專(zhuān)利名稱(chēng)：：酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、雙歧桿菌在制備治療冷涼瀉、喝酒瀉藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、雙歧桿菌的藥物新用途，具體涉及酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、雙歧桿菌作為藥物活性成份在制備治療腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉藥物中的應(yīng)用，屬于生物藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：腸易激綜合征(irritablebowelsyndrome,IBS)指的是一組包括腹痛、腹脹、排便習(xí)慣改變和大便性狀異常、黏液便等表現(xiàn)的經(jīng)檢查排除可引起這些癥狀的器質(zhì)性疾病的臨床綜合征，持續(xù)存在或反復(fù)發(fā)作。本病已經(jīng)發(fā)展為常見(jiàn)病，在普通人群進(jìn)行問(wèn)卷調(diào)查，有IBS癥狀者歐美報(bào)道為10%20%，我國(guó)北京一組報(bào)道為8.7%。目前，傳統(tǒng)的胃腸病理論認(rèn)為其病因和發(fā)病機(jī)制不清楚，所以腹瀉型IBS又被稱(chēng)為不明原因腹瀉。冷涼瀉，即冷涼性腹瀉，是指人體受寒著涼、飲用冷飲料或食用生冷瓜果食物后，而引發(fā)的腹瀉，有時(shí)伴有腹痛、腹脹等癥狀。喝酒瀉，既喝酒性腹瀉，是指喝酒(啤酒、白酒等)后，由于酒精的刺激等原因而導(dǎo)致的腹瀉，有時(shí)伴有腹痛、腹脹等癥狀。由青島市微生態(tài)工程技術(shù)研究中心和青島東海藥業(yè)有限公司聯(lián)合組織醫(yī)學(xué)人員和統(tǒng)計(jì)學(xué)人員，對(duì)通過(guò)腸道健康熱線由醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)人員詳細(xì)記錄的629例腹瀉患者的資料進(jìn)行回顧性統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)冷涼瀉和喝酒瀉發(fā)病率很高，分別占到慢性腹瀉患者的85.6%和89.1%,許多患者受涼、喝酒后就腹瀉的病史，反反復(fù)復(fù)持續(xù)了十幾年，甚至幾十年，部分患者后來(lái)到醫(yī)院檢查已經(jīng)發(fā)展為潰瘍性結(jié)腸炎，甚至腸癌。腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉長(zhǎng)期反復(fù)發(fā)作給患者的生活、學(xué)習(xí)和工作帶來(lái)很多不便，降低了患者的生活質(zhì)量。對(duì)于腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉，目前的治療藥物主要為抗菌消炎藥、止瀉藥和中藥等，但都療效不高，只能緩解一時(shí)的癥狀，治療后易復(fù)發(fā)，且長(zhǎng)期應(yīng)用副作用大。因此，尋找能根治腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉，且沒(méi)有副作用的藥物是臨床迫切需求的，本發(fā)明的藥物新用途解決了這一難題，社會(huì)意義巨大。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明人通過(guò)研究和分析發(fā)現(xiàn)大部分腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉患者的發(fā)病機(jī)制是各種原因?qū)е碌哪c道菌群紊亂，有害菌增多，產(chǎn)生的氨、糞臭素、吲哚等毒素增加，使腸道的生物屏障、粘膜免疫屏障、機(jī)械屏障乃至化學(xué)屏障均輕度受損，處于亞健康狀態(tài)，腸鏡檢查不出明顯的器質(zhì)性損傷，但此時(shí)的腸道耐受能力減弱，受到一些不良刺激，就會(huì)發(fā)生腹瀉、便秘、腹脹、腹痛等癥狀。本發(fā)明人經(jīng)臨床研究證實(shí)，酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、雙歧桿菌由于能夠恢復(fù)腸道菌群平衡，減少有害菌及其產(chǎn)生的毒素，產(chǎn)生短鏈脂肪酸修復(fù)腸黏膜，從而恢復(fù)腸道功能。