專利名稱：特丁基對苯二酚在制備治療地中海貧血的藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及特丁基對苯二酚(tBHQ)在制備治療地中海貧血的藥物中的用途，特別是涉及特丁基對苯二酚通過激活Nrf2而上調(diào)α-珠蛋白穩(wěn)定蛋白(AHSP)的表達(dá)從而緩解并治療地中海貧血的癥狀。
背景技術(shù)：
1.地中海貧血及其治療地中海貧血是人類最為常見的單基因遺傳性疾病之一。當(dāng)珠蛋白基因發(fā)生突變時(shí)，一種或多種珠蛋白肽鏈的合成受阻，最終導(dǎo)致α-珠蛋白肽鏈和珠蛋白肽鏈的合成不平衡。游離的珠蛋白肽鏈?zhǔn)菑?qiáng)氧化劑，可以催化產(chǎn)生活性氧自由基ROS。ROS的產(chǎn)生可以破壞紅系前體細(xì)胞和成熟的紅細(xì)胞，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致凋亡。凋亡的紅系前體細(xì)胞累積即可導(dǎo)致無效的紅系生成，其癥狀即為貧血。另外，游離的珠蛋白不穩(wěn)定而易發(fā)生沉淀或降解。珠蛋白在紅細(xì)胞膜上的沉淀會(huì)破壞細(xì)胞膜導(dǎo)致溶血性貧血。降解的珠蛋白釋放有毒的血紅素、嚇啉和鐵離子等，這些游離的離子也會(huì)催化產(chǎn)生ROS。ROS的產(chǎn)生是關(guān)于地中海貧血的分子病理學(xué)的重要內(nèi)容。目前關(guān)于地中海貧血的治療主要分為三類，輸血、利用鐵螯合劑去除血液中過量的鐵離子和利用激素進(jìn)行內(nèi)分泌調(diào)節(jié)等方法是對癥治療，可以在一段時(shí)間內(nèi)減輕地中海貧血的臨床癥狀，但需終生用藥；而通過異體骨髓移植、藥物開啟胎兒型珠蛋白基因的表達(dá)和利用抗氧化劑等方法則是從病因出發(fā)，可以在一定程度上改善地中海貧血癥狀，但仍面臨排異反應(yīng)，藥物毒性等因素的困擾；另外有關(guān)地中海貧血基因治療的方法也在艱難探索中。2. AHSP蛋白及其調(diào)節(jié)α -珠蛋白穩(wěn)定蛋白AHSP是新近發(fā)現(xiàn)的α -珠蛋白特異的分子伴侶。AHSP的結(jié)構(gòu)決定其功能，通過結(jié)合并穩(wěn)定各種形式的α-珠蛋白，AHSP可以減少ROS的產(chǎn)生，在正常的紅系發(fā)生和地中海貧血發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。以AHSP為靶標(biāo)，尋找可以預(yù)防地中海貧血發(fā)生，緩解或者改善地中海貧血癥狀的藥物是很有前景的地中海貧血治療方案。因此關(guān)于AHSP表達(dá)調(diào)節(jié)的研究顯得尤為重要。AHSP是作為GATA-I的靶基因被發(fā)現(xiàn)的，GATA-1對AHSP的調(diào)節(jié)作用也是最早被詳細(xì)闡明的。Gallagher等人通過5’ RACE的方法首先鑒定了 AHSP啟動(dòng)子區(qū)的5’端，進(jìn)一步結(jié)合多種實(shí)驗(yàn)手段證明了 GATA-I和廣譜的轉(zhuǎn)錄因子Oct-I在AHSP調(diào)控區(qū)的結(jié)合位點(diǎn)，以人AHSP啟動(dòng)子導(dǎo)向的報(bào)告基因在轉(zhuǎn)基因鼠體內(nèi)特異地在骨髓、脾和網(wǎng)織紅細(xì)胞等紅系組織中表達(dá)。Pilon等人進(jìn)一步在細(xì)胞和動(dòng)物水平證明了 EKLF對AHSP的轉(zhuǎn)錄激活作用，同時(shí)，EKLF作為染色質(zhì)調(diào)節(jié)子還可以改變AHSP的染色質(zhì)水平。另有文獻(xiàn)報(bào)道表明組蛋白去乙?；敢种苿┖图?xì)胞內(nèi)的鐵的水平都可以調(diào)節(jié)AHSP的表達(dá)。細(xì)胞內(nèi)游離的鐵可以通過與鐵調(diào)節(jié)蛋白相互作用而去穩(wěn)定AHSP的mRNA的穩(wěn)定性，從而負(fù)調(diào)節(jié)AHSP在鐵過多狀態(tài)下的表達(dá)，加劇α-珠蛋白的不穩(wěn)定性，進(jìn)而加劇地中海貧血的癥狀。