專利名稱：用于增加生存年限和健康年限的組合物和方法
用于增加生存年限和健康年限的組合物和方法相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用本申請(qǐng)要求于2009年6月12日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)第61/186，709號(hào)和于2009 年6月17日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)第61/187，905號(hào)的優(yōu)先權(quán)，通過引用將上述申請(qǐng)的全部內(nèi)容并入本文。
背景技術(shù)：
提供以下描述是為了有助于閱讀者的理解，并不是承認(rèn)提供的信息或引用的文獻(xiàn)是本發(fā)明的現(xiàn)有技術(shù)。長壽一直是最熱門的科學(xué)領(lǐng)域之一，但在研究領(lǐng)域中仍然對(duì)其知之甚少。嚴(yán)格和科學(xué)地講，人們不知道如何衡量衰老。衰老并不僅是年齡的問題。某些人在晚年時(shí)仍活躍并且敏捷，而其他人在中年時(shí)就受到衰老疾病的折磨(心臟病、高血壓、中風(fēng)、糖尿病、癌癥、 阿爾茨海默病和癡呆等)。公認(rèn)的是幾乎世界各地的人群都在快速老齡化。65歲及以上的人口比例正在從 2005年的7%增加至2050年的16%。老年人口數(shù)已經(jīng)是1950年時(shí)的3倍，并且到2050年將是現(xiàn)在的3倍，即15億人會(huì)超過65歲。然而有關(guān)尋找對(duì)生存年限/健康年限具有顯性正性作用的單基因突變的衰老研究還未獲得成功。衰老是全身性的退行性變，并且可能不是由于單個(gè)基因或系統(tǒng)的改變。Leonard Hayflick首次觀察到細(xì)胞分裂的有限性現(xiàn)象，現(xiàn)在被稱為Hayflick極限。在細(xì)胞分裂時(shí)，DNA的復(fù)制不能一直進(jìn)行到染色體的末端。端粒是位于染色體末端的重復(fù)性DNA區(qū)，用于保護(hù)染色體末端免于退化。沒有端粒，細(xì)胞在復(fù)制時(shí)會(huì)失去其染色體末端和其中含有的必要信息。端粒作為封閉染色體末端的可丟棄的緩沖區(qū)，在細(xì)胞分裂時(shí)被消耗，但能通過端粒酶補(bǔ)充。端粒酶能通過添加TTAGGG重復(fù)序列來補(bǔ)充染色體的3'末端 (Autexier C et al. 2006，Collins K et al. 2006)。因此通過暫時(shí)活化端粒酶或用基因療法來延長某些重要細(xì)胞中的端粒很久以來一直被認(rèn)為是延長生命的方法。利用線蟲類中的秀麗隱桿線蟲(Caenorhabditis elegans) 進(jìn)行的研究表明延長端粒和增長的生存時(shí)間之間存在關(guān)聯(lián)性。端粒較長的蠕蟲平均存活M 天，比正常蠕蟲長約 20% (Artandi SE et al. 2000)。發(fā)明概述本發(fā)明涉及柔毛水楊梅(Geum japonic·)有機(jī)提取物(OEGJ)，及其提高細(xì)胞培養(yǎng)體系中細(xì)胞壽命的作用。本發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，經(jīng)OEGJ處理的培養(yǎng)細(xì)胞以及經(jīng)OEGJ治療的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組織細(xì)胞中呈現(xiàn)出顯著增加的端粒酶活性。OEGJ在動(dòng)物模型中的研究進(jìn)一步證實(shí)了 OEGJ能延長生存年限，并上調(diào)諸如Atkl、Bcl2、VEGF和NF κ B的存活增強(qiáng)基因和端粒酶的活性。這些被OEGJ誘導(dǎo)上調(diào)的基因表達(dá)可能是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物存活和壽命提高的內(nèi)在機(jī)制。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及藥物組合物的應(yīng)用和提高壽命和生活質(zhì)量的方法。具體而言，本發(fā)明涉及用于在哺乳動(dòng)物個(gè)體中增強(qiáng)活力和刺激端粒酶活性的藥物組合物和方法，因此所述藥物組合物和方法可用于抗衰老以及顯著提高健康生存年限和壽命。
一方面，本公開提供了提高有需要的個(gè)體的壽命和生活質(zhì)量的方法，所述方法包括給予所述個(gè)體有效量的0EGJ。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述提取物的給藥能刺激端粒酶和一種或多種選自Aktl、Bcl2、EGF、VEGF和NF κ B的細(xì)胞存活因子的表達(dá)。在一個(gè)實(shí)施方案中， 與未給予所述提取物的個(gè)體相比，所述提取物的給藥提高生存年限或生活質(zhì)量。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述個(gè)體是人。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述有機(jī)提取物是乙醇提取物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述有機(jī)提取物是甲醇提取物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述提取物通過口服給藥。在一個(gè)實(shí)施方案中， 所述提取物通過皮下注射、肌內(nèi)注射或靜脈輸注進(jìn)行給藥。在一個(gè)實(shí)施方案中，所給予的提取物的量為0. 01mg/kg/天至10000mg/kg/天。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述有效量的提取物是包含所述提取物和合適的載體或賦形劑的藥物制劑的形式。另一方面，本公開提供用于提高個(gè)體的壽命和生活質(zhì)量的藥物組合物，其包含有效量的OEGJ和藥學(xué)可接受的載體。另一方面，本公開提供預(yù)防或治療有需要的個(gè)體中的糖尿病的方法，所述方法包括給予所述個(gè)體有效量的0EGJ。另一方面，本公開提供預(yù)防或治療有需要的個(gè)體中的眼部疾病或疾病狀態(tài)的方法，所述方法包括給予所述個(gè)體有效量的0EGJ。另一方面，本公開提供治療有需要的個(gè)體中的炎癥的方法，所述方法包括給予所述個(gè)體有效量的0EGJ。另一方面，本公開提供增強(qiáng)具有創(chuàng)傷的個(gè)體的創(chuàng)傷愈合的方法，所述方法包括給予所述個(gè)體有效量的0EGJ。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述創(chuàng)傷是褥瘡。附圖簡要描述

圖1顯示OEGJ提高秀麗隱桿線蟲的存活能力或預(yù)期壽命。野生型N2秀麗隱桿線蟲生長在用大腸桿菌(Escherichia coli)菌株0P50劃線的NGM瓊脂板上，在通風(fēng)培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。用0EGJ(150yg/ml)處理受試組中位于Ll期的N2蠕蟲，用等量溶劑處理對(duì)照組的蠕蟲。為了測(cè)試OEGJ處理的蠕蟲的存活能力，將培養(yǎng)溫度增加至27°C。Ct-7:27°C下保持7天的未處理對(duì)照組的N2蠕蟲，部分蠕蟲死亡，部分蠕蟲仍然存活，但未觀察到幼體蠕蟲。0EGJ-7 相同狀態(tài)下保持7天的OEGJ治療的蠕蟲，幾乎沒有蠕蟲死亡，并且有趣的是， 觀察到很多幼體蠕蟲。Ct-14 :27°C下孵育14天后，未處理對(duì)照組的所有N2蠕蟲都死亡。 0EGJ-14 在27°C下孵育14天后，盡管OEGJ處理的樣品中大部分成體蠕蟲死亡，但觀察到很多幼體蠕蟲仍然存活。圖2 =OEGJ處理對(duì)N2秀麗隱桿線蟲的生存時(shí)間/健康時(shí)間的影響。Ct 未處理的對(duì)照N2蠕蟲。Tr :0EGJ處理的蠕蟲。結(jié)果表明，幾乎在所有檢查點(diǎn)，OEGJ處理組中觀察到的活的蠕蟲都多于未處理組。到第38天為止，未處理組的所有蠕蟲都死亡。然而，OEGJ處理組中約5%的蠕蟲仍然存活。OEGJ處理組中剩余的蠕蟲在第42天死亡，比未處理的對(duì)照蠕蟲長約10%。圖3 =OEGJ處理對(duì)daf-2秀麗隱桿線蟲的生存時(shí)間/健康時(shí)間的影響。Ct 未處理的對(duì)照daf-2蠕蟲。Tr :0EGJ處理的蠕蟲。我們發(fā)現(xiàn)，幾乎在所有觀察點(diǎn)，OEGJ處理組中觀察到的活的蠕蟲都多于未處理組。在第56天，未處理的對(duì)照組中約5%的蠕蟲存活；然而， OEGJ處理組中仍然有約10%的蠕蟲存活。
