專利名稱：納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水制備微球的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及制藥技術領域的微球及其制備方法，尤其涉及一種納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水(W/0/0/S)制備微球的方法。
背景技術：
制藥行業(yè)從藥物發(fā)現，到臨床的應用，最后一個環(huán)節(jié)是藥物制劑。其中有一部分藥物需要長期給藥才能治愈；還有一部分需要靶向等局部給藥。要達到這些目的，原料藥必須要制備成相應的劑型。例如需要長期給藥但在體內的半衰期短的藥物，宜制備成緩釋長效劑型；對于一些腫瘤的治療，需要一些藥物靶向于病照，例如靶向于腫瘤血管的栓塞微球制劑等。
關于微球制劑的制備方法，MengShi 等[Journal ofControlled Release,89(2003),167-177]報道了利用W/0/W方法把牛血清白蛋白(BSA)和環(huán)孢霉素A(CyA)包封在PLGA/PLA殼-核微球里，該方法利用最常見的W/0/W復乳法來制備雙層微球，而該復乳法的油水界面是公認的蛋白殺手，容易導致水溶性的蛋白在該界面的聚集，同樣致使包封率不高，存在不完全釋放和突釋等缺陷。Morita T.等[Journal of Controlled Release,69(2000),435-444]用聚乙二醇PEG作為蛋白微粉化的賦形劑(即表面活性劑)，然后用水包油-油包固體的方法把蛋白微囊包在生物可降解的微球里，該文獻雖然利用新的S/0/W乳化法制備載蛋白微球，但只是改變了表面活性劑，將以前報道較多的聚乙烯醇PVA改為聚乙二醇PEG。但這種改變仍不能克服包封率低，及疏水性表面所引起的局部微囊化及炎癥的缺點。
發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種納米顆粒混懸液包油-油包油-油包水制備微球的方法，以解決現有技術中微球制劑包封率低、疏水性表面會引起局部微囊化及炎癥的缺點。本發(fā)明的技術方案如下一種納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水制備微球的方法，包括如下步驟(I)將藥物或藥物和藥用輔料制備成藥物水溶液，所述藥物在藥物水溶液中的重量百分比為0. 1% -90% ;較優(yōu)的為10% -50%，所述藥用輔料在藥物水溶液中的重量百分比為0% -20%，較優(yōu)的為5% -15% ;(2)將步驟⑴制備的藥物水溶液按照重量比為I : 1-10分散在濃度為0. 5% -80% (w/w)的聚合物有機溶液中形成均勻的混懸液，即油包水(W/0)乳液；較優(yōu)的，聚合物有機溶液的濃度為5% -30% (w/w)，分散方式可選擇乳化、渦旋或超聲等，分散時間較佳為1-5分鐘；(3)將步驟(2)形成的油包水(W/0)乳液加到親水油相中并乳化形成油包油-油包水(S/0/0)復乳，乳化方法可為攪拌、渦漩或超聲0. 1-5分鐘；(4)將步驟(3)形成的油包油-油包水(S/0/0)復乳加入到重量百分比濃度為I % -80%的納米顆?；鞈乙褐谢蚝?% -80% (w/w)納米顆粒和O. 5% -5% (w/w)表面活性劑的混懸液中乳化，形成納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水(W/0/0/S)復乳；其中納米顆粒濃度以20%-70% (w/w)為佳；加入方式可為滴加、一次性加入、噴霧方式加入或倒入等；乳化方式可選擇乳化、渦旋或超聲等，乳化時間為O. 1-5分鐘； (5)將所述納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水(W/0/0/S)復乳轉移到濃度為1% -10% (w/w)無機鹽溶液固化l_4h ;該無機鹽可選自氯化鈉、氯化鉀、硝酸鉀或碳酸鈉等，轉移方式可為滴加、一次性加入、噴霧方式加入或倒入等；(6)將步驟(5)所得樣品進行離心，收集微球，并洗滌所得微球，之后凍干，得到表面自組裝有納米顆粒的微球，通常洗滌時可采用水、乙醇或乙醇和水的混和液進行洗滌3-5次。