專利名稱：脂質(zhì)代謝改善劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
我們發(fā)明了具有出色的脂質(zhì)代謝改善能力、苦味小、穩(wěn)定性優(yōu)異并且安全的試劑。 該試劑能夠抑制人類及其它哺乳動(dòng)物脂肪細(xì)胞攝取脂質(zhì)。本申請(qǐng)還將描述包含該試劑的食品、飲品、營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑和飼料。
背景技術(shù)：
近年來，由飲食習(xí)慣改變、長(zhǎng)期缺乏鍛煉和過度緊張引起的生活方式疾病如肥胖癥、高血壓、以及高脂血癥和糖尿病相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)增加。當(dāng)此類生活方式相關(guān)的疾病發(fā)展時(shí)， 它們可導(dǎo)致更嚴(yán)重的疾病如動(dòng)脈硬化和心肌梗塞。生活方式疾病中，飲食習(xí)慣的大部分改變可歸于從日本飲食到西方飲食的轉(zhuǎn)變，與傳統(tǒng)的日本飲食相比，西方飲食主要由肉組成并具有更高的卡路里。主要有兩種預(yù)防由高卡路里飲食引起的生活方式相關(guān)疾病的方法。 第一種方法涉及降低血液中的甘油三酯和低密度脂蛋白膽固醇的水平，即改善脂質(zhì)代謝。 第二種方法涉及抑制脂肪累積，即，預(yù)防肥胖癥。雖然兩種方法被認(rèn)為是一樣的，但其背后的實(shí)際機(jī)理卻不同。存在改善脂質(zhì)代謝、但不抑制體重增加的試劑(參見專利文獻(xiàn)1)以及抑制體重增加但與脂質(zhì)代謝無關(guān)的試劑(參見專利文獻(xiàn)幻。從健康和美容方面，對(duì)于預(yù)防和治療肥胖癥，抑制脂肪累積的后一種方法已受到了關(guān)注。嘗試的治療方法包括藥物和運(yùn)動(dòng)療法以及限制飲食。雖然藥物療法被認(rèn)為是有效的，但還需要考慮其副作用。運(yùn)動(dòng)療法和限制飲食在長(zhǎng)期執(zhí)行方面伴隨著時(shí)間和精神上的困難，并且成功率低。另外，不能忽視營(yíng)養(yǎng)缺乏和由過度限制飲食引起的厭食癥的風(fēng)險(xiǎn)。針對(duì)此背景，存在對(duì)能夠基于日常攝食并具有改善脂質(zhì)代謝能力的簡(jiǎn)單然而安全的試劑或飲食試劑的需求。作為改善脂質(zhì)代謝的機(jī)理，可以考慮抑制血清膽固醇和甘油三酯累積。所有物質(zhì)中，已知來自大豆蛋白的大豆肽抑制這些指標(biāo)的累積(參見非專利文獻(xiàn)1)。此外，已披露了來自乳清蛋白的水解物具有脂質(zhì)代謝改善能力(參見專利文獻(xiàn)3)。來自乳蛋白質(zhì)的水解物用于各種產(chǎn)品以預(yù)防來自乳和乳制品的食物過敏。由牛乳得到的乳清蛋白不同于母乳的乳清蛋白，并被認(rèn)為是變應(yīng)原。為了應(yīng)對(duì)該問題，已披露了乳清蛋白的酶水解，其制備方法(參見專利文獻(xiàn)4和幻以及在特定條件下通過加熱和由耐熱水解酶的酶水解來變性乳清蛋白以得到乳清蛋白水解物的方法(參見專利文獻(xiàn)6)。引文列表
專利文獻(xiàn)
專利文獻(xiàn)1JP2002--226394A
專利文獻(xiàn)2JP 2007'-308469A
專利文獻(xiàn)3JP H05--176713A
專利文獻(xiàn)4JP H02--2319A
專利文獻(xiàn)5JP H02--138991A
專利文獻(xiàn)6JP H04--112753A
非專利文獻(xiàn)
非專利文獻(xiàn) 1 :Cho SJ 等人· Cholesterollowering mechanism of soybean protein hydrolysate. J Agric Food Chem. 2007 Dec 26 ；55 (26) : 10599—604。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明要解決的問題來自乳的乳清蛋白水解物是有利的，這是因?yàn)槠渑c來自大豆蛋白的大豆肽相比具有更高的支鏈氨基酸含量(專利文獻(xiàn)幻，來自乳的乳清蛋白水解物能夠生產(chǎn)更好的脂質(zhì)代謝改善劑。然而，典型的乳清蛋白水解物溶液是混濁的，當(dāng)作為實(shí)際產(chǎn)品使用時(shí)具有局限性， 并且不能作為需要外觀透明的產(chǎn)品使用。