專利名稱：治療試劑的cns 遞送的制作方法
治療試劑的CNS遞送相關(guān)申請的交叉引用本申請要求美國臨時申請序列號61/358，857 (2010年06月25日提交)、61/360，786(2010年 7 月 I 日提交),61/387, 862(2010年 9 月 29 日提交),61/435, 710(2011年 I 月 24 日提交)、61/442，115(2011 年 2 月 11 日提交)、61/476，210(2011 年 4 月 15 日提交)、和61/495，268(2011年6月9日提交)的優(yōu)先權(quán)；其中每個的整體通過參考的方式并入本文。與該申請相關(guān)的美國申請:名稱為“乙酰肝素N-硫酸酯酶CNS遞送的方法和組合物，”于同日提交；“艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶的CNS遞送的方法和組合物，”于同日提交；“ β -半乳糖腦苷脂酶CNS遞送的方法和組合物，”于同日提交；“芳基硫酸酯酶A的CNS遞送的方法和組合物，”于同日提交；“Sanfilippo綜合癥類型B的治療，”于同日提交；其中每個的整體通過參考的方式并入本文。
背景技術(shù)：
酶替代治療(ERT)包括向受試者全身施用天然或重組衍生的蛋白質(zhì)和/或酶。批準(zhǔn)的療法主要是通過靜脈向受試者施用，并且對于治療潛在的酶缺乏癥的軀體癥狀有效。由于所述靜脈施用的蛋白質(zhì)和/或酶在進(jìn)入所述中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的細(xì)胞和組織內(nèi)的有限分布，具有CNS病因?qū)W的所述疾病的治療尤其具有挑戰(zhàn)性，因為所述靜脈施用的蛋白質(zhì)和/或酶沒有充分穿過血-腦屏障(BBB)。所述血-腦屏障(BBB)是由內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成的體系，其功能是保護(hù)所述中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)使免于遭受在所述血流中的有害物質(zhì)，例如細(xì)菌、大分子(例如蛋白質(zhì))和其它親水性分子，通過限制這種物質(zhì)穿過所述BBB的擴散并進(jìn)入所述潛在的腦脊髓液(CSF)和CNS。有幾種繞過所述BBB的方式，以增強治療試劑的腦遞送，包括直接的顱內(nèi)注射、所述BBB的短暫通透性、以及修飾活性劑 以改變組織分布。治療試劑完全繞過所述血管直接注射進(jìn)入腦組織，但是主要有患并發(fā)癥(傳染、組織損傷、免疫應(yīng)答)的風(fēng)險，所述并發(fā)癥由顱內(nèi)注射、以及所述活性劑從所述施用位點的輕度擴散所引起。到目前為止，蛋白質(zhì)直接施用進(jìn)所述腦物質(zhì)中不能實現(xiàn)顯著的治療效果，因為擴散障礙和可以被施用的治療體積有限。對流協(xié)助擴散已經(jīng)通過放置在所述腦實質(zhì)中的導(dǎo)管研究，使用緩慢的、長期的輸液(Bobo,等，Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A91, 2076-2080 (1994) ；Nguyen,等 J.Neurosurg.98,584-590(2003))，但是沒有使用這種方法進(jìn)行長期治療的批準(zhǔn)療法。另外，大腦內(nèi)導(dǎo)管的放置是非常侵入性的，并且作為臨床替代不太理想。鞘內(nèi)(IT)注射，或者施用蛋白質(zhì)到所述腦脊髓液(CSF)，也已經(jīng)被嘗試，但是沒有產(chǎn)生成功的治療。在這種治療方法中的主要的挑戰(zhàn)是所述活性劑傾向于非常緊密地綁定在腦室室管膜襯里，其阻止了隨后的擴散。目前，通過直接施用到所述CSF以治療腦遺傳性疾病，還沒有批準(zhǔn)的產(chǎn)品。事實上，很多人都認(rèn)為在大腦表面擴散的障礙、以及缺乏有效和便捷的遞送方式，極大地妨礙了在大腦中任何疾病達(dá)到足夠的治療效果。
許多溶酶體貯積癥影響神經(jīng)系統(tǒng)，從而在用傳統(tǒng)治療方法治療這些疾病中表現(xiàn)出獨特的挑戰(zhàn)。在受影響的個體的神經(jīng)元和腦膜中往往在大量聚集糖胺聚糖(GAG)，導(dǎo)致各種形式的CNS癥狀。迄今為止，還沒有成功地以任何方式治療由溶酶體疾病導(dǎo)致的CNS癥狀。因此，仍然非常需要有效地將治療試劑遞送到大腦。更具體地講，非常需要更有效地遞送活性劑到中樞神經(jīng)系統(tǒng)，用于治療溶酶體貯積癥。發(fā)明概述本發(fā)明提供了有效和較少侵入性的直接遞送治療試劑到中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的方法。部分上，本發(fā)明基于意外發(fā)現(xiàn)的基礎(chǔ)上，即溶酶體貯積癥的替代酶可以直接以高濃度(例如，大于約3mg/ml,4mg/ml,5mg/ml, 10mg/ml或更多)引入到有需要治療的受試者的腦脊髓液(CSF)中，使得所述酶有效和廣泛地在各表面之間擴散并在所述腦的各區(qū)域之間貫通，包括深部腦區(qū)域。更令人驚訝的是，本發(fā)明人已經(jīng)證明可以使用簡單的生理鹽水或緩沖液為基礎(chǔ)的制劑會達(dá)到如此高濃度蛋白的遞送，而不誘發(fā)實質(zhì)性的不利影響，如在所述受試者中嚴(yán)重的免疫反應(yīng)。因此，本發(fā)明提供了高效、臨床可取的和患者友好型的方法，用于直接CNS遞送以治 療具有CNS組分，特別是溶酶體貯積癥的各種疾病和紊亂。本發(fā)明在CNS靶向領(lǐng)域和酶替代療法中代表了顯著的進(jìn)步。此外，本發(fā)明向有需要治療的受試者提供了鞘內(nèi)(IT)施用治療試劑(例如替代酶)的方法。在一些實施方案中，替代酶可以是重組的、基因活化的或天然酶。如本文使用的，所述術(shù)語“鞘內(nèi)施用”，“鞘內(nèi)注射”，“鞘內(nèi)遞送”，或符合語法的等價表達(dá)，是指注射到所述脊椎管(圍繞所述脊髓的鞘內(nèi)空間)中。在一些實施方案中，根據(jù)本發(fā)明，“鞘內(nèi)施用”或“鞘內(nèi)遞送”是指通過腰區(qū)或腰部的IT施用或遞送，即腰部的IT施用或遞送。如本文使用的，所述術(shù)語“腰部”或“腰區(qū)”，是指在第三和第四腰椎(下背部)之間的區(qū)域，更包含所述L2-S1區(qū)的脊椎?？梢灶A(yù)期的是所述腰部IT施用或遞送區(qū)分超過小腦延髓池遞送(即，通過小腦周圍和下方的空間注入，通過在頭骨和脊椎頂部之間的開口)，因為根據(jù)我們的發(fā)明，腰椎IT施用或遞送提供到遠(yuǎn)端椎管的更好及更有效的遞送，而此外，小腦延髓池遞送，通常不良好地遞送至遠(yuǎn)端脊椎管。在一個方面，本發(fā)明提供的方法包括步驟:向正患有或者易患伴有溶酶體酶水平或者活性降低的溶酶體貯積癥的受試者鞘內(nèi)施用組合物，所述組合物包括所述溶酶體酶的替代酶，所述替代酶濃度大于約5mg/ml (例如，大于6mg/ml、7mg/ml、8mg/ml、9mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、30mg/ml、40mg/ml、50mg/ml、75mg/ml,或 100mg/ml)。在一些實施方案中，所述組合物進(jìn)一步包括一種或多種(i)緩沖劑，(ii)表面活性劑，或(iii)滲透壓調(diào)節(jié)劑。在一些實施方案中，所述組合物具有大約為3.0-8.0的pH(例如，4.0-7.5,5.0-7.5,5.5-7.7,5.5-7.0,6.0-7.0,6.5-7.5,6.5-7.0,或 5.5-6.5)。在一些實施方案中，所述組合物包括在制劑中的替代酶，所述制劑不合成CSF。在一些實施方案中，所述組合物在單一的劑量下施用，體積小于約15mL(例如，小于約 10mL、9mL、8mL、7mL、6mL、5mL、4mL、3mL、2mL、L 5mL, 1.0mT,或 0.5mL)。在一些實施方案中，所述鞘內(nèi)施用的組合物在受試者中不產(chǎn)生導(dǎo)致實質(zhì)性的不利影響。在某些實施方案中，所述鞘內(nèi)施用的組合物不導(dǎo)致適應(yīng)性T-細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。在又一個方面中，本發(fā)明提供的方法包括步驟:向正患有或者易患伴有溶酶體酶水平或者活性降低的溶酶體貯積癥的受試者施用組合物，所述組合物包括溶酶體酶替代酶，其施用包括在缺乏并發(fā)免疫抑制治療時的所述組合物的鞘內(nèi)施用。在一些實施方案中，所述方法不涉及治療的受試者的免疫耐受誘導(dǎo)。在某些實施方案中，所述方法不涉及使用T-細(xì)胞免疫抑制劑預(yù)處理或預(yù)調(diào)節(jié)所述受試者。在進(jìn)一步的方面中，本發(fā)明提供的方法，包括步驟:向正患有或者易患伴有溶酶體酶水平或者活性降低的溶酶體貯積癥的受試者，以治療有效劑量，鞘內(nèi)施用包括溶酶體酶替代酶的組合物，并且施用間隔，使得在一個或多個腦、脊髓和外周器官組織中達(dá)到溶酶體酶正常水平或活性的至少約10% (例如，至少約15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%，或 95% )。在一些實施方案中，所述酶遞送至的所述一種或多種腦組織包括腦膜組織。在一些實施方案中，所述腦膜組織選自:軟腦膜、硬腦膜、蛛網(wǎng)膜組織。在一些實施方案中，所述酶遞送至的所述一種或多種腦組織包括大腦組織。在某些實施方案中，所述大腦組織中為大腦的表面或淺部組織。在某些實施方案中，所述大腦的表面或淺部組織選自:軟腦膜組織、大腦皮質(zhì)帶狀組織、海馬、在所述大腦的表面距所述表面4mm以內(nèi)的組織、Virchow Robin空間、VR空間的血管、所述海馬、腦下表面的下丘腦部分、所述視神經(jīng)和神經(jīng)束、嗅球和突起物、及其組合。在一些實施方案中，所述酶遞送的所述大腦組織為大腦的深部組織。在某些實施方案中，所述大腦的深部組織選自大腦皮質(zhì)絲帶的內(nèi)部組織、在所述大腦表面距所述表面以下4mm的組織、在所述大腦表面距所述表面以下6mm的組織、在所述大腦表面距所述表面以下IOmm的組織、所述間腦、下丘腦、丘腦、腹側(cè)丘腦(prethalamus),以及底丘腦、后腦、大腦腳、紅核、顱神經(jīng)III核、深部灰質(zhì)、豆?fàn)詈恕⒒咨窠?jīng)節(jié)、尾狀核、豆?fàn)詈?、杏仁核、蒼白球，及其組合。在一些實施方 案中，所述酶遞送至的所述一種或多種腦組織包括所述小腦組織。在某些實施方案中，所述小腦組織選自分子層組織、浦肯野氏細(xì)胞層組織、顆粒細(xì)胞層組織、小腦腳、及其組合。在一些實施方案中，所述小腦組織是所述小腦的深部組織。在某些實施方案中，所述小腦的深部組織選自:浦肯野氏細(xì)胞層組織、顆粒細(xì)胞層組織、小腦深部白質(zhì)組織和小腦深部核組織。在一些實施方案中，所述酶遞送至的所述一種或多種腦組織包括腦干組織。在某些實施方案中，所述腦干組織選自腦干白質(zhì)組織和/或腦干核組織。在一些實施方案中，所述酶遞送至的所述脊髓的一種或多種組織是脊髓的表面或淺部組織。在某些實施方案中，所述脊髓的表面或淺部組織選自:軟腦膜、所述束狀的白質(zhì)、和在所述脊髓的表面距所述表面4_以內(nèi)的組織。在一些實施方案中，所述所述脊髓的一種或多種組織是所述脊髓的深部組織。在某些實施方案中，所述脊髓的所述深部組織選自:脊髓灰質(zhì)和室管膜細(xì)胞、以及在所述脊髓表面距所述表面以下4_的組織。在一些實施方案中，所述酶遞送至的所述一種或多種腦組織包括表面或者淺部組織。在某些實施方案中，所述表面或者淺部組織選自:軟腦膜、硬腦膜、和腦膜的蛛網(wǎng)膜組織、軟腦膜組織、大腦皮質(zhì)帶狀組織、在所述大腦的表面距所述表面4_以內(nèi)的組織、及其組合。在一些實施方案中，所述酶遞送至的組織包括深部組織。在某些實施方案中，所述深部腦組織選自:所述大腦的深部白質(zhì)、所述脊髓的深部灰質(zhì)、胼胝體、腦室周圍組織、丘腦、基底神經(jīng)節(jié)、間腦、海馬傘、在大腦皮質(zhì)絲帶以下的組織、在所述大腦表面距所述表面以下4mm的組織、在所述大腦表面距所述表面以下6mm的組織、在所述大腦表面距所述表面以下IOmm的組織、浦肯野氏細(xì)胞層、顆粒細(xì)胞層組織、小腦深部白質(zhì)組織和小腦深部核組織及其組合。在一些實施方案中，所述治療有效劑量的范圍從0.005mg/kg腦重量至100mg/kg腦重量。在某些實施方案中，所述治療有效劑量大于lmg/kg腦重量(例如大于5、10、15、
20、25、30、35、40、45、或者50mg/kg腦重量)。在某些實施方案中，所述治療有效劑量大于10mg/kg腦重量。在某些實施方案中，所述治療有效劑量大于30mg/kg腦重量。在一些實施方案中,所述施用間隔為每兩周一次。在一些實施方案中，所述施用間隔為每月一次。在一些實施方案中，所述施用間隔為每兩月一次。在一些實施方案中，所述施用間隔為每月兩次。在一些實施方案中，所述施用間隔為每周一次。在一些實施方案中，所述施用間隔是每周兩次或數(shù)次。在一些實施方案中，所述施用是持續(xù)的，例如通過持續(xù)灌注泵。在另一方面中，本發(fā)明提供了方法包括步驟:施用至正患有或者易患伴有溶酶體酶水平或者活性降低的溶酶體貯積癥的受試者，包含溶酶體酶替代酶的組合物，其中施用包括所述組合物的鞘內(nèi)施用，以使得所述替代酶被遞送到深部腦組織，在所述外部表面以下至少5mm(例如至少6mm、7mm、8mm、9mm、10mm.11mm、12mm、或者在所述外部表面以下更深)。在一些實施方案中，所述替代酶被遞送至在所述外部表面以下至少IOmm的深部腦組織。在某些實施方案中，所述替代酶特別地被遞送到所述深部腦組織的細(xì)胞溶酶體。在一些實施方案中，所述酶遞送至的所述深部腦組織選自:所述大腦的深部白質(zhì)、所述脊髓的深部灰質(zhì)、胼胝體、腦室周圍組織、丘腦、海馬傘、所述大腦皮質(zhì)絲帶以下的組織、在所述大腦表面距所述表面以下4mm的組織、在所述大腦表面距所述表面以下6mm的組織、在所述大腦表面距 所述表面以下IOmm的組織、浦肯野氏細(xì)胞層、顆粒細(xì)胞層組織、小腦深部白質(zhì)組織、和小腦深部核組織、及其組合.