較佳地，所述藥物包括小分子藥物和大分子藥物，所述小分子藥物為化學藥物，可 選自腫瘤化療類藥物或抗生素類藥物，其中腫瘤化療類藥物選自阿霉素、環(huán)磷酰胺、更生霉素、博萊霉素、柔紅霉素、表阿霉素、絲裂霉素、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、卡鉬、卡莫司汀(BCNU)、司莫司汀、順鉬、依托泊苷、喜樹堿及其衍生物、苯芥膽留醇、紫杉醇及其衍生物、多西紫杉醇及其衍生物、長春堿、長春新堿、它莫西芬、依托泊苷、哌泊舒凡、環(huán)磷酰胺或氟他胺及其衍生物，緩釋微球可載有上述藥物中的一種；抗生素類藥物選自環(huán)孢素、左氧氟沙星、氧氟沙星、或鹽酸依匹斯汀，緩釋微球可載有上述藥物中的一種；所述大分子藥物為生物大分子藥物；所述藥用輔料為注射用藥用輔料，尤其是小糖類(如蔗糖、海藻糖、葡萄糖、麥芽糖或乳糖等)、多羥基類化合物(如甘露醇、山梨醇、甘油、1，2_丙二醇、赤鮮糖醇、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚環(huán)氧乙烷或聚吡咯烷酮等)、多糖類化合物(如葡聚糖、海藻酸鈉、殼聚糖、淀粉、纖維素或環(huán)糊精物質等)、氨基酸化合物(如甘氨酸、賴氨酸、精氨酸、谷氨酸或組氨酸等)、或無機鹽類物質(如鋅鹽、鈣鹽、銅鹽、鎂鹽或鑰鹽等)的一種或任意組合。較佳地，所述生物大分子藥物選自蛋白大分子藥物、疫苗、抗體、核酸、或脂質體藥物中的一種或幾種，其中所述蛋白大分子藥物選自生長素、促紅細胞生成素(EPO)、重組人粒細胞集落刺激因子(G-CSF)、粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、疫苗、干擾素(IFN)、生長素(GH)、胰島素(Insulin)、表皮生長因子(EGF)、成纖維細胞生長因子(FGF)、轉化生長因子(TGF-β)、胰島素樣生長因子(IGF)、血管內皮細胞生長因子(VEGF)、血小板生長因子(TOGF)、內皮生長因子(EGF)、神經生長因子(NGF)、骨衍生性生長因子(BDGF)、骨形成蛋白(BMP)、組織多肽抗原(TPA)、抗體(antibody)、凝血因子VIII (VIII)或凝血因子IX遺傳因子等的一種或幾種；所述的核酸選自反義核苷酸(anti-RNA)、小分子RNA(RNAi)或基因(DNA)等的一種或幾種。較佳地,所述步驟(2)中,所述聚合物有機溶液中,聚合物選自聚己內酯(PCL)、聚乳酸(PLA)、聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)、聚乳酸-聚乙二醇(PLA-PEG)、聚羥基乙酸-聚乳酸-聚乙二醇(PLGA-PEG)和聚己內酯-聚乙二醇(PCL-PEG)中的一種或幾種，有機溶劑選自二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、庚烷、氯仿、或丙酮中的一種或幾種，其中以二氯甲烷、乙酸乙酯或乙腈中一種或幾種組合的有機溶液為佳；所述步驟(3)中，所述親水油相選自乙二醇、甘油和丙三醇中的一種或幾種，如果選擇它們的混合物，則可為任意混合比，其中親水油相與油包水(W/0)乳液的體積比較佳的為2-10 ；所述步驟(4)中，所述納米顆粒混懸液選自有機納米顆粒水混懸液、無機納米顆粒水混懸液或上述兩者的混合液；其中有機納米顆粒例如聚苯乙烯納米顆粒、交聯葡聚糖納米顆粒等，無機納米顆粒例如二氧化娃納米顆粒、二氧化鈦納米顆粒、輕基磷灰石納米顆粒、四氧化三鐵納米顆粒、三氧化二鐵顆粒、金納米顆粒、三氧化二招納米顆粒、碳酸韓納米顆粒、磷酸鈣納米顆粒、碳酸鎂納米顆粒、氫氧化鎂納米顆粒量子點、銀納米顆粒等，可選擇有機納米顆?；驘o機納米顆粒的一種或多種。較佳地，所述聚合物有機溶劑中還添加有O. 1-20% (w/w)聚乙二醇(PEG)或泊洛沙姆(po Ioxmer)。 較佳地,所述的步驟(4)中，所述表面活性劑選自聚乙烯醇PVA、聚乙二醇PEG、聚乙烯吡咯烷酮PVP、泊洛沙姆poloxmer、聚三梨醇、乙基纖維素EC、或吐溫的一種或幾種。