專利名稱：蚯蚓干燥粉末的制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及蚯蚓干燥粉末的制造方法，更詳細(xì)而言，涉及可以除去蚯蚓體內(nèi)含有的有害物質(zhì)，并可以制造含有高效價(jià)酶的蚯蚓干燥粉末的蚯蚓干燥粉末的制造方法。
背景技術(shù)：
蚯蚓提取物、蚯蚓干燥粉末自古以來(lái)主要在東南亞各國(guó)中作為各種疾病的預(yù)防齊U、治療劑而被應(yīng)用，迄今為止已知有作為膀胱內(nèi)結(jié)石縮小劑和排出促進(jìn)劑、黃疸治療劑、分娩促進(jìn)劑、強(qiáng)壯劑、生發(fā)劑、強(qiáng)精劑、解熱劑、痙攣治療劑、血液循環(huán)促進(jìn)劑、半身不遂治療劑、間接鎮(zhèn)痛劑、利尿劑、支氣管哮喘劑、高血壓治療劑的用途。然而，蚯蚓在養(yǎng)殖床中飼養(yǎng)、繁殖，即使對(duì)餌食進(jìn)行嚴(yán)格挑選后供給，其中也存在 汞、鎘、鉛、砷之類的有害元素或病原性微生物，在飼養(yǎng)中，這些有害物質(zhì)被蚯蚓攝取，并在其體內(nèi)蓄積，其結(jié)果，服用由蚯蚓活體制造的治療藥時(shí)，有可能對(duì)人體產(chǎn)生不良影響。因此，以蚯蚓活體作為原料制備用于口服給藥的藥劑時(shí)，有必要除去這些有害物質(zhì)，為此提出了許多方法。迄今為止提出了如下方法將蚯蚓活體浸潰在鈉鹽或鉀鹽之類的堿金屬鹽的水溶液中，使其排泄消化道內(nèi)的糞土后，進(jìn)行濕式粉碎，將所得到的懸浮液真空冷凍干燥，從而制造可用作糖尿病治療劑、抗高脂血癥藥或血壓調(diào)節(jié)劑的蚯蚓干燥粉末的方法(參照專利文獻(xiàn)廣4);將蚯蚓活體在維持于6 26°C的酸水溶液中放置O. Γ5小時(shí)，除去消化道內(nèi)的糞土后磨碎，將該磨碎物脫氣后，在分階段升溫的同時(shí)進(jìn)行真空干燥，從而制造血栓癥患者治療藥的方法(參照專利文獻(xiàn)5)等。另外，提出了以下方法為了除去或降低重金屬類、纖溶活性抑制物質(zhì)和血小板活化因子的前體物質(zhì)，將蚯蚓干燥粉末制成水溶液，除去其混濁成分，獲得濁度以波長(zhǎng)700nm處的吸光度下計(jì)為1.5以下的蚯蚓水溶液的方法(參照專利文獻(xiàn)6)?，F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)I :日本特開(kāi)平1-47718號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)2 :日本特開(kāi)平1-47719號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)3 :日本特開(kāi)平1-47720號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)4 :日本特開(kāi)平1-268639號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)5 :日本特開(kāi)平3-72427號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)6 :日本特開(kāi)2006-96673號(hào)公報(bào)