在又一方面中，本發(fā)明提供的方法包括步驟:向正患有或者易患伴有溶酶體酶水平或者活性降低的溶酶體貯積癥的受試者鞘內(nèi)施用組合物，所述組合物包含由人類細(xì)胞制備的所述溶酶體酶的替代酶。在一些實施方案中，所述溶酶體貯積癥選自:天冬氨酰葡萄糖胺尿癥，膽固醇脂沉積病，沃爾曼病，胱氨酸病，Danon病,法布里病,Farber脂肪肉芽腫病,Farber病,墨角藻糖苷酶缺乏病，半乳糖唾液酸沉積癥Ι/II型，戈謝病類型Ι/Π/ΙΙΙ，球細(xì)胞腦白質(zhì)營養(yǎng)不良，克拉伯病，糖原貯積癥II，龐貝氏癥，GMl-神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥類型I/II/III，GM2-神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥類型I，泰-薩克斯病，GM2-神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥類型II，桑德霍夫病，GM2-神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥，α-甘露糖苷過多癥類型1/11，β-甘露糖苷過多癥，異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良，粘脂糖癥類型I，唾液酸沉積癥類型Ι/ΙΙ，粘脂糖癥類型ΙΙ/ΙΙI，粘脂糖癥類型IV，1-細(xì)胞病，粘脂糖癥類型IIIC假胡爾勒氏多種營養(yǎng)不良，黏多糖貯積癥類型I，黏多糖貯積癥類型II，亨特綜合癥，黏多糖貯積癥類型IIIA，Sanfilippo綜合癥類型Α、Β、或D (黏多糖貯積癥類型IIΙΒ，黏多糖貯積癥類型II 1C，黏多糖貯積癥類型IIID)，黏多糖貯積癥類型IVA，莫基奧綜合癥，黏多糖貯積癥類型IVB，黏多糖貯積癥類型VI，黏多糖貯積癥類型VII，Sly綜合癥，黏多糖貯積癥類型IX，多種硫酸酯酶缺乏癥，神經(jīng)元蠟樣脂褐質(zhì)沉積癥，CLNlBatten病，CLN2Batten病，尼曼匹克病類型A/B，尼曼匹克病類型Cl，尼曼匹克病類型C2，致密性成骨不全癥，Schindler病類型1/11，戈謝病和唾液酸貯積病。在一些實施方案中，所述溶酶體貯積癥選自=Hunters綜合癥、異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良(MLD)病、Sanfilippo綜合癥類型A、Sanfilippo綜合癥類型B、和球細(xì)胞腦白質(zhì)營養(yǎng)不良(GLD)病。在某些實施方案中，所述替代酶選自重組艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶(I2S)、芳基硫酸酯酶A(ASA)、乙酰肝素N-硫酸酯酶(HNS)、α -N-乙酰葡糖胺糖苷酶(Naglu)和β-半乳糖苷酶(GLC)。在一些實施方案中，所述替代酶含有甘露糖-6-磷酸(Μ6Ρ)殘基。在一些實施方案中，所述替代酶是包含溶酶體靶向部分的融合蛋白。在一些實施方案中，所述替代酶被遞送至神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞、血管周細(xì)胞和/或腦膜細(xì)胞。在某些實施方案中，所述替代酶被進(jìn)一步遞送至在所述脊髓中的神經(jīng)元。在一些實施方案中，所述鞘內(nèi)施用進(jìn)一步導(dǎo)致在外周靶組織中所述替代酶的全身遞送。在某些實施方案中，所述外周靶組織選自:肝臟、腎臟和/或心臟、內(nèi)皮、骨髓和骨髓來源的細(xì)胞、脾臟、肺臟、淋巴結(jié)、骨和軟骨、卵巢和睪丸。在一些實施方案中，所述鞘內(nèi)施用導(dǎo)致所述替代酶在腦靶組織、脊髓神經(jīng)元和/或外周靶組織中的溶酶體定位。在一些實施方案中，所述鞘內(nèi)施用導(dǎo)致GAG貯存在所述腦靶組織、脊髓神經(jīng)元和/或外周靶組織中的減少。在某些實施方案中，所述GAG貯存相對于對照，以至少20%、40%、50%、60%、80%、90%、1_倍、1.5-倍或者2-倍地減少。在一些實施方案中，所述鞘內(nèi)施用導(dǎo)致在神經(jīng)元中的液泡化減少。在一些實施方案中，所述神經(jīng)元包括浦肯野細(xì)胞。在一些實施方案中，所述鞘內(nèi)施用導(dǎo)致在所述腦靶組織、脊髓神經(jīng)元和/或外周靶組織中所述替代酶的酶活性增加。在某些實施方案中，所述酶活性相對于對照，以至少1-倍、2-倍、3-倍、4-倍、5-倍、6-倍、7-倍、8-倍、9-倍或者10-倍地增加。在某些實施方案中，所述增加的酶活性至少 約 10nmol/hr/mg、20nmol/hr/mg、40nmol/hr/mg、50nmol/hr/mg、60nmol/hr/mg、70nmol/hr/mg、80nmol/hr/mg、90nmol/hr/mg、100nmol/hr/mg、150nmol/hr/mg、200nmol/hr/mg、250nmol/hr/mg、300nmol/hr/mg、350nmol/hr/mg、400nmol/hr/mg、450nmol/hr/mg、500nmol/hr/mg、550nmol/hr/mg 或者 600nmol/hr/mgo在一些實施方案中，所述酶活性在所述腰區(qū)中增加。在某些實施方案中，在所述腰區(qū)中所述增加的酶活性至少約 500nmol/hr/mg、600nmol/hr/mg、700nmol/hr/mg、800nmol/hr/mg、900nmol/hr/mg、1000nmol/hr/mg、1500nmol/hr/mg、2000nmol/hr/mg、3000nmol/hr/mg、4000nmol/hr/mg、5000nmol/hr/mg、6000nmol/hr/mg、7000nmol/hr/mg、8000nmol/hr/mg、9000nmol/hr/mg、或者 10, OOOnmo I/hr/mg。在一些實施方案中，所述溶酶體貯積癥伴有周邊癥狀，并且所述方法進(jìn)一步包括向所述受試者靜脈施用所述替代酶。在某些實施方案中，所述靜脈施用沒有比每周施用更頻繁(例如沒有比兩周一次，每月一次、每兩個月一次、每三個月一次、每四個月一次、每五個月一次、或者每六個月一次更頻繁)。在某些實施方案中，所述靜脈施用沒有比每月施用更頻繁，例如每周兩次、每周一次、每隔一周、或者每月兩次。在一些實施方案中，靜脈和鞘內(nèi)施用在同一天執(zhí)行。在一些實施方案中，所述靜脈和鞘內(nèi)施用不在彼此的一定時間內(nèi)執(zhí)行，例如不執(zhí)行:在至少2天以內(nèi)、在至少3天以內(nèi)、在至少4天以內(nèi)、在至少5天以內(nèi)、在至少6天以內(nèi)、在至少7天以內(nèi)、或者在至少一周以內(nèi)。在一些實施方案中，靜脈和鞘內(nèi)施用按照交替的時間表執(zhí)行，例如每周一次、每隔一周、每月兩次或者每月一次交替施用。在一些實施方案中，鞘內(nèi)施用替代在施用時間表上的靜脈施用，例如在每周一次、每隔一周、每月兩次、或者每月一次進(jìn)行靜脈施用的時間表中，在該時間表中的每第三次或第四次或第五次施用可以用鞘內(nèi)施用代替靜脈施用。在一些實施方案中，靜脈施用代替在施用時間表上的鞘內(nèi)施用，例如在每周一次、每隔一周、每月兩次、或者每月一次進(jìn)行鞘內(nèi)施用的時間表中，在該時間表中的每第三次或第四次或第五次施用可以用靜脈施用代替靜脈施用。在一些實施方案中，靜脈和鞘內(nèi)施用是連續(xù)地執(zhí)行的，例如首先靜脈施用(例如每周一次、每隔一周、每月兩次、每月一次，給藥持續(xù)兩周、一個月、二個月、三個月、四個月、五個月、六個月或者一年或者更久)，然后鞘內(nèi)施用(例如每周一次、每隔一周、每月兩次、或每月一次給藥，持續(xù)超過兩周、一個月、二個月、三個月、四個月、五個月、六個月或者一年或者更久)。在一些實施方案中，首先執(zhí)行鞘內(nèi)施用(例如每周一次、每隔一周、每月兩次、每月一次、每兩個月一次、每三個月一次給藥，持續(xù)兩周、一個月、二個月、三個月、四個月、五個月、六個月或者一年或者更久)，然后靜脈施用(例如每周一次、每隔一周、每月兩次、或每月一次給藥，持續(xù)超過兩周、一個月、二個月、三個月、四個月、五個月、六個月或者一年或者更久)。在一些實施方案中，所述溶酶體貯積癥伴有周邊癥狀，并且所述方法包括鞘內(nèi)施用所述替代酶，但不涉及向所述受試者靜脈施用所述替代酶。在某些實施方案中，所述替代酶的所述鞘內(nèi)施用減輕或者減少所述受試者酶替代缺陷的一種或多種周邊癥狀。在另一方面中，本發(fā)明提供了治療Hunters綜合癥的方法，包括步驟:向有需要治療的受試者以治療有效劑量、鞘內(nèi)施用重組艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶(I2S)，并且施用間隔使得Hunters綜合癥的至少一種癥狀或特征在強度、嚴(yán)重程度或頻率方面減輕，或者延緩發(fā)生。在一些實施方案中，所述Hunters綜合癥的至少一種癥狀或特征為:認(rèn)知障礙；白質(zhì)病變；在所述腦實質(zhì)中擴張的血管周圍間隙、神經(jīng)節(jié)、胼胝體、和/或腦干；萎縮癥；和/或腦室擴大。在又一方面中，本發(fā)明提供了 治療異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良(MLD)病的方法，包括步驟:向有需要治療的受試者鞘內(nèi)施用治療有效劑量的重組芳基硫酸酯酶A(ASA))，并且施用間隔使得所述MLD病的至少一種癥狀或特征在強度、嚴(yán)重程度或頻率方面減輕，或者延緩發(fā)生。在一些實施方案中，所述MLD病的至少一種癥狀或特征為:顱內(nèi)壓增高、腦外積水、在中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)髓鞘中和在內(nèi)臟器官中的硫酸糖脂積累、進(jìn)行性的脫髓鞘、在所述CNS和PNS以內(nèi)的軸突損失、和/或運動和認(rèn)知功能障礙。在又一方面中，本發(fā)明提供了治療Sanf i I ippo綜合癥類型A (Sanf i I ippoA)病的方法，包括步驟:向有需要治療的受試者以治療有效劑量、鞘內(nèi)施用重組的乙酰肝素N-硫酸酯酶(HNS)酶，并且施用間隔使得至少Sanfilippo A病的至少一種癥狀或特征在強度、嚴(yán)重程度或頻率方面減輕，或者延緩發(fā)生。.
在另一方面中，本發(fā)明提供了治療Sanfilippo綜合癥類型B(Sanfilippo B)病的方法，包括步驟:向有需要治療的受試者以治療有效劑量、鞘內(nèi)施用重組的α -N-乙酰葡糖胺糖苷酶(Naglu),并且施用間隔使得Sanfilippo B病的至少一種癥狀或特征在強度、嚴(yán)重程度或頻率方面減輕，或者延緩發(fā)生。在一些實施方案中，所述Sanfilippo A或者Sanfilippo B病的至少一種癥狀或特征是聽力損失、言語發(fā)展障礙、運動技能缺陷、肌肉運動活動過度、進(jìn)行性的認(rèn)知障礙、攻擊性和/或睡眠障礙。在一些實施方案中，所述重組Naglu酶是包括Naglu和溶酶體祀向部分的融合蛋白。在某些實施方案中，所述溶酶體靶向部分是IGF-1I。在另一方面中，本發(fā)明提供了治療球細(xì)胞腦白質(zhì)營養(yǎng)不良(GLD)病的方法，包括步驟:向有需要治療的受試者以治療有效劑量、鞘內(nèi)施用重組的β_半乳糖苷酶(GLC)，并且施用間隔使得所述GLD病的至少一種癥狀或特征在強度、嚴(yán)重程度或頻率方面減輕，或者延緩發(fā)生。在一些實施方案中，所述GLD病的至少一種癥狀或特征是:易怒、抽搐、心智衰退、耳聾、失明、肌陣攣性癲癇發(fā)作、過度肌肉緊張、發(fā)育遲緩、發(fā)育技能的退化、過敏癥、震顫、運動失調(diào)、痙攣狀態(tài)、發(fā)作性嚴(yán)重嘔吐、腦白質(zhì)營養(yǎng)不良、大腦萎縮癥、球細(xì)胞的發(fā)育受損和/或脫髓鞘。在又一方面中，本發(fā)明提供了鞘內(nèi)施用設(shè)備，包括流體進(jìn)入端口 ；空心體，所述空心體具有與所述流體進(jìn)入端口液體連通的第一流體孔口以及配置插入到脊髓中的第二流體孔口 ；和固定機構(gòu)，所述固定機構(gòu)用于固定所述空心體在所述脊髓中的插入。在一些實施方案中，所述固定機構(gòu)包括安裝在所述空心體表面的一個或多個球形門柄、以及可調(diào)節(jié)覆蓋所述一個或多個球形門柄的縫合環(huán)。在一些實施方案中，所述流體進(jìn)入端口是包括貯液囊。在某些實施方案中，所述流體進(jìn)入端口是可植入的。在某些實施方案中，所述流體進(jìn)入端口是可注射的端口。在一些實施方案中，所述流體進(jìn)入端口是機械泵。如在這個申請中使用的，所述術(shù)語“大約”和“約”是等價使用的。在本申請中使用的任何具有或不具有大約/約的數(shù)字，其意思是打算覆蓋被在相關(guān)技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所意識到的任何正常波動。本發(fā)明的其它特征、目標(biāo)和優(yōu)點在下面的詳細(xì)描述中是顯而易見的。應(yīng)該理解，盡管詳細(xì)地描述，為了表明本發(fā)明的實施方案，僅僅是以解說的方式給出，而不是加以限制?，F(xiàn)有技術(shù)的技術(shù)人員從所述詳細(xì)的描述中，顯而易見地得到在本發(fā)明范圍以內(nèi)的多種變化和修改。 附圖概述所述附圖僅供說明的目的，而不是用于限制。

圖1圖解了具有固定機構(gòu)的鞘內(nèi)藥物遞送設(shè)備(IDDD)的示例圖。圖2Α描述了在患者體內(nèi)的示例性位置，其中IDDD可以放置；圖2Β描述了鞘內(nèi)藥物遞送設(shè)備(IDDD)的多種組件；以及圖2C描述了在IT-腰部注射的患者體內(nèi)的示例性插入位置。圖3描述了示例性結(jié)果，其概述了在成年猴中測試的媒介物。圖4描述了示例性結(jié)果，其圖解了在hGalC的絕熱板中(作為pH的函數(shù))hGalC的穩(wěn)定性。圖5描述了示例性結(jié)果，其圖解了 hGalC的比活性作為pH的函數(shù)圖6描述了示例性結(jié)果，其圖解了 hGalC的絕熱板作為鹽濃度的函數(shù).
圖7描述了示例性結(jié)果，其圖解了 GalC運行沉降速度，比較了在5mM磷酸鈉(PH6.0緩沖劑)中的不同離子強度。圖7A描述了示例性結(jié)果，其使用50mM NaCl和hGalC。圖7B描述了示例性結(jié)果，其圖解了 150mMNaCl和hGalC。圖7C描述了示例性結(jié)果，其圖解了 500mM NaCl和hGalC。圖7D描述了示例性結(jié)果，其圖解了 150mM NaCl和小鼠GalC。
圖8描述了示例性結(jié)果，其圖解了 GalC AUC性能作為鹽濃度的函數(shù)(lmg/mLGalC，5mM 憐酸鈉，pH6.0) (Y 軸=s*g(s*) ;X 軸=s*)。圖9描述了示例性結(jié)果，其圖解了在通用緩沖液(pH6.0)中hGalC的系列稀釋(Y-軸=< g(s*)/CQ> (I/svedberg) ;X-軸=s* (svedbergs)).
