專利名稱：一種腎石通的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中成藥的質(zhì)量控制方法，特別是涉及一種腎石通的質(zhì)量控制方法，更具體地涉及一種腎石通浸膏或腎石通制劑的質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
腎石通顆粒收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》第2冊(cè)中。處方是由金錢草 100g、王不留行(炒)100g、篇蓄60g、瞿麥50g、海金沙40g、丹參40g雞內(nèi)金(燙)40g、延胡索(醋制)30g、牛膝30g、木香20g組成。制備工藝為以上十味，海金沙、王不留行裝入布袋內(nèi)，與其余金錢草等八味加水煎煮二次，第一次2. 5小時(shí)，第二次1. 5小時(shí)，合并煎液，濾過，減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 20 1. 25(75 80°C )的清膏；取清膏1份，加糖粉2份，糊精1份混勻，制成顆粒，在80°C以下干燥。規(guī)格每袋裝15克。功能主治具有清熱利濕、 活血止痛、化石排石的功效，用于腎結(jié)石、腎盂結(jié)石、膀胱結(jié)石、輸尿管結(jié)石。目前市售腎石通制劑還有腎石通無糖型顆粒，腎石通丸(每袋生藥量均為7. 65g)等。腎石通顆?，F(xiàn)執(zhí)行的部頒標(biāo)準(zhǔn)中只有性狀、顆粒劑檢查項(xiàng)，無鑒別項(xiàng)目和含量測(cè)定項(xiàng)目，制劑質(zhì)量可控性差。有文獻(xiàn)報(bào)道腎石通的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。定性鑒別方面，曾有過金錢草、王不留行蓄、 丹參、延胡索和牛膝的薄層色譜研究，已有文獻(xiàn)報(bào)道大多采用單個(gè)化學(xué)成分對(duì)照品為對(duì)照， 開展薄層鑒別。如以槲皮素、齊墩果酸、延胡索乙素為對(duì)照，進(jìn)行金錢草、牛膝、延胡索的鑒別(江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2001)；以槲皮素、齊墩果酸為對(duì)照，進(jìn)行篇蓄、牛膝的鑒別(西北藥學(xué)雜志，2005)；以齊墩果酸、王不留行藥材，原兒茶醛為對(duì)照，進(jìn)行牛膝、王不留行、丹參的鑒別(時(shí)珍國醫(yī)國藥，2008)等。上述鑒別存在特征性不強(qiáng)，效果不佳的缺點(diǎn)槲皮素在金錢草、篇蓄中都有，以此為對(duì)照品進(jìn)行鑒別缺乏特異性，王不留行和箱丨蓄的鑒別效果很差；牛膝的鑒別重復(fù)性不好，分離效果也較差；金錢草、丹參、延胡索的鑒別方法也不理想。也有一些文獻(xiàn)研究腎石通顆粒的定量控制。如于蘭等采用NaNO2-Al (NO3)3- NaOH 比色法，以蘆丁為對(duì)照品，以510nm為測(cè)定波長測(cè)定腎石通顆粒中總黃酮含量(西北藥學(xué)雜志，2005)。然而如圖1所示，腎石通顆粒樣品在400 600nm波長范圍內(nèi)吸收曲線平坦，沒有明顯的最大吸收波長。郭亞健等研究報(bào)道以NaNO2-Al (NO3) 3"NaOH為顯色劑，于400 600nm進(jìn)行總黃酮含量測(cè)定的方法專屬性不強(qiáng)，準(zhǔn)確性較差(《關(guān)于NaNO2-Al (NO3) 3"NaOH比色法測(cè)定總黃酮方法的探討》，藥物分析雜志，2005年)，也進(jìn)一步說明文獻(xiàn)中的510nm比色法測(cè)定腎石通總黃酮不夠理想。最近有一些采用高效液相色譜法(HPLC)對(duì)腎石通顆粒制劑的定量控制研究報(bào)道，如HPLC法測(cè)定腎石通顆粒中槲皮素的含量(安徽醫(yī)藥，2006)，測(cè)定山萘素的含量(大理學(xué)院學(xué)報(bào)，2010)，測(cè)定中槲皮素與山萘素的含量(中國藥業(yè)，2010)；另有HPLC測(cè)定腎石通顆粒中丹參酚酸類成分的含量，如測(cè)定丹參素的含量(曹兆軍等，中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2007)， 測(cè)定原兒茶醛(時(shí)珍國醫(yī)國藥，2008)的報(bào)道。