一種納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水方法制備的微球，所述微球的粒徑為1-500 μ m，較佳地為10-100 μ m，其表面組裝有一層納米顆粒；其中所述微球中，藥物的重量百分比為O. 1% -40%，納米顆粒的重量百分比為9. 9% -96%，聚合物的重量百分比為90% -3. 65%，藥用輔料的重量百分比為0-30%。與現有技術相比，本發(fā)明的有益效果如下第一，本發(fā)明選擇了合適聚合物材料以及制備微球的W-O-O-S方法，避免用常規(guī)的W/0和W/0/W方法導致的包封率不高的缺陷，及S/0/0等方法制備的微球，由于表面疏水，容易導致體內組織微囊化及炎癥等副作用；第二，采用本發(fā)明方法制備微球，能在微球的表面自組裝一層納米顆粒，這種表面具有納米顆粒的微球具有增強細胞黏附的作用，可減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化；第三，本發(fā)明方法引入親水油相，可起到把有機溶劑萃取出來，而不形成油和水的界面的作用，從而起到保護藥物不在油水界面聚集，避免由此導致的變性失活和藥物的包封率降低。當然，實施本發(fā)明的任一產品并不一定需要同時達到以上所述的所有優(yōu)點。
圖I為本發(fā)明實施例一的例I所得微球的SEM照片；圖2為本發(fā)明實施例一的例I所得微球的體外釋放曲線；圖3為本發(fā)明實施例一的例I所得微球的抗菌作用效果曲線；圖4為本發(fā)明實施例一的例I所得微球的抗癌作用效果曲線；圖5為本發(fā)明實施例一的例I所得微球與W/0/W方法制備微球的體內組織相容性SEM照片；圖6為本發(fā)明實施例二的例I所得微球的SEM照片；圖7為本發(fā)明實施例二的例I所得微球的體外釋放曲線；
圖8為本發(fā)明實施例二的例I所得微球的藥效作用曲線；圖9為本發(fā)明實施例二的例I所得微球與W/0/W方法制備微球的體內組織相容性曲線；圖10為本發(fā)明實施例三的例I所得微球的體外釋放曲線；圖11為本發(fā)明實施例三的例I所得微球的藥效作用曲線；圖12為本發(fā)明實施例四的例I所得微球的藥效作用曲線；圖13為本發(fā)明實施例五的例I所得微球的藥效作用曲線；圖14為本發(fā)明實施例七所得微球的藥效作用曲線；圖15為本發(fā)明實施例八所得微球的藥效作用曲線。
具體實施例方式下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應該理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明，而不用于限定本發(fā)明的保護范圍。在實際應用中本領域技術人員根據本發(fā)明做出的改進和調整，仍屬于本發(fā)明的保護范圍。實施例一以阿霉素為例的小分子藥物微球例I :具有抗菌作用和抗癌效果的載有阿霉素水溶液的聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)微球的制備，包括如下步驟(I)取20mg阿霉素溶解到O. 5ml的水中形成藥物水溶液；(2)把上述藥物水溶液和百分比濃度為20%的PLGA的二氯甲烷溶液按照重量比I 9混合并超聲5分鐘形成均勻的混懸液，即油包水(W/0)乳液；(3)把步驟(2)所得油包水(W/0)乳液滴加到5ml親水油相乙二醇中并攪拌5分鐘形成油包油-油包水(W/0/0)復乳；(4)把步驟(3)所得油包油-油包水(W/0/0)復乳滴加到50ml重量百分比濃度為10%的銀納米顆粒混懸液中并攪拌5分鐘形成納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包固(W/0/0/S)復乳；(5)把步驟(4)所得的納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水(W/0/0/S)復乳滴加到濃度為5% (w/w)的IOOOml氯化鈉溶液固化2小時；(6)把步驟(5)所得樣品進行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有阿霉素水溶液的聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)微球。