圖10描述了示例性結(jié)果，其圖解了 GalC AUC性能作為pH的函數(shù)(lmg/mL，3mM檸檬酸鹽、磷酸鹽和硼酸鹽緩沖液，具有50mM NaCl)。圖11描述了示例性結(jié)果，其圖解了從WDA分析得到的基線讀數(shù)，在最高濃度、pH6.0、5mM 磷酸鈉和 150mM NaCl 中。圖12描述了示例性結(jié)果，其圖解了從WDA分析得到的強調(diào)讀數(shù)，在最高濃度、pH6.0、5mM 磷酸鈉和 150mM NaCl 中。圖13圖形化地比較并覆蓋了基線和強調(diào)的GalC樣品。圖14描述了示例性結(jié)果，其圖解了存在1% NaTC中的hGalC的系列稀釋。圖15描述了示例性結(jié)果，其圖解了存在1% NaTC中的hGalC的系列稀釋(1.0mg/mL 和 0.3mg/mL)。圖16描述了示例性結(jié)果，其圖解了在不同的緩沖液和pH中的hGalC(lmg/mL)的固有熒光。圖17描述了示例性結(jié)果，其圖解了 hGalC的圓形二色性作為pH的函數(shù)。圖18描述了 示例性結(jié)果，其圖解了在125I_hGalC的單一鞘內(nèi)給藥后，在雄性Sprague-Dawley大鼠的血清、血液和紅血球中的放射性的組平均濃度。圖19描述了示例性結(jié)果，其圖解了在125I_hGalC的單一鞘內(nèi)給藥后，雄性Sprague-Dawley大鼠的血清、心臟、腎臟、肝臟、肺臟、脾臟中的放射性的平均組濃度。圖20描述了示例性結(jié)果，其圖解了在1251-hGalC的單一靜脈彈丸注射后，在雄性Sprague-Dawley大鼠的血清、心臟、腎臟、肝臟、肺臟、脾臟中的所述放射性的平均組濃度。圖21描述了示例性結(jié)果，其圖解了在1251-hGalC的單一鞘內(nèi)給藥和靜脈彈丸注射之后，在雄性Sprague-Dawley大鼠的血清、心臟、腎臟、肝臟、肺臟、脾臟中的放射性的平均組濃度。圖22描述了示例性結(jié)果，其圖解了在125I_hGalC的單一鞘內(nèi)給藥后，在雄性Sprague-Dawley大鼠的血清和多種組織(脂肪組織(腎臟脂肪)、腎上腺、骨(大腿骨)、肌肉(骨骼的)、坐骨神經(jīng)))中的放射性的平均濃度。圖23描述了示例性結(jié)果，其圖解了在1251-hGalC的單一靜脈彈丸注射后，在雄性Sprague-Dawley大鼠的血清和多種組織(脂肪組織(腎臟fast)、腎上腺、骨(大腿骨)、肌肉(骨骼的)、坐骨神經(jīng)))中的放射性的平均濃度。圖24描述了示例性結(jié)果，其圖解了在125I_hGalC的單一鞘內(nèi)給藥和靜脈彈丸注射之后，在雄性Sprague-Dawley大鼠的血清和組織(脂肪組織(腎臟fast)、腎上腺、骨(大腿骨)、肌肉(骨骼的)、坐骨神經(jīng)))中的放射性的平均濃度。圖25描述了示例性結(jié)果，其圖解了在125I_hGalC的單一鞘內(nèi)給藥之后，在雄性Sprague-Dawley大鼠的血清、腦脊髓液和多種其它組織中的放射性的平均濃度。圖26描述了示例性結(jié)果，其圖解了在1251-hGalC的單一靜脈彈丸注射之后，在雄性Sprague-Dawley大鼠的血清、腦脊髓液和多種其它組織中的放射性的平均濃度。
圖27描述了示例性結(jié)果，其圖解了在1251-hGalC的單一鞘內(nèi)給藥和靜脈彈丸注射之后，在雄性Sprague-Dawley大鼠的血清、腦脊髓液和組織中的放射性的平均濃度。圖28描述了示例性結(jié)果，其圖解了在125I_hGalC的單一鞘內(nèi)給藥之后，在雄性Sprague-Dawley大鼠的血清和組織中的放射性的平均濃度。圖29描述了示例性結(jié)果，其圖解了在1251-hGalC的單一靜脈彈丸注射之后，在雄性Sprague-Dawley大鼠的血清和組織中的放射性的平均濃度。圖30描述了示例性結(jié)果，其圖解了在1251-hGalC的單一鞘內(nèi)給藥和靜脈彈丸注射之后，在雄性Sprague-Dawley大鼠的血清和組織中的放射性的平均濃度。圖31描述了示例性結(jié)果,其圖解了 rmGalC的IP施用減少了在twitcher小鼠中的腦鞘氨醇半乳糖苷水平。數(shù)據(jù)表示平均值土SEM，η = 4只小鼠每個處理組。圖32描述了示例性結(jié)果，其圖解了增加的存活率與僅ICV和ICV/IPrmGalC療法.
圖33描述了示例性結(jié)果，其圖解了在twitcher小鼠中，在rmGalC的ICV和ICV/IP注射后，腦鞘氨醇半乳糖苷顯著減少。

圖34描述了示例性結(jié)果,其圖解了在用40ug的rmGalC處理的twitcher小鼠中觀察到組織學(xué)標(biāo)記物的改善。膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)作為星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物使用。Ibal作為小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞標(biāo)記物使用。溶酶體相關(guān)膜蛋白-1(LAMP-1)作為溶酶體標(biāo)記物使用。圖35描述了示例性結(jié)果，其圖解了在rmGalC或媒介物的單一 ICV注射后，鞘氨醇半乳糖苷再累積。圖36描述了示例性結(jié)果，其圖解了在用單一 ICV注射rmGalC(以PND19/20)處理的twitcher小鼠中的存活率。數(shù)據(jù)表示η = 8每組。圖37描述了示例性結(jié)果，其圖解了用rmGalC和rhGalC進(jìn)行ICV/IP處理小鼠的存活率。圖38描述了示例性結(jié)果，其圖解了單一 ICV注射rmGalC和rhGalC處理小鼠的步態(tài)分析。圖39描述了示例性結(jié)果,其圖解了在twitcher小鼠中對rmGalC或rhGalC的抗
原應(yīng)答。圖40描述了示例性結(jié)果，其圖解了在天然的和rhGalC-處理的GLD狗的所述CSF中的鞘氨醇半乳糖苷水平。圖41描述了示例性結(jié)果，其圖解了用組I多克隆抗體在所述大腦中IT注射GalC的IHC染色。圖42描述了示例性結(jié)果，其圖解了用組2抗體在所述大腦中IT注射GalC的IHC染色。圖43描述了示例性結(jié)果，其圖解了用小鼠單克隆抗體在所述大腦中IT注射GalC的IHC染色。圖44描述了示例性結(jié)果，其圖解了用小鼠單克隆抗體在所述大腦中IT注射GalC的IHC染色。圖45描述了示例性結(jié)果，其圖解了用小鼠單克隆抗體在所述肝臟中IT注射GalC的IHC染色。
圖46描述了示例性結(jié)果，其圖解了用組2多克隆抗體在所述肝臟中IT注射GalC的IHC染色。圖47描述了示例性結(jié)果，其圖解了在所述腦中的平均GalC活性。圖48描述了示例性結(jié)果，其圖解了在所述肝臟中的平均GalC活性。圖49描述了示例性結(jié)果，其圖解了在所述腦中GalC免疫染色，10X。圖50描述了示例性結(jié)果，其圖解了在所述腦中GalC免疫染色，40X。圖51描述了示例性結(jié)果，其圖解了活化小膠質(zhì)細(xì)胞的Iba染色，40X。圖52描述了示例性結(jié)果，其圖解了在所述腦中LFB/PAS染色，IOX0圖53圖解了示例性的I2S IHC，證明了:在鞘內(nèi)注射3劑量的I2S后，在所述大腦和小腦皮層(包括覆蓋所述腦(箭頭頭部)表面的一層腦膜細(xì)胞)中的神經(jīng)元(箭頭)中檢測到I2S。在2劑量注射的腦中，I2S IHC染色較弱(照片未顯示)。在媒介物對照動物的所述腦中，對于任何類型的細(xì)胞，沒有觀察到陽性I2S染色，40X。圖54描述了在鞘內(nèi)-腰椎I2S注射后，在IKO小鼠的腦中的病理的示例性揭露。H&E染色的腦組織顯示了(在所述媒介物對照動物中)大量的細(xì)胞儲存液泡(箭頭)。在2劑量(照片未顯示)和3劑量注射小鼠中，在整個腦中，細(xì)胞液泡化都減少。在所述3劑量注射小鼠中，發(fā)現(xiàn)顯著的減少(40X)。圖55描述了 LAMP-1示例性的免疫組織化學(xué)染色，在2劑量(照片未顯示)和3劑量的I2S治療之后，在所述腦中，溶酶體活性有顯著的減少(與媒介物對照小鼠相比)。所述減少的特征為:在所述整個腦 所述區(qū)域中，LAMP-1陽性細(xì)胞的數(shù)量較少、以及染色強度變較輕(40X)。圖56圖解了示例性的形態(tài)計量結(jié)果，通過比較在野生-類型(WT)、媒介物未處理的、以及I2S(2和3劑量)的小鼠之間的平均LAMP-1陽性區(qū)域(在所述大腦皮層(皮層)、尾狀核(CP)、丘腦(TH)、白質(zhì)(WM)和小腦(CBL)中)，證實了:在被評估腦的所有區(qū)域中的所述LAMP-1陽性染色中，有顯著的減少。數(shù)據(jù)以平均值土s.d顯示。# = P<0.05;* = P< 0.01 ;** = P < 0.001。圖57描述了腦細(xì)胞示例性的電子顯微照片，其示出了在超微結(jié)構(gòu)水平的病理改善。媒介物處理小鼠神經(jīng)元具有層狀的內(nèi)含物、斑馬體樣結(jié)構(gòu)和含有貯存顆粒材料(插入)的液泡，其在I2S注射的小鼠中減少。媒介物處理小鼠的少突膠質(zhì)細(xì)胞示出了大的低電子密度貯存粒(箭頭)，并且I2S-注射小鼠的少突膠質(zhì)細(xì)胞具有最小的液泡化。比例尺:在神經(jīng)元中，2 μ m ;在少突膠質(zhì)細(xì)胞中，500nm。圖58描述了示例性免疫組織化學(xué)結(jié)構(gòu)，證明:在鞘內(nèi)注射3劑量的I2S后，在所述肝臟的竇狀腺細(xì)胞中，檢測到I2S。在2劑量注射的肝臟中，2S IHC染色較弱(照片未顯示)。在媒介物對照動物的所述肝臟中，沒有觀察到陽性I2S染色(40X)。圖59描述了來自肝臟的示例性組織。通過H&E染色揭示了嚴(yán)重的細(xì)胞液泡化和異常高的溶酶體活性，并且在媒介物對照動物中發(fā)現(xiàn)強烈的LAMP-1免疫染色(與WT類型相比)。在用2照片未顯示)或者3劑量的I2S治療進(jìn)行鞘內(nèi)治療后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞液泡化和LAMP-1免疫染色顯著減少。H&E染色揭示了細(xì)胞質(zhì)內(nèi)液泡化幾乎完全消失，伴隨接近正常的肝臟細(xì)胞結(jié)構(gòu)(H&E，40X ；LAMP-1,20X)。圖60描述示例性的組織，示出了 3mg治療組動物的大腦。在腦膜細(xì)胞中觀察到陽性I2S染色(4X)。圖61描述了示例性的組織，示出了 30mg治療組動物的大腦。在神經(jīng)元和腦膜細(xì)胞中觀察到陽性I2S染色(4X)。圖62描述了示例性的的組織，示出了 IOOmg治療組動物的大腦。在神經(jīng)元和腦膜細(xì)胞中觀察到陽性I2S染色比在3和30mg處理動物中更強(4X)。圖63描述了示例性的的組織，示出了 150mg治療組動物的大腦。觀察到大群體的神經(jīng)元，并且是I2S陽性，伴隨強烈陽性腦膜細(xì)胞。圖64描述了示例性的組織，示出了 I2S陽性的神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞、以及腦膜細(xì)胞(在所述大腦的層I以內(nèi))，在30mg治療組動物中(40X)。圖65描述了示例性的組織，示出了 I2S陽性的神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞、以及血管周細(xì)胞(在所述大腦的層III以內(nèi))，在30mg治療組動物中(40X)。圖66描述 了示例性的組織，示出了 I2S陽性的神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞(在所述大腦的層VI以內(nèi)，靠近白質(zhì))，在30mg治療組動物中(40X)。圖67描述了示例性的組織，示出了強烈陽性的I2S染色，在150mg治療組動物的神經(jīng)元中(100X)。圖68描述了示例性的組織，示出了頸部脊髓的I2S免疫染色，在150mg治療中(4X)。圖69描述了示例性的組織，示出了腰椎脊髓的I2S免疫染色，在150mg治療組動物中(4X)。圖70描述了示例性的組織,示出了 meningial細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞和外延的/周邊的/神經(jīng)內(nèi)膜(結(jié)締組織細(xì)胞)的強烈陽性I2S免疫染色，在150mg治療組動物的所述腰椎切片中(40X)。圖71描述的圖像示出了在150mg治療組動物的腰椎脊髓中的神經(jīng)元為強烈的I2S陽性(40X)。圖72描述來自肝臟的示例性結(jié)果(從3mg治療組動物)。只有竇狀腺細(xì)胞為I2S陽性(40X)。圖73描述來自肝臟的示例性結(jié)果(從30mg治療組動物)。竇狀腺細(xì)胞和肝細(xì)胞為I2S陽性(40X)。圖74描述來自肝臟的示例性結(jié)果(從IOOmg治療組動物)。在竇狀腺細(xì)胞和肝細(xì)胞中，I2S免疫染色為強烈陽性(40X)。圖75描述來自肝臟的示例性結(jié)果(從150mg治療組動物)。在竇狀腺細(xì)胞和肝細(xì)胞中，識別I2S染色為強烈陽性(40X)。圖76描述來自心臟的示例性結(jié)果(從3mg治療組動物)。I2S免疫染色為陰性(40X)。圖77描述來自心臟的示例性結(jié)果(從30mg治療組動物)。間質(zhì)細(xì)胞為I2S陽性(40X)。圖78描述來自心臟的示例性結(jié)果(從IOOmg治療組動物)。觀察到I2S的陽性間質(zhì)細(xì)胞染色(40X)。圖79描述來自心臟的示例性結(jié)果(從150mg治療組動物)。觀察到I2S的陽性間質(zhì)細(xì)胞染色(40X)。圖80描述來自腎臟的示例性結(jié)果(從3mg治療組動物)。I2S免疫染色為陰性(40X)。圖81描述來自腎臟的示例性結(jié)果(從30mg治療組動物)。血管小球和間質(zhì)細(xì)胞為I2S陽性。圖82描述來自腎臟的示例性結(jié)果(從IOOmg治療組動物)。觀察到血管小球和間質(zhì)細(xì)胞I2S染色增加(40X)。圖83描述來自腎臟的示例性結(jié)果(從150mg治療組動物)。觀察到近端腎小管、血管小球和間質(zhì)細(xì)胞的陽性I2S染色(40X)。圖84圖解了免疫組織化學(xué)(IHC)研究的結(jié)果，其評估了每周使用劑量的艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶(I2S)的食蟹猴CNS組織。正如根據(jù)(IHC)所測定的，在整個所述CNS中有細(xì)胞沉積。在所述灰質(zhì)中I2S被檢測到，以劑量依賴型的方式，在所有組的(大腦、小腦、腦干和脊髓的)所述神經(jīng)元中。在所更高劑量組的表面灰質(zhì)中，大量的大腦神經(jīng)元對I2S染色為陽性，在所述表面皮層中(圖84A)。I2S在神經(jīng)元中檢測到(在所述丘腦(圖84B)、海馬(圖84C)、尾狀核(圖84D)和脊髓(圖84E)中)。Meningial和血管周細(xì)胞也為I2S染色陽性(圖84F)。所述確定的比例尺對應(yīng)于25um。圖85通過圖表地比較了艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶(I2S)在所述顱池和脊髓池中的清除率，通過標(biāo)繪I2S在這種池中相對于施用后的時間的量。圖86圖解了鞘內(nèi)施用艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶(I2S)至非人類靈長類，在6個月時間內(nèi)的劑量依賴的灰質(zhì)沉積。所述圖解的染色強度對應(yīng)于艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶在所述丘腦中的累積。在目前的圖86中，所述細(xì)胞核通過DAPI復(fù)染，并且似乎為藍(lán)色，所述蛋白質(zhì)(I2S)似乎為綠色。

