專(zhuān)利名稱(chēng)：一種含有自噬抑制劑的肝動(dòng)脈化療栓塞劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是一種治療肝癌的含有自噬抑制劑的肝動(dòng)脈化療栓塞 劑。
背景技術(shù)：
動(dòng)脈栓塞化療(Transcatheter arterial chemoembolization，TACE)是利用碘油 和化療藥物灌注栓塞腫瘤供血?jiǎng)用}，形成缺血缺氧和局部化療的微環(huán)境，是肝癌治療的一 種安全有效的治療方式。腫瘤的血供90%以上來(lái)自肝動(dòng)脈，而正常肝組織75%的血液來(lái)自 門(mén)靜脈，所以進(jìn)行動(dòng)脈栓塞不會(huì)對(duì)正常的肝臟血供造成大的影響，卻阻斷了腫瘤的主要血 供，因此，癌結(jié)節(jié)大部分壞死，而肝臟功能不受損或受損不嚴(yán)重。而且通過(guò)導(dǎo)管選擇性將化 療藥物送至腫瘤的供血?jiǎng)用}，腫瘤局部藥物濃度高，可達(dá)全身的100 400倍，這是外周靜 脈給藥難以達(dá)到的水平，藥物的首過(guò)效應(yīng)明顯，而全身毒副作用卻明顯減少?，F(xiàn)有的由化療 藥物與碘油組成的栓塞劑，是將化療藥物與碘油混合栓塞，可起到栓塞和化療的雙重作用。 碘油作為化療藥物的載體，能夠延長(zhǎng)局部化療藥的作用時(shí)間，同時(shí)還能栓塞小動(dòng)脈及其末 梢分支，致使腫瘤缺血壞死。然而，TACE后，雖然80%以上的腫瘤組織出現(xiàn)壞死，但僅有5% 是完全壞死，而殘存的癌細(xì)胞會(huì)具有或產(chǎn)生更強(qiáng)的增殖和侵襲能力。部分患者TACE后短期 內(nèi)肝內(nèi)出現(xiàn)多處或彌漫性播散灶或肺內(nèi)多發(fā)轉(zhuǎn)移灶等。而且肝癌細(xì)胞對(duì)化療的不敏感，制 約著TACE中化療藥物的作用效果，進(jìn)而影響TACE的總體療效。由于在TACE中使用的化療 藥物是通過(guò)破壞腫瘤細(xì)胞基因組的DNA結(jié)構(gòu)或阻斷基因表達(dá)過(guò)程來(lái)發(fā)揮抗癌作用的，因此 當(dāng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物存在抗性時(shí)，化療效果明顯減弱，而加大化療藥劑量又會(huì)發(fā)生嚴(yán)重 的副作用或并發(fā)癥。因此，現(xiàn)有的TACE術(shù)有其局限性，療效尚不夠滿(mǎn)意。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種含有自噬抑制劑的肝動(dòng)脈化療栓塞劑，亦即在栓塞劑中加入了自 噬抑制劑，形成化療藥物、自噬抑制劑和碘油三者混合栓塞，以提高TACE術(shù)中化療藥物的 作用效果，增強(qiáng)肝癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，可在一定程度上提高TACE術(shù)的總體療效。本發(fā)明所說(shuō)的化療藥物為順鉬；碘油為超液態(tài)碘化油；自噬抑制劑選自巴佛洛霉 ^AKBafilomycin Al) ^ttRf (Chloroquine)。本發(fā)明栓塞劑是臨用時(shí)將各組分按各自的給藥劑量混合而成，各自的給藥劑量按 體重計(jì)算，分別為順鉬2mg/kg ；超液態(tài)碘化油 0. 2ml/kg ；自噬抑制劑巴佛洛霉素Al (Bafilomycin Al) 0. 6Ug/kg或氯喹(Chloroquine) 60mg/kg其中，自噬抑制劑巴佛洛霉素Al (Bafilomycin Al)或氯喹(Chloroquine)均可以 作為化療藥物的增敏劑，能增加肝癌細(xì)胞在栓塞后的缺血缺氧微環(huán)境中對(duì)化療藥物的敏感性，增強(qiáng)化療藥物的抗癌效果。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明栓塞劑對(duì)治療中晚期原發(fā)性肝癌可取 得較好的療效，腫瘤細(xì)胞凋亡率和壞死率都明顯增加，腫瘤縮小顯著，從而提高了 TACE的 治療效果。本發(fā)明為肝動(dòng)脈化療栓塞提供了一種療效好、損傷小的栓塞劑。