本實(shí)驗(yàn)室成員通過研究在AHSP啟動(dòng)子區(qū)預(yù)測到小Maf家族成員的識(shí)別位點(diǎn)，因此推測CNC-bZIP家族成員可能調(diào)節(jié)AHSP的表達(dá)。CNC-bZIP蛋白家族的成員眾多，包括 NF-E2, Nrfl，Nrf2 (NF-E2 relatedfactor 2)，Nrf3, Bachl 和 Bach2 等，均可以與小 Maf 家族蛋白形成二聚體。其中，NF-E2與GATA-1、EKLF等同為調(diào)節(jié)紅系正常生成的重要轉(zhuǎn)錄因子，對紅系分化晚期的珠蛋白基因的表達(dá)調(diào)節(jié)至關(guān)重要。而Nrf2主要在細(xì)胞氧化應(yīng)激狀態(tài)及抵抗炎癥等方面發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，可以調(diào)節(jié)大量參與細(xì)胞保護(hù)的基因。β -珠蛋白基因簇LCR區(qū)高敏位點(diǎn)HS2含有串聯(lián)的NF-E2結(jié)合位點(diǎn)，以此串聯(lián)序列為探針在Κ562 cDNA文庫中篩選得到Nrf2。Nrf2可結(jié)合的保守序列被稱為抗氧化劑效應(yīng)元件(antioxidant responsiveelement,ARE)或者親電子試齊Ll效應(yīng)元件(electrophile responsiveelement, EpRE)。作為細(xì)胞內(nèi)重要的抗氧化分子，Nrf2可通過促進(jìn)抗氧化蛋白和二類去毒素酶類的表達(dá)，來對抗細(xì)胞在氧化應(yīng)激或親電子試劑刺激下產(chǎn)生的不良反應(yīng)。Nrf2包含有六個(gè)Neh (Nrf2-ECH homology)功能域。其中Nehl為堿性亮氨酸拉鏈區(qū)，可與Maf家族形成二聚體，繼而與DNA相結(jié)合。Neh4和Neh5為轉(zhuǎn)錄激活域，可與CBP相結(jié)合激活下游基因轉(zhuǎn)錄。Neh2為Keapl結(jié)合區(qū)域，Keapl的結(jié)合可引起Nrf2的降解。ROS 作為信號(hào)分子激活蛋白激酶C(I3KC)，則可引起Nrf2 Neh2功能域的kr 104被PKC磷酸化而使Nrf2與Keapl解離。解離后的Nrf2在核內(nèi)累積發(fā)揮效應(yīng)。3.抗氧化劑與作為潛在的治療地中海貧血的藥物特丁基對苯二酚tBHQ (Tertiary Butyl Hydroquinone)是一種親離子試劑，可以起抗氧化的作用。tBHQ作為抗氧化劑的應(yīng)用非常廣泛，主要集中在食品加工、美容產(chǎn)品、橡膠工業(yè)以及油脂加工等。tBHQ在基礎(chǔ)科學(xué)研究中的也有廣泛的應(yīng)用，主要作為Nrf2的特異性激活劑發(fā)揮作用。DEM是另一種Nrf2的激活劑，化學(xué)名為馬來酸二乙酯。DEM在細(xì)胞水平也可以顯著升高AHSP的表達(dá)水平。tBHQ作為潛在的治療地中海貧血的藥物，主要存在以下優(yōu)勢首先，特異性強(qiáng)。作為Nrf2的激活劑，DEM沒有tBHQ應(yīng)用廣泛，分析可能為DEM沒有tBHQ的特異性強(qiáng)。DEM對Nrf2的激活作用可以被抗氧化劑或者抗氧化酶所封閉，但是tBHQ對Nrf2 的激活則不受影響。其次，安全性高。tBHQ廣泛用于食品、油脂和化妝品等物質(zhì)的抗氧化保護(hù)，而DEM則多用于化學(xué)工業(yè)中，顯然tBHQ更具有安全性。最后，有效性好。tBHQ作為多酚類抗氧化劑，除可以通過激活Nrf2信號(hào)通路誘導(dǎo)解毒酶類的表達(dá)外，還可以通過直接與三價(jià)鐵離子結(jié)合發(fā)揮抗氧化作用，抗氧化能力強(qiáng)于DEM。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明人經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，tBHQ不僅在細(xì)胞水平，還可以在動(dòng)物水平升高AHSP的表達(dá)，從而增強(qiáng)其對α-珠蛋白的穩(wěn)定作用，并且在地中海貧血細(xì)胞模型中tBHQ處理可引起 AHSP的表達(dá)在內(nèi)源性反饋增加的基礎(chǔ)上進(jìn)一步提高。