上述文獻(xiàn)中一般測(cè)定的都是某一藥材中單個(gè)成分的含量，很難全面反映10味藥材的復(fù)方的整體質(zhì)量情況。腎石通制劑處方中金錢草為方中主藥(君藥)，用量約占整個(gè)處方的1/5，其主要成分為黃酮類物質(zhì)。另外篇蓄、瞿麥、王不留行和海金沙等多味藥材也都富含黃酮類成分， 幾種含黃酮藥材用量共占整個(gè)處方總量的2/3。由于多種藥材中含有黃酮類成分，同時(shí)黃酮類成分和藥效關(guān)系密切，可以將其作為控制質(zhì)量的指標(biāo)來評(píng)價(jià)腎石通內(nèi)在質(zhì)量，并可用作衡量中間品或成品質(zhì)量是否達(dá)到要求是否穩(wěn)定的標(biāo)準(zhǔn)。目前尚未有一種能準(zhǔn)確測(cè)定腎石通制劑中總黃酮含量的方法。亟需一種準(zhǔn)確、有效和便捷的總黃酮的含量測(cè)定方法，來評(píng)價(jià)腎石通中間品及成品的總黃酮含量及其穩(wěn)定性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種準(zhǔn)確、有效、便捷的腎石通制劑的質(zhì)量控制方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取了以下技術(shù)方案一種腎石通制劑的質(zhì)量控制方法，包括以下步驟(1)采用薄層色譜法，以金錢草對(duì)照藥材為對(duì)照，體積比為1 3 1的冰醋酸-水為展開劑，鑒別腎石通中的金錢草；(2)采用薄層色譜法，以木香對(duì)照藥材為對(duì)照，體積比為6 10 1的環(huán)己烷乙酸乙酯為展開劑，5%香草醛硫酸溶液為顯色劑，鑒別腎石通中的木香；(3)采用薄層色譜法，以丹參素鈉對(duì)照品為對(duì)照，體積比為2 4 1 0.4的三氯甲烷-丙酮-甲酸為展開劑，鑒別腎石通中的丹參；(4)采用薄層色譜法，以延胡索乙素對(duì)照品為對(duì)照，體積比為4 5 1的甲苯-丙酮為展開劑，鑒別腎石通中的延胡索；(5)采用比色法，以三氯化鋁-醋酸-醋酸鹽緩沖液體系為顯色劑，蘆丁為對(duì)照品， 273士2nm為測(cè)定波長，測(cè)定腎石通中總黃酮的含量。其中采用薄層色譜法，用金錢草藥材為陽性對(duì)照鑒別金錢草包括以下步驟 a.供試品溶液的制備取腎石通加乙醇濃度為0 95%的乙醇-水混合溶劑超聲提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀芙?，用乙醚振搖提取數(shù)次，棄乙醚液，再用乙酸乙酯振搖提取，乙酸乙酯液蒸干，殘?jiān)?5%乙醇溶解，作為供試品溶液；b.對(duì)照品溶液的制備取金錢草藥材，按供試品溶液的制備方法制成對(duì)照品溶液；c.薄層條件點(diǎn)樣于聚酰胺薄膜上，以體積比為2 1的冰乙酸-水為展開劑，噴以3%三氯化鋁乙醇溶液，待乙醇揮干后，置紫外光燈 365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；采用薄層色譜法，用木香藥材為陽性對(duì)照鑒別木香包括以下步驟a.供試品溶液的制備取腎石通加水超聲提取，離心，上清液濃縮至1/5體積，加乙醇使含醇量達(dá)80%，攪拌，離心，取上清液濃縮至干，殘?jiān)铀芙?，?0-90°C的石油醚提取3次，合并石油醚液， 揮干，殘?jiān)蛹状既芙?，作為供試品溶液；b.對(duì)照品溶液的制備取木香藥材，按供試品溶液的制備方法制成對(duì)照品溶液；c.薄層條件點(diǎn)樣于硅膠G薄層板上，以體積比為8 1的環(huán)己烷-乙酸乙酯為展開劑，噴以5%香草醛硫酸溶液，日光下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；采用薄層色譜法，用丹參素鈉為陽性對(duì)照鑒別丹參包括以下步驟a.供試品溶液的制備取腎石通加水振搖，超聲提取，離心，取上清液，加鹽酸調(diào)節(jié)PH至2，用乙酸乙酯提取2次，合并乙酸乙酯液，用水洗滌1次，蒸干，殘?jiān)右掖既芙?，作為供試品溶液；b.對(duì)照品溶液的制備取丹參素鈉對(duì)照品，加乙醇制成每Iml含Img的溶液，制成對(duì)照品溶液； c.