專利名稱：一種甘草次酸溫敏凝膠及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開的一種凝膠及其制備方法，屬功能高分子材料技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種甘草次酸溫敏凝膠及其制備方法。
背景技術(shù)：
肝臟是人體最大的實(shí)體器官，對(duì)維持生命和內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定起著舉足輕重的作用。 然而，肝癌、急性肝衰竭等疾病嚴(yán)重威脅著人類的健康。我國(guó)更是世界上肝病的高發(fā)區(qū)，每年因肝病死亡的人數(shù)超過10萬(wàn)，發(fā)病率占全球的50%以上。因此，肝臟疾病的治療成為目前醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域的重中之重。在肝病治療過程中，肝移植是目前最有效、最徹底的治療手段，但供肝來源短缺、 異體免疫排斥等制約了其發(fā)展；人工肝的研究和發(fā)展為肝病治療提供了另外一種方法，但它只能暫時(shí)緩解癥狀或者短期延續(xù)病人的生命；組織工程學(xué)概念的提出，為解決這些難題提供了寶貴的理論依據(jù)。在組織工程學(xué)四要素中，生物材料占據(jù)最重要的地位。工程化組織常將種子細(xì)胞種植在能夠提供力學(xué)和化學(xué)信號(hào)的生物活性降解支架上，引導(dǎo)細(xì)胞分化與組裝成三維組織。高聚物水凝膠內(nèi)部網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中充斥大量水分，具備流體的性質(zhì)，與充盈有大量水性液體的機(jī)體組織非常相似，柔軟、潤(rùn)濕的表面以及與組織的親合性減少了材料對(duì)周圍組織的刺激，因此，組織工程常采用水凝膠作為細(xì)胞釋放載體。在這些水凝膠中，一類具有環(huán)境刺激響應(yīng)性的水凝膠，由于具有獨(dú)特的性質(zhì)，如溫度響應(yīng)性、PH值響應(yīng)性、光響應(yīng)性、生物分子響應(yīng)性、電場(chǎng)響應(yīng)性等，在組織工程、藥物釋放、蛋白質(zhì)分離、酶的固定、信號(hào)傳感等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。聚異丙基丙烯酰胺(POTPAAm)溫度敏感性凝膠在組織工程學(xué)方面的研究尤其引人關(guān)注。其在水溶液中的臨界溶解溫度(LCST)為32°C，當(dāng)環(huán)境溫度低于32°C時(shí)，PNIPAAm 表現(xiàn)親水性，從環(huán)境吸水發(fā)生溶脹，分子鏈表現(xiàn)為伸展?fàn)顟B(tài)；當(dāng)環(huán)境溫度高于32°C時(shí)， PNIPAAm表現(xiàn)疏水性，分子鏈脫水，發(fā)生急劇收縮，呈收縮構(gòu)型。正是由于PNIPAAm凝膠的 LCST在人體正常體溫(37°C)附近，植入人體時(shí)，其體積會(huì)發(fā)生急劇變化，從而可以應(yīng)用在組織工程、器官重建、再生醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。細(xì)胞在細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)表面進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，互相之間結(jié)合，會(huì)形成細(xì)胞片層?