專利名稱：：一種桑葉抗炎、降血糖提取物及其制劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種桑葉抗炎、降血糖提取物的制備方法及其制劑，該提取物含有較高濃度的桑葉黃酮、生物堿和多糖成分，該提取物及其制劑明顯的抗炎和降低血糖作用。
背景技術(shù)：
：桑葉為桑料植物桑(MorusalbaL.)的葉，其藥用價(jià)值最早見于《神農(nóng)本草經(jīng)》，桑葉性寒，味苦，歸肺、肝經(jīng)，具有祛風(fēng)清熱、涼血明目等功效《本草經(jīng)疏》記載桑葉性味苦、甘、寒，甘所以益血，寒所以涼血，甘寒相合，故下氣而益陰，又能明目而止咳，有補(bǔ)益之功?，F(xiàn)代化學(xué)研究表明桑葉含有黃酮及黃酮苷、生物堿、多糖、甾醇、揮發(fā)油、氨基酸、維生素、微量元素等多種對(duì)人體健康有利的化學(xué)物質(zhì)。藥理研究表明，桑葉對(duì)人體及為安全，且具有降血糖、降血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗炎、抗衰老、抗腫瘤、抗病毒等多種治療功能。桑葉有效成分提取物的研究報(bào)道及專利申請(qǐng)已非常多，如洪春力申報(bào)的發(fā)明專利'一種桑葉總堿浸膏的制劑及其制備方法'(公開號(hào)CN1430964A)，介紹了一種治療糖尿病桑葉總生物堿浸膏的提取方法；李淑芬，等申報(bào)的發(fā)明專利'從桑葉中連續(xù)提取生物堿、黃酮和多糖活性成分的方法'(公開號(hào)CN101209284)，介紹了從桑葉中連續(xù)提取純化生物堿、黃酮、多糖類成分的方法。但通過文獻(xiàn)查詢，目前尚未發(fā)現(xiàn)對(duì)桑葉抗炎、降血糖有效成分同時(shí)提取的研究報(bào)道和專利的申報(bào)記錄。本發(fā)明的目的在于研制一種桑葉抗炎、降血糖提取物及其制劑，擴(kuò)大桑葉的應(yīng)用范圍。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明公開了一種桑葉抗炎、降血糖提取物的制備方法及其制劑。該制備方法簡易可行，制劑穩(wěn)定安全，非常有利于工業(yè)化生產(chǎn)，通過動(dòng)物藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，證明該制備方法生產(chǎn)的提取物有顯著的抗炎和降血糖作用。桑葉抗炎、降血糖有效成分同時(shí)提取的研究未見報(bào)道，本發(fā)明在采用傳統(tǒng)提取分離方法的基礎(chǔ)上，應(yīng)用了一些專門技術(shù)以提高桑葉提取物的抗炎、降血糖作用。具體步驟如下桑葉藥材適當(dāng)粉碎后，用10%到95%含水甲醇或乙醇，在靜態(tài)或動(dòng)態(tài)下，室溫或加熱(包括回流、微波等)提取，提取溶劑用量為藥材的515倍，提取次數(shù)為13次，提取液過濾合并、減壓或常壓蒸餾回收醇溶劑到收集液醇含量低于20%后，繼續(xù)蒸發(fā)濃縮到無醇味(相對(duì)密度1.051.25/8CTC)、加水26倍量，加酸調(diào)節(jié)pH=32后，放24到72小時(shí)，過濾。過濾收集的不溶物低溫烘干、粉碎備用。濾液先過聚酰胺樹脂充分吸附后，過陽離子交換樹脂充分吸附。吸附濾液的聚酰胺樹脂水洗凈、氨水悶制4小時(shí)后用10%到95%的含水甲醇或乙醇提取，提取液用醋酸調(diào)節(jié)pH近中性，回收醇溶劑，減壓濃縮成浸膏后干燥粉碎備用。吸附濾液的離子交換樹脂水洗凈、氨水悶制4小時(shí)后用10%到95%的含水甲醇或乙醇提取，提取液回收醇溶劑，減壓濃縮成浸膏后干燥粉碎備用。醇提取后的桑葉粗粉除去殘余的醇溶液，用水提取，提取液過濾合并，減壓蒸發(fā)濃4縮到相對(duì)密度大于1.20/8(TC，加入含醇量大于85%的乙醇溶液調(diào)節(jié)溶液含醇量在50%70%攪拌均勻，放置2472小時(shí)后過濾收集沉淀物，低溫烘干粉碎備用。將前述制得的物料粉末充分混合均勻即得。本發(fā)明制成的提取物在生產(chǎn)藥品、健康相關(guān)產(chǎn)品制劑時(shí)，可加入國家和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及法規(guī)允許加入的輔料，比如淀粉、蔗糖、糊精、甘露醇、甘油、硅衍生物、硬脂酸鎂、滑石粉等。