專利名稱：13-甲氨基-18-硫代苦參堿化合物用于制備抗肝纖維化或其他組織器官纖維化藥物的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及13-甲氨基-18-硫代苦參堿化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽類在制備抗纖維化藥物中的用途。
背景技術(shù)：
肝纖維化是肝臟對(duì)各種病因所致慢性肝損傷的修復(fù)反應(yīng)，主要特征是細(xì)胞外基質(zhì) (extracellular matrix,ECM)的過度沉積。肝纖維化是各種慢性肝病共有的病理特征，是進(jìn)一步向肝硬化發(fā)展，甚至惡變死亡的主要中間環(huán)節(jié)。由于肝硬化的治療十分困難、死亡率高，而目前認(rèn)為肝纖維化具有可逆性，因此阻斷或延緩肝纖維化的發(fā)生發(fā)展，對(duì)于多種伴隨肝纖維化的慢性肝病的治療，具有重要應(yīng)用價(jià)值。目前，臨床上肝纖維化治療包括針對(duì)原發(fā)病的病因治療和針對(duì)纖維化本身的治療。但去除原發(fā)病因并不能完全抑制肝纖維化的發(fā)展，而纖維化的存在還可影響對(duì)原發(fā)病的治療效果，因此，針對(duì)纖維化的治療尤顯重要。目前在研的抗肝纖維化藥物主要通過抑制或減輕炎癥反應(yīng)、抗氧化應(yīng)激、抑制肝纖維化過程中起主要作用的肝星狀細(xì)胞激活、增殖或促進(jìn)其凋亡、保護(hù)肝細(xì)胞、促進(jìn)肝再生、抑制或中和促纖維化因子活性以及抑制細(xì)胞外基質(zhì)合成或促進(jìn)其降解等環(huán)節(jié)。近幾十年來，抗肝纖維化藥物研究雖然取得了一定的進(jìn)展，但目前許多藥物仍處于臨床前或臨床試驗(yàn)階段，如 TGF^ 1拮抗劑、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子、S-腺苷蛋氨酸、吡非尼酮等，但目前尚無一種化學(xué)藥物被批準(zhǔn)用于人類肝纖維化的治療。除肝纖維化外，纖維化還可發(fā)生于肺、腎、心等多種組織器官。大量文獻(xiàn)資料研究表明，ECM產(chǎn)生細(xì)胞，如肝臟星狀細(xì)胞、腎小球系膜細(xì)胞、腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞、肺成纖維細(xì)胞、 心成纖維細(xì)胞等在器官或組織纖維化中起重要的作用，它們已成為預(yù)防和治療器官或組織纖維化的靶標(biāo)，抑制ECM產(chǎn)生細(xì)胞的激活、增殖或促進(jìn)其凋亡是防治纖維化的重要手段。中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?00910199252. 0提供了一類硫代苦參堿化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽類的制備方法，還提供了這類化合物能抑制參與炎癥過程的細(xì)胞因子產(chǎn)生和核轉(zhuǎn)錄因子NF κ B轉(zhuǎn)錄活性，可用于制備治療細(xì)胞因子和核轉(zhuǎn)錄因子NF κ B參與的諸如慢性炎癥等相關(guān)的炎癥性疾病和病理過程的藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是在現(xiàn)有技術(shù)基礎(chǔ)上，進(jìn)一步公開13-甲氨基-18-硫代苦參堿化合物(I) 及其藥學(xué)上可接受的鹽類在制備抗纖維化藥物中的用途。本發(fā)明提供的化合物(I)，其結(jié)構(gòu)式見圖1。上述化合物藥學(xué)上可接受的鹽類是乙酸鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、氫溴酸鹽、 草酸鹽、檸檬酸鹽、甲磺酸鹽等。本發(fā)明從細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明13-甲氨基-18-硫代苦參堿化合物(I)具有抗纖維化作用從細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)證明13-甲氨基-18-硫代苦參堿化合物(I)對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞、腎小球系膜細(xì)胞、肺成纖維細(xì)胞、心成纖維細(xì)胞增殖和膠原合成具有抑制作用； 通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)說明13-甲氨基-18-硫代苦參堿化合物⑴對(duì)小鼠四氯化碳和D-氨基半乳糖造成的急性肝損傷具有保護(hù)作用；以大鼠膽管結(jié)扎(BDL)肝纖維化模型和硫代乙酰胺 (TAA)肝纖維化模型證實(shí)13-甲氨基-18-硫代苦參堿化合物(I)能顯著減輕肝細(xì)胞變性、 壞死和纖維組織的形成，且抗纖維化作用優(yōu)于苦參堿和臨床使用的苦參素注射液，并在多環(huán)節(jié)上產(chǎn)生藥理活性，能抑制肝星狀細(xì)胞增殖和活化，抑制纖維化肝臟上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)型。 對(duì)博萊霉素所致大鼠肺纖維化具有降低大鼠肺組織羥脯氨酸含量和大鼠死亡率的作用。結(jié)果說明13-甲氨基-18-硫代苦參堿化合物(I)具有確切的抗纖維化作用，因此可用來制備預(yù)防和治療肝纖維化或其他組織器官纖維化藥物。