圖4 =OEGJ處理對(duì)daf-16秀麗隱桿線蟲的生存時(shí)間/健康時(shí)間的影響。Ct 未處理的對(duì)照daf-16蠕蟲。Tr =OEGJ處理的daf-16蠕蟲。到第12天為止，未處理的對(duì)照組中約77%的蠕蟲死亡。相比之下，OEGJ處理組中約50%的蠕蟲在第12天時(shí)仍然存活。也就是說，未處理組中死亡的蠕蟲比OEGJ治療組多約27%，這表明OEGJ處理顯著增加健康時(shí)間。圖5 =OEGJ處理對(duì)daf-2秀麗隱桿線蟲的生存時(shí)間/健康時(shí)間的影響，該daf_2秀麗隱桿線蟲在20°C下同步化為Ll并在20°C下繼續(xù)培養(yǎng)。Ct 未處理的對(duì)照daf-2蠕蟲。 Tr =OEGJ處理的蠕蟲。OEGJ處理組中約58%的蠕蟲在第21天仍然存活。相比之下，到第 21天為止，未處理的對(duì)照組中約58%的蠕蟲已經(jīng)死亡。在所有檢查點(diǎn)，OEGJ處理組中存活的蠕蟲比未處理的對(duì)照蠕蟲多約5-15%，提示OEGJ處理能增加蠕蟲的健康時(shí)間和存活時(shí)間。圖6 =OEGJ處理誘導(dǎo)心臟中mTERT表達(dá)的上調(diào)。Ctr 來自未處理的對(duì)照小鼠心臟的mTERT信號(hào)。0EGJ-1 4代表來自O(shè)EGJ處理的小鼠心臟的mTERT信號(hào)。在所有4個(gè) OEGJ處理的心臟樣品中都觀察到mTERT的陽性信號(hào)，表現(xiàn)出的mTERT表達(dá)比未處理的對(duì)照樣品(Ctr)高約 24_8_13_27 倍。圖7 =OEGJ誘導(dǎo)SAMPlO小鼠腦中的新血管生成。a 在OEGJ治療小鼠的海馬區(qū)周圍觀察到顯著增多(15-25%)的血管(圓圈)；b 相比之下，在未治療的對(duì)照小鼠的海馬區(qū)周圍發(fā)現(xiàn)較少的血管(圓圈)；c:在OEGJ治療小鼠的額葉皮質(zhì)區(qū)中觀察到增多(15-25%) 的血管(圓圈)；d 在未治療的對(duì)照動(dòng)物的相同區(qū)域發(fā)現(xiàn)較少的血管(圓圈)。圖8 :0EGJ誘導(dǎo)SAMPlO小鼠腦中的神經(jīng)元再生。a 在未治療的對(duì)照小鼠的海馬區(qū)中幾乎未觀察到陽性Ki67信號(hào)；b 在OEGJ治療的動(dòng)物的海馬DG區(qū)的內(nèi)緣中發(fā)現(xiàn)具有顆粒細(xì)胞核形狀的一些暗棕色Ki67陽性信號(hào)(圓圈)，提示有神經(jīng)元再生；c 在未治療的對(duì)照小鼠的額葉皮質(zhì)區(qū)幾乎未發(fā)現(xiàn)Ki67陽性信號(hào)；d 在OEGJ治療的小鼠的額葉皮質(zhì)區(qū)鑒定出一些Ki67陽性的具有神經(jīng)元形狀的細(xì)胞(紅色圓圈)。發(fā)明詳細(xì)描述在各個(gè)方面，本發(fā)明提供用于增加壽命和預(yù)防或治療各種醫(yī)學(xué)疾病狀態(tài)的化合物、提取物和方法。本文提供的化合物可以配制為可用于公開的方法的藥物組合物和藥物。 還提供了所述化合物和提取物在制備藥物制劑和藥物中的用途。應(yīng)當(dāng)理解，為了提供對(duì)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性理解，下文以不同詳細(xì)程度描述了本發(fā)明的某些方面、模式、實(shí)施方案、變化和特征。以下術(shù)語在全文中按下文所述使用，除非上下文明確指明另外情況。本文中，試劑或藥物對(duì)個(gè)體的“給藥”包括將化合物引入或遞送至個(gè)體以行使化合物預(yù)期功能的任何途徑?？梢酝ㄟ^任何合適的途徑進(jìn)行給藥，包括口服、鼻內(nèi)、胃腸外(靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)或皮下)、直腸或局部給藥。給藥包括自給藥和由他人給藥。還應(yīng)當(dāng)理解，所描述的治療或預(yù)防醫(yī)學(xué)疾病狀態(tài)的各種模式意圖表示“實(shí)質(zhì)性的”，其不僅包括完全的治療或預(yù)防，還包括未達(dá)到完全的治療或預(yù)防，但實(shí)現(xiàn)了一些生物學(xué)或醫(yī)學(xué)相關(guān)的結(jié)果。本文所用的術(shù)語組合物的“有效量”或“藥學(xué)有效量”或“治療有效量”是足以實(shí)現(xiàn)所需治療和/或預(yù)防效果的量，例如，實(shí)現(xiàn)了所治療疾病相關(guān)的癥狀的預(yù)防或減少的量。給予個(gè)體的本發(fā)明組合物的量將取決于疾病的類型和嚴(yán)重程度以及個(gè)體的特征，例如一般健康狀況、年齡、性別、體重和對(duì)藥物的耐受性。其還取決于疾病的程度、嚴(yán)重性和類型。本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)這些因素以及其它因素能確定合適的劑量。本發(fā)明的組合物也可以與一種或多種其它治療化合物聯(lián)合給藥。在沒有特別指明的情況下，本發(fā)明所用的縮寫“0EGJ”表示下文所述的植物柔毛水楊梅的有機(jī)溶劑提取物。本文所用的術(shù)語“壽命”是指動(dòng)物的生存年限。因此，壽命是指動(dòng)物生存年限的年數(shù)。在一些實(shí)施方案中，當(dāng)術(shù)語“增加的壽命”涉及給予了本發(fā)明組合物的個(gè)體時(shí)，表示給予了所述組合物的未患病動(dòng)物的生存年限相對(duì)于未給予所述組合物的另一未患病動(dòng)物有所增加。在一些實(shí)施方案中，與未給予所述組合物的未患病動(dòng)物相比，動(dòng)物的壽命增加至少 6個(gè)月、至少1年、至少2年、至少3年、至少4年、至少5年或至少10年。在一些實(shí)施方案中，與未給予所述組合物的未患病動(dòng)物相比，動(dòng)物壽命增加至少1年，但不多于10年、不多于5年或不多于4年。本文所用的術(shù)語“治療(treating) ”或“治療(treatment) ”或“緩解”是指治療性處理和預(yù)防性(prophylactic)或預(yù)防性(preventative)措施，其目的是預(yù)防或延緩(減輕)所針對(duì)的病理疾病狀態(tài)或病癥。如果個(gè)體接受了本發(fā)明方法的治療劑后，該個(gè)體表現(xiàn)出可觀察到的和/或可測(cè)定的具體疾病或疾病狀態(tài)的一種或多種指征和癥狀的減少或缺失，則認(rèn)為該個(gè)體被成功“治療” 了病癥。本文所用的病癥或疾病狀態(tài)的“預(yù)防(prevention)”或“預(yù)防(preventing) ”是指在統(tǒng)計(jì)學(xué)樣品中，相對(duì)于未處理的對(duì)照樣品，化合物能減少處理的樣品中病癥或疾病狀態(tài)的發(fā)生，或者相對(duì)于未處理的對(duì)照樣品，化合物能延緩病癥或疾病狀態(tài)的一種或多種癥狀的發(fā)作或降低其嚴(yán)重程度。本文所用的術(shù)語“個(gè)體”是指哺乳動(dòng)物，例如人，但也可以是動(dòng)物，例如，家畜(例如，狗、貓等)，農(nóng)畜(例如，牛、羊、豬、馬等)和實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物(例如，猴、大鼠、小鼠、兔、豚鼠
寸J ο本發(fā)明的組合物本發(fā)明提供利用來自多種植物的提取物和化合物以及所述化合物的衍生物增加個(gè)體壽命的方法，所述植物包括柔毛水楊梅和仙鶴草(Xian he cao)(也稱為龍牙草 (Agrimonia pilosa Ledeb. ))0在一些實(shí)施方案中，所述化合物是柔毛水楊梅或仙鶴草的全植物、提取物，例如有機(jī)提取物。在具體實(shí)施方案中，所述化合物是柔毛水楊梅的甲醇/乙醇提取物或其活性部位。在一些實(shí)施方案中，所述化合物是柔毛水楊梅提取物的部分。本發(fā)明提供利用來自多種植物的試劑和/或提取物和化合物以及該化合物的衍生物來增加個(gè)體壽命的方法，所述植物包括柔毛水楊梅。在一些實(shí)施方案中，所述試劑是柔毛水楊梅的提取物，例如柔毛水楊梅的有機(jī)提取物。在具體實(shí)施方案中，所述試劑是柔毛水楊梅的甲醇/乙醇提取物或其活性部位。柔毛水楊梅有機(jī)提取物的制備提供了制備柔毛水楊梅有機(jī)提取物的方法。該方法包括以下步驟(a)用醇提取柔毛水楊梅植物，所述醇選自C1-C4醇。該步驟可以室溫下重復(fù)3-6次，通常5次。在進(jìn)行步驟(a)之前，可以將植物材料制成粉末或切成小塊。C1-C4醇包括甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇和叔丁醇。通常，添加的醇的重量是待提取的柔毛水楊梅重量的1-10倍。所述方法還可以包括以下步驟(b)將獲自步驟(a)的提取物干燥為干燥粉末；和 (c)用C6烷、KOAc和選自C1-C4醇的醇相繼提取獲自步驟(b)的粉末。C6烷包括具有6 個(gè)碳原子的環(huán)狀和非環(huán)狀烷，包括，例如，環(huán)己烷、正己烷和新己烷等。C1-C4醇包括甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇和叔丁醇。所用的有機(jī)溶劑的重量通常是待進(jìn)一步提取的粉末重量的1-10倍。上文所述的方法還可以包括過濾提取物來去除其中的任何不溶性粉末?？梢栽诟哂谑覝氐臏囟认?例如50°C )的減壓條件下完成干燥步驟。為了純化0EGJ，所述方法可以還包括以下步驟將粉末施加到色譜柱；并用含有漸增濃度的選自C1-C4醇的醇的水性溶液洗脫柱。例如，可以使用kphadex或反相柱。所用的醇可以是選自甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇和叔丁醇的任何一種。通過NMR分析，我們發(fā)現(xiàn)OEGJ通常主要含有單寧類和三萜類，所述單寧類包括 gemin A、B、C、D、E和F，所述三萜類包括2-羥基齊墩果酸、2-羥基熊果酸、2，19-二羥基-熊果酸、2- α ,19-α- 二羥基-3-氧代-12-烏索烯-28-酸、熊果酸、印imolic acid、山楂酸、 野鴨椿酸、委陵菜酸，委陵菜酸的28- β -D-葡糖苷。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的提取物、活性部位和化合物是利用水和/或有機(jī)溶劑從植物原材料提取得到的，包括以下過程1.將水和/或有機(jī)溶劑添加到植物材料，將整體進(jìn)行諸如浸泡/浸濾、超聲或微波的處理而進(jìn)行提取；2.在提取過程之前或之后，利用石油醚、己烷或氯仿類型的溶劑進(jìn)行脫脂；3.任選地，利用乙酸乙酯或乙醚類型的有機(jī)溶劑對(duì)回收的提取物進(jìn)行進(jìn)一步提??；4.任選地，將獲得的粗提取物濃縮，并如果需要將其凍干。一方面，考慮到允許獲得的富集，粗提取物可以接受色譜純化過程。在一個(gè)實(shí)施方案中，使用離心分配色譜(CPC)。該技術(shù)具體描述于Α。P。