；厥占?xì)胞片層所用的傳統(tǒng)方法是以蛋白酶使細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)降解，從而使培養(yǎng)細(xì)胞脫附，此時(shí)常損及細(xì)胞一細(xì)胞連接蛋白和細(xì)胞膜上表達(dá)的受體蛋白，并且得不到完整的細(xì)胞片層。 將PNIPAAm凝膠應(yīng)用于細(xì)胞培養(yǎng)，利用其溫度敏感性可以成功解決這一問題。在人的正常體溫(37°C )條件下，將細(xì)胞于PNIPAAm凝膠表面培養(yǎng)，待細(xì)胞片層形成后，降低環(huán)境溫度到32°C以下，PNIPAAm分子發(fā)生由疏水到親水的轉(zhuǎn)變，分子鏈由收縮狀態(tài)變?yōu)樯煺範(fàn)顟B(tài)，這樣使細(xì)胞片層從基質(zhì)表面自然脫落。因?yàn)闊o(wú)需使用蛋白酶，這使得對(duì)酶敏感的細(xì)胞如肝細(xì)胞和膠質(zhì)細(xì)胞能保持其分化的細(xì)胞功能，并得到完整的細(xì)胞片層。但由于PNIPAAm生物相容性差，細(xì)胞在其上成活率較低，大大限制了 POTPAAm的應(yīng)用。
肝細(xì)胞是一種吸附型細(xì)胞，與細(xì)菌或某些懸浮型細(xì)胞不同，肝細(xì)胞不適應(yīng)懸浮生長(zhǎng)，而需要粘附在一個(gè)載體的表面以保持其細(xì)胞活性和功能。細(xì)胞在載體表面的吸附是通過載體表面的配體與細(xì)胞表面的受體間的相互作用完成的，在不同的載體和配體表面，細(xì)胞會(huì)表現(xiàn)出不同的活性、形態(tài)和功能。甘草次酸存在于甘草的根、莖部，在傳統(tǒng)中藥處方中應(yīng)用極其廣泛。很多研究證實(shí)，肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞膜表面存在GA受體，這些結(jié)合位點(diǎn)具有高度特異性和飽和性，脂質(zhì)體經(jīng)甘草次酸修飾后具有良好的趨肝性和肝細(xì)胞靶向性，可在肝臟高度蓄積，廣泛應(yīng)用于肝臟疾病的治療和肝臟保護(hù)中。針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明將與肝細(xì)胞具有特異結(jié)合性的甘草次酸 (glycyrrhetinic acid, GA)引入PNIPAAm凝膠，增強(qiáng)支架材料的生物相容性和細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn)，為肝細(xì)胞的培養(yǎng)構(gòu)建一種新型微環(huán)境，同時(shí)利用PNIPAAm的溫度響應(yīng)性，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的無(wú)損傷脫附。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是設(shè)計(jì)一種新型高分子智能凝膠，該凝膠具有良好的溫度響應(yīng)性和肝細(xì)胞特異結(jié)合性。而且，通過改變溫度，凝膠可以發(fā)生親疏水性轉(zhuǎn)變，用于實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的無(wú)損傷脫附。本發(fā)明的技術(shù)方案包括甘草次酸溫敏凝膠的設(shè)計(jì)方案和其制備方法的技術(shù)方案。甘草次酸溫敏凝膠的制備方法包括(1)甘草次酸琥珀酰亞胺活性酯(GSE)的制備將甘草次酸(GA)溶于四氫呋喃(THF)中，冷卻至-10°C，加入1 3g DCC，攪拌 30min，加入SuOH，GA與SuOH的質(zhì)量比為3 5 1，溶液濃度為0. 1 0. 