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明要解決的問(wèn)題然而，將蚯蚓活體長(zhǎng)時(shí)間浸潰在淡水、堿金屬鹽水溶液、酸水溶液中時(shí),蚯蚓的體力減弱，其結(jié)果，活體內(nèi)含有的蛋白質(zhì)變性，酶作用降低，因此可能導(dǎo)致所得到的蚯蚓粉末的藥理效果變差。另外，存在以下問(wèn)題蚯蚓在水的存在下死亡時(shí)，由于蚯蚓中存在的纖溶活性酶的作用，導(dǎo)致蚯蚓的活體迅速溶解并腐敗，因此在水溶液中的處理存在時(shí)間限定。因此，本發(fā)明的目的在于提供一種蚯蚓干燥粉末的制造方法，該方法可以除去蚯蚓體內(nèi)含有的有害物質(zhì)，并可以制造含有高效價(jià)的酶的蚯蚓干燥粉末。本發(fā)明人為了解決上述課題而進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過(guò)使活蚯蚓與金屬的氯化物接觸后，再與羥基羧酸接觸，可以解決上述課題，從而完成了本發(fā)明。用于解決問(wèn)題的方案S卩，本發(fā)明的蚯蚓的干燥粉末的制造方法的特征在于，使活蚯蚓與選自由鉀、鈉、 鎂和鈣組成的組中的至少一種金屬的氯化物接觸，其后，使粉末狀羥基羧酸與活蚯蚓接觸，用水稀釋，將pH調(diào)整至2 5，保持3 180分鐘后，對(duì)活蚯蚓進(jìn)行水洗、磨碎，并將所得到的磨碎物冷凍干燥。另外，本發(fā)明的蚯蚓的干燥粉末的制造方法的特征在于，使活蚯蚓與選自由鉀、鈉、鎂和鈣組成的組中的金屬的氯化物接觸，其后，將活蚯蚓浸潰在pH調(diào)整至2飛的羥基羧酸水溶液中，保持3 180分鐘后，對(duì)活蚯蚓進(jìn)行水洗、磨碎，并將所得到的磨碎物冷凍干燥。本發(fā)明的蚯蚓的干燥粉末的制造方法優(yōu)選的是，將前述活蚯蚓在明亮處放置1(Γ50小時(shí)后，剝離附著于體表的污物，然后與上述金屬的氯化物接觸。另外，本發(fā)明的蚯蚓的干燥粉末的制造方法優(yōu)選的是，上述冷凍干燥是通過(guò)將磨碎物在-18 °C '35°C下冷凍20 240小時(shí)后，在真空下冷凍干燥而進(jìn)行的。另外，在本發(fā)明的蚯蚓的干燥粉末的制造方法中，上述金屬的氯化物優(yōu)選為氯化鈉。另外，在本發(fā)明的蚯蚓的干燥粉末的制造方法中，上述羥基羧酸優(yōu)選為選自由醋酸、蘋(píng)果酸、檸檬酸、乳酸、丙二酸和琥珀酸組成的組中的至少一種。發(fā)明的效果根據(jù)本發(fā)明，可以提供蚯蚓干燥粉末的制造方法，所述制造方法可以除去蚯蚓體內(nèi)含有的有害物質(zhì)，并可以制造含有高效價(jià)的酶的蚯蚓干燥粉末。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的蚯蚓的干燥粉末的制造方法的特征在于，使活蚯蚓與選自由鉀、鈉、鎂和鈣組成的組中的至少一種金屬的氯化物接觸，其后，使粉末狀羥基羧酸與活蚯蚓接觸，用水稀釋，將PH調(diào)整至2 5，保持3 180分鐘，或者，將活蚯蚓浸潰在pH調(diào)整至2飛的羥基羧酸水溶液中，保持3 180分鐘后，對(duì)活蚯蚓進(jìn)行水洗、磨碎，并將所得到的磨碎物冷凍干燥。若在對(duì)活蚯蚓進(jìn)行加工之前，使其與規(guī)定的金屬氯化物接觸，再與羥基羧酸接觸，則對(duì)于蚯蚓來(lái)說(shuō)形成了不適棲息環(huán)境，其結(jié)果，為了適應(yīng)該環(huán)境，蚯蚓排泄消化道內(nèi)的消化物，與此同時(shí)，排出體內(nèi)含有的汞、鎘、鉛等有害物質(zhì)。