在第一個(gè)方面，本發(fā)明提供了 tBHQ在制備治療地中海貧血的藥物中的用途。特別地，所述的地中海貧血為β-地中海貧血。tBHQ通過上調(diào)地中海貧血患者中紅細(xì)胞中的 α-珠蛋白穩(wěn)定蛋白的表達(dá)而穩(wěn)定過多的游離α -珠蛋白，從而緩解地中海貧血的癥狀，達(dá)到治療的目的。特別地，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，tBHQ通過激活Nrf2而上調(diào)α-珠蛋白穩(wěn)定蛋白的表達(dá)。以Nrf2特異性激活劑tBHQ處理K562細(xì)胞后，AHSP的表達(dá)顯著上調(diào)；過表達(dá)和干擾 Nrf2可以引起AHSP表達(dá)的上調(diào)和下調(diào)，說明Nrf2對AHSP存在正向調(diào)節(jié)作用；熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)和ChIP證明Nrf2可以通過直接與AHSP調(diào)控區(qū)結(jié)合而在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)其表達(dá)。在第二個(gè)方面，本發(fā)明提供了 tBHQ在制備上調(diào)β-地中海貧血患者中的α-珠蛋白穩(wěn)定蛋白的藥物中的用途。由于存在內(nèi)在的反饋環(huán)路，β-地中海貧血患者體內(nèi)的AHSP 的表達(dá)水平應(yīng)該高于正常人體內(nèi)的AHSP表達(dá)水平。本發(fā)明人通過細(xì)胞水平實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物水平實(shí)驗(yàn)證明，tBHQ進(jìn)一步升高了地中海貧血模型中的AHSP表達(dá)水平，從而可以起到治療的作用。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種治療地中海貧血的藥物組合物，其包括tBHQ和藥學(xué)上可接受的載體。


圖1. Nrf2的特異性激活劑tBHQ可調(diào)節(jié)AHSP的表達(dá)。A :tBHQ處理后半定量PCR 檢測Nrf2和AHSP的表達(dá)。B tBHQ處理后，實(shí)時(shí)定量PCR檢測AHSP的表達(dá)。C:tBHQ處理后western blot檢測Nrf2和AHSP的表達(dá)情況。圖2.在Nrf2干擾的K562細(xì)胞中檢測AHSP的表達(dá)。A 半定量PCR檢測AHSP在干擾Nrf2的K562細(xì)胞中的表達(dá)。B 實(shí)時(shí)定量PCR檢測AHSP在干擾Nrf2的K562細(xì)胞中的表達(dá)。干擾GFP 感染pSIREN-siGFP后篩選得到的K562穩(wěn)定細(xì)胞株，干擾GFP的細(xì)胞株作為干擾Nrf2細(xì)胞株的對照組。干擾Nrf2 感染pSIREN_siNrf2后篩選得到的K562穩(wěn)定細(xì)胞株。圖3.通過熒光素酶報(bào)告基因檢測GATAl和Nrf2激活A(yù)HSP的啟動(dòng)子的活性A AHSP啟動(dòng)子元件的各個(gè)片段示意圖。B :Nrf2可激活A(yù)HSP的啟動(dòng)子的活性。GATAl作為可以激活A(yù)HSP表達(dá)的陽性對照。圖4. ChIP檢測Nrf2在AHSP啟動(dòng)子區(qū)的富集AHSP-m/AHSP_P3。兩個(gè)位于AHSP 啟動(dòng)子區(qū)的Nrf2的潛在結(jié)合位點(diǎn)。H0-1-E1/2 血紅素加氧酶的兩個(gè)增強(qiáng)子序列，Nrf2已報(bào)道的結(jié)合位點(diǎn)，為本實(shí)驗(yàn)的陽性對照。H0-l-eXon3 血紅素加氧酶的第三外顯子片段，作為本實(shí)驗(yàn)的陰性對照。Input為樣品輸出量，是每對引物的陽性對照，Nrf2為通過Nrf2的抗體免疫共沉淀而富集的DNA樣品。IgG是通過IgG富集的DNA模板，為本實(shí)驗(yàn)的陰性對照。圖5.