5g/mL，在-10°C 下繼續(xù)攪拌2 4h，然后在不高于20°C的室溫下攪拌15 20h，濾除二環(huán)己基脲(白色固體)，將所得溶液傾入體積為3倍的無(wú)水乙醚中，靜置過夜，得到白色沉淀，過濾，用無(wú)水乙醚洗滌，真空干燥，得白色粉末狀甘草次酸琥珀酰亞胺活性酯(GSE)。(2)甘草次酸胺類衍生物(GA-NH2)將GSE溶于N、N- 二甲基甲酰胺(DMF)中，溶液濃度為0. 05 0. lg/mL，用恒壓滴液漏斗緩慢滴加到乙二胺(EDA)中，GSE與EDA摩爾比為1 20 40mol，混合液在50°C 80°C下反應(yīng)20 30h后，減壓蒸餾至無(wú)餾分流出，將濃縮液滴加到蒸餾水中，有白色沉淀產(chǎn)生，過濾，用蒸餾水洗滌多次，以除去DMF和EDA，冷凍干燥，得白色粉末狀甘草次酸胺類衍生物(GA-NH2)。(3)乙烯基甘草次酸單體(AAc-GA)的合成將GA-NH2溶于DMF中，溶液濃度為0. 1 0. 5g/mL,加入AAc，GA-NH2與AAc質(zhì)量比為4 6 lg，氮?dú)獗Ｗo(hù)氛圍，再加入0.01 0.03g sulfo-NHS活化劑和0. 05 0. Ig EDC縮合劑，室溫下反應(yīng)20 30h，過濾，將反應(yīng)后的混合物中白色沉淀濾去，在攪拌下把濾液滴加到蒸餾水中，靜置過夜，出現(xiàn)白色沉淀，過濾，干燥，得到白色粉末狀乙烯基甘草次酸單體(AAc-GA)。(4)P(NIPAAm-co-AAc-GA)共聚凝膠的合成將單體NIPAAm 和 AAc-GA 溶于 DMF 中，AAc-GA 與(AAc-GA+NIPAAm)的質(zhì)量比為 0 0.5 lg，這個(gè)意思不明白，是否指AAc-GA與NIPAAm的質(zhì)量比例？請(qǐng)確認(rèn)，溶液濃度為0. 1 0. 4g/mL,室溫下攪拌，通氮?dú)釯Omin后加入0. 05 0. Ig MBAA交聯(lián)劑，待完全溶解后，再加入0. 02 0. (MgAIBN弓|發(fā)劑，繼續(xù)氮?dú)獗Ｗo(hù)IOmin,滴入50 100 μ 1 2 %的TEMED， 攪拌IOmin后撤掉氮?dú)獗Ｗo(hù)，并馬上將溶液倒入模具中，密封，50°C 80°C下反應(yīng)M 48h 生成P (NIPAAm-co-AAc-GA)凝膠。將凝膠切成圓片，在DMF中浸泡2d，然后在蒸餾水中浸泡 4d，每天換液，除去未反應(yīng)的單體。本發(fā)明設(shè)計(jì)的甘草次酸溫敏凝膠具有良好的綜合性能一方面由于甘草次酸具有與肝細(xì)胞表面去唾液酸糖蛋白受體(ASGPR)進(jìn)行特異性結(jié)合的功能，它的引入增強(qiáng)了肝細(xì)胞在材料表面的吸附力，從而促進(jìn)肝細(xì)胞在材料表面的增殖分化；另一方面，溫敏性材料 NIPAAm的引入，實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞脫附智能化，通過控制環(huán)境溫度，達(dá)到了細(xì)胞的自然脫附，可以得到完整的細(xì)胞片層，避免了傳統(tǒng)酶解法對(duì)細(xì)胞功能造成的損傷，同時(shí)由于可將得到的細(xì)胞片層直接植入主體，不必連同支架材料植入主體，從而避免了支架材料必須可生物降解以及主體對(duì)材料的免疫學(xué)等方面的限制。由于所述的良好綜合特性，本發(fā)明溫敏性甘草次酸基凝膠在肝組織工程支架材料、肝細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)材料等方面可以得到廣泛應(yīng)用。此外，所述制備方法工藝流程簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)條件溫和，不需要特殊設(shè)備，投資成本低， 具有良好的可操作性，且所用試劑均為常規(guī)試劑，反應(yīng)殘余物容易去除，便于工業(yè)化實(shí)施。
