專利名稱：：一種中藥組合物在制備治療骨質疏松癥藥物中的應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種屬于中藥制劑用途領域，具體涉及一種中藥組合物在制備治療骨質疏松癥藥物中的應用。
背景技術：
：骨質疏松癥是以骨量減少，骨的微觀結構退化為特征，致使骨的脆性增加以及易于發(fā)生骨折的一種全身性骨骼疾病。隨著社會老齡化進程，骨質疏松癥的發(fā)病率逐年升高。據我國流行病學調查報告，骨質疏松癥50歲60歲發(fā)病率為21%，60歲70歲發(fā)病率為58%;尤其是絕經后婦女，骨質疏松癥和骨折并發(fā)癥發(fā)病率更高，男女比率約1:8。骨質疏松癥主要分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩大類。原發(fā)性骨質疏松是由于年齡增加或婦女絕經后骨組織發(fā)生的一種生理性變化。因某些疾病(如內分泌紊亂鈣吸收障礙等慢性疾病)、營養(yǎng)不良及藥物誘發(fā)的骨質疏松稱為繼發(fā)性骨質疏松癥。國內外治療骨質疏松癥通常采用鈣制劑或雌激素替代療法。但鈣制劑大多吸收不好或吸收后鈣磷不能在骨骼中沉積。雌激素替代療法，能直接改善絕經后婦女骨代謝，有效地防止絕經后頭幾年骨的進行性丟失，但短期服用，其療效難以持久，長期服用容易導致各種并發(fā)癥(如乳腺癌、子宮內膜癌等)。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的是為了提供一種中藥組合物在制備治療骨質疏松癥藥物中的應用?！N中藥組合物在制備治療骨質疏松癥藥物中的應用，所述中藥組合物包含以下重量份配比的原料藥狗脊600份黑老虎360份千斤拔144份桑寄生180份女貞子30份雞血藤360份金櫻子192份牛大力240份菟絲子30份制備方法為取狗脊、雞血藤、金櫻子、千斤拔、黑老虎(木部)加水煎煮二次，合并煎液，濾過，濾液濃縮成稠膏；黑老虎(皮部)與其余桑寄生等四味粉碎成粗粉，加入上述稠膏，混勻，干燥，粉碎成細粉，過篩，混勻；加入輔料制成臨床上可接受的劑型。—種中藥組合物在制備治療骨質疏松癥藥物中的應用，所述中藥組合物還可以是由以下重量份配比的原料藥組成狗脊600份黑老虎360份千斤拔144份桑寄生180份女貞子30份雞血藤360份金櫻子192份牛大力240份菟絲子30份延胡索26份兩面針26份乳香12份沒藥20份。制備方法取狗脊、金櫻子、雞血藤、千斤拔、黑老虎(木部)加水煎煮二次，濾過，合并濾液，濃縮成稠膏；其余牛大力等八味及黑老虎(皮部)共粉碎成粗粉，加入上述稠膏，3混勻，干燥，粉碎成細粉，過篩，混勻；加入輔料制成臨床上可接受的劑型。上述治療骨質疏松癥的藥物劑型可以是丸劑、膠囊劑和片劑。經藥效學試驗表明，本發(fā)明所涉及的中藥組合物對老齡去勢老齡SD大鼠骨質疏松癥均有一定的提高骨質疏松大鼠血清鈣、磷含量的作用，提高骨形成指標堿性磷酸酶，降低骨吸收的指標羥脯氨酸、抗酒石酸酸性磷酸酶的作用；骨生物力學試驗也表明壯腰健腎丸高劑量組雄性大鼠左側股骨彎曲試驗中最大荷載有增加的趨勢；從骨組織計量學看，能明顯提高雌性大鼠骨小梁面積百分比及骨小梁的厚度。因此，從給藥后動物的組織計量學、生物力學以及試驗中測試的眾多指標綜合分析，能對骨質疏松癥有明顯的治療作用。