圖87圖解了鞘內(nèi)施用艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶(I2S)至非人類靈長類，在單一注射后和在多注射后，在6個月時間段內(nèi)的劑量依賴的累積。所述圖解的染色強度對應(yīng)于I2S蛋白質(zhì)在所述大腦皮層的累積。圖88表明了艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶(I2S)的細(xì)胞定位(在靈長類的整個所述大腦)。圖88A圖解了腦組織(從所述靈長類大腦提取)的橫截面剖視圖，而圖88B圖解了所述范圍的特定區(qū)域?qū)?yīng)于在圖88A中識別切片的:白質(zhì)組織的三個區(qū)域(用W1、W2和W3指代)，接近腦室的白質(zhì)(VW)和表面灰質(zhì)(SG)組織。圖89A-D圖解了在6個月的時間段每月注射后，鞘內(nèi)施用艾杜糖醛酸_2_硫酸酯酶(I2S)至靈長類的神經(jīng)元和少突膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞、以及軸突連接。特別地，圖89A、圖89B、圖89C和圖89D說明了靈長類腦組織的細(xì)絲染色，在鞘內(nèi)施用艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶
(I2S)，并分別對應(yīng)于所述三個區(qū)域的白質(zhì)(Wl、W2和W3)、和表面灰質(zhì)區(qū)域(SG)，在圖87B中識別。圖89A圖解了在所述白質(zhì)(Wl)組織中，鞘內(nèi)施用I2S的少突膠質(zhì)細(xì)胞吸收。圖89B和圖89C分別圖解了在所述W2和W3白質(zhì)組織中的少突膠質(zhì)細(xì)胞吸收和軸突連接。圖89D圖解了在所述表面灰質(zhì)組織中(SG)，鞘內(nèi)施用I2S的神經(jīng)元吸收。圖90圖解了非人類靈長類，在靠近腦室的白質(zhì)(VW)中，艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶的細(xì)胞識別(在頂部左側(cè)的箭頭)。如在重疊圖像中所描述的(在底部右側(cè)的箭頭)，所述艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶與髓磷脂不相關(guān)聯(lián)(頂部右側(cè))。在存在的所述圖90中，所述核通過DAPI (底部左側(cè))蛋白質(zhì)(I2S)復(fù)染，在頂部左側(cè)方框出現(xiàn)。圖91圖解了健康比格犬組織中的染色，所述比格犬被腦室內(nèi)地(ICV)或者鞘內(nèi)地(IT)施用單一注射的艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶(I2S)。如在圖像a-h中描述的，I2S在整個所述灰質(zhì)(IT和ICV組兩者都)廣泛地分布，如通過免疫組織化學(xué)(IHC)測定的。圖像a和b圖解了，在所述大腦皮層中，神經(jīng)元對于I2S為陽性，在所有6個神經(jīng)元層中，從所述表面分子層至所述深部內(nèi)層(IT和ICV組兩者都)。圖像c和d圖解了，在所述IT和ICV組中的小腦皮層中，在神經(jīng)元(包括浦肯野細(xì)胞)中檢測到I2S。相似地，圖像e和f圖解了，在IT和ICV組中，在所述海馬中都有大量的神經(jīng)元對于I2S為陽性。最終，圖像g和h表明，(在包括IT和ICV組兩者中)I2S-陽性神經(jīng)元在所述丘腦和尾狀核中發(fā)現(xiàn)。在所述存在的圖91中，I2S染色用箭頭指示。圖92比較性地圖解了艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶基因敲除小鼠(IKO)的胼胝體組織，所述小鼠未處理、或者被鞘內(nèi)施用I2S。如所描述的，在所述I2S-處理IKO小鼠的胼胝體和穹窿組織中，所述處理的IKO小鼠表現(xiàn)某種溶酶體貯積癥的細(xì)胞液泡化特征減少。圖93A圖解了存在的溶酶體相關(guān)膜蛋白I (LAMPl)(—種溶酶體疾病病理學(xué)生物標(biāo)記物)的顯著減少，在所述處理IKO小鼠的表面大腦皮層(圖93A)中，相對于所述未處理IKO對照小鼠(圖93B)，在20X和40X的放大倍數(shù)。圖94描述了示例性的鞘內(nèi)藥物遞送設(shè)備(IDDD)。圖95描述了示例性的mR1-A-CATH1''低調(diào)鞘內(nèi)植入入口系統(tǒng)。圖96描述了示例性的鞘內(nèi)藥物遞送設(shè)備(IDDD)。圖97描述了示例性的鞘內(nèi)藥物遞送設(shè)備(IDDD)，其允許在家施用以進(jìn)行CNS酶替代治療(ERT)。

圖98是示例性的圖解，其示出了:在神經(jīng)元(浦肯野細(xì)胞)中，在單一大腦內(nèi)注射艾杜硫酶(idursulfase)的液泡化影響。圖99是示例性的圖解，其示出了:在所述腦中的I2S活性(與劑量和區(qū)域相關(guān))。圖100是示例性的圖解，其示出了艾杜硫酸酯(在不同深度的大腦皮層)的免疫組織化學(xué)定位。圖101是示例性的圖解，其示出了在猴子脊髓中的I2S活性，在鞘內(nèi)給藥艾杜硫酶后。圖102為示例說明，顯示了鞘內(nèi)注射艾杜硫酶后，猴子肝臟、心臟和腎臟的I2S活性。圖103描述了增加的Hunter-1T試驗程序的示例性圖表。圖104為示例性的圖解，顯示了在30mg劑量后，在腦組織中的各個部分的I2S濃度測量值。同樣地，不同圖對應(yīng)于不同的測量時間。圖105為示例性的圖解，顯示了在施用后隨著時間的推移，以各種產(chǎn)品濃度通過不同施用途徑的I2S濃度的測量值。如圖106描述了在t = 5小時，IV、IT-L，或ICV給藥后，食蟹猴中1241-標(biāo)記的艾杜硫酶-1T的PET顯像。圖107為示例性的圖解，顯示了靜脈內(nèi)施用后，血清中的ASA濃度數(shù)據(jù)。圖108為示例性的圖解，顯示了 IT腰椎施用后，血清中的ASA濃度數(shù)據(jù)。
圖109為示例性的圖解，顯示了 IV施用后，CSF中的ASA濃度。圖110為示例性的圖解，顯示了 IT-腰部施用后，CSF中的ASA濃度。圖111描述了在治療后，腦組織、腦膜、浸潤(中、高劑量組，兩種性別)中的示例性顯微照片。圖112描述了在治療后，腦組織、腦膜、浸潤(中、高劑量組，兩種性別)中的另一示例性顯微照片。圖113描述了在治療后，腦組織、血管周圍，浸潤(中等劑量雄性，高劑量雌性)的示例性顯微照片。圖114描述了用rhASAl治療后，免疫耐受MLD小鼠脊髓的示例性Alcian藍(lán)染色以及由Alcian藍(lán)染色動物頸部脊髓(在1、8、15和22天接受鞘內(nèi)注射rhASA，劑量為520mg/kg的腦重量或媒介物對照)所確定的硫腦苷酯減少的說明。正如所表明的那樣，用鞘內(nèi)注射rhASA治療導(dǎo)致減少硫腦苷酯在脊髓中的積累，包括在所述脊髓的頸部區(qū)域。圖115示出了經(jīng)rhASAl治療的免疫耐受MLD小鼠的Alcian藍(lán)染色脊髓切片的示例性形態(tài)分析；以及如形態(tài)分析物所確定的，在全脊髓(T-脊髓)、總灰質(zhì)(T-GM)、腰椎灰質(zhì)(L-GM)、頸椎灰質(zhì)(C-GM)、總白質(zhì)(T-WM)，腰椎白質(zhì)(L-WM)，和脊髓白質(zhì)(C-WM)中的Alcian藍(lán)光密度的結(jié)果說明。正如所表明的那樣，與媒介物對照相比，用rhASA治療的動物，觀察到統(tǒng)計學(xué)顯著的Alcian染色減少。圖116描述了用rhASAl治療的免疫耐受MLD小鼠白質(zhì)(海馬傘)LAMP染色的示例性減少，描繪的示例性結(jié)果說明了在海馬傘中如免疫組化法測定的LAMP-1水平。放大倍率=20X。正如所表明的那樣，用rhASA鞘內(nèi)注射治療導(dǎo)致在腦白質(zhì)中LAMP-1的減少。圖117示出了以r hASAl治療的免疫耐受MLD小鼠腦的LAMP染色的示例性形態(tài)計量分析，并且結(jié)果說明了用20mg/kg靜脈內(nèi)rhASA、300mg/kg腦重量鞘內(nèi)rhASA、520mg/kg腦重量靜脈內(nèi)的rhASA治療的動物胼胝體(CC)、海馬傘(F)、小腦白質(zhì)(CB-WM)和腦干(BS)，或媒介物對照的LAMP-1染色強度。圖118為示例性說明，顯示了在每隔一周(EOW) IT給藥為期6個月(主要的尸檢)后，媒介物給藥的青少年食蟹猴腦鉆孔的ASA濃度。圖119為示例性的圖解，顯示了在rhASAl的EOW IT給藥(1.8mg/劑為期6個月(主要的尸檢))后，青少年食蟹猴腦鉆孔的ASA濃度。圖120為示例性的圖解，顯示了 rhASAl的EOW IT給藥(6.0mg/劑為期6個月(主要的尸檢))后，青少年食蟹猴腦鉆孔的ASA濃度。圖121為示例性的圖解，顯示了 rhASAl的EOW IT給藥(18.6mg/劑為期6個月(主要的尸檢))后，青少年食蟹猴腦鉆孔的rhASA濃度。圖122為示例性的圖解，顯示了 rhASAl的EOW IT給藥(PBS-對照)(為期6個月(主要的尸檢))后，青少年食蟹猴腦鉆孔的rhASA濃度。圖123為示例性的圖解，顯示了媒介物的EOW IT給藥(為期6個月(主要的尸檢))后，青少年食蟹猴腦鉆孔的rhASA濃度。圖124為示例性的圖解，顯示了 rhASAl的EOW IT給藥(1.8mg/劑為期6個月(主要的尸檢))后，青少年食蟹I猴腦鉆孔的rhASA濃度。圖125為示例性的圖解，顯示了 rhASAl的EOW IT給藥(6.0mg/劑為期6個月(主要的尸檢))后，青少年食蟹猴腦鉆孔的rhASA濃度。圖126為示例性的圖解，顯示了 rhASAl的EOW IT給藥(18.6mg/劑為期6個月(主要的尸檢))后，青少年食蟹猴腦鉆孔的rhASA濃度。圖127為示例性的圖解，顯示了從選定的腦表面鉆孔的rhASA濃度，對于設(shè)備對照、媒介物、1.8mg、6.0mg和18.6mg處理的動物。(單獨的雄性和雌性、設(shè)備對照數(shù)據(jù)從恢復(fù)的尸檢獲得，所有其它數(shù)據(jù)從主要的尸檢獲得)。圖128為示例性的圖解，顯示了從選定的腦深部白質(zhì)區(qū)域鉆孔的rhASA濃度，對于設(shè)備對照、媒介物、1.8mg、6.0mg和18.6mg處理的動物。(單獨的雄性和雌性、設(shè)備對照數(shù)據(jù)從恢復(fù)的尸檢獲得，所有其它數(shù)據(jù)從主要的尸檢獲得)。圖129為示例性的圖解，顯示了從選定的腦深部灰質(zhì)區(qū)域鉆孔的rhASA濃度，對于設(shè)備對照、媒介物、1.8mg、6.0mg和18.6mg處理的動物。(單獨的雄性和雌性、設(shè)備對照數(shù)據(jù)從恢復(fù)的尸檢獲得，所有其它數(shù)據(jù)從主要的尸檢獲得)。圖130為示例性的圖解，顯示了從多個區(qū)域的選定鉆孔中的rhASA濃度，對于設(shè)備對照、媒介物、1.8mg、6.0mg和18.6mg處理的動物。(聯(lián)合的雄性和雌性、設(shè)備對照數(shù)據(jù)從恢復(fù)的尸檢獲得，所有其它數(shù)據(jù)從主要的尸檢獲得)。圖131為示例性的圖解，顯示了在青少年食蟹猴的脊髓切片中rhASA的濃度，在EOff IT給藥為期6-個月(恢復(fù)期尸檢)。圖132為示例性的圖解，顯示了在青少年食蟹猴的肝臟中rhASA的濃度，在EOW IT給藥為期6-個月(047-021)(恢復(fù)期尸檢)。

圖133為示例性的圖解，顯示了腦鉆孔的解剖學(xué)定位:在所述皮層下的WM、腦室周圍麗(以及深部白質(zhì))、以及皮層下的麗。圖134為示例性的圖解，顯示了腦鉆孔的解剖學(xué)定位:在胼胝體和胼胝體周圍皮層下的麗、內(nèi)囊-GP1、內(nèi)囊-尾狀核、深部白質(zhì)、皮層下的麗和皮層、豆?fàn)詈恕⒑惋D皮層下的麗和皮層。圖135為示例性的圖解，顯示了腦鉆孔的解剖學(xué)定位:在所述深部灰質(zhì)、深部WM(額葉腦室周圍和皮層下的)、以及皮質(zhì)下白質(zhì)和皮層-表面的失狀。圖136為示例性的圖解，顯示了腦鉆孔的解剖學(xué)定位:在胼胝體和胼胝體周圍皮層下的麗、深部皮層下的麗、深部灰質(zhì)、腦室周圍麗，皮層下的麗和海馬。圖137為示例性的圖解，顯示了腦鉆孔的解剖學(xué)定位:在胼胝體和和深部WM中。圖138為示例性的圖解，顯示了腦鉆孔的解剖學(xué)定位:在皮層下的WM-枕骨腦葉和小腦白質(zhì)，包括齒狀核(WM)。圖139A-G圖解在從成年和青少年食蟹猴的腦組織鉆孔提取的組織中，重組人類芳基硫酸酯酶A (ASA)的濃度，其被施用媒介物、1.8mgrhASA或者18.6mg rhASA。圖139A-G的每個對應(yīng)于在圖134中描述的腦組織區(qū)域。圖140A和圖140B為示例性的圖解，示出了在從成年和青少年食蟹猴的腦組織深部白質(zhì)(圖140A)或深部灰質(zhì)(圖140B)中，其被鞘內(nèi)施用(IT)或者腦室內(nèi)施用(ICV)，重組人類芳基硫酸酯酶A (ASA)的濃度的比較。圖141A顯示了自青少年(年齡< 12個月齡)食蟹猴(IT-施用18.6或1.8mg劑量的重組人芳基硫酸酯酶A (rhASA))鉆孔的多個組織檢測到的ASA濃度。如圖140A-B二者所示，遞送到組織的ASA濃度在2.5ng/mgrhASA之內(nèi)、或否則超過其的目標(biāo)治療濃度。腦組織的所述解剖區(qū)域的對應(yīng)于每一個在圖140A和圖140B所示的鉆孔編號:皮層下的白質(zhì)⑴；腦室周圍白質(zhì)和深部白質(zhì)⑵；皮層下白質(zhì)⑶；皮層下白質(zhì)⑷；內(nèi)囊(5);內(nèi)囊尾狀核(6);深部白質(zhì)(7);皮層下白質(zhì)和皮質(zhì)⑶；豆?fàn)詈?9);顳皮層下白質(zhì)和皮質(zhì)(10)，深部灰質(zhì)(11)，深部灰質(zhì)(12)，額葉腦室周圍&皮層下的(13);皮層下白質(zhì)，皮質(zhì)表面的perifalxian(14);胼胝體和胼胝周圍皮層下白質(zhì)(15);深部皮層下的白質(zhì)(16);深部灰質(zhì)(17);深部灰質(zhì)(18);腦室周圍白質(zhì)(19);深部皮層下的白質(zhì)(20);海馬(21);餅服體(22);深部白質(zhì)(23);皮層下的白質(zhì)，枕骨腦葉(24);和小腦白質(zhì)(25)。圖142A圖解了從IT-施用1.8mg的ASA的食蟹猴提取的深部白質(zhì)組織的區(qū)域。圖142B圖解了深部白質(zhì)組織的免疫染色，以及在相關(guān)細(xì)胞中的ASA分布。在圖142B中，所述蛋白質(zhì)(ASA)在所述右側(cè)底部方框中指出。圖142C圖解了所述IT-施用ASA，其顯示了:在食蟹猴深部白質(zhì)組織的細(xì)胞器共定位，特別是在溶酶體中。在圖142C中，所述ASA免疫染色在所述頂部左側(cè)方框中指出。圖143比較了:在IT-或者ICV-施用這種標(biāo)記ASA至食蟹猴之后的24小時，1241-標(biāo)記的芳基硫酸酯酶A(ASA)的分布(使用PET掃描)。圖144圖解了在緊隨ICV施用至食蟹猴之后，1241-標(biāo)記的ASA的分布，并且比較了在2-5小時以內(nèi)IT-施用的1241-標(biāo)記的ASA的分布。如所演示的，IT-施用遞送所述1241-標(biāo)記的ASA至與所述ICV施用顯示相同的初始房室(池和近端脊柱)。圖145描述了在小鼠模型中，示例性的ICV和IT施用。圖146A描述了示例性的結(jié)果，其說明了在6個月的給藥后，HNS作為時間的函數(shù)的CSF濃度(在1.5、4.5和8.311^劑量) 。圖146B詳述了示例性的結(jié)果，其說明了在所述CSF中的抗HNS濃度，在為期6個月的(在1.5,4.5和8.3mg劑量，在猴子中)IT施用之后。顯示的數(shù)據(jù)組合了雄性和雌性。圖146C詳述了示例性的結(jié)果，其說明了在所述CSF中的抗HNS濃度，在為期6個月的(在1.5,4.5和8.3mg劑量，在猴子中)IT施用之后(在6個月的給藥之后)。顯示的數(shù)據(jù)組合了雄性和雌性。所述兩個最高濃度(32，205ng/mL和15，467ng/mL)，在IT給藥6 (在8.3mg的HNS)之后，被從繪圖排除，因為在預(yù)給藥6沒有采集到CSF樣本。圖147描述了示例性結(jié)果，其說明了來自所述腦的腦膜和軟組織的組織切片的代表性圖像(用蘇木精和曙紅染色)。圖147A描述了示例性結(jié)果，其說明了在DC猴子中，嗜中性細(xì)胞局部浸潤至IT導(dǎo)管的低-能量視野。圖147B描述了示例性結(jié)果，其說明了在高劑量(8.3mg/劑)猴子的腦膜中，嗜酸性細(xì)胞浸潤的高能量視野；浸潤的總體嚴(yán)重程度于所述中等劑量(4.5mg/劑)組相似(未顯示)。圖147C描述了示例性結(jié)果，其說明了低劑量(1.5mg/劑)猴子的高能量視野，其顯示了在血管周空間(腦實質(zhì))中的嗜酸性細(xì)胞。圖147D描述了示例性結(jié)果，其說明了低劑量猴子(1.5mg/劑)，其顯示了在血管周空間和鄰近軟組織中的嗜酸性細(xì)胞。圖147E描述了示例性結(jié)果，其說明了在低劑量組動物的脊髓軟組織(通過箭頭表示)中的嗜酸性細(xì)胞；在所述區(qū)域中的神經(jīng)元是正常的。圖147F描述了示例性結(jié)果，其說明了在低劑量(1.5mg/劑)猴子中，嗜酸性細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞區(qū)域(箭頭表明嗜酸性細(xì)胞；所述方框表明小膠質(zhì)細(xì)胞的區(qū)域)。在所述神經(jīng)元中有幾個大的神經(jīng)元，所有這些是正常的。比例尺:200um。