本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為O. 35%，納米顆粒的重量百分比為96%，聚合物的重量百分比為3. 65%，藥用輔料的重量百分比為0%。對本例制備的載有阿霉素水溶液的聚乳酸-羥基乙酸微球進行形貌表征、釋放曲線測試、抗菌測試、抗癌測試及在體內組織相容性測試，并將其抗菌性、抗癌性及相容性與w/0/w方法制備的微球進行對比，其中抗癌作用的測試條件為一次給藥，總劑量與對照組水溶液組每天一次的共15天的總劑量相同。相容性測試中，以微球注射部位出現纖維化的時間為標準計算時間。圖I-圖5分別依次列出了本例中載有阿霉素水溶液的聚乳酸-羥基乙酸微球的掃描電鏡圖、體外釋放曲線、抗菌作用曲線、抗癌作用曲線和相容性圖像。其中圖I中，A為微球的掃描電鏡圖，B為微球的表面放大圖,可以看出，本例所制備的微球形態(tài)好，其表面自組裝有一層銀納米顆粒，粒徑在10-500nm ;從圖2中可以看出，本例所制備的微球幾乎達到100 %的藥物釋放率，突釋非常小，幾乎沒有不完全釋放，基本可以達到零級釋放，其體外釋放性能符合要求。微球中阿霉素相對于其原始投加量的包封率為92.0% (計算方法為實際包封在微球的藥X 100% /投入的藥量=藥物的包封率)。從附圖3可以看出，本例所制備的微球的抗菌效果比對照組好；從附圖4可以看出，本例所制備的微球的抗癌作用效果比對照組好，約為100%，而對照組僅為80%。附圖5中可看到，W/0/W方法制備的微球(圖5A)在治療后的3-6個月出現纖維化組織；而本實施例納米顆粒混懸液的制備微球(圖5B)在治療一年后也沒有纖維組織的出現(即注射部位的微囊化不出現，從而克服了微囊化的產生)。以本實施例方法制備的小分子藥物微球可以用于需要長期治療的疾病，尤其是需要局部治療的疾病如腫瘤的血管栓塞微球等。這種方法制備的微球包封率高，最少可以達到80%以上，且這種表面具有納米顆粒的微球，由于表面親水性的材料與組織相容性比疏水性的材料好，具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。
例2 :具有抗菌作用和抗癌效果的載有阿霉素水溶液的聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)微球的制備本例2與例I的不同之處在于，步驟⑷中，將步驟(3)所得油包油-油包水(W/0/0)復乳滴加到含有10%的銀納米顆粒和1% (w/w)的PVA表面活性劑的混懸液中。 實施例二以生長素為例的大分子藥物微球例I :具有細胞黏附作用和促進生長或延緩衰老作用的載有生長素水溶液的聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)微球的制備，包括以下步驟(I) IOmg生長素溶解到O. 4ml的水中形成藥物水溶液；(2)把上述藥物水溶液和百分比濃度為10%的PLGA 二氯甲烷溶液按照重量比為I 9混合并超聲I分鐘形成均勻的混懸液，即油包水(W/0)乳液；(3)把步驟(2)所得油包水(W/0)乳液滴加到5ml親水油相乙二醇中并攪拌5分鐘形成油包油-油包水(w/0/0)復乳；(4)把步驟(3)所得油包油-油包水(W/0/0)復乳滴加到40ml重量百分比濃度為80%的羥基磷灰石納米顆?；鞈乙褐胁⒊昈. I分鐘形成納米顆粒混懸液包油-油包油-油包水(W/0/0/S)復乳；(5)把步驟⑷的納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水(W/0/0/S)復乳滴加到濃度為5% (w/w)的氯化鈉溶液固化3小時；(6)把步驟(5)所得樣品進行離心，收集微球，并用水洗滌5次，凍干后得到具有細胞黏附作用和促進生長或延緩衰老作用的載有生長素水溶液的聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)微球。