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      用以活化血小板的添加劑的制作方法

      文檔序號(hào):869806閱讀:469來(lái)源:國(guó)知局
      專利名稱:用以活化血小板的添加劑的制作方法
      技術(shù)領(lǐng)域
      本發(fā)明關(guān)于一種用于血液樣本的添加劑,尤指一種用于活化血小板的添加劑。
      背景技術(shù)
      凝血作用是人體一個(gè)重要的急救措施,凝血機(jī)制分為外源性(extrinsic)與內(nèi)源性(intrinsic),牽涉多層的調(diào)控及各種凝血因子,其中血小板和鈣離子(Ca2+)扮演極重要的角色,血小板調(diào)控內(nèi)源性凝血機(jī)制,鈣離子則為多種凝血因子的輔因子,因此在創(chuàng)傷時(shí),血小板會(huì)產(chǎn)生多種生長(zhǎng)因子,進(jìn)而促進(jìn)凝血及傷口愈合。富血小板血漿(Platelet Rich Plasma, PRP)在特定pH值及血小板濃度下可產(chǎn)生多種生長(zhǎng)因子,因此醫(yī)學(xué)上將其用于治療糖尿病患者難以痊愈的傷口、關(guān)節(jié)炎、足部潰爛或是燒燙燒等,甚至也能配合植皮促使組織細(xì)胞再生修復(fù),效用佳且副作用低。PRP于使用上的效果除了依不同治療有不同導(dǎo)入方式外,影響其活性最大者便是PRP中血小板的濃度與其活性,較高濃度或活性較高的血小板產(chǎn)生的生長(zhǎng)因子較多,治療的效果越快也越好,雖應(yīng)用PRP治療的疾病多非急癥,但若能提高每次施打PRP的效力,便可減少抽血與治療的次數(shù),不僅降低感染的機(jī)率、節(jié)省人力物力及減輕病患的痛楚,因此如何有效率地使PRP產(chǎn)生更多生長(zhǎng)因子,確有其開發(fā)的必要性。

      發(fā)明內(nèi)容
      本發(fā)明的一目的為提供一種活化血小板的方法,其可提升現(xiàn)有治療方法之的效力,有助于提升醫(yī)療質(zhì)量。本發(fā)明又一目的為提供一種用于血液樣本的添加劑,可活化血液樣本中的血小板,使其產(chǎn)生較多量的生長(zhǎng) 因子,以獲得較佳的治療效果。為達(dá)到上述目的,本發(fā)明提供一種用以活化血小板的添加劑,其包含鈣離子、抗氧化劑、抗生素和緩沖液。較佳地,前述鈣離子的濃度范圍為0.05、.5mEq/ml。較佳地,前述抗氧化劑的濃度范圍為10(T400mg/ml ;較佳地,前述抗氧化劑為谷
      胱甘肽、維生素C、維生素E、維生素A、類胡蘿卜素、輔酶、硫辛酸、類黃酮或其組合。較佳地,前述抗生素的濃度范圍為2(Γ70 μ g/ml ;較佳地,前述抗生素為硫酸正泰霉素、鏈霉素、林可霉素、青霉素、四環(huán)霉素、氯霉素、紅霉素、磺胺類藥或其組合。較佳地,前述緩沖液系醫(yī)藥可接受的緩沖液;較佳地,前述緩沖液為磷酸緩沖溶液、林格氏溶液或其組合。本發(fā)明又提供一種活化血液樣本的方法,其步驟為將樣本與添加劑混合。較佳地,前述混合時(shí)間為5 20分鐘。較佳地,前述樣本為血漿,每毫升含有10(Γ300Χ106的血小板。較佳地,前述樣本為富含有血小板的血衆(zhòng)(PRP),其含有濃度超過(guò)每毫升109的血小板。