具體實施例方式本發(fā)明所涉及的中藥組合物是得到國家食品藥品監(jiān)督管理局批準的壯腰健腎丸和舒筋健腰丸。壯腰健腎丸是由以下重量份配比的原料藥組成(在本發(fā)明實施例中，重量份的單位是g):狗脊600g、黑老虎360g、千斤拔144g、桑寄生180g、女貞子30g、雞血藤360g、金櫻子192g、牛大力240g、菟絲子30g。舒筋健腰丸是由以下重量配比的原料藥組成狗脊600g、黑老虎360g、千斤拔144g、桑寄生180g、女貞子30g、雞血藤360g、金櫻子192g、牛大力240g、菟絲子30g、延胡索26g、兩面針26g、乳香12g、沒藥20g。藥效學試驗1.試驗方法劑量設計根據其臨床擬用法用量，本專題選用壯腰健腎丸低劑量1.Og/kg、壯腰健腎丸高劑量3.Og/kg，舒筋健腰丸低劑量1.35g/kg、舒筋健腰丸高劑量4.Og藥丸/kg進行藥效學篩選(壯腰健腎丸、舒筋健腰丸低、高劑量組按等效劑量折算法均約相當于成人臨床日用量的1、3倍)。陽性藥選用已上市的仙靈骨葆膠囊，該藥是在貴州民間驗方的基礎上發(fā)掘整理而成的苗族藥，該產品療效明確，銷售狀況良好，故選用其為陽性對照藥。給藥劑量為1.0g/kg(均按藥丸計，按等效劑量折算法約相當于成人臨床日用量的4倍，臨床人用最大劑量為3g/天)。以上各組給藥途徑均為灌胃給藥，給藥容積均為15ml/kg。2.分組與給藥試驗選用檢疫合格11-12月齡SD大鼠分為7組除偽手術組外，其余大鼠行去勢手術后2周按體重進行隨機均衡分組模型對照組，陽性藥組(仙靈骨葆膠囊)，壯腰健腎丸高、低劑量組，舒筋健腰丸高、低劑量組。各組在檢疫期結束后施行去勢手術雌性大鼠切除雙側卵巢及輸卵管；雄性大鼠摘除兩側睪丸。偽手術組僅切除包裹卵巢的一小團脂肪組織。除偽手術組、去勢模型組給予等量蒸餾水外，其余各組每天給藥一次，本試驗給藥周期設為連續(xù)給藥12周。3.動物的末次處理試驗結束前大鼠禁食一夜，次日上午用10%水合氯醛腹腔注射麻醉動物(擬定劑量為3.Oml/kg，具體的劑量麻醉人員可以根據動物的情況作相應的調整)腹主動脈采血制備血清，采血后盡快分離血清。血清樣本在-2(TC保存待測。血清用于測定血清鈣(Ca)、磷(IP)、堿性磷酸酶(ALT)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、羥輔氨酸(HOP)、骨鈣素等指標。采血后腹主動脈放血處死大鼠，制作骨標本取下大鼠左右股骨，脛骨，除凈附在骨上的肌肉和軟組織。取脛骨在室溫下，于4%福爾馬林中固定用于骨組織計量學的檢測，其余骨標本制取后用生理鹽水紗布包裹，置于_201:低溫冰箱保存待測。4.統(tǒng)計分析方法由于考慮到12月齡的雌性大鼠與雄性大鼠體重相差太大，相應的雌雄大鼠之間骨指數、生物力學及組織計量學應該進行雌雄分開統(tǒng)計，而血清生化指標由于雌雄之間差異較小，故合并進行統(tǒng)計。統(tǒng)計時所有數據均輸入EXCEL2003統(tǒng)計軟件進行相應的統(tǒng)計處理，各組計量數據均采用又土S表示。對SD大鼠血清生化指標的影響1.試驗從_201:冰箱中取出動物末次處理后保存的血清，分別檢測血清f丐(Ca)、血清磷(IP)、堿性磷酸酶(ALP)、肌酐(Cre)活性采用生化自動分析儀測定。