本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為O. 17%，納米顆粒的重量百分比為84. 45%，聚合物的重量百分比為15. 17%，藥用輔料的重量百分比為0.21%。對本例制備的具有細胞黏附作用和促進生長或延緩衰老作用的載有生長素水溶液的聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)微球進行形貌表征、釋放曲線測試、藥效測試以及在體內組織相容性測試，并將其藥效、相容性與常規(guī)方法制備的微球進行對比，其中，藥效測試條件為一次給藥，總劑量與對照組水溶液組每天一次的共15天的總劑量相同。圖6-圖9分別依次列出了本例中微球的掃描電鏡圖、體外釋放曲線、藥效作用曲線和組織相容性曲線。其中，圖6中，A為微球的掃描電鏡圖，B為微球的表面放大圖，圖中可以看出，本例所制備的微球形態(tài)好，粒徑在10-200 μ m，其表面自組裝有一層羥基磷灰石納米顆粒；從圖7中可以看出，本例所制備的微球幾乎達到100%的藥物釋放率，突釋非常小，幾乎沒有不完全釋放，可以達到零級釋放(各條曲線代表不同PLGA材料制備的微球，可以調控藥物的不同釋放時間，其中各個PLGA分別為2A50/50，羥基乙酸乳酸=I I和分子量為20000-30000Da ;2A65/35，羥基乙酸乳酸=I I和羥基乙酸乳酸=O. 65 O. 35和分子量為20000-30000Da ;3A50/50，羥基乙酸乳酸=I I和分子量為30000_47000Da ；3A65/35，羥基乙酸乳酸=O. 65 O. 35和分子量為30000-47000Da)，其體外釋放性能符合要求。微球中生長素相對于其原始投加量的包封率為85. 62% (計算方式為實際包封在微球的藥X 100% /投入的藥量=藥物的包封率)。附圖8中，微球組為本實施例方法制備的微球，對照組為W/0/W方法制備的微球，空白組為不含藥物的微球，可以看出，使用本例所制備的微球，體重增加比對照組的體重增加快，藥效更好；從附圖9可以看出，本例所制備的微球的相容性比對照組的好，在治療期間，在動物組織內沒有出現注射部位的微囊化或纖維化。這種方法制備的微球包封率高最少可以達到80%以上，突釋非常小，幾乎沒有不完全釋放，基本可以達到零級釋放，同時由于納米顆粒在材料降解產生的酸可以與羥基磷灰石納米顆粒發(fā)生反應，而中和酸，以保證微球的內環(huán)境相對穩(wěn)定，可以使生物大分子藥物在整個制備過程和治療過程保持高活性即不失活。而且這種表面具有納米顆粒的生物大分子藥物微球，由于表面親水性的材料與組織相容性比疏水性的材料好，具有增強細胞黏附、 減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。例2 :具有細胞黏附作用和促進生長或延緩衰老作用的載有生長素水溶液的聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)的制備本例與例I的不同之處在于，步驟(4)中，將步驟(3)所得油包油-油包水(W/0/O)復乳滴加到含有10%羥基磷灰石納米顆粒和O. 5% (w/w) PVA表面活性劑的混懸液中。本實施例方法制備的生物大分子藥物微球可以用于需要頻繁注射給藥、長期治療的疾病，尤其是需要局部治療的疾病如腫瘤、各種病因引起的貧血、侏儒等重大疾病的治療。實施例三例I :具有抗菌作用和抗病毒效果的載有干擾素(IFN)水溶液的聚乳酸(PLA)微球的制備，包括如下步驟(I)將5mg干擾素和5mg葡聚糖溶解到O. 2ml的水中形成藥物水溶液；(2)把上述藥物水溶液和百分比濃度為15%的PLA的二氯甲烷溶液按照重量比為I 8混合并超聲I分鐘形成均勻的混懸液，即油包水(W/0)乳液；(3)把步驟(2)所得油包水(W/0)乳液滴加到5ml親水油相乙二醇和甘油混合液中(乙二醇甘油的體積比=3 2)并攪拌5分鐘形成油包油-油包水(W/0/0)復乳；(4)把步驟(3)所得油包油-油包水(W/0/0)復乳滴加到4ml重量百分比濃度為60%的二氧化鈦納米顆粒混懸液中并超聲2分鐘形成納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水(W/0/0/S)復乳；