薄層條件點(diǎn)樣于硅膠G薄層板上，以體積比為25 10 4的三氯甲烷-丙酮-甲酸為展開劑，置氨蒸氣中熏10分鐘，在空氣中揮盡板上吸附的氨后，置紫外光燈365nm下檢視； 供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；采用薄層色譜法，用延胡索乙素為陽性對(duì)照鑒別延胡索包括以下步驟a.供試品溶液的制備取腎石通加濃氨試液[氨(NH3)濃度25. 0% 觀.0% (g/g)]濕潤20分鐘后，加乙醚振搖提取30分鐘后，靜置過夜，分取上清液，用30%醋酸提取4次，合并提取液， 用濃氨試液調(diào)PH值至10 11，用三氯甲烷提取4次，合并三氯甲烷液，用水洗至中性，無水硫酸鈉脫水后，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，作為供試品溶液；b.對(duì)照品溶液的制備取延胡索乙素對(duì)照品，加乙醇制成每Iml含0. 2mg的溶液，制成對(duì)照品溶液；c.薄層條件點(diǎn)樣于硅膠G薄層板上，以體積比為9 2的甲苯-丙酮為展開劑，置碘缸中約3分鐘后取出，揮盡板上吸附的碘后，置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；采用比色法，以蘆丁為對(duì)照，紫外273nm測(cè)定腎石通制劑中的總黃酮含量包括以下步驟a.供試品溶液的制備取腎石通加醇濃度為0 100%的乙醇-水混合溶劑或甲醇-水混合溶劑超聲提取，補(bǔ)足重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液；b.對(duì)照品溶液的制備精密稱取蘆丁對(duì)照品適量，加醇濃度為0 100%的乙醇-水混合溶劑或甲醇-水混合溶劑制成每Irnl中含蘆丁 0. 8 1. 2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；c.測(cè)定方法分別量取對(duì)照品溶液和供試品溶液，各加入PH5. 5，濃度為0. lmol/L的顯色劑三氯化鋁-醋酸-醋酸鹽緩沖液體系；放置30分鐘后，在273nm波長下，測(cè)定吸光值，計(jì)算總黃酮含量(以蘆丁計(jì))。在該發(fā)明中，腎石通為腎石通浸膏或腎石通制劑，腎石通制劑的劑型為顆粒、片劑、膠囊、微丸或滴丸。本發(fā)明發(fā)明人通過大量試驗(yàn)摸索，對(duì)腎石通制劑方中十味藥材均進(jìn)行了鑒別研究，首次建立了以金錢草藥材為對(duì)照，木香藥材為對(duì)照、丹參素鈉為對(duì)照鑒別腎石通制劑中金錢草、木香、丹參的薄層色譜法，同時(shí)改良了延胡索的薄層色譜條件。新建了以蘆丁為對(duì)照，在紫外273nm測(cè)定總黃酮的含量測(cè)定方法。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果1.本發(fā)明在原有標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，增加了金錢草、木香、丹參和延胡索的薄層鑒別方法，操作簡便，安全，可以準(zhǔn)確、快速地進(jìn)行定性鑒別，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好；通過新建的總黃酮的含量測(cè)定方法，可以全面、準(zhǔn)確地反映制劑的質(zhì)量；從而可以實(shí)現(xiàn)對(duì)腎石通藥品的定性和定量檢測(cè)，可以有效地控制腎石通產(chǎn)品的質(zhì)量，防止假冒偽劣產(chǎn)品；2.本發(fā)明的質(zhì)量控制方法能對(duì)腎石通制劑進(jìn)行有效的質(zhì)量控制，包括中間品腎石通浸膏以及由該配方制成的片劑、膠囊、微丸、滴丸等。


圖1為采用NaNO2-Al (NO3) 3"NaOH比色法測(cè)定腎石通顆粒中的總黃酮時(shí)，待測(cè)液在 400 600nm范圍內(nèi)的紫外-可見分光光譜圖；圖2為本發(fā)明中蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液與待測(cè)液在200 600nm范圍內(nèi)的紫外-可見分光光譜圖；a為蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液；b為待測(cè)液；