FOUCAULT, Edo, Centrifugal Partition Chromatography ( ^^Il^KfeiH ) Chromatographic Science Series, Marcel Dekker Inc0,1995,68 或W。D0 CONWAY,EcL,Countercurrent Chromatography apparatus theory 和 applications (逆流色譜裝置理論和應(yīng)用)，VCH Publishers Inc0,1990. CPC 是基于通過混合兩種或更多種溶劑或溶液而制備的兩種不混溶液相之間的溶質(zhì)分配。所述兩種相中的一種通過離心力保持靜止。溶劑、它們的比例和流速的選擇與CPC柱中靜止相的穩(wěn)定性和實(shí)際壓力密切相關(guān)。因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員能根據(jù)所需純化的提取物的性質(zhì)選擇最合適的溶劑。因此， 粗提取物和富集的部分能含有任何從OEGJ鑒定出的化合物，并且所述化合物作為主要成分。這些不同的提取物，即粗提取物或富集的提取物，也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。實(shí)施其它分離過程允許分離這些富集了一種或多種化合物的提取物。使用合適溶劑的按照適合于所選擇的分離的比例的混合物，可以對(duì)從粗提取物富集的部分或?qū)Υ痔崛∥镒陨磉M(jìn)行這些分離。用于增加生存年限或健康年限的方法和組合物本發(fā)明是基于下述發(fā)現(xiàn)0EGJ不僅能通過保護(hù)細(xì)胞免受缺血和應(yīng)激的影響來增強(qiáng)重要細(xì)胞(例如神經(jīng)元和心肌細(xì)胞)的存活能力，還能上調(diào)細(xì)胞存活因子和端粒酶的表達(dá)，所述細(xì)胞存活因子包括Aktl、BC12、EGF、VEGF和NFκB等。此外，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，OEGJ 能促進(jìn)重要缺血器官(例如心臟和腦部)中的新血管形成，并且能誘導(dǎo)受損心臟的心肌細(xì)胞和腦中的神經(jīng)元再生。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示0EGJ能有效地在一定程度上預(yù)防衰老，甚至逆轉(zhuǎn)衰老，并提高生存年限或生活質(zhì)量。通常，本發(fā)明涉及改善年齡相關(guān)的生理學(xué)病癥和延長哺乳動(dòng)物的生存年限以及改善老齡哺乳動(dòng)物的生活質(zhì)量的方法。一方面，本發(fā)明提供增加有需要的個(gè)體壽命和/或增強(qiáng)有需要的個(gè)體活力的方法，其包括給予所述個(gè)體有效量的本文所述的化合物、組合物、活性部位或提取物。在一些實(shí)施方案中，柔毛水楊梅的甲醇/乙醇提取物、其活性部位和分離的化合物能顯著增加被處理的細(xì)胞/組織中的端粒酶活性并顯著增加哺乳動(dòng)物個(gè)體的生存年限。本文所述的試劑能顯著增加新生哺乳動(dòng)物個(gè)體的活力和存活能力。接受處理的哺乳動(dòng)物個(gè)體更具活力并且表現(xiàn)明顯更為健康。與未處理的對(duì)照個(gè)體相比，接受處理的哺乳動(dòng)物個(gè)體的承受危及生命的應(yīng)激的能力也顯著增加。一方面，增加壽命和/或增強(qiáng)生活質(zhì)量的方法包括給予有需要的哺乳動(dòng)物來自多種植物的試劑、和活性部位和/或提取物和化合物以及所述化合物的衍生物，所述植物包括柔毛水楊梅和仙鶴草。另一方面，用于增加壽命和/或改善生活質(zhì)量的試劑是含有一種或多種賦形劑、 載體或填充劑的藥物組合物的一部分。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物組合物以單位劑量形式包裝。所述單位劑量形式能有效誘導(dǎo)增加個(gè)體的壽命和/或增強(qiáng)個(gè)體的活力和存活能力。在本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案中，進(jìn)行合適的體外或體內(nèi)測(cè)定來確定本發(fā)明試劑(提取物、活性部位部分和化合物)的效果，以及所述試劑的給藥是否適用于增加哺乳動(dòng)物個(gè)體的壽命和/或提高哺乳動(dòng)物個(gè)體的生活質(zhì)量。在一些實(shí)施方案中，使用體外模型來評(píng)價(jià)試劑對(duì)個(gè)體的影響。合適的模型包括但不限于應(yīng)激抗性測(cè)定，其中將秀麗隱桿線蟲暴露于 27°C的致死溫度和受試試劑。研究了試劑在調(diào)節(jié)有機(jī)體中抵抗應(yīng)激的效果，并與合適的對(duì)照進(jìn)行比較。在一些實(shí)施方案中，使用長壽的體內(nèi)模型來評(píng)價(jià)試劑對(duì)個(gè)體的效果。合適的模型包括生存年限測(cè)定，其中準(zhǔn)備年齡同步化的秀麗隱桿線蟲蠕蟲，并使其生活在添加了受試試劑的瓊脂上。另一模型是短生存年限小鼠，其中單一 klotho基因突變導(dǎo)致多種年齡相關(guān)病癥。研究了試劑在調(diào)節(jié)有機(jī)體個(gè)體中的年齡相關(guān)病癥的效果，并與合適的對(duì)照進(jìn)行比較。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供通過將細(xì)胞與本發(fā)明的植物提取物、活性部位和/ 或化合物接觸而增加細(xì)胞對(duì)應(yīng)激的抗性或預(yù)防細(xì)胞凋亡的方法。本文所述的方法可以用于增加細(xì)胞、特別是原代細(xì)胞(即，獲自諸如人的生物體的細(xì)胞)在細(xì)胞培養(yǎng)物中存活的時(shí)間。還可以用本發(fā)明的植物、提取物、活性部位和/或化合物處理胚胎干細(xì)胞(EQ和多能細(xì)胞以及從它們分化而來的細(xì)胞，從而使培養(yǎng)物中的細(xì)胞或其后代存活更長的時(shí)間。例如在離體修飾之后，這些細(xì)胞還可以用于移植入個(gè)體。糖尿病另一方面，本發(fā)明的植物、提取物、活性部位和/或化合物可以用于治療或預(yù)防代謝性病癥，例如胰島素抵抗、前糖尿病狀態(tài)，I型和II型糖尿病和/或其并發(fā)癥。
糖尿病是指人具有高血糖水平的代謝性病癥，其原因是機(jī)體不能產(chǎn)生足夠的胰島素或利用胰島素的能力下降。胰島素在胰腺中產(chǎn)生，它是在細(xì)胞水平將葡萄糖轉(zhuǎn)化為能量的激素。葡萄糖對(duì)我們的健康至關(guān)重要，因?yàn)樗羌∪夂推渌M織中的細(xì)胞的主要能量形式。然而，血液中異常高水平的葡萄糖，也稱為高血糖癥的疾病狀態(tài)，會(huì)導(dǎo)致急性和慢性血管疾病并發(fā)癥，例如失明、腎衰、冠心病、中風(fēng)和截肢(Pankaj，2007)。I型和II型糖尿病是兩種最常見的糖尿病形式。I型糖尿病最常見于兒童期或青春期，其主要是由于胰腺中朗格漢斯氏島中的產(chǎn)胰島素β細(xì)胞的喪失，隨之導(dǎo)致胰島素缺乏。T細(xì)胞介導(dǎo)的針對(duì)β細(xì)胞的自身免疫應(yīng)答是I型糖尿病的主要內(nèi)在機(jī)制。II型糖尿病占所有糖尿病病例的90%，其主要是由于胰島素抵抗和β細(xì)胞功能紊亂(Lin & Sim， 2010)。與I型糖尿病相反，II型糖尿病患者的胰島素水平，特別是在早期時(shí)，非常高，因?yàn)闄C(jī)體試圖對(duì)胰島素抵抗進(jìn)行補(bǔ)償。然而，隨著疾病的發(fā)展，由于胰島素抵抗和增加的肝葡萄糖產(chǎn)生，即使高于正常的胰島素水平也不能將血漿葡萄糖保持在正常水平。隨著疾病的進(jìn)程，很可能由于β細(xì)胞功能的進(jìn)行性惡化和加速的β細(xì)胞凋亡導(dǎo)致胰島素下降，從而進(jìn)一步加重疾病狀態(tài)(Wajchenberg BL, 2007) 我們最近的研究表明，OEGJ能顯著促進(jìn)肌肉、心臟和腦部中新的血管的生長。OEGJ 誘導(dǎo)的血管生成和肌肉再生都會(huì)增強(qiáng)體內(nèi)葡萄糖的利用和消耗，導(dǎo)致糖尿病患者血糖水平降低。此外，如果在心臟、腦部和肌肉中發(fā)現(xiàn)的OEGJ誘導(dǎo)的細(xì)胞再生也存在于胰腺，則OEGJ 治療能補(bǔ)償β細(xì)胞的喪失。因此，本文所述的植物、提取物，活性部位和/或化合物的給藥可以為糖尿病患者提供有效治療。在示例性的實(shí)施方案中，本發(fā)明的植物、提取物、活性部位和/或化合物的給藥可以作為治療或預(yù)防糖尿病的聯(lián)合治療的一部分。例如，一種或多種本發(fā)明的植物、提取物、 活性部位和/或化合物可以與一種或多種抗糖尿病藥聯(lián)合給藥。示例性的抗糖尿病藥包括，例如醛糖還原酶抑制劑、糖原磷酸化酶抑制劑、山梨醇脫氫酶抑制劑、蛋白酪氨酸磷酸酶IB酶抑制、二肽基蛋白酶抑制劑、胰島素(包括口服生物可利用胰島素制劑)、胰島素模擬物、二甲雙胍、阿卡波糖、過氧化物酶體增殖活化受體-Y (PPAR-y)的配體(例如曲格列酮、羅格列酮、吡格列酮或GW-li^9)、磺酰脲類、格列吡嗪、格列本脲或氯磺丙脲，其中第一和第二化合物的量產(chǎn)生治療效果。其它抗糖尿病藥包括葡萄糖苷酶抑制劑、胰高血糖素樣肽-I(GLP-I)、胰島素、PPAR-α/γ雙激動(dòng)劑、美格替耐和αΡ2抑制劑。在示例性的實(shí)施方案中，抗糖尿病藥可以是二肽基肽酶IV (DP-IV或DPP-IV)抑制劑，例如諾華公司的 LAF237 (NVP DPP728 ； 1_[ [ [2_[ (5-氰基吡啶-2-基)氨基]乙基]氨基]乙?；鵠_2_氰基-(S)-吡咯-啶)或默克公司的ΜΚ-04301(參見例如，Hughes et al. ,Biochemistry 38: 1 1597-603(1999))。炎性疾病、創(chuàng)傷愈合和褥瘡在其它方面，本發(fā)明的植物、提取物、活性部位和/或化合物可用于治療或預(yù)防炎癥相關(guān)疾病或病癥?？