專利名稱：包含益生菌的用于1-10歲兒童的全營養(yǎng)液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及兒童營養(yǎng)領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明涉及g在用于胃腸道功能受損的兒童的營養(yǎng)組合物。本發(fā)明的一個實(shí)施方案涉及施用于胃腸道功能受損的兒童的營養(yǎng)組合物，所述營養(yǎng)組合物包含益生微生物。該益生微生物可以是非復(fù)制的，例如生物學(xué)活性的、熱處理的益生微生物。
背景技術(shù)：
兒童有特殊的營養(yǎng)需要。這些需要隨著兒童的年齡和發(fā)育狀態(tài)而極大不同。兒童期通常理解為在出生和青春期階段之間的時間段。
兒童的機(jī)體在兒童發(fā)育時所經(jīng)歷的顯著改變需要營養(yǎng)物的持續(xù)供應(yīng)以支持該過程。平衡的膳食最佳地向兒童提供他們所需的全部。然而，某些兒童患有胃腸(GI)道功能受損。因此，此類兒童不總是能夠向他們的機(jī)體供應(yīng)足夠量的營養(yǎng)。這些兒童可能患有例如食欲減退、容量不耐受(volume intolerance)、便秘或腹瀉，這不允許充足的食物攝取，或不允許從攝取的食物適當(dāng)?shù)匚盏剿璧臓I養(yǎng)物。已開發(fā)了專門的營養(yǎng)組合物用于此類情況，從而使得甚至在此類不利的情況下，兒童的特殊需求仍可以得到滿足。一般地，在食物攝取不充分的情況下，食物組合物中的常量營養(yǎng)物被加工，以使得其更易于吸收。然而,希望還支持消化道的功能,從而使得消化系統(tǒng)更有效地工作。兒童常與許多其他兒童密切接觸，并且因此需要強(qiáng)的免疫系統(tǒng)。然而，取決于發(fā)育狀態(tài)，他們的免疫系統(tǒng)可能仍是未成熟的。由GI道功能受損引起的營養(yǎng)不良可以進(jìn)一歩削弱免疫系統(tǒng)。如果組合物具有抗炎作用，這也是期望的。因此，期望的是，不僅給兒童提供營養(yǎng)支持還提供對免疫系統(tǒng)的支持，在兒童生病或從疾病中恢復(fù)的情況下提供允許降低炎癥程度的天然組合物、和/或提供允許消化道更好地發(fā)揮功能的手段。故，本領(lǐng)域需要能夠根據(jù)兒童的特殊需要給兒童提供專門營養(yǎng)同時減少炎癥、カロ強(qiáng)免疫系統(tǒng)和/或改善消化的營養(yǎng)組合物。優(yōu)選的是，這通過使用如下天然成分來達(dá)到，所述天然成分可以安全施用而無副作用，且可以容易地通過使用エ業(yè)化加工而摻入營養(yǎng)組合物內(nèi)。本發(fā)明人解決了這ー需求。因此，本發(fā)明的目的是對現(xiàn)有技術(shù)的改善，提供滿足上文所述需要的兒童用營養(yǎng)組合物。本發(fā)明人很驚訝，他們可以通過獨(dú)立權(quán)利要求的主題達(dá)到這個目的。從屬權(quán)利要求進(jìn)ー步發(fā)展本發(fā)明的想法。

發(fā)明內(nèi)容
由此，本發(fā)明人提出提供包含益生菌的特定ロ服營養(yǎng)組合物，以施用于具有受損的GI道功能的兒童。為了本發(fā)明的目的，兒童應(yīng)理解為1-13歲的人。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，益生菌能夠在液體營養(yǎng)組合物的框架中提供其健康益處。因?yàn)槭┯糜谔囟ɑ颊叩囊后w營養(yǎng)組合物通常具有比包含益生菌的酸乳飲品長的貨架期，所以益生菌通常不加入此類營養(yǎng)組合物中，因?yàn)椴淮_定益生菌的生活力是否可以在延長的貨架期中得到保證。本發(fā)明人現(xiàn)在能夠證實(shí)，甚至非復(fù)制性益生菌也可以提供益生菌的健康益處，且甚至可以具有提高的益處。

因此，本發(fā)明的一個實(shí)施方案是施用于兒童的組合物，其向患者提供全營養(yǎng)，且包含益生微生物。該兒童可患有例如受損的胃腸道功能。組合物提供全營養(yǎng)，患者可以從該組合物獲得所有需要的營養(yǎng)而無需額外的食物來源。本發(fā)明的組合物可以作為ロ服施用的營養(yǎng)組合物或作為經(jīng)由管飼施用的營養(yǎng)組合物而提供。本發(fā)明的營養(yǎng)組合物提供平衡的肽譜，以支持氮吸收和生長。肽可以是完全或部分基于乳清的，以利于胃排空。作為完全基于乳清的蛋白質(zhì)來源，可以使用酶促水解的乳清蛋白質(zhì)?？商娲?，奶蛋白質(zhì)濃縮物和乳清蛋白質(zhì)濃縮物的混合物可以以約I : I的比率使用。本發(fā)明的營養(yǎng)組合物可以施用于1-10歲的兒童。本發(fā)明的一個實(shí)施方案是這樣的組合物，其具有在0.9-1. lkcal/ml范圍中的卡路里密度、在250-270m0sm/kg水范圍中的重量摩爾滲透壓濃度，且包含占組合物約11-13%卡路里的蛋白質(zhì)來源、占組合物約43-56%卡路里的碳水化合物來源、和占組合物約32-45%卡路里的脂質(zhì)來源。可以選擇高M(jìn)CT LCT比率，以降低脂肪吸收不良的可能性。因此，MCT(中鏈甘油三酷)LCT(長鏈甘油三酷)比率對于正?；颊呖梢栽?0 80至24 76范圍中。對于患有脂肪吸收不良的患者，可以優(yōu)選采用約58 42至62 38 的 MCT LCT 比率。本發(fā)明的組合物可以含有纖維以幫助促進(jìn)健康腸道微生物群(gut microbiota)。可以使用豌豆纖維、低聚果糖和菊粉的混合物。纖維可以以5. 5-7. 5g/L的量存在。本發(fā)明的組合物可以具有在175 : I至190 : I范圍中的NPC N比率。非蛋白質(zhì)千卡路里與氮的比率(NPC N)通過計算姆天供應(yīng)的氮克數(shù)(IgN = 6. 25g蛋白質(zhì))并用總的非蛋白質(zhì)千卡路里除以氮克數(shù)進(jìn)行計算。一般地，具有在80 I范圍中的NPC N比率的營養(yǎng)增補(bǔ)物用于最嚴(yán)重應(yīng)激的患者，在100 I范圍中的NPC N比率用于嚴(yán)重應(yīng)激的患者，并且在150 I范圍中的NPC N比率用于未應(yīng)激的患者。
