┖驮型绊懽訉m收縮，而松弛素預(yù)防宮頸擴(kuò) 張，這些治療的組合提供了相比于已知方法更顯著的改善。
在一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了降低宮頸擴(kuò)張的方法，其包括選擇傾向于早產(chǎn)的 女性，向該女性施用藥學(xué)上有活性的松弛素的藥物制劑。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā) 明提供了降低宮頸擴(kuò)張率的方法，其包括向懷孕人類女性施用包含藥學(xué)上有活性的松弛 素的藥物制劑，以降低宮頸擴(kuò)張率。另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及降低早產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)的方法， 其包括選擇傾向于早產(chǎn)的人類女性，和向該女性施用包含藥學(xué)上有活性的松弛素的藥物 制劑。在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了降低早產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)的方法，其包括向懷孕人類女性 施用包含藥學(xué)上有活性的松弛素的藥物制劑，以減少早產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。本發(fā)明還涵蓋了降低 流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)的方法，其通過選擇傾向于流產(chǎn)的人類女性，和向該女性施用包含藥學(xué)上有活 性的松弛素的藥物制劑進(jìn)行。在本方法的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，人類女性是懷孕女性。 在本方法的另一個(gè)實(shí)施方案中，松弛素也可施用給妊娠前傾向于早產(chǎn)的女性。值得注意 地，在本文所述方法中，松弛素可施用給表現(xiàn)出癥狀的懷孕女性，該癥狀包括但不限于 小腹收縮、痛性痙攣；下腰鈍痛(low dull pain ι her back)；骨盆腔區(qū)域壓力；胃痙攣； 有陰道排出物；陰道出血和陰道水樣液體泄漏。
在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了增加妊娠期長(zhǎng)度的方法，其包括選擇傾向于早產(chǎn) 的懷孕女性，和施用藥學(xué)上有活性的松弛素的藥物制劑，其減少了早產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。本發(fā)明 還涉及增加?jì)雰撼錾w重的方法，其包括選擇傾向于早產(chǎn)的懷孕女性，和施用藥學(xué)上有 活性的松弛素的藥物制劑給該女性從而通過增加妊娠期提高出生率。在本發(fā)明的一個(gè) 實(shí)施方案中，松弛素可施用給表現(xiàn)出以下癥狀的懷孕女性，該癥狀包括但不限于小腹收 縮、痛性痙攣；下腰鈍痛；骨盆腔區(qū)域壓力；胃痙攣；有陰道排出物，陰道出血和陰道 水樣液體泄漏。
用于本發(fā)明藥物制劑的松弛素可以是，例如，純化的、合成的或重組的松弛 素。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，松弛素是H2人松弛素。在另一些實(shí)施方案中，松弛 素是Hl人松弛素、H3人松弛素或松弛素激動(dòng)劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，松弛素是合成的或重組的H2人松弛素。因此，可用合成或重組人松弛素的藥物制劑治療對(duì)象。在本 發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)象用合成H2人松弛素治療。在另一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)象用重 組H2人松弛素治療。松弛素可通過許多不同途徑施用給對(duì)象，包括但不限于靜脈內(nèi)、皮 下、肌內(nèi)或局部。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，松弛素通過靜脈內(nèi)施用。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施 方案中，松弛素通過皮下施用。在另一個(gè)實(shí)施方案中，通過脊椎注射施用松弛素。更具 體地說，松弛素的藥物制劑可以約0.1至500 μ g/kg對(duì)象體重/天的量施用給對(duì)象。因 而，松弛素施用給對(duì)象使得保持約0.5至50ng/ml的血清松弛素濃度。
施用本發(fā)明方法所述的松弛素在具有提前分娩或早產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)跡象的女性中預(yù)防提 前分娩或早產(chǎn)。此外，施用松弛素可導(dǎo)致出生時(shí)嬰兒體重增加和/或出生時(shí)正常的嬰兒 體重。在本發(fā)明方法的一個(gè)實(shí)施方案中，松弛素從妊娠首三個(gè)月開始時(shí)施用直到分娩發(fā) 作。在另一個(gè)實(shí)施方案中，松弛素從妊娠中三個(gè)月或妊娠末三個(gè)月開始時(shí)施用，直到分 娩發(fā)作。在這些時(shí)間段內(nèi)，松弛素可每天、每周或每月施用。
本發(fā)明還提供了用于在傾向于早產(chǎn)的人類女性中降低宮頸擴(kuò)張速率的松弛素； 用于在傾向于早產(chǎn)或流產(chǎn)的人類女性中降低早產(chǎn)和流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)的松弛素；以及用于在傾向 于早產(chǎn)的人類女性中延長(zhǎng)妊娠期長(zhǎng)度和增加?jì)雰撼錾w重的松弛素。


在結(jié)合用于舉例說明優(yōu)選實(shí)施方案的附圖進(jìn)行閱讀時(shí)能很好地理解本發(fā)明。但 是，應(yīng)了解本發(fā)明不限于附圖中所公開的具體實(shí)施方案。
圖IA顯示大小與形狀類似于胰島素的肽類激素H2松弛素。圖IB提供了人松 弛素2 (H2)的B鏈6EQ ID NO 1)和A鏈^EQ ID NO 2)的氨基酸序列，X代表谷氨酸[E]或谷氨酰胺[Q]。
圖2顯示了匯集的松弛素和匯集的安慰劑組中隨時(shí)間的平均血清松弛素濃度。
圖3顯示了匯集的松弛素和匯集的安慰劑組中所示時(shí)間點(diǎn)的平均總Bishop得 分。
圖4顯示了匯集的松弛素和匯集的安慰劑組中隨時(shí)間的宮頸擴(kuò)張變化。
具體實(shí)施方式
概述