(5)把步驟(4)的納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水(W/0/0/S)復乳滴加到濃度為10% (w/w)的IOOOml氯化鈉溶液固化I小時；(6)把步驟(5)所得樣品進行離心，收集微球，并用水洗滌4次，凍干后得到載有干擾素(IFN)水溶液的聚乳酸(PLA)微球。本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為O. 30%，納米顆粒的重量百分比為71.89%,聚合物的重量百分比為27. 45%，藥用輔料的重量百分比為O. 36%。對本例制備的微球進行形貌表征，結果顯示，制備的微球形態(tài)好，其表面自組裝一層二氧化鈦納米顆粒，粒徑在10-150 μ m ;微球中干擾素相對于其原始投加量的包封率為
84.45% (計算方法為實際包封在微球的藥X 100% /投入的藥量=藥物的包封率)。本例所制得的微球的體外釋放曲線如附圖10、藥效曲線如附圖11，圖10中可看出 幾乎零級的體外釋放曲線；圖11中，微球組為本實施例方法制備的微球，對照組為w/0/w方法制備的微球，可看出本實施例微球抗病毒和抗菌作用均好于對照組。這種方法制備的微球包封率高，最少可以達到80%以上，突釋非常小和幾乎沒有不完全釋放，可以達到零級釋放。由于納米顆粒在材料降解產生的酸可以與羥基磷灰石納米顆粒發(fā)生反應，而中和酸，以保證微球的內環(huán)境相對穩(wěn)定，同時可以使IFN藥物在整個制備過程和治療過程保持高活性即不失活。例2 :具有抗菌作用和抗病毒效果的載有干擾素(IFN)的聚乳酸(PLA)微球的制備本例與例I的不同之處在于，步驟⑵中，PLA的二氯甲烷溶液的濃度為10%，并且含有O. 1% (w/w)聚乙二醇；步驟⑷中，將步驟(3)所得油包油-油包水(W/0/0)復乳滴加到含50%的二氧化鈦納米顆粒和5% (w/w)的PVA表面活性劑的混懸液中。這種方法制備的IFN微球可以用于需要頻繁注射給藥、長期治療的疾病，如肝炎；可以減少注射的頻率和減輕病人的痛苦。實施例四例I :具有抗菌作用和治療貧血作用的載有促紅細胞生成素(EPO)水溶液的聚己內酯(PCL)微球的制備，包括如下步驟(I)將5mg EPO和5mg葡聚糖溶解到O. 2ml的水中形成藥物水溶液；(2)把上述藥物水溶液和百分比濃度為12%的PCL的二氯甲烷溶液按照重量比為I 9混合并超聲I分鐘形成均勻的混懸液，即油包水(W/0)乳液；(3)把步驟(2)所得油包水(W/0)乳液滴加到5ml親水油相丙二醇和甘油混合液中(丙二醇甘油的體積比=3 2)并攪拌5分鐘形成油包油-油包水(W/0/0)復乳；(4)把步驟(3)所得油包油-油包水(W/0/0)復乳滴加到5ml重量百分比濃度為60%的羥基磷灰石納米顆?；鞈乙褐胁嚢?分鐘形成納米顆粒混懸液包油-油包油-油包水(W/0/0/S)復乳；(5)把步驟⑷的納米顆粒混懸液包油-油包油-油包水(W/0/0/S)復乳滴加到濃度為1% (w/w)的IOOOml氯化鈉溶液固化4小時；(6)把步驟(5)所得樣品進行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到具有抗菌作用和治療貧血作用的載有促紅細胞生成素(EPO)水溶液的聚己內酯(PCL)微球。
本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為O. 70%，納米顆粒的重量百分比為44. 03 %，聚合物的重量百分比為54. 72 %，藥用輔料的重量百分比為O. 55 %。對本例制備的微球形貌表征，結果顯示，所制備微球形態(tài)好，其表面自組裝有一層羥基磷灰石納米顆粒，粒徑在50-120 μ m ;微球中EPO相對于其原始投加量的包封率為