在α -珠蛋白過表達(dá)的k562穩(wěn)定株中(A)，tBHQ處理后western blot檢測 Nrf2的激活情況⑶以及實(shí)時(shí)定量PCR檢測AHSP的表達(dá)(C)。圖6. A 實(shí)時(shí)定量PCR檢測H0-1和AHSP在tBHQ處理Balb/C小鼠中的表達(dá)(tBHQ 注射用劑量。30毫克/公斤，小鼠尾靜脈注射三次，每次間隔8小時(shí)，數(shù)量5只。B =Western blot檢測HO-I和AHSP在tBHQ處理Balb/C小鼠中的表達(dá)。C和D :tBHQ處理Balb/C小鼠中AHSP和HO-I表達(dá)情況的統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果。
具體實(shí)施例方式1. Nrf2特異性激活劑tBHQ上調(diào)AHSP的表達(dá)親電子試劑特丁基對苯二酚(tBHQ)和馬來酸二乙酯(DEM)可以通過激活激酶通路而促進(jìn)Nrf2的磷酸化，Nrf2磷酸化后入核而激活下游的靶基因。因此tBHQ和DEM已經(jīng)被廣泛作為Nrf2的特異性激活劑使用。
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tBHQ上調(diào)AHSP的表達(dá)首先配制濃度為20mM的tBHQ貯存液，然后將tBHQ加入處于對數(shù)生長期的K562細(xì)胞中，同時(shí)加DMSO為對照。分別按照時(shí)間梯度和藥物濃度梯度處理后收細(xì)胞，提取RNA和蛋白，通過western blot檢測Nrf2的激活情況，通過半定量PCR反應(yīng)檢測AHSP的表達(dá)情況。結(jié)果如圖1所示，Nrf2可以在蛋白水平被tBHQ顯著激活，RNA水平?jīng)]有改變，這與文獻(xiàn)報(bào)道是一致的。AHSP的RNA水平顯著提高。這說明AHSP很可能是Nrf2的下游靶基因。干擾Nrf2降低AHSP的表達(dá)為了獲得相對穩(wěn)定的Nrf 2干擾細(xì)胞株，將pSIREN_siNrf2載體包裝成逆轉(zhuǎn)錄病毒進(jìn)行RNA干擾。在實(shí)驗(yàn)中，采用細(xì)胞作為病毒包裝細(xì)胞系，用皰疹口炎病毒G(VSV-G) 提供包膜蛋白。VSV-G可識(shí)別一種所有細(xì)胞上都存在的磷脂，所以理論上能有效地感染所有有絲分裂的細(xì)胞。此外，VSV-G很穩(wěn)定，因此病毒上清液可以通過離心濃縮到2000倍以上， 從而得到高滴度的病毒。提高病毒滴度可以提高靶mRNA的干擾效率，因?yàn)椴《镜味鹊脑黾犹岣吡苏鲜录陌l(fā)生從而引起了很強(qiáng)的shRNA的表達(dá)，進(jìn)一步提高了細(xì)胞內(nèi)siRNA的濃度。這一特點(diǎn)對于那些中低效率的RNA干擾序列尤其適用。收集的病毒上清經(jīng)0.45μπι的濾膜過濾除去細(xì)胞碎片，分裝，-70°C凍存，備用。用病毒感染時(shí)，直接將3ml病毒上清(含 polybrene 8 μ g/ml)加入處于對數(shù)生長期的K562細(xì)胞中，混勻后放回CO2孵箱中培養(yǎng)。 10-12小時(shí)后，離心換正常培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。24h再感染一次。感染M小時(shí)后即可加含有嘌呤霉素(puromycin，1 μ g/ml)的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)，約7-10天后形成混合細(xì)胞克隆。通過半定量RT-PCR、real-time PCR和western blot檢測Nrf2的干擾效果和AHSP的表達(dá)情況。結(jié)果如圖2所示，K562細(xì)胞中的Nrf2可以被有效的干擾，而AHSP的表達(dá)水平都顯著下調(diào)。Nrf2可以激活A(yù)HSP基因的啟動(dòng)子活性上述研究表明Nrf2可以正向調(diào)節(jié)AHSP的表達(dá)，為了進(jìn)一步研究Nrf2對AHSP的調(diào)節(jié)是否在轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行，用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測Nrf2是否能夠調(diào)節(jié)AHSP基因的啟動(dòng)子活性。