專利名稱：具有高抗炎活性的細(xì)菌菌株的制作方法
具有高抗炎活性的細(xì)菌菌株本發(fā)明涉及具有高抗炎活性的益生菌菌株。本發(fā)明涉及作為白細(xì)胞介素-IO(IL-IO)的產(chǎn)生的強(qiáng)誘導(dǎo)物的細(xì)菌菌株。特別的是，本發(fā)明涉及由所述細(xì)菌菌株因其增強(qiáng)在外周血單個(gè)核細(xì)胞中的IL-10產(chǎn)生而顯示出的抗炎活性，另一方面該細(xì)菌菌株具有較低的刺激促炎性IL-12產(chǎn)生的能力，因此導(dǎo)致了高IL-10/IL-12比。本發(fā)明還涉及至少一種細(xì)菌菌株在制備用于預(yù)防或治療炎性腸病(IBD)和腸易激綜合征(IBS)的組合物中的應(yīng)用。最后，本發(fā)明涉及包含作為活性成分的至少一種益生菌菌株的食物產(chǎn)品，例如益生菌食物補(bǔ)充劑。已知益生菌是在以充足的量施用時(shí)會(huì)為宿主帶來(lái)健康益處的活微生物。正逐漸認(rèn)識(shí)到益生性乳酸桿菌和雙歧桿菌是用來(lái)預(yù)防和/或治療腸道病況的方法。與抗原或感染原的多數(shù)遭遇都出現(xiàn)在粘膜表面，粘膜表面包括在胃腸道、呼吸道和生殖泌尿道形成內(nèi)襯的表面。由于通常以口服方式來(lái)攝取益生菌，因此理想的是，益生菌適合用來(lái)影響在胃腸道的超過(guò)300m2的“粘膜邊界”發(fā)生的免疫應(yīng)答。腸免疫系統(tǒng)構(gòu)成免疫系統(tǒng)的最大部分。其與形式為食物抗原的復(fù)雜抗原性負(fù)載物、共棲細(xì)菌和偶然出現(xiàn)的病原體相互作用。樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)在最早期的細(xì)菌識(shí)別中和在T細(xì)胞應(yīng)答定形中起關(guān)鍵作用。樹(shù)突狀細(xì)胞感知組織中的抗原，隨后遷移至引流淋巴結(jié)， 在引流淋巴結(jié)中樹(shù)突狀細(xì)胞具有激活并影響初始T細(xì)胞功能分化的獨(dú)特能力。來(lái)自DC的信號(hào)能夠確定是否會(huì)出現(xiàn)針對(duì)特定抗原的耐受性或活性免疫應(yīng)答，并且進(jìn)一步影響Thl或 Th2免疫應(yīng)答是否會(huì)占據(jù)優(yōu)勢(shì)DC使共刺激分子CD80和CD86上調(diào)，并產(chǎn)生促成Thl應(yīng)答的 IL-12。DC還可以產(chǎn)生IL-10和IL_4，IL-10和IL-4促進(jìn)Th2應(yīng)答的產(chǎn)生或促進(jìn)調(diào)節(jié)T細(xì)胞的生成。對(duì)作為病原體的有害微生物、過(guò)敏原和毒素的識(shí)別會(huì)激活胃腸免疫系統(tǒng)。抗原特異性Treg細(xì)胞介導(dǎo)對(duì)共棲微生物的口服耐受，并將無(wú)害的腸居生物和病原體區(qū)分開(kāi)?？诜褪艿陌l(fā)展和保持發(fā)生中斷時(shí)會(huì)導(dǎo)致一系列異常的破壞性炎性病況，包括炎性腸病(IBD) 和結(jié)腸炎。IBD和結(jié)腸炎是其中患者的免疫系統(tǒng)對(duì)原生腸內(nèi)細(xì)菌產(chǎn)生過(guò)度反應(yīng)的病癥。在這些病況中出現(xiàn)的Treg細(xì)胞耗盡會(huì)有效地破壞耐受性，并使得在腸中出現(xiàn)大規(guī)模的炎癥。 Treg細(xì)胞的體內(nèi)轉(zhuǎn)移通過(guò)IL-10、TGF-β和CTLA-4依賴性機(jī)制而抑制上述疾病的發(fā)展。益生菌菌株能夠誘導(dǎo)諸如白細(xì)胞介素-I(IL-I)、IL-6、IL-12、腫瘤壞死因子 α (TNF-α)和Y干擾素(IFN-γ )等促炎細(xì)胞因子以及諸如IL-10和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β等抗炎細(xì)胞因子。IFN-Y和IL-12強(qiáng)力地放大巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞的功能，這或許是其抗致癌活性和抗感染活性的可能機(jī)制。