本發(fā)明制成的提取物可通過適當(dāng)方法制成藥品、健康相關(guān)產(chǎn)品的任何劑型，這些劑型包括片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、含服片劑、泡騰片劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、丸劑、滴丸劑、顆粒劑、茶劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、溶液劑、注射劑、栓劑、硬膏劑、軟膏劑、霜?jiǎng)?、噴霧劑、滴劑、貼劑等。本發(fā)明優(yōu)先選擇的劑型為口服制劑，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、合劑等。本發(fā)明制成的提取物通過以下藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)證明其有益效果—、抗炎作用1.實(shí)驗(yàn)材料1.l藥物桑葉提取物，用實(shí)例l方法制備，實(shí)驗(yàn)前用水配成所需濃度；陽性對(duì)照藥地塞米松(浙江仙琚制藥股份有限公司，批號(hào)071010)。角叉菜膠(中國藥品生物制品檢定所提供)。1.2動(dòng)物KM小鼠，1822g，$;SD大鼠，體重110140g，古。1.3儀器與試劑EL204萬分之一克電子天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)。Lambda35UVPerkinElmer(美國珀金艾爾默公司)，LG16-W型高速離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)。PV-200足趾容積測量儀(成都泰盟科技有限公司)。2.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS11.0對(duì)所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)。3.實(shí)驗(yàn)方法3.l對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹度的影響取小鼠75只，隨機(jī)分為5組，分別為空白對(duì)照組(生理鹽水)、陽性對(duì)照組(地塞米松，6mg/kg)、桑葉提取物高(10g生藥/kg)、中(5g生藥/kg)、低(2g生藥/kg)三個(gè)劑量組。灌胃給藥，l次/d，給藥容量為20mL/kg，連續(xù)7d。末次藥后60min，各鼠以0.02ml二甲苯滴于右耳致炎，15min后處死，沿耳廓基線剪下二耳。用6mm直徑打孔器分別在左、右耳同一部位打下圓耳片，稱重，以左右耳重量差作為腫脹度。3.2對(duì)醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響取小鼠60只，隨機(jī)分為5組，分別為空白對(duì)照組(生理鹽水)、陽性對(duì)照組(地塞米松，6mg/kg)、桑葉提取物高(10g生藥/kg)、中(5g生藥/kg)、低(2g生藥/kg)三個(gè)劑量組。灌胃給藥，1次/d，給藥容量為20mL/kg，連續(xù)7d。末次藥后60min，各鼠尾靜脈注射0.25%伊文斯蘭0.lml/10g，同時(shí)腹腔注射0.6%醋酸溶液0.lml/10g。15min后處死，立即注入6ml生理鹽水沖洗腹腔，剪開腹腔，濾出腹腔洗出液，2000rpm離心10min，取上清液于590nm處測定OD值。3.3對(duì)角叉菜膠致大鼠足趾腫脹的影響取大鼠60只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組(生理鹽水)，陽性對(duì)照組(地塞米松，4.5mg/kg)，桑葉提取物高劑量(9g生藥/kg)、中劑量(4g生藥/kg)、低劑量(2g生藥/kg)三個(gè)劑量組。灌胃給藥，1次/d，給藥容量為20ml/kg，連續(xù)7d。末次給藥lh后，將0.08mLl^角叉菜膠注入大鼠右后足趾皮下，用足趾容積測量儀分別測量注射前、注射后1、2、3、4、5h大鼠足趾至踝關(guān)節(jié)容積，并用公式計(jì)算其腫脹度(腫5脹度E(%)=(Vt-Vn)/VnX100%，其中Vn和Vt分別代表用致炎劑前后足趾容積值)。