專利名稱：多烯磷脂酰膽堿治療肥胖和胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)的藥物新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種已上市藥物的新的藥物作用，具體是多烯磷脂酰膽堿治療肥胖和胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)的藥物新用途。
背景技術(shù)：
肥胖癥作為一種常見的慢性內(nèi)分泌代謝疾病，發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，已成為全球性的公共健康難題。肥胖的病因十分復(fù)雜，涉及到遺傳、環(huán)境、心理、行為等多種因素的相互作用。肥胖的發(fā)生是由于機體的能量攝入長期高于機體的能量消耗，多余的能量以脂肪形式貯存從而導(dǎo)致肥胖。肥胖癥通常采用綜合措施治療，包括飲食療法、運動療法、行為療法、外科療法和藥物療法。藥物療法是前幾種療法效果不佳或復(fù)發(fā)率高時的常用選擇。減肥藥的種類很多，多數(shù)還處于臨床或臨床前研究階段。其中主要有四類:①作用于中樞的擬兒茶酚胺和擬5-輕色胺的食欲抑制劑。如西布曲明(Sibutramine);②增加能量消耗的藥物。如中樞興奮藥、β 3-腎上腺素受體激動劑和激素類藥物；③作用于外周胃腸脂酶和胰脂酶的抑制齊U，如賽尼可(Orlistat) 其他治療肥胖的藥物，包括胰島素增敏劑和瘦素(Ieptin)。這些藥物均因為不同程度的副作用而難以在臨床上推廣使用，因此，尋找一種安全有效的減肥藥物是目前臨床治療所急需的。胰島素抵抗(Insulin Resistance, IR)是指胰島素作用的祀器官對胰島素作用的敏感性下降，即正常劑量的胰島素產(chǎn)生低于正常生物學(xué)效應(yīng)的一種狀態(tài)。目前認為，IR不僅是II型糖尿病的發(fā)病基礎(chǔ)，更是貫穿多種代謝相關(guān)疾病的主線，是這些疾病的共同病理生理基礎(chǔ)。大量流行病學(xué)資料顯示，胰島素抵抗在糖尿病及心血管疾病發(fā)病之前就可存在，常常與肥胖、高血壓、高脂血癥相伴隨。而肥胖是引起胰島素抵抗最常見的原因，換句話說肥胖癥者幾乎都存在胰島 素抵抗。目前將胰島素抵抗、中心性肥胖、糖耐量降低或糖尿病、高血壓、血脂代謝紊亂等多種疾病的組合，統(tǒng)稱為“代謝綜合征”或“胰島素抵抗綜合征”，并且認為胰島素抵抗是促使糖尿病、高血壓、高血脂等疾病發(fā)生發(fā)展的最重要和最根本原因。而胰島素抵抗與葡萄糖轉(zhuǎn)運體4(GLUT4)蛋白功能有關(guān)。GLUT4是一種膜蛋白，分子量約45-55ku，其基本結(jié)構(gòu)由12個跨膜片段(M1-M12)組成。GLUT4僅存在于胰島素敏感的骨骼肌、心肌和脂肪細胞中。在沒有胰島素刺激時主要位于細胞內(nèi)的儲存囊泡內(nèi)。當(dāng)胰島素與受體結(jié)合后，激發(fā)一系列級聯(lián)效應(yīng)，導(dǎo)致GLUT4向細胞外膜移動并發(fā)生結(jié)構(gòu)改變，將葡萄糖轉(zhuǎn)運至細胞內(nèi)后恢復(fù)原來結(jié)構(gòu)。這一過程很容易被逆轉(zhuǎn)，當(dāng)循環(huán)胰島素水平下降時，GLUT4通過吞飲作用從細胞外清除并回到儲存囊泡中。因此胰島素敏感組織可迅速對循環(huán)胰島素水平做出反應(yīng)，保持血糖平衡。目前能夠降低胰島素抵抗的藥物主要有雙胍類藥物二甲雙胍、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑、胰島素增敏劑等，但三者均存在不同程度的不良反應(yīng)。
本發(fā)明是在細胞分子水平對多烯磷脂酰膽堿進行深入研究的結(jié)果，旨在提供一種治療肥胖和胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)的藥物新用途。發(fā)明人經(jīng)國內(nèi)外專利文獻檢索和公開發(fā)表的期刊論文檢索，未發(fā)現(xiàn)多烯磷脂酰膽堿用于肥胖和胰島素抵抗(代謝綜合征)的治療，也未發(fā)現(xiàn)與本發(fā)明相關(guān)的報道或文獻。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供常用保肝藥物(多烯磷脂酰膽堿)一種新的用途，即多烯磷脂酰膽堿治療肥胖和胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)的藥物新用途，或者說提供了多烯磷脂酰膽堿一種新的治療適應(yīng)癥。肥胖是脂肪細胞數(shù)量增多和體積增大的結(jié)果。SW872脂肪細胞是從人的脂肪肉瘤細胞建立的一種新的脂肪細胞系，是體外研究糖、脂代謝和相關(guān)藥物作用機制的重要細胞模型。因此，選擇了 SW872細胞作為研究用細胞模型。本發(fā)明證實了多烯磷脂酰膽堿能顯著抑制脂肪細胞的增殖，因而可降低肥胖的程度。多烯磷脂酰膽堿使脂肪細胞G1/S期的比例顯著增加，S期細胞的比例顯著降低，顯示藥物多烯磷脂酰膽堿使脂肪細胞停止在Gl期，從而起到減肥的作用。胰島素抵抗與葡萄糖轉(zhuǎn)運體4(GLUT4)蛋白功能有關(guān)。多烯磷脂酰膽堿作用于脂肪細胞，能使其細胞膜GLUT4蛋白表達顯著增加，且呈劑量相關(guān)性，證明了多烯磷脂酰膽堿能明顯改善胰島素抵抗，可以用于胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)的治療。本發(fā)明首次提供了多烯磷脂酰膽堿用于肥胖和胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)治療的新用途。本發(fā)明的目的是開發(fā)常用保肝藥物多烯磷脂酰膽堿用于治療肥胖和胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)的新用途。多烯磷脂酰膽堿具有價格適中、毒副作用小的優(yōu)點。