所以，把這三種菌單獨(dú)或組合制成活菌制劑對(duì)治療腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉療效顯著。本發(fā)明以酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、雙歧桿菌為藥物活性成份制成的制劑，可以是以酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、雙歧桿菌單獨(dú)為藥物活性成份分別制成相關(guān)劑型；也可以是酪酸梭菌與凝結(jié)芽孢桿菌組合，酪酸梭菌與雙歧桿菌組合，凝結(jié)芽孢桿菌與雙歧桿菌組合作為藥物活性成份分別制成相關(guān)劑型；也可以是酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌與雙歧桿菌三種菌組合制成相關(guān)劑型。本發(fā)明所述酪酸梭菌選自但不限于酪酸梭菌(Clostridiumbutyricum)、CGMCC>保藏編號(hào)0313.1。本發(fā)明所述凝結(jié)芽孢桿菌選自但不限于凝結(jié)芽孢桿菌(Bacilluscoagulans)、CGMCC、保藏編號(hào)1207。本發(fā)明所述雙歧桿菌選自但不限于嬰兒雙歧桿菌(Bifidobacteriuminfantis)、CGMCC、保存編號(hào)0313.2，長(zhǎng)雙歧桿菌(Bifidobacteriumlongum)、CGMCC、保存編號(hào)0313.5，短雙歧桿菌(Bifidobacteriumbreve)、CGMCC、保存編號(hào)0313.6，雙歧雙歧桿菌(又稱(chēng)兩歧雙歧桿菌)(Bifidobacteriumbifidum)、CGMCC、保存編號(hào)0313.7。本發(fā)明所述的酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、雙歧桿菌指活生物個(gè)體。本發(fā)明是以有效劑量的酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、雙歧桿菌根據(jù)上面所述單獨(dú)或組合作為藥物活性成份，按照一定的制劑工藝，加入常規(guī)的賦性劑、調(diào)味劑、崩解齊、防腐劑、潤(rùn)滑劑、濕潤(rùn)劑、黏合劑、溶劑、增稠劑、增溶劑等藥物輔料，制成任何一種適合于臨床上使用的劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液體制劑等口服劑型，或肛門(mén)栓劑、灌腸劑型等。本發(fā)明所指有效劑量是指以酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、雙歧桿菌根據(jù)上面所述單獨(dú)或組合作為藥物活性成份，即以酪酸梭菌；凝結(jié)芽孢桿菌；雙歧桿菌；酪酸梭菌和凝結(jié)芽孢桿菌；酪酸梭菌和雙歧桿菌；凝結(jié)芽孢桿菌和雙歧桿菌；酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌和雙歧桿菌分別為藥物活性成份制成的活菌制劑包含的總活菌數(shù)不能低于1X106CFU/g,一般在lX107CFU/g以上，最高可達(dá)到1X1012CFU/g或1X1012CFU/g以上。本發(fā)明優(yōu)選的制劑工藝為，先在液體培養(yǎng)基中接種菌種，進(jìn)行培養(yǎng)或多級(jí)擴(kuò)增培養(yǎng)，然后將液態(tài)培養(yǎng)物離心，收集濕菌泥，并將所述菌泥干燥、粉碎，得到干燥菌粉。將所得干燥菌粉與藥用載體混合，制成最終劑型。由于本發(fā)明首次公開(kāi)了以酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、雙歧桿菌為藥物活性成份治療腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉的藥物作用，特別是對(duì)冷涼瀉和喝酒瀉的藥物作用，因此，酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、雙歧桿菌按上面所述單獨(dú)或組合作為藥物活性成份或主要藥物活性成份與輔料組合制成藥劑，只要是該藥劑用于治療腸易激綜合征，特別是用于治療冷涼瀉或喝酒瀉，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明的酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、雙歧桿菌在制成任何一種劑型時(shí)，均具有治療腸易激綜合征、冷涼瀉或喝酒瀉的作用。