      綜上所述,本發(fā)明的添加劑除添加活化血小板必需的鈣離子外,更輔以抗氧化劑及抗生素,增加PRP使用上的持續(xù)性及安全性,因此有助于PRP于臨床上的應(yīng)用。此外,本發(fā)明的添加劑只需簡(jiǎn)單與血液樣本(如,PRP)混合,即可發(fā)生效果,不論在檢測(cè)性、治療性或美容性的臨床運(yùn)用上,都具有簡(jiǎn)便快速的優(yōu)點(diǎn)。


      圖1為本發(fā)明實(shí)施例一于活化血小板的試驗(yàn)結(jié)果。
      具體實(shí)施例方式本發(fā)明關(guān)于一種用以活化血小板的添加劑及使用前述添加劑于檢測(cè)性、治療性或美容性的臨床運(yùn)用上活化血小板的方法。前述添加劑包含適當(dāng)濃度的鈣離子、抗氧化劑、抗生素及緩沖液。本發(fā)明所稱的「活化」系指使增加血小板的生理活性及/或促進(jìn)其于生理機(jī)制上的功能。舉例來(lái)說(shuō),如促使血小板更有效率地釋放生長(zhǎng)因子如血小板衍生性生長(zhǎng)因子(TOGF-BB)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β)與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)。本發(fā)明所稱的「血液樣本」泛指人類或動(dòng)物的血液樣本;更明確地,系指富含有血小板的血漿樣本。然而,所屬領(lǐng)域具有通常知識(shí)者,參本發(fā)明說(shuō)明書所揭露的內(nèi)容,當(dāng)可理解使用本發(fā)明的添加劑使任何血液樣本中所含的血小板活化,皆應(yīng)屬于本發(fā)明的范疇。前述鈣離子的濃度為0.05、.5mEq/ml。前述鈣離子可由含鈣離子溶液來(lái)提供,其包括,但不限于氯化鈣溶液、磷酸鈣溶液、鈣葡糖酸鹽或其組合。由于鈣離子是血小板活化路徑中重要輔因子(cofactor),因此,添加鈣離子將有助于促使血液樣本中的血小板活化,或提供其活化的程度。前述抗氧化劑的濃度為10(T400mg/ml。前述抗氧化劑包括,但不限于谷胱甘肽、維
      生素C、維生素E、維生素A、類胡蘿卜素、輔酶、硫辛酸、類黃酮或其組合。于本發(fā)明的添加劑中添加抗氧化劑可去除自由基等活性物質(zhì),延長(zhǎng)生長(zhǎng)因子的壽命。前述抗生素的濃度為2(Γ70 μ g/ml。前述抗生素包括,但不限于硫酸正泰霉素、鏈霉素、林可霉素、青霉素、四環(huán)霉素、氯霉素、紅霉素、磺胺類藥或其組合。于本發(fā)明的添加劑中添加抗生素可避免在使用血漿樣本時(shí)可能發(fā)生的感染。前述緩沖液于本發(fā)明的添加劑中系為了維持適當(dāng)pH值環(huán)境,使血液樣本中的血小板維持正常的生理活性,而得以持續(xù)釋放生長(zhǎng)因子。較佳地,前述緩沖液系將本發(fā)明的添加劑的PH值控制于51之間。更明確地,前述緩沖液為醫(yī)藥可接受的緩沖液,包括,但不限于:林格氏溶液、磷酸緩沖液或其組合。本發(fā)明的添加劑的配制方法系簡(jiǎn)述如下:首先,取得所需的原料,包括欲使用的含鈣離子溶液、抗氧化劑、抗生素及緩沖液。前述原料可直接選購(gòu)商業(yè)上經(jīng)無(wú)菌處理的醫(yī)藥級(jí)試劑,或者亦可簡(jiǎn)易經(jīng)實(shí)驗(yàn)室調(diào) 配,再依所屬領(lǐng)域中具有通常知識(shí)者所習(xí)知的方式來(lái)滅菌。舉例來(lái)說(shuō),滅菌的方式有:經(jīng)0.22μπι的圓形濾膜(俗稱小飛碟)過(guò)濾以同時(shí)達(dá)到濾除細(xì)小雜質(zhì)及滅菌的效果,或者亦可使配好的試劑于滅菌釜中經(jīng)高溫高壓滅菌。