圖1:多烯磷脂酰膽堿的分子結(jié)構(gòu)圖。圖2:不同濃度多烯磷脂酰膽堿對脂肪細胞的抑制率圖3:多烯磷脂酰膽堿對脂肪細胞生長周期的影響圖4:多烯磷脂酰膽堿對脂肪細胞細胞膜Glut4蛋白表達量的影響
具體實施方式
:下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明進行詳細說明，應(yīng)理解，這些實施方式僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講述的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。實施例1:多烯磷脂酰膽堿顯著抑制脂肪細胞的增殖。采用MTT法，將脂肪細胞按1X 104個細胞/孔接種于96孔，用DMEM+10%胎牛血清培養(yǎng)，隔日換液，待細胞達60-70 %匯合，加不同濃度的多烯磷脂酰膽堿，使其終濃度為
0.54mmol/L,2.70mmol/L, 13.50mmol/L,同時設(shè)空白對照組，作用 12，24，48，72 小時(每組12復(fù)孔)后，與5g/L的MTT共孵育4h，吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加150ul 二甲基亞砜，置搖床上震搖20min使沉淀完全溶解，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上570nm處測得各孔的吸光度值。通過對吸光度值的分析統(tǒng)計可得出不同濃度的藥物多烯磷脂酰膽堿在不同時間段對細胞增殖的抑制率(圖2)，可以看到多烯磷脂酰膽堿顯著抑制脂肪細胞的增殖，因此可降低肥胖的程度，可用于肥胖的治療。實施例2:多烯磷脂酰膽堿使脂肪細胞的生長停止在Gl期，從而抑制其增殖。脂肪細胞按I X IO4個細胞/孔接種于6孔板，用DMEM+10%胎牛血清培養(yǎng)培養(yǎng)，隔日換液，待細胞達60-70 %匯合，加不同濃度的多烯磷脂酰膽堿，使其終濃度為0.54mmol/L,2.70mmol/L, 13.50mmol/L,同時設(shè)空白對照組，作用24小時后，PBS沖洗，0.25%胰酶消化，4°C IOOOrpm離心5min后收集，細胞沉淀用70 %乙醇4°C固定24小時，PBS洗2次，重懸于含有50g/L的RNase A和50mg/L碘化吡啶的PBS中，懸液在37°C孵育30min，200 μ m尼龍過濾網(wǎng)濾過后，流式細胞儀分析?？梢钥吹蕉嘞┝字Ｄ憠A使脂肪細胞G1/S期的比例顯著增加，S期的細胞比例顯著降低，使脂肪細胞的生長停止在Gl期，從而抑制其增殖(圖3)。實施例3:多烯磷脂酰膽堿使脂肪細胞細胞膜GLUT4蛋白表達顯著增加，且呈劑量相關(guān)性。脂肪細胞按IXlO4個細胞/孔接種于24孔板(預(yù)先放置無菌小玻片)，用DMEM+10%胎牛血清培養(yǎng)培養(yǎng)，隔日換液，待細胞達60-70%匯合，加不同濃度的多烯磷脂酰膽堿，使其終濃度為0.54mmol/L,2.70mmol/L, 13.50mmol/L,同時設(shè)空白對照組，作用24小時；0.25胰酶消化細胞，PBS洗滌離心，加入GLUT4抗體，室溫避光孵育30分鐘，PBS洗滌細胞，加入FITC標記的GLUT4 二抗，室溫避光孵育30分鐘，洗滌細胞2次，將細胞重懸于PBS液中，混勻，上流式細胞儀測 定，以不加GLUT4 —抗作為陰性對照。可以看到多烯磷脂酰膽堿能使脂肪細胞細胞膜GLUT4蛋白表達顯著增加，且呈劑量相關(guān)性(圖4)，說明多烯磷脂酰膽堿通過增加脂肪細胞細胞膜GLUT4蛋白表達從而提高基礎(chǔ)狀態(tài)糖轉(zhuǎn)運，改善胰島素抵抗，可以用于胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)的治療。
權(quán)利要求
1.多烯磷脂酰膽堿治療肥胖和胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)的藥物新用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述多烯磷脂酰膽堿治療肥胖和胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)的藥物用途，其特征在于:多烯磷脂酰膽堿具有治療肥胖和胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)的作用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種多烯磷脂酰膽堿治療肥胖和胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)的藥物新用途。采用臨床上常用的保肝藥多烯磷脂酰膽堿作為治療肥胖、胰島素抵抗(代謝綜合征)的新藥物。細胞實驗證明，多烯磷脂酰膽堿使脂肪細胞G1/S期的比例顯著增加，S期細胞的比例顯著降低，使脂肪細胞的生長停止在G1期，從而抑制其增殖，因此可降低肥胖的程度，可用于肥胖的治療。同時，多烯磷脂酰膽堿使脂肪細胞細胞膜GLUT4表達增加，從而起到改善胰島素抵抗的作用，可以用于胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)的治療。多烯磷脂酰膽堿是一種價格適中、副作用小、安全可靠的藥物，可用于肥胖和胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)的治療。
文檔編號A61P3/04GK103202849SQ20121000800
公開日2013年7月17日 申請日期2012年1月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月12日
發(fā)明者周巧霞, 張經(jīng)碩 申請人:蘇州九龍醫(yī)院有限公司