對于兒童，通常不需要太高的蛋白質(zhì)含量。然而，在嚴(yán)重應(yīng)激的兒童的情況下，NPC N比率可以相應(yīng)地調(diào)整。本發(fā)明的組合物可以具有在4. 5 1-5.5 I范圍中的n6 n3脂肪酸比率的脂質(zhì)來源。一般地，本發(fā)明的組合物包含約83-87%游離水。游離水是滿足最低限度液體需求所必需的。一般地，GI功能受損的兒童飲水不夠。本發(fā)明的組合物可以用于下述的營養(yǎng)管理腸切除術(shù)、囊性纖維化、腦癱、腫瘤、胰腺炎、HIV/AIDS、吸收不良、短腸綜合征、發(fā)育遲滯、營養(yǎng)不良、IBD (炎性腸病)、脂肪吸收不良、便秘、Crohn氏病、腹瀉、胃腸道受損、谷蛋白不耐受、消化和吸收受損、乳糖不耐受、限制的腸功能、兒科胃腸道病癥、專門兒科營養(yǎng)需要、和/或生長遲滯(failure to thrive) 0本發(fā)明的組合物可以部分包含或僅包含非復(fù)制的益生微生物。 本發(fā)明人驚訝地發(fā)現(xiàn)，例如就免疫加強(qiáng)效應(yīng)而言和/或就抗炎效應(yīng)而言，非復(fù)制益生微生物甚至可以比復(fù)制性益生微生物更有效。這是令人驚訝的，因?yàn)橐嫔１欢x為“當(dāng)以足夠量施用時，對宿主賦予健康益處的活微生物”(FA0/WH0指南)。絕大多數(shù)的出版文獻(xiàn)涉及活益生菌。此外，有幾項(xiàng)研究調(diào)查了由非復(fù)制性細(xì)菌遞送的健康益處，并且其中大多數(shù)指出，益生菌的滅活(例如通過熱處理)會導(dǎo)致?lián)Q的益生菌的健康益處的喪失(Rachmilewitz, D.等人，2004, Gastroenterology 126 :520-528 ；Castagliuolo 等人，2005, FEMS TmmunoI. Med.Microbiol. 43 :197-204 ；Gill, H. S.和 K. J. Rutherfurd,2001, Br. J. Nutr. 86 :285-289 ；Kaila，M.等人，1995，Arch. Dis. Child 72:51-53.)。某些研究顯示被殺死的益生菌可以保留某些健康作用(Rachmilewitz,D.等人，2004,Gastroenterology 126 :520-528 ;Gill,
H.S.和 K. J. Rutherfurd, 2001, Br. J. Nutr. 86 :285-289)，但明顯地，活益生菌迄今為止在本領(lǐng)域中被公認(rèn)為更有效。根據(jù)本發(fā)明的組合物可以包含任何有效量的益生微生物，例如相應(yīng)于約106_1012cfu/g 干重的量。益生微生物可以是非復(fù)制性益生微生物?！胺菑?fù)制”益生微生物包括已經(jīng)熱處理的益生細(xì)菌。這包括滅活的、死的、無生活力的和/或作為碎片例如DNA、代謝物、細(xì)胞質(zhì)化合物和/或細(xì)胞壁物質(zhì)存在的微生物?！胺菑?fù)制”意指通過經(jīng)典鋪平板方法無法檢測到活細(xì)胞和/或菌落形成単位。經(jīng)典鋪平板方法在微生物學(xué)教科書中有總結(jié)James Monroe Jay, Martin J. Loessner, DavidA. Golden. 2005. Modern food microbiology.弟 7版，Springer Science, New York, N. Y.第790頁。一般地，活細(xì)胞的不存在可以如下顯示在用不同濃度的細(xì)菌制劑(‘非復(fù)制’樣品)接種和在合適條件下孵育(有氧和/或缺氧大氣，至少24小時)后，在瓊脂平板上無可見菌落或在液體生長培養(yǎng)基中無增加的濁度。為了本發(fā)明的目的，益生菌定義為“對宿主的健康(health)或康健(well-being)具有有利作用的微生物細(xì)胞制劑或微生物細(xì)胞組分”。(Salminen S, Ouwehand A. BennoY.等人“Probiotics :how should they be defined”Trends Food Sci. Technol. 1999 10107-10)。使用非復(fù)制益生微生物的可行性提供了幾個優(yōu)點(diǎn)。在嚴(yán)重免疫受損患者中，活益生菌的使用可能因發(fā)展菌血癥的潛在危險而在異常的情況下受限制。非復(fù)制益生菌可以使用而無任何問題。此外，非復(fù)制益生微生物的提供允許熱重構(gòu)同時保留健康益處。本發(fā)明的組合物包含足以至少部分地產(chǎn)生健康益處的量的益生微生物和/或非復(fù)制益生微生物。足以完成這點(diǎn)的量定義為“治療有效劑量”。對于這個目的有效的量將取決于本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的許多因素，例如患者的重量和一般健康狀態(tài)，以及食物基質(zhì)的 影響。在預(yù)防應(yīng)用中，根據(jù)本發(fā)明的組合物施用于對病癥敏感或有罹患病癥危險的消費(fèi)者，其施用量足以至少部分地降低發(fā)展該病癥的危險。此量定義為“預(yù)防有效劑量”。再次，精確量取決于許多因素例如患者的健康狀態(tài)和重量，以及食物基質(zhì)的影響。本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠適當(dāng)?shù)卣{(diào)整治療有效劑量和/或預(yù)防有效劑量。一般而言，本發(fā)明的組合物含有治療有效劑量和/或預(yù)防有效劑量的益生微生物和/或非復(fù)制益生微生物。一般地，治療有效劑量和/或預(yù)防有效劑量在約0，005mg-1000mg益生微生物和/或非復(fù)制益生微生物/日劑量的范圍內(nèi)。就數(shù)值量而言，“短時間高溫”處理的非復(fù)制微生物可以以對應(yīng)于IO4-IO12等價cfu/g干組合物的量存在于組合物中。明顯地，非復(fù)制微生物不形成菌落，因此，這個術(shù)語應(yīng)理解為得自104-1012cfu/g復(fù)制細(xì)菌的非復(fù)制微生物量。這包括滅活的、無生活力的或死的、或作為碎片例如DNA或細(xì)胞壁或細(xì)胞質(zhì)化合物存在的微生物。換言之，組合物含有的微生物的數(shù)量以該數(shù)量的微生物的菌落形成能力(cfu)來表達(dá)，就如同所有微生物是活的一樣，而不管它們事實(shí)上是否是非復(fù)制性的，例如滅活的或死的、成碎片的、或是這些狀態(tài)的任何或所有的混合物。優(yōu)選地，非復(fù)制微生物以等價于IO4-IO9CfVg干組合物的量，更加優(yōu)選以等價于105-109cfu/g干組合物的量存在。