梢栽谘装Y發(fā)生之前、發(fā)生時(shí)或發(fā)生之后給予本發(fā)明的植物、提取物、 活性部位和/或化合物。當(dāng)預(yù)防性使用時(shí)，優(yōu)選在任何炎癥反應(yīng)或癥狀之前提供所述化合物。所述化合物的給藥可以預(yù)防或減輕炎癥反應(yīng)或癥狀。炎癥是復(fù)雜的生物學(xué)過程，機(jī)體通過炎癥對(duì)感染、損傷或刺激作出反應(yīng) (Medzhitov,2008)。炎癥是保護(hù)機(jī)體免受諸如細(xì)菌、病毒和寄生蟲的各種致病外來物的影響的防御機(jī)制。盡管急性炎癥是治愈創(chuàng)傷和感染的先決條件，但是由于免疫系統(tǒng)不能清除外來物而造成的長期炎癥(也稱為慢性炎癥)會(huì)導(dǎo)致許多疾病，包括風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、 動(dòng)脈粥樣硬化、哮喘和炎性腸病(Ku et al. ,2009 ；Hamid & Tulic, 2009 ；Kaser et al.， 2010)。最近，慢性炎癥和中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、癌癥和心臟病發(fā)作之間的聯(lián)系已被提出(Kang & McGavern，2009 ；Grivennikov et al.，2010)。慢性炎性疾病困擾世界數(shù)以百萬計(jì)的人并且難以治療，目前還沒有治愈性藥物。很多用于治療慢性炎性疾病的藥物具有嚴(yán)重的副作用，包括胃出血、糖尿病和高血壓。在某些實(shí)施方案中，一種或多種本發(fā)明的植物、提取物、活性部位和/或化合物可以單獨(dú)給藥或與用于治療或預(yù)防炎癥的其它化合物聯(lián)合給藥。示例性的抗炎藥包括，例如類固醇(例如皮質(zhì)醇、可的松、氟氫可的松、強(qiáng)的松、6 α -甲基強(qiáng)的松、去炎松、倍他米松或地塞米松)、非留體類抗炎藥(NSAIDS，例如阿司匹林、對(duì)乙酰氨基酚、托美丁、布洛芬、甲滅酸、吡羅昔康、萘丁美酮、羅非昔布、塞來昔布、依托度酸或尼美舒利)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，其它治療劑是抗生素(例如萬古霉素、青霉素、羥氨芐青霉素、氨芐青霉素、頭孢噻肟、 頭孢曲松、頭孢克肟、利福平、甲硝唑、強(qiáng)力霉素或鏈霉素)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，其它治療劑是PDE4抑制劑(例如羅氟司特或咯利普蘭)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，其它治療劑是抗組胺劑(例如賽克利嗪、羥嗪、異丙嗪或苯海拉明)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，其它治療劑是抗瘧藥(例如青蒿素、蒿甲醚、青蒿琥酯、磷酸氯喹、鹽酸甲氟喹、鹽酸強(qiáng)力霉素、鹽酸氯胍、阿托伐醌或鹵泛群)。在一個(gè)實(shí)施方案中，其它治療劑是drotrecogin alfa.創(chuàng)傷愈合是意外損傷或手術(shù)介入后的復(fù)雜并且動(dòng)態(tài)的過程，其中機(jī)體自我修復(fù)并恢復(fù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)和組織層。正常創(chuàng)傷愈合分為三個(gè)階段炎癥期、增生期和重建期 (Stadelmann et al.，1998)。增生期中的血管生成對(duì)于創(chuàng)傷愈合至關(guān)重要。在血管生成的過程中，血管內(nèi)皮細(xì)胞形成新的血管。褥瘡也稱為壓瘡或壓力性潰瘍，大部分情況下是由于未減輕的壓力而造成的病變 (Bluestein D & Javaheri A，2008)。雖然褥瘡可以影響身體的任何部位，但褥瘡最常見的身體部分是骨或軟骨區(qū)，例如膝、踝和肘，特別是臀部、胯部和腳跟的皮膚。發(fā)展為褥瘡的高風(fēng)險(xiǎn)人群是癱瘓的人或無人幫助的情況下不能改變體位的人。如果不能早期發(fā)現(xiàn)，褥瘡可致命，并且是發(fā)達(dá)國家中主要醫(yī)源性死因之一。當(dāng)持續(xù)的壓力切斷易受傷害的身體部位的循環(huán)時(shí)，就發(fā)展為褥瘡。受累的組織最終由于供血不足而死亡。因此，能改善血供的試劑可用于治療褥瘡。眼部病癥本發(fā)明的一方面是通過給予患者治療劑量的本發(fā)明的植物、提取物、活性部位或化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、前藥或代謝衍生物來抑制、減少或治療包括白內(nèi)障和老視在內(nèi)的眼部病癥的方法。在一些實(shí)施方案中，OEGJ能有效治療某些眼部病癥，特別是年齡相關(guān)的和退行性眼部病癥，例如白內(nèi)障和老視。白內(nèi)障是眼睛晶狀體中不透明的或混濁的區(qū)域。根據(jù)所述區(qū)域的大小和位置，白內(nèi)障對(duì)正常視力的影響從輕微不透明至完全失明。年齡相關(guān)的白內(nèi)障是最常見的白內(nèi)障類型，并且影響60%的65-74歲人群和91%的75-85歲人群。根據(jù)世界衛(wèi)生組織，年齡相關(guān)的白內(nèi)障是世界范圍內(nèi)約50%的失明原因，并且是超過55歲人群中喪失視力的首要原因(Asbell et al.，2005)。晶狀體蛋白的變性和聚集被認(rèn)為是白內(nèi)障的內(nèi)在原因。另一方面，老視也是年齡相關(guān)的眼部疾病狀態(tài)，其中眼部的晶狀體逐漸喪失彈性，從而隨著衰老而難以對(duì)近距離物體聚焦(Charman，2008)。本發(fā)明的另一方面是通過給予有需要的個(gè)體治療劑量的本發(fā)明植物、提取物、活性部位或化合物來治療(包括抑制和預(yù)防性治療)包括白內(nèi)障、老視等在內(nèi)的年齡相關(guān)的眼部疾病。在一個(gè)實(shí)施方案中，聯(lián)合藥物方案可以包括用于治療或預(yù)防眼部病癥或與這些疾病狀態(tài)相關(guān)的繼發(fā)疾病狀態(tài)的藥物或化合物。因此，聯(lián)合藥物方案可以包括一種或多種本發(fā)明的植物、提取物、活性部位或化合物和一種或多種用于治療眼部病癥的治療利。例如， 一種或多種本發(fā)明的植物、提取物、活性部位或化合物可以與有效量的一種或多種試劑聯(lián)
I=I O藥物組合物的制劑和劑量在本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案中，進(jìn)行的體外或體內(nèi)分析來確定本發(fā)明試劑(提取物、活性部位和化合物)的效果以及所述試劑的給藥是否適用于治療個(gè)體所患疾病或醫(yī)學(xué)疾病狀態(tài)。這些分析的實(shí)例在上文中結(jié)合具體疾病或醫(yī)學(xué)治療進(jìn)行了描述。通常，足以實(shí)現(xiàn)治療或預(yù)防效果的本發(fā)明組合物的有效量為約0. OOOOOlmg/千克體重/天至約10，OOOmg/千克體重/天。合適的情況下，劑量為約0. OOOlmg/千克體重/天至約2000mg/千克體重/天。示例性的治療方案為每天一次或每周一次或每月一次給藥。 通常多次給予所述試劑。單次劑量之間的間隔可以是每天、每周、每月或每年?；蛘?，可以以緩釋制劑的形式給予所述試劑，在這種情況下，需要給藥的頻率減少。劑量和頻率根據(jù)試劑在個(gè)體中的半衰期而不同。給藥的劑量和頻率可以根據(jù)是預(yù)防性處理還是治療性處理而不同。在預(yù)防性應(yīng)用中，在長期以相對(duì)低頻率的間隔給予相對(duì)低的劑量。某些個(gè)體持續(xù)接受治療。在治療性應(yīng)用中，有時(shí)需要以相對(duì)短的間隔給予相對(duì)高的劑量，直至疾病的進(jìn)展降低或停止，并優(yōu)選地直至個(gè)體表現(xiàn)出疾病癥狀的部分或完全改善。在此之后，可以給予患者預(yù)防方案。毒性合適的情況下，本文所述的試劑的有效量(例如，劑量)能提供治療益處，而不會(huì)產(chǎn)生對(duì)個(gè)體的明顯毒性?？梢酝ㄟ^標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)程序在細(xì)胞培養(yǎng)物或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中確定本文所述的試劑的毒性，例如，通過測(cè)定LD5tl (半數(shù)致死量)或LDltltl (絕對(duì)致死量)。毒性效應(yīng)和治療效果的劑量比是治療指數(shù)。獲自這些細(xì)胞培養(yǎng)物分析和動(dòng)物研究的數(shù)據(jù)可以參考用于制定人類中使用無毒性的劑量范圍。本文所述的試劑的劑量優(yōu)選處于包括有效劑量且僅具有很小的毒性或無毒性的血循環(huán)濃度的范圍內(nèi)。根據(jù)所用劑型和給藥途徑，劑量可以在該范圍內(nèi)變化。確切的制劑、給藥途徑和劑量可以由醫(yī)師根據(jù)個(gè)體的疾病狀態(tài)來選擇。參見，例如，F(xiàn)ingl et al,In:The Pharmacological Basis of Therapeutics,Ch. 1 (治療的藥理學(xué)基礎(chǔ)，第一章)(1975)。根據(jù)本發(fā)明的方法，可以將所述試劑合并到適于給藥的藥物組合物中。在一些實(shí)施方案中，所述藥物組合物可以包含適于對(duì)個(gè)體進(jìn)行給藥的形式的純化的或基本純化的柔毛水楊梅提取物和藥學(xué)可接受的載體。在其它實(shí)施方案中，所述藥物組合物所包含的藥學(xué)可接受的載體在一定程度上由所給予的具體組合物以及用于給予組合物的具體方法決定。因此，適于給予組合物的藥物組合物制劑有很多種(參見，例如，Remington' sSciences (雷明頓制藥科學(xué))，Mack Publishing Co。