具體實(shí)施例方式以下給出本發(fā)明的具體實(shí)施例，但本發(fā)明不受實(shí)施例的限制。實(shí)例一(1)甘草次酸琥珀酰亞胺活性酯(GSE)的制備將2. 895g甘草次酸(GA)溶于30mL四氫呋喃(THF)中，冷卻至_10°C，加入1. 77g DCC，攪拌30min，加入0. 71g SuOH，在-10°C下繼續(xù)攪拌3h，然后在不高于20°C的室溫下攪拌18h，濾去二環(huán)己基脲(白色固體)，將所得溶液傾入體積為3倍的無(wú)水乙醚中，靜置過夜，得到白色沉淀，過濾，用無(wú)水乙醚洗滌，真空干燥，得白色粉末狀甘草次酸琥珀酰亞胺活性酯(GSE)。(2)甘草次酸胺類衍生物(GA-NH2)將1. 015g GSE溶于15mL DMF，用恒壓滴液漏斗緩慢滴加到3. 5mL乙二胺(EDA)中， 混合液在60°C下反應(yīng)24h后，減壓蒸餾至無(wú)餾分流出，將濃縮液滴加到蒸餾水中，有白色沉淀產(chǎn)生，過濾，用蒸餾水洗滌多次，以除去DMF和EDA，冷凍干燥，得白色粉末狀甘草次酸胺類衍生物(GA-NH2)。(3)甘草次酸大單體(AAc-GA)的合成將5g GA-NH2溶于20mL DMF中，加入ImL AAc,用氮?dú)獗Ｗo(hù)，再加入0. Olg sulfo-NHS活化劑和0. 07g EDC縮合劑，室溫下反應(yīng)Mh，過濾，將反應(yīng)后的混合物中白色沉淀脲濾去，在攪拌下把濾液滴加到蒸餾水中，靜置過夜，出現(xiàn)白色沉淀，過濾，干燥，得到白色粉末狀乙烯基甘草次酸單體(AAc-GA)。(4) P (NIPAAm-co-AAc-GA)共聚凝膠的合成將2. 0848g NIPAAm 和 0. 8935g AAc-GA 溶于 IOmL DMF,室溫下攪拌，通氮?dú)?IOmin 后加入0.0925g MBAA交聯(lián)劑，待完全溶解后，再加入0.03^g AIBN引發(fā)劑，繼續(xù)氮?dú)獗Ｗo(hù) lOmin，滴入64μ 1 2%的TEMED，攪拌IOmin后撤掉氮?dú)獗Ｗo(hù)，并馬上將溶液倒入模具中，密封，60°C下反應(yīng)48h，生成P (NIPAAm-co-AAc-GA)凝膠。將凝膠切成圓片，在DMF中浸泡2d， 然后在蒸餾水中浸泡4d，每天換液，除去未反應(yīng)的單體。實(shí)例二(1)甘草次酸琥珀酰亞胺活性酯(GSE)的制備將2. 895g甘草次酸(GA)溶于30mL四氫呋喃(THF)中，冷卻至_10°C，加入1. 77g DCC，攪拌30min，加入0. 965g SuOH，在-10°C下繼續(xù)攪拌2h，然后在不高于20°C的室溫下攪拌15h，濾去二環(huán)己基脲(白色固體)，將所得溶液傾入體積為3倍的無(wú)水乙醚中，靜置過夜，得到白色沉淀，過濾，用無(wú)水乙醚洗滌，真空干燥，得白色粉末狀甘草次酸琥珀酰亞胺活性酯(GSE)。(2)甘草次酸胺類衍生物(GA-NH2)將1. 015g GSE溶于15mLDMF，用恒壓滴液漏斗緩慢滴加到2. 3mL乙二胺(EDA)中， 混合液在80°C下反應(yīng)20h后，減壓蒸餾至無(wú)餾分流出，將濃縮液滴加到蒸餾水中，有白色沉淀產(chǎn)生，過濾，用蒸餾水洗滌多次，以除去DMF和EDA，冷凍干燥，得白色粉末狀甘草次酸胺類衍生物(GA-NH2)。(3)甘草次酸大單體(AAc-GA)的合成將3g GA-NH2溶于20mLDMF中，加入0. 5mLAAc,用氮?dú)獗Ｗo(hù)，再加入0. Olg sulfo-NHS活化劑和0. 05EDC縮合劑，室溫下反應(yīng)30h，過濾，將反應(yīng)后的混合物中白色沉淀濾去，在攪拌下把濾液滴加到蒸餾水中，靜置過夜，出現(xiàn)白色沉淀，過濾，干燥，得到白色粉末狀乙烯基甘草次酸單體(AAc-GA)。