專利名稱：瓜蔞薤白顆粒的制備方法及檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥方劑的制備及檢測(cè)方法，特別屬于瓜萎薤白顆粒的制備方法及檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
中藥在預(yù)防和治療心血管疾病中的作用日益突出。瓜萎薤白白酒湯，由瓜萎、薤白和白酒3味中藥組成，其原始組方為栝萎實(shí)一枚(搗)薤白半斤白酒七升，出自漢代名醫(yī)張仲景所著的《金匱要略》，是我國中醫(yī)用于治療胸痹癥的代表方劑，也是近年來用于治療心血管疾病的基本方劑之一，療效確切，是一個(gè)很有價(jià)值的古方，但由于湯劑劑型原因，致使瓜萎薤白的生物利用度較低，活性成分的穩(wěn)定性不易控制；瓜萎薤白湯室溫放置7天，其總生物堿和總皂苷的含量均明顯降低；對(duì)于瓜萎薤白白酒湯未見有關(guān)檢測(cè)方法報(bào)道，僅在原著中有如下敘述右三味，同煮，取二升，分溫再服。在中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16(15) =61-62,65.報(bào)道了瓜萎薤白顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究一文，其為控制瓜萎薤白顆粒制劑質(zhì)量，選用薤白皂苷中的代表成分-薤白皂苷B作為含量測(cè)定的指標(biāo)成分，已期為萎薤白顆粒中薤白皂苷B的含量測(cè)定建立一種穩(wěn)定性好、分離效率高的分析方法。由于中藥復(fù)方是一個(gè)復(fù)雜的用藥體系，特別是根據(jù)中醫(yī)藥整體觀的思想，中藥的藥效是通過多種成分作用于機(jī)體的多個(gè)靶點(diǎn)而實(shí)現(xiàn)的，即使同時(shí)以幾個(gè)成分作為質(zhì)量控制的指標(biāo)成分，仍不足以全面客觀地評(píng)價(jià)中藥的質(zhì)量，更何況采用單一成分，因此采用薤白皂苷B無法準(zhǔn)確全面評(píng)價(jià)瓜萎薤白顆粒的質(zhì)量。而中藥指紋圖譜作為天然藥物的質(zhì)量控制方法目前在國內(nèi)外已被廣泛接受。美國藥典、英國藥典、印度藥典及WHO草藥評(píng)價(jià)指南均收載了指紋圖譜。ChP2010對(duì)一些品種采用了 HPLC色譜指紋圖譜技術(shù)，以控制產(chǎn)品質(zhì)量，因此有必要采用指紋圖譜技術(shù)對(duì)瓜萎薤白顆粒進(jìn)行質(zhì)量控制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的第I個(gè)技術(shù)問題是提供一種生物利用度高，活性成分穩(wěn)定性的瓜萎薤白顆粒的制備方法；本發(fā)明所要解決的第2個(gè)技術(shù)問題上述瓜萎薤白顆粒的檢測(cè)方法；本發(fā)明解決技術(shù)問題的技術(shù)方案為瓜萎薤白顆粒的制備方法，包括以下步驟a、提取物制備步驟取瓜萎、薤白藥材，加6 12倍水或體積濃度50% -80%的乙醇于98_100°C煎煮或回流提取I 3小時(shí)，共提取2 3次，濾過，濾液濃縮成密度為I. 05-1. 25的稠膏，得到瓜萎薤白提取物；b、顆粒制備步驟取瓜萎薤白提取物I份，加藥學(xué)上可接受的輔料I 4份進(jìn)行混合，直接制成軟材，再制成顆粒，干燥，整粒，包裝，得瓜萎薤白顆粒。所述的a、提取物制備步驟也可以為以下步驟
取瓜萎、薤白藥材適量，以體積濃度為75% -80%的乙醇溶液浸泡lh，超聲處理45min,過濾,濾液濃縮至稠膏,備用；殘洛以65% -75%的乙醇溶液浸泡Ih,超聲處理45min,過濾,濾液濃縮至稠膏,備用；殘洛再55% -65%的乙醇溶液浸泡Ih,超聲處理45min,過濾,濾液濃縮至稠膏,合