益生菌可以通過本領(lǐng)域已知的任何方法而成為非復(fù)制的。目前可用于使益生菌菌株成為非復(fù)制性的技術(shù)通常有熱處理、Y-輻射、UV光或化學(xué)試劑(福爾馬林、多聚甲醛)的使用。優(yōu)選使用在食品エ業(yè)的エ業(yè)化環(huán)境下相對易于應(yīng)用的技術(shù)來使益生菌成為非復(fù)制性的。目前上市的含有益生菌的大多數(shù)產(chǎn)品是在其生產(chǎn)過程中被熱處理過的。因此，有利的是，能夠連同所生產(chǎn)的產(chǎn)品一起或至少以相似方式熱處理益生菌，同時益生菌保留或改善其對于消費(fèi)者的有利特性或甚至獲得新的有利特性。然而，益生微生物通過熱處理的滅活在文獻(xiàn)中一般與益生活性的至少部分喪失相關(guān)。本發(fā)明人目前已驚訝地發(fā)現(xiàn)，致使益生微生物非復(fù)制(例如通過熱處理)，并不導(dǎo)致益生菌健康益處的喪失，而是——相反地——可以增強(qiáng)已有的健康益處且甚至生成新的健康益處。因此，本發(fā)明的一個實(shí)施方案是組合物，其中非復(fù)制益生微生物已通過熱處理而成為非復(fù)制性的。
此熱處理可以在至少71. 5°C執(zhí)行至少I秒。可以使用長期熱處理或短期熱處理。在エ業(yè)規(guī)模中，目前通常的短期熱處理例如UHT樣熱處理是優(yōu)選的。這類熱處理減少細(xì)菌載量，并且減少加工時間，從而減少對營養(yǎng)物的破壞。本發(fā)明人首次證實(shí)，高溫短時間熱處理的益生微生物，無論其初始性質(zhì)如何，均顯示出抗炎免疫譜/性質(zhì)。特別地，通過該熱處理，可以發(fā)展新的抗炎譜/性質(zhì)，或增強(qiáng)已有的抗炎譜/性質(zhì)。因此，目前可以通過使用對應(yīng)于一般エ業(yè)上適用的熱處理的特定熱處理參數(shù)，生成具有抗炎免疫譜的非復(fù)制益生微生物，即使活的對應(yīng)微生物不是抗炎菌株。因此，例如，熱處理可以是在約71. 5_150°C高溫處理約1-120秒。高溫處理可以是高溫/短時間(HTST)處理或超高溫(UHT)處理。 可以對益生微生物實(shí)施在約71. 5_150°C約1-120秒的短期高溫處理。更優(yōu)選可以對微生物實(shí)施在約90_140°C，例如90_120°C，約1_30秒的短期高溫處理。這種高溫處理致使微生物至少部分地非復(fù)制。高溫處理可以在正常大氣壓下執(zhí)行，但也可以在高壓下執(zhí)行。一般壓カ范圍是1-50巴，優(yōu)選1-10巴，更加優(yōu)選2-5巴。明顯地，優(yōu)選的是，當(dāng)應(yīng)用熱時，在液體或固體的培養(yǎng)基中對益生菌進(jìn)行熱處理。待應(yīng)用的理想壓カ因此將取決于提供微生物時微生物所在的組合物的性質(zhì)和使用的溫度。高溫處理可以在約71. 5_150°C、優(yōu)選約90_120°C、更加優(yōu)選約120_140°C的溫度范圍中執(zhí)行。高溫處理可以執(zhí)行約1-120秒、優(yōu)選約1-30秒、更加優(yōu)選約5-15秒的短時間。該給定的時幀是指對益生微生物施加該給定溫度的時間。注意，取決于提供微生物的組合物的性質(zhì)和量且取決于使用的加熱器的構(gòu)造，熱應(yīng)用時間可以不同。然而，一般地，本發(fā)明的組合物和/或微生物通過高溫短時間(HTST)處理、巴氏瞬間滅菌(flash pasteurization)、或超高溫(UHT)處理來進(jìn)行處理。UHT處理是通過將組合物在超過135°C (275 °F )的溫度(這是殺死奶中的細(xì)菌孢子所需的溫度)加熱約1-10秒的短時間，涉及至少部分地滅菌組合物的超高溫加工或超熱處理(兩者均縮寫為UHT)。例如，使用超過135°C的溫度以這種方式加工奶，允許在該必要的保持時間(至2-5秒)中細(xì)菌載量的減少，從而使得連續(xù)流操作成為可能。存在2種王要類型的UHT系統(tǒng)直接和間接系統(tǒng)。在直接系統(tǒng)中，通過蒸汽注射或蒸汽輸注，處理產(chǎn)品；而在間接系統(tǒng)中，使用板式換熱器、管式換熱器或刮面式換熱器來熱處理產(chǎn)品。UHT系統(tǒng)的組合可以在產(chǎn)品制備過程中的任何步驟或多個步驟應(yīng)用。HTST處理定義如下(高溫/短時間):設(shè)計以達(dá)到奶中活微生物數(shù)目的5-log減少，即，殺死99，9999%的活微生物，的巴氏滅菌方法。這被認(rèn)為足以破壞幾乎所有酵母、霉菌和常見腐敗細(xì)菌，并且還確保對常見致病性耐熱生物產(chǎn)生足夠破壞。在HTST過程中，將奶加熱至 71. 7V (161 0F ) 15-20 秒。巴氏瞬間滅菌法是易腐飲料如果汁和蔬菜汁、啤酒和乳制品的熱巴氏滅菌方法。它在填充到容器內(nèi)之前完成，以便殺死腐敗微生物，使得產(chǎn)品更安全且延長其貨架期。液體以受控的連續(xù)流進(jìn)行移動，同時被施加于71. 50C (160 0F )-74°C (165 0F )的溫度約15-30秒。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語“短時間高溫處理”應(yīng)包括例如高溫短時間(HTST)處理、UHT處理和巴氏瞬間滅菌。因?yàn)榇藷崽幚硖峁┝司哂懈纳频目寡鬃V的非復(fù)制益生菌，所以本發(fā)明的組合物可以用于炎性病癥的預(yù)防或治療中?？梢酝ㄟ^本發(fā)明的組合物治療或預(yù)防的炎性病癥并無特別的限制。例如，它們可以選自急性炎癥例如敗血癥；燒傷；和慢性炎癥例如炎性腸病，例如Crohn氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、隱窩炎(pouchitis);壞死性小腸結(jié)腸炎；皮膚炎癥例如UV或化學(xué)品誘導(dǎo)的皮膚炎癥、濕疹、反應(yīng)性皮膚(reactive skin);腸激惹綜合征；眼炎癥；變態(tài)反應(yīng)、哮喘；及其組
ム