值得注意的是,部分藥劑并不適合以高溫高壓的方式來(lái)滅菌,例如,在這樣的溫度壓力條件下,很有可能造成抗生素的破壞,因此所屬領(lǐng)域具有通常知識(shí)者當(dāng)可理解需視情況選擇采用滅菌的方式。較佳地,即便所使用的原料是在供貨商端便已滅菌過(guò)的產(chǎn)品,或已經(jīng)操作者進(jìn)行滅菌,于本發(fā)明的添加劑配置完成后,仍可再經(jīng)過(guò)至少一次的0.22 μ m圓形濾膜過(guò)濾,以避免于制備本發(fā)明的添加劑的過(guò)程中的任何可能污染情況。取得所需原料之后,陸續(xù)將前述含鈣離子溶液、前述抗氧化劑及前述抗生素加入前述緩沖液中,其混合的順序并沒有限制,但為了維持前述抗氧化劑與前述抗生素的活性,較佳地,系先混合前述含鈣離子溶液與前述緩沖液。除此之外,亦可將前述含鈣離子溶液與前述緩沖液混合為一混合液之后,將前述混合液妥善保存,直至需要使用本發(fā)明的添加劑時(shí),再將保存的前述混合液取出,并添加前述抗氧化劑與前述抗生素。如此一來(lái)可以確保氧化劑與抗生素的活性維持在最佳的狀況。將前述含鈣離子溶液、前述抗氧化劑及前述抗生素加入前述緩沖液中后,攪拌或搖晃使所有成分能均勻的混合。較佳地,為了維持前述抗氧化劑與前述抗生素的活性,于室溫下進(jìn)行混合程序;更明確地,于16 26°C下進(jìn)行混合程序。完成混合程序之后,如前所述,較佳地系再經(jīng)過(guò)至少一次的0.22 μ m圓形濾膜過(guò)濾,便制得本發(fā)明的添加劑。于使用本發(fā)明的添加劑時(shí),較佳地,將前述添加劑與血液樣本進(jìn)行混合。更明確地,混合過(guò)程需持續(xù)搖晃以使前述添加劑與血漿樣本充分地混合。較佳地,前述混合的時(shí)間為5 20分鐘。據(jù)此,本發(fā)明的添加劑提供血小板活化所需的輔因子,且血漿樣本來(lái)自病患本身,因此不會(huì)有免疫排斥的問(wèn)題,特別適合使用生長(zhǎng)因子促進(jìn)組織新生的醫(yī)療。以下實(shí)施例僅以文字并搭配圖式說(shuō)明實(shí)際進(jìn)行的制程及實(shí)驗(yàn),以使所屬領(lǐng)域中具有通常知識(shí)者更明確地了解本發(fā)明的特點(diǎn)與精神。惟需注意的是,以下實(shí)施例僅用于示范性地說(shuō)明本發(fā)明,而不應(yīng)用以限制本發(fā)明的權(quán)利范圍。實(shí)施例一:制備本發(fā)明的用于活化血小板的添加劑。于本實(shí)施例中將 示范性地制備本發(fā)明的添加劑。取得無(wú)菌的緩沖液、含鈣離子溶液、抗氧化劑及抗生素。于本實(shí)施例中,所使用的緩沖液為林格氏液、所使用的含鈣離子溶液為氯化鈣溶液、所使用的抗氧化劑為谷胱甘肽及所使用的抗生素為硫酸正泰霉素。首先,將1.7 mL的林格氏液與0.5 ml的氯化鈣溶液(0.272 mEq/ml)混合,再于20°C的條件下加入250 mg的谷胱甘肽與4 μ I的硫酸正泰霉素(50 μ g/ml)。待各成份均勻混合及溶解至無(wú)懸浮物為止,即可獲得本實(shí)施例的用于活化血小板的添加劑,其中鈣離子濃度約為0.062 mEq/ml、谷胱甘肽的濃度約為113.636 mg/ml及硫酸正泰霉素的濃度約為 45 μ g/mlο實(shí)施例二:實(shí)施例一的添加劑的使用方法及效果分析。于本實(shí)施例中,將實(shí)施例一的添加劑與血漿樣本依實(shí)際使用情況混合后,分析添加劑的效果。