，Easton，PA 18th ed。，1990)。通常將藥物組合物配制為無菌的、基本上等滲的并且完全符合美國食品與藥品管理局的所有良好生產(chǎn)規(guī)范(GMP)規(guī)程。當(dāng)形容組合物、載體、稀釋劑和試劑時(shí)，術(shù)語“藥學(xué)可接受的”、“生理學(xué)容許的”以及其語法變體可交換使用，并且表示該材料能夠給予個(gè)體，并且不會(huì)產(chǎn)生需要禁止組合物給藥的程度的不希望的生理學(xué)影響。例如，“藥學(xué)可接受的賦形劑”表示該賦形劑可用于制備通常是安全的，無毒性的且滿足需要的藥物組合物，并且還包括獸醫(yī)用途以及人類制藥用途能接受的賦形劑。這些賦形劑可以是固體、液體、半固體，或者對(duì)于噴霧劑組合物來說， 可以是氣體?！八帉W(xué)可接受的鹽和酯”是指藥學(xué)可接受的并具有所需藥學(xué)性質(zhì)的鹽和酯。這類鹽包括試劑中存在的酸性質(zhì)子能夠與無機(jī)或有機(jī)堿反應(yīng)的情況下形成的鹽。合適的無機(jī)鹽包括與堿金屬形成的鹽，所述堿金屬例如鈉和鉀、鎂、鈣和鋁。合適的有機(jī)鹽包括與有機(jī)堿形成的鹽，所述有機(jī)堿例如胺類堿，例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨基丁三醇、N-甲基葡糖胺等。這類鹽還包括與無機(jī)酸(例如，鹽酸和氫溴酸)和有機(jī)酸(例如乙酸、檸檬酸， 馬來酸和烷基磺酸和芳基磺酸，例如甲磺酸和苯磺酸)形成的酸加成鹽。藥學(xué)可接受的酯包括與試劑中存在的羧基、磺酰氧基和膦酰氧基形成的酯，例如，Cp6烷基酯。當(dāng)存在兩種酸性基團(tuán)時(shí)，藥學(xué)可接受的鹽或酯可以是單酸單鹽或酯或二鹽或酯；同樣，當(dāng)存在多于兩種酸性基團(tuán)時(shí)，部分的或所有的這些基團(tuán)可以被鹽化或酯化。本發(fā)明中命名的試劑可以以非鹽化或非酯化的形式或鹽化和/或酯化的形式存在，并且這些試劑的命名意圖包括原始(非鹽化的和非酯化的)化合物及其藥學(xué)可接受的鹽和酯。此外，本發(fā)明所述的某些試劑可以以多種立體異構(gòu)體的形式存在，涉及該試劑時(shí)意圖包括所有單種立體異構(gòu)體和這些立體異構(gòu)體的所有混合物(無論是外消旋的還是其它)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地確定本發(fā)明的具體藥物和組合物的合適的給藥時(shí)機(jī)、順序和劑量。這些載體或稀釋劑的合適的實(shí)例包括但不限于，水、鹽溶液、林格氏液、葡萄糖溶液和5%人血清白蛋白。還可以使用脂質(zhì)體和諸如不揮發(fā)性油的非水性載體。這些介質(zhì)和化合物在藥學(xué)活性物質(zhì)中的使用是本領(lǐng)域公知的。除了與所述試劑不相容的任何常規(guī)介質(zhì)或化合物之外，其它介質(zhì)或化合物可用于組合物中。還可以將補(bǔ)充性活性化合物合并到組合物中。本發(fā)明的藥物組合物的配制符合其預(yù)期的給藥途徑。本發(fā)明的組合物可以通過以下途徑給藥胃腸外、局部、靜脈內(nèi)、口服、皮下、動(dòng)脈內(nèi)、真皮內(nèi)、經(jīng)皮、直腸、顱內(nèi)、腹膜內(nèi)、 鼻內(nèi)、肌內(nèi)途徑或作為吸入劑。所述試劑可以任選地與在治療各種疾病中至少有一定效果的其它試劑聯(lián)合給藥。胃腸外、真皮內(nèi)或皮下施用的溶液或懸液可以包括以下組分無菌稀釋劑，例如注射用水、鹽溶液、不揮發(fā)性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶劑；抗菌化合物，例如苯甲醇或?qū)αu基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，例如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合化合物，例如乙二胺四乙酸(EDTA)；緩沖液，例如醋酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；以及用于調(diào)節(jié)張力的化合物， 例如氯化鈉或葡萄糖?？梢杂盟峄驂A調(diào)節(jié)PH，例如鹽酸或氫氧化鈉。胃腸外制劑可以裝入安瓶、一次性注射器或玻璃或塑料制成的多劑量瓶中。適于注射使用的藥物組合物包括無菌水性溶液(在可溶于水的情況下)或用于臨時(shí)制備無菌注射液或分散液的分散劑和無菌粉末。對(duì)于靜脈內(nèi)給藥，合適的載體包括生理鹽水、抑菌水、Cremophor EL (BASF,Parsippany,N. J.)或磷酸鹽緩沖液(PBQ。無論在什么情況下，組合物必須是無菌的，并且其流動(dòng)性應(yīng)當(dāng)易于注射。其在生產(chǎn)和貯存條件下必須穩(wěn)定，并且必須能抵抗諸如細(xì)菌和真菌的微生物的污染活動(dòng)。載體可以是含有例如水、乙醇、 多元醇(例如丙三醇、丙二醇和液態(tài)聚乙二醇等)及其合適的混合物的溶劑或分散介質(zhì)。 可以例如通過使用諸如卵磷脂的包被、保持需要的顆粒尺寸(在分散液的情況下)和施用表面活性劑來保持合適的流動(dòng)性?？梢岳酶鞣N抗菌和抗真菌化合物實(shí)現(xiàn)微生物活動(dòng)的預(yù)防，所述抗菌和抗真菌化合物例如對(duì)羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸，硫柳汞等。在很多情況下，優(yōu)選在組合物中包含等滲化合物，例如糖，諸如甘露醇、山梨醇的多元醇，氯化鈉?？梢酝ㄟ^在組合物中包含延緩吸收的化合物實(shí)現(xiàn)注射組合物的持續(xù)吸收，所述化合物例如單硬脂酸鋁和明膠?？梢酝ㄟ^將所需量的試劑合并入含有一種上文所列成分或上文所列成分的組合的合適的溶劑中然后視情況進(jìn)行過濾滅菌來制備無菌注射液。通常，通過將結(jié)合劑合并到含有基本分散介質(zhì)和上文所列的所需其它成分的無菌介質(zhì)中來制備分散劑。對(duì)于用于制備無菌注射液的無菌粉末，制備方法是真空干燥和冷凍干燥，從而從之前過濾滅菌的溶液得到活性成分和任何其它所需成分的粉末?？梢砸苑e存注射(depot injection)或植入制劑的形式給予本發(fā)明的試劑，植入制劑的制備形式能允許活性成分的持續(xù)釋放或脈沖釋放?？诜M合物通常包含惰性稀釋劑或可食用的載體?？梢詫⒖诜M合物封裝在明膠膠囊中或壓縮成片劑。為了口服治療給藥，結(jié)合劑可以與賦形劑合并，并用于片劑、錠劑或膠囊的形式。還可以使用用于漱口水的流體載體來制備口服組合物，其中流體載體中化合物是經(jīng)口施用、漱口和吐出或吞下。藥學(xué)相容的結(jié)合化合物和/或輔助材料可以作為組合物的一部分。片劑、丸劑、膠囊、錠劑等可以含有任何下述成分或具有相似性質(zhì)的化合物粘合劑，例如微晶纖維素、黃蓍膠或明膠；賦形劑，例如淀粉或乳糖；崩解化合物，例如藻酸、 Primogel或玉米淀粉；潤滑劑，例如硬脂酸鎂或Merotes ；助流劑，例如膠態(tài)二氧化硅；甜味劑化合物，例如蔗糖或糖精；或調(diào)味劑化合物，例如薄荷油、水楊酸甲酯或桔子香精。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述試劑與能保護(hù)所述試劑免于從體內(nèi)快速清除的載體一起進(jìn)行制備，例如控釋制劑，包括植入物和微膠囊化的遞送體系?？梢允褂蒙锟山到獾?、生物相容的聚合物，例如乙烯醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯和聚乳酸。此類制劑的制備方法對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的。還可以從Alza Corporation和Nova !Pharmaceuticals，Inc購買所述材料。脂質(zhì)體懸液(包括靶向于感染細(xì)胞的具有針對(duì)病毒抗原的單克隆抗體的脂質(zhì)體)也可用作藥學(xué)可接受的載體?？梢愿鶕?jù)本領(lǐng)域已知的方法進(jìn)行制備，例如，美國專利第4，522，811號(hào)中的描述。
實(shí)施例通過以下實(shí)施例進(jìn)一步闡述本技術(shù)，但這些實(shí)施例不應(yīng)解釋為以任何方式進(jìn)行限制。實(shí)施例1.用于增強(qiáng)存活能力和端粒酶活性的由天然化合物組成的組合物的鑒定使用由生物活性導(dǎo)向技術(shù)來篩選植物成分，從而鑒定增強(qiáng)端粒酶活性的化合物的組合物。在篩選植物提取物時(shí)，鑒定出柔毛水楊梅的有機(jī)提取物(OEGJ)能顯著增強(qiáng)細(xì)胞的存活能力和端粒酶活性。簡而言之，將從安徽省采集的IOkg干燥的柔毛水楊梅切成小塊，在室溫下用90%甲醇/乙醇(10倍體積)滲濾6天。將提取物進(jìn)行電噴霧，得到棕色粉末。將提取物(150 μ g/ml)施加到間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)物后，發(fā)現(xiàn)OEGJ能提高細(xì)胞對(duì)抗諸如缺氧等應(yīng)激的存活能力。RT-PCR分析表明，某些與細(xì)胞存活的相關(guān)基因上調(diào)，例如 Aktl、Bcl2、VEGF, EGF和NF κ B等。因此，我們?cè)谝韵卵芯恐羞M(jìn)一步測(cè)試OEGJ的作用。實(shí)施例2.增強(qiáng)培養(yǎng)的心肌細(xì)胞的存活能力大量的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路控制細(xì)胞功能，包括細(xì)胞分裂、分化、衰老和死亡等。某些疾病的發(fā)展也取決于這些細(xì)胞功能，特別是取決于細(xì)胞衰老和細(xì)胞死亡，而且這種影響隨著年齡而增加。例如，由凋亡造成的心肌細(xì)胞損失導(dǎo)致心衰，抗凋亡(存活)信號(hào)的下調(diào)或促凋亡信號(hào)的過表達(dá)與這一疾病發(fā)展密切相關(guān)。