ロ o如果長期熱處理用于致使益生微生物非復(fù)制，那么此熱處理可以在約70_150°C的溫度范圍中執(zhí)行約3分鐘-2小時，優(yōu)選在約80-140°C的范圍中約5分鐘-40分鐘。雖然現(xiàn)有技術(shù)一般教導(dǎo)，就發(fā)揮其益生特性而言，通過長期熱處理致使非復(fù)制的細(xì)菌通常比活細(xì)胞效カ低，但本發(fā)明人能夠證實(shí)與其活性對應(yīng)物比較，熱處理的益生菌在刺激免疫系統(tǒng)方面更佳。本發(fā)明還涉及包含益生微生物的組合物，所述益生微生物已經(jīng)通過在至少約70°C熱處理至少約3分鐘而是非復(fù)制性的。非復(fù)制益生菌的免疫增強(qiáng)效應(yīng)通過體外免疫譜分析而得到證實(shí)。所用的體外模型使用來自人外周血單核細(xì)胞(PBMCs)的細(xì)胞因子譜分析，該模型在本領(lǐng)域中被公認(rèn)為是用于測試免疫調(diào)節(jié)化合物的標(biāo)準(zhǔn)模型(Schultz等人,2003, Journal of Dairy Research70,165-173 ;Taylor 等人，2006，Clinical and Experimental Allergy,36,1227-1235 ；Kekkonen 等人，2008, World Journal of Gastroenterology, 14,1192-1203)。該體外PBMC分析法已被幾個作者/研究組用于例如根據(jù)益生菌的免疫譜，即其抗炎或促炎特征，來分類益生菌(Kekkonen等人,2008, World Journal ofGastroenterology, 14,1192-1203)。例如，該分析法已顯示允許預(yù)測益生菌候選物在腸道結(jié)腸炎小鼠模型中的抗炎效應(yīng)(Foligne, B.等人,2007, World J. Gastroenterol. 13 236-243)。此外，該分析法被常規(guī)用作臨床試驗(yàn)中的讀出手段，并且已經(jīng)被證實(shí)導(dǎo)致與臨床結(jié)果相一致的結(jié)果(Schultz 等人，2003, Journal of Dairy Research 70,165-173 ；Taylor等人，2006, Clinical and Experimental Allergy,36，1227-1235)。變態(tài)反應(yīng)疾病在過去數(shù)十年一直在穩(wěn)步地増加，目前被WHO視為流行病。一般地，變態(tài)反應(yīng)被認(rèn)為起因于免疫系統(tǒng)的Thl和Th2應(yīng)答之間的失衡，導(dǎo)致強(qiáng)烈地偏向Th2介質(zhì)的產(chǎn)生。因此，通過恢復(fù)免疫系統(tǒng)的Thl和Th2臂之間的合適平衡，可以減輕、下調(diào)或防止變態(tài)反應(yīng)。這提示減少Th2應(yīng)答或增強(qiáng)(至少瞬時地)Thl應(yīng)答的必要性。后者將是免疫加強(qiáng)應(yīng)答的特征，通常伴隨例如更高水平的IFN Y、TNF-a和IL-12。(Kekkonen等人，2008，World Journal of Gastroenterology,14,1192-1203 ；Viljanen M.等人，2005, Allergy,60,494-500)因此，本發(fā)明的組合物允許治療或預(yù)防與受損的(compromised)免疫防御有關(guān)的病癥。
相應(yīng)地，可以通過本發(fā)明的組合物治療或預(yù)防的與受損的免疫防御有關(guān)的病癥并無特別的限制。例如，它們可以選自感染，特別是細(xì)菌、病毒、真菌和/或寄生物感染；吞噬細(xì)胞缺陷；低至嚴(yán)重的免疫抑制水平，例如由應(yīng)激或免疫抑制藥物、化療或放療誘導(dǎo)的那些 ’天然的低免疫活性的免疫系統(tǒng)狀態(tài)，例如新生兒的免疫系統(tǒng)；變態(tài)反應(yīng)；及其組合。本發(fā)明中所述的組合物還允許增強(qiáng)患者對疫苗特別是ロ服疫苗的應(yīng)答。任何量的非復(fù)制微生物都是有效的。然而，通常優(yōu)選至少90%、優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少98%、最優(yōu)選至少99%、理想地至少99. 9%、最理想地所有的益生菌是非復(fù)制的。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，所有的微生物是非復(fù)制的。因此，在本發(fā)明的組合物中，至少90%、優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少98%、最優(yōu)選至少99%、理想地至少99. 9%、最理想所有的益生菌可以是非復(fù)制的。 所有的益生微生物都可以用于本發(fā)明的目的。例如，益生微生物可以選自雙歧桿菌屬(bifidobacteria)、乳桿菌屬(Iactobacilli)、丙酸桿菌屬(propionibacteria)或其組合，例如長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)、乳雙歧桿菌(Bifidobacterium lactis)、動物雙歧桿菌(Bifidobacterium animalis)、短雙歧桿菌(Bifidobacterium breve)、嬰兒雙歧桿菌(Bifidobacterium infantis)、青春雙歧桿菌(Bifidobacterium adolescentis)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)、干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)、副干酪乳桿菌(Lactobacillus paracasei)、唾液乳桿菌(Lactobacillus salivarius)、羅伊氏乳桿菌(Lactobacillus reuteri)、鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)、約氏乳桿菌(Lactobacillus johnsonii)、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、雙こ酸乳球菌(Lactococcus diacetylactis)、乳脂乳球菌(Lactococcus cremoris)、保加利亞乳桿菌(Lactobacillus bulgaricus)、瑞士乳桿菌(Lactobacillus helveticus)、德氏乳桿菌(Lactobacillus delbrueckii)、大腸桿菌(Escherichia coli)和/或其混合物。本發(fā)明的組合物可以例如包含益生微生物，所述的益生微生物選自長雙歧桿菌NCC 3001、長雙歧桿菌NCC 2705、短雙歧桿菌NCC 2950、乳雙歧桿菌NCC 2818、約氏乳桿菌Lai、副干酪乳桿菌NCC 2461、鼠李糖乳桿菌NCC 4007、羅伊氏乳桿菌DSM17983、羅伊氏乳桿菌ATCC55730、嗜熱鏈球菌NCC 2019、嗜熱鏈球菌NCC 2059、干酪乳桿菌NCC 4006、嗜酸乳桿菌NCC 3009、干酪乳桿菌ACA-DC 6002 (NCC 1825)、大腸桿菌Nissle、保加利亞乳桿菌NCC 15、乳酸乳球菌NCC 2287或其組合。所有這些菌株或是在布達(dá)佩斯條約(Budapest treaty)下保藏和/或是可商購獲得的。在布達(dá)佩斯條約下保藏的菌株如下長雙歧桿菌 NCC 3001:ATCC BAA-999