本發(fā)明是基于對(duì)懷孕女性靜脈內(nèi)施用人松弛素導(dǎo)致宮頸擴(kuò)張速率顯著降低的觀 察結(jié)果。宮頸擴(kuò)張代表判定女性為做好身體準(zhǔn)備進(jìn)入陰道分娩的重要參數(shù)。出人意料 地，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，施用松弛素可用于在人類女性中抑制宮頸擴(kuò)張。該發(fā)現(xiàn)與動(dòng)物研究 中得到的結(jié)果完全相反，在動(dòng)物研究中施用松弛素增強(qiáng)了子宮頸成熟和擴(kuò)張。值得注意 地，過早地增加擴(kuò)張?jiān)黾恿嗽绠a(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。因此，抑制子宮頸的擴(kuò)張?zhí)峁┝祟A(yù)防在妊娠足 月到達(dá)前早產(chǎn)的方法，以及在妊娠早期階段中預(yù)防流產(chǎn)的方法。通過預(yù)防早產(chǎn)，可延長(zhǎng) 妊娠期，以確保嬰兒全面發(fā)育或者至少發(fā)育到嬰兒器官的成熟水平，其足以使得嬰兒在 子宮外存活。
早產(chǎn)對(duì)于嬰兒和母親都有健康的風(fēng)險(xiǎn)，并且是昂貴的健康問題。早產(chǎn)兒需要特別的照顧，經(jīng)常患有嚴(yán)重的疾病，并且可能經(jīng)歷終生的健康影響。除了這些身體上的限 制外，早產(chǎn)還可能對(duì)嬰兒和母親有強(qiáng)烈的心理影響。盡管生產(chǎn)和新生兒醫(yī)學(xué)上已有許多 技術(shù)進(jìn)步增加早產(chǎn)兒醫(yī)學(xué)并發(fā)癥存活和復(fù)原的機(jī)會(huì)，但是早產(chǎn)仍然是嬰兒在其一歲之內(nèi) 死亡的首要原因之一。定義
術(shù)語“松弛素”表示本領(lǐng)域中公知的肽類激素(參見圖1)。本文使用的術(shù)語 “松弛素”涵蓋人松弛素，包含完整的全長(zhǎng)人松弛素或者保留生物活性的松弛素分子的一部分。術(shù)語“松弛素”還考慮了合成人松弛素和重組人松弛素，其包括合成H2人松 弛素和重組H2人松弛素。該術(shù)語還涵蓋了具有松弛素樣活性的活性物質(zhì)，例如保留生 物活性的松弛素類似物以及其部分，以及競(jìng)爭(zhēng)性取代松弛素受體例如LGR7或LGR8受體 上結(jié)合的松弛素的物質(zhì)。另外，本文使用的人松弛素的核酸序列不一定100%等同于人 松弛素H2，而可以是與人松弛素H2有至少約40%、50%, 60%, 65%, 66%, 67%, 68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%或99%的同一性。本文使用的松弛素可通 過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何方法制備。這些方法的實(shí)例在例如美國(guó)專利No.5,759,807 以及 Biillesbach 等人(1991) The Journal of Biological Chemistry 266(17) 10754-10761 中 描述。松弛素分子以及類似物的實(shí)例在例如美國(guó)專利No.5,166,191中有舉例說明。
術(shù)語“宮頸擴(kuò)張”表示子宮頸口(開口)和子宮頸管寬度從小于約一厘米加寬 到約IOcm的過程，其使得胎兒通過。
術(shù)語“子宮頸成熟”表示子宮頸準(zhǔn)備好分娩的過程，例如使得子宮頸柔軟變薄 (即宮管消失)。
術(shù)語“早產(chǎn)”、“成熟前出生”、“提前出生”和“提前生產(chǎn)”表示在妊娠約 37周完成之前出生，并且在說明書通篇可互換地使用。
術(shù)語“提前分娩”或者“過早分娩”表示在妊娠約37周完成前分娩發(fā)作，其 特征在于子宮收縮或子宮應(yīng)激性增加。術(shù)語“提前分娩”或“過早分娩”在說明書通 篇中可互換地使用。
術(shù)語“流產(chǎn)”或“自發(fā)流產(chǎn)”表示在妊娠階段天然或自發(fā)地終止妊娠，其中胚 胎或胎兒不能存活，一般在人體中定義為妊娠約20周之前。這些術(shù)語在說明書通篇可互 換地使用。
術(shù)語“嬰兒”或“嬰孩”表示生命最幼年期的人類孩子，特別是它們可以走路 之前，通常為一歲以前。這些術(shù)語在說明書通篇可互換地使用。
術(shù)語“新生兒”或“新生嬰兒”表示小于約一個(gè)月的人類嬰兒。這些術(shù)語在 說明書通篇中可互換地使用，包括早產(chǎn)兒、過熟嬰兒和足月嬰兒。
術(shù)語“約”在用于所陳述的值背景中時(shí)，涵蓋超過或低于所陳述的值最多10% 的范圍(例如所陳述值的90-110% )。例如，約30mcg/kg/天的靜脈內(nèi)(IV)輸注速率涵 蓋27mcg/kg/天至33mcg/kg/天的IV輸注速率。
“治療有效的”表示，與患者基線狀態(tài)，或者未治療或安慰劑治療(例如不用松 弛素治療)對(duì)象的狀態(tài)相比，會(huì)對(duì)患者導(dǎo)致可測(cè)得預(yù)期醫(yī)學(xué)或臨床益處的藥學(xué)上有活性 的松弛素的量。松弛素8
松弛素是大小與形狀類似于胰島素的肽類激素(參見圖1)。更具體地說，松弛 素是屬于胰島素基因超家族的內(nèi)分泌和自分泌/旁分泌激素。編碼蛋白的活性形式由A 鏈和B鏈組成，其由二硫鍵連接，兩個(gè)鏈間二硫鍵和一個(gè)鏈內(nèi)二硫鍵。因此，在二硫鍵 的配置上，結(jié)構(gòu)類似于胰島素。對(duì)于人類，有三個(gè)非等位松弛素基因，松弛素-KRLN-I 或Hl)、松弛素-2 (RLN-2或H2)和松弛素_3 (RLN-3或H3)。Hl和H2具有高序列同 源性。對(duì)于該基因，描述有編碼不同同工型的兩個(gè)選擇性剪接轉(zhuǎn)錄變體。人體中Hl的 表達(dá)是不確定的。H2在生殖器官中表達(dá)，而H3主要在腦中表達(dá)。松弛素肽家族與其受 體的進(jìn)化是本領(lǐng)域公知的(參見Wilkinson等人O005)BMC Evolutionary Biology 5 (14) 1-17 ；禾口 Wilkinson 與 Bathgate (2007) Chapter 1, Relaxin and Related Peptides, Landes Bioscience andSpringer Science+Business Media)。