本發(fā)明是基于以下發(fā)現(xiàn)而完成的迄今已知，通過(guò)形成蚯蚓的不適環(huán)境而使蚯蚓吐出體內(nèi)的含有有毒物質(zhì)的糞等，然后將蚯蚓磨碎的方法，在這些方法中，組合特定的不適環(huán)境形成方法，并按特定的順序進(jìn)行，可獲得酶活性優(yōu)異且高的蚯蚓干燥粉末。即，重點(diǎn)是先給予金屬氯化物(滲透壓應(yīng)激)、然后再給予羥基羧酸(pH應(yīng)激)的順序。由于蚯蚓的分子生物學(xué)分析沒(méi)有推進(jìn)，因此詳細(xì)的機(jī)理未必是清楚的，但已知的是，在酵母、線蟲(chóng)、植物等其他模型生物的研究中，滲透壓應(yīng)激可以活化熱休克蛋白基因等多種應(yīng)激應(yīng)答基因的轉(zhuǎn)錄。由此，關(guān)于本發(fā)明所獲得的效果，作為所考慮的主要原因之一，例如可列舉出以下原因通過(guò)最初的滲透壓應(yīng)激，使熱休克蛋白(HSP)基因等活化，其后，通過(guò)經(jīng)由作為其他應(yīng)激的pH應(yīng)激，引起應(yīng)激應(yīng)答基因表達(dá)路徑的進(jìn)一步活化，從而使有用酶的產(chǎn)生量顯著增高。在本發(fā)明方法中，作為原料使用活蚯蝴，即，使用活著的蚯蚓。作為活蚯蟲(chóng)引沒(méi)有特別限定，例如可以使用粉正蝴(Lumbricus rubellus)、陸正蝴(Lumbricusterrestris)、赤子愛(ài)勝蝴(Eisenia foetida)、背暗異唇蝴(Allolobophora caliginosa)、八毛枝蟲(chóng)引(Dendrobaena octaedra)、Allolobophora japonica Michae I sen > Drawidahattamimizu HataiΛ Pheretima divergens Michaelsen、Pheretima communissima、Pheretima agrestis、Pheretima sieboldi Horst、Pheretima hilgendorfiΛPontodriIusmatsushimensis lizuka、 Tubifex hattai Nomura、 Limnodrilus gotoi Hatai (=L.SocialisStephenson)等。
本發(fā)明方法中，優(yōu)選的是，在使活蚯蚓與金屬的氯化物接觸之前，將活蚯蚓移動(dòng)到面包箱之類的平箱中，在明亮處放置1(Γ50小時(shí)，除去附著于體表的污物。放置在明亮處的時(shí)間更優(yōu)選為12 24小時(shí)。此時(shí)的收容量?jī)?yōu)選為蚯蚓堆積成3(T60mm的厚度、優(yōu)選堆積成4(Γ50_的厚度左右的量。該平箱內(nèi)不存在砂、泥之類的異物，另外，由于蚯蚓為夜行性，在暗處時(shí)生活活動(dòng)變得活躍，從而可能消耗體力，因此優(yōu)選夜間通過(guò)照明培養(yǎng)方式等保持明亮。通過(guò)該處置，使活蚯蚓發(fā)揮自我防御本能，排泄消化道內(nèi)殘留的消化物，并以該排泄物覆蓋全身，從而防止水分蒸發(fā)來(lái)維持生活環(huán)境，因此，若重復(fù)利用適當(dāng)手段剝除該覆蓋的污物，即排泄物，可以最終除去消化道內(nèi)的消化物和附著于體表的污物。