圖3為本發(fā)明實(shí)施例2-4中測(cè)定總黃酮時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合附圖和具體實(shí)施例詳細(xì)說明本發(fā)明。實(shí)施例1本發(fā)明質(zhì)量控制方法的方法學(xué)驗(yàn)證(1)準(zhǔn)確度試驗(yàn)如圖2所示，測(cè)定腎石通浸膏或腎石通制劑中的總黃酮含量時(shí)，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液與待測(cè)液在273nm波長處有共同吸收峰，說明此方法適用于測(cè)定腎石通中總黃酮含量，經(jīng)準(zhǔn)確度試驗(yàn)表明，該方法加樣回收率可達(dá)100. 1%，測(cè)定結(jié)果可靠，見表1。表1準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種腎石通的質(zhì)量控制方法，其特征在于，包括以下步驟(1)采用薄層色譜法，以金錢草對(duì)照藥材為對(duì)照，體積比為1 3 1的冰醋酸-水為展開劑，鑒別腎石通中的金錢草；(2)采用薄層色譜法，以木香對(duì)照藥材為對(duì)照，體積比為6 10 1的環(huán)己烷-乙酸乙酯為展開劑，5%香草醛硫酸溶液為顯色劑，鑒別腎石通中的木香；(3)采用薄層色譜法，以丹參素鈉對(duì)照品為對(duì)照，體積比為2 4 1 0.4的三氯甲烷-丙酮-甲酸為展開劑，鑒別腎石通中的丹參；(4)采用薄層色譜法，以延胡索乙素對(duì)照品為對(duì)照，體積比為4 5 1的甲苯-丙酮為展開劑，鑒別腎石通中的延胡索；(5)采用比色法，以三氯化鋁-醋酸-醋酸鹽緩沖液體系為顯色劑，蘆丁為對(duì)照品， 273士2nm為測(cè)定波長，測(cè)定腎石通中總黃酮的含量。
2.如權(quán)利要求1所述的腎石通的質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述步驟(1)包括以下步驟a.供試品溶液的制備取腎石通加乙醇濃度為0 95%的乙醇-水混合溶劑超聲提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀芙?，用乙醚振搖提取數(shù)次，棄乙醚液，再用乙酸乙酯振搖提取乙酸乙酯液蒸干，殘?jiān)?5%乙醇溶解，作為供試品溶液；b.對(duì)照品溶液的制備取金錢草藥材，按供試品溶液的制備方法制成對(duì)照品溶液；c.薄層條件點(diǎn)樣于聚酰胺薄膜上，以體積比為2 1的冰乙酸-水為展開劑，噴以3%三氯化鋁乙醇溶液，待乙醇揮干后，置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
3.如權(quán)利要求1所述的腎石通的質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述步驟(2)包括以下步驟a.供試品溶液的制備取腎石通加水超聲提取，離心，上清液濃縮至1/5體積，加乙醇使含醇量達(dá)80%，攪拌， 離心，取上清液濃縮至干，殘?jiān)铀芙?，?0-90°C的石油醚提取3次，合并石油醚液，揮干，殘?jiān)蛹状既芙?，作為供試品溶液；b.對(duì)照品溶液的制備取木香藥材，按供試品溶液的制備方法制成對(duì)照品溶液；c.薄層條件點(diǎn)樣于硅膠G薄層板上，以體積比為8 1的環(huán)己烷-乙酸乙酯為展開劑，噴以5%香草醛硫酸溶液，日光下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
4.如權(quán)利要求1所述的腎石通的質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述步驟(3)包括以下步驟a.供試品溶液的制備取腎石通加水振搖，超聲提取，離心，取上清液，加鹽酸調(diào)節(jié)PH至2，用乙酸乙酯提取2次，合并乙酸乙酯液，用水洗滌1次，蒸干，殘?jiān)右掖既芙猓鳛楣┰嚻啡芤?；b.對(duì)照品溶液的制備取丹參素鈉對(duì)照品，加乙醇制成每Iml含Img的溶液，制成對(duì)照品溶液；c.薄層條件點(diǎn)樣于硅膠G薄層板上，以體積比為25 10 4的三氯甲烷-丙酮-甲酸為展開劑， 置氨蒸氣中熏10分鐘后，揮盡板上吸附的氨后，置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中， 在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