AHSP基因啟動(dòng)子區(qū)熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒的構(gòu)建對AHSP基因啟動(dòng)子區(qū)0. 4k的片段進(jìn)行截短缺失。分別為0. 4k-刪除片段_1、 0. 4k-刪除片段-2和0. 4k-刪除片段-3。首先，在引物中引入酶切位點(diǎn)，從基因組中通過PCR方法將AHSP啟動(dòng)子區(qū)克隆。進(jìn)而通過酶切連接的方法將其引入PGIXBbasic報(bào)告基因載體將構(gòu)建好的熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染細(xì)胞，同時(shí)共轉(zhuǎn)pcDNA4、 pcDNA4-GATAl和pcDNA4_Nrf2等表達(dá)質(zhì)粒檢測對啟動(dòng)子的激活情況，其中，pcDNA4作為陰性對照，GATAl作為陽性對照。結(jié)果如圖3所示，與pcDNA4比，GATAl和Nrf 2均可激活A(yù)HSP的啟動(dòng)子活性，且二者對0. 4k-刪除片段-1、0. 4k-刪除片段-2和0. 4k-刪除片段-3三個(gè)截短體的轉(zhuǎn)錄激活能力逐漸降低，但仍可激活。這說明Nrf2可以在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)AHSP的表達(dá)。Nrf2在AHSP啟動(dòng)子區(qū)的募集
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首先獲得合適的超聲破碎的染色質(zhì)DNA片段。然后根據(jù)生物信息學(xué)的預(yù)測設(shè)計(jì)Nrf2潛在結(jié)合位點(diǎn)的引物，根據(jù)引物的擴(kuò)增效率確定模板用量。實(shí)驗(yàn)中，除了特異的 anti-Nrf2抗體之外，還包括IgG對照用于校正抗體與染色質(zhì)間的非特異性結(jié)合。此外， 根據(jù)人血紅素加氧酶I (heme oxygenase I，H0_1)的增強(qiáng)子1和增強(qiáng)子2設(shè)計(jì)的引物作為 Nrf2結(jié)合的陽性對照，根據(jù)HO-I外顯子3設(shè)計(jì)的引物作為陰性對照，以驗(yàn)證ChIP操作的可靠性。結(jié)果表明，Nrf2可以與AHSP啟動(dòng)子區(qū)的兩個(gè)位點(diǎn)結(jié)合，且當(dāng)K562細(xì)胞經(jīng)tBHQ處理后，Nrf2與其中一個(gè)位點(diǎn)的結(jié)合增強(qiáng)，如圖4所示。2. Nrf2特異激活劑tBHQ在細(xì)胞和動(dòng)物水平上調(diào)AHSP的表達(dá)tBHQ可以進(jìn)一步提高α -珠蛋白過表達(dá)的Κ562穩(wěn)定株內(nèi)AHSP的表達(dá)水平由于存在內(nèi)在的反饋環(huán)路，β-地中海貧血患者體內(nèi)的AHSP的表達(dá)水平通常高于正常人體內(nèi)的AHSP表達(dá)水平。這點(diǎn)在地中海貧血小鼠體內(nèi)也得到證明。首先需要明確的是，tBHQ是否可能進(jìn)一步升高地中海貧血患者體內(nèi)的AHSP表達(dá)水平而起到治療的作用。以過表達(dá)α-珠蛋白的K562細(xì)胞作為研究的模型模擬β-地中海貧血的效應(yīng)。首先以tBHQ處理過表達(dá)α-珠蛋白的K562細(xì)胞，通過Wfestern blot和實(shí)時(shí)定量PCR的方法分別檢測Nrf2和AHSP的蛋白水平和RNA水平。結(jié)果如圖5所示，tBHQ可以顯著升高Nrf2 的蛋白表達(dá)水平，同時(shí)β-地中海貧血模型細(xì)胞中的AHSP RNA水平也都較藥物處理前顯著升高。tBHQ可以上調(diào)Balb/C小鼠體內(nèi)AHSP的表達(dá)水平以上的結(jié)果表明tBHQ的確可以進(jìn)一步上調(diào)α -珠蛋白過表達(dá)的Κ562穩(wěn)定株中 AHSP的表達(dá)水平，說明了以tBHQ作為治療地中海貧血藥物的可能性。