并三次稠膏液，備用。所述藥學(xué)上可接受的輔料為可溶性淀粉、淀粉、乳糖、蔗糖和糊精一種或兩種以上組合。所述的瓜萎薤白顆粒規(guī)格范圍為每I 5克配方顆粒相當(dāng)于瓜萎薤白藥材10 45克，可根據(jù)臨床醫(yī)生處方量的需求，用加入不同輔料來控制調(diào)節(jié)瓜萎薤白配方顆粒的不同規(guī)格，優(yōu)選范圍為每5克相當(dāng)于瓜萎薤白生藥材25克。本發(fā)明的檢測(cè)方法為指紋圖譜法。對(duì)照品溶液的制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥12h的腺苷、槲皮素對(duì)照品適量，分別加15%甲醇制得含腺苷、槲皮素約IOOmg · L-I的對(duì)照品溶液。供試品溶液的制備取瓜萎薤白顆粒2g及其組方藥味瓜萎、薤白各lg，用200mL的60%乙醇浸泡30min后，回流提取lh，過濾，濾渣加150mL的60%乙醇回流45min，合并二次回流提取液。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓回收溶劑得浸膏。浸膏用少量水溶解后，備用。將水溶解后的溶液裝入分液漏斗中，加入等量的乙酸乙酸萃取三次，取乙酸乙酯層，回收乙酸乙酯，殘?jiān)?0mL乙腈溶解，得乙酸乙酯提取層供試品溶液，O. 45 μ m微孔濾膜過濾，備用。取水層，再用等量的水飽和正丁醇溶液萃取三次，取正丁醇層，O. 45 μ m微孔濾膜過濾，備用。色譜條件乙酸乙酯部位的色譜條件色譜柱為Lichrospher C18 (4. 6_X 250mm, 5 μ m),以乙腈-1% H3P04溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫(O 5min，乙腈20%—25% ;5 lOmin，乙腈25%— 27%；10 13min，乙腈 27%— 28%；13 15min，乙腈 28%— 28%；15 20min，乙腈 28%— 30%；20 25min，乙腈 30%— 31%;25 30min，乙腈 31%— 33%；30 35min，乙臆 33%— 40% ；35 40min,乙臆 40%— 45% ；40 50min,乙臆 45% — 45% ；),流速I. OmL · min- ;柱溫30°C ；DAD檢測(cè)器，檢測(cè)波長為360nm。正丁醇部位的色譜條件色譜柱為Lichrospher C18 (4. 6_X 250mm, 5 μ m),以乙腈-水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫(O 5min，乙腈0%— 1% ;5 lOmin，乙腈1% — 1% ;10 20min，乙腈 1%— 2%;20 25min，乙腈 2%— 2%;25 35min，乙腈 2%— 6%;35 40min,乙臆 6% — 6% ；40 45min,乙臆 6%— 10 % ；45 50min,乙臆 10%— 10 % ),流速1. OmL · min- ;柱溫30°C ；DAD檢測(cè)器，檢測(cè)波長為260nm。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比所制的顆?；钚猿煞址€(wěn)定性高，檢測(cè)方法采用指紋圖譜技術(shù)控制中藥的質(zhì)量，更適合中醫(yī)藥整體觀的思想，具有更全面地評(píng)價(jià)瓜萎薤白顆粒質(zhì)量的特點(diǎn)。


圖I為瓜萎薤白湯放置不同時(shí)間總生物堿的紫外-可見光譜圖(酸性染料比色法)；1為O時(shí)間的總生物堿光譜圖；2為放置7天后的總生物堿光譜2為實(shí)施例I所制的顆粒放置不同時(shí)間總生物堿的紫外-可見光譜圖(酸性染料比色法)；3為O時(shí)間的總生物堿光譜圖；4為放置18個(gè)月后的總生物堿光譜圖。
圖3為瓜萎薤白湯放置不同時(shí)間總皂苷的紫外-可見光譜變化(香草醛-濃硫酸顯色法)5為O時(shí)間的總皂苷光譜圖；6為放置7天后的總皂苷光譜圖；圖4為實(shí)施例I所制的顆粒放置不同時(shí)間總皂苷的紫外-可見光譜變化(香草醛-濃硫酸顯色法)7為O時(shí)間的總皂苷光譜圖；8為放置18個(gè)月后的總皂苷光譜5為瓜萎薤白湯乙酸乙酯部位指紋圖譜，A為O時(shí)間的指紋圖譜、B為放置7天后的指紋圖譜。圖6為實(shí)施例2所制的顆粒乙酸乙酯部位指紋圖譜，C為O時(shí)間的指紋圖譜、D為放置24個(gè)月天后的指紋圖譜。圖7為實(shí)施例I所制的顆粒的正丁醇部位的指紋圖譜(S-腺苷)。圖8為實(shí)施例I所制的顆粒的乙酸乙酯部位的指紋圖譜(S-槲皮素)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)的說明。