專利名稱：一種接骨續(xù)筋片的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥制劑的檢測方法，具體的說，本發(fā)明涉及中成藥接骨續(xù)筋片的檢測方法。
背景技術(shù)：
接骨續(xù)筋片是一種活血化瘀，消腫止痛的中成藥，在我國已上市多年，臨床用于軟組織損傷、骨折等療效肯定。接骨續(xù)筋片由中藥材蜥蜴、骨碎補(炒)和穿山龍按中成藥合劑的常規(guī)工藝制備而成。該產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十一冊，標(biāo)準(zhǔn)編號為WS3-B-2226-96。該標(biāo)準(zhǔn)中僅有定性化學(xué)反應(yīng)鑒別，其專屬性較差，且沒有任何定量檢測的方法，不利于控制接骨續(xù)筋片的產(chǎn)品質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了克服目前接骨續(xù)筋片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅有定性化學(xué)反應(yīng)鑒別、專屬性不強、不利于控制產(chǎn)品質(zhì)量的缺點。提供一種專屬性強，且更能準(zhǔn)確控制產(chǎn)品質(zhì)量的接骨續(xù)筋片的檢測方法?，F(xiàn)有的檢測方法為⑴取本品3片，除去糖衣，研細(xì)，加甲醇6ml，溫浸30分鐘，濾過，取濾液2ml，加對二甲氨基苯甲醛溶液aiil，密閉，置60°C水浴中加熱30分鐘，顯粉紅色。(2)取本品1片，除去糖衣，研細(xì)，加水5ml，置水浴中加熱10分鐘，濾過，取濾液 lml，加茚三酮試液0. 5ml，置水浴中加熱，顯藍(lán)紫色。本發(fā)明相對現(xiàn)有檢測方法，還增加了以下技術(shù)(1)采用薄層色譜法，以骨碎補對照藥材、柚皮苷為對照品，鑒別接骨續(xù)筋片中含有骨碎補；( 采用高效液相色譜法測定接骨續(xù)筋片中薯蕷皂苷元的含量，薯蕷皂苷元為藥材穿山龍主要成份之一?！?、薄層色譜法鑒別接骨續(xù)筋片中含有骨碎補試藥與試劑骨碎補對照藥材、柚皮苷對照品(中國藥品生物制品檢定所)接骨續(xù)筋片、缺骨碎補的接骨續(xù)筋片陰性對照樣所用試劑均為分析純供試品溶液制備取本品10片，去糖衣，研細(xì)，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。對照藥材及對照品溶液制備取骨碎補對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液。再取柚皮苷對照品，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作為對照品溶液。缺骨碎補的接骨續(xù)筋片陰性對照樣按供試品溶液制備方法制備。照薄層色譜法(《中國藥典》2005版一部附錄VI B)試驗，吸取上述三種溶液各 5 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(1 12 2.5 3) 的上層液為展開劑，展開，取出，晾干。顯色噴以三氯化鋁試液，在紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品相應(yīng)位置顯相同顏色的熒光斑點。陰性無干擾。
以上結(jié)果表明，此方法可以做為接骨續(xù)筋片中骨碎補薄層專屬鑒別。二、高效液相色譜法測定接骨續(xù)筋片中薯蕷皂苷元的含量色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑乙腈-水 (90 10)為流動相；檢測波長為203nm。理論板數(shù)按薯蕷皂苷元峰計應(yīng)不低于3000。對照品溶液的制備取薯蕷皂苷元對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含
0.Img的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品20片，除去糖衣，研細(xì)，取約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，置具塞錐形瓶中，蒸干，殘渣加3mol/L鹽酸溶液20ml使溶解，加熱回流1小時，取出，放冷，用三氯甲烷振搖提取3次，每次25ml，合并三氯甲烷液，回收溶劑至干，殘渣加流動相使溶解并轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。含量測定方法的方法學(xué)考察1、線性關(guān)系考察取薯蕷皂苷元對照品溶液(0.020 lg/L_)用甲醇配成質(zhì)量濃度為0. 00402，0. 00804，0. 01206,0. 01608和0. 0201g/L的對照品溶液，注入液相色譜儀，按擬定的色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積；以峰面積(Y)對進(jìn)樣量(X)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為 Y = 441224 X-1598，r = 0. 9999 ；結(jié)果表明在0. 0804 0. 402 μ g范圍內(nèi)，薯蕷皂苷元的峰
面積與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系。2、精密度試驗精密吸取同一供試品溶液，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，薯蕷皂苷元峰面積的RSD為0.67% (η = 6)。結(jié)果表明，本法精密度良好。3、重現(xiàn)性試驗取同一批號樣品6份，在上述色譜條件下進(jìn)樣，測定樣品中薯蕷皂苷元峰面積，計算，結(jié)果樣品中薯蕷皂苷元含量的RSD為0. 91% (n = 6)。4、穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液，分別在0，2，4，6，8和12h精密吸取10 μ L， 在上述色譜條件下進(jìn)樣，測定樣品中薯蕷皂苷元峰面積，結(jié)果薯蕷皂苷元峰面積的RSD為