4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析抗炎實(shí)驗(yàn)結(jié)果見下表1和表2:表1桑葉醇提物對(duì)耳廓腫脹度(n=15)和腹腔毛細(xì)血管通透性的影響(n=12)組別動(dòng)物數(shù)劑量(g/kg)耳廓腫脹度(g)腹腔液OD值空白對(duì)照組15;12—0.0070±0.00370.2124±0.0580陽性對(duì)照組高劑量組中劑量組低劑量組15;1215;1215;1215;120扁1020.0025±0.0015**0.0028±0.0022**0.0041士0.0029**0.0060±0.00300.1419±0.0354**0.1429±0扁5**0.1315±0.0460**0.1650±0.0338**P<0.05**P<0.01表2桑葉提取物對(duì)角叉菜膠所致大鼠足趾腫脹的影響(3f±s，n=12)組別劑量g/kg致炎后腫脹度(％)lh2h3h4h5h空白對(duì)照組一35.46土0.0849.80土0.0S'57.41±0.1454.99±0.1349.14±0.13陽性對(duì)照組0.004510.74±0.07'*18.92±0.10'"21.04土0.09"20.94士0.08"17.10i0.09"高劑量組717.05土0.09"34.27土0.07'"46.76士0.07'41.03士0.08"37.90±0.11'中劑量組424.24±0.07"39.50土0.08'"48.13±0.05'45.94士0.06'40.04±0.07'低劑量組220.83土0.05"39.58土0.09'"47息0.06'40.65士0.09"32.82±0.11*'*P<0.05**P<0.01實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析1)桑葉提取物高、中劑量組分別使小鼠的耳廓腫脹的程度由空白組的0.0070±0.0037，降低到0.0041±0.0029，和0.0028±0.0022，高劑量組幾乎接近陽性試藥地塞米松的水平。均可顯著減輕二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹的程度能對(duì)抗炎癥急性期的滲出(P〈0.01)(表l)。表1結(jié)果還顯示，桑葉提取物的高、中、低劑量組使醋酸致腹腔毛細(xì)血管通透性增加的作用由空白組的0.2124±0.05800.分別降低為0.1429±0.0205、0.1315±0.0460和0.1650±0.03380.均有明顯抑制醋酸致腹腔毛細(xì)血管通透性增加的作用(P<0.050.01)，提示均能對(duì)抗炎癥急性期的滲出。2)桑葉提取物高、中、低劑量組于末次給藥后lh、2h、3h、4、5h均有不同程度地明顯抑制角叉菜膠所致大鼠足趾腫脹的程度(P<0.050.01)，提示均能對(duì)抗炎癥急性期的滲出。結(jié)論以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，本桑葉提取物對(duì)實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物炎癥有較好的抑制作用。二、降低實(shí)驗(yàn)性血糖升高作用1.實(shí)驗(yàn)材料2.1藥物桑葉提取物，用實(shí)例1方法制備，實(shí)驗(yàn)前用水配成所需濃度。陽性對(duì)照藥鹽酸二甲雙胍腸溶片(貴州圣濟(jì)堂制藥有限公司，批號(hào)20070501)。61.2動(dòng)物KM小鼠，1822g，古。1.3儀器與試劑EL204萬分之一克電子天平(梅特勒_托利多儀器(上海)有限公司)，Lambda35UVPerkinElmer(美國珀金艾爾默公司)，LG16-W型高速離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)；血糖GOD-PAP法檢測試劑盒(四川省邁克科技有限責(zé)任公司，批號(hào)0308091)。2.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS11.0對(duì)所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)。3.實(shí)驗(yàn)方法及實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析取禁食不禁水24h后的小鼠，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(空白對(duì)照組)和造模對(duì)照組。