血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)及羥脯氨酸(HOP)，血清骨鈣素根據試劑盒使用說明書測定。本試驗骨吸收的指標選血清抗酒石酸酸性磷酸酶(StrACP)及羥脯氨酸(HOP)，骨形成的指標選血清堿性磷酸酶及骨鈣素。2.結果(附表1)附表1壯腰健腎丸、舒筋健腰丸對老齡去勢大鼠血清生化指標的影響(X土S)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>與模型對照組相比，*表示p<0.05，**表示p<0.01。試驗結果表明本實驗中與偽手術組相比，模型組大鼠血清鈣、磷水平稍低于偽手術組，壯腰健腎丸、舒筋健腰丸高劑量均有一定的提高骨質疏松大鼠血清鈣或血清磷的作用，推測壯腰健腎丸、舒筋健腰丸高劑量可能是通過提高鈣、磷水平途徑從而增加骨的強度。與模型對照組相比，壯腰健腎丸高劑量組血清羥脯氨酸、抗酒石酸酸性磷酸酶明顯減少，堿性磷酸酶明顯升高，骨鈣素亦有增加的趨勢；舒筋健腰丸高劑量組抗酒石酸酸性磷酸酶明顯減少，堿性磷酸酶明顯升高，上述試驗結果提示，壯腰健腎丸、舒筋健腰丸高劑量組均具有一定的降低骨吸收的作用和提高骨形成的作用。對SD大鼠骨組織計量學的測定1材料與儀器病理圖像分析軟件Image-ProPlus6.O，編制單位MediaCybernetics公司2骨病理片的制作對于動物末次處理后的脛骨，骨病理片采用脫鈣法制作。制作方法如下①取右側脛骨近端1/3，室溫置于10%福爾馬林中固定24h，流水沖洗24小時后移入10%EDTA溶液中脫鈣，至骨組織無氣泡發(fā)生或軟化為宜，或用大頭針輕輕能剌進為度，自來水沖洗24小時(脫f丐過程注意避光)，②然后轉入70%酒精內脫水3小時，再以80%酒精脫水3小時，90%、95%酒精三次脫水各1小時，100%酒精三次脫水各1小時，③投入苯甲酸甲酯中透明過夜，浸石蠟50分鐘包埋，切片厚度5iim。⑤H-E染色。3.結果在顯微鏡下可見偽手術組的脛骨近端骨小粱較為密集，互相連接成立體網狀，骨小梁表面光滑，骨小粱的間距小，而模型對照組動物的骨小梁大多數表現(xiàn)為骨小梁數量明顯減少，骨小粱排列稀疏.骨小梁之間的間隙增寬，骨髓腔擴大，并出現(xiàn)骨小梁的空缺區(qū)域。骨小粱粗細不均.有較多的骨吸收陷窩，部分區(qū)域的骨小粱出現(xiàn)斷裂、殘端游離，骨小粱的連接中斷，三維結構受到破壞。偽手術祖及去勢大鼠骨小梁之間的間隙中均有較多的脂肪細胞。試驗結果(附表2、3):附表2.壯腰健腎丸、舒筋健腰丸對老齡去勢雌性大鼠組織計量的影響(X土S)組別劑量(g/kg)動物數骨小梁面積百分比(％)骨小梁厚度骨小梁數目(個/mm2)骨小梁分離度(拜)偽手術-922.49±4.13**57.05±10.843.98±0.60**199.91±37.42*模型對-813.26±4.5552.48±9.172.48±0.69398.13±199.37陽性對1.01012.55±3.4653.32士6.512.38±0.7713±I34.29壯腰健腎丸高3.01120.49±5.7廣64.96±6.17**3.18±0.81270.52±85.02壯腰健腎丸低1.0914.91±3.1756.28±9.842.67±0.53335息69.54舒筋健腰丸高4.01115.16±4.7754.46±10.892.82±0.95344.57±141.94劑量組舒筋健腰丸低1.35917.79±4.2551.44±3.693.44±0.73*255.01±75.33與模型對照組相比，*表示p<0.05，**表示p<0.01。