松弛素激活兩個(gè)特異性松弛素受體，即LGR7 (RXFPl)和LGR8 (RXFP2)。 LGR7和LGR8是含有富亮氨酸重復(fù)的G蛋白偶聯(lián)受體(LGR)，其代表獨(dú)特的G蛋白偶 聯(lián)受體亞群。它們含有七螺旋跨膜結(jié)構(gòu)域和大糖基化胞外結(jié)構(gòu)域，與糖蛋白激素受體 (glycoproteohormone)例如LH受體或FSH受體有遠(yuǎn)的親緣關(guān)系。這些松弛素受體在心 臟、平滑肌、結(jié)締組織以及中樞和自主神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn)。有效的松弛素例如HI、H2,豬 和鯨松弛素具有某些共有序列，即Arg-Glu-Leu-Va卜Arg-X-X-IldSEQID NO 3)序列 或結(jié)合盒。偏離該序列同源性的松弛素，例如大鼠、鯊魚、狗和馬松弛素顯示通過LGR7 和LGR8 受體的生物活性減少(參見Bathgate等人 O005) Ann.N.Y.Acad.Sci.1041 61-76 ； Receptors for RelaxinFamily Peptides)。
松弛素在女性和男性中都有發(fā)現(xiàn)(參見Tregear等人；Relax:in 2000，Proceedings of the Third International Conference on Relaxin & RelatedPeptides (2000 年 10 月 22-27 日， Broome, Australia)。在女性中，松弛素由卵巢的黃體、乳房產(chǎn)生，妊娠期間也由胎盤、 絨毛膜和蛻膜產(chǎn)生。在男性中，松弛素由睪丸產(chǎn)生。排卵之后，由于由黃體產(chǎn)生，松弛 素水平上升，在妊娠首三個(gè)月期間而不是妊娠結(jié)束時(shí)達(dá)到峰值。沒有妊娠時(shí)，其水平下 降。在人類中，松弛素在妊娠中起到下列作用提高精子活力、調(diào)節(jié)血壓、控制心率和 釋放縮宮素和加壓素。在動(dòng)物中，松弛素?cái)U(kuò)寬恥骨，便于分娩，軟化子宮頸(子宮頸成 熟)和松弛子宮肌肉系統(tǒng)。在動(dòng)物中，松弛素還影響膠原代謝，抑制膠原合成以及通過 增加基質(zhì)金屬蛋白酶提高其斷裂。其還增加血管生成，并且是腎血管擴(kuò)張劑。
松弛素具有生長(zhǎng)因子的一般性能，能夠改變結(jié)締組織的性質(zhì)和影響平滑肌收 縮。已知在動(dòng)物中H2主要在生殖組織中表達(dá)(參見美國(guó)專利No.5,023,321)并且涉及宮 頸擴(kuò)張。但是，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在人體中，松弛素導(dǎo)致相反的效果，事實(shí)上降低宮頸擴(kuò) 張速率。松弛素激動(dòng)劑
在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了包括松弛素激動(dòng)劑施用的方法。在一些方法 中，松弛素激動(dòng)劑活化一種或多種松弛素相關(guān)G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)，其選自但不限于 RXFPU RXFP2、RXFP3、RXFP4、FSHR(LGRl)、LHCGR(LGR2)、TSHR (LGR3)、 LGR4、LGR5、LGR6LGR7 (RXFPl)禾Π LGR8 (RXFP2)。在一些實(shí)施方式中，松弛素激 動(dòng)劑包括Compugen的WO 2009/007848中式I氨基酸序列(通過引用并入本文，用于教 導(dǎo)松弛素激動(dòng)劑的序列)。
式I的肽優(yōu)選7至100個(gè)氨基酸長(zhǎng)，包含氨基酸序列5Q-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22-X23-X24-X 25-X26-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33 ；其中Xl空缺或者是G或者是小天然或非天 然氨基酸；X2空缺或者是Q或者是極性天然或非天然氨基酸；X3空缺或者是K或者堿 性天然或非天然氨基酸；X4空缺或者是G或者小天然或非天然氨基酸；X5空缺或者是 Q或S或者極性天然或非天然氨基酸；X6空缺或者是V或A或P或M或者疏水天然或非 天然氨基酸；X7空缺或者是G或者小天然或非天然氨基酸；X8空缺或者是P或L或A 或天然或非天然氨基酸；X9空缺或者是P或Q或天然或非天然氨基酸；XlO空缺或G或 天然或小非天然氨基酸；Xl 1空缺或者是A或H或E或D或疏水或小或酸性天然或非天 然氨基酸；X12空缺或者是A或P或Q或S或R或H或疏水或小天然或非天然氨基酸； X13空缺或是C或V或疏水天然或非天然氨基酸；X14空缺或是R或K或Q或P或堿 性或極性天然或非天然氨基酸；X15空缺或是R或Q或S或堿性或極性天然或非天然氨 基酸；X16空缺或是A或L或H或Q或疏水或小天然或非天然氨基酸；X17空缺或是Y 或疏水或芳香天然或非天然氨基酸；X18空缺或是A或疏水或小天然或非天然氨基酸； X19空缺或是A或疏水小天然或非天然氨基酸；X20空缺或是F或疏水或芳香天然或非天 然氨基酸；X21空缺或是S或T或極性天然或非天然氨基酸；X22空缺或是V或疏水天然 或非天然氨基酸；X23空缺或是G或疏水或小非天然氨基酸或由酰胺取代；XM空缺或 是R或堿性天然或非天然氨基酸；X25空缺或是R或堿性天然或非天然氨基酸；乂沈是八 或疏水或小天然或非天然氨基酸；X27是Y或疏水或芳香天然或非天然氨基酸；X^是 A或疏水或小天然或非天然氨基酸；X^是A或疏水或小天然或非天然氨基酸；X30是 F或疏水天然或非天然氨基酸；X31是S或T或極性天然或非天然氨基酸；X32是V或 疏水天然或非天然氨基酸；X33空缺或是G或疏水或小天然或非天然氨基酸或由酰胺取 代；或者其可藥用鹽6EQ ID NO 4)。在一些優(yōu)選實(shí)施方案中，松弛素激動(dòng)劑包括肽 P59C13V(游離酸)的序列 GQKGQVGPPGAAVRRAY AAFSV(SEQ ID NO 5)。在另一 個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，松弛素激動(dòng)劑包括肽P74C13V(游離酸)GQKGQVGPPGAA VRRAY AAFS VGRRAY AAFS V(SEQ DD NO 6)的序列。人補(bǔ)體ClQ腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白 8(CTRP8 或 C1QT8)的其他衍生物，例如肽P59-G (游離酸 Gly)GQKGQVGPPGAACRRA Y AAFSVG (SEQ ID NO 7)也考慮適用于本發(fā)明的方法。C1QT8的氨基酸序列如SEQ ID NO 8 所示 MAAPALIXLALIXPVGAWPGLPRRPCVHCCRPAWPPGPYARVSDRDLW RGDLWRGLPRVRPTIDIEILKGEKGEAGVRGRAGRSGKEGPPGARGLQGRRGQKGQVG PPGAACRRAYAAFSVGRRAYAAFSVGRREGLHSSDHFQAVPFDTELVNLDGAFDLAAGR FLCTVPGVYFLSLNVHTWNYKETYLHIMLNRRPAAVLYAQPSERSVMQAQSLMLLLAA GDAVWVRMFQRDRDNAIYGEHGDLYITFSGHLVKPAAEL.