任何藥劑，如果其組份中含有酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、雙歧桿菌中的一種或幾種成份制備成藥，在其包裝或說(shuō)明書(shū)等標(biāo)識(shí)上或者在其他任何宣傳品上只要注明或提示具有治療腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉的作用，則落入本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。本發(fā)明的酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、雙歧桿菌是益生菌。因此，也可以將酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、雙歧桿菌制成保健食品或保健藥品。將酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、雙歧桿菌制成的保健食品，如果在其包裝或說(shuō)明書(shū)等標(biāo)識(shí)上或者在其他任何宣傳品上只要注明或提示具有治療腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉的作用，則落入本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。具體實(shí)施例方式藥物制備例說(shuō)明以酪酸梭菌為藥物活性成分制成膠囊劑為例，說(shuō)明制備方法。酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、雙歧桿菌按上面所述單獨(dú)或組合作為藥物活性成份，制備方法同下，制備方法不只局限以下的方法，公知的方法均可以。所配成的制劑含兩種菌以上活性成份可分別發(fā)酵或混合發(fā)酵，然后制成單一組分菌粉或混合組分菌粉，最后按常規(guī)方法制備成所需的劑型。實(shí)施例1酪酸梭菌活菌菌粉制備取酪酸梭菌活菌菌種管一支，溶于已滅菌裝有IOml生理鹽水和璃珠的IOOml三角瓶中，活化10分鐘，用Iml無(wú)菌吸管吸取Iml菌懸液接種裝有50ml擴(kuò)增培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，置搖擺床內(nèi)37°C恒溫振蕩(190rpm)培養(yǎng)24小時(shí)，轉(zhuǎn)接裝有450ml擴(kuò)增培養(yǎng)基2500ml檔板三角瓶中，37°C恒溫振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，鏡檢無(wú)雜菌后再轉(zhuǎn)接于裝有4.5L擴(kuò)增培養(yǎng)基的種子罐中，厭氧培養(yǎng)(充氣量31)24小時(shí)，鏡檢無(wú)雜菌后轉(zhuǎn)接有45L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，37°C厭氧培養(yǎng)24小時(shí)，鏡檢芽孢率達(dá)80%以上，停止培養(yǎng)。用連續(xù)離心機(jī)，12000rpm離心。收集濕菌泥，稱(chēng)重，按11(w/v)添加適量脫脂奶粉等保護(hù)劑后，干燥，粉碎，常溫保存?zhèn)溆?。?shí)施例2酪酸梭菌活菌膠囊制備成份％(重量)酪酸梭菌活菌菌粉20.00份微晶纖維素40.00份葡萄糖40.00份將上述組份中13組中充分拌勻，然后利用常規(guī)灌裝膠囊技術(shù)按單位劑量制成膠囊。試驗(yàn)例說(shuō)明我們以口服酪酸梭菌活菌膠囊、口服凝結(jié)芽孢桿菌活菌片、口服雙歧桿菌活菌片為例，介紹以酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、雙歧桿菌按上面所述單獨(dú)或組合為藥物活性成份制成的活菌制劑治療腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉的臨床效果。