附著于蚯蚓體表的污物的剝離例如可通過(guò)用無(wú)紡布包覆蚯蚓，使污物吸附在無(wú)紡布上來(lái)進(jìn)行。通過(guò)將該放置在明亮處和除去附著于體表的污物的處理、以及使蚯蚓與金屬氯化物和羥基羧酸接觸的處理進(jìn)行組合，可以期待排出、除去更多的蚯蚓體內(nèi)的有毒物。本發(fā)明所使用的金屬的氯化物是選自由鉀、鈉、鎂和鈣組成的組中的至少一種金屬的氯化物。即，選自由氯化鉀、氯化鈉、氯化鎂和氯化鈣組成的組中的至少一種。另外，也可以是它們的混合物，還可以是它們與可添加在食品中的其它無(wú)害成分的混合物。作為這種混合物，例如可列舉出食鹽、巖鹽、曬制的鹽。上述金屬的氯化物可以通過(guò)將粉末狀的金屬的氯化物撒到活蚯蚓上來(lái)使用，由此，發(fā)生蚯蚓與金屬的氯化物的接觸。使金屬的氯化物與活蚯蚓接觸后，再使活蚯蚓與羥基羧酸接觸。對(duì)于與羥基羧酸的接觸，可以通過(guò)將粉末狀的羥基羧酸撒到活蚯蚓上來(lái)進(jìn)行。在與上述金屬的氯化物接觸后迅速進(jìn)行與羥基羧酸的接觸。另外，優(yōu)選在使活蚯蚓與羥基羧酸接觸之前，對(duì)蚯蚓進(jìn)行水洗。若通過(guò)水洗除去上述金屬的氯化物后再使蚯蚓與羥基羧酸接觸，則可獲得酶活性高的蚯蚓干燥粉末。在活蚯蚓與羥基羧酸接觸之前進(jìn)行水洗的情況下，優(yōu)選在與金屬的氯化物的接觸開(kāi)始后的30分鐘以內(nèi)，更優(yōu)選在20分鐘以內(nèi)進(jìn)行水洗。水洗方法沒(méi)有特別限定，可以采用公知的方法。由于活蚯蚓與羥基羧酸粉末長(zhǎng)時(shí)間接觸會(huì)死亡，導(dǎo)致生活功能消失，從而變得不排泄消化道內(nèi)的消化物，因此需要盡可能快地、優(yōu)選在30秒以內(nèi)、更優(yōu)選20秒以內(nèi)用水稀釋羥基羧酸，將PH調(diào)整至2飛的范圍內(nèi)。
羥基羧酸形成對(duì)于蚯蚓而言不適的生活環(huán)境，因此，活蚯蚓根據(jù)自我保存本能放出體液、排泄物來(lái)改善生活環(huán)境。另外，羥基羧酸具有殺菌性，因此可以期待其發(fā)揮上述那樣地促進(jìn)消化器官內(nèi)殘留的消化物等的排泄的作用，還可發(fā)揮殺滅附著于蚯蚓上的雜菌的效果。本發(fā)明方法中使用的結(jié)晶狀羥基羧酸只要是在使用條件下顯示結(jié)晶狀體的羥基羧酸即可，不論其羥基數(shù)或羧基數(shù)如何均可使用。即，可以是單羥基單羧酸、單羥基多羧酸、多羥基單羧酸、多羥基多羧酸的任何一種。作為本發(fā)明中使用的羥基羧酸，例如可列舉出羥基乙酸、乳酸、醋酸、β_羥基丙酸、α-羥基正丁酸、羥基正丁酸、α-羥基正戊酸、β-羥基正戊酸、蘋(píng)果酸、α-甲基蘋(píng)果酸、α -羥基戊二酸、β -羥基戊二酸、檸檬酸、丙二酸和琥珀酸等。其中，從可在食品中使用且容易獲得的觀點(diǎn)考慮，優(yōu)選乳酸、醋酸、蘋(píng)果酸、檸檬酸、丙二酸和琥珀酸。羥基羧酸可以單獨(dú)使用一種，也可以混合兩種以上使用。