圖148描述了示例性結(jié)果，其說明了在猴子脊髓和腦中的HNS酶活性。圖148A/B描述了示例性結(jié)果，其說明了在(A)雄性和(B)雌性猴子的脊髓中的活性。切片-3 =腰椎，切片3，6 =胸部的，以及切片9 =頸部的；0 =導(dǎo)管尖端。圖148C/D描述了示例性結(jié)果，其說明了在(C)雄性和(D)雌性猴子的腦中的HNS活性。切片從吻端至尾端進(jìn)行編號(3至15)。所有組織樣本的手機在所述末次給藥后的約24小時，或者在所述末次給藥的4周(對于所述恢復(fù)期動物)。DC，設(shè)備對照。所述數(shù)據(jù)呈現(xiàn)形式為平均值土 SEM，n = 4猴子(每個治療組)。圖149描述了示例性結(jié)果，其說明了在猴子腦和肝臟中的酶活性。圖149Α描述了示例性結(jié)果，其說明了在所述高劑量(8.3mg/劑)組猴子腦中的HNS活性分布。顯示了:所述腦的表面、深部、和非常深部(腦室周圍)區(qū)域的活性倍數(shù)-變化，與內(nèi)源性水平(DC組)的比較。所有的組織樣品的收集，在末次給藥后的約24小時，或者在末次給藥的4周(對于恢復(fù)期動物)。所述數(shù)據(jù)呈現(xiàn)以平均值土SEM，n = 6猴子(兩個性別)，腦切片6和9。兩只猴子的數(shù)據(jù)沒有包括在內(nèi)；在尸檢時所述導(dǎo)管被發(fā)現(xiàn)不通暢。圖149Β顯示了在猴子肝臟中的HNS活性。所有組織樣本的收集，在所述末次給藥后的約24小時，或者在所述末次給藥后的4周(對于恢復(fù)期動物)。DC，設(shè)備對照。Rec，恢復(fù)期。所述數(shù)據(jù)呈現(xiàn)形式為平均值土SEM, η = 4猴子(每個治療組)；除了所述低劑量(4.5mg/劑)雌性組(η = 3)。圖150描述了示例性結(jié)果，其說明了在青少年食蟹猴中的HNS定位:3_個月中間時期隊列。圖150Α描述了示例性結(jié)果，其說明了媒介物對照動物(Omg/劑)的小腦對于HNS免疫染色為陰性；20χ放大倍數(shù)。圖150Β描述了示例性結(jié)果，其說明了低劑量(1.5mg/齊U)的小腦，其顯示了:最小陽性染色限制于所述分子層；20x放大倍數(shù)。圖150C描述了示例性結(jié)果，其說明了中等劑量(4.5mg/劑)動物的小腦，其顯示了在所述外部顆粒層中的最小染色；20x放大倍數(shù)。圖150D描述了示例性結(jié)果，其說明了高劑量(8.3mg/劑)動物的小腦中的中度染色，包括分子層、外部顆粒層、以及浦肯野細(xì)胞；20x放大倍數(shù)。圖151描述了示例性的研究，在IT給藥1241-HNS (以I和10mg/kg的劑量)之后，將在所述頭部區(qū)域中的HNS濃 度隨時間(在所述第一個20分鐘中)進(jìn)行標(biāo)繪。圖152描述了示例性的研究，在IT給藥1241-HNS (以I和10mg/kg的劑量)之后，將在所述腦中的HNS濃度隨時間進(jìn)行標(biāo)繪。圖153描述了示例性的研究，在IT給藥1241-HNS (以I和10mg/kg的劑量)之后，將在所述腦區(qū)域中的HNS濃度隨時間進(jìn)行標(biāo)繪。圖154描述了示例性的研究，在IT給藥1241-HNS (以I和10mg/kg的劑量)之后，將在所述頭部區(qū)域中的HNS濃度隨時間進(jìn)行標(biāo)繪。圖155描述了示例性的研究，在IT給藥1241-HNS (以I和10mg/kg的劑量)之后，將在所述近端脊柱中的HNS濃度隨時間進(jìn)行標(biāo)繪。圖156描述了示例性的研究，在IT給藥1241-HNS (以I和10mg/kg的劑量)之后，將在所述中段脊柱中的HNS濃度隨時間進(jìn)行標(biāo)繪。圖157描述了示例性的研究，在IT給藥1241-HNS (以I和10mg/kg的劑量)之后，將在所述遠(yuǎn)端脊柱中的HNS濃度隨時間進(jìn)行標(biāo)繪。圖158描述了示例性的研究，在IT給藥1241-HNS (以I和10mg/kg的劑量)之后，將在所述肝臟中的HNS濃度隨時間進(jìn)行標(biāo)繪。
圖159描述了示例性的研究，在IT給藥1241-HNS (以I和10mg/kg的劑量)之后，將在所述腦中的HNS濃度隨時間進(jìn)行標(biāo)繪，單個(頂部)以及平均值土SD (底部)。圖160描述了示例性的研究，在IT給藥1241-HNS (以I和10mg/kg的劑量)之后，將所述肝HNS濃度隨時間進(jìn)行標(biāo)繪，單個(頂部)以及平均值土SD (底部)。圖161描述了示例性的研究，在IT給藥1241-HNS (以I和10mg/kg的劑量)之后，將所述腎臟HNS濃度隨時間進(jìn)行標(biāo)繪，單個(頂部)以及平均值土SD (底部)。圖162描述了示例性的研究，在IT給藥1241-HNS (以I和10mg/kg的劑量)之后，將所述心臟HNS濃度隨時間進(jìn)行標(biāo)繪，單個(頂部)以及平均值土SD (底部)。圖163描述了示例性的研究，在IT給藥1241-HNS (以I和10mg/kg的劑量)之后，將所述皮膚HNS濃度隨時間進(jìn)行標(biāo)繪，單個(頂部)以及平均值土SD (底部)。圖164描述了示例性的研究，在IT給藥124I_HNS(以I和10mg/kg的劑量)之后，將所述腦HNS濃度隨時間進(jìn)行標(biāo)繪(頂部)；以及在所述腦中非-房室PK參數(shù)的比較(底部)。圖165描述了示例性的研究在IT給藥124I_HNS(以I和10mg/kg的劑量)之后，將所述肝臟HNS濃度隨時間進(jìn)行標(biāo)繪(頂部)；以及在所述肝臟中非-房室PK參數(shù)的比較(底部)。圖166圖解示例性的來自正常人類初級纖維細(xì)胞，其被用于rhNaglu和Naglu-1GFII的細(xì)胞內(nèi)在化研究。rhNaglu的細(xì)胞吸收是最小的，而Naglu-1GFII的細(xì)胞吸收更明顯。Naglu-1GFII內(nèi)在化的飽和曲線表明了受體介導(dǎo)的吸收。這種吸收被IGFII抑制，但不被甘露糖-6-磷酸抑制。

圖167描述示例性的共聚焦顯微鏡研究的結(jié)果，其使用Sanfilippo B受試者的成纖維細(xì)胞(GM01426)。觀察到:Naglu-1GFII的廣泛內(nèi)在化，以及Naglu-1GFII與Lamp-1的共定位。圖168為示例性的圖解，其顯示了在野生類型(WT)、Naglu-/-(KO)和雜合體Naglu+/-(Het)小鼠中的Naglu活性。Naglu的總?cè)毕菰赟anfilippoB小鼠的腦、肝臟、腎臟和脾臟中觀察到。圖169描述了小鼠小腦的頂面觀和側(cè)視圖，表明了組織學(xué)分析腦池內(nèi)(IC)注射位點和剖切平面。中間的顯微照片，小鼠腦的橫向切片視圖以Ix級數(shù)。方框的區(qū)域表明在所述底部的顯微照片中，所述范圍為4x顯微圖像。底部的顯微照片，4x圖像的組織學(xué)切片。方框A和B表明了所述范圍為40x顯微圖像，在圖170和圖171中。圖170描述了在腦池內(nèi)注射(IC)后的7天，在Sanfilippo B小鼠中示例性的免疫組織化學(xué)，40x。rhNaglu和Naglu-1GFII (在神經(jīng)元中以及在膠質(zhì)細(xì)胞中)都表現(xiàn)廣泛的細(xì)胞吸收，并且所述分布和細(xì)胞吸收模式在所述兩個蛋白質(zhì)之間非常相似。(抗-人類Naglu單克隆抗體)。圖171描述了大腦皮層的示例性LAMP-1免疫染色，在40x放大倍數(shù)。與所述野生類型小鼠的腦相比，觀察到在所述媒介物處理的Sanfilippo B小鼠中觀察到溶酶體忙積增加，如所述增加的LAMP-1免疫染色陽性斑點所演示的。rhNalgu和Naglu-1GFII處理的Sanfilippo B小鼠的腦都表現(xiàn)溶酶體忙積的減少，這與wt小鼠非常相似。圖172A圖解了在IT-施用Naglu的Naglu-缺陷型小鼠的白質(zhì)組織中，細(xì)胞液泡化普遍地減少(相對于被施用媒介物的所述相同Naglu-缺陷型小鼠)。圖172B圖解了在鞘內(nèi)施用Naglu的Naglu-缺陷型小鼠的白質(zhì)組織中，溶酶體相關(guān)膜蛋白I(LAMPl)免疫染色顯著減少(相對于被施用媒介物的所述相同Naglu-缺陷型小鼠)。圖173從數(shù)量上圖解并比較了在被施用Naglu的Naglu-缺陷型小鼠(相對于被施用媒介物的所述野生類型、以及Naglu-缺陷型小鼠)的大腦皮層、尾狀核和豆?fàn)詈?CP)、丘腦(TH)、小腦(CBL)和白質(zhì)(WM)中測量的LAMP濃度。在鞘內(nèi)施用所述三劑量的Naglu后，在7天的過程中，在被分析的每個腦組織區(qū)域的所述LAMP-陽性區(qū)域進(jìn)一步地減少(圖173A)(相對于2劑量的Naglu，在2周的過程中(圖173B))。圖174圖解了示例性正中矢狀位解剖圖，其中人類CNS在該圖中作為參考使用，以表明在wt插管的大鼠中的注射位點。箭頭表面IT注射在所述脊髓和所述大腦皮層區(qū)域中的大約解剖學(xué)定位，其中組織從免疫組織化學(xué)采集。圖175圖解了在IT注射后，在所述腦中示例性的Naglu活性。在Naglu-ΤΑΤ和Naglu-1GFII注射的wt大鼠的腦中，Naglu活性顯著較高。圖176 描述 了在 IT 注射后 24 小時，(rhNaglu、Naglu-ΤΑΤ, Naglu-1GFII,Naglu-kif和PerT-Naglu處理的wt插管的大鼠)的大腦皮層的示例性Naglu免疫染色，20x。Naglu-1GFII是表現(xiàn)出良好地廣泛分布至所述腦實質(zhì)中的唯一蛋白質(zhì)。被細(xì)胞吸收進(jìn)入神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞中，這在Naglu-1GFII處理大鼠中也是顯著的。另一方面，在rhNaglu、Naglu-ΤΑΤ、Naglu kif和PerT-Naglu處理組中，所述蛋白質(zhì)保留在所述腦膜(M)中。圖177描述了來自圖176的選定切片的示例性高能量放大。上面的面板，在所述rhNaglu處理的wt插管的大鼠中，rhNaglu保持在所述腦膜(M)，在所述腦的軟組織中沒有發(fā)現(xiàn)陽性染色。下面的面板，在Naglu-1GFII處理的wt插管的大鼠中，觀察到良好地廣泛分布進(jìn)入所述腦實質(zhì)，并且在神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞中觀察到細(xì)胞吸收。圖178圖解了，在IT注射后的24小時，在所述腦和肝臟中的示例性Naglu活性。在所述三個組之間，在所述腦中的Naglu活性沒有表現(xiàn)出顯著的差異，在所述肝臟中對于Naglu活性，所述相同是真實的。這個結(jié)果表明在所述腦和肝臟中，Naglu活性被大程度地檢測到，由于末次注射法發(fā)生在犧牲前的24小時。圖179圖解了在IT注射Naglu-1GFII后，在所述腦和肝臟中的示例性總GAG水平。在媒介物處理的Sanfilippo B鼠中的總GAG表現(xiàn)出進(jìn)行性增加，這反映了由于隨Sanfilippo B小鼠年齡增長的累積效應(yīng)。GAG在所述腦中統(tǒng)計學(xué)顯著性降低，這在3x注射組中觀察到(P < 0.05)。在2x和3x注射組中，也觀察到GAG在肝臟中統(tǒng)計學(xué)顯著性地降低(p<0.05)。GAG水平在肝臟中(相對于在腦中)更快和更劇烈的變化，是在(對于亨特綜合癥)IT遞送I2S中國已經(jīng)被觀察到的現(xiàn)象。圖180描述了在IT注射后，在Sanfilippo B小鼠的腦中，Naglu的示例性生物分布。Naglu免疫熒光染色顯示了在所述腦的腦膜(M)和軟組織上的Naglu-1GFII蛋白質(zhì)。在所述2x和3x注射組中，觀察到細(xì)胞吸收。G:膠質(zhì)細(xì)胞。圖181為示例性的圖解,其顯示了所述小鼠腦的冠狀面。方框表示LAMP-1免疫染色的照片拍攝的部位。為了演示蛋白質(zhì)分布和功效的程度，選擇大腦皮層和皮層下組織(例如尾狀核、丘腦和白質(zhì))進(jìn)行LAMP-1免疫染色。圖182為示例性的圖解，其顯示了大腦皮層的LAMP-1免疫染色，在40x放大倍數(shù)。與野生類型小鼠的腦相比，在所述媒介物處理的SanfilippoB小鼠的腦中，觀察到溶酶體貯積增加，正如觀察到LAMP-1免疫染色陽性斑點的增加。在Naglu-1GFII IT注射后，溶酶體貯積的減少是顯著的:2x注射處理的Sanfilippo B小鼠腦的陽性斑點的大小減少，并且3x注射處理的Sanfilippo B小鼠腦的陽性斑點的大小和數(shù)量減少。圖183為示例性的圖解，其顯示了尾狀核、皮層下核的LAMP-1免疫染色(40x)。與在所述大腦皮層中看到的相似，在所述媒介物處理的Sanfilippo B小鼠的腦中，觀察到溶酶體貯積增加，正如觀察到的LAMP-1免疫染色陽性斑點的增加。在Naglu-1GFII IT注射后，溶酶體貯積減少是顯著的:2x注射處理的Sanfilippo B小鼠腦的陽性斑點的大小減少，并且3x注射處理的Sanfilippo B小鼠腦的陽性斑點的大小和數(shù)量減少。圖184為示例性的圖解，其顯示了所述丘腦、間腦核的LAMP-1免疫染色(40x)。在Naglu-1GFII IT注射后，溶酶體貯積的減少是顯著的:2x注射處理的Sanfilippo B小鼠腦的陽性斑點的大小減少，并且3x注射處理的Sanfilippo B小鼠腦的陽性斑點的大小和數(shù)量減少。圖185為示例性的圖解，其顯示了白質(zhì)的LAMP-1免疫染色(40x)。神經(jīng)元軸纖維的徑向磁跡將白質(zhì)從存在于圖181-184的灰質(zhì)區(qū)分開。盡管如此，可以在媒介物處理的Sanfilippo B小鼠腦中觀察到，溶酶體貯積增加的模式與所述野生小鼠相同。在Naglu-1GFI I IT注射后，溶酶體貯積減少是顯著的:在所述2x和3x注射處理的Sanfi I ippoB小鼠腦中，陽性斑點的大小減少，數(shù)量減少。圖186為示例性的圖解，其顯示了小腦皮層的LAMP-1免疫染色。所述小腦皮層的形態(tài)是明顯的:密集定位的顆粒神經(jīng)元、細(xì)胞減少的分子層、以及(在所述顆粒神經(jīng)元和所述分子層之間的)單層的Purkinje神經(jīng)元。Purkinje神經(jīng)元通過大細(xì)胞質(zhì)、以及突出進(jìn)入所述分子層的臨時性樹突識別。圖187為示例性的圖解，其顯示在所述腦、脊髓和肝臟中的Naglu染色。在所述腦和脊髓中，注射的Naglu在腦膜(M)中檢測到(僅通過IHC)，并且在其它區(qū)域沒有檢測到Naglu陽性染色。