首先，我們測(cè)試了 OEGJ是否能增強(qiáng)培養(yǎng)的心肌細(xì)胞的存活能力或防止細(xì)胞死亡。 通過在缺氧環(huán)境室中培養(yǎng)心肌細(xì)胞造成缺氧。所述室的氧濃度保持為IOmmHg,持續(xù)對(duì)小時(shí)。結(jié)果表明，與未處理的對(duì)照心肌細(xì)胞相比，從缺氧開始至缺氧結(jié)束的OEGJ處理顯著增加了諸如Aktl、Bcl2、EGF, VEGF, NFkB的某些存活因子的表達(dá)，并顯著防止細(xì)胞由于缺氧死亡。在未處理的對(duì)照心肌細(xì)胞中，隨著缺氧時(shí)間延長，凋亡細(xì)胞數(shù)增加。相比之下，OEGJ 處理增加細(xì)胞存活能力并減少凋亡細(xì)胞數(shù)(P < 0. 01)。實(shí)施例3. OEGJ增加秀麗隱桿線蟲的存活為了測(cè)試OEGJ是否能增強(qiáng)秀麗隱桿線蟲的存活能力或預(yù)期壽命，使用了野生型 N2秀麗隱桿線蟲。通過漂白(bleaching)將秀麗隱桿線蟲同步化，并分兩組種到瓊脂板上。平板為60mm的表面包被皿(約IOml固體形式的培養(yǎng)基)。蠕蟲生活在強(qiáng)制通風(fēng)的培養(yǎng)箱中的用大腸桿菌菌株0P50劃線的NGM瓊脂板上，培養(yǎng)箱溫度保持為士0.5°C。用 OEGJ (150 μ g/ml，每一個(gè)皿加上600 μ 1藥物溶液，每個(gè)皿都遮擋風(fēng)干)處理約500個(gè)蠕蟲/皿，用等量溶劑處理對(duì)照組蠕蟲。在野生型秀麗隱桿線蟲株中，秀麗隱桿線蟲Ν2株在 200C _25°C下能誘導(dǎo)dauer幼蟲形成。高于25°C 對(duì)于秀麗隱桿線蟲是致死溫度。為了測(cè)試OEGJ處理的蠕蟲的存活能力，將培養(yǎng)溫度提高至27°C。圖像采集于第7天和第14 天(采集圖像時(shí)，蠕蟲暴露于20°C )。我們發(fā)現(xiàn)，未處理的對(duì)照組的N2蠕蟲在27°C下孵育7天后，部分蠕蟲死亡，同時(shí)部分仍然存活，但是未觀察到幼體蠕蟲(圖1 :Ct-7)。相比之下，OEGJ處理的蠕蟲在相同狀態(tài)下孵育7天后，幾乎沒有蠕蟲死亡，并且更有趣的是觀察到很多幼體蠕蟲(圖1 :0EGJ-7)。 此外，27°C下孵育14天后，未處理的對(duì)照組中所有N2蠕蟲死亡(圖1 :Ct-14)。形成鮮明對(duì)比的是，盡管OEGJ處理組中很多成體蠕蟲死亡，但觀察到相當(dāng)多的幼體蠕蟲仍然存活(圖 1 :0EGJ-14)。這些結(jié)果表明過高和致死的溫度環(huán)境不僅使N2蠕蟲絕育，還能在2周內(nèi)殺死所有蠕蟲。相比之下，OEGJ處理不僅增強(qiáng)蠕蟲在致死溫度環(huán)境下的存活能力，還能保持它們產(chǎn)生后代的能力。OEGJ增加秀麗隱桿線蟲的平均健康時(shí)間為了測(cè)試OEGJ是否能刺激蠕蟲中與細(xì)胞存活相關(guān)基因的上調(diào)并增強(qiáng)蠕蟲的存活能力，通過漂白(bleaching)處理將野生型N2、daf-2和daf_16突變體秀麗隱桿線蟲分別同步化并分為兩組種到瓊脂板上。daf-2基因編碼秀麗隱桿線蟲中的胰島素樣受體。daf-2 的突變已被證實(shí)能使蠕蟲生存時(shí)間加倍(Jennie B. et al.，1995 ;J. Apfeld & C. Kenyon， 1998)。該基因已知能調(diào)節(jié)生殖發(fā)育、衰老、氧化應(yīng)激抗性、耐熱性、缺氧抗性以及細(xì)菌病原體抗性(M. S Garni & CA. Wolkow，2006)。daf_2是蠕蟲中唯一的胰島素/IGF-1樣受體。胰島素/IGF-I樣信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)從蠕蟲到人都保守。daf-2的作用是通過磷酸化作用級(jí)聯(lián)來負(fù)調(diào)節(jié)叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子daf-16。研究表明，daf-16是daf_2依賴性生存時(shí)間延長和dauer形成所必需的。當(dāng)非磷酸化時(shí)，daf-16是有活性的并存在于細(xì)胞核中。daf-16在決定秀麗隱桿線蟲及其進(jìn)化近親的衰老速度和平均生存時(shí)間中起重要作用(S.T.Henderson & T.E.Johnson， 2001)。在很多其它動(dòng)物中也發(fā)現(xiàn)daf-16，包括人。daf-16是驅(qū)動(dòng)衰老、免疫和應(yīng)激響應(yīng)中涉及的生物學(xué)過程的基因組中的一員。在15°C下同步化的Ll期N2、daf-2和daf-16蠕蟲(約500個(gè)蠕蟲/皿)生長在20°C強(qiáng)制通風(fēng)的培養(yǎng)箱中用大腸桿菌株0P50劃線的NG瓊脂板上，培養(yǎng)箱的溫度保持為士0. 5°C。用OEGJ (150 μ g/ml，每一個(gè)皿加上600 μ 1藥物溶液，每個(gè)皿都遮擋風(fēng)干)處理受試組的蠕蟲，用等量溶劑處理對(duì)照組的蠕蟲。另一例外實(shí)驗(yàn)是在20°C下同步化Ll期的 daf-2并使其在20°C下生長。如圖2所示，幾乎在所有檢查點(diǎn)，OEGJ處理組中觀察到的活的蠕蟲都多于未處理組。到第38天為止，所有未處理組的蠕蟲死亡。然而，OEGJ處理組中約5%的蠕蟲仍然存活(圖2)。OEGJ處理組中剩余的蠕蟲第42天才全部死亡，平均生存時(shí)間比未處理的對(duì)照蠕蟲長約10%。為了測(cè)試OEGJ處理對(duì)daf-2突變體秀麗隱桿線蟲(其生存時(shí)間已經(jīng)是野生型蠕蟲的2倍)的生存時(shí)間的影響，我們用OEGJ測(cè)試daf-2蠕蟲。結(jié)果表明，幾乎在所有觀察點(diǎn)，OEGJ處理組中發(fā)現(xiàn)的活的蠕蟲都多于未處理組(圖3)。未處理的對(duì)照中約5%的蠕蟲在第56天存活，而OEGJ處理組中約10%的蠕蟲仍然存活(圖3)。為了進(jìn)一步測(cè)試OEGJ處理對(duì)具有顯著較短生存時(shí)間的蠕蟲的影響，使用了 daf-16突變體秀麗隱桿線蟲。我們發(fā)現(xiàn)，到第12天為止，未處理的對(duì)照組中約77%的蠕蟲死亡(圖4)。相比之下，OEGJ處理組中約50%的蠕蟲在第12天仍然存活。(圖4)。未處理組中死亡的蠕蟲比OEGJ治療多約27%，這表明OEGJ處理能顯著增加健康時(shí)間。為了更進(jìn)一步測(cè)試OEGJ處理對(duì)不同狀態(tài)下的daf-2秀麗隱桿線蟲的生存時(shí)間的效果，daf-2蠕蟲的同步化和生長都在20°C下進(jìn)行。我們發(fā)現(xiàn)，OEGJ處理組中約58%的蠕蟲在第21天仍然存活(圖5)。相比之下，到第21天，未處理的對(duì)照組中約58%的蠕蟲已經(jīng)死亡(圖5)。在所有檢查點(diǎn)，OEGJ處理組中仍然存活的蠕蟲比未處理組多約5-15%，提示OEGJ處理增加了健康時(shí)間和生存時(shí)間。實(shí)施例4. OEGJ處理誘導(dǎo)小鼠長壽和增加的端粒酶活性昆明(KM)小鼠在正常飼養(yǎng)下的生存時(shí)間通常是582. 5士 177. 73天。將KM小鼠(η =16)隨機(jī)分為兩組。給予受試組小鼠(η = 9，6月齡)2個(gè)月的0EGK200mg/kg/天，添加于食物中)。在相同時(shí)間給予6月齡對(duì)照組小鼠(n = 7)蔗糖O00mg/kg/天，添加于食物中)。然后，在12小時(shí)光照/黑暗周期的環(huán)境受控條件下飼養(yǎng)小鼠。所有動(dòng)物自由攝取標(biāo)準(zhǔn)鼠顆粒料和水。TERT (端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶)是端粒酶的催化亞基。使用基于TaqMan 熒光方法的 RT-PCR對(duì)全范圍的mTERT (小鼠TERT)mRNA拷貝數(shù)進(jìn)行定量。在PCR的延伸期中，探針與靶序列雜交，然后由于Taq聚合酶的5'至3'核酸外切酶活性而被切割。報(bào)告子熒光信號(hào)的增加與特定PCR產(chǎn)物的量成比例，這提供了高度精確并且可重復(fù)的定量。達(dá)到熒光閾值的PCR循環(huán)數(shù)是循環(huán)閾值(Ct)。每個(gè)樣品的Ct值與輸入cDNA的初始量的對(duì)數(shù)成比例。通過將未知樣品的Ct值繪制在標(biāo)準(zhǔn)曲線上，可以計(jì)算樣品中靶序列的量。為了將mTERT mRNA 表達(dá)相對(duì)于樣品與樣品在輸入RNA、RNA質(zhì)量和逆轉(zhuǎn)錄酶效率中的差異進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，擴(kuò)增管家基因GAPDH。根據(jù)每條標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別測(cè)定GAPDH和mTERT的拷貝數(shù)。mTERT和GAPDH的拷貝數(shù)之比代表每個(gè)樣品的標(biāo)準(zhǔn)化的mTERT，并且可以與其它樣品的標(biāo)準(zhǔn)化的mTERT進(jìn)行比較(Artandi SE et al. 2000)。OEGJ給藥2個(gè)月后，將來自O(shè)EGJ處理組的4只小鼠和來自未處理對(duì)照組的2只小鼠處死。利用Trizol anvitrogen)，分別從心臟制備總RNA。GCl細(xì)胞系用作實(shí)驗(yàn)的陽性對(duì)照。利用Superscript II anvitrogen)，按照廠商說明書，使用隨機(jī)引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。在 BioRad MJ Mini實(shí)時(shí)PCR上，對(duì)兩個(gè)稀釋液以雙平行樣品進(jìn)行實(shí)時(shí)PCR。