活蚯蚓的組織中65%為水分?；铗球镜纳眢w保護(hù)功能可以發(fā)揮一定的時(shí)間，但活蚯蚓若死亡，則酶發(fā)揮作用，因此，有必要慎重地控制在不適生活環(huán)境下放置的時(shí)間。該時(shí)間取決于條件，通常為3 180分鐘的范圍。在本發(fā)明中，將經(jīng)羥基羧酸處理的蚯蚓活體用水洗滌后，磨碎，制成液狀 糊料狀的磨碎物。洗滌優(yōu)選用純水進(jìn)行。洗滌方法沒(méi)有特別限定，可以采用公知的水洗方法。另夕卜，磨碎前的處理工序的合計(jì)時(shí)間，即，從向蚯蚓上撒上金屬的氯化物至用水洗滌羥基羧酸為止的時(shí)間優(yōu)選合計(jì)在240分鐘以內(nèi)。上述磨碎方法沒(méi)有特別限定，例如，使用均化器、混合機(jī)、均質(zhì)混合器、擂潰機(jī)、力口壓型細(xì)胞破碎裝置，通常在f25°C下進(jìn)行。從抑制蚯蚓構(gòu)成成分分解的觀點(diǎn)考慮，優(yōu)選在低溫下進(jìn)行，優(yōu)選2 15°C的溫度。將通過(guò)磨碎蚯蚓而得到的磨碎物容納于例如不銹鋼制托盤(pán)中，進(jìn)行冷凍干燥。此時(shí)，蚯蚓活體中含有的酶雖然對(duì)活細(xì)胞沒(méi)有作用，但對(duì)死細(xì)胞進(jìn)行瞬時(shí)作用，因此有可能產(chǎn)生腐敗性氣體，為了防止這種情況，優(yōu)選瞬時(shí)驟冷/冷凍至-18°C '35°C而抑制酶的作用后，進(jìn)行冷凍干燥。這樣，為了在不損害蚯蚓本來(lái)的藥理作用的條件下進(jìn)行粉末化，需要迅速冷凍，但另一方面，在過(guò)短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行冷凍時(shí)，有時(shí)與作為蚯蚓糊料的主成分的蛋白質(zhì)一起存在的雜質(zhì)形成點(diǎn)狀的不冷凍部分，無(wú)法分離，因此過(guò)快地冷凍是不優(yōu)選的。因此，冷凍優(yōu)選在-18°C _35°C的低溫下進(jìn)行20 240小時(shí)，更優(yōu)選進(jìn)行50 170小時(shí)。在冷凍干燥時(shí)，重要的是選擇可將雜質(zhì)與水分一起除去而不殘留的條件。因此，優(yōu)選在50Pa以下的壓力下、_60°C、90°C的溫度內(nèi)，分階段地升高溫度，并控制在1(Γ60小時(shí)的范圍內(nèi)。作為冷凍干燥方法，例如，如上述那樣地將磨碎物在_18°C "-35°C的溫度下冷凍20^240小時(shí)，然后在_60°C ^+90°C的溫度下，分多個(gè)階段地升溫，在壓力25 40Pa下，邊分多個(gè)階段減壓，邊冷凍真空干燥10飛0小時(shí)，從而可獲得無(wú)菌狀態(tài)的淡黃色蚯蚓干燥粉末。如上述那樣得到的蚯蚓干燥粉末根據(jù)蚯蚓的種類、采集場(chǎng)所、采集時(shí)間而變動(dòng)，在IOOg粉末中例如含有精氨酸7(Tl20mg、賴氨酸ll(Tl50mg、組氨酸35 60mg、苯丙氨酸55 80mg、酪氨酸50 75mg、亮氨酸100 150mg、異亮氨酸60 90mg、蛋氨酸25 40mg、纟顏氨酸70 105mg、丙氨酸85 135mg、甘氨酸75 105mg、脯氨酸60 85mg、谷氨酸210 300mg、絲氨酸80 llOmg、蘇氨酸75 llOmg、天冬氨酸150 220mg、色氨酸15 30mg和胱氨酸20 35mg。實(shí)施例接著，通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明。本發(fā)明不受以下實(shí)施例限定。[蚯蚓干燥粉末的制備]