本發(fā)明還涵蓋了這些多肽的同源物，這些同源物可以是與示例性松弛素激動(dòng) 劑(例如SEQ ID NO: 5或SEQ ID NO: 6)的氨基酸序列有至少50 %、至少55%、 至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少85%、至 少90%、至少95%或者更多直至100%同一性，如使用國(guó)家生物技術(shù)信息中心(NCBI) 的BlastP軟件使用缺省參數(shù)所確定的，任選地和優(yōu)選地包括下列項(xiàng)過濾開啟(此選 項(xiàng)使用(蛋白)程序從查詢中過濾重復(fù)或低復(fù)雜度序列)，評(píng)分矩陣為針對(duì)蛋白質(zhì)的 BLOSUM62，字長(zhǎng)是3，E值為10，缺口成本為11，1 (初始和(初始和擴(kuò)展)。任選地10和優(yōu)選地，使用國(guó)家生物技術(shù)信息中心(NCBI)的BlastP軟件使用缺省參數(shù)確定核酸序列 同一性/同源性，參數(shù)優(yōu)選包括使用DUST過濾程序，還優(yōu)選包括E值為10，過濾低復(fù)雜 度序列以及字長(zhǎng)為11。最后，本發(fā)明還涵蓋上述多肽的片段和具有突變的多肽，例如一 個(gè)或多個(gè)氨基酸的缺失、插入或取代，其為天然或人工誘導(dǎo)的，隨機(jī)或靶向形式的。松 弛素治療導(dǎo)致宮頸擴(kuò)張速率的降低
缺乏有力子宮收縮以及閉合完全的子宮頸維持妊娠。子宮頸用作防護(hù)侵入微生 物的防護(hù)屏障以及用作分娩胎兒的結(jié)構(gòu)屏障。子宮頸能力的缺乏導(dǎo)致早產(chǎn)，甚至是在沒 有分娩子宮收縮的情況下。但是，當(dāng)子宮頸很硬時(shí)，有力的子宮收縮無法帶來分娩。因 此，子宮頸功能在妊娠期間隨時(shí)間的變化對(duì)于成功的妊娠是決定性的。在分娩期間以及 之后，子宮頸經(jīng)歷結(jié)締組織重塑的顯著過程，其分四個(gè)階段軟化、成熟、擴(kuò)張和修復(fù) (Word等人，2007 Semin.Reprod.Med.25(l) 69-79)。最初的軟化階段是緩慢的漸進(jìn)過 程，其特征為膠原合成和子宮頸生長(zhǎng)的增加，并導(dǎo)致膠原原纖網(wǎng)絡(luò)的重構(gòu)。這一過程在 妊娠的早期階段提供了軟化子宮頸的拉伸強(qiáng)度。在子宮頸成熟過程中，膠原濃度主要由 于親水糖胺聚糖合成增加而降低。在此階段，拉伸強(qiáng)度降低，子宮頸開始消失(變薄) 和擴(kuò)張。分娩過程中的擴(kuò)張不同于成熟期間的這一初始擴(kuò)張過程，它是由于不同機(jī)制導(dǎo) 致，其包括白細(xì)胞將蛋白酶和膠原酶釋放進(jìn)入細(xì)胞外基質(zhì)。子宮頸重塑的最后階段、修 復(fù)在分娩后發(fā)生。
值得注意地，子宮頸成熟是宮頸擴(kuò)張所必需的，已知兩個(gè)過程都是按期成功分 娩所需的。子宮頸成熟的標(biāo)準(zhǔn)度量是Bishop得分。其顯示了子宮頸是如何變軟、開放和 消失的(擴(kuò)張和消失)，以及骨盆中子宮頸和嬰兒位置有多低的等級(jí)，從而評(píng)估對(duì)陰道分 娩的準(zhǔn)備。子宮頸成熟通常在子宮收縮開始前幾周就開始，表明女性早產(chǎn)和按期分娩是 長(zhǎng)的持續(xù)過程，而且分娩的子宮收縮是分娩過程中的晚期事件(Word等人，見上文)。松 弛素已涉及在動(dòng)物中通過促進(jìn)子宮頸成熟和擴(kuò)張促進(jìn)生產(chǎn)過程。意外地，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn) 施用松弛素在人類女性中具有相反的作用，提供了降低子宮頸擴(kuò)增速率的方法?；诖?發(fā)現(xiàn)，松弛素(例如，人松弛素的或人H2松弛素)可施用給傾向于早產(chǎn)的懷孕女性，以 降低宮頸擴(kuò)張速率。松弛素可通過幾種施用途徑來施用，包括但不限于靜脈內(nèi)、皮下、 肌內(nèi)或局部施用或者通過脊椎注射。使用松弛素的治療可早在妊娠首三個(gè)月開始直到分 娩發(fā)作，或者，治療可從妊娠中三個(gè)月或妊娠末三個(gè)月開始時(shí)開始直到分娩發(fā)作。松弛 素治療提供了預(yù)防早產(chǎn)或流產(chǎn)的方法
目前預(yù)防早產(chǎn)的方法是預(yù)防的策略和排除提前分娩的處理，早產(chǎn)的特征在于子 宮收縮或增加的分娩前子宮應(yīng)激性。引發(fā)早產(chǎn)的實(shí)際生理機(jī)制尚未清楚地確定，但是已 顯示受到例如下列因素的影響，前列腺素合成、縮宮素釋放、激素比(孕酮水平下降、 雌二醇水平上升)、子宮組織的機(jī)械拉伸和子宮血流變化。在大多數(shù)情況下，提前分娩 導(dǎo)致早產(chǎn)，因?yàn)槠駷橹共淮嬖谕Ｖ狗置涞母咝铱煽康姆椒?。因此，減少提前分娩的 發(fā)生被認(rèn)為是降低早產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)的決定性因素。所以，策略集中在教育醫(yī)生和患者有關(guān)提前 分娩的風(fēng)險(xiǎn)以及其早期檢測(cè)的方法。這些包括注意提前分娩的典型癥狀，例如每小時(shí)發(fā) 生超過六次的收縮，下腰鈍痛，感覺到骨盆壓力，腹瀉，陰道小量出血或流血或水樣陰 道排出物。另外，對(duì)于具有提前分娩和生產(chǎn)高風(fēng)險(xiǎn)的女性，建議每周子宮頸評(píng)估，經(jīng)陰 道超聲波檢查，胎兒纖連蛋白檢測(cè)(作為胎盤組織破壞的指示物)以及在家子宮活動(dòng)監(jiān)測(cè)(Weissmiller (1999), American Academy of Family Physicians)。目前，對(duì)提前分娩的處理包括臥床休息、減少身體活動(dòng)和使用安胎劑，以防止收縮，其在一些情況下有幫助，但 是在另一些情況下不是充分的。
本發(fā)明提供了通過降低宮頸擴(kuò)張速率而不是影響子宮收縮降低早產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)的新方 法。值得注意地，子宮頸成熟和擴(kuò)張被認(rèn)為到期之前的子宮收縮，以及在提前分娩的生 產(chǎn)之前(Word等人，見上文)。因此，施用松弛素特別適于預(yù)防宮頸擴(kuò)張非常重要的情 況。在另一些情況中，提前分娩過程中的子宮收縮導(dǎo)致宮頸擴(kuò)張。施用松弛素也可適于 降低擴(kuò)張速率，從而防止出生。本發(fā)明中，松弛素可單獨(dú)或者與改變收縮性的物質(zhì)(例 如安胎劑或孕酮)一起使用，提供了預(yù)防早產(chǎn)的更有效方法。
值得注意地，卵巢高刺激或者體外受精導(dǎo)致具有與正常妊娠相比提高的循環(huán)松 弛素水平的妊娠，其由于存在增加的黃體組織。因?yàn)檫@些妊娠與高發(fā)生率的早產(chǎn)相關(guān)， 建議松弛素血清水平的提高與早期分娩發(fā)作相關(guān)聯(lián)(Weiss等人，(1993)Obstet Gynecol 82，821-828).但是，這些妊娠中多個(gè)因素可在胎兒早熟風(fēng)險(xiǎn)增加中起作用。重要地 是，如本發(fā)明方法中所述施用松弛素導(dǎo)致松弛素血清水平比這些妊娠中所觀察到的水平 高數(shù)倍。本發(fā)明人顯示，在這些顯著更高的水平下，松弛素減少了宮頸擴(kuò)張，其為陰道 分娩的必要條件，因此預(yù)防了早產(chǎn)。