對(duì)于每個(gè)mRNA樣品，用GAPDH mRNA含量校正Tert表達(dá)。程序?yàn)樵?0°C下初始孵育2分鐘，然后是95°C持續(xù)10分鐘和40個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)為95°C持續(xù)15秒、68°C持續(xù)2分15秒、95°C持續(xù)15秒、 63°C持續(xù)20秒、95°C持續(xù)15秒。在每個(gè)循環(huán)，測(cè)定產(chǎn)物的熔解點(diǎn)。PCR利用對(duì)Tert基因特異的一組引物。結(jié)果表明在所有樣品中觀察到18s和GAPDH內(nèi)參的陽性信號(hào)。在所有4個(gè)OEGJ 處理的心臟樣品和GCl細(xì)胞中觀察到mTERT的陽性信號(hào)。未處理對(duì)照心臟樣品中僅有非常低的或幾乎沒有mTERT表達(dá)。所有4個(gè)處理的樣品表現(xiàn)出的mTERT表達(dá)比未處理對(duì)照樣品高約24 8_13 27倍(圖6)。此結(jié)果為OEGJ處理能控制誘導(dǎo)TERT表達(dá)的假說提供了可能性。為了測(cè)試細(xì)胞存活基因和TERT的增強(qiáng)表達(dá)能否轉(zhuǎn)化為延長的生存時(shí)間，我們利用上述OEGJ處理的小鼠繼續(xù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。我們發(fā)現(xiàn)，處理的小鼠的活動(dòng)更具活力并且明顯表現(xiàn)出更健康。與未處理的對(duì)照動(dòng)物相比，處理的小鼠的承受危及生命的應(yīng)激能力也顯著增強(qiáng)。因此，剩余的5只OEGJ處理的小鼠的平均生存時(shí)間為763士 108天。相比之下，剩余的 5只未處理的小鼠的平均生存時(shí)間為610士 158天。綜上所述，OEGJ處理的小鼠享有的生存時(shí)間比未處理的對(duì)照長17-25% (圖6)。實(shí)施例5. OEGJ引起衰老加速小鼠中年齡相關(guān)病癥的改善衰老加速小鼠(SAM)系由日本京都大學(xué)衰老生物學(xué)部建立，其作為衰老加速和年齡相關(guān)病癥的新的鼠模型。在本研究中，使用短壽小鼠(SAMPlO)。SAMPlO小鼠表現(xiàn)出加速的衰老。SAMPlO中最典型的年齡相關(guān)改變是腦萎縮，特別是大腦的額部，額部腦皮質(zhì)、頂部腦皮質(zhì)、顳部腦皮質(zhì)和枕部腦皮質(zhì)。在衰老的SAMPlO中，這些區(qū)域中的大神經(jīng)元通常收縮和/或消失(Shimada et al，1992)。所有這些典型病理學(xué)表型與老年人中通常觀察到的年齡相關(guān)病癥相似。SAMPlO小鼠存活時(shí)間的中位數(shù)為333天(Takeda et al, 1991)。當(dāng)SAMPlO小鼠4月齡時(shí)，用0EGK400mg/kg/天，配制于H2O懸液)通過灌胃給藥每天治療受試組小鼠(n = 16)，持續(xù)4周。給予未治療對(duì)照組小鼠(n = 16)等量的水。停止治療后1個(gè)月，即小鼠約為6月齡時(shí)，使用Morris水迷宮(1. 8M)來評(píng)價(jià)兩個(gè)組的所有小鼠的空間學(xué)習(xí)和記憶能力。每天訓(xùn)練動(dòng)物5次，訓(xùn)練4天。通常，將找到平臺(tái)的耗時(shí)用于評(píng)價(jià)小鼠對(duì)于平臺(tái)位置的學(xué)習(xí)能力和記憶的強(qiáng)度。記錄找到隱藏平臺(tái)之前的耗時(shí)(也稱為逃避潛伏期)。結(jié)果表明，OEGJ治療的SAMPlO小鼠表現(xiàn)出的逃避潛伏期顯著短于未治療的小鼠(P < 0. 001)。在4周的OEGJ治療后，利用東芝超聲掃描儀的12-MHz線性探針研究實(shí)驗(yàn)小鼠的腦血流(CBF)。為了排除OEGJ的血管擴(kuò)張效應(yīng)的可能性，4周OEGJ治療之后2周再次測(cè)定 CBF0 3次重復(fù)測(cè)量的平均值作為CBF。我們發(fā)現(xiàn)，OEGJ治療的小鼠的CBF比未治療的對(duì)照小鼠平均高15%。有趣的是，當(dāng)在水迷宮測(cè)試之后處死小鼠時(shí)，OEGJ治療小鼠的腦部凈重量平均比未治療的小鼠重約15%。此外，未治療的小鼠的血壓為約135mmHg，比正常小鼠的血壓高約13%。相比之下，OEGJ治療的SAMPlO小鼠的血壓比未治療的對(duì)應(yīng)者的血壓低約 10%。這些結(jié)果提示，OEGJ治療誘導(dǎo)了小鼠腦中新的側(cè)支血管形成，從而減少小動(dòng)脈或微血管的外周阻力，從而能夠顯著增加腦部血流。為了證實(shí)OEGJ治療的動(dòng)物中增加的CBF的物理基礎(chǔ)，從CBF測(cè)量之后處死的實(shí)驗(yàn)小鼠中取出腦部，福爾馬林固定，石蠟包埋，組織切片(5μπι)，Η&Ε染色。通過對(duì)額葉皮質(zhì)內(nèi)和海馬區(qū)周圍的血管進(jìn)行計(jì)數(shù)來確定組織學(xué)切片的血管密度。將額葉或海馬內(nèi)的6個(gè)隨機(jī)且非重疊高倍鏡視野(HPF) (40倍)用于對(duì)每個(gè)切片的所有血管進(jìn)行計(jì)數(shù)。取每個(gè)HPF中的血管數(shù)的平均值，并將其表示為每個(gè)HPF的血管數(shù)。由2個(gè)研究人員以盲法的方式進(jìn)行血管計(jì)數(shù)。血管計(jì)數(shù)的結(jié)果表明在未治療的對(duì)照小鼠中，額葉皮質(zhì)區(qū)的血管數(shù)為約 68. 6 士 16. 3/HPF,海馬區(qū)周圍的血管數(shù)為46. 8 士 13. 2/HPF (圖7)。相比之下，在OEGJ治療的小鼠中，額葉皮質(zhì)區(qū)的血管數(shù)為約83. 8士 12. 9/HPF，海馬區(qū)周圍的血管數(shù)為61. 7士 11. 2/ HPF (圖 7)。為了研究OEGJ治療誘導(dǎo)的腦部微循環(huán)的改善是否能引起神經(jīng)元再生從而取代受損的或死亡的神經(jīng)元，從獲自實(shí)驗(yàn)小鼠腦部的每一塊切下的薄切片(5μπι)，并用抗Ki67的特異性抗體進(jìn)行免疫組化染色。通過對(duì)切片的顯微鏡檢查，我們發(fā)現(xiàn)OEGJ治療不僅增強(qiáng)腦皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)中新血管的生長，還能在這些區(qū)域誘導(dǎo)神經(jīng)元再生(圖8)。相比之下，在未治療的對(duì)照腦中，既未鑒定到腦部顯著的新側(cè)支血管的生長，也未發(fā)現(xiàn)神經(jīng)元的再生(圖 8)。新再生的神經(jīng)元樣細(xì)胞能被對(duì)Ki67特異的抗體陽性染色(圖8)，這表明它們是新再生的神經(jīng)元細(xì)胞。綜上所述，這些觀察結(jié)果提示，OEGJ不僅能明顯刺激SAM小鼠腦部中新的側(cè)支血管的生長，從而改善CBF，還能誘導(dǎo)負(fù)責(zé)學(xué)習(xí)和認(rèn)知能力的額葉皮質(zhì)和海馬區(qū)中的神經(jīng)元再生，這可能是水迷宮探索試驗(yàn)中明顯改善的行為表現(xiàn)的物理基礎(chǔ)。綜上所述，以上結(jié)果提示，OEGJ能通過刺激細(xì)胞生存和功能性腦部微循環(huán)的重建以及取代受損的或死亡的重要細(xì)胞(例如用新再生的神經(jīng)元或心肌細(xì)胞取代受損的或死亡的神經(jīng)元或心肌細(xì)胞)來降低衰老過程的進(jìn)展，或甚至逆轉(zhuǎn)衰老。因此，本發(fā)明的組合物可以用于提高壽命和生活質(zhì)量。實(shí)施例6.糖尿病基于上述證據(jù)，在人道治療的基礎(chǔ)上，在糖尿病患者中測(cè)試了 OEGJ用于治療糖尿病的可能性。在治療之前1年，1名59男性在進(jìn)行痔瘡手術(shù)之前被首次診斷有糖尿病。當(dāng)時(shí)，他的血糖水平為0mmol/Lo他接受了 1周的胰島素治療，并開始服用糖尿病藥物(達(dá)美康80mg，每早空腹2片)。服藥的6個(gè)月中，他的平均血糖水平為9.97mmol/L。他開始口服OEGJ (1. Sg/天)并聯(lián)合達(dá)美康，在2個(gè)月的OEGJ治療期中，他的平均血糖水平降低至 7.90mmol/L。即使在中斷OEGJ治療之后，他的平均血糖水平在相似水平(8. 06mmol/L)保持了2個(gè)月。實(shí)施例7.炎性疾病、創(chuàng)傷愈合和褥瘡