具體實(shí)施例方式現(xiàn)結(jié)合實(shí)施例和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)描述。實(shí)施例1.制備含巴佛洛霉素Al的肝動(dòng)脈化療栓塞劑按體重給藥劑量分別為順鉬2mg/kg，超液態(tài)碘化油0. 2ml/kg,巴佛洛霉素Al 0. 6Ug/kg，以此配比，將順鉬、超液態(tài)碘化油和巴佛洛霉素Al混合均勻，即成肝動(dòng)脈化療栓塞劑。實(shí)施例2.制備含氯喹的肝動(dòng)脈化療栓塞劑按體重給藥劑量分別為順鉬2mg/kg，超液態(tài)碘化油0. 2ml/kg,氯喹60mg/kg，以此 配比，將順鉬、超液態(tài)碘化油和氯喹混合均勻，即成肝動(dòng)脈化療栓塞劑。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)一.采用的本發(fā)明栓塞劑由實(shí)施例1制備實(shí)驗(yàn)1.本發(fā)明栓塞劑對(duì)兔VX2肝癌的治療效果實(shí)驗(yàn)1)動(dòng)物純種新西蘭大白兔(購(gòu)自第二軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，下同)40只，雌雄 不限，體重2 2. 5kg ；2)建立兔VX2肝癌模型(下同)按常規(guī)將VX2肝癌組織塊用直接嵌插包埋法種植于新西蘭大白兔肝左葉，移植術(shù) 后兩周CT掃描檢查兔肝內(nèi)腫瘤，證實(shí)兔VX2肝癌模型建成，并在CT顯示的最大層面測(cè)量腫 瘤的最大徑和最小徑；3)分組將上述VX2肝癌模型兔隨機(jī)分為四組，每組10只A組為生理鹽水對(duì)照組按體重經(jīng)肝動(dòng)脈緩慢注入0. 2ml/kg生理鹽水；B組為超液態(tài)碘化油+順鉬栓塞組按體重將超液態(tài)碘化油0. 2ml/kg+順鉬2mg/kg混合后反復(fù)乳化，再在透視下經(jīng)連 接管緩慢注入肝動(dòng)脈；C組為超液態(tài)碘化油+巴佛洛霉素Al栓塞組按體重將超液態(tài)碘化油0. 2ml/kg+巴佛洛霉素Al 0. 6Ug/kg充分混合后再在透視 下經(jīng)連接管緩慢注入肝動(dòng)脈；D組為本發(fā)明超液態(tài)碘化油+順鉬+巴佛洛霉素Al栓塞組按體重將超液態(tài)碘化油0. 2ml/kg+順鉬2mg/kg+巴佛洛霉素A10. 6Ug/kg混合乳 化后，再在透視下經(jīng)連接管緩慢注入肝動(dòng)脈。栓塞術(shù)后2周行CT掃描測(cè)量肝臟腫瘤大小。按公式計(jì)算腫瘤體積V = ab2/2 (其 中，V為腫瘤體積，a為腫瘤最大徑，b為腫瘤最小徑)；并計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)率(Growth Rate, GR) :GR = V 治療后 /V 治療前 X 100% ；腫瘤生長(zhǎng)抑制率(Growth Inhibition Rate, GIR) GIR = -1-(V給藥組治療后-V給藥組治療前)/ (V對(duì)照組治療后-V對(duì)照組治療前)。結(jié)果 見(jiàn)表1 生長(zhǎng)率(％) 生長(zhǎng)抑制率
組別腫瘤大小(cm3)
治療前1天治療后2周
A 組1.214士0.09120. 053±1.5281651. 81 ±21. 910
B1.179±0. 1356.417±0. 583*544. 31 ±23. 94·72. 20士 13. 05
組1.162±0.1277.442±0. 369*640. 45±47. 50*66. 66士 13. 91