實(shí)施例I :取90g瓜萎、90g薤白藥材，粉碎，加水IOOOml，煎煮2小時(shí)，提取3次，合并提取藥液，濾過，濾液在常壓條件下濃縮至相對(duì)密度為I. 05 I. 15的清膏，減壓干燥，研成干粉，得瓜萎薤白提取物約18g，加乳糖3克，用體積濃度80%乙醇IOml制成軟材，制成顆粒，經(jīng)60°C下常壓干燥，整粒，得瓜萎薤白顆粒，分裝成袋，規(guī)格為每I克相當(dāng)于瓜萎、薤白藥材5克。實(shí)施例2 取瓜萎、薤白藥材各90g，以體積濃度75% -80%的乙醇溶液IOOOml浸泡lh，超聲(KH-4-DB型數(shù)控超聲波清洗器，昆山禾創(chuàng)超聲儀器公司)處理45min，過濾，濾液濃縮至稠膏，備用。殘?jiān)?5% -75%的乙醇溶液800ml浸泡lh，超聲處理45min，過濾，濾液濃縮至稠膏，備用。殘洛再55% -65%的乙醇溶液600ml浸泡Ih,超聲處理45min,過濾,濾液濃縮至稠膏，合并三次稠膏液(相對(duì)密度為I. 10 I. 25)，得瓜萎薤白提取物約30g。加可溶性淀粉適量，制成軟材，再制成顆粒，在60°C下常壓干燥，整粒，得瓜萎薤白顆粒，分裝成袋，規(guī)格為每I克相當(dāng)于瓜萎、薤白藥材6克。由圖6可知，通過超聲處理的提取物，其保質(zhì)期明顯加長。實(shí)施例3:取90g瓜萎、90g薤白藥材，粉碎，加60%乙醇lOOOg，煎煮3小時(shí)，提取3次，合并
提取藥液，濾過，濾液在常壓條件下濃縮至相對(duì)密度為I. 05 I. 15的清膏，減壓干燥，研成干粉，得瓜萎薤白提取物約25g，加β -環(huán)糊精5克，用80%乙醇8ml制成軟材，制成顆粒，經(jīng)60°C下常壓干燥，整粒，得瓜萎薤白顆粒，分裝成袋，規(guī)格為每I克相當(dāng)于瓜萎、薤白藥材10克。實(shí)例4 取90g瓜萎、90g薤白藥材，粉碎，加70 %乙醇1000ml，煎煮4小時(shí)，提取3次，合并提取藥液，濾過，濾液在常壓條件下濃縮至相對(duì)密度為I. 10 I. 25的稠膏，減壓干燥，研成干粉，得瓜萎薤白提取物約25g，加入可溶性淀粉、糖粉、糊精(I I I. 5)的混合物7g，制成軟材，再制成顆粒，在60°C下常壓干燥，整粒，得瓜萎薤白顆粒，分裝成袋，規(guī)格為每I克相當(dāng)于瓜萎、薤白藥材8克。實(shí)施例5 :檢測(cè)方法。 (I)多糖的含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒溫重的槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品，精密稱定，置IOOmL量瓶中，加無水乙醇適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得O. 054mg · mL-1的標(biāo)準(zhǔn)品溶液；供試品溶液的制備取瓜萎薤白顆粒O. 2g，精密稱定，置IOOmL具塞錐形瓶中，加乙酸乙酯50mL，超聲30min，過濾，取濾液，回收乙酸乙酯，殘?jiān)脽o水乙醇溶解并用IOOml容量瓶定容至刻度，備用;三氯化鋁溶液的制備取三氯化鋁適量，精密稱定，用無水乙醇定容至100ml，制成濃度為O. Imol噸_1溶液，備用；醋酸鈉-醋酸緩沖液(pH 6. O)的制備取醋酸鈉54. 6g，加Imol · L-I醋酸溶液20mL溶解后，加水稀釋至500mL，即得；檢測(cè)波長的確定取一定量的槲皮素對(duì)照品溶液和已處理好的供試品溶液，分別加三氯化鋁溶液(V V = I 2)和醋酸鈉-醋酸緩沖液(V V = I 1)，30°C顯色30min后在200 SOOnm波長范圍內(nèi)掃描。結(jié)果表明，槲皮素對(duì)照品和供試品的最大吸收峰位一致，均位于424nm波長處,故本試驗(yàn)選用424nm作為檢測(cè)波長；標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品溶液O. 5、I、I. 5、2、2. 5mL，分別加三氯化鋁溶液(V : V =I 2)和醋酸鈉-醋酸緩沖液(V V = I 1)，加無水乙醇定容至10ml。