附表3.壯腰健腎丸、舒筋健腰丸對老齡去勢雄性大鼠組織計量的影響(文土S)7<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>與模型對照組相比，*表示p<0.05，**表示p<0.01。本試驗的骨組織形態(tài)計量學顯示模型組雌雄大鼠均表現(xiàn)出骨小梁面積百分數、骨小梁數目明顯減少，骨小梁分離度明顯增大，雌、雄性大鼠的骨小梁厚度都有減少的趨勢。本試驗結果提示雌雄老齡大鼠去勢后成功地復制了骨質疏松癥模型。經治療后，壯腰健腎丸高劑量組雌性骨質疏松大鼠的骨小梁面積百分數、骨小梁厚度明顯增加，骨小梁數目有增加趨勢和骨小梁分離度有減少的趨勢；壯腰健腎丸低劑量組雌性骨質疏松大鼠的骨小梁數目明顯增加，骨小梁面積百分比有增加和骨小梁分離度有減少的趨勢；壯腰健腎丸低劑量組雄性骨質疏松大鼠的骨小梁厚度明顯增加；試驗結果提示壯腰健腎丸高劑量、舒筋健腰丸低劑量能減少雌性大鼠去勢所引起的骨丟失，改善骨小梁的形態(tài)，起到的骨質疏松癥的目的。對SD大鼠骨生物力學的影響1材料與儀器YLS-16A小動物骨骼強度測定儀，山東省醫(yī)學科學院設備站生產。2方法與結果從-2(TC冰箱中取出股骨、脛骨和腰椎骨，室溫自然解凍。方法使用YLS-16小動物骨骼強度測定儀依照使用說明進行下列測定①左側股骨最大荷載測試(三點彎曲試驗)。③左側脛骨骨最大荷載測試(三點彎曲試驗)。每個樣本放置在儀器上的位置及方向保持一致。試驗結果(附表4、5):附表4.壯腰健腎丸、舒筋健腰丸對老齡去勢雌性大鼠生物力學指標d土S)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>與模型對照組相比，*表示p<0.05，**表示p<0.01。附表5.壯腰健腎丸、舒筋健腰丸對老齡去勢雄性大鼠生物力學指標(^土S)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>與模型對照組相比，*表示p<0.05，**表示p<0.01。試驗結果(附表4、5)表明在本實驗中，模型組雄性大鼠的股骨、脛骨彎曲試驗最大負荷均顯著低于偽手術組，表明雄性大鼠去勢后可導致大鼠骨生物力學性能的降低；與模型組相比，壯腰健腎丸高、低劑量組雄性大鼠左側股骨、脛骨彎曲試驗(折斷)的最大荷載有增加的趨勢。以上試驗結果表明壯腰健腎丸、舒筋健腰丸均有一定的提高骨質疏松大鼠血清鈣、磷含量的作用，提高骨形成指標堿性磷酸酶，降低骨吸收的指標羥脯氨酸、抗酒石酸酸性磷酸酶的作用；從生物力學試驗也表明壯腰健腎丸高劑量組雄性大鼠左側股骨彎曲試驗中最大荷載有增加的趨勢；從組織計量學看，壯腰健腎丸高劑量組明顯提高雌性大鼠骨小梁面積百分比及骨小梁的厚度。因此，從給藥后動物的組織計量學、生物力學以及試驗中測試的眾多指標綜合分析，在本試驗條件下，對12月齡的老齡SD大鼠去勢所致的骨質疏松經壯腰健腎丸、舒筋健腰丸14周的給藥后的表現(xiàn)出一定的抗骨質疏松的作用，其中壯腰健腎丸高劑量組的作用強于其它給藥劑量組，壯腰健腎丸的抗骨質疏松作用亦優(yōu)于陽性藥仙靈骨葆膠囊。