5.如權(quán)利要求1所述的腎石通的質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述步驟(4)包括以下步驟a.供試品溶液的制備取腎石通加氨質(zhì)量濃度為25. 0% 28. 0%的濃氨試液濕潤20分鐘后，加乙醚振搖提取30分鐘后，靜置過夜，分取上清液，用30%醋酸提取4次，合并提取液，用濃氨試液調(diào)pH 值至10 11，用三氯甲烷提取4次，合并三氯甲烷液，用水洗至中性，無水硫酸鈉脫水后，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，作為供試品溶液；b.對(duì)照品溶液的制備取延胡索乙素對(duì)照品，加乙醇制成每Iml含0. 2mg的溶液，制成對(duì)照品溶液；c.薄層條件點(diǎn)樣于硅膠G薄層板上，以體積比為9 2的甲苯-丙酮為展開劑，置碘缸中約3分鐘后取出，揮盡板上吸附的碘后，置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
6.如權(quán)利要求1所述的腎石通的質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述步驟(5)包括以下步驟a.供試品溶液的制備取腎石通加醇濃度為0 100 %的乙醇-水混合溶劑或甲醇-水混合溶劑超聲提取，補(bǔ)足重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液；b.對(duì)照品溶液的制備精密稱取蘆丁對(duì)照品適量，加醇濃度為0 100 %的乙醇-水混合溶劑或甲醇水混合溶劑制成每Iml中含蘆丁 0. 8 1. 2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；c.測(cè)定方法分別量取對(duì)照品溶液和供試品溶液，各加入PH5. 5，濃度為0. lmol/L的顯色劑三氯化鋁-醋酸-醋酸鹽緩沖液體系；放置30分鐘后，在273士2nm波長下，測(cè)定吸光值，計(jì)算總黃酮含量。
7.如權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的腎石通的質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述腎石通為腎石通浸膏或腎石通制劑。
8.如權(quán)利要求7所述的腎石通的質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述腎石通制劑的劑型為顆粒、片劑、膠囊、微丸或滴丸。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種腎石通的質(zhì)量控制方法。該質(zhì)量控制方法建立了以金錢草藥材為對(duì)照，木香藥材為對(duì)照、丹參素鈉為對(duì)照鑒別腎石通制劑中金錢草、木香、丹參的薄層色譜法，同時(shí)改良了延胡索的薄層色譜條件。新建了以蘆丁為對(duì)照，在紫外273±2nm測(cè)定總黃酮的含量測(cè)定方法。本發(fā)明在原有標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，增加了金錢草、木香、丹參和延胡索的薄層鑒別方法，可以準(zhǔn)確、快速地進(jìn)行定性鑒別，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好；通過總黃酮的含量測(cè)定方法，可以全面、準(zhǔn)確地反映制劑的質(zhì)量；從而可以有效地控制腎石通產(chǎn)品的質(zhì)量，防止假冒偽劣產(chǎn)品；能對(duì)腎石通制劑進(jìn)行有效的質(zhì)量控制，包括中間品腎石通浸膏以及由該配方制成的片劑、膠囊、微丸、滴丸等。
文檔編號(hào)A61K36/704GK102166264SQ20111007978
公開日2011年8月31日 申請(qǐng)日期2011年3月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月30日
發(fā)明者葉健文, 杜松, 羅愛勤 申請(qǐng)人:廣州漢方現(xiàn)代中藥研究開發(fā)有限公司