D 組1.239±0.0861.855土0.412**##150. 40±31. 65"##96. 73± 10. 42"#注與A 組相比，*Ρ < 0. 05，**Ρ < 0. 01 ；與 B 組相比，#Ρ < 0. 05，##Ρ < 0. 01.由表1可見(jiàn)，本發(fā)明栓塞劑(D組)能明顯抑制兔VX2肝癌的生長(zhǎng)，腫瘤生長(zhǎng)抑制 率不僅與生理鹽水對(duì)照組(Α組)相比有顯著差異(Ρ<0. 01)，而且比由順鉬和超液態(tài)碘化 油組成的栓塞劑組(B組)提高了 24. 53%，說(shuō)明本發(fā)明栓塞劑由于含有自噬抑制劑——巴 佛洛霉素Al，因此肝癌治療作用明顯優(yōu)于現(xiàn)有的順鉬和超液態(tài)碘化油組成的栓塞劑，同時(shí) 由超液態(tài)碘化油和自噬抑制劑巴佛洛霉素Al的組合治療效果遠(yuǎn)低于本發(fā)明栓塞劑，說(shuō)明 自噬抑制劑——巴佛洛霉素Al對(duì)化療藥物順鉬治療的增敏作用。實(shí)驗(yàn)2.本發(fā)明栓塞劑對(duì)兔VX2肝癌凋亡的影響實(shí)驗(yàn)純種新西蘭大白兔60只，雌雄不限，體重2. 0-2. 5kg。VX2肝癌模型建立后2周， 把60只經(jīng)CT掃描證實(shí)的VX2肝癌荷瘤兔隨機(jī)分為4組，每組15只。采用經(jīng)選擇性肝動(dòng)脈 插管的方法進(jìn)行栓塞。=
A組為生理鹽水對(duì)照組(同實(shí)驗(yàn)1)B組為為超液態(tài)碘化油+順鉬栓塞組(同實(shí)驗(yàn)1)C組為超液態(tài)碘化油+巴佛洛霉素Al栓塞組(同實(shí)驗(yàn)1)D組為本發(fā)明超液態(tài)碘化油+順鉬+巴佛洛霉素Al栓塞組(同實(shí)驗(yàn)1)栓塞術(shù)后2周處死所有動(dòng)物，取出腫瘤標(biāo)本用10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋， 制切片。采用原位缺口末端標(biāo)記(TUNEL)法檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡指數(shù)(Al)，用免疫組織化 學(xué)法檢測(cè)各組腫瘤細(xì)胞中Bax和Bcl-2蛋白的表達(dá)情況，結(jié)果見(jiàn)表2和表3。表2栓塞術(shù)后各組動(dòng)物腫瘤細(xì)胞的凋亡指數(shù)(％) (i±S)
CN 101953845 A^ zR3/9 頁(yè)表1栓塞治療前后腫瘤大小及腫瘤生長(zhǎng)率(
%
5組別例數(shù)凋亡指數(shù)(％)
A 組155.28±1.31
B 組1511.45±2. 73*
C 組159. 86±2. 65
D 組1523.92±1.98"#注與A 組相比，*P < 0. 05，**P < 0. 01 ；與 B 組相比，#P < 0. 05.表3栓塞術(shù)后各組動(dòng)物腫瘤細(xì)胞中Bax和Bcl_2的表達(dá)
組別 例數(shù)Bax表達(dá)Bcl-2表達(dá)
陽(yáng)性例數(shù)陽(yáng)性率(％)陽(yáng)性例數(shù)陽(yáng)性率(％)
A 組15213.33 1386.67
B 組15533.33* 1066.67*
C 組 15320.00*# 1280.00
D 組 15853.33"# 533.33*·注與A 組相比，*P < 0. 05，**P < 0. 01 ；與 B 組相比，#P < 0. 05，##P < 0. 01.由表2可見(jiàn)，本發(fā)明栓塞劑治療組(D組)TUNEL染色陽(yáng)性細(xì)胞最多，細(xì)胞凋亡指 數(shù)最高，能明顯促進(jìn)兔VX2肝癌細(xì)胞的凋亡，細(xì)胞凋亡指數(shù)不僅與生理鹽水對(duì)照組(A組) 相比有顯著差異(P <0.01)，而且和由順鉬和超液態(tài)碘化油組成的栓塞劑組(B組)相比， 差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.05)，說(shuō)明本發(fā)明栓塞劑由于含有自噬抑制劑——巴佛洛霉 素Al，因此肝癌細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯高于現(xiàn)有的順鉬和超液態(tài)碘化油組成的栓塞劑，同時(shí)超 液態(tài)碘化油和巴佛洛霉素Al組合(C組)的凋亡指數(shù)遠(yuǎn)低于本發(fā)明栓塞劑，說(shuō)明自噬抑制 劑——巴佛洛霉素Al促進(jìn)了化療藥物順鉬誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞的凋亡。