另一方面，據(jù)假設(shè)，對(duì)IL-10和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β的誘導(dǎo)會(huì)參與炎癥的下調(diào)，因?yàn)檫@些細(xì)胞因子能夠抑制巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞的功能并且促進(jìn)調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞的發(fā)展。IL-10由多種細(xì)胞產(chǎn)生，包括Th2細(xì)胞、DC、單核細(xì)胞(monocyte)、B細(xì)胞、角化細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞；其具有抗炎效果，并主要起抑制Thl應(yīng)答的作用。IL-10驅(qū)動(dòng)抑制抗原特異性免疫應(yīng)答的CD4+T細(xì)胞子集(稱為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞1 (Trl))的生成，并且活躍地下調(diào)體內(nèi)的病理性免疫應(yīng)答。
“炎性腸病(IBD) ”涵蓋了若干種腸部病癥，包括克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎和囊炎 (pouchitis)ο在炎性腸病中，IL-10是引起特殊治療興趣的細(xì)胞因子，因?yàn)橐言趧?dòng)物模型中顯示，白細(xì)胞介素(IL)-IO(-/-)小鼠自發(fā)地發(fā)展腸部炎癥。已在動(dòng)物模型中顯示，在體外顯示出誘導(dǎo)更高水平的抗炎細(xì)胞因子IL-10和更低水平的炎性細(xì)胞因子IL-12的潛力的益生菌菌株在該模型中提供抵御體內(nèi)結(jié)腸炎的最佳保護(hù)。在對(duì)IBD的治療中，益生菌介導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)是令人感興趣的選擇，據(jù)顯示，口服遞送的細(xì)菌可以調(diào)節(jié)全身免疫系統(tǒng)和粘膜免疫系統(tǒng)。然而，由于菌株在胃腸道中的存活情況和持續(xù)性的不同，且/或由于益生菌與宿主免疫系統(tǒng)之間的菌株特異性相互作用，并非所有候選益生菌都被證明同樣高效。因此，對(duì)成功的保護(hù)性菌株的選擇將取決于對(duì)大量候選菌株進(jìn)行的針對(duì)其技術(shù)性能和免疫調(diào)節(jié)性能的適當(dāng)篩選。所以，仍需要分離并選擇具有突出抗炎活性的細(xì)菌菌株。特別而言，仍需要分離并選擇作為IL-10的產(chǎn)生的強(qiáng)誘導(dǎo)物的特定細(xì)菌菌株。此外，仍需要分離并選擇具有較低的刺激促炎性IL-12的產(chǎn)生的能力從而使IL-10/IL-12比至少大于1的細(xì)菌菌株。最后，仍需要找到并選擇在胃腸道中因其對(duì)胃液、膽汁鹽、胰分泌物和對(duì)腸壁的粘附有抗性而顯示出高持續(xù)性的細(xì)菌菌株。最后但并非最次要的是，選擇不具有獲得性抗生素抗性的細(xì)菌菌株是很重要的。本申請(qǐng)人已選出了一組能夠解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的突出問(wèn)題的細(xì)菌菌株。根據(jù)本發(fā)明的第一方面，提供了通過(guò)刺激白細(xì)胞介素-10而具有免疫調(diào)節(jié)功能的一組細(xì)菌菌株或其細(xì)胞組分。根據(jù)本發(fā)明的第二方面，提供了含有至少一種細(xì)菌菌株或其細(xì)胞組分作為活性成分的食物產(chǎn)品。根據(jù)本發(fā)明的第三方面，提供了含有用作藥物的至少一種細(xì)菌菌株或其細(xì)胞組分的組合物。根據(jù)本發(fā)明的第四方面，提供了至少一種細(xì)菌菌株或其細(xì)胞組分在制備用于預(yù)防或治療大腸和小腸炎性病癥的藥物中的應(yīng)用。根據(jù)本發(fā)明的第五方面，提供了至少一種細(xì)菌菌株或其細(xì)胞組分在制備用于預(yù)防或治療機(jī)能性腸障礙的藥物中的應(yīng)用。