(實(shí)施例I)將30kg在明亮處放置24小時(shí)后剝離附著于體表的污物的活粉正蚓以約5cm的厚度平鋪在平皿上，在其上均勻地撒上250g氯化鈉。20分鐘后，對(duì)蚯蚓進(jìn)行水洗。其后，同樣地撒上250g檸檬酸后，用15秒添加30升純水，進(jìn)行稀釋。此時(shí)，剛添加水后的PH為2. 25，完全稀釋時(shí)的pH為2. 74。撒上檸檬酸粉末時(shí)，蚯蚓一下子放出黃色體液，用水稀釋后，在該狀態(tài)下保持20分鐘。接著，從污濁的檸檬酸水溶液中取出活蚯蚓，水洗后，使用均化器在10°C下磨碎，制備蚯蚓糊料。接著，將該蚯蚓糊料抽吸脫氣，除去其中含有的氣體后，轉(zhuǎn)移到不銹鋼制托盤(pán)上，瞬時(shí)驟冷至-35°C，在該溫度下維持50小時(shí)，緩慢冷凍。將冷凍的蚯蚓糊料在-35 °C下保持OPa壓力2小時(shí)后，升溫至溫度25 °C，在40Pa下干燥10小時(shí)，接著在40°C、壓力35Pa下干燥14小時(shí)，接著在65°C、壓力35Pa下干燥12小時(shí)，最后將溫度設(shè)定在80°C，在壓力25Pa下保持6小時(shí)，進(jìn)行真空冷凍干燥。通過(guò)該處理，獲得含水量8質(zhì)量％的淡黃色的蚯蚓干燥粉末。(比較例I)將30kg在明亮處放置24小時(shí)后剝離附著于體表的污物的活粉正蚓以約5cm的厚度平鋪在平皿上，在其上均勻地撒上30升水。添加水后，在該狀態(tài)下保持20分鐘。接著，從水中取出活蚯蚓，水洗后，使用均化器在10°C下磨碎，制備蚯蚓糊料。接著，將該蚯蚓糊料抽吸脫氣，除去其中含有的氣體后，轉(zhuǎn)移到不銹鋼制托盤(pán)中，瞬時(shí)驟冷至-35°C，在該溫度下維持50小時(shí)，緩慢冷凍。將冷凍的蚯蚓糊料在_35°C下保持OPa壓力2小時(shí)后，升溫至溫度25°C，在40Pa下干燥10小時(shí)，接著，在40°c、壓力35Pa下干燥14小時(shí)，接著，在65°C、壓力35Pa下干燥12小時(shí)，最后，將溫度設(shè)定在80°C，在壓力25Pa下保持6小時(shí)，進(jìn)行真空冷凍干燥。通過(guò)該處理，獲得含水量8質(zhì)量％的淡黃色的蚯蚓干燥粉末。(比較例2)將30kg在明亮處放置24小時(shí)后剝離附著于體表的污物的活粉正蚓以約5cm的厚度平鋪在平皿上，在其上撒上250g檸檬酸，后用15秒添加30升純水，進(jìn)行稀釋。撒上檸檬酸粉末時(shí)，蚯蚓一下子放出黃色體液，用水稀釋后，在該狀態(tài)下保持20分鐘。接著，從污濁的檸檬酸水溶液中取出活蚯蚓，水洗后，使用均化器在10°C下磨碎，制備蚯蚓糊料。接著，將該蚯蚓糊料抽吸脫氣，除去其中含有的氣體后，轉(zhuǎn)移到不銹鋼制托盤(pán)上，瞬時(shí)驟冷至-35°C，在該溫度下維持50小時(shí)，緩慢冷凍。將冷凍的蚯蚓糊料在_35°C下保持OPa壓力2小時(shí)后，升溫至溫度25°C，在40Pa下干燥10小時(shí)，接著在40°C、壓力35Pa下干燥14小時(shí)，接著在65°C、壓力35Pa下干燥12小時(shí)，最后將溫度設(shè)定在80°C，在壓力25Pa下保持6小時(shí)，進(jìn)行真空冷凍干燥。通過(guò)該處理，獲得含水量8質(zhì)量％的淡黃色的蚯蚓干燥粉末。