由表3可見(jiàn)，本發(fā)明栓塞劑治療組(D組)中Bcl-2家族的促凋亡蛋白Bax表達(dá)陽(yáng) 性率最高、抑凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)陽(yáng)性率最低，與生理鹽水對(duì)照組(A組)相比差異明顯(P <0.01)；而且D組與由順鉬和超液態(tài)碘化油組成的栓塞劑組(B組)相比，也具有明顯差 異(P<0.05)。說(shuō)明本發(fā)明栓塞劑由于含有自噬抑制劑——巴佛洛霉素Al，因此Bcl-2家 族的促凋亡蛋白Bax表達(dá)上調(diào)，抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)下調(diào)，同時(shí)超液態(tài)碘化油和巴佛洛霉 素Al組合(C組)中Bax和Bcl-2蛋白的表達(dá)也分別低于和高于本發(fā)明栓塞劑D組，說(shuō)明 自噬抑制劑——巴佛洛霉素Al促進(jìn)了 Bcl-2家族的促凋亡蛋白Bax表達(dá)，抑制了抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)，最終促進(jìn)化療藥物順鉬誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞的凋亡。實(shí)驗(yàn)3.本發(fā)明栓塞劑對(duì)VX2肝癌兔肝功能的影響純種新西蘭大白兔40只，雌雄不限，體重2. 0-2. 5kg。VX2肝癌模型建立后2周， 把40只經(jīng)CT掃描證實(shí)的VX2肝癌荷瘤兔隨機(jī)分為4組，每組10只。采用經(jīng)選擇性肝動(dòng)脈 插管的方法進(jìn)行栓塞。A組為生理鹽水對(duì)照組(同實(shí)驗(yàn)1)B組為為超液態(tài)碘化油+順鉬栓塞組(同實(shí)驗(yàn)1)C組為超液態(tài)碘化油+巴佛洛霉素Al栓塞組(同實(shí)驗(yàn)1)D組為本發(fā)明超液態(tài)碘化油+順鉬+巴佛洛霉素Al栓塞組(同實(shí)驗(yàn)1)術(shù)前1天及栓塞治療后3、7、14天分別抽血檢測(cè)血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT) 和天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)，結(jié)果見(jiàn)表4。表4兔VX2肝癌栓塞治療前后肝功能變化(U/L，Mean士 SD)
組 治療前1天 治療后3天 治療后7天 治療后14天
別ALTASTALTASTALTASTALTASTA組36. 2442. 24±37.58 +45.65 士36. 95+43. 72 土38. 86土43. 69 +±5. 498. 956.328. 935. 959. 127. 558. 78B組38. 7540. 56±149.29 ±162.41 +91. 73±123. 25土73. 19+97. 33 士±5. 1310. 1939. 76"25. 79"16. 88*26. 77"13. 68*19. 57"C組35. 3843. 96±101.93 +95.79 土59. 25±63.83 ±40. 69±52.94 +±7.916. 5823.54"#18. 43*#8. 73*"9. 52·#10. 23"6. 79D組38. 19 ±6. 2542. 73 9. 45±97.61 土 18. 26**#149. 52 ± 28. 