根據(jù)上述治療效果，OEGJ應(yīng)當(dāng)可用于治療慢性炎性疾病、創(chuàng)傷和褥瘡。因此，在人道治療的基礎(chǔ)上，我們測(cè)試了使用OEGJ治療慢性炎性疾病、創(chuàng)傷和褥瘡的可能性。約2年前，來自上海的1名女性患者發(fā)生多次腦部發(fā)作(中風(fēng))。在約8個(gè)月前她發(fā)生另一次腦部發(fā)作之后，她完全喪失語言和所有體力活動(dòng)能力。她喪失了對(duì)任何事件的任何前攝反應(yīng)，并且表現(xiàn)為完全的植物人患者，伴有肌肉僵硬。數(shù)月后，在檢查時(shí)她的臀部發(fā)生深度褥瘡(直徑16-18cm，深度10-12cm)。使情況更糟的是患者還感染了多藥耐藥性金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus)。人們擔(dān)心如此嚴(yán)重的褥瘡和感染會(huì)奪去她的生命。對(duì)壞死和腐爛組織進(jìn)行手術(shù)清創(chuàng)之后，給予她OEGJ (口服給藥，2g/天)。OEGJ給藥 1周后，她的褥瘡開始快速愈合。開放的創(chuàng)傷變得更小并逐漸變淺。2個(gè)月的OEGJ治療使她的深度褥瘡?fù)耆?。?dāng)患者停止服用藥物時(shí)，褥瘡的愈合速度下降。在患者恢復(fù)OEGJ 治療之后，褥瘡的愈合速度提高。實(shí)施例8.眼部病癥基于上述證據(jù)，在人道治療的基礎(chǔ)上，在患者中測(cè)試了 OEGJ可用于治療年齡相關(guān)的眼部病癥和退行性眼部病癥的可能性。1名80歲的女性在4年前開始表現(xiàn)出白內(nèi)障的癥狀。她的視力逐漸惡化，即使佩戴眼鏡也不能看清電視上的畫面。她接受了 0EGK2g/天)口服給藥1個(gè)月。3個(gè)月后，她訴說甚至可以不佩戴眼鏡就能輕松地看電視。她還能很好地閱讀雜志和書籍。1名78歲的男性被診斷為重度白內(nèi)障超過1年，他視力模糊并最終失明。白內(nèi)障手術(shù)后，他的視力恢復(fù)一些。然而，2周后，他再次完全喪失了視力。白內(nèi)障手術(shù)后3個(gè)月， 他接受了 0EGJ(1.5g/d天)口服治療2個(gè)月。OEGJ治療后，他能清楚地辨認(rèn)個(gè)人并且在行走時(shí)能夠?qū)ぢ?。他甚至能辨認(rèn)菜地中的小物體(3cm長，直徑0.3cm)。1名48歲的女性由于老視而佩戴老花鏡超過8年。8個(gè)月前，她必須佩戴度數(shù)更高的老花鏡才能看清電腦上的內(nèi)容。1個(gè)月的OEGJ 口服給藥(0.5g/天)之后，她甚至能夠不佩戴眼鏡閱讀電腦上的文章。1名48歲的男性在約4年前由于老視而開始主訴視力問題。不佩戴老花鏡的情況下，他不能看清身份證上的詳細(xì)內(nèi)容。0EGK2g/天)口服給藥2個(gè)月后，他甚至可以不佩戴老花鏡而容易地讀出身份證。根據(jù)上述OEGJ的多種治療效果和OEGJ在治療眼部病癥患者中的有前景的效果， 我們提出OEGJ可以通過顯著促進(jìn)由于衰老造成的供血不足的物理重建，從而明顯改善眼中組織和細(xì)胞的生存微環(huán)境來發(fā)揮其作用。對(duì)于白內(nèi)障，通過增加眼中的血流，OEGJ可以有助于預(yù)防和/或延緩蛋白聚集在晶狀體上，并且還能有助于溶解晶狀體上先前存在的蛋白聚集體。對(duì)于老視，OEGJ誘導(dǎo)的微環(huán)境的改善可以有利于保持晶狀體的彈性和增強(qiáng)負(fù)責(zé)彎曲和拉直晶狀體的睫狀肌的強(qiáng)度。按照該發(fā)現(xiàn)，OEGJ還可以用于治療其它眼部病癥，例如糖尿病性視網(wǎng)膜病、色素性視網(wǎng)膜炎和眼缺血綜合征。盡管已經(jīng)展示并描述了某些實(shí)施方案，但是應(yīng)當(dāng)理解，在不脫離權(quán)利要求書所限定的較寬范圍中的技術(shù)的情況下，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在其中做出改變和改動(dòng)。本公開不應(yīng)局限于本申請(qǐng)所述的具體實(shí)施方案。在不脫離其實(shí)質(zhì)和范圍的情況下，可以進(jìn)行很多改動(dòng)和變化，這對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的。本公開范圍內(nèi)除本文所列之外的功能上等同的方法和裝置對(duì)于閱讀了上述描述的本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的。這些改動(dòng)和變化意圖包括在附加權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。本公開僅受附加權(quán)利要求書的內(nèi)容以及這些權(quán)利要求賦予權(quán)力的等同物的全部范圍的限制。應(yīng)當(dāng)理解，本公開不局限于具體方法、試劑、化合物、組合物或生物體系，上述是必然能夠變化的。還應(yīng)當(dāng)理解，本文所用的術(shù)語僅用于描述具體實(shí)施方案，而并非意圖進(jìn)行限制。此外，當(dāng)以馬庫什組的方式描述本公開的特征或方面時(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到，還從任何個(gè)體成員或馬庫什組成員的亞組的方式描述了本公開。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，為了任何和所有目的，特別是在提供書面描述方面的目的，本文公開的所有范圍還包括任何和所有可能的子范圍以及子范圍的組合。任何列出的范圍能容易地被認(rèn)為充分描述和賦予了同一范圍被分解為至少相等的二分之一、三分之一、四分之一、五分之一、十分之一等的情況。作為非限制性實(shí)例，本文討論的每個(gè)范圍能容易地分解為下三分之一、中三分之一和上三分之一等。本領(lǐng)域技術(shù)人員還應(yīng)當(dāng)理解，諸如 “多至”、“至少”、“大于”、“少于”等的所有語言包括所記載的數(shù)值，并且是指能如上文所討論隨后分解成子范圍的范圍。最后，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，一個(gè)范圍包括每個(gè)個(gè)體成員。 因此，例如，具有1-3個(gè)單元的組是指具有1、2或3個(gè)單元的組。同樣，具有1-5個(gè)單元的組是指具有1、2、3、4或5個(gè)單元的組，以此類推。盡管本文中公開了各個(gè)方面和實(shí)施方案，其他方面和實(shí)施方案對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的。本文公開的各個(gè)方面和實(shí)施方案僅是說明目的，而不是意圖進(jìn)行限制，附加權(quán)利要求書表明真正的范圍和實(shí)質(zhì)。參考文獻(xiàn)Armanios MY, Chen JJ, Cogan JD, Alder JK, lngersoll RG, Markin C, Lawson WE, Xie Μ, Vulto I, Phillips JA 3rd, Lansdorp PM, Greider Cff, Loyd JE. 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權(quán)利要求
1.提高有需要的個(gè)體的壽命、存活能力和生活質(zhì)量的方法，所述方法包括給予所述個(gè)體有效量的柔毛水楊梅(Geum japonicum)有機(jī)提取物(OEGJ)。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述提取物刺激端粒酶和一種或多種選自Aktl、 Bcl2、EGF, VEGF和NF κ B的細(xì)胞存活因子的表達(dá)。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中與未給予所述提取物的個(gè)體相比，所述提取物增加生存年限或生活質(zhì)量。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述有機(jī)提取物是乙醇提取物。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述有機(jī)提取物是甲醇提取物。
6.如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述個(gè)體是人。
7.如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述提取物通過口服給藥。
8.如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述提取物通過皮下注射、肌內(nèi)注射或靜脈輸注進(jìn)行給藥。
9.如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的方法，其中所給予的提取物的量為0.01mg/kg/天至 2000mg/kg/天。
10.如權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述有效量的提取物是包含所述提取物和藥學(xué)可接受的載體的制劑。
11.用于提高個(gè)體壽命、存活能力和生活質(zhì)量的藥物組合物，包含有效量的柔毛水楊梅 (Geum japonicum)有機(jī)提取物和藥學(xué)可接受的載體。
12.如權(quán)利要求11所述的組合物，其中所述有機(jī)提取物是乙醇提取物。
13.如權(quán)利要求11所述的組合物，其中所述有機(jī)提取物是甲醇提取物。
14.預(yù)防或治療有需要的個(gè)體中的糖尿病的方法，所述方法包括給予所述個(gè)體有效量的柔毛水楊梅(Geum japonicum)有機(jī)提取物。
15.預(yù)防或治療有需要的個(gè)體中的眼部疾病或疾病狀態(tài)的方法，所述方法包括給予所述個(gè)體有效量的柔毛水楊梅(Geum japonicum)有機(jī)提取物。
16.治療有需要的個(gè)體中的炎癥的方法，所述方法包括給予所述個(gè)體有效量的柔毛水楊梅(Geum japonicum)有機(jī)提取物。
17.增強(qiáng)具有創(chuàng)傷的個(gè)體的創(chuàng)傷愈合的方法，所述方法包括給予所述個(gè)體有效量的柔毛水楊梅(Geum japonicum)有機(jī)提取物。
18.如權(quán)利要求17所述的方法，其中所述創(chuàng)傷是褥瘡。
全文摘要
本文公開了植物柔毛水楊梅(Geum japonicum)的化合物、提取物和活性部位以及增加壽命和存活能力或預(yù)防或治療各種醫(yī)學(xué)疾病狀態(tài)的方法，所述醫(yī)學(xué)疾病狀態(tài)包括糖尿病、炎癥、創(chuàng)傷愈合、褥瘡和眼部病癥。本文提供的化合物可配制為可用于所公開的方法的藥物組合物和藥物。還提供了所述化合物和提取物在制備藥物制劑和藥物中的用途。
文檔編號(hào)A61P3/10GK102497873SQ201080026127
公開日2012年6月13日 申請(qǐng)日期2010年6月11日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月12日
發(fā)明者李明, 程蕾 申請(qǐng)人:基因雷克斯制藥有限公司