在所述肝臟 中，竇狀腺細(xì)胞⑶是Naglu陽性，并且在肝臟中沒有發(fā)現(xiàn)Naglu 吸收(H) ο圖188為示例性的圖解，其顯示了所述肝臟和脊髓的LAMP免疫染色和H&E染色。與所述媒介物動物相比，在Naglu處理的整個肝臟和脊髓中，LAMP染色都減少。H&E染色顯示，在肝臟中，在處理組中的細(xì)胞液泡化減少(與媒介物處理動物相比)。圖189A和圖189B為示例性的圖解，其顯示了所述腦的H&E染色、以及所述腦的形態(tài)改善，在為期3個月的6次每隔一周(EOW)的IT注射Naglu后。在所述處理的腦中，在所有被檢測區(qū)域中的所述細(xì)胞液泡化(箭頭)比媒介物組減少。圖190A和圖190B是示例性的圖解，其顯示了在多個腦區(qū)域中的LAMP免疫染色，在為期3個月6次IT Naglu注射后。與所述媒介物處理組相比，Naglu IT施用至SanfilippoB小鼠，導(dǎo)致溶酶體活性在所有被檢測區(qū)域中減少，通過LAMP免疫染色顯示。這種減少的特征為:LAMP陽性細(xì)胞數(shù)目減少，較小的細(xì)胞體積，以及較輕的染色。在所述小腦和腦干(其定位在靠近所述脊髓的腦尾狀核部分)中，(與其他腦區(qū)域相比)發(fā)現(xiàn)顯著的減少。在所述深部腦區(qū)域(包括所述白質(zhì)、海馬和丘腦)中，發(fā)現(xiàn)明顯的減少。圖191A和圖190B是示例性的圖解，其顯示了在為期3個月的6次IT Naglu注射后，在多個腦區(qū)域中的Iba IHC，其揭示了小膠質(zhì)細(xì)胞的活化。與媒介物處理相比，在所述Naglu處理組中，陽性細(xì)胞數(shù)目和染色強度沒有觀察到減少。盡管如此，陽性小膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)隨著在所有被檢測腦區(qū)域中細(xì)胞大小的減少而改變(與在所述媒介物組中大的和液泡化相比)(插入)。圖192A和圖192B是示例性的圖解，其顯示了在為期3個月的6次IT Naglu注射后，在多個腦區(qū)域中的GFAP IHC，其揭示了星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化。與媒介物處理相比，在所述小腦和腦干中，GFAP陽性染色減少，并且在其它被檢測區(qū)域中輕微地減少。定義為了使本發(fā)明更容易被理解，某些術(shù)語在下文首先被定義。下面的術(shù)語和其它術(shù)語的其它定義在整個說明書提出。約或者大約:如本文使用的，所述術(shù)語“約”或者“大約，”如應(yīng)用于一個或多個感興趣的值，其是指與規(guī)定的參考值相似的值。在某些實施方案中，所述術(shù)語“約”或者“大約”是指某范圍的值，其落入所述規(guī)定的參考值在任意方向上(大于或小于)的
1%、或更小以內(nèi)，除非另有說明或以其他方式明顯從上下文得出(除非其中該數(shù)字將超過100%的可能值)。轉(zhuǎn)佳:如本文使用的，所述術(shù)語“轉(zhuǎn)佳”意思是狀態(tài)的預(yù)防、減輕或者緩減，或者受試者狀態(tài)的改善。轉(zhuǎn)佳包括，但是不要求病情的痊愈或徹底的預(yù)防。在一些實施方案中，轉(zhuǎn)佳包括相關(guān)蛋白質(zhì)的水平或其活性的增加，所述相關(guān)蛋白質(zhì)在相關(guān)疾病組織中缺乏。生物活性::如本文使用的，所述短語“生物活性”是指在生物系統(tǒng)中具有活性的任何實際的特性，并且特別地在生物體中。例如，當(dāng)將試劑施用到生物體中，所述試劑對生物體具有生物效應(yīng)，這被認(rèn)為是生物活性。在特別的實施方案中，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)或多肽是生物活性的，該部分的蛋白或多肽將享有至少所述蛋白或多肽的一種生物活性，這通常被稱為“生物活性”部分。 填充劑:如本文使用的，所述術(shù)語“填充劑”是指復(fù)合物，其為凍干混合物添加質(zhì)量，并且有助于所述凍干塊狀物的物理結(jié)構(gòu)(例如促進(jìn)基本均勻的凍干塊狀物的生產(chǎn)，使其保持了開放的孔隙結(jié)構(gòu))。示例性的填充劑包括甘露醇、甘氨酸、氯化鈉、羥乙基淀粉、乳糖、蔗糖、海藻糖、聚乙二醇和葡萄聚糖。陽離子依賴型甘露糖-6-磷酸受體(C1-MPR):如本文使用的，所述術(shù)語“陽離子依賴型甘露糖-6-磷酸受體(C1-MPR) ”是指細(xì)胞受體，所述細(xì)胞受體在高爾基體中，在酸水解酶前體上結(jié)合甘露糖-6-磷酸(M6P)標(biāo)簽，并被注定運輸?shù)剿鋈苊阁w。除了甘露糖-6-磷酸，所述C1-MPR也結(jié)合其他蛋白質(zhì)，包括IGF-1I。所述C1-MPR也被稱為“M6P/IGF-1I受體”、“C1-MPR/IGF-1I受體”、“ IGF-1I受體”或者“IGF2受體”。這些術(shù)語和其省略語在本文中互換使用。并發(fā)免疫抑制療法:如本文使用的，所述術(shù)語“并發(fā)免疫抑制療法”包括作為預(yù)處理、預(yù)調(diào)節(jié)或者與治療方法平行的任意免疫抑制療法。稀釋劑:如本文使用的，所述術(shù)語“稀釋劑”是指藥學(xué)上可接受的(例如對施用到人類是安全的和非毒性的)稀釋物質(zhì)，其對于重組制劑的制備是有效的。示例性的稀釋劑包括無菌水、注射用制菌水(BWFI)、pH緩沖溶液(例如磷酸鹽-緩沖鹽水)、無菌生理鹽水、林格式溶液或者右旋糖溶液。劑型:如本文使用的，所述術(shù)語“齊麵”和“單位劑型”是指待治療患者的治療蛋白質(zhì)的物理上分離的單位。每個單位含有預(yù)定量的經(jīng)計算產(chǎn)生預(yù)期治療效果的活性材料。可以理解，盡管如此，所述組合物的總劑量可以被由主治醫(yī)生根據(jù)合理的醫(yī)學(xué)判斷決定。酶替代治療(ERT):如本文使用的，所述術(shù)語“酶替代治療(ERT) ”是指任意的治療策略，其可以通過所述丟失的酶以糾正酶缺乏。在一些實施方案中，所述丟失的酶通過鞘內(nèi)施用提供。在一些實施方案中，所述丟失的酶通過注入到血流中提供。一旦施用，酶被細(xì)胞吸收，并運輸?shù)剿鋈苊阁w，在所述溶酶體中所述酶發(fā)揮清除由于酶缺乏而累積在所述溶酶體中的材料。通常，為了使溶酶體酶替代治療有效，所述治療酶被遞送到在靶組織合適的細(xì)胞中的溶酶體(在所述組織中所述貯積缺陷是明顯的)。改善、增加、或者減少:如本文使用的，所述術(shù)語“改善”、“增加”或者“減少”或語法等價表達(dá)，包括相對于基線測量的值，例如在開始本文所描述的處理之前在相同個體中的測量，或者在缺乏本文所描述的處理的對照個體(或者多個對照個體)中的測量?！皩φ諅€體”是這樣的個體:其受到與所述正被治療的個體相同形式的溶酶體貯積癥的折磨，并且其與所述治療個體年齡相同(以確保在所述正被治療的個體和所述對照個體之間所述疾病所處的階段是可比性的)。個體、受試者、患者:如本文使用的，所述術(shù)語“受試者”、“個體”或者“患者”是指人類或者非人類的哺乳動物受試者。所述正被治療的個體(也稱為“患者”或者“受試者”)是患有疾病的個體(胎兒、嬰兒、兒童、青少年、成人)。鞘內(nèi)施用:如本文使用的，所述術(shù)語“鞘內(nèi)施用”或者“鞘內(nèi)注射”是指注射進(jìn)入所述脊椎管(在所述脊髓周圍的鞘內(nèi)空間)。多種技術(shù)可以使用，包括但不限于，側(cè)腦室注射(通過鉆孔或小腦延髓 池或腰椎穿刺或諸如此類)。在一些實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的“鞘內(nèi)施用”或“鞘內(nèi)遞送”是指IT施用或者遞送(通過腰部或腰區(qū))，即腰椎IT施用或者遞送。如本文使用的，所述術(shù)語“腰區(qū)”或“腰部”是指在所述第三和第四腰椎(下背部)骨之間的區(qū)域，更包含所述脊椎的L2-S1區(qū)域。連接體:如本文使用的，所述術(shù)語“連接體”是指，在融合蛋白中，不同于在天然蛋白質(zhì)中在特定位點出現(xiàn)的氨基酸序列，并且通常設(shè)計成柔性的或插入到在兩個蛋白質(zhì)部分之間的結(jié)構(gòu)中(例如α-螺旋)。連接體也被稱為間隔區(qū)。凍干保護(hù)劑:如本文使用的，所述術(shù)語“凍干保護(hù)劑”是指這樣的分子:其防止或減少蛋白質(zhì)或其它物質(zhì)在經(jīng)過冷凍干燥和后續(xù)儲存中的化學(xué)和/或物理的不穩(wěn)定性。示例性的凍干保護(hù)劑包括糖(例如蔗糖或海藻糖)；氨基酸(例如氨基酸(例如谷氨酸一鈉或組氨酸)；甲胺(例如甜菜堿)；感膠離子鹽(硫酸鎂):多元醇(例如三價或更高的糖醇，例如甘油、赤藻糖醇、甘油、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨糖醇和甘露醇)；丙二醇；聚乙二醇；普流羅尼類；及其組合。在一些實施方案中，凍干保護(hù)劑是非還原糖，例如海藻糖或蔗糖。溶酶體酶:如本文使用的，所述術(shù)語“溶酶體酶”是指任意的酶，其能夠在哺乳動物溶酶體中累積的材料，或者能使一種或多種溶酶體貯積癥癥狀得到拯救或轉(zhuǎn)佳。適合于本發(fā)明的溶酶體酶包括野生類型的或者修飾的溶酶體酶，并能使用重組和合成的方法制備，或者從天然來源中純化。示例性的溶酶體在表I中列出。溶酶體酶缺乏:如本文使用的，“溶酶體酶缺乏”是指一組遺傳性疾病，其由于至少一種酶的缺乏所導(dǎo)致，所述酶是在溶酶體中將大分子(例如酶底物)裂解成肽、氨基酸、單糖、核酸和脂肪酸所需要的。結(jié)果，患有溶酶體酶缺乏癥的個體在多種組織(例如CNSJf臟、脾臟、腸、血管壁和其它器官)中具有累積的材料。溶酶體貯積癥:如本文使用的，所述術(shù)語“溶酶體貯積癥”是指導(dǎo)致一種或多種溶酶體酶缺乏的任意疾病，所述溶酶體酶是代謝天然大分子所需要的。這些疾病通常導(dǎo)致在溶酶體中未降解分子的累積，導(dǎo)致貯藏粒(術(shù)語也稱為儲存囊泡)數(shù)量的增加。這些疾病和多種實施例在下文詳細(xì)地被描述。多肽:如本文使用的，“多肽”，一般而言，是指由至少兩個氨基酸彼此通過肽鍵連接成的一串。在一些實施方案中，多肽包括至少3-5個氨基酸，其中每個通過至少一個肽鍵的方式與其余的連接。那些在本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員會意識到有時多肽包括“非天然”氨基酸或者任選的、其它仍然能合并到多肽鏈中的其它實體。替代酶:如本文使用的，所述術(shù)語“替代酶”是指任意的酶，其能發(fā)揮作用以替代至少部分的所述(在待治療的疾病中)缺乏或丟失的酶。在一些實施方案中，所述術(shù)語“替代酶”是指任意的酶，其能發(fā)揮作用以替代至少部分的所述(在待治療的溶酶體貯積癥中)缺乏或丟失的溶酶體酶。在一些實施方案中，替代酶能減少在哺乳動物溶酶體中累積的材料，或者其能拯救或改善一種或多種溶酶體貯積癥癥狀。適合于本發(fā)明的替代酶包括野生類型或者修飾的溶酶體酶，并且能使用重組和合成的方法制備或者從天然來源中純化。替代酶可以是重組的、合成的、基因活化的或者天然的酶?？扇苄?如本文使用的，所述術(shù)語“可溶性”是指治療試劑形成均勻的溶液的能力。在一些實施方案中，所述治療試劑在所述溶液中的可溶性(其在所述溶液中被施用，并且通過它運輸?shù)阶饔玫陌邢蛭稽c(例如所述腦的所述細(xì)胞和組織))是足夠的，以允許遞送治療有效量的治療世界至作用的靶向位點。 幾種因素可以影響所述治療試劑的可溶性。例如，可能影響蛋白質(zhì)可溶性的相關(guān)因素包括離子強度、氨基酸序列和存在其它共溶試劑或者鹽(例如鈣鹽)。在一些實施方案中，所述藥物組合物被配制，使得所述鈣鹽從這種組合物中排除。在一些實施方案中，依照本發(fā)明的所述試劑是在對應(yīng)的組合物中可溶性的?？梢岳斫?，當(dāng)?shù)葷B溶液通常對于腸胃外施用藥物是優(yōu)選的，使用等滲溶液可能限制一些治療世界充分的溶解性，特別是某些蛋白質(zhì)和/或酶。已經(jīng)表明，輕微高滲溶液(例如高達(dá)175mM氯化鈉，在5mM磷酸鈉中，pH7.0)和含糖溶液(例如高達(dá)2%蔗糖，在5mM磷酸鈉中，pH7.0)在猴中具有良好的耐受性。例如，最常見的批準(zhǔn)的CNS推注制劑組合物是生理鹽水(在水中 150mM NaCl)。穩(wěn)定性:如本文使用的，所述術(shù)語“穩(wěn)定的”是指所述治療試劑在較長期間保持其治療效果(例如所有的或者大部分的其預(yù)期生物活性和/或理化完整性)的能力。所述治療試劑的穩(wěn)定性，以及所述藥物組合物保持這種治療試劑的穩(wěn)定性的能力，可以在延長的時間周期內(nèi)進(jìn)行評估(例如至少1、3、6、12、18、24、30、36月或更久)。通常，本文描述的藥物組合物已經(jīng)被配制，可以使得其能穩(wěn)定、或者作為選擇減慢或阻止與之相配制的一種或多種治療試劑(例如重組蛋白質(zhì))的所述降解。在配制的情況下，穩(wěn)定的制劑是一種，在這種制劑中所述治療試劑在儲存和在加工過程中(例如冷凍/融化，機械混合和凍干)，基本保持其物理的和/或化學(xué)完整性和生物活性。對于蛋白質(zhì)穩(wěn)定性，其可以通過形成高分子量(HMW)聚集物酶活性損失、肽片段形成和電荷轉(zhuǎn)移性能進(jìn)行測量。
受試者:如本文使用的，所述術(shù)語“受試者”意思是任意的哺乳動物，包括人類。在本發(fā)明的某些實施方案中，所述受試者是成年人、青少年或者嬰兒。本發(fā)明也考慮了所述藥物組合物的施用、和/或子宮內(nèi)治療方法的性能?；镜耐葱?本文使用的所述短語“基本的同源性”是指，在氨基酸或核酸序列之間的比較。如本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員的理解，兩條序列通常會被認(rèn)為“基本同源”，如果它們在對應(yīng)的位點含有同源的殘基。同源的殘基可以是相同的殘基?？蛇x擇的，同源的殘基也可以是不相同的殘基，其具有合適的相似結(jié)構(gòu)和/或功能特性。例如，如本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所已知的，某些氨基酸通常被分類為“疏水的”或者“親水的”氨基酸，和/或具有“極性”或“非極性I”側(cè)鏈。一個氨基酸取代另一個相同類型的氨基酸，通常被認(rèn)為是“I同源”取代。 眾所周知在本領(lǐng)域技術(shù)中，氨基酸或者核酸序列可以使用多種算法比較，包括商業(yè)計算機程序，例如核酸序列的BLASTN，氨基酸序列的BLASTP、間隙BLAST (gapped BLAST)和PS1-BLAST。示例性的這種程序在這些文獻(xiàn)中進(jìn)行了描述:Altschul,等，Basic localalignment searchtool, J.Mol.Biol.,215(3):403-410,1990 ;Altschul,等，Methodsin Enzymology ；Altschul,等， "Gapped BLAST and PS1-BLAST:a new generationof protein database search programs " , Nucleic Acids Res.25:3389-3402,1997 ；Baxevanis, et al., Bioinformatics:A Practical Guide to the Analysis of Genesand Proteins, Wiley, 1998 ；and Misener, 等，(eds.), Bioinformatics Methods andProtocols (Methods in Molecular Biology, Vol.132), Humana Press, 1999.除了識別同源序列，上述提及的所述程序通常提供同源性程度的指示。在一些實施方案中，兩個序列被認(rèn)為基本同源，如果他們相應(yīng)殘基的至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多在相關(guān)延伸的殘基之間是同源的。在一些實施方案中，所述相關(guān)延伸是完全的序列。在一些實施方案中，所述相關(guān)延伸是至少 10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500 或更多殘基。