那么，tBHQ在動(dòng)物體內(nèi)是否可以發(fā)揮相同的作用呢？通過尾靜脈注射的方法以tBHQ處理Balb/C小鼠，檢測小鼠骨髓中AHSP等基因的表達(dá)情況。具體步驟如下(1)實(shí)驗(yàn)用小鼠的選擇實(shí)驗(yàn)中選擇18_22g的雄性Balb/C小鼠。飼養(yǎng)時(shí)注意溫度和濕度適宜，環(huán)境安靜， 12小時(shí)明暗交替。(2) tBHQ 的配制稱取0. 5g tBHQ溶解在Iml的DMSO中，配制成250 μ g/μ 1的母液。再以PBS稀釋成2. 5 μ g/ μ 1的工作液(含1 % DMS0)。高濃度tBHQ極易氧化，故每次加藥均應(yīng)新鮮配制。C3) tBHQ 處理小鼠采用尾靜脈注射的方法先將小鼠置于固定筒內(nèi)，使尾部露在外面。先以45-59°C 溫水熱敷鼠尾，再用70 %的酒精棉球擦拭尾部，待尾部左右側(cè)靜脈擴(kuò)張后，左手拉尾，右手進(jìn)針。給藥量約為30mg/kg鼠重。對照組給同等劑量的用PBS稀釋的1%DMS0。共給藥三次，間隔8小時(shí)。(4)骨髓細(xì)胞的獲取引頸處死給藥組和對照組小鼠，取小鼠的兩條股骨，用2ml —次性注射器吸取生理鹽水將骨髓從股骨中沖出。注意冰上操作。離心后用PBS將骨髓細(xì)胞懸起，分成兩份，其中1/3的骨髓離心后直接加Trizol處理，用于RNA的提取。另外2/3的骨髓經(jīng)液氮速凍后可貯存于-70°C。用于蛋白的提取。(5) Western blot和實(shí)時(shí)定量PCR檢測血紅素加氧酶和AHSP的表達(dá)情況結(jié)果表明Nrf2經(jīng)典下游分子血紅素加氧酶H0_1的表達(dá)無論在蛋白水平還是在 RNA水平都顯著升高(ρ < 0. 05)，這說明tBHQ在動(dòng)物體內(nèi)可以有效地誘導(dǎo)Nrf2的轉(zhuǎn)錄激活能力；AHSP的表達(dá)在蛋白水平和RNA水平也都顯著升高(ρ < 0. 05)，說明tBHQ的確可以上調(diào)動(dòng)物體內(nèi)的AHSP的表達(dá)(圖6)。
權(quán)利要求
1.特丁基對苯二酚在制備治療地中海貧血的藥物中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述的地中海貧血為地中海貧血。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其中特丁基對苯二酚通過上調(diào)地中海貧血細(xì)胞中的α-珠蛋白穩(wěn)定蛋白的表達(dá)而緩解地中海貧血的癥狀。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其中特丁基對苯二酚通過激活Nrf2而上調(diào)α-珠蛋白穩(wěn)定蛋白的表達(dá)。
5.特丁基對苯二酚在制備上調(diào)地中海貧血患者中的α-珠蛋白穩(wěn)定蛋白的藥劑中的用途。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其中所述患者中的α-珠蛋白穩(wěn)定蛋白的表達(dá)水平通常高于正常個(gè)體內(nèi)的表達(dá)水平。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的用途，其中特丁基對苯二酚通過激活Nrf2而上調(diào)α-珠蛋白穩(wěn)定蛋白的表達(dá)。
8.一種治療地中海貧血的藥物組合物，包括特丁基對苯二酚和藥學(xué)上可接受的載體。
全文摘要
本發(fā)明涉及特丁基對苯二酚在制備治療地中海貧血的藥物中的用途，特別是涉及特丁基對苯二酚通過激活Nrf2而上調(diào)α-珠蛋白穩(wěn)定蛋白(AHSP)的表達(dá)從而緩解并治療地中海貧血的癥狀。
文檔編號(hào)A61K31/05GK102188413SQ20101012576
公開日2011年9月21日 申請日期2010年3月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月15日
發(fā)明者劉德培, 呂湘, 曹聰, 梁植權(quán), 趙國偉 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所