本發(fā)明還涵蓋了降低流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)的方法。流產(chǎn)，在妊娠約20周之前沒有明顯原因 的妊娠失敗，是早期妊娠的最常見并發(fā)癥。根據(jù)美國(guó)婦產(chǎn)科醫(yī)師學(xué)會(huì)(ACOG)，約15% 的已知妊娠以流產(chǎn)終結(jié)。但是，實(shí)際數(shù)量可能高得多，因?yàn)樵S多流產(chǎn)發(fā)生在妊娠的非常 早期，以至于女性甚至不知道自己懷孕。大多數(shù)流產(chǎn)在妊娠12周之前發(fā)生，有時(shí)是由于 胚胎的遺傳問題，其通常與母親無關(guān)。早期自發(fā)性流產(chǎn)的另一個(gè)原因可能是孕酮不足。 在這些情況下，給予孕酮補(bǔ)充劑的處方，但是沒有研究顯示它們能夠降低流產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。 流產(chǎn)的其他原因，尤其是在妊娠的晚期，包括但不限于子宮畸形、子宮中的生長(zhǎng)、子宮 頸問題以及臍帶或者胎盤的問題。盡管在多數(shù)情況下，流產(chǎn)與胎兒異常有關(guān)，但是妊娠 約20周之前妊娠產(chǎn)物的喪失是病因?qū)W不明的病癥。
目前，通過臥床休息處理孕婦中流產(chǎn)的高風(fēng)險(xiǎn)。流產(chǎn)經(jīng)常表現(xiàn)出腹部痙攣或者 陰道流血。其他癥狀包括但不限于，下腰痛或腹鈍痛或刺痛，有或無腹部痙攣的陰道小 量出血，從陰道流出的液體、組織或結(jié)塊樣物質(zhì)，發(fā)燒和嘔吐。減少流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)的策略主 要集中于減少身體活動(dòng)和臥床休息，其經(jīng)常使得預(yù)期的母親變得虛弱。另外，在本發(fā)明 所述的松弛素治療之前尚不存在可靠的預(yù)防流產(chǎn)的方法。然而，本發(fā)明提供了通過施用 松弛素預(yù)防流產(chǎn)以及降低流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)的可靠方法。流產(chǎn)經(jīng)常伴隨子宮頸的變化例如宮頸擴(kuò) 張。因此，施用松弛素非常適合這些情況，因?yàn)槠滹@著降低了宮頸擴(kuò)張的速率，如本文 所證明的。
由于通過施用松弛素預(yù)防提前分娩或流產(chǎn)，可增加妊娠期的長(zhǎng)度。在有些情況 下，施用松弛素可延長(zhǎng)妊娠至足月，其是優(yōu)選的，因?yàn)樽阍碌膵雰壕哂休^低的許多新生 兒并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)。由于母親或嬰兒的醫(yī)學(xué)狀況，例如先兆子癇、陰道流血或胎兒窘迫， 足月之前的分娩有時(shí)是需要的。在這些情況下，可施用松弛素將妊娠延長(zhǎng)到嬰兒器官發(fā) 育到足以確保嬰兒存活的階段。
新生兒存活機(jī)會(huì)的一個(gè)重要因素是出生體重。足月新生兒的平均出生體重為約127.5磅(3.2kg)，通常在約5.5-10磅范圍內(nèi)(2.7-4.61 )。早產(chǎn)兒的出生體重分類如下出 生體重低于51b8od2500g)定義為低出生體重(LBW)；低于31b 5oz(1500g)的體重是極 低出生體重(VLBW)；和低于21b 3oz (IOOOg)的體重是超低出生體重(ELBW)。LBW、 VLBW和ELBW與嬰兒中多個(gè)問題的較高風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，該問題包括但不限于腦癱、敗血 癥、慢性肺病和死亡。這些嬰兒也具有較高的低體溫風(fēng)險(xiǎn)，其可以是危險(xiǎn)的。低于均值 的出生體重經(jīng)常在早產(chǎn)新生兒中觀察到。因此，使用松弛素預(yù)防早產(chǎn)提供了增加新生兒 出生體重的方法。值得注意地，有時(shí)也在足月嬰兒中觀察到低于均值的出生體重。在某 些情況下，施用松弛素可用于延長(zhǎng)懷孕至足月，以增加出生體重和存活機(jī)會(huì)。
本發(fā)明提供了通過施用松弛素減少早產(chǎn)和流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)的方法以及增加懷孕期和嬰 兒出生體重的方法。松弛素(例如人H2松弛素)可通過多種施用途徑施用給傾向于早產(chǎn) 的女性，該施用途徑包括但不限于靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、局部施用或者通過脊椎注射。 使用松弛素治療可早在妊娠首三個(gè)月開始直至分娩發(fā)作，或者，治療可從妊娠中三個(gè)月 或妊娠末三個(gè)月初開始直至分娩發(fā)作。具有早產(chǎn)或流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)的女性
具有提前分娩、早產(chǎn)或流產(chǎn)史的女性，以及懷有雙胞胎或多胞胎的女性，或者 體外受精(IVF)后懷有單個(gè)胎兒的女性具有較高的早產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)。此外，非白人類女性，以 及低于18歲或者高于35歲的女性具有較高的提前分娩風(fēng)險(xiǎn)。營(yíng)養(yǎng)不良、肥胖、懷孕前體 重不足以及身高低于5英尺是增加這一風(fēng)險(xiǎn)的其他因素。另一個(gè)重要的方面是懷孕之間 的時(shí)間，出生和下一次懷孕之間6至9個(gè)月的短時(shí)間與早產(chǎn)高發(fā)生率相關(guān)。此外，具有 某些子宮或子宮頸異常的女性經(jīng)常提前分娩。例如，子宮頸功能不全的女性，即在懷孕 到達(dá)足月之前子宮頸在沒有痛或子宮收縮的情況下開始開放(擴(kuò)張)和變薄(消失)的病 癥。這些事件由于子宮頸虛弱而發(fā)生，其隨著懷孕的發(fā)展在子宮壓力增加下而開放。另 外，某些生活方式因素，包括但不限于產(chǎn)前護(hù)理晚或沒有、吸煙、酒精消費(fèi)、使用非 法藥物、家庭暴力、缺少社會(huì)支持、長(zhǎng)時(shí)間處于極高的壓力下和長(zhǎng)工作時(shí)間，可能也增 加早產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。懷孕期間的某些醫(yī)學(xué)情況也可增加女性在足月前生產(chǎn)的可能性。這些包 括異常胎盤形成、尿路感染、陰道炎、性傳播傳染病，以及可能其他感染、糖尿病、高 血壓、凝血疾病(血栓形成傾向)、陰道出血、嬰兒的某些先天缺陷以及暴露于DES (己 烯雌酚，用于治療雌激素不足情況的合成雌激素)。
具有較高流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)的女性包括大于35歲的女性，或者具有流產(chǎn)史的女性，以及 多胞胎妊娠的女性。另外，激素缺乏或失衡，子宮或子宮頸異常，麻疹、衣原體或其他 性傳播傳染病的感染，細(xì)菌性陰道炎，未控制的糖尿病，甲狀腺問題、免疫系統(tǒng)疾病、 嚴(yán)重腎病和先天性心臟病可能增加了流產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。另外，生活方式的因素例如抽煙、喝 酒或使用非法藥物，以及某些藥物例如粉刺藥物易維甲酸、嚴(yán)重營(yíng)養(yǎng)不良和暴露于環(huán)境 和工作危險(xiǎn)例如高水平輻射或毒性物質(zhì)增加了自發(fā)性流產(chǎn)的可能性。松弛素組合物和制 劑