基本一致性:本文使用的所述短語“基本一致性”是指在氨基酸或者核酸序列之間的比較。如本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所理解的，兩條序列通常會被認(rèn)為是“基本一致的”，如果它們在相應(yīng)的位點含有一致的殘基。眾所周知在本領(lǐng)域技術(shù)中，氨基酸或者核酸序列可以使用多種算法中的任意一個進(jìn)行比較，包括在商業(yè)計算機中的程序，例如核酸序列的BLASTN，以及氨基酸序列的BLASTP、間隙BLAST (gapped BLAST)和PS1-BLAST。示例性的這種程序在下述的文獻(xiàn)中進(jìn)行了描述:Altschul,等，Basic local alignment search tool,J.Mol.Biol., 215 (3):403-410,1990 ;Altschul,等，Methods in Enzymology ；Altschul等，Nucleic Acids Res.25:3389-3402,1997 ；Baxevanis et al., Bioinformatics:APractical Guide to the Analysis of Genes and Proteins, Wiley,1998 ；and Misener,等，(eds.), Bioinformatics Methods and Protocols(Methods in Molecular Biology,Vol.132), Humana Press, 1999.除了識別這些一致的序列，上文所提及的所述程序通常提供了一致性程度的指示。在一些實施方案中，所述序列被認(rèn)為是基本一致的，如果他們相應(yīng)殘基的至少 50%,55%,60%,65%,70%,75%,80%,85%,90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%、99%或更多在相關(guān)延伸的殘基之間是一致的。在一些實施方案中，所述相關(guān)延伸是完全的序列。在一些實施方案中，所述相關(guān)延伸是至少10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500 或更多殘基。合成的CSF:如本文使用的，所述術(shù)語“合成的CSF”是指具有與腦脊髓液一致的pH、電解質(zhì)組成、葡萄糖含量和滲透壓的溶液。合成的CSF也被稱為人工CSF。在一些實施方案中，合成的CSF是Elliott’ s B溶液。適合于CNS遞送:如本文使用的，所述短語“適合于CNS遞送”或者“適合于鞘內(nèi)遞送”是指本發(fā)明的所述藥物組合物，通常是指這些組合物的穩(wěn)定性、耐受性和可溶性性能，以及這些組合物遞送有效量的含于其中的治療試劑至遞送祀向位點(例如所述CSF或者所述腦)的能力。靶組織:如本文使用的，所述術(shù)語“靶組織”是指受到待治療的所述溶酶體貯積癥影響的任意組織，或者在其中所述缺乏的溶酶體酶正常表達(dá)。在一些實施方案中，靶組織包括這些組織，在其中具有可檢測的或者異常高量的酶底物(例如儲存在所述組織的所述細(xì)胞溶酶體中)，在患有或者易患有溶酶體貯積癥的患者中。在一些實施方案中，靶組織包括這些組織:其表現(xiàn)疾病相關(guān)病理、癥狀或特征。在一些實施方案中，靶組織包括這些組織:在其中所述缺乏的溶酶體酶以升高的水平正常表達(dá)。如本文使用的，靶組織可以是腦部靶組織、脊髓靶組織和/或周邊靶組織。示例性的靶組織在下文詳細(xì)描述。治療部分:如本文使用的，所述術(shù)語“治療部分”是指部分的分子，其為所述分子提供治療效果。在一些實施方案中，治療部分是具有治療活性的多肽。治療有效量:如本文使用的，所述術(shù)語“治療有效量”是指治療性蛋白質(zhì)(例如替代酶)的量，其給予所述治療的受試者治療效果，以合理的效益/風(fēng)險比率(適合于任意的醫(yī)療)。所述治療效果可以是客觀的(例如通過某種測試或者標(biāo)記物測量)或主觀的(例如受試者給出的效果的指示或感覺)。特別地，所述“治療有效量”是指某種量的治療蛋白質(zhì)或者組合物有效治療、改善或者阻止預(yù)期的病或者病情，或者表現(xiàn)可檢測的治療或者預(yù)防效果(例如通過改善疾病相關(guān)癥狀、阻止或者延緩所述疾病的發(fā)生、和/或減少所述疾病的嚴(yán)重程度或頻率)。在給藥方案上的治療有效量通常施用，可以包括多種單位劑量。對任何特定治療蛋白質(zhì)，治療有效量(和/或在有效給藥方案內(nèi)的合適的單位劑量)會有所不同，例如，根據(jù)施用途徑、以及其它藥物試劑。而且，任何特定患者的所述特定的治療有效量(和/或單位劑量)可以根據(jù)多種因素改變，包括被治療的疾病和所述疾病的嚴(yán)重程度；所采用的特定藥物試劑的活性；所采用的特定組合物；所述患者的年齡、體重、一般健康、性別和飲食；施用時間；施用途徑；和/或所采用的特定融合蛋白的排泄和代謝；所述治療持續(xù)的時間；以及在醫(yī)藥領(lǐng)域已知的類似因素?？扇萑痰?如本文使用的，所述術(shù)語“可容忍的”和“耐受性”是指本發(fā)明的藥物組合物在所述受試者(所述的這些受試者是指被施用組合物的受試者)中不引發(fā)有害反應(yīng)的能力，或者可選擇地在所述受試者(所述的這些受試者是指被施用組合物的受試者)中不引發(fā)嚴(yán)重的有害反應(yīng)的能力。在一些實施方案中，本發(fā)明所述藥物組合物可以被所述受試者(所述受試者是指被施用組合物的受試者)良好地容忍。治療:如本文使用的，所述術(shù)語“治療”(也稱為“處理”或“治療”)是指任意施用的治療性蛋白質(zhì)(例如溶酶體酶)， 其部分地或者完全地緩解、改善、減輕、已知或者延緩發(fā)生，減少嚴(yán)重程度和/或減少(特定疾病、紊亂和/或病情(例如Hunters綜合癥、Sanfilippo綜合癥類型B的)一種或多種癥狀或特征的發(fā)生率。這種治療可以是這樣的受試者(其不表現(xiàn)相關(guān)的疾病、紊亂和/或病情的體征)，和/或這樣的受試者(其僅僅表現(xiàn)相關(guān)的疾病、紊亂和/或病情的早期體征)?？蛇x擇地或者額外地這種治療可以是這樣的受試者，其表現(xiàn)所述相關(guān)的疾病、紊亂和/或病情的一種或多種已建立的體征。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了，此外，改善的方法用于有效直接遞送治療試劑至所述中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)。如上文所討論的，本發(fā)明基于意外的發(fā)現(xiàn):溶酶體貯積癥的替代酶可以以高濃度直接引入到有需要治療的受試者的所述腦脊髓液(CSF)中，而在受試者中不誘發(fā)實質(zhì)性副作用。更加出乎意料的是，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn):所述替代酶可以在簡單的生理鹽水或者緩沖液基礎(chǔ)制劑中遞送，而不使用合成的CSF。甚至更出乎意料的是，根據(jù)本發(fā)明的鞘內(nèi)遞送在所述受試者中不導(dǎo)致實質(zhì)性副作用，例如嚴(yán)重的免疫應(yīng)答。因此，在一些實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的鞘內(nèi)遞送可以在缺乏并發(fā)免疫抑制療法時使用(例如通過預(yù)處理或者預(yù)調(diào)節(jié)不誘發(fā)免疫耐受性)。在一些實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的鞘內(nèi)遞送允許在多種腦組織間的有效擴散，導(dǎo)致所述替代酶在在表面、淺部和/或深部的腦區(qū)域中多種靶腦組織中的有效遞送。在一些實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的鞘內(nèi)遞送產(chǎn)生充分量的替代酶進(jìn)入所述外周循環(huán)。結(jié)果，在某些情況下，根據(jù)本發(fā)明的鞘內(nèi)遞送導(dǎo)致所述替代酶在外周組織中的遞送，例如肝臟、心臟和腎臟。該發(fā)現(xiàn)是預(yù)料之外的，并且可以是對具有CNS和外周組件的所述溶酶體貯積癥的治療特別有用，其通常需要常規(guī)鞘內(nèi)施用和靜脈施用。這也是想到的:根據(jù)本發(fā)明的鞘內(nèi)遞送可以允許減少給藥和/或iv注射的頻率，而不損害周邊癥狀治療的治療效果。本發(fā)明提供了多種意外的和有益的特征，其允許替代酶有效和便捷地遞送至多種腦靶組織，導(dǎo)致具有CNS指示的溶酶體貯積癥的有效治療。本發(fā)明的多個方面在下面章節(jié)進(jìn)行詳細(xì)描述。所述章節(jié)的使用不是打算限制本發(fā)明。每章節(jié)可以應(yīng)用于本發(fā)明的任意方面。在這份申請中，使用“或者”意思是“和/或”，除非另有聲明。溶酶體貯積癥和替代酶可以使用本發(fā)明的發(fā)明方法來治療任何的溶酶體貯積癥，特別是具有CNS病因和/或癥狀的溶酶體貯積癥，包括但不限于:天冬氨酰葡萄糖胺尿癥、膽固醇脂沉積病、沃爾曼病、胱氨酸病、Danon病、法布里病、Farber脂肪肉芽腫病、Farber病、墨角藻糖苷酶缺乏病、半乳糖唾液酸沉積癥I/II型、戈謝病類型Ι/ΙΙ/ΠΙ、球細(xì)胞腦白質(zhì)營養(yǎng)不良、克拉伯病、糖原貯積癥I1、龐貝氏癥、GMl-神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥類型I/II/II1、GM2-神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥類型1、泰-薩克斯病、GM2-神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥類型I1、桑德霍夫病、GM2-神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥、α -甘露糖苷過多癥類型1/11、β -甘露糖苷過多癥、異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良、粘脂糖癥類型1、唾液酸沉積癥類型1/11、粘脂糖癥類型Π/ΙΙΙ、1-細(xì)胞病、粘脂糖癥類型IIIC假胡爾勒氏多種營養(yǎng)不良、黏多糖貯積癥類型1、黏多糖貯積癥類型I1、亨特綜合癥、黏多糖貯積癥類型IIIA、Sanfilippo綜合癥(類型Α、B、C或者D)、黏多糖貯積癥類型IIIB、黏多糖貯積癥類型II 1 C、黏多糖貯積癥類型IIID、黏多糖貯積癥類型IVA、莫基奧綜合癥、黏多糖貯積癥類型IVB、黏多糖貯積癥類型V1、黏多糖貯積癥類型VI1、Sly綜合癥、黏多糖貯積癥類型IX、多種硫酸酯酶缺乏癥、神經(jīng)元蠟樣脂褐質(zhì)沉積癥、CLNlBatten病、CLN2Batten病、尼曼匹克病類型A/B、尼曼匹克病類型Cl、尼曼匹克病類型C2、致密性成骨不全癥、Schindler病類型1/11、戈謝病和唾液酸貯積病。在一些實施方案中，使用本發(fā)明的發(fā)明方法溶酶體貯積癥包括=Hunters綜合癥、異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良(MLD)病、Sanfilippo綜合癥類型A、Sanfilippo綜合癥類型B、和細(xì)胞腦白質(zhì)營養(yǎng)不良(GLD)病。所述溶酶體貯積癥的遺傳病因、臨床表現(xiàn)和分子生物學(xué)的詳細(xì)評論可以詳參于Scriver et al., eds., The Metabolic and Molecular Basis of Inherited Disease,7.sup.th Ed., Vol.1I, McGraw Hill, (1995).因此，在上文的疾病中的酶缺乏對本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員是已知的，其中一些在下表中示出。表I
權(quán)利要求
1.一種方法，包括如下的步驟: 向正患有或者易患伴有溶酶體酶水平或者活性降低的溶酶體貯積癥的受試者，鞘內(nèi)施用包含溶酶體酶替代酶的組合物；所述替代酶濃度大于約5mg/ml。
2.按權(quán)利要求1所述的方法，其中所述替代酶的濃度大于約10mg/ml。
3.按權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述組合物進(jìn)一步包括下述的一種或多種:(i)緩沖劑、(ii)表面活性劑、或者(iii)滲透壓調(diào)節(jié)劑。
4.述權(quán)利要求中任意一項所述的方法，其中所述組合物具有大約為3.0-8.0的pH。
5.述權(quán)利要求中任意一項所述的方法，其中所述組合物以小于5mL的單劑量體積施用。
6.述權(quán)利要求中任意一項所述的方法，其中所述組合物以小于3mL的單劑量體積施用。
7.述權(quán)利要求中任意一項所述的方法，其中所述鞘內(nèi)施用的所述組合物在所述受試者中不產(chǎn)生實質(zhì)性副作用。
8.述權(quán)利要求中任意一項所述的方法，其中所述鞘內(nèi)施用的所述組合物不產(chǎn)生適應(yīng)性T-細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。
9.一種方法，包括如下的步驟: 向正患有或者易患伴有溶酶體酶水平或者活性降低的溶酶體貯積癥的受試者，鞘內(nèi)施用在制劑中包含溶酶體酶替代酶的組合物；所述制劑不是合成CSF。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述替代酶濃度大于約5mg/ml。
11.一種方法，包括如下的步驟: 向正患有或者易患伴有溶酶體酶水平或者活性降低的溶酶體貯積癥的受試者施用，其中施用包括在缺乏并發(fā)免疫抑制治療時的所述組合物的鞘內(nèi)施用。
12.按權(quán)利要求11所述的方法，其中所述方法不包括在被治療的所述受試者中的免疫耐受誘導(dǎo)。
13.按權(quán)利要求12所述的方法，其中所述方法不包括使用T-細(xì)胞免疫抑制劑對所述受試者的預(yù)處理或者預(yù)調(diào)節(jié)。
14.一種方法，包括如下的步驟: 向正患有或者易患伴有溶酶體酶水平或者活性降低的溶酶體貯積癥的受試者鞘內(nèi)施用包含治療有效劑量溶酶體酶替代酶的組合物，并且施用間隔使得在一種或多種腦、脊髓和外周器官組織中達(dá)到溶酶體酶正常水平或者活性的至少10%。
15.按權(quán)利要求14所述的方法，其中所述一種或多種腦組織包括menengal組織。
16.按權(quán)利要求15所述的方法，其中所述menengal組織選自:軟腦膜、硬腦膜和蛛網(wǎng)膜組織。
17.按權(quán)利要求16所述的方法，其中所述一種或多種腦組織包括大腦組織。
18.按權(quán)利要求17所述的方法，其中所述大腦組織是大腦的表面或淺部組織。
19.按權(quán)利要求18所述的方法，其中所述大腦的表面或淺部組織選自:軟腦膜組織、大腦皮質(zhì)帶狀組織、在大腦表面距表面4_以內(nèi)的組織、及其組合。
20.按權(quán)利要求17所述的方法，其中所述大腦組織是所述大腦的深部組織。
21.按權(quán)利要求20所述的方法，其中所述大腦的深部組織選自:在大腦皮質(zhì)絲帶以下的組織、在所述大腦表面距所述表面以下4mm的組織、在所述大腦表面距所述表面以下6mm的組織、在所述大腦表面距所述表面以下IOmm的組織、及其組合。
22.按權(quán)利要求14所述的方法，其中所述一種或多種腦組織包括所述小腦組織。
23.按權(quán)利要求22所述的方法，其中所述小腦組織選自:分子層組織、浦肯野氏細(xì)胞層組織、顆粒細(xì)胞層組織、及其組合.