正常對(duì)照組腹腔注射生理鹽水，造模對(duì)照組按65mg/kg體重腹腔注射四氧嘧啶，72h后(禁食不禁水12h)各鼠眼眶靜脈叢取血測血糖值，選擇血糖值在1033mmol/L的小鼠為造模成功小鼠(稱為模型對(duì)照組)，按血糖水平隨機(jī)分為四氧嘧啶模型對(duì)照組，二甲雙胍陽性對(duì)照組(0.75g/kg)、桑葉提取物高(7g生藥/kg)、中(4g生藥/kg)、低(2g生藥/kg)三個(gè)劑量組。灌胃給藥，1次/d，給藥容量為20ml/kg，連續(xù)7d，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給同容量生理鹽水。末次給藥后(禁食不禁水12h)60min，于眼眶靜脈叢取血，按血糖測定試劑盒操作測定血糖值，結(jié)果見下表3:表3桑葉提取物對(duì)四氧嘧啶性高血糖小鼠血糖的影響(±s，n=12)組別動(dòng)物數(shù)劑量(g/kg)藥前血糖值(mmol/L)藥后血糖值(mol/L)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實(shí)驗(yàn)結(jié)論本桑葉提取物對(duì)四氧嘧啶性高血糖小鼠的血糖有明顯降低作用。具體實(shí)施例方式以下通過實(shí)施實(shí)例進(jìn)一步說明本發(fā)明的具體實(shí)施過程實(shí)施實(shí)例1桑葉藥材粉碎成粗粉10kg，以70%的乙醇回流提取2次，首次150kg，2次80kg;乙醇提取液過濾合并，6(TC減壓回收乙醇、濃縮到相對(duì)密度等于1.15/8CTC(已無醇味)，稱量得1.93kg，加水8kg，煮沸30分鐘后放冷，加鹽酸調(diào)節(jié)pH=32，放24到72小時(shí)后抽濾分別收集不溶物和濾液。不溶物8(TC減壓烘干稱重得682g，粉碎備用。濾液先用處理好的聚酰胺樹脂柱(樹脂重5kg)充分吸附，聚酰胺處理后的溶液用陽離子交換樹脂柱(樹脂重10kg)充分吸附。吸附濾液的聚酰胺樹脂水洗凈、氨水悶制4小時(shí)后用80%乙醇回流提取3次(首次加醇為40kg，2次和3次均為25kg)，醇提取液過濾合并，冰醋酸調(diào)節(jié)pH=6.57，減壓回收乙醇，減壓蒸發(fā)濃縮成相對(duì)密度大于1.30/80°C的浸膏，8(TC減壓烘干稱重得218g，粉碎備用。吸附溶液的陽離子交換樹脂充分吸附，水洗凈、氨水悶制4小時(shí)后用80%乙醇回流提取2次(首次加醇為80kg，2次50kg)，醇提取液過濾合并，減壓回收乙醇，減壓蒸發(fā)濃縮成相對(duì)密度大于1.30/8(TC的浸膏，8(TC減壓烘干稱重得413g，粉碎備用。醇提取后的桑葉粗粉8(TC烘除殘余的醇溶液，用水煮沸提取2次，首次加水為藥材重量的150kg，2次為100kg，提取液過濾合并，減壓蒸發(fā)濃縮到相對(duì)密度大于1.20/80°C，加入含醇量大于85%的乙醇溶液，調(diào)節(jié)溶液含醇量在70%，攪拌均勻，放置72小時(shí)后過濾收集沉淀物，8(TC減壓烘干稱重得351g、粉碎備用。將前述提取制得的各物料粉按比例等量遞增混合均勻即得。實(shí)施實(shí)例2膠囊劑[處方]桑葉干膏200g藥用淀粉98g硬脂酸鎂2g共制成硬膠囊1000粒。[制法]將桑葉浸膏制成細(xì)粉，按等量遞增方法與藥用淀粉、硬脂酸鎂充分混合均勻裝入硬膠囊殼中即可。實(shí)施實(shí)例3片劑[處方]桑葉干膏200g藥用淀粉100g硬脂酸鎂2g共制成1000片糖衣片。[制法]將桑葉浸膏制成細(xì)粉，按等量遞增方法與藥用淀粉充分混合均勻，以60%乙醇制壓片顆粒，干燥、整粒，加入硬脂酸鎂充分混合均勻，壓片、包糖衣即可。實(shí)施實(shí)例4顆粒劑[處方]桑葉干膏1000g糊精980g甜味劑及其它輔料20g共制成100袋。[制法]將桑葉浸膏制成細(xì)粉，按等量遞增方法與糊精、甜味劑等充分混合均勻，以60%乙醇制顆粒，干燥、整粒，分裝于適當(dāng)容器中即可。權(quán)利要求一種具有抗炎、降血糖作用的桑葉提取物，其特征在于該桑葉提取物含有桑葉生物堿、黃酮、多糖等有效成分。2.權(quán)力要求1的桑葉提取物的制備方法，其特征在于經(jīng)過以下步驟2.1將桑葉藥材粉碎成粗粉，用10%到95%的含水甲醇或乙醇提??