56*.77. 64 15. 98"±108.69士 12. 53""53. 54 14. 91.+ #75.96土 10. 34*#注與A 組相比，*P < 0. 05，**P < 0. 01 ；與 B 組相比，#P < 0. 05，##P < 0. 01.由表4可見(jiàn)，栓塞治療前1天，四組動(dòng)物的ALT和AST水平無(wú)顯著性差異(P > 0. 05)。治療后3天的檢測(cè)結(jié)果顯示，B、C、D三組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的ALT和AST值有一過(guò)性升高， 而且與生理鹽水對(duì)照組(A組)相比均具有明顯差異(P<0.05)；治療后7天，B、C、D三組 動(dòng)物的ALT和AST水平開(kāi)始下降；14天時(shí)，超液態(tài)碘化油和自噬抑制劑巴佛洛霉素Al的組 合(C組)與A組相比，已無(wú)顯著性差異(P > 0. 05)，肝功能已恢復(fù)正常，說(shuō)明自噬抑制劑巴 佛洛霉素Al本身對(duì)肝功能無(wú)明顯影響；而14天時(shí)，B、D兩組的ALT和AST水平都明顯高于 A組(P < 0. 05)，而B(niǎo)、D兩組相比，D組動(dòng)物的ALT和AST值均顯著低于B組(P < 0. 05)， 說(shuō)明化療栓塞治療會(huì)損害實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的肝功能，但是自噬抑制劑巴佛洛霉素Al的加入不僅 沒(méi)有加重這種損傷，反而使損傷程度降低(P < 0. 05)，具有一定的肝保護(hù)作用。所以本發(fā)明 栓塞劑既可以更好地治療肝癌，抑制肝癌的生長(zhǎng)，又可以在一定程度上降低化療藥物對(duì)肝 臟的損傷。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)二 .采用的本發(fā)明栓塞劑由實(shí)施例2制備
權(quán)利要求
一種含有自噬抑制劑的肝動(dòng)脈化療栓塞劑，由化療藥物、自噬抑制劑和碘油組成，所說(shuō)的化療藥物為順鉑，碘油為超液態(tài)碘化油，自噬抑制劑選自巴佛洛霉素A1或氯喹，臨用時(shí)按各組分的給藥劑量混勻即可。
2.按權(quán)利要求1所述的含有自噬抑制劑的肝動(dòng)脈化療栓塞劑，其特征在于各組分的給 藥劑量按體重計(jì)算分別為順鉬2mg/kg ；超液態(tài)碘化油0. 2ml/kg ；巴佛洛霉素Al 0. 6Ug/kg或氯喹60mg/kg。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是一種治療肝癌的含有自噬抑制劑的肝動(dòng)脈化療栓塞劑，由化療藥物，自噬抑制劑和碘油組成，所說(shuō)的化療藥物為順鉑；碘油為超液態(tài)碘化油；自噬抑制劑選自巴佛洛霉素A1或氯喹。巴佛洛霉素A1或氯喹均可作為一種化療藥物的增敏劑，能增加肝癌細(xì)胞在栓塞后的缺血缺氧微環(huán)境中對(duì)化療藥物的敏感性，增強(qiáng)化療藥物的抗癌效果。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明栓塞劑對(duì)治療中晚期原發(fā)性肝癌可取得較好的療效，腫瘤細(xì)胞凋亡率和壞死率都明顯增加，腫瘤縮小顯著，從而提高了動(dòng)脈栓塞化療的治療效果。本發(fā)明為肝動(dòng)脈化療提供了一種療效好、損傷小的栓塞劑。
文檔編號(hào)A61P1/16GK101953845SQ201010257128
公開(kāi)日2011年1月26日 申請(qǐng)日期2010年8月13日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月28日
發(fā)明者劉燕, 衛(wèi)立辛, 吳孟超, 宋建瑞, 趙秋東, 趙雪, 郭獻(xiàn)靈 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)