此外，肽具有風(fēng)味苦的特性，制約了其在口服食品和飼料中的使用。雖然已報(bào)道乳清蛋白水解物降低變態(tài)反應(yīng)(專利文獻(xiàn)6)，但還沒有報(bào)道其改善脂質(zhì)代謝。因此，本發(fā)明的目的是提供脂質(zhì)代謝改善劑或包含此類試劑并能夠作為正常飲食的一部分而攝取的食品、飲品、營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑或飼料。此外，并不限制其在改善脂質(zhì)代謝和預(yù)防或治療代謝綜合癥中的應(yīng)用，這是因?yàn)槠浞浅０踩?，并且水溶液高度透明和風(fēng)味中極小的苦味。用于解決問題的方案本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案如下所示(1) 一種包含乳清蛋白水解物作為活性成分的脂質(zhì)代謝改善劑，其具有以下特征(i) IOkDa以下的分子量分布，在200Da和3kDa之間具有主峰。(i i) 2至8的APL (平均肽鏈長(zhǎng)度)。(iii) 20%以下的游離氨基酸含量。(iv)抗原性為β -乳球蛋白抗原性的1/10，000以下。(2)根據(jù)上述項(xiàng)(1)所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其特征在于乳清蛋白水解物可通過以下獲得在PH 6至10和50°C至70°C下變性乳清蛋白，并由耐熱水解酶來酶水解，隨后進(jìn)一步加熱以失活所述酶。(3)根據(jù)上述項(xiàng)(1)所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其特征在于乳清蛋白水解物可通過以下獲得在PH 6至10和20°C至55°C下酶水解乳清蛋白，隨后在pH 6至10和50°C至 70°C下加熱以用耐熱水解酶來酶水解未水解的乳清蛋白，同時(shí)通過加熱變性，以及進(jìn)一步加熱以失活所述酶。(4) 一種食品和飲品，其包含根據(jù)上述項(xiàng)(1)至( 中任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)代謝改善劑。(5) 一種營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑，其包含根據(jù)上述項(xiàng)(1)至( 中任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)代謝改善劑。(6) 一種飼料，其包含上述項(xiàng)(1)至(3)中任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)代謝改善劑。本發(fā)明的其它優(yōu)選實(shí)施方案如下所示(A) 一種改善脂質(zhì)代謝的方法，其包括施用具有以下特征的乳清蛋白水解物
(i) IOkDa以下的分子量分布，在200Da和3kDa之間具有主峰。(ii) 2至8的APL (平均肽鏈長(zhǎng)度)。(iii) 20%以下的游離氨基酸含量。(iv)抗原性為β -乳球蛋白抗原性的1/10，000以下。(B)根據(jù)上述項(xiàng)(A)所述的方法，其特征在于乳清蛋白水解物可通過以下獲得在 PH 6至10和50°C至70°C下變性乳清蛋白，并由耐熱水解酶酶水解，隨后進(jìn)一步加熱以失活所述酶。(C)根據(jù)上述項(xiàng)(A)所述的方法，其特征在于乳清蛋白水解物可通過以下獲得在 PH 6至10和20°C至55°C下酶水解乳清蛋白，隨后在pH 6至10和50°C至70°C下加熱以用耐熱水解酶來酶水解未水解的乳清蛋白，同時(shí)通過加熱變性，以及進(jìn)一步加熱以失活所述酶。(D) 一種抑制血清中甘油三酯、膽固醇或磷脂累積的方法，其特征在于施用具有以下特征的乳清蛋白水解物(i) IOkDa以下的分子量分布，在200Da和3kDa之間具有主峰。(i i) 2至8的APL (平均肽鏈長(zhǎng)度)。(iii) 20%以下的游離氨基酸含量。(iv)抗原性為β -乳球蛋白抗原性的1/10，000以下。(E)根據(jù)上述項(xiàng)⑶所述的方法，其特征在于乳清蛋白水解物可通過以下獲得在 PH 6至10和50°C至70°C下變性乳清蛋白，并由耐熱水解酶酶水解，隨后進(jìn)一步加熱以失活所述酶。(F)根據(jù)上述項(xiàng)⑶所述的方法，其特征在于乳清蛋白水解物可通過以下獲得在 PH 6至10和20°C至55°C下酶水解乳清蛋白，隨后在pH 6至10和50°C至70°C下加熱以用耐熱水解酶來酶水解未水解的乳清蛋白，同時(shí)通過加熱變性，以及進(jìn)一步加熱以失活所述酶。