長雙歧桿菌 NCC 2705:CNCM 1-2618
短雙歧桿菌 NCC 2950CNCM 1-3865
乳雙歧桿菌 NCC 2818:CNCM 1-3446
副千酪乳桿菌NCC 2461:CNCM 1-2116
鼠李糖乳桿菌 NCC 4007:CGMCC 1.3724 嗜熱鏈球菌 NCC 2019:CNCM 1-1422
嗜熱鏈球菌 NCC 2059:CNCM 1-4153
乳酸乳球菌 NCC 2287:CNCM 1-4154
干酪乳桿菌 NCC 4006:CNCM 1-1518
干酪乳桿菌 NCC 1825:ACA-DC 6002
嗜酸乳桿菌 NCC 3009:ATCC 700396
保加利亞乳桿菌NCC 15:CNCM 1-1198
約氏乳桿菌LalCNCM 1-1225
羅伊氏乳桿菌DSM17983DSM17983
羅伊氏乳桿菌ATCC55730ATCC55730
大腸桿菌 Nissle 1917:DSM 6601本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解它們可以自由地組合本文描述的所有本發(fā)明特征，而不脫
離所公開的本發(fā)明的范圍。根據(jù)下列實(shí)施例和附圖，本發(fā)明的進(jìn)ー步的優(yōu)點(diǎn)和特征是顯而易見的。附圖簡述圖IA和B表示用“短時高溫”處理的益生菌的抗炎免疫譜的增強(qiáng)。圖2表示非抗炎的益生菌株在用“短時高溫”處理后變成抗炎的，即表現(xiàn)出顯著的
體外抗炎免疫譜。圖3A和B表示商購可獲得的產(chǎn)品中使用的益生菌株在用“短時高溫”處理后體外
表現(xiàn)出增強(qiáng)的或新的抗炎免疫譜。圖4A和B表不乳品起子菌株(diary starter strains)(即Lcl起子菌株)在高
溫?zé)崽幚砗篌w外表現(xiàn)出增強(qiáng)的或新的抗炎免疫譜。圖5表示非抗炎的益生菌株在用HTST處理后體外表現(xiàn)出抗炎免疫譜。圖6 :使用活的和熱處理(140°C，15秒)形式的益生菌株和乳品起子菌株產(chǎn)生的
PBMC數(shù)據(jù)(IL-12p40、IFN-y、TNF-a、IL-10)的主成分分析。每個點(diǎn)表示活的或熱處理的
一種菌株(通過其NCC號或名稱標(biāo)識)。圖7表示活的和熱處理(85°C，20分鐘)的菌株的IL-12p40/IL-10比例?？偟膩碚f，相比本發(fā)明的“短時高溫”處理，85°C熱處理20分鐘引起IL-12p40/IL-10比例的增加(圖 1、2、3、4 和 5)。圖8表示用熱處理細(xì)菌刺激的人PBMCs的體外細(xì)胞因子分泌的增加。圖9表示在用鹽水攻擊(challenged)的OVA-致敏小鼠(陰性對照)、用OVA攻擊的OVA-致敏小鼠(陽性對照)和用OVA攻擊且用熱處理或活的短雙歧桿菌NCC2950處理的OVA-致敏小鼠中觀察到的腹瀉強(qiáng)度的百分?jǐn)?shù)。結(jié)果以腹瀉強(qiáng)度百分?jǐn)?shù)顯示(由4個獨(dú)立試驗(yàn)計算出的平均值土SEM)，100%的腹瀉強(qiáng)度對應(yīng)于陽性對照組(變應(yīng)原致敏和攻擊)發(fā)生的癥狀。 實(shí)施例
實(shí)施例I :方法學(xué)細(xì)菌制劑活的益生菌對宿主免疫系統(tǒng)的健康益處通常被認(rèn)為是菌株特異性的。體外誘導(dǎo)高水平IL-10和/或誘導(dǎo)低水平促炎細(xì)胞因子的益生菌(PBMC分析法)已經(jīng)顯示是有效的體內(nèi)抗炎菌株(Foligne, B.等人，2007, World J. Gastroenterol. 13 :236-243)。使用數(shù)種益生菌株來研究熱處理的益生菌的抗炎特性。這些菌株是長雙歧桿菌NCC 3001、長雙歧桿菌NCC 2705、短雙歧桿菌NCC 2950、乳雙歧桿菌NCC 2818、副干酪乳桿菌NCC 2461、鼠李糖乳桿菌NCC 4007、干酪乳桿菌NCC 4006、嗜酸乳桿菌NCC 3009、干酪乳桿菌ACA-DC 6002 (NCC 1825)和大腸桿菌Nissle。還測試了數(shù)種起子培養(yǎng)菌株，包括ー些商業(yè)用于生產(chǎn)Nestl6Lcl發(fā)酵產(chǎn)品的菌株嗜熱鏈球菌NCC 2019、嗜熱鏈球菌NCC 2059、保加利亞乳桿菌NCC 15和乳酸乳球菌NCC 2287。細(xì)菌細(xì)胞是在5-15L生物反應(yīng)器中在針對每種菌株優(yōu)化的條件下培養(yǎng)的。所有的一般細(xì)菌生長培養(yǎng)基均是可用的。這類培養(yǎng)基是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。當(dāng)pH調(diào)至5. 5時，連續(xù)加入30%堿溶液(NaOH或Ca(OH)2)。當(dāng)足夠時，通過用CO2氣體處理頂部空間來維持缺氧條件。大腸桿菌是在標(biāo)準(zhǔn)的需氧條件下培養(yǎng)的。通過離心(5，000Xg，4°C )收集細(xì)菌細(xì)胞,并且重懸于足夠體積的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中，以便達(dá)到終濃度約109-101Qcfu/mL。部分制劑用15%甘油凍存于_80°C。另ー部分細(xì)胞通過以下進(jìn)行熱處理-超高溫140°C，15秒；通過間接蒸汽注射。-高溫短時(HTST):74°C、90°C和120°C，15秒，通過間接蒸汽注射。-水浴中的長時低溫(85°C，20分鐘)。熱處理后，將樣品凍存于_80°C，直至使用。細(xì)菌制劑的體外免疫譜分析評估活的和熱處理的細(xì)菌制劑的免疫譜(即體外誘導(dǎo)人血細(xì)胞分泌特定細(xì)胞因子的能力)。從血液過濾器分離人外周血單核細(xì)胞(PBMCs)。通過細(xì)胞密度梯度分離后，收集單核細(xì)胞并且用Hank平衡鹽溶液洗滌兩次。然后將細(xì)胞重懸于補(bǔ)充有10%胎牛血清(Bioconcept,巴黎,法國)>1 % L-谷氨酰胺(Sigma)、I %青霉素/鏈霉素(Sigma)和