1.22% (n = 6)，表明供試品溶液在12h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。5、回收率實驗精密稱定已知含量的樣品5份，每份約2g，分別精密加入薯蕷皂苷元對照品，在上述色譜條件下進(jìn)行分析測定，計算回收率。結(jié)果薯蕷皂苷元的平均回收率為 97. 0%, RSD 為 1. 6%。該測定方法經(jīng)過方法學(xué)驗證，陰性樣品對測定無干擾。用本方法測定十批接骨續(xù)
筋片中薯蕷皂苷元的含量，結(jié)果如下
批號__ηΛ_含量
0809010.570801010.51
0809020.580802010.57 028 081001 0.56 080301 0.59
081002 0.59 080302 0.52 081101__055_080303_0. 54根據(jù)以上結(jié)果和原標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定本品每片(每素片重0. 32g)含穿山龍以薯蕷皂苷元 (C27H42O3)計，不得少于 0. 5mg。本發(fā)明的接骨續(xù)筋片的質(zhì)量控制方法，既增加了定性鑒別方法又增加了有效成份
的含量測定方法，提高了接骨續(xù)筋片質(zhì)量控制方法的專屬性和質(zhì)量穩(wěn)定性，確保了人們用藥的安全性和有效性。本發(fā)明的接骨續(xù)筋片的質(zhì)量控制方法，既可用于控制接骨續(xù)筋片的質(zhì)量，又可以用來控制相同處方的其它劑型如顆粒劑等的質(zhì)量。
具體實施例方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但不作為限制。實施例1、取申請人生產(chǎn)的批號為090401的接骨續(xù)筋片。鑒別⑴取本品3片，除去糖衣，研細(xì)，加甲醇6ml，溫浸30分鐘，濾過，取濾液 2ml，加對二甲氨基苯甲醛溶液aiil，密閉，置60 V水浴中加熱30分鐘，顯粉紅色。(2)取本品1片，除去糖衣，研細(xì)，加水5ml，置水浴中加熱10分鐘，濾過，取濾液 lml，加茚三酮試液0. 5ml，置水浴中加熱，顯藍(lán)紫色。(3)取本品10片，去糖衣，研細(xì)，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干， 殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取骨碎補對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液。再取柚皮苷對照品，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005版一部附錄VI B)試驗，吸取上述三種溶液各5 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(1 12 2.5 3)的上層液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，在紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品相應(yīng)位置顯相同顏色的熒光斑點。檢查應(yīng)符合合劑項下有關(guān)的各項規(guī)定(中國藥典2005年版一部附錄1J)。含量測定照高相液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑乙腈-水 (90 10)為流動相；檢測波長為203nm。理論板數(shù)按薯蕷皂苷元峰計應(yīng)不低于3000。對照品溶液的制備取薯蕷皂苷元對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含 0. Img的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品20片，除去糖衣，研細(xì)，取約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，置具塞錐形瓶中，蒸干，殘渣加3mol/L鹽酸溶液20ml使溶解，加熱回流1小時，取出，放冷，用三氯甲烷振搖提取3次，每次25ml，合并三氯甲烷液，回收溶劑至干，殘渣加流動相使溶解并轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。本品每片(每素片重0. 32g)含穿山龍以薯蕷皂苷元(C27H42O3)計，為0. 56mg。
權(quán)利要求
1.一種接骨續(xù)筋片的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括采用薄層色譜法鑒別骨碎補，高效液相色譜法測定薯蕷皂苷元的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述鑒別方法包括以下步驟(1)取本品3片，除去糖衣，研細(xì)，加甲醇6ml，溫浸30分鐘，濾過，取濾液2ml，加對二甲氨基苯甲醛溶液anl，密閉，置60°C水浴中加熱30分鐘，顯粉紅色；(2)取本品1片，除去糖衣，研細(xì)，加水5ml，置水浴中加熱10分鐘，濾過，取濾液lml，加茚三酮試液0. 5ml，置水浴中加熱，顯藍(lán)紫色；(3)取本品10片，去糖衣，研細(xì)，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取骨碎補對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液。