松弛素和松弛素類似物配制成用于本發(fā)明方法的藥物?？杉せ钌飳W(xué)上或藥學(xué) 上有活性的松弛素(例如合成松弛素、重組松弛素)或松弛素激動(dòng)劑(例如松弛素類似 物或松弛素樣調(diào)節(jié)劑)與松弛素受體結(jié)合相關(guān)的生物學(xué)反應(yīng)的任何組合物或化合物可用 作本發(fā)明中的藥物。關(guān)于配制和施用技術(shù)的綜合細(xì)節(jié)在科學(xué)文獻(xiàn)中有充分描述(參見 Remington‘ sPharmaceutical Sciences，Maack Publishing Co，Easton Pa.)?？梢载S艮據(jù)本令頁域中已知的藥品生產(chǎn)方法來制備含有藥學(xué)上有活性的松弛素的藥物制劑。含有本發(fā)明方 法中所用的藥學(xué)上有活性的松弛素或松弛素激動(dòng)劑的制劑可配制用于以任何常規(guī)可接受 途徑施用，包括但不限于靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、局部或通過脊椎注射。下文給出了說明 性的實(shí)例。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，靜脈內(nèi)施用松弛素。
當(dāng)藥物通過靜脈內(nèi)注射遞送時(shí)，含有藥學(xué)上有活性的松弛素或藥學(xué)上有效的松 弛素激動(dòng)劑的制劑可以是無菌注射制劑的形式，如無菌的注射用含水或含油混懸劑。該 混懸劑可以根據(jù)已知技術(shù)使用上文已提到的那些適當(dāng)?shù)姆稚┗驖駶?rùn)劑和助懸劑進(jìn)行配 制。所述無菌注射制劑也可以是在無毒性的胃腸外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌注射 溶液。在能使用的可接受的賦形劑和溶劑中，尤其是水和林格氏液(一種等張氯化鈉)。 另外，可方便地用無菌不揮發(fā)性油作為溶劑或混懸媒介。對(duì)于該目的，可以使用任何溫 和的不揮發(fā)性油，包括合成的甘油單酯和甘油二酯。另外，脂肪酸如油酸也可用于制備 注射劑。
用于局部施用的藥物制劑含有藥學(xué)上可接受的局部載體和適于局部施用的藥 物，并且可以是任何適于施用到身體表面的形式。制劑包括例如霜?jiǎng)?、洗劑、溶液劑?凝膠劑、軟膏劑、糊劑等等。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的多種添加劑可包含在局部制劑中。 例如，可使用溶劑，包括相對(duì)少量的醇類，來使得某些制劑組分可溶。在制劑中包含加 入的透過增強(qiáng)劑也可以是所希望的。透過增強(qiáng)劑是局部藥物遞送領(lǐng)域技術(shù)人員已知的， 和/或在相關(guān)教科書和文獻(xiàn)中有述。參見例如Percutaneous Penetration Enhancers, Smith 等人編著(CRC Press，1995)。局部制劑還可包含常規(guī)添加劑，例如遮光劑、抗氧化劑、 香味劑、著色劑、膠凝劑、稠化劑、稀釋劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑等等。還可添加其他 試劑，例如抗微生物劑，以防止保存中的腐敗變質(zhì)，即，抑制微生物例如酵母和霉菌的 生長(zhǎng)。該制劑還可含有緩和刺激的添加劑，以減少或消除組合物的藥學(xué)上有活性的成分 或其他成分造成的皮膚刺激或表皮損傷的可能性。
可以使用本領(lǐng)域中熟知的藥學(xué)上可接受的載體以適于口服施用的劑量配制用于 口服施用的藥物制劑。這類載體能將藥物制劑配制成適合患者攝入的單位劑型，如片 劑、丸劑、散劑、膠囊、液體制劑(liquids)、錠劑、凝膠劑、糖漿、膏劑(slurries)、混 懸劑等。通過以下方法可以獲得用于口服使用的藥物制劑將松弛素化合物與固體輔料 混合，任選將所得的混合物粉碎，和在加入適合的另外的化合物(如果需要的話)后加 工顆粒混合物以獲得片劑或丸劑。適合的固體賦形劑是碳水化合物或蛋白質(zhì)填充劑，其 包括但不限于糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；來源于玉米、小麥、米、馬鈴 薯或其它植物的淀粉；纖維素如甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素或羧甲基纖維素鈉；和 樹膠，包括阿拉伯膠和西黃蓍膠；以及蛋白質(zhì)，如明膠和膠原。如果需要的話，可以加 入崩解劑或增溶劑，如交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、海藻酸或其鹽如海藻酸鈉。也可以 口服使用的本公開物的藥物制劑是例如由明膠制成的推入契合膠囊(push-fitcapsule)以及 由明膠和包衣如甘油或山梨醇制成的密封的軟膠囊。推入契合膠囊能含有與填充劑或粘 合劑如乳糖或淀粉、潤(rùn)滑劑如滑石粉或硬脂酸鎂和任選的穩(wěn)定劑混合的松弛素。在軟膠 囊中，松弛素化合物可以在存在或存在穩(wěn)定劑的情況下溶解或混懸在適合的液體如脂肪 油、液體石蠟或液體聚乙二醇中。
本公開物的含水混懸劑含有與適于生產(chǎn)含水混懸劑的賦形劑混合的松弛素。這14CN 102026650 A說明書12/19頁 類賦形劑包括助懸劑如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、海藻酸鈉、 聚乙烯吡咯烷酮、西黃蓍膠和阿拉伯膠、以及分散劑或濕潤(rùn)劑如天然存在的磷脂如卵磷 脂、烯化氧(alkylnene oxide)與脂肪酸的縮合產(chǎn)物(例如，聚氧乙烯硬脂酸酯)、環(huán)氧乙 烷與長(zhǎng)鏈脂肪醇的縮合產(chǎn)物(例如，heptadecaethylene oxycetanol)、環(huán)氧乙烷與衍生自脂 肪酸或己糖醇的部分酯的縮合產(chǎn)物(例如，聚氧乙烯山梨醇單油酸酯)或環(huán)氧乙烷與衍生 自脂肪酸或己糖醇酐的部分酯的縮合產(chǎn)物(例如，聚氧乙烯失水山梨醇單油酸酯)。含水 混懸劑還可以含有一種或多種防腐劑如對(duì)羥基苯甲酸乙酯或?qū)αu基苯甲酸正丙酯、一種 或多種著色劑、一種或多種矯味劑、一種或多種甜味劑如蔗糖、阿司帕坦或糖精。還可 以調(diào)整制劑的容積滲克分子濃度。
油混懸劑可以通過將松弛素混懸在植物油如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油 中或混懸在礦物油如液體石蠟中來配制。油混懸劑可以含有增稠劑如蜂蠟、硬石蠟或鯨 蠟醇?？梢约尤胩鹞秳┮蕴峁┛煽诘目诜苿?。這些制劑可以通過加入抗氧化劑如抗壞 血酸來保護(hù)。
適合用于通過加入水來制備含水混懸劑的本公開物的可分散的粉末和顆粒能由 松弛素以及分散劑、助懸劑和/或濕潤(rùn)劑和一種或多種防腐劑來配制。也可以存在另外 的賦形劑例如甜味劑、矯味劑和著色劑。
本公開物的藥物制劑還可以是水包油型乳劑的形式。油相可以是植物油如橄欖 油或花生油、礦物油如液體石蠟或它們的混合物。適合的乳化劑包括天然存在的樹膠如 阿拉伯膠和西黃蓍膠、天然存在的磷脂如大豆卵磷脂、衍生自脂肪酸或己糖醇酐的酯或 部分酯如失水山梨醇單油酸酯和這些部分酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物如聚氧乙烯失水山梨 醇單油酸酯。乳劑還含有甜味劑和矯味劑。糖漿和酏劑可以用甜味劑如甘油、山梨醇或 蔗糖配制。此類制劑還可以含有緩和劑、防腐劑、矯味劑或著色劑。施用和給藥方案