30°C顯色30min后照分光光度法，于波長424nm處測(cè)定吸收度，以Iml蒸餾水按同樣顯色操作為空白，以測(cè)得的吸收度與其對(duì)應(yīng)的濃度；測(cè)定法精密吸取供試品l.OmL，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下自“分別加三氯化鋁溶液(V V =I 2)起”依法操作，由回歸方程計(jì)算樣品溶液中總黃酮含量。(2)總黃酮的含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒溫重的槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品，精密稱定，置IOOmL量瓶中，加無水乙醇適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得O. 054mg · mL-1的標(biāo)準(zhǔn)品溶液；供試品溶液的制備
取瓜萎薤白顆粒O. 2g，精密稱定，置IOOmL具塞錐形瓶中，加乙酸乙酯50mL，超聲30min，過濾，取濾液，回收乙酸乙酯，殘?jiān)脽o水乙醇溶解并用IOOml容量瓶定容至刻度，備用;三氯化鋁溶液的制備取三氯化招適量，精密稱定，用無水乙醇定容至100ml,制成濃度為O. Imol *L-1溶液，備用；醋酸鈉-醋酸緩沖液(pH 6. O)的制備
取醋酸鈉54. 6g，加Imol · L-I醋酸溶液20mL溶解后，加水稀釋至500mL，即得；檢測(cè)波長的確定取一定量的槲皮素對(duì)照品溶液和已處理好的供試品溶液，分別加三氯化鋁溶液(V V = I 2)和醋酸鈉-醋酸緩沖液(V V = I 1)，30°C顯色30min后在200 SOOnm波長范圍內(nèi)掃描。結(jié)果表明，槲皮素對(duì)照品和供試品的最大吸收峰位一致，均位于424nm波長處,故本試驗(yàn)選用424nm作為檢測(cè)波長；標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品溶液O. 5、I、I. 5、2、2. 5mL，分別加三氯化鋁溶液(V : V =I 2)和醋酸鈉-醋酸緩沖液(V V = I 1)，加無水乙醇定容至10ml。30°C顯色30min后照分光光度法，于波長424nm處測(cè)定吸收度，以Iml蒸餾水按同樣顯色操作為空白，以測(cè)得的吸收度與其對(duì)應(yīng)的濃度；測(cè)定法精密吸取供試品l.OmL，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下自“分別加三氯化鋁溶液(V V =I 2)起”依法操作，由回歸方程計(jì)算樣品溶液中總黃酮含量。實(shí)施例1-4的總黃酮量初始分別為3. 75 %，4. 72 %，4. 88 %，4. 03 %，18個(gè)月后，分別為 3. 65%,4. 71%,4. 80%,4. OOV0o
權(quán)利要求
1.瓜萎薤白顆粒的制備方法，包括以下步驟 a、提取物制備步驟 取瓜萎、薤白藥材，加6 12倍水或體積濃度50% -80%的乙醇于98-100°C煎煮或回流提取I 3小時(shí)，共提取2 3次，濾過，濾液濃縮成密度為I. 05 I. 25的稠膏，得到瓜萎薤白提取物； b、顆粒制備步驟 取瓜萎薤白提取物I份，加藥學(xué)上可接受的輔料I 4份進(jìn)行混合，直接制成軟材，再制成顆粒，干燥，整粒，包裝，得瓜萎薤白顆粒。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的瓜萎薤白顆粒的制備方法，其特征在于所述的a、提取物制備步驟也可以為以下步驟 取瓜萎、薤白藥材適量，以體積濃度為75% -80%的乙醇溶液浸泡lh，超聲處理45min，過濾，濾液濃縮至稠膏，備用； 殘?jiān)?5% -75%的乙醇溶液浸泡lh，超聲處理45min，過濾，濾液濃縮至稠膏，備用； 殘洛再55% -65%的乙醇溶液浸泡Ih,超聲處理45min,過濾,濾液濃縮至稠膏,合并三次稠膏液，備用。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的瓜萎薤白顆粒的制備方法，其特征在于所述藥學(xué)上可接受的輔料為可溶性淀粉、淀粉、乳糖、蔗糖和糊精一種或兩種以上組合。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的瓜萎薤白顆粒的制備方法，其特征在于所述的瓜萎薤白顆粒規(guī)格范圍為每I 5克配方顆粒相當(dāng)于瓜萎薤白藥材10 45克。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的瓜萎薤白顆粒的制備方法，其特征在于所述范圍為每5克相當(dāng)于瓜萎薤白生藥材25克。