由于酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、雙歧桿菌都是益生菌，作用機(jī)理相同，所以酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、雙歧桿菌按上面所述組合作為藥物活性成份制成的活菌制劑與單獨(dú)作為藥物活性成份制成的活菌制劑治療腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉的臨床效果相同或相近，所以在這里只介紹單獨(dú)作為藥物活性成份制成的口服酪酸梭菌活菌膠囊、口服凝結(jié)芽孢桿菌活菌片、口服雙歧桿菌活菌片的臨床研究效果為代表。試驗(yàn)例1酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、雙歧桿菌治療腸易激綜合征療效觀察1對(duì)象與方法1.1觀察對(duì)象選擇20052006年就診的按1999年提出的羅馬II診斷標(biāo)準(zhǔn)診斷明確的腸易激綜合征患者隨機(jī)分入口服酪酸梭菌活菌膠囊治療組、口服凝結(jié)芽孢桿菌活菌片治療組和口服雙歧桿菌活菌片治療組。1.2療效判定標(biāo)準(zhǔn)1.2.1癥狀分級(jí)①腹痛0級(jí)無(wú)疼痛；1級(jí)(輕度)有疼痛，但不影響日?；顒?dòng)或工作，亦不需服藥；2級(jí)(中度)有疼痛，部分影響日?；顒?dòng)或工作，并需服藥；3級(jí)(重度)有疼痛，影響日?；顒?dòng)或工作，需休息，并需服藥。②腹脹0級(jí)無(wú)癥狀；1級(jí)偶有癥狀；2級(jí)間斷發(fā)生；3級(jí)經(jīng)常有癥狀。③排便費(fèi)力、急迫感、排便不凈感0級(jí)無(wú)癥狀；1級(jí)輕度，偶有；2級(jí)中度，間斷有；3級(jí)重度，經(jīng)常有。④腸鳴音0級(jí)正常；1級(jí)稍活躍；2級(jí)活躍；3級(jí)亢進(jìn)。⑤腹部壓痛0級(jí)無(wú)壓痛；1級(jí)壓痛輕微；2級(jí)壓痛較明顯；3級(jí)壓痛明顯。1.2.2療效分級(jí)(1)治愈治療后患者糞便性狀及排便次數(shù)恢復(fù)正常(每天排12次黃色條狀軟便)，全身癥狀消失。(2)顯效治療后患者糞便性狀及排便次數(shù)明顯好轉(zhuǎn)(每天排23次黃色軟便)或每周排便>3次，全身癥狀明顯改善。(3)進(jìn)步治療后患者糞便性狀及排便次數(shù)有好轉(zhuǎn)(每天排3次黃色爛便)或每周排便等于3次，全身癥狀有好轉(zhuǎn)。(4)無(wú)效治療后患者糞便性狀和排便次數(shù)及全身癥狀無(wú)好轉(zhuǎn)，甚至惡化。1.3安全性評(píng)價(jià)治療中認(rèn)真觀察可能與治療藥有關(guān)的不良反應(yīng)，記錄發(fā)生時(shí)間、癥狀及持續(xù)時(shí)間、處理結(jié)果。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SAS統(tǒng)計(jì)分析軟件，數(shù)據(jù)分別用百分率或均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示，治療前后的差異顯著性測(cè)驗(yàn)，用χ2檢驗(yàn)和精確概率法，或t檢驗(yàn)，差異的顯著性水平為ρ<0.05。2結(jié)果口服酪酸梭菌活菌膠囊治療組治療50例，口服凝結(jié)芽孢桿菌活菌片治療組治療46例，口服雙歧桿菌活菌片治療組治療57例。詳細(xì)療效觀察結(jié)果如下2.1口服酪酸梭菌活菌膠囊治療腸易激綜合征50例療效觀察結(jié)果2.1.1臨床資料男性33例，女性17例，男女=21，平均年齡41.8歲，平均病程19.9月。IBS分型，腹瀉為主型34例，便秘為主型8例，腹瀉便秘交替型8例。2.1.2給藥方法口服酪酸梭菌活菌膠囊，每粒420mg(含酪酸梭菌活菌數(shù)不低于l.OXlOWg),由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3粒/次，一天2次，療程1421天。對(duì)脫水者補(bǔ)充水、電解質(zhì)等支持療法。2.1.3療效觀察結(jié)果2.1.3.1腸易激綜合征患者治療前后的癥狀改善比較50例IBS患者的腹瀉和便秘等癥狀，治療后均有顯著的改善(P<0.05)，見(jiàn)表1。表1腸易激綜合征患者治療前后的癥狀改善比較、嚴(yán)處治療前(50例)治療后(50例)X—此認(rèn),八^癥狀"^！