(4) P (NIPAAm-co-AAc-GA)共聚凝膠的合成將2. 2141g NIPAAm 和 0. 2460g AAc-GA 溶于 IOmL DMF,室溫下攪拌，通氮?dú)?IOmin 后加入0.0925g MBAA交聯(lián)劑，待完全溶解后，再加入0.03^g AIBN引發(fā)劑，繼續(xù)氮?dú)獗Ｗo(hù) lOmin，滴入64μ 1 2%的TEMED，攪拌IOmin后撤掉氮?dú)獗Ｗo(hù)，并馬上將溶液倒入模具中，密封，60°C下反應(yīng)48h，生成P (NIPAAm-co-AAc-GA)凝膠。將凝膠切成圓片，在DMF中浸泡2d， 然后在蒸餾水中浸泡4d，每天換液，除去未反應(yīng)的單體。實(shí)驗(yàn)三(1)甘草次酸琥珀酰亞胺活性酯(GSE)的制備將2. 895g甘草次酸(GA)溶于30mL四氫呋喃(THF)，冷卻至-10°C，加入1. 77g DCC，攪拌30min，加入0. 579g SuOH，在-10°C下繼續(xù)攪拌4h，然后在不高于20°C的室溫下攪拌20h，濾去二環(huán)己基脲(白色固體)，將所得溶液傾入體積為3倍的無(wú)水乙醚中，靜置過夜，得到白色沉淀，過濾，用無(wú)水乙醚洗滌，真空干燥，得白色粉末狀甘草次酸琥珀酰亞胺活性酯(GSE)。(2)甘草次酸胺類衍生物(GA-NH2)將1. 015g GSE溶于20mL DMF，用恒壓滴液漏斗緩慢滴加到4. 7mL乙二胺(EDA)中， 混合液在50°C下反應(yīng)30h后，減壓蒸餾至無(wú)餾分流出，將濃縮液滴加到蒸餾水中，有白色沉淀產(chǎn)生，過濾，用蒸餾水洗滌多次，以除去DMF和EDA，冷凍干燥，得白色粉末狀甘草次酸胺類衍生物(GA-NH2)。(3)甘草次酸大單體(AAc-GA)的合成將8g GA-NH2溶于20mL DMF中，加入2mL AAc，用氮?dú)獗Ｗo(hù)，再加入0. 03gsulfo-NHS活化劑和0. Ig EDC縮合劑，室溫下反應(yīng)20h，過濾，將反應(yīng)后的混合物中白色沉淀脲濾去，在攪拌下把濾液滴加到蒸餾水中，靜置過夜，出現(xiàn)白色沉淀，過濾，干燥，得到白色粉末狀乙烯基甘草次酸單體(AAc-GA)。(4)P(NIPAAm-co-AAc-GA)共聚凝膠的合成將1. 8868g NIPAAm 和 1. 8868g AAc-GA 溶于 IOmLDMF,室溫下攪拌，通氮?dú)?IOmin 后加入0.0925g MBAA交聯(lián)劑，待完全溶解后，再加入0.03^g AIBN引發(fā)劑，繼續(xù)氮?dú)獗Ｗo(hù) lOmin，滴入64μ 1 2%的TEMED，攪拌IOmin后撤掉氮?dú)獗Ｗo(hù)，并馬上將溶液倒入模具中，密封，60°C下反應(yīng)48h，生成P (NIPAAm-co-AAc-GA)凝膠。將凝膠切成圓片，在DMF中浸泡2d， 然后在蒸餾水中浸泡4d，每天換液，除去未反應(yīng)的單體。實(shí)例四(1)甘草次酸琥珀酰亞胺活性酯(GSE)的制備將5. 79甘草次酸(GA)溶于30mL四氫呋喃(THF)，冷卻至_10°C，加入3gDCC，攪拌 30min，加入1. 42g SuOH，在-10°C下繼續(xù)攪拌3h，然后在不高于20°C的室溫下攪拌18h，濾去二環(huán)己基脲(白色固體)，將所得溶液傾入體積為3倍的無(wú)水乙醚中，靜置過夜，得到白色沉淀，過濾，用無(wú)水乙醚洗滌，真空干燥，得白色粉末狀甘草次酸琥珀酰亞胺活性酯(GSE)。(2)甘草次酸胺類衍生物(GA-NH2)將2. 03g GSE溶于20mL DMF,用恒壓滴液漏斗緩慢滴加到7mL乙二胺(EDA)中，混合液在50°C下反應(yīng)30h后，減壓蒸餾至無(wú)餾分流出，將濃縮液滴加到蒸餾水中，有白色沉淀產(chǎn)生，過濾，用蒸餾水洗滌多次，以除去DMF和EDA，冷凍干燥，得白色粉末狀甘草次酸胺類衍生物(GA-NH2)。