(G) 一種預(yù)防和/或治療高脂血癥的方法，其特征在于施用具有以下特征的乳清蛋白水解物(i) IOkDa以下的分子量分布，在200Da和3kDa之間具有主峰。(ii) 2至8的APL (平均肽鏈長(zhǎng)度)。(iii) 20%以下的游離氨基酸含量。(iv)抗原性為β -乳球蛋白抗原性的1/10，000以下。(H)根據(jù)上述項(xiàng)(G)所述的方法，其特征在于乳清蛋白水解物可通過以下獲得在 PH 6至10和50°C至70°C下變性乳清蛋白，并由耐熱水解酶酶水解，隨后進(jìn)一步加熱以失活所述酶。(I)根據(jù)上述項(xiàng)(G)所述的方法，其特征在于乳清蛋白水解物可通過以下獲得在 PH 6至10和20°C至55°C下酶水解乳清蛋白，隨后在pH 6至10和50°C至70°C下加熱以用耐熱水解酶來酶水解未水解的乳清蛋白，同時(shí)通過加熱變性，以及進(jìn)一步加熱以失活所述酶。(J) 一種預(yù)防和/或治療肥胖癥的方法，其特征在于施用具有以下特征的乳清蛋白水解物
(i) IOkDa以下的分子量分布，在200Da和3kDa之間具有主峰。(ii) 2至8的APL (平均肽鏈長(zhǎng)度)。(iii) 20%以下的游離氨基酸含量。(iv)抗原性為β -乳球蛋白抗原性的1/10，000以下。(K)根據(jù)上述項(xiàng)(J)所述的方法，其特征在于乳清蛋白水解物可通過以下獲得在 PH 6至10和50°C至70°C下變性乳清蛋白，并由耐熱水解酶酶水解，隨后進(jìn)一步加熱以失活所述酶。(L)根據(jù)上述項(xiàng)(J)所述的方法，其特征在于乳清蛋白水解物可通過以下獲得在 PH 6至10和20°C至55°C下酶水解乳清蛋白，隨后在pH 6至10和50°C至70°C下加熱以用耐熱水解酶來酶水解未水解的乳清蛋白，同時(shí)通過加熱變性，以及進(jìn)一步加熱以失活所述酶。發(fā)明的效果該脂質(zhì)代謝改善劑對(duì)血清中的甘油三酯和總膽固醇累積以及肝臟中的甘油三酯累積具有顯著的抑制效果。其在預(yù)防和治療疾病如高脂血癥和肥胖癥中是有效的。
具體實(shí)施例方式與脂質(zhì)代謝改善劑混合的乳清蛋白水解物可改善脂質(zhì)代謝。所述水解物可通過以下獲得在50°C至70°C和pH 6至10下變性乳清蛋白，并由耐熱水解酶酶水解，隨后進(jìn)一步加熱以失活所述酶。在進(jìn)行上述酶水解之前，如果所述乳清蛋白在PH 6至10和20至55°C 下由蛋白水解酶水解，并且未冷卻，則產(chǎn)率相當(dāng)?shù)馗摺４送?，通過使用超濾和/或微濾膜濃縮以該方式制備的乳清蛋白水解物，可以達(dá)到更強(qiáng)的脂質(zhì)代謝改善效果。另外，所述膜將降低苦味并改善乳清蛋白水解物的透明性。超濾膜的截留分子量應(yīng)當(dāng)在1至20kDa，或優(yōu)選2至IOkDa范圍內(nèi)。微濾膜的截留分子量應(yīng)當(dāng)在100至500Da，或優(yōu)選150至300Da范圍內(nèi)。為了不限制該乳清蛋白水解物的用途，高度的透明性是期望的。透明性試驗(yàn)(下述)應(yīng)當(dāng)使吸光度小于0. 014，優(yōu)選小于0. 010或小于0. 005。本發(fā)明中的乳清蛋白是源自不同哺乳動(dòng)物，如母牛、水牛、山羊或人的乳的乳清的凝集物、粉末或純化的蛋白質(zhì)。另外，在水溶液條件下進(jìn)行乳清蛋白酶反應(yīng)。乳清蛋白水溶液的pH通常為6至10 ；因此，當(dāng)發(fā)生酶反應(yīng)時(shí)無需調(diào)節(jié)pH。然而，在需要調(diào)節(jié)的情況中，可以使用酸性溶液如鹽酸、檸檬酸或乳酸，或者堿性溶液如氫氧化鈉、 氫氧化鈣或磷酸鈉來相應(yīng)地調(diào)節(jié)pH(pH 6至10)。雖然本發(fā)明描述了在50至70°C下加熱，但優(yōu)選在加熱乳清蛋白溶液之前添加耐熱水解酶及進(jìn)行酶水解，從而得到更高的產(chǎn)率。雖然對(duì)于蛋白酶通常使用的溫度為<40°C，但對(duì)于本方法中使用的耐熱水解酶最佳的溫度為> 45°C。只要它是在該溫度下工作最佳的已知耐熱水解酶，就可以沒有限定的使用任何酶。耐熱水解酶的一些實(shí)例是木瓜蛋白酶、蛋白酶S (商標(biāo)名稱)、pr0leather (商標(biāo)名稱)、thermoase (商標(biāo)名稱)、alcalase (商標(biāo)名稱)禾口 protin—A (商標(biāo)名稱)。在該方法中，在80°C下加熱30分鐘后具有約10%以上殘余活性的耐熱水解酶是期望的。另外， 使用多種酶是更有效的。優(yōu)選的反應(yīng)時(shí)間為30分鐘至10小時(shí)。