^-^^-^-ΙΓ^Τ—-Χ顯著性檢驗(yàn)(P值)_例數(shù)構(gòu)成比例數(shù)構(gòu)成比_腹瀉346836<0.05便秘81600<0.05腹瀉+便秘81600<0.05水樣、稀爛418224<0.05便或軟便硬便91800<0.05腹痛37741224<0.05腹脹4080918<0.05排便不凈感32641326<0.05排便費(fèi)力91824<0.05排便急迫感27541020<0.05腹壓痛3060714<0.05腸鳴音36_72_1224_<005_※用卡方檢驗(yàn)或精確概率法2.1.3.2腸易激綜合征患者治療前后的排便次數(shù)、療程與療效治療后IBS患者的腹瀉為主型和腹瀉便秘交替型的排便次數(shù)有顯著的減少(ρ<0.01)，而便秘為主型的則有顯著的增加(ρ<0.01)，型間療效無(wú)明顯不同，21天的療效比14天的要好，見(jiàn)表2。表2腸易激綜合征患者治療前后的排便次數(shù)、療程與療效_排便次數(shù)/天抜療程與療效(總有效率)---lW-治療前治療后_14^_21天g+sp)__例數(shù)構(gòu)成比例數(shù)構(gòu)成比4.10土1.711.67±0.70a<0.01418247940.0±0.0_1.1±0.3b<0.01_^自身對(duì)比t檢驗(yàn)，an=42；bn=82.1.3.3腸易激綜合征患者的總療效50例IBS患者，痊愈31例，顯效16例，總有效率為94%，無(wú)效為0，見(jiàn)表3。表3腸易激綜合征患者的總療效、平均起效時(shí)間權(quán)利要求1.酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、雙歧桿菌在制備治療冷涼瀉、喝酒瀉的藥物中的應(yīng)用，其中所述的酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、雙歧桿菌單獨(dú)應(yīng)用或組合應(yīng)用作為藥物活性成份制成活菌制劑。2.按權(quán)利要求1所述應(yīng)用，其特征在于雙歧桿菌包括嬰兒雙歧桿菌、長(zhǎng)雙歧桿菌、短雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌。3.按權(quán)利要求1所述應(yīng)用，其特征在于將有效劑量的權(quán)利要求1所述的酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、雙歧桿菌三種菌和藥學(xué)上可接受的不同載體制成口服劑型、肛門(mén)栓劑、灌腸劑。4.按權(quán)利要求1所述應(yīng)用，其特征在于將有效劑量的權(quán)利要求1所述的酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌兩種菌和藥學(xué)上可接受的不同載體制成口服劑型、肛門(mén)栓劑、灌腸劑。5.按權(quán)利要求1所述應(yīng)用，其特征在于將有效劑量的權(quán)利要求1所述的酪酸梭菌、雙歧桿菌兩種菌和藥學(xué)上可接受的不同載體制成口服劑型、肛門(mén)栓劑、灌腸劑。6.按權(quán)利要求1所述應(yīng)用，其特征在于將有效劑量的權(quán)利要求1所述的凝結(jié)芽孢桿菌、雙歧桿菌兩種菌和藥學(xué)上可接受的不同載體制成口服劑型、肛門(mén)栓劑、灌腸劑。7.按權(quán)利要求1所述應(yīng)用，其特征在于將有效劑量的權(quán)利要求1所述的酪酸梭菌和藥學(xué)上可接受的不同載體制成口服劑型、肛門(mén)栓劑、灌腸劑。8.按權(quán)利要求1所述應(yīng)用，其特征在于將有效劑量的權(quán)利要求1所述的凝結(jié)芽孢桿菌和藥學(xué)上可接受的不同載體制成口服劑型、肛門(mén)栓劑、灌腸劑。9.按權(quán)利要求1所述應(yīng)用，其特征在于將有效劑量的權(quán)利要求1所述的雙歧桿菌和藥學(xué)上可接受的不同載體制成口服劑型、肛門(mén)栓劑、灌腸劑。10.按權(quán)利要求3、4、5、6、7、8或9所述，其特征在于所述有效劑量是指制劑包含的總活菌數(shù)不能低于lX106CFU/g，一般在1X107CFU/g以上，最高可達(dá)到1XIO12CFU/g或1X1012CFU/g以上。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、雙歧桿菌的藥物新用途，具體涉及酪酸梭菌、凝結(jié)芽孢桿菌、雙歧桿菌單獨(dú)或組合作為藥物活性成份制成活菌制劑在制備治療冷涼瀉、喝酒瀉藥物中的應(yīng)用。文檔編號(hào)A61K9/00GK102008511SQ20101020543公開(kāi)日2011年4月13日申請(qǐng)日期2006年11月17日優(yōu)先權(quán)日2006年11月17日發(fā)明者崔云龍申請(qǐng)人:北京普爾康醫(yī)藥高科技有限公司,青島東海藥業(yè)有限公司