(3)甘草次酸大單體(AAc-GA)的合成將5g GA-NH2溶于 20mLDMF 中，加入 ImL AAc，用氮?dú)獗Ｗo(hù)，再加入0. 03g sulfo-NHS 活化劑和0. Ig EDC縮合劑，室溫下反應(yīng)Mh，過濾，將反應(yīng)后的混合物中白色沉淀濾去，在攪拌下把濾液滴加到蒸餾水中，靜置過夜，出現(xiàn)白色沉淀，過濾，干燥，得到白色粉末狀乙烯基甘草次酸單體(AAc-GA)。(4) P (NIPAAm-co-AAc-GA)共聚凝膠的合成將2. 2141g NIPAAm 和 0. 2460g AAc-GA 溶于 IOmL DMF,室溫下攪拌，通氮?dú)?IOmin 后加入0.05g MBAA交聯(lián)劑，待完全溶解后，再加入0.02g AIBN引發(fā)劑，繼續(xù)氮?dú)獗Ｗo(hù) lOmin，滴入50μ 1 2%的TEMED，攪拌IOmin后撤掉氮?dú)獗Ｗo(hù)，并馬上將溶液倒入模具中，密封，50°C下反應(yīng)48h，生成P (NIPAAm-co-AAc-GA)凝膠。將凝膠切成圓片，在DMF中浸泡2d， 然后在蒸餾水中浸泡4d，每天換液，除去未反應(yīng)的單體。實(shí)例五(1)甘草次酸琥珀酰亞胺活性酯(GSE)的制備將5. 79g甘草次酸(GA)溶于30mL四氫呋喃(THF)，冷卻至-10°C，加入3g DCC, 攪拌30min，加入1. 16g SuOH，在-10°C下繼續(xù)攪拌4h，然后在不高于20°C的室溫下攪拌 20h，濾去二環(huán)己基脲(白色固體)，將所得溶液傾入體積為3倍的無(wú)水乙醚中，靜置過夜，得到白色沉淀，過濾，用無(wú)水乙醚洗滌，真空干燥，得白色粉末狀甘草次酸琥珀酰亞胺活性酯 (GSE)。(2)甘草次酸胺類衍生物(GA-NH2)
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將2. 03g GSE溶于20mL DMF,用恒壓滴液漏斗緩慢滴加到7mL乙二胺(EDA)中，混合液在80°C下反應(yīng)20h后，減壓蒸餾至無(wú)餾分流出，將濃縮液滴加到蒸餾水中，有白色沉淀產(chǎn)生，過濾，用蒸餾水洗滌多次，以除去DMF和EDA，冷凍干燥，得白色粉末狀甘草次酸胺類衍生物(GA-NH2)。(3)甘草次酸大單體(AAc-GA)的合成將5gGA-NH2溶于20mLDMF中，加入 ImL AAc，用氮?dú)獗Ｗo(hù)，再加入0. Olg suIfo-NHS 活化劑和0. 07g EDC縮合劑，室溫下反應(yīng)20h，過濾，將反應(yīng)后的混合物中白色沉淀脲濾去， 在攪拌下把濾液滴加到蒸餾水中，靜置過夜，出現(xiàn)白色沉淀，過濾，干燥，得到白色粉末狀乙烯基甘草次酸單體(AAc-GA)。(4)P(NIPAAm-co-AAc-GA)共聚凝膠的合成將2. 0848g NIPAAm 和 0. 8935g AAc-GA 溶于 IOmL DMF,室溫下攪拌，通氮?dú)?IOmin 后加入0.05g MBAA交聯(lián)劑，待完全溶解后，再加入0.02g AIBN引發(fā)劑，繼續(xù)氮?dú)獗Ｗo(hù) lOmin，滴入50μ 1 2%的TEMED，攪拌IOmin后撤掉氮?dú)獗Ｗo(hù)，并馬上將溶液倒入模具中，密封，50°C下反應(yīng)48h，生成P (NIPAAm-co-AAc-GA)凝膠。將凝膠切成圓片，在DMF中浸泡2d， 然后在蒸餾水中浸泡4d，每天換液，除去未反應(yīng)的單體。
權(quán)利要求