6.權(quán)利要求I所制的瓜萎薤白顆粒的檢測(cè)方法為指紋圖譜法。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測(cè)方法，其特征在于包括以下步驟 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥12h的腺苷、槲皮素對(duì)照品適量，分別加15%甲醇制得含腺苷、槲皮素約IOOmg · L—1的對(duì)照品溶液； 供試品溶液的制備 取瓜萎薤白顆粒2g及其組方藥味瓜萎、薤白各lg，用200mL的60%乙醇浸泡30min后，回流提取lh，過濾，濾渣加150mL的60%乙醇回流45min，合并二次回流提取液。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓回收溶劑得浸膏。浸膏用少量水溶解后，備用； 將水溶解后的溶液裝入分液漏斗中，加入等量的乙酸乙酸萃取三次，取乙酸乙酯層，回收乙酸乙酯，殘?jiān)?0mL乙腈溶解，得乙酸乙酯提取層供試品溶液，O. 45μπι微孔濾膜過濾，備用； 取水層，再用等量的水飽和正丁醇溶液萃取三次，取正丁醇層，O. 45 μ m微孔濾膜過濾，備用; 色譜條件 乙酸乙酯部位的色譜條件色譜柱為Lichrospher C18(4. 6mmX 250mm, 5 μ m),以乙腈-1% H3P04溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫(O 5min，乙腈20% — 25% ;5 lOmin，乙腈25%—27% ;10 13min，乙腈 27%— 28% ；13 15min，乙腈 28%— 28% ；15 20min，乙腈28%— 30% ；20 25min，乙腈 30%— 31% ；25 30min，乙腈 31%— 33% ；30 35min，乙臆 33%— 40% ；35 40min,乙臆 40%— 45% ；40 50min,乙臆 45% — 45% ；),流速I. OmL · mirT1 ;柱溫30。。；DAD檢測(cè)器，檢測(cè)波長為360nm ； 正丁醇部位的色譜條件色譜柱為Lichrospher C18 (4. 6mmX 250mm, 5 μ m),以乙腈-水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫(O 5min，乙腈0% — 1% ;5 lOmin，乙腈1% — 1% ;10 20min,乙腈 I % — 2 % ;20 25min，乙腈 2 % — 2 % ;25 35min，乙腈 2%—6%;35 40min,乙臆 6% — 6% ；40 45min,乙臆 6%— 10 % ；45 50min,乙臆 10%— 10 % ),流速1. OmL · mirT1 ;柱溫30 °C ；DAD檢測(cè)器，檢測(cè)波長為260nm。
全文摘要
本發(fā)明公開了瓜蔞薤白顆粒的制備方法及檢測(cè)方法，所述的制備方法包括a.提取物制備步驟、b.顆粒制備步驟，所述的檢測(cè)方法為指紋圖譜法，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，所制的顆?；钚猿煞址€(wěn)定性高，檢測(cè)方法采用指紋圖譜技術(shù)控制中藥的質(zhì)量，更適合中醫(yī)藥整體觀的思想，具有更全面地評(píng)價(jià)瓜蔞薤白顆粒質(zhì)量的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61K9/16GK102641407SQ20121011319
公開日2012年8月22日 申請(qǐng)日期2012年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月18日
發(fā)明者鄒純才, 鄢海燕 申請(qǐng)人:皖南醫(yī)學(xué)院