本申請(qǐng)人已測(cè)試了屬于以下物種的細(xì)菌菌株嗜酸乳桿菌、卷曲乳桿菌、加氏乳桿菌、德氏乳桿菌、唾液乳桿菌、干酪乳桿菌、副干酪乳桿菌、植物乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、短乳桿菌、布氏乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌、青春雙歧桿菌、角雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌、 短雙歧桿菌、鏈狀雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、乳雙歧桿菌、長(zhǎng)雙歧桿菌、假鏈狀雙歧桿菌和嗜熱鏈球菌。表1示出了在本發(fā)明范圍內(nèi)具有有效應(yīng)用的一組細(xì)菌菌株。表權(quán)利要求
1.一種細(xì)菌菌株，所述細(xì)菌菌株是白細(xì)胞介素-10的誘導(dǎo)物，所述細(xì)菌菌株選自由副干酪乳桿菌LMG P-21380、植物乳桿菌LMG P-21021、乳雙歧桿菌LMG P-21384和短雙歧桿菌DSM 16604或其細(xì)胞組分組成的組。
2.如權(quán)利要求1所述的細(xì)菌菌株，其中，所述細(xì)菌顯示出大于1且小于150、優(yōu)選為 10 100、更優(yōu)選為30 60的IL-10/IL-12比。
3.如權(quán)利要求1或2所述的細(xì)菌菌株短雙歧桿菌DSM16604，所述短雙歧桿菌DSM 16604是白細(xì)胞介素-10的誘導(dǎo)物，且顯示出50 100、優(yōu)選為70 80的IL-10/IL-12比。
4.如權(quán)利要求1 3中任一項(xiàng)所述的細(xì)菌菌株，其中所述細(xì)菌為活細(xì)菌形式或死細(xì)菌形式或其細(xì)胞組分形式。
5.一種食物產(chǎn)品，所述食物產(chǎn)品包含至少一種作為活性成分的權(quán)利要求1 4中任一項(xiàng)所述的細(xì)菌菌株。
6.一種組合物，所述組合物包含至少一種用作藥物的權(quán)利要求1 4中任一項(xiàng)所述的細(xì)菌菌株。
7.如權(quán)利要求6所述的組合物，所述組合物用作用于預(yù)防或治療大腸和小腸炎性病癥的藥物。
8.如權(quán)利要求7所述的組合物，其中，所述炎性病癥選自由克羅恩氏病和潰瘍性結(jié)腸炎組成的組。
9.如權(quán)利要求6所述的組合物，所述組合物用作用于預(yù)防或治療機(jī)能性腸障礙的藥物。
10.如權(quán)利要求9所述的組合物，其中，所述機(jī)能性腸障礙選自由痢疾和便秘組成的組。
11.權(quán)利要求1 4中任一項(xiàng)所述的細(xì)菌菌株中的至少一種在制備用于預(yù)防或治療大腸和小腸炎性病癥的藥物中的應(yīng)用。
12.如權(quán)利要求11所述的應(yīng)用，其中，所述炎性病癥選自由克羅恩氏病和潰瘍性結(jié)腸炎組成的組。
13.權(quán)利要求1 4中任一項(xiàng)所述的細(xì)菌菌株中的至少一種在制備用于預(yù)防或治療機(jī)能性腸障礙的藥物中的應(yīng)用。
14.如權(quán)利要求13所述的應(yīng)用，其中，所述機(jī)能性腸障礙選自由痢疾和便秘組成的組。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有高抗炎活性的益生菌菌株。本發(fā)明涉及作為產(chǎn)生白細(xì)胞介素10(IL-10)的強(qiáng)力誘導(dǎo)物的細(xì)菌菌株。特別地，本發(fā)明涉及由所述細(xì)菌菌株因其增強(qiáng)IL-10在外周血單個(gè)核細(xì)胞中的產(chǎn)生而表現(xiàn)出的抗炎活性，另一方面該細(xì)菌菌株具有較低的刺激促炎性IL-12產(chǎn)生的能力，因此導(dǎo)致了高IL-10/IL-12比。本發(fā)明還涉及至少一種細(xì)菌菌株在制備用于預(yù)防或治療炎性腸病(IBD)和腸易激綜合征(IBS)的組合物中的應(yīng)用。本發(fā)明最后涉及包含至少一種益生菌菌株作為活性成分的食物產(chǎn)品，例如益生菌食物補(bǔ)充劑。
文檔編號(hào)A61P1/00GK102438637SQ200980158993
公開(kāi)日2012年5月2日 申請(qǐng)日期2009年3月5日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月5日
發(fā)明者G·P·斯特羅齊, G·莫格納, L·莫格納 申請(qǐng)人:益生菌股份公司