24.如權(quán)利要求22所述的方法，其中所述小腦組織是所述小腦的深部組織。
25.權(quán)利要求24所述的方法，所述小腦的深部組織選自:其中所述小腦的深部組織選自:浦肯野氏細(xì)胞層組織、顆粒細(xì)胞層組織、小腦深部白質(zhì)組織[將被定義為深部的顆粒細(xì)胞層]、和小腦深部核組織。
26.權(quán)利要求14所述的方法，其中所述一種或多種腦組織包括腦干組織。
27.權(quán)利要求26所述的方法，其中所述腦干組織選自:腦干白質(zhì)組織和/或腦干核組織。
28.權(quán)利要求14所述的方法，其中所述脊髓的所述一種或多種組織時所述脊髓的表面或淺部組織。
29.權(quán)利要求28所述的方法，其中所述脊髓的表面或淺部組織選自:軟腦膜、束狀的白質(zhì)、和距所述脊髓表面4mm以內(nèi)的組織。
30.權(quán)利要求14所述的方法，其中所述脊髓的所述一種或多種組織是所述脊髓的深部組織。
31.權(quán)利要求30所述的方法，其中所述脊髓的所述深部組織選自:脊髓灰質(zhì)和室管膜細(xì)胞，以及在所述脊 髓表面距所述表面以下4_的組織。
32.權(quán)利要求14所述的方法，其中所述一種或多種腦組織包括表面或者淺部組織。
33.權(quán)利要求32所述的方法，其中所述表面或者淺部組織選自:軟腦膜、硬腦膜、和menengal的蛛網(wǎng)膜組織、軟腦膜組織、大腦皮質(zhì)帶狀組織、在所述大腦的表面距所述表面4_以內(nèi)的組織、及其組合。
34.權(quán)利要求14所述的方法，其中所述組織包括深部組織。
35.權(quán)利要求34所述的方法，其中所述深部腦組織選自:所述大腦的深部白質(zhì)、所述脊髓的深部灰質(zhì)、胼胝體、腦室周圍組織、丘腦、海馬傘、在大腦皮質(zhì)絲帶以下的組織、在所述大腦表面距所述表面以下4mm的組織、在所述大腦表面距所述表面以下6mm的組織、在所述大腦表面距所述表面以下IOmm的組織、浦肯野氏細(xì)胞層、顆粒細(xì)胞層組織、小腦深部白質(zhì)組織[將被定義為深部的顆粒細(xì)胞層]、以及小腦深部核組織、及其組合。
36.權(quán)利要求14-35任意一項所述的方法，其中所述治療有效劑量的范圍從·0.005mg/kg腦重量至100mg/kg腦重量。
37.權(quán)利要求14-35任意一項所述的方法，其中所述治療有效劑量大于lmg/kg腦重量。
38.權(quán)利要求14-35任意一項所述的方法，其中所述治療有效劑量大于10mg/kg腦重量。
39.權(quán)利要求14-35任意一項所述的方法，其中所述治療有效劑量大于30mg/kg腦重量。
40.權(quán)利要求14-39任意一項所述的方法，其中所述施用間隔為每兩周一次。
41.按權(quán)利要求14-39任意一項所述的方法，其中所述施用間隔為每月一次。
42.按權(quán)利要求14-39任意一項所述的方法，其中所述施用間隔為每兩月一次。
43.一種方法，包括如下的步驟: 向正患有或者易患伴有溶酶體酶水平或者活性降低的溶酶體貯積癥的受試者，施用包含溶酶體酶替代酶的組合物；所述施用包括所述組合物的鞘內(nèi)施用，以使所述替代酶被遞送到在所述外部表面以下至少5mm的深部腦組織。
44.按權(quán)利要求43所述的方法，其中所述替代酶被遞送到在所述外部表面以下至少10mm的深部腦組織。
45.按權(quán)利要求43所述的方法，其中所述替代酶特別地被遞送到所述深部腦組織的溶酶體。
46.按權(quán)利要求43、44和45任意一項所述的方法，其中所述深部腦組織選自:所述大腦的深部白質(zhì)、所述脊髓的深部灰質(zhì)、胼胝體、腦室周圍組織、丘腦、海馬傘、在大腦皮質(zhì)絲帶以下的組織、在所述大腦表面距所述表面以下4mm的組織、在所述大腦表面距所述表面以下6mm的組織、在所述大腦表面距所述表面以下10mm的組織、浦肯野氏細(xì)胞層、顆粒細(xì)胞層組織、小腦深部白質(zhì)組織和小腦深部核組織、及其組合。
47.一種方法，包括如下的步驟: 向正患有或者易患伴有溶酶體酶水平或者活性降低的溶酶體貯積癥的受試者鞘內(nèi)施用包含溶酶體酶替代酶的組合物，所述溶酶體酶是從人類細(xì)胞制備的。
48.述權(quán)利要求中任意一項所述的方法，其中所述溶酶體貯積癥選自:天冬氨酰葡萄糖胺尿癥，膽固醇脂沉積病，沃爾曼病，胱氨酸病，Danon病，法布里病，F(xiàn)arber脂肪肉芽腫病，F(xiàn)arber病，墨角藻糖苷酶缺乏病，半乳糖唾液酸沉積癥類型I/II，戈謝病類型I/II/III，球細(xì)胞腦白質(zhì)營養(yǎng)不良，克拉伯病，糖原貯積癥II，龐貝氏癥，GMl-神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥類型I/II/III，GM2-神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥類型I，泰-薩克斯病，GM2-神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥類型II，桑德霍夫病，GM2-神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥，α -甘露糖苷過多癥類型I/II、β -甘露糖苷過多癥，異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良，粘脂糖癥類型I，唾液酸沉積癥類型1/11，粘脂糖癥類型11/III，I-細(xì)胞病，粘脂糖癥類型IIIC假胡爾勒氏多種營養(yǎng)不良，黏多糖貯積癥類型I，黏多糖貯積癥類型II，亨特綜合癥，黏多糖貯積癥類型IIIA，Sanfilippo綜合癥類型Α、B或C，黏多糖貯積癥類型IIΙΒ，黏多糖貯積癥類型IIIC，黏多糖貯積癥類型IIID，黏多糖貯積癥類型IVA，莫基奧綜合癥，黏多糖貯積癥類型IVB，黏多糖貯積癥類型VI，黏多糖貯積癥類型VII，Sly綜合癥，黏多糖貯積癥類型IX，多種硫酸酯酶缺乏癥，神經(jīng)元蠟樣脂褐質(zhì)沉積癥，CLNlBatten病，CLN2Batten病,尼曼匹克病類型A/B，尼曼匹克病類型Cl，尼曼匹克病類型C2，致密性成骨不全癥，Schindler病類型I/II，戈謝病和唾液酸貯積病。
49.述權(quán)利要求中任意一項所述的方法,其中所述溶酶體忙積癥選自=Hunters綜合癥、異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良(MLD)病、SanfiIippo綜合癥類型A、SanfiIippo綜合癥類型B、和球細(xì)胞腦白質(zhì)營養(yǎng)不良(GLD)病。
50.按權(quán)利要求49所述的方法，其中所述替代酶選自重組艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶(I2S)、芳基硫酸酯酶A(ASA)、乙酰肝素N-硫酸酯酶(HNS)、α-N-乙酰葡糖胺糖苷酶(Naglu)和β -半乳糖苷酶(GLC)。
51.述權(quán)利要求中任意一項所述的方法，其中所述替代酶含有甘露糖-6-磷酸(Μ6Ρ)殘基。
52.述權(quán)利要求中任意一項所述的方法，其中所述替代酶是包含溶酶體靶向部分的融合蛋白。
53.述權(quán)利要求中任意一項所述的方法，其中所述替代酶被遞送到神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞、血管周細(xì)胞和/或腦膜細(xì)胞。
54.述權(quán)利要求中任意一項所述的方法，其中所述替代酶進(jìn)一步被遞送到在所述脊髓中的所述神經(jīng)元。
55.述權(quán)利要求中任意一項所述的方法，其中所述鞘內(nèi)施用進(jìn)一步導(dǎo)致在外周靶組織中的所述替代酶的全身遞送。
56.按權(quán)利要求55所述的方法，其中所述外周靶組織選自:肝臟、腎臟、脾臟和/心臟。
57.述權(quán)利要求中任意一項所述的方法，其中所述鞘內(nèi)施用導(dǎo)致所述替代酶在腦靶組織、脊髓神經(jīng)元和/或外周靶組織中的溶酶體定位。
58.述權(quán)利要求中任意一項所述的方法，其中所述鞘內(nèi)施用導(dǎo)致在所述腦靶組織、脊髓神經(jīng)元和/或外周靶組織中GAG貯存的減少。
59.按權(quán)利要求58所述的方法，其中所述GAG貯存與對照相比，以至少20%、40%、50%、60%、80%、90%、1_ 倍、1.5-倍、或者 2-倍減少。
60.述權(quán)利要求中任意一項所述的方法，其中所述鞘內(nèi)施用導(dǎo)致在神經(jīng)元中液泡化的減少。
61.根據(jù)權(quán)利要求60所述的方法，其中所述神經(jīng)元包括浦肯野細(xì)胞。
62.述權(quán)利要求中任意一項所述的方法，其中所述鞘內(nèi)施用導(dǎo)致在所述腦靶組織、脊髓神經(jīng)元和/或外周靶組織中所述替代酶活性的增加。
63.按權(quán)利要求62所述的方法，其中所述酶活性與對照相比，以至少1-倍、2-倍、3-倍、4-倍、5-倍、6-倍、7-倍、8-倍、9-倍或者10-倍增加。
64.按權(quán)利要求62或者63所述的方法，其中所述增加的酶活性為至少約10nmol/hr/mg、20nmol/hr/mg、40nmol/hr/mg、50nmol/hr/mg、60nmol/hr/mg、70nmol/hr/mg、80nmol/hr/mg、90nmol/hr/mg、IOOnmoI/hr/mg、150nmol/hr/mg、200nmol/hr/mg、250nmol/hr/mg、300nmol/hr/mg、350nmol/hr/mg、400nmol/hr/mg、450nmol/hr/mg、500nmol/hr/mg、550nmol/hr/mg 或者 600nmol/hr/mgo
65.按權(quán)利要求64所述的方法，其中所述酶活性在所述腰區(qū)中增加。
66.按權(quán)利要求65所述的方法，其中在所述腰區(qū)中所述增加的酶活性為至少約 500nmol/hr/mg、600nmol/hr/mg、700nmol/hr/mg、800nmol/hr/mg、900nmol/hr/mg、1000nmol/hr/mg、1500nmol/hr/mg、2000nmol/hr/mg、3000nmol/hr/mg、4000nmol/hr/mg、5000nmol/hr/mg、6000nmol/hr/mg、7000nmol/hr/mg、8000nmol/hr/mg、9000nmol/hr/mg、或者 10，000nmol/hr/mgo
67.述權(quán)利要求中任意一項所述的方法，其中所述溶酶體貯積癥伴有周邊癥狀，并且所述方法進(jìn)一步包括向所述受試者靜脈施用所述替代酶。
68.按權(quán)利要求67所述的方法，其中所述靜脈施用沒有比每月施用更頻繁。
69.述權(quán)利要求中任意一項所述的方法，其中所述溶酶體貯積癥伴有周邊癥狀，并且其中所述方法不包括向所述受試者靜脈施用所述替代酶。
70.療Hunters綜合癥的方法，包括如下的步驟: 向有需要治療的受試者以治療有效劑量鞘內(nèi)施用重組艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶(I2S)，并且施用間隔使得所述Hunters綜合癥的至少一種癥狀或特征在強度、嚴(yán)重程度或頻率上減少，或者延緩發(fā)生。
71.按權(quán)利要求70所述的方法,其中所述Hunters綜合癥的至少一種癥狀或特征是認(rèn)知障礙；白質(zhì)病變；在所述腦實質(zhì)、神經(jīng)節(jié)、胼胝體、和/或腦干中擴張的血管周圍間隙；萎縮癥；和/或腦室擴大。
72.療異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良(MLD)病的方法，包括如下的步驟: 向有需要治療的受試者以治療有效劑量，鞘內(nèi)施用重組芳基硫酸酯酶A(ASA))，并且施用間隔使得MLD病的至少一種癥狀或特征在強度、嚴(yán)重程度或者頻率方面減少，或者延緩發(fā)生。
73.按權(quán)利要求73所述的方法，其中所述MLD病的至少一種癥狀或特征是顱內(nèi)壓增高、腦外積水、在中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)髓鞘中和在內(nèi)臟器官中的硫酸糖脂積累、進(jìn)行性脫髓鞘和在所述CNS和PNS以內(nèi)的軸突損失、和/或運動和認(rèn)知功能障礙。
74.療Sanfilippo綜合癥類型A(SanfilippoA)病的方法,包括如下的步驟:向有需要治療的受試者以治療有效劑量鞘內(nèi)施用重組乙酰肝素N-硫酸酯酶(HNS)，并且施用間隔使得所述Sanfilippo A病的至少一種癥狀或者特征在強度、嚴(yán)重程度、或頻率方面的減少，或者延緩發(fā)生。
75.療SanfiIippo綜合癥類型B(SanfiIippo B)病的方法，包括如下的步驟:向有需要治療的受試者以治療有效劑量鞘內(nèi)施用重組α-Ν-乙酰葡糖胺糖苷酶(Naglu)，并且施用間隔使得所述SanfiI ippo B病的至少一種癥狀或特征在強度、嚴(yán)重程度或者頻率方面減少，或者延緩發(fā)生。
76.按權(quán)利要求75或者76所述的方法,其中所述SanfilippoA或者Sanf ilippo B病的至少一種癥狀或特征是:聽力損失、語言發(fā)展遲緩、運動技能缺陷、活動過度、智力遲鈍、攻擊性和/或睡眠障礙。
77.按權(quán)利要求77所述的方法，其中所述重組Naglu酶是包含Naglu和溶酶體靶向部分的融合蛋白。
78.按權(quán)利要求78所述的方法，其中所述溶酶體靶向部分是IGF-1I。
79.療球細(xì)胞腦白質(zhì)營養(yǎng)不良(GLD)病的方法，包括如下的步驟:向有需要治療的受試者以治療有效劑量鞘內(nèi)施用重組β_半乳糖苷酶(GLC)，并且施用間隔以使得所述GLD的至少一種癥狀或特征在強度、嚴(yán)重程度或者頻率方面減少，或者延緩發(fā)生。
80.按權(quán)利要求80所述的方法，其中所述GLD病的至少一種癥狀或特征是:易怒、抽搐、心智衰退、耳聾、失明、肌陣攣性癲癇發(fā)作、過度肌肉緊張、發(fā)育遲緩、發(fā)育技能的退化、過敏癥、震顫、運動失調(diào)、疫攣狀態(tài)、發(fā)作性嚴(yán)重嘔吐、腦白質(zhì)營養(yǎng)不良、大腦萎縮癥、球細(xì)胞發(fā)育和/或脫髓鞘。
81.內(nèi)施用的設(shè)備，包括 流體進(jìn)入端口； 空心體，所述空心體具有與所述流體進(jìn)入端口液體連通的第一流體孔口、以及配置插入到脊髓中的第二流體孔口 ；以及固定機構(gòu)，所述固定機構(gòu)用于固定所述空心體在所述脊髓中的插入。
82.按權(quán)利要求82所述的設(shè)備，其中所述固定機構(gòu)包括安裝在所述空心體的所述表面上的一個或多個球形門柄、以及可調(diào)節(jié)覆蓋所述一個或多個球形門柄的縫合環(huán)。
83.按權(quán)利要求82或者83所述的設(shè)備，其中所述流體進(jìn)入端口是包括貯液囊。
84.按權(quán)利要求82-84任意一項所述的設(shè)備，其中所述流體進(jìn)入端口是可植入的。
85.按權(quán)利要求82-85任意一項所述的設(shè)備，其中所述流體進(jìn)入端口是可注射的端口。
86.按權(quán)利要求82-85任 意一項所述的設(shè)備，其中所述流體進(jìn)入端口是機械泵。
全文摘要
本發(fā)明提供了有效的和較少侵入性的方法，用于遞送治療試劑至所述中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)。在一些實施方案中，本發(fā)明提供了方法，包括步驟向正患有或者易患伴有溶酶體酶水平或者活性降低的溶酶體貯積癥的受試者鞘內(nèi)施用包含溶酶體酶替代酶的組合物。
文檔編號A61K38/46GK103096918SQ201180040978
公開日2013年5月8日 申請日期2011年6月25日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月25日
發(fā)明者P·加萊斯, J·潘, J·鮑威爾, L·查納斯, T·麥考利, T·L·萊特, R·菲佛, Z·夏若克 申請人:夏爾人類遺傳性治療公司