(比較例3)將30kg在明亮處放置24小時(shí)后剝離附著于體表的污物的活粉正蚓以約5cm的厚度平鋪在平皿上，在其上撒上250g檸檬酸。其后，添加30升水，進(jìn)行稀釋。撒上檸檬酸粉末時(shí)，蚯蚓一下子放出黃色體液，用水稀釋后，在該狀態(tài)下保持20分鐘。接著，從污濁的檸檬酸水溶液中取出活蚯蚓，水洗后，撒上250g氯化鈉，在該狀態(tài)下保持20分鐘 。接著，對(duì)活蚯蚓進(jìn)行水洗，使用均化器在10°C下磨碎，制備蚯蚓糊料。接著，將該蚯蚓糊料抽吸脫氣，除去其中含有的氣體后，轉(zhuǎn)移到不銹鋼制托盤(pán)上，瞬時(shí)驟冷至_35°C，在該溫度下維持50小時(shí)，緩慢冷凍。 將冷凍的蚯蚓糊料在-35 °C下保持OPa壓力2小時(shí)后，升溫至溫度25 °C，在40Pa下干燥10小時(shí)，接著在40°C、壓力35Pa下干燥14小時(shí)，接著在65°C、壓力35Pa下干燥12小時(shí)，最后將溫度設(shè)定在80°C，在壓力25Pa下保持6小時(shí)，進(jìn)行真空冷凍干燥。通過(guò)該處理，獲得含水量8質(zhì)量％的淡黃色的蚯蚓干燥粉末。(比較例4)將30kg在明亮處放置24小時(shí)后剝離附著于體表的污物的活粉正蚓以約5cm的厚度平鋪在平皿上，將250g檸檬酸和250g氯化鈉混合，均勻地撒在該粉正蚓上。其后，撒上250g檸檬酸和250g氯化鈉后，用15秒添加30升純水，進(jìn)行稀釋。撒上檸檬酸粉末和氯化鈉時(shí)，蚯蚓一下子放出黃色體液，用水稀釋后，在該狀態(tài)下保持20分鐘。接著，從污濁的檸檬酸水溶液中取出活蚯蚓，水洗后，使用均化器在10°C下磨碎，制備蚯蚓糊料。接著，將該蚯蚓糊料抽吸脫氣，除去其中含有的氣體后，轉(zhuǎn)移到不銹鋼制托盤(pán)上，瞬時(shí)驟冷至-35 °C，在該溫度下維持50小時(shí)，緩慢冷凍。將冷凍的蚯蚓糊料在_35°C下保持OPa壓力2小時(shí)后，升溫至溫度25°C，在40Pa下干燥10小時(shí)，接著在40°C、壓力35Pa下干燥14小時(shí)，接著在65°C、壓力35Pa下干燥12小時(shí)，最后將溫度設(shè)定在80°C，在壓力25Pa下保持6小時(shí)，進(jìn)行真空冷凍干燥。通過(guò)該處理，獲得含水量8質(zhì)量％的淡黃色的蚯蚓干燥粉末。[蚯蚓干燥粉末的效價(jià)檢測(cè)]〈測(cè)定試樣的制備〉向Ig上述獲得的各蚯蚓干燥粉末中添加20ml生理鹽水，在1500rpm下振蕩I小時(shí)。將其在10000Xg、4°C下離心分離15分鐘而得到的上清作為測(cè)定試樣。〈蛋白質(zhì)定量法〉蛋白質(zhì)定量按照考馬斯亮藍(lán)法(Bradford法，M. Bradford, Anal.Biochem.，72:248-254，1976)進(jìn)行計(jì)算。針對(duì)上述測(cè)定試樣，使用蛋白分析試劑盒(Bio-Rad Laboratories, Inc.)制備蛋白質(zhì)質(zhì)量測(cè)定用試樣，測(cè)定595nm處的吸光度。另外，通過(guò)使用牛血清白蛋白(Bovine, Sigma-Aldrich Co.)制作的校準(zhǔn)曲線,進(jìn)行蛋白質(zhì)質(zhì)量的換算。[表 I]
權(quán)利要求