最后，需要加熱反應(yīng)溶液以失活水解酶。用于該方法的酶可通過在100°C以上加熱反應(yīng)溶液10秒以上來失活。離心如上所述收集的反應(yīng)溶液，并收集上清液。干燥上清液以得到粉末化的乳清蛋白水解物產(chǎn)品。離心過程中形成的沉淀物與上清液相比，對(duì)降低變態(tài)反應(yīng)具有較小的作用，并且應(yīng)當(dāng)將其除去。然而，可以干燥反應(yīng)溶液并原樣使用。可通過該方法得到的乳清蛋白水解物通過抑制ELISA法[Japanese Journal of Pediatric Allergy 1,36(1987)]來定量。證實(shí)其抗原性與β-乳球蛋白相比為1/10,000 以下并為乳清蛋白的< 1/10，000，且其極其安全。另外，由于乳清蛋白水解物溶液是透明的，并且其苦味得分大約為2，對(duì)于該產(chǎn)品的不存在局限性。通過以下方法評(píng)價(jià)透明性和苦味。透明性評(píng)價(jià)方法制備1 %的乳清蛋白水解物并在650nm下測(cè)量吸光度?？辔对u(píng)價(jià)方法制備10%的乳清蛋白溶液，并添加苦味物鹽酸奎寧以評(píng)價(jià)苦味。如表1所示，如果苦味得分為< 2，則可將其用于食品和飲品。[表 1]
權(quán)利要求
1.一種脂質(zhì)代謝改善劑，其包含具有以下特征的乳清蛋白水解物作為活性成分 (1) IOkDa以下的分子量分布，在200Da和3kDa之間具有主峰0)2至8的APL (平均肽鏈長(zhǎng)度)(3)20%以下的游離氨基酸含量(4)抗原性為乳球蛋白抗原性的1/10,000以下。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其特征在于所述乳清蛋白水解物可通過以下得到在PH 6至10和50°C至70°C下變性乳清蛋白，并由耐熱水解酶酶水解，隨后進(jìn)一步加熱以失活所述酶。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)代謝改善劑，其特征在于所述乳清蛋白水解物可通過以下獲得在PH 6至10和20°C至55°C下酶水解乳清蛋白，隨后在pH 6至10和50°C至70°C 下加熱以用耐熱水解酶來酶水解未水解的乳清蛋白，同時(shí)通過加熱變性，以及進(jìn)一步加熱以失活所述酶。
4.一種食品和飲品，其包含根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)代謝改善劑。
5.一種營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑，其包含根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)代謝改善劑。
6.一種飼料，其包含根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)代謝改善劑。
全文摘要
公開一種脂質(zhì)代謝改善劑，其具有優(yōu)異的脂質(zhì)代謝改善效果，并對(duì)于預(yù)防和治療高脂血癥、肥胖癥及其它疾病有效。還公開包含該脂質(zhì)代謝改善劑的脂質(zhì)代謝改善產(chǎn)品如食品、飲品、營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑和飼料。脂質(zhì)代謝改善劑的特征在于包含乳清蛋白水解物作為活性成分，其中所述乳清蛋白水解物的特征在于具有10kDa以下的分子量分布，其中主峰出現(xiàn)在200Da和3kDa的范圍內(nèi)，還具有2至8的APL(平均肽鏈長(zhǎng)度)、20％以下的游離氨基酸含量以及抗原性為β-乳球蛋白抗原性的1/10,000以下。
文檔編號(hào)A61K38/00GK102395376SQ20108001681
公開日2012年3月28日 申請(qǐng)日期2010年4月8日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月16日
發(fā)明者上辻大輔, 日暮聰志, 福田亙博, 窄野昌信, 芹澤篤 申請(qǐng)人:雪印惠乳業(yè)株式會(huì)社