含有本發(fā)明方法中所用的藥學(xué)上有活性的松弛素的制劑可以任何常規(guī)可接受途 徑施用，包括但不限于靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、局部或通過脊椎注射。施用將隨著藥物的 藥代動(dòng)力學(xué)及其他性質(zhì)和患者健康狀況的不同而不同。下文給出了一般性指導(dǎo)。
本發(fā)明的方法在傾向于早產(chǎn)的人類女性中減少了宮頸擴(kuò)張。另外，本發(fā)明的方 法在傾向于早產(chǎn)或流產(chǎn)的女性中減少了早產(chǎn)和流產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)，以及在這些對(duì)象中增加了懷 孕期的長(zhǎng)度和增加了嬰兒出生體重。能夠完成此目的的松弛素單獨(dú)或者與其他藥品或藥 物(例如孕酮或安胎劑)組合的量被認(rèn)為是治療有效劑量。對(duì)于此用途有效的給藥時(shí)間 安排和量，即“給藥方案”依賴于多種因素，包括懷孕階段，提前宮頸擴(kuò)張的程度，提 前分娩的嚴(yán)重性，不良副作用的嚴(yán)重性，患者健康的一般性狀態(tài)，患者的身體狀況，年 齡等等。在為患者計(jì)算給藥方案時(shí)，也考慮到施用的模式。給藥方案必須還考慮藥代動(dòng) 力學(xué)，即，吸收速率、生物利用率、代謝率、清除率等。根據(jù)這些原則，松弛素可用于 在人類女性中降低宮頸擴(kuò)張，優(yōu)選傾向于早產(chǎn)的懷孕女性。
現(xiàn)有技術(shù)允許醫(yī)生針對(duì)每個(gè)患者個(gè)體確定松弛素給藥方案。例如，下文為松弛 素提供的指導(dǎo)可用作確定在實(shí)施本發(fā)明方法時(shí)施用的含有藥學(xué)上有活性的松弛素的制劑 的給藥方案的指導(dǎo)，即，給藥時(shí)間安排和劑量水平。按照一般性原則，預(yù)期藥學(xué)上有活 性的H2人松弛素(例如合成的、重組的)的日劑量通常為約0.1至500 μ g/kg對(duì)象體重/ 天的量，更通常為約1至500 μ g/kg對(duì)象體重/天的量。對(duì)象也可接受約10至IOOOyg/15kg對(duì)象體重/天的量的藥學(xué)上有活性的H2人松弛素(例如合成的、重組的)。在一個(gè) 實(shí)施方案中，松弛素的劑量是10、30、100和250yg/kg/天。在另一個(gè)實(shí)施方案中，這 些劑量導(dǎo)致松弛素的血清濃度分別為約3、10、30和75ng/ml。在另一個(gè)實(shí)施方案中， 繼續(xù)松弛素的施用以維持松弛素血清濃度為約0.5至約500ng/ml，更有約0.5至約300ng/ ml最優(yōu)選約3至約75ng/ml。在另一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)對(duì)象和病癥，繼續(xù)松弛素的施 用以維持松弛素血清濃度為約0.1至約50ng/ml，更有約0.1至約30ng/ml，最優(yōu)選約1至 約20ng/ml。松弛素施用維持一段特定時(shí)間，或者只要需要抑制宮頸擴(kuò)張和早產(chǎn)的一段 時(shí)間。例如，根據(jù)患者，根據(jù)需要一次或多次任選重復(fù)治療，松弛素治療持續(xù)時(shí)間可維 持約4小時(shí)至約96小時(shí)?；蛘?，松弛素可施用數(shù)周。例如，可使用用于皮下施用的便 攜式輸液泵來治療具有早產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)的女性達(dá)數(shù)周以上，而不要求其留在醫(yī)院。
松弛素制劑的單次或多次施用可根據(jù)需要的劑量和頻率以及具有早產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)的女 性對(duì)其的耐受來施用。該制劑應(yīng)提供足以有效降低宮頸擴(kuò)張的松弛素量。用于靜脈內(nèi)施 用松弛素的典型藥物制劑依賴于具體的治療。例如，松弛素可通過單治療(即沒有伴隨 其他藥物)或者與另一種藥物(medication)例如孕酮、安胎劑或其他藥品(drug)的聯(lián)合治 療施用給患者。值得注意地，施用給患者的松弛素劑量可根據(jù)年齡、懷孕階段、藥物耐 受性和伴隨的藥物和條件進(jìn)行變化。實(shí)驗(yàn)
下列具體實(shí)施例旨在說明本發(fā)明，不應(yīng)視為對(duì)所要求保護(hù)的范圍的限制。實(shí)施 例1評(píng)估人松弛素的安全性以及對(duì)子宮頸成熟作用的臨床研究
臨床研究概述。本研究設(shè)計(jì)成具有兩個(gè)目的。第一個(gè)是確定在女性體內(nèi)靜脈內(nèi) 施用重組人松弛素M小時(shí)的安全性。第二個(gè)目的是確定通過該方法施用的高劑量的松弛 素M小時(shí)是否可使得子宮頸成熟或者誘導(dǎo)分娩。主要效力終點(diǎn)為相比:Bishop得分(其為 復(fù)合的廣泛接受的子宮頸得分度量(Bishop，1964))中基線的變化，。該得分具有5個(gè)成 員，其全都對(duì)嬰兒陰道分娩所需的子宮頸變化有貢獻(xiàn)子宮頸擴(kuò)張、消失(effacement)、 產(chǎn)位(station)、一致性(consistency)和胎位(position)。出人意料地，松弛素不促進(jìn)子宮 頸成熟或分娩發(fā)生，相反卻在這些對(duì)象中降低宮頸擴(kuò)張。
研究對(duì)象。研究對(duì)象是進(jìn)入醫(yī)院接受預(yù)定引產(chǎn)的妊娠>40周健康的初產(chǎn)女性。 研究對(duì)象的加入和排除標(biāo)準(zhǔn)在表1至列出。該研究遵照方案、國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)議(International Conference on Harmonization, ICH)、臨床實(shí)踐標(biāo)準(zhǔn)(GCP)、FDA、當(dāng)?shù)匾?guī)章制度和 BAS Medical, Inc.,的標(biāo)準(zhǔn)操作程序60P)進(jìn)行。本發(fā)明人負(fù)責(zé)獲得參與該研究的每個(gè)患者 的知情同意。在簽署知情同意表之前，向患者解釋該研究的所有相關(guān)方面。知情同意書 由當(dāng)?shù)貍惱砦瘑T會(huì)批準(zhǔn)，并且在進(jìn)行除常規(guī)護(hù)理一部分之外的任何活動(dòng)或治療之前從患 者處獲得。這包括但不限于診斷或治療程序的性能以及所研究藥物第一劑量的施用。表 1研究對(duì)象關(guān)鍵準(zhǔn)入標(biāo)準(zhǔn) 健康初產(chǎn)女性>40周:fe娘 Bishop 得分 <4膜完整，胎兒頭頂先露，小于8次子宮收縮/小時(shí) 反應(yīng)性胎兒無應(yīng)激試驗(yàn) 單胎妊娠 18-40歲懷孕前BMI<29，懷孕期間體重增加<18Kg__關(guān)鍵排除標(biāo)準(zhǔn) 血紅蛋白<8.5gm/dL目前診斷有高血壓(持續(xù)SBP>140mmHg或者DBP>90mmHg)診斷有姓娘中毒(表現(xiàn)惡心、嘔吐、浮腫和/或蛋白尿)體重<50kg母親慢性腎臟疾病母親自身免疫或股原血管病需要胰島素療法的母親枉娠前糖尿病或姓娘期糖尿病子宮內(nèi)膜異位病史任何心臟傳導(dǎo)異常的心電圖證據(jù)要求ICU監(jiān)測(cè)的嚴(yán)重母親心臟病計(jì)劃的和/或之前的剖腹產(chǎn)，或者之前經(jīng)典子宮切開。胎盤前置或血管前置(Vasa praevia)胎兒先露異常，包括橫產(chǎn)式臍帶脫出活躍的生殖器皰疹感染 已知胎兒時(shí)形子宮內(nèi)生長(zhǎng)限制(IUGR)；對(duì)于胎齡來說體重在百分之十以下，腹部周長(zhǎng)在2.5%以下。