前述血漿樣本為富含血小板血漿(PRP),其來(lái)源為自人體抽取的全血,經(jīng)離心等技術(shù)純化而得,其血小板濃度每毫升超過(guò)109。將富含血小板血漿(PRP)與實(shí)施例一所制得的添加劑直接于室溫下混合,其中持續(xù)以手或振蕩器搖晃,以使兩者充分混勻后,使其靜置20分鐘,再測(cè)定其中的血小板衍生性生長(zhǎng)因子(H)GF-BB)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β)與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的濃度。請(qǐng)參考圖1,其顯示加入添加劑后前述三種生長(zhǎng)因子的濃度均較全血的生長(zhǎng)因子濃度有顯著的提高。 由圖中的數(shù)據(jù)可知,與對(duì)照組相比,實(shí)施例一的添加劑可提升血小板衍生性生長(zhǎng)因子約3.5倍的釋放,提升轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子約2倍的釋放,并提升血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子約3.5倍的釋放。
      權(quán)利要求
      1.一種用以活化血小板的添加劑,其特征在于,其包含: 鈣離子; 抗氧化劑; 抗生素;及 緩沖液。
      2.如權(quán)利要求1所述的添加劑,其包含: 0.05 0.5mEq/ml的I丐離子; 100 400mg/ml的抗氧化劑; 20^70 μ g/ml的抗生素;及 緩沖液。
      3.如權(quán)利要求1所述的添加劑,其中前述緩沖液是醫(yī)藥可接受的緩沖液。
      4.如權(quán)利要求1所述的添加劑,其中前述緩沖液的pH值范圍為5 8。
      5.如權(quán)利要求1所述的添加劑,其中前述抗氧化劑為谷胱甘肽、維生素C、維生素E、維生素A、類胡蘿卜素、輔酶、硫辛酸、類黃酮或其組合。
      6.如權(quán)利要求1所述的添加劑,其中前述抗生素為硫酸正泰霉素、鏈霉素、林可霉素、青霉素、四環(huán)霉素、氯霉素、紅霉素、磺胺類藥或其組合。
      7.一種促使血小板活化的方法,其包含使樣本與如申如權(quán)利要求1所述的添加劑混`口 ο
      8.如權(quán)利要求7所述的方法,其中前述混合的時(shí)間為5 20分鐘。
      9.如權(quán)利要求7所述的方法,其中前述樣本為血漿。
      10.如權(quán)利要求9所述的方法,其中前述血漿為富含有血小板的血漿(PRP)。
      全文摘要
      本發(fā)明關(guān)于一種用以活化血小板的添加劑。本發(fā)明的添加劑包含鈣離子、抗生素、抗氧化劑及緩沖液。將所需成份依特定比例混勻后以即取得前述血漿樣本的添加劑。本發(fā)明的添加劑使用上簡(jiǎn)便且快速,而所制得的添加劑具有活化血小板的功用,有助于血小板在醫(yī)療上的應(yīng)用。
      文檔編號(hào)A61P19/02GK103110947SQ201110362788
      公開日2013年5月22日 申請(qǐng)日期2011年11月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月16日
      發(fā)明者黃美月 申請(qǐng)人:瑪旺干細(xì)胞醫(yī)學(xué)生物科技股份有限公司
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