1.一種蚯蚓干燥粉末的制造方法，其特征在于，使活蚯蚓與選自由鉀、鈉、鎂和鈣組成的組中的至少一種金屬的氯化物接觸， 其后，使粉末狀羥基羧酸與活蚯蚓接觸，用水稀釋，將pH調(diào)整至2 5，保持3 180分鐘后，對(duì)活蚯蚓進(jìn)行水洗、磨碎，并將所得到的磨碎物冷凍干燥。
2.—種蚯蚓干燥粉末的制造方法，其特征在于，使活蚯蚓與選自由鉀、鈉、鎂和鈣中的金屬的氯化物接觸， 其后，將活蚯蚓浸潰在PH調(diào)整至2飛的羥基羧酸水溶液中，保持3 180分鐘后，對(duì)活蚯蚓進(jìn)行水洗、磨碎，并將所得到的磨碎物冷凍干燥。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的蚯蚓干燥粉末的制造方法，其中，將所述活蚯蚓在明亮處放置1(Γ50小時(shí)后，剝離附著于體表的污物，然后與所述金屬的氯化物接觸。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的蚯蚓干燥粉末的制造方法，其中，將所述活蚯蚓在明亮處放置1(Γ50小時(shí)后，剝離附著于體表的污物，然后與所述金屬的氯化物接觸。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的蚯蚓干燥粉末的制造方法，其中，所述冷凍干燥是通過(guò)將磨碎物在-18 °C '35°C下冷凍20 240小時(shí)后，在真空下冷凍干燥而進(jìn)行的。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的蚯蚓干燥粉末的制造方法，其中，所述冷凍干燥是通過(guò)將磨碎物在-18 °C '35°C下冷凍20 240小時(shí)后，在真空下冷凍干燥而進(jìn)行的。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的蚯蚓干燥粉末的制造方法，其中，所述金屬的氯化物為氯化鈉。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的蚯蚓干燥粉末的制造方法，其中，所述金屬的氯化物為氯化鈉。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的蚯蚓干燥粉末的制造方法，其中，所述羥基羧酸為選自由醋酸、蘋(píng)果酸、檸檬酸、乳酸、丙二酸和琥珀酸組成的組中的至少一種。
10.根據(jù)權(quán)利要求2所述的蚯蚓干燥粉末的制造方法，其中，所述羥基羧酸為選自由醋酸、蘋(píng)果酸、檸檬酸、乳酸、丙二酸和琥珀酸組成的組中的至少一種。
全文摘要
本發(fā)明提供一種蚯蚓干燥粉末的制造方法，所述制造方法可以除去蚯蚓體內(nèi)含有的有害物質(zhì)，并可以制造含有高效價(jià)酶的蚯蚓干燥粉末。一種蚯蚓干燥粉末的制造方法，其特征在于，使活蚯蚓與選自由鉀、鈉、鎂和鈣組成的組中的至少一種金屬的氯化物接觸，其后，使粉末狀羥基羧酸與活蚯蚓接觸，用水稀釋，將pH調(diào)整至2~5，保持3~180分鐘后，對(duì)活蚯蚓進(jìn)行水洗、磨碎，并將所得到的磨碎物冷凍干燥。
文檔編號(hào)A61P7/02GK102724986SQ201180004473
公開(kāi)日2012年10月10日 申請(qǐng)日期2011年10月5日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月11日
發(fā)明者石井一行 申請(qǐng)人:井石有限會(huì)社