；2.2提取液過濾、濃縮、加水，加酸放置后過濾；2.3過濾收集的不溶物低溫烘干、粉碎備用，濾液先過聚酰胺樹脂充分吸附后，過陽離子交換樹脂充分吸附，2.4吸附濾液的聚酰胺樹脂水洗凈、氨水悶制4小時(shí)后用10%到95%的含水甲醇或乙醇提取，提取液用醋酸調(diào)節(jié)pH近中性，回收醇溶劑，減壓濃縮成浸膏后干燥粉碎備用；2.5吸附濾液的離子交換樹脂水洗凈、氨水悶制4小時(shí)后用10%到95%的含水甲醇或乙醇提取，提取液回收醇溶劑，減壓濃縮成浸膏后干燥粉碎備用；2.6醇提取后的桑葉粗粉除去殘余的醇溶液，用水提取，提取液過濾合并，減壓蒸發(fā)濃縮到相對(duì)密度大于1.20/8(TC，加入含醇量大于85%的乙醇溶液調(diào)節(jié)溶液含醇量在50%70%攪拌均勻，放置2472小時(shí)后過濾收集沉淀物，低溫烘干粉碎備用；2.7將2.3、2.4、2.5和2.6的物料粉末充分混合均勻即得。3.權(quán)力要求2所述具有抗炎、降血糖作用的桑葉提取物的制備方法，其特征是最佳生產(chǎn)工藝如下以70%的乙醇回流提取2次，首次15倍，2次8倍；乙醇提取液過濾合并，減壓回收乙醇后，濃縮到相對(duì)密度等于1.15/8(TC，加入4倍量水、煮沸30分鐘后放冷，加鹽酸調(diào)節(jié)pH=32，放24到72小時(shí)后抽濾分別收集不溶物和濾液。不溶物8(TC減壓烘干、粉碎備用。濾液先用處理好的聚酰胺樹脂充分吸附，聚酰胺處理后的溶液用陽離子交換樹脂充分吸附。吸附濾液的聚酰胺樹脂水洗凈、氨水悶制4小時(shí)后用80%乙醇回流提取3次(首次加醇為樹脂濕重點(diǎn)8倍，2次和3次均為5倍)，醇提取液過濾合并，冰醋酸調(diào)節(jié)pH=6.57，減壓回收乙醇，減壓蒸發(fā)濃縮成相對(duì)密度大于1.30/8(TC的浸膏，8(TC減壓烘干、粉碎備用。吸附溶液的陽離子交換樹脂充分吸附，水洗凈、氨水悶制4小時(shí)后用80%乙醇回流提取2次(首次加醇為樹脂濕重點(diǎn)8倍，2次為5倍)，醇提取液過濾合并，減壓回收乙醇，減壓蒸發(fā)濃縮成相對(duì)密度大于1.30/8(TC的浸膏，8(TC減壓烘干、粉碎備用。醇提取后的桑葉粗粉8(TC烘除殘余的醇溶液，用水煮沸提取2次，首次加水為藥材重量的15倍，2次為10倍，提取液過濾合并，減壓蒸發(fā)濃縮到相對(duì)密度大于1.20/8(TC，加入含醇量大于85%的乙醇溶液，調(diào)節(jié)溶液含醇量在70%，攪拌均勻，放置72小時(shí)后過濾收集沉淀物，80°C減壓烘干、粉碎備用。將前述提取制得的各物料粉按比例等量遞增混合均勻即得。4.權(quán)力要求2所述具有抗炎、降血糖作用的桑葉提取物的制備方法，其特征是藥材的提取可采用動(dòng)態(tài)的回流提取、煮沸提取、滲漉提取，靜態(tài)的浸泡、微波提取等。提取浸膏干燥方式可采用常溫烘干、減壓烘干、噴霧干燥等方式。5.權(quán)力要求2所述具有抗炎、降血糖作用的桑葉提取物，其特征是可添加適當(dāng)輔料制成任何劑型，如(不僅僅包括)糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、含服片劑、泡騰片劑，硬膠囊劑、軟膠囊劑、丸劑、滴丸劑、顆粒劑、茶劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、溶液劑、注射劑、栓劑、硬膏劑、軟膏劑、霜?jiǎng)婌F劑、滴劑、貼劑等，作為藥品、健康相關(guān)產(chǎn)品運(yùn)用。本發(fā)明優(yōu)先選擇的劑型為口服制劑，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、合劑等。6.權(quán)力要求2所述具有抗炎、降血糖作用的桑葉提取物及其制劑，其特征是制備制劑的輔料是國家和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及法規(guī)允許加入的輔料，比如(不僅僅包括)淀粉、蔗糖、糊精、甘露醇、甘油、硅衍生物、硬脂酸鎂、滑石粉等。7.權(quán)力要求2所述具有抗炎、降血糖作用的桑葉提取物，其特征是可用于非致病病原體感染性疾病引起的炎癥、糖尿病等疾病的預(yù)防、治療和康復(fù)；也可與抗病原微生物藥物聯(lián)合應(yīng)用，治療致病病原體感染性疾病引起的炎癥。全文摘要本發(fā)明涉及一種桑葉提取物及其制劑的制備方法，該提取物含有較高濃度的桑葉生物堿、黃酮和多糖類成分，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有明顯的抗炎和降低非正常高血糖作用，可作為藥品或健康相關(guān)產(chǎn)品推廣使用。文檔編號(hào)A61P29/00GK101780147SQ20101012259公開日2010年7月21日申請(qǐng)日期2010年3月12日優(yōu)先權(quán)日2010年3月12日發(fā)明者藍(lán)鳴生,陳路申請(qǐng)人:廣西藥用植物園制藥廠