1.一種甘草次酸溫敏凝膠制備方法，包括如下步驟(1) GSE制備；⑵GA-NH2合成；(3)單體AAc-GA合成；(4)P(NIPAAm-co-AAc-GA)共聚凝膠的合成將單體NIPAAm和AAc-GA溶于DMF中，AAc-GA與(AAc-GA+NIPAAm)的質(zhì)量比為0 0. 5 Ig,溶液濃度為0. 1 0. 4g/mL,攪拌，通氮?dú)釯Omin后加入0. 05 0. Ig MBAA交聯(lián)劑，再加入0. 02 0. 04g AIBN引發(fā)劑，氮?dú)獗Ｗo(hù)lOmin，滴入50 100 μ 1 2%的TEMED， 攪拌IOmin后撤掉氮?dú)獗Ｗo(hù)，溶液倒入模具中，密封，50°C 80°C下反應(yīng)M 48h生成 P(NIPAAm-C0-AAC-GA)凝膠。將凝膠切成圓片，在DMF中浸泡2d，然后在蒸餾水中浸泡4d， 每天換液，除去未反應(yīng)的單體。
2.一種如權(quán)1所述甘草次酸溫敏凝膠制備方法，其特征在于所述GSE制備方法如下 GA溶于THF中，冷卻至-10°C，加入DCC，攪拌，加入SuOH，GA與SuOH的質(zhì)量比為3 5 1， 在-10°C下攪拌2 4h，在不高于20°C下攪拌15 20h，濾除二環(huán)己基脲，所得溶液傾入體積為3倍的無(wú)水乙醚中，靜置過夜，得到白色沉淀，過濾，用無(wú)水乙醚洗滌，真空干燥，得白色粉末狀GSE。
3.—種如權(quán)1所述甘草次酸溫敏凝膠制備方法，其特征在于所述GA-NH2合成方法如下=GSE溶于DMF中，溶液濃度為0. 05 0. lg/mL,滴加到EDA中，GSE與EDA摩爾比為 1 20 40mol，混合液在50°C 80°C下反應(yīng)20 30h后，減壓蒸餾至無(wú)餾分流出，濃縮液滴加到蒸餾水中，有白色沉淀產(chǎn)生，過濾，用蒸餾水洗滌多次，冷凍干燥，得白色粉末狀 GA-NH20
4.一種如權(quán)1所述甘草次酸溫敏凝膠制備方法，其特征在于所述AAc-GA合成方法如下=GA-NH2溶于DMF中，溶液濃度為0. 1 0. 5g/mL,加入AAc，GA-NH2與AAc質(zhì)量比為4 6 lg，氮?dú)獗Ｗo(hù)氛圍，再加入0.01 0.03g sulfo-NHS活化劑和0. 05 0. Ig EDC縮合劑，室溫下反應(yīng)20 30h，過濾，在攪拌下把濾液滴加到蒸餾水中，靜置過夜，過濾，干燥，得到白色粉末狀單體AAc-GA。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種甘草次酸溫敏凝膠及其制備方法，屬于功能高分子材料技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明通過將與肝細(xì)胞具有特異結(jié)合性的甘草次酸(GA)引入PNIPAAm凝膠，改善支架材料的生物相容性。設(shè)計(jì)制備的新型凝膠不僅具有良好的溫度響應(yīng)性和肝細(xì)胞特異結(jié)合性，而且，通過改變溫度，凝膠可以發(fā)生親疏水性轉(zhuǎn)變，實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞脫附智能化，避免了傳統(tǒng)酶解法對(duì)細(xì)胞功能造成的損傷。所述制備方法工藝流程簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)條件溫和，具有良好的可操作性，且便于推廣實(shí)施。
文檔編號(hào)A61L27/52GK102552982SQ20101061253
公開日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2010年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月29日
發(fā)明者楊寧, 聶萍萍, 董友玉, 賀曉凌, 陳莉 申請(qǐng)人:天津工業(yè)大學(xué)