具體實施例如下所示實施例1狗脊600g、黑老虎360g、千斤拔144g、桑寄生180g、女貞子30g、雞血藤360g、金櫻子192g、牛大力240g、菟絲子30g。取狗脊、雞血藤、金櫻子、千斤拔、黑老虎(木部)加水煎煮二次，合并煎液，濾過，濾液濃縮成稠膏；黑老虎(皮部)與其余桑寄生等四味粉碎成粗粉，加入上述稠膏，混勻，干燥，粉碎成細粉，過篩，混勻；每100g粉末用煉蜜115135g制成大蜜丸；或每100g粉末用煉蜜5060g，用適量水泛丸，制成水蜜丸。實施例2狗脊600g、黑老虎360g、千斤拔144g、桑寄生180g、女貞子30g、雞血藤360g、金櫻子192g、牛大力240g、菟絲子30g。取狗脊、雞血藤、金櫻子、千斤拔、黑老虎(木部)加水煎煮二次，合并煎液，濾過，濾液濃縮成稠膏；黑老虎(皮部)與其余桑寄生等四味粉碎成粗粉，加入上述稠膏，混勻，干燥，粉碎成細粉，過篩，混勻；加入適量硬脂酸鎂，用壓片機壓制成片劑。實施例3狗脊600、黑老虎360g、千斤拔144g、桑寄生180g、女貞子30g、雞血藤360g、金櫻子192g、牛大力240g、菟絲子30g、延胡索26g、兩面針26g、乳香12g、沒藥20g。取狗脊、金櫻子、雞血藤、千斤拔、黑老虎(木部)加水煎煮二次，濾過，合并濾液，濃縮成稠膏；其余牛大力等八昧及黑老虎(皮部)共粉碎成粗粉，加入上述稠膏，混勻，干燥，粉碎成細粉，過篩，混勻；每100g粉末用煉蜜3540g，用適量的水泛丸制成水蜜丸。實施例4狗脊600g、黑老虎360g、千斤拔144g、桑寄生180g、女貞子30g、雞血藤360g、金櫻子192g、牛大力240g、菟絲子30g、延胡索26g、兩面針26g、乳香12g、沒藥20g。取狗脊、金櫻子、雞血藤、千斤拔、黑老虎(木部)加水煎煮二次，濾過，合并濾液，濃縮成稠膏；其余牛大力等八味及黑老虎(皮部)共粉碎成粗粉，加入上述稠膏，混勻，干燥，粉碎成細粉，過篩，混勻；將粉末裝入膠囊，制成膠囊劑。權利要求一種中藥組合物在制備治療骨質疏松癥藥物中的應用，其特征在于所述中藥組合物包含以下重量份配比的原料藥狗脊600份黑老虎360份千斤拔144份桑寄生180份女貞子30份雞血藤360份金櫻子192份牛大力240份菟絲子30份。2.根據權利要求1所述的中藥組合物在制備治療骨質疏松癥藥物中的應用，其特征在于所述中藥組合物還包含以下重量份配比的原料藥延胡索26份兩面針26份乳香12份沒藥20份。3.根據權利要求1或2所述的中藥組合物在制備治療骨質疏松癥藥物中的應用，其特征在于所述治療骨質疏松癥的藥物劑型可以是丸劑、膠囊劑或片劑。全文摘要本發(fā)明是關于一種中藥組合物在制備治療骨質疏松癥藥物中的應用，所述中藥組合物包含以下重量份配比的原料藥狗脊600份、黑老虎360份、千斤拔144份、桑寄生180份、女貞子30份、雞血藤360份、金櫻子192份、牛大力240份、菟絲子30份。本發(fā)明從給藥后動物的組織計量學、生物力學以及試驗中測試的眾多指標綜合分析，能對骨質疏松癥有明顯的治療作用。文檔編號A61K36/758GK101791341SQ20101013950公開日2010年8月4日申請日期2010年3月30日優(yōu)先權日2010年3月30日發(fā)明者何風雷,李卓璐,莫國強,郭鐘慧申請人:廣州陳李濟藥廠