0.I %慶大霉素(Sigma)的Iscove改良的Dulbecco培養(yǎng)基(IMDM, Sigma)中。然后將PBMCs (7 X IO5個細(xì)胞/孔)與活的和熱處理的細(xì)菌(相當(dāng)于7 X IO6Cfu/孔)在48孔板中孵育36小吋?；畹暮蜔崽幚淼募?xì)菌的作用是在來自8位単獨(dú)供體的PBMCs上測試的，分為兩個獨(dú)立試驗(yàn)。孵育36小時后，將培養(yǎng)板冷凍并且保持在-20°C，直至細(xì)胞因子測量。細(xì)胞因子譜分析是在活的細(xì)菌和它們的熱處理的對應(yīng)物中平行進(jìn)行的(即在相同批次的PBMCs上在相冋試驗(yàn)中)。按照供應(yīng)商的說明，通過ELISA(R&D DuoSet Human IL-10, BD OptEIA HumanIL12p40, BD OptEIA Human TNFa，BD OptEIA Human IFN- y )測定 36 小時孵育后細(xì)胞培養(yǎng)物上清液中細(xì)胞因子(IFNi、IL-12p40、TNF-a和IL-10)的水平。IFNi、IL_12p40和TNF-a是促炎細(xì)胞因子，而IL-IO是有力的抗炎介質(zhì)。結(jié)果是以4位単獨(dú)供體的平均值(pg/mL)+/-SEM表示的，并且是各用4位供體進(jìn)行的兩個單獨(dú)試驗(yàn)的代表。計算每個菌 株的IL-12p40/IL-10的比值，作為體內(nèi)抗炎作用的預(yù)測值(Folign6，B.等人，2007，WorldJ. Gastroenterol. 13 :236-243)。將通過ELISA(參見上面)測定的每個菌株的細(xì)胞因子數(shù)值(pg/mL)轉(zhuǎn)移至BioNumerics v5. 10 軟件(Applied Maths, Sint-Martens-Latem, Belgium)中。對該組數(shù)據(jù)進(jìn)行了主成分分析(PCA,維技術(shù)(dimensioning technique))。該分析包括減去特征值的平均值和除以特征值的方差(Subtraction of the averages over the characters anddivision by the variances over the characters were included in tnis analysis)。結(jié)果超高溫(UHT) /高溫短時(HTST)-樣處理產(chǎn)生的抗炎譜 將在研的益生菌株進(jìn)行一系列的熱處理(超高溫(UHT)、高溫短時(HTST)、和850C 20分鐘)，并且在體外將它們的免疫譜與活細(xì)胞的免疫譜進(jìn)行比較。當(dāng)與人PBMC(圖
1、2、3、4和5)溫育時，活的微生物(益生菌和/或乳品起子培養(yǎng)物)誘導(dǎo)不同水平的細(xì)胞因子產(chǎn)生。這些微生物的熱處理以溫度依賴方式改變了 PBMC產(chǎn)生的細(xì)胞因子的水平。“短時高溫”處理(120°C或140°C，15秒)產(chǎn)生具有抗炎免疫譜的非復(fù)制細(xì)菌(

圖1、2、3和4)。事實(shí)上，UHT-樣處理的菌株(140°C，15秒)誘導(dǎo)了更少的促炎細(xì)胞因子(TNF-a、IFN-Y、IL-12p40)，而維持或誘導(dǎo)額外的IL-10產(chǎn)生(相比活的對應(yīng)物)。相比活細(xì)胞，任何UHT-樣處理的菌株產(chǎn)生的IL-12p40/IL-10比例都更低(圖1、2、3和4)。對于以HTST-樣處理法處理的細(xì)菌，該觀察也是對的，所述的HTST-樣處理即120°C進(jìn)行15秒(圖1、2、3和4)，或74°C和90°C進(jìn)行15秒(圖5)。熱處理(UHT-樣或HTST-樣處理)對益生菌株(圖1、2、3和5)和乳品起子培養(yǎng)物(圖4)的體外免疫譜具有相似的影響。對活的和熱處理(140°C，15秒)的益生菌和乳品起子菌株產(chǎn)生的PBMC數(shù)據(jù)的主成分分析表明，活菌株均沿著X軸分布，說明菌株在體外展示出非常不同的免疫譜，促炎細(xì)胞因子的從低(左側(cè))到高(右側(cè))的誘導(dǎo)者。熱處理的菌株聚集在圖的左側(cè)，這表明熱處理的菌株誘導(dǎo)了少得多的促炎細(xì)胞因子(圖6)。通過比較，85°C熱處理20分鐘的細(xì)菌比活細(xì)胞誘導(dǎo)更多的促炎細(xì)胞因子和更少的IL-10，從而導(dǎo)致更高的IL-12p40/IL-10比例(圖7)。UHT-樣和HTST-樣處理增強(qiáng)或產(chǎn)生抗炎譜。UHT和HTST處理的菌株表現(xiàn)出抗炎譜，不管它們各自最初的免疫譜(活細(xì)胞)如何。已知具有體內(nèi)抗炎并且體外表現(xiàn)出抗炎譜的益生菌株(長雙歧桿菌NCC 3001、長雙歧桿菌NCC 2705、短雙歧桿菌NCC 2950、乳雙歧桿菌NCC 2818)在“短時高溫”處理后表現(xiàn)出增強(qiáng)的體外抗炎譜。如圖I所示，UHT-樣處理的雙歧桿菌屬菌株的IL-12p40/IL-10比例低于活對應(yīng)細(xì)菌的比例，從而表明UHT-樣處理的樣品的改善的抗炎譜。更引人注目地，在非抗炎性活菌株中也證實(shí)了通過UHT-樣和HTST-樣處理可以產(chǎn)生抗炎譜。活的鼠李糖乳桿菌NCC 4007和副干酪乳桿菌NCC 2461表現(xiàn)出體外高的IL-12p40/IL_10比例(圖2和5)。兩種活菌株顯示出不能防止小鼠中TNBS-誘導(dǎo)的結(jié)腸炎。在“短時高溫”處理(UHT或HTST)后鼠李糖乳桿菌NCC 4007和副干酪乳桿菌NCC 2461誘導(dǎo)的IL-12p40/IL_10比例急劇下降，達(dá)到與雙歧桿菌屬菌株獲得的同樣低的水平。這些低的IL-12p40/IL-10比例的原因是低水平的IL-12p40產(chǎn)生并且組合無變化(鼠李糖乳桿菌NCC 4007)或急劇誘導(dǎo)的IL-10分泌(副干酪乳桿菌NCC 2461)(圖2)。結(jié)果-UHT-樣和HTST-樣熱處理可以增強(qiáng)活微生物的抗炎譜/特性(例如長雙歧桿菌NCC 2705、長雙歧桿菌NCC 3001、短雙歧桿菌NCC 2950、乳雙歧桿菌NCC 2818)