研究設(shè)計(jì)研究分兩部分進(jìn)行
部分A是多通道隨機(jī)化雙盲安慰劑對(duì)照劑量增加研究，其為18個(gè)>40周妊娠預(yù) 定引產(chǎn)的對(duì)象。測(cè)試7.5、25和75mcg/kg/天的松弛素的劑量。以6個(gè)為一群處理對(duì) 象，分別隨機(jī)分配為4 2比例的接受松弛素或安慰劑。一旦復(fù)查了安全性數(shù)據(jù)，則將 劑量增加到下一個(gè)劑量水平。
合格的患者在預(yù)定引產(chǎn)前至少M(fèi)小時(shí)進(jìn)入醫(yī)院。在引產(chǎn)前M小時(shí)，通過連續(xù)
權(quán)利要求
1.降低宮頸擴(kuò)張速率的方法，其包括將包含藥學(xué)上有活性的松弛素的藥物制劑施 用給懷孕的人類女性，以降低宮頸擴(kuò)張的速率。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述懷孕人類女性具有選自下列的癥狀早期收 縮、其小腹痙攣、其下腰鈍痛、其骨盆腔區(qū)域有壓力、胃痙攣、陰道排出物質(zhì)、陰道出 血和陰道水樣液體泄漏。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述松弛素是人H2松弛素。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述松弛素以約0.1至500u g/kg對(duì)象體重的量施用 給所述女性。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述松弛素施用給所述女性以維持約0.5至50ng/ml 的松弛素血清濃度。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述松弛素在妊娠首三個(gè)月開始時(shí)施用。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述松弛素施用直至分娩發(fā)作。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述松弛素在妊娠中三個(gè)月開始時(shí)施用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述松弛素施用直至分娩發(fā)作。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述松弛素在妊娠末三個(gè)月開始時(shí)施用。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所述松弛素施用直至分娩發(fā)作。
12.降低早產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)的方法，其包括將包含藥學(xué)上有活性的松弛素的藥物制劑施用給 懷孕的人類女性，以減少早產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所述懷孕人類女性具有選自下列的癥狀早期收 縮、其小腹痙攣、其下腰鈍痛、其骨盆腔區(qū)域有壓力、胃痙攣、陰道排出物質(zhì)、陰道出 血和陰道水樣液體泄漏。
14.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所述松弛素是人H2松弛素。
15.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所述松弛素以約0.1至500u g/kg對(duì)象體重的量施 用給所述女性。
16.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所述松弛素施用給所述女性以維持約0.5至50ng/ ml的松弛素血清濃度。
17.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所述松弛素在妊娠首三個(gè)月開始時(shí)施用。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中所述松弛素施用直至分娩發(fā)作。
19.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所述松弛素在妊娠中三個(gè)月開始時(shí)施用。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的方法，其中所述松弛素施用直至分娩發(fā)作。
21.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所述松弛素在妊娠末三個(gè)月開始時(shí)施用。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的方法，其中所述松弛素施用直至分娩發(fā)作。
23.增加?jì)雰撼錾w重的方法，其包括a)選擇具有早產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)的懷孕人類女性；和b)向所述女性施用包含藥學(xué)上有活性的松弛素的藥物制劑，從而通過延長(zhǎng)妊娠期來 增加?jì)雰旱某錾w重。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的方法，其中所述懷孕人類女性具有選自下列的癥狀早期收 縮、其小腹痙攣、其下腰鈍痛、其骨盆腔區(qū)域有壓力、胃痙攣、陰道排出物質(zhì)、陰道出 血和陰道水樣液體泄漏。
25.根據(jù)權(quán)利要求23的方法
26.根據(jù)權(quán)利要求23的方法 用給所述女性。
27.根據(jù)權(quán)利要求23的方法ml的松弛素血清濃度。
28.根據(jù)權(quán)利要求23的方法
29.根據(jù)權(quán)利要求28的方法
30.根據(jù)權(quán)利要求23的方法
31.根據(jù)權(quán)利要求30的方法
32.根據(jù)權(quán)利要求23的方法
33.根據(jù)權(quán)利要求32的方法其中所述松弛素是人H2松弛素。其中所述松弛素以約0.1至500 u g/kg對(duì)象體重的量施其中所述松弛素施用給所述女性以維持約0.5至50ng/其中所述松弛素在妊娠首三個(gè)月開始時(shí)施用。 其中所述松弛素施用直至分娩發(fā)作。 其中所述松弛素在妊娠中三個(gè)月開始時(shí)施用。 其中所述松弛素施用直至分娩發(fā)作。 其中所述松弛素在妊娠末三個(gè)月開始時(shí)施用。 其中所述松弛素施用直至分娩發(fā)作。
全文摘要
本發(fā)明涉及在人類女性中減少早產(chǎn)和流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)的方法。特別地，本發(fā)明提供了通過施用松弛素降低宮頸擴(kuò)張和提前分娩的方法。
文檔編號(hào)A61K38/00GK102026650SQ200980117756
公開日2011年4月20日 申請(qǐng)日期2009年5月15日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月16日
發(fā)明者D·R·斯圖爾特 申請(qǐng)人:科爾泰拉公司