再取柚皮苷對照品，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作為對照品溶液，照《中國藥典》2005 版一部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各5 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比1 12 2.5 3甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水的上層液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，在365nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材及對照品相應(yīng)位置顯相同顏色的熒光斑點。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述含量測定方法包括以下步驟照中國藥典2005年版一部附錄VI D高相液相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑以體積比90 10 乙腈-水為流動相；檢測波長為203nm，理論板數(shù)按薯蕷皂苷元峰計應(yīng)不低于3000，對照品溶液的制備取薯蕷皂苷元對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含0. Img 的溶液，即得，供試品溶液的制備取本品20片，除去糖衣，研細(xì)，取約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，置具塞錐形瓶中，蒸干，殘渣加3mol/L鹽酸溶液20ml使溶解，加熱回流1小時，取出，放冷，用三氯甲烷振搖提取3次，每次25ml，合并三氯甲烷液，回收溶劑至干，殘渣加流動相使溶解并轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得，測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得，本品每片含穿山龍以薯蕷皂苷元(C27H42O3)計，為0. 56mg。
4.一種接骨續(xù)筋片的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括以下步驟鑒別(1)取本品3片，除去糖衣，研細(xì)，加甲醇6ml，溫浸30分鐘，濾過，取濾液^iil， 加對二甲氨基苯甲醛溶液anl，密閉，置60°C水浴中加熱30分鐘，顯粉紅色，(2)取本品1片，除去糖衣，研細(xì)，加水5ml，置水浴中加熱10分鐘，濾過，取濾液lml，加茚三酮試液0. 5ml，置水浴中加熱，顯藍(lán)紫色，(3)取本品10片，去糖衣，研細(xì)，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取骨碎補對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液，再取柚皮苷對照品，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法(《中國藥典；)〉2005版一部附錄VI B)試驗，吸取上述三種溶液各5μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(1 12 2.5 3)的上層液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，在紫外燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材及對照品相應(yīng)位置顯相同顏色的熒光斑點，檢查應(yīng)符合合劑項下有關(guān)的各項規(guī)定(中國藥典2005年版一部附錄IJ)，含量測定照高相液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI D)測定， 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑乙腈-水 (90 10)為流動相；檢測波長為203nm，理論板數(shù)按薯蕷皂苷元峰計應(yīng)不低于3000，對照品溶液的制備取薯蕷皂苷元對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含0. Img 的溶液，即得，供試品溶液的制備取本品20片，除去糖衣，研細(xì)，取約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，置具塞錐形瓶中，蒸干，殘渣加3mol/L鹽酸溶液20ml使溶解，加熱回流1小時，取出，放冷，用三氯甲烷振搖提取3次，每次25ml，合并三氯甲烷液，回收溶劑至干，殘渣加流動相使溶解并轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得，測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得，本品每片(每素片重0. 32g)含穿山龍以薯蕷皂苷元(C27H42O3)計，為0. 56mg。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種中藥制劑的檢測方法，具體的說，本發(fā)明涉及中成藥接骨續(xù)筋片的檢測方法。本發(fā)明所述檢測方法包括采用薄層色譜法鑒別骨碎補，高效液相色譜法測定薯蕷皂苷元的含量。
文檔編號A61K36/8945GK102335315SQ20101023410
公開日2012年2月1日 申請日期2010年7月22日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月22日
發(fā)明者劉艷陽, 黎家檢 申請人:江西濟(jì)民可信藥業(yè)有限公司, 江西濟(jì)民可信集團(tuán)有限公司