本發(fā)明化合物(1)13-甲氨基-18-硫代苦參堿結(jié)構(gòu)見圖1 ；大鼠肝纖維化模型中膽管結(jié)扎(BDL)肝纖維化模型中病理檢查可見化合物(I)能顯著減輕肝細(xì)胞變性、壞死和纖維組織的形成見圖2 ；硫代乙酰胺(TAA)肝纖維化模型中，化合物(I) (25,50mg/kg)能顯著降低TAA升高的血清ALT、AST水平(ρ <0.01)和肝臟羥脯氨酸含量(ρ < 0. 01)，且優(yōu)于苦參堿組或苦參素組(P < 0. 05)，結(jié)果見圖3 ；免疫組織化學(xué)染色TAA纖維化模型組，結(jié)果表明，化合物(I)減少細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生，治療肝纖維化是通過抑制肝細(xì)胞和HSC的上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)型(印ithelial-to-mesenchymal transition, EMT)起作用，見圖 4。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的具體實(shí)施方式
不限于以下實(shí)施例。實(shí)施例1 :13_甲氨基-18-硫代苦參堿化合物(I)對(duì)ECM產(chǎn)生細(xì)胞增殖和膠原合成的作用試驗(yàn)方法細(xì)胞增殖試驗(yàn)96孔細(xì)胞培養(yǎng)板每孔加入IX 104個(gè)大鼠肝星狀細(xì)胞HSC-T6、腎小球系膜細(xì)胞、肺成纖維細(xì)胞、心成纖維細(xì)胞，在37°C C02孵箱中孵育24h，然后加入100 μ 1 含有不同藥物濃度和10%新生牛血清(NCS)的DMEM培養(yǎng)液或無藥培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)48h后加入噻唑蘭(MTT)酶標(biāo)儀測(cè)定570nm吸收度值。膠原合成的測(cè)定采用3H-脯氨酸同位素法。將細(xì)胞濃度調(diào)整為2. 5X 105個(gè)/ml， 在96孔板上每孔加100 μ 1，培養(yǎng)24h使之形成單層，以消除細(xì)胞生長(zhǎng)對(duì)膠原合成的影響。 然后加入含50 μ g. ml-1的維生素C的藥物與10% NCS或轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β 1 (TGF β 1)再培養(yǎng)48h，同時(shí)加入每孔[3H]-脯氨酸18. 5kBq。細(xì)胞用胰酶消化后，收集于玻璃纖維濾紙上， 用液閃儀測(cè)定細(xì)胞3H-脯氨酸摻入值(cpm)。結(jié)果表明，13-甲氨基-18-硫代苦參堿化合物(I) (5 40 μ mol. L_l)能顯著濃度依賴地抑制ECM產(chǎn)生細(xì)胞肝星狀細(xì)胞HSC-T6、腎小球系膜細(xì)胞、肺成纖維細(xì)胞、心成纖維細(xì)胞增殖和膠原合成(表1，2)。表1 13-甲氨基-18-硫代苦參堿化合物(I)對(duì)ECM產(chǎn)生細(xì)胞增殖的影響
權(quán)利要求
1.13-甲氨基-18-硫代苦參堿化合物(I)，其結(jié)構(gòu)式如圖所示，在制備抗肝纖維化或其他組織器官纖維化藥物中的用途。
2.13-甲氨基-18-硫代苦參堿化合物(I)藥學(xué)上可接受的鹽類乙酸鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、氫溴酸鹽、草酸鹽、檸檬酸鹽、甲磺酸鹽等在制備抗肝纖維化或其他組織器官纖維化藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及13-甲氨基-18-硫代苦參堿化合物(I)及其鹽類在制備抗纖維化藥物中的用途。本發(fā)明從細(xì)胞學(xué)試驗(yàn)證實(shí)13-甲氨基-18-硫代苦參堿能抑制細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生細(xì)胞肝星狀細(xì)胞增殖和活化，抑制纖維化肝臟上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)型。此外，對(duì)其他各種導(dǎo)致器官或組織纖維化的細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生細(xì)胞也具有抑制作用。動(dòng)物試驗(yàn)證明13-甲氨基-18-硫代苦參堿有非常顯著的抗肝纖維化作用。結(jié)果說明，13-甲氨基-18-硫代苦參堿具有確切的抗肝纖維化或其他組織器官纖維化作用，可用來制備預(yù)防和治療肝纖維化或其他組織器官纖維化的藥物。
文檔編號(hào)A61P1/16GK102258516SQ201010186858
公開日2011年11月30日 申請(qǐng)日期2010年5月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月28日
發(fā)明者張俊平, 李云華, 李婕, 王紹展, 胡宏崗 申請(qǐng)人:上海滬豐生物科技有限公司