-UHT-樣和HTST-樣熱處理可以使非抗炎的活微生物產(chǎn)生抗炎譜/特性(例如，鼠李糖乳桿菌NCC 4007、副干酪乳桿菌NCC 2461、乳品起子嗜熱鏈球菌NCC 2019)-從可商購獲得的產(chǎn)品中分離的菌株(包括益生的大腸桿菌菌株)也證實(shí)了抗炎譜/特性(圖3A&B)。UHT/HTST-樣處理的影響對于所有測試的益生菌和乳品起子是類似的，例如乳桿菌屬、雙歧桿菌屬和鏈球菌屬。UHT/HTST-樣處理已經(jīng)應(yīng)用于數(shù)種表現(xiàn)出不同體外免疫譜的乳桿菌、雙歧桿菌和鏈球菌。UHT/HTST-樣處理后的所有菌株比它們的活對應(yīng)菌株都誘導(dǎo)了更少的促炎細(xì)胞因子(圖1、2、3、4、5和6)，這證實(shí)了 UHT/HTST-樣處理對這些所得非復(fù)制細(xì)菌的免疫特性的影響可以概括至所有益生菌，特別是乳桿菌和雙歧桿菌以及特定的大腸桿菌菌株，和所有乳品起子培養(yǎng)物，特別是鏈球菌、乳球菌和乳桿菌。實(shí)施例2 方法學(xué)細(xì)菌制劑五種益生菌株用于研究非復(fù)制益生菌的免疫增強(qiáng)特性3種雙歧桿菌(長雙歧桿菌NCC3001、乳雙歧桿菌NCC2818、短雙歧桿菌NCC2950)和2種乳桿菌(副干酪乳桿菌NCC2461,鼠李糖乳桿菌NCC4007)。細(xì)菌細(xì)胞生長在MRS上，于37°C分批發(fā)酵16-18小時，無pH控制。將細(xì)菌細(xì)胞旋轉(zhuǎn)沉降(5，000Xg，4°C )，并且重懸于磷酸鹽緩沖液中，之后在鹽水中稀釋以達(dá)到終濃度約10E10cfu/mLo將長雙歧桿菌NCC3001、乳雙歧桿菌NCC2818、副干酪乳桿菌NCC2461、鼠李糖乳桿菌NCC4007在85°C水浴中熱處理20分鐘。將短雙歧桿菌NCC2950在90°C水浴中熱處理30分鐘。將熱處理的細(xì)菌懸浮液等分并且凍存于_80°C直至使用。活細(xì)菌在PBS-甘油15%中存于_80°C直至使用。細(xì)菌制劑的體外免疫譜分析評估活的和熱處理的細(xì)菌制劑的免疫譜/特性(即，體外誘導(dǎo)人血細(xì)胞分泌特定細(xì)胞因子的能力)。從血液過濾器分離人外周血單核細(xì)胞(PBMCs)。通過細(xì)胞密度梯度分離后，收集單核細(xì)胞并且用Hank平衡鹽溶液洗漆兩次。然后將細(xì)胞重懸于補(bǔ)充有10%胎牛血清(Bioconcept,巴黎，法國)、I % L-谷氨酰胺(Sigma)、I %青霉素/鏈霉素(Sigma)和0. I %慶大霉素(Sigma)的Iscove改良的Dulbecco培養(yǎng)基(IMDM, Sigma)中。然后將PBMCs (7 X IO 5個細(xì)胞/孔)與活的和熱處理的細(xì)菌(相當(dāng)于7 X IO6Cfu/孔)在48孔板中培養(yǎng)36小吋?；畹暮蜔崽幚淼募?xì)菌的作用是在來自8位単獨(dú)供體的PBMCs上測試的，分為兩個獨(dú)立試驗(yàn)。培養(yǎng)36小時后，將培養(yǎng)板冷凍并且保持在-20°C，直至細(xì)胞因子測量。細(xì)胞因子譜分析是在活的細(xì)菌和它們的熱處理對應(yīng)細(xì)菌中平行進(jìn)行的(即在相同批次PBMCs上在相同試驗(yàn)中)。按照供應(yīng)商的說明，通過ELISA (R&D DuoSet Human IL-10, BD OptEIA HumanIL12p40, BD OptEIA Human TNF, BD OptEIA Human IFN- y )測定培養(yǎng) 36 小時后細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子(IFN- y , IL-12p40、TNF-a 和 IL-10)的水平。IFN-Y、IL_12p40 和TNF-a是促炎細(xì)胞因子，而IL-IO是有力的抗炎介質(zhì)。結(jié)果是以4位単獨(dú)供體的平均值(pg/mL) +/-SEM表示的，并且是各用4位供體進(jìn)行的兩個單獨(dú)試驗(yàn)的代表?；畹暮蜔崽幚淼亩屉p歧桿菌NCC2950在防止變應(yīng)性腹瀉中的體內(nèi)作用變應(yīng)性腹瀉的小鼠模型用于測試短雙歧桿菌NCC2950的Thl促進(jìn)作用(BrandtE. B等人.JCI 2003; 112 (II) :1666-1667)。致敏(以14天的間隔，于第0和14天，2次腹膜內(nèi)注射卵白蛋白(OVA)和硫酸鋁鉀)后，將雄性Balb/c小鼠用OVA ロ服攻擊6次(第27、
29、32、34、36、39天)，導(dǎo)致短暫的臨床癥狀(腹瀉)和免疫參數(shù)變化(總IgE、OVA特異性IgE、小鼠肥大細(xì)胞蛋白酶I即MMCP-I的血漿濃度)。在OVA致敏前(第-3、-2、-1、0天和第11、12、13和14天)和攻擊期內(nèi)(第23至39天)將活的或90°C熱處理30分鐘的短雙歧桿菌NCC2950通過管飼法施用4天。使用毎日細(xì)菌劑量約IO9菌落形成単位(cfu)或等價的cfu/小鼠。益里熱處理后對“促炎”細(xì)胞因子分泌的誘導(dǎo)體外評估了熱處理的細(xì)菌菌株刺激人外周血單核細(xì)胞(PBMCs)分泌細(xì)胞因子的能力。用熱處理的細(xì)菌刺激PBMCs后基于四種細(xì)胞因子的免疫譜與在相同的體外分析試驗(yàn)中由活細(xì)菌細(xì)胞誘導(dǎo)的免疫譜進(jìn)行比較。將熱處理的制劑鋪板并且評估不存在任何存活的細(xì)菌計數(shù)。熱處理的細(xì)菌制劑鋪板后不產(chǎn)生菌落。當(dāng)與人PBMCs溫育時，活的益生菌誘導(dǎo)了不同且菌株依賴性水平的細(xì)胞因子產(chǎn)生(圖8)。益生菌的熱處理，與它們的活對應(yīng)細(xì)菌比較，改變了 PBMCs產(chǎn)生的細(xì)胞因子的水平。熱處理的細(xì)菌比它們的活對應(yīng)細(xì)菌誘導(dǎo)了更多的促炎細(xì)胞因子(TNF-a、IFN-Y、IL-12p40)。通過比較，熱處理的細(xì)菌比活細(xì)胞誘導(dǎo)了相似或更低量的IL-10。這些數(shù)據(jù)表明熱處理的細(xì)菌比它們的活對應(yīng)細(xì)菌更能刺激免疫系統(tǒng)，并且因此更能加強(qiáng)減弱的免疫防御。換言之，體外數(shù)據(jù)說明了熱處理后細(xì)菌菌株的增強(qiáng)的免疫加強(qiáng)作用。為了說明熱處理的短雙歧桿菌NCC2950對免疫系統(tǒng)的增強(qiáng)作用(相比活細(xì)胞)，在變應(yīng)性腹瀉的動物模型中測試了活的和熱處理的短雙歧桿菌NCC2950 (菌株A)。相比陽性對照組，用熱處理的短雙歧桿菌NCC2950處理后腹瀉強(qiáng)度顯著且一致地下降(41.1% ±4. 8),而用活的短雙歧桿菌NCC2950處理后腹灣強(qiáng)度僅降低20±28.3*%。這些結(jié)果證實(shí)，熱處理的短雙歧桿菌NCC2950比其活的對應(yīng)細(xì)菌表現(xiàn)出對變應(yīng)性腹瀉的增強(qiáng)的保護(hù)作用。結(jié)果顯示，熱處理后提高了益生菌增強(qiáng)免疫防御的能力。實(shí)施例3-6:
可以制備例如下列營養(yǎng)組合物
權(quán)利要求
1.施用于胃腸道功能受損的兒童的組合物，其向患者提供全營養(yǎng)并包含益生微生物。
2.依照權(quán)利要求I的組合物，其具有在0.9-1.lkcal/ml范圍中的卡路里密度、在250-270m0sm/kg水范圍中的重量摩爾滲透壓濃度，且包含占組合物約10-13%卡路里的蛋白質(zhì)來源、占組合物約43-56%卡路里的碳水化合物來源、占組合物約32-45%卡路里的脂質(zhì)來源，并具有175 I至190 I的NPC N比率。
3.依照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的組合物，其包含具有4.5 : I至5. 5 : I的n6 : n3脂肪酸比率、和/或20 80至62 38的MCT LCT比率的脂質(zhì)來源。
4.依照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的組合物，其包含約83-87%游離水。
5.依照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的組合物,其中所述益生微生物包含非復(fù)制益生微生物。
6.依照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的組合物，其包含對應(yīng)于約106-1012cfu的量的益生微生物。
7.依照前述權(quán)利要求5-6中任一項(xiàng)的組合物，其中所述非復(fù)制益生微生物是已經(jīng)通過熱處理，優(yōu)選通過在至少71. 5°C高溫處理至少I秒，而成為非復(fù)制的。
8.依照權(quán)利要求7的組合物，其中所述熱處理是在約71.5-150°C高溫處理約1-120秒，并且優(yōu)選是高溫/短時間(HTST)處理或超高溫(UHT)處理。
9.依照權(quán)利要求8的組合物用于在炎性病癥的預(yù)防或治療中使用。
10.依照權(quán)利要求7的組合物，其中所述熱處理在約70-150°C的溫度范圍中執(zhí)行約3分鐘-2小時，優(yōu)選在約80-140°C的范圍中約5分鐘-40分鐘。
11.依照權(quán)利要求10的組合物用于在預(yù)防或治療與受損的免疫防御有關(guān)的病癥中使用。
12.依照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的組合物,其中至少90%、優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少98%、最優(yōu)選至少99%、理想地至少99. 9%、最理想地所有的益生菌是非復(fù)制的。
13.依照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的組合物，其中所述益生微生物選自雙歧桿菌、乳桿菌、丙酸桿菌或其組合，例如長雙歧桿菌、乳雙歧桿菌、動物雙歧桿菌、短雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、青春雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、副干酪乳桿菌、唾液乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、約氏乳桿菌、植物乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌、乳酸乳球菌、嗜熱鏈球菌、乳酸乳球菌、雙こ酰乳球菌、乳脂乳球菌、保加利亞乳桿菌、瑞士乳桿菌、德氏乳桿菌、大腸桿菌、和/或其混合物。
14.依照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的組合物，其中所述益生微生物選自長雙歧桿菌NCC3001、長雙歧桿菌NCC 2705、短雙歧桿菌NCC 2950、乳雙歧桿菌NCC 2818、約氏乳桿菌Lai、副干酪乳桿菌NCC 2461、鼠李糖乳桿菌NCC 4007、羅伊氏乳桿菌DSM17983、羅伊氏乳桿菌ATCC55730、嗜熱鏈球菌NCC 2019、嗜熱鏈球菌NCC 2059、干酪乳桿菌NCC 4006、嗜酸乳桿菌NCC 3009、干酪乳桿菌ACA-DC 6002 (NCC 1825)、大腸桿菌Nissle、保加利亞乳桿菌NCC15、乳酸乳球菌NCC 2287、或其組合。
15.依照前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的組合物，其含有約0，005mg-1000mg非復(fù)制微生物/日劑量。
全文摘要
本發(fā)明涉及兒童營養(yǎng)領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明涉及預(yù)期用于胃腸道功能受損的兒童的營養(yǎng)組合物。本發(fā)明的一個實(shí)施方案涉及包含益生微生物的、待施用于胃腸道功能受損的兒童的營養(yǎng)組合物。該益生微生物可以是非復(fù)制的，例如生物學(xué)活性的熱處理的益生微生物。
文檔編號A61P37/04GK102762216SQ201080031027
公開日2012年10月31日 申請日期2010年5月11日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月11日
發(fā)明者A·梅賽尼爾, G·普里烏特, S·努特恩 申請人:雀巢產(chǎn)品技術(shù)援助有限公司