85.26% (計算方法為實際包封在微球的藥X 100%/投入的藥量=藥物的包封率)，且實驗表明其體外釋放曲線也符合要求。本例制備的顆粒的藥效曲線見附圖12，由圖12可看出，本實施例制備的微球抗貧血效果和抗菌效果為70天，與普通的藥物顆粒70天相比，效果都非常好。這種方法制備的微球包封率高最少可以達到80%以上，突釋非常小和幾乎沒有不完全釋放，可以達到零級釋放。由于納米顆粒在材料降解產生的酸可以與羥基磷灰石納米顆粒發(fā)生反應，而中和酸，以保證微球的內環(huán)境相對穩(wěn)定，可以使EPO藥物在整個制備過程 和治療過程保持高活性即不失活。且這種具有納米顆粒表面的微球，由于表面親水性的材料與組織相容性比疏水性的材料好，具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。例2 :具有抗菌作用和治療貧血作用的載有促紅細胞生成素(EPO)水溶液的聚己內酯(PCL)微球的制備本例與例I的不同之處在于，步驟(2)中，PCL的二氯甲烷溶液的濃度為80%，并且含有20% (w/w)泊洛沙姆；步驟(4)中，將步驟(3)所得油包油-油包水(W/0/0)復乳滴加到含40%羥基磷灰石納米顆粒和5% (w/w)的PVA表面活性劑的混懸液中。本實施例方法制備的EPO微球可以用于需要頻繁注射給藥、長期治療各種原因引起的貧血如腫瘤治療引起的腎衰貧血；可以減少注射的頻率和減輕病人的痛苦。實施例五例I :具有抗菌作用和粒細胞增加作用的載有粒細胞集落刺激因子G-CSF水溶液的PLGA-PEG微球制備，包括以下步驟(I) 5mg G-CSF和5mg葡聚糖溶解到O. 2ml的水中形成藥物水溶液；(2)把上述藥物水溶液和百分比濃度為12%的PLGA-PEG的二氯甲烷溶液按照重量比為I : 9混合并超聲5分鐘形成均勻得混懸液，即油包水(W/0)乳液；(3)把步驟(2)所得油包水(W/0)乳液滴加到5ml親水油相乙二醇和丙二醇混合液中(乙二醇丙二醇的體積比=3 2)并渦漩I分鐘形成油包油-油包水(W/0/0)復乳；(4)把步驟(3)所得油包油-油包水(W/0/0)復乳滴加到Iml重量百分比濃度為60%的羥基磷灰石納米顆粒混懸液中并攪拌5分鐘形成納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水(W/0/0/S)復乳；(5)把步驟(4)所得納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水(W/0/0/S)復乳滴加到濃度為5% (w/w)的IOOOml氯化鈉溶液固化2小時；(6)把步驟(5)所得樣品進行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有粒細胞集落刺激因子G-CSF水溶液的PLGA-PEG微球。本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為O. 70%，納米顆粒的重量百分比為44. 03%，聚合物的重量百分比為54. 72%，藥用輔料的重量百分比為O. 55%。對本例制備的微球進行形貌表征，結果顯示，制備微球形態(tài)好，其表面自組裝有一層羥基磷灰石納米顆粒，粒徑在50-120 μ m ;微球中G-CSF相對于其原始投加量的包封率為93. 36% (計算方法為實際包封在微球的藥X 100%/投入的藥量=藥物的包封率)，且實驗表明其體外釋放曲線也符合要求。該例的藥效曲線如附圖13，其中微球組為本實施例方法制備的微球，對照組為W/ο/ff方法制備的微球，空白組為不含藥物的微球，圖中可以看出，本實施例微球的藥效明顯好于對照組。例2 :具有抗菌作用和粒細胞增加作用的載有粒細胞集落刺激因子G-CSF水溶液的PLGA-PEG微球制備本例與例I的不同之處在于， 步驟⑵中，PLGA-PEG的二氯甲烷溶液的濃度為15%，并且含有10% (w/w)泊洛沙姆；步驟(4)中，將步驟(3)所得油包油-油包水(W/0/0)復乳滴加到含20%羥基磷灰石納米顆粒和2% (w/w)的PVA表面活性劑的混懸液中。本實施例方法制備的G-CSF微球可以用于需要頻繁注射給藥、長期治療各種原因引起的白細胞減少癥；可以減少注射的頻率和減輕病人的痛苦。這種方法制備的微球包封率高，最少可以達到80%以上，突釋非常小和幾乎沒有不完全釋放，可以達到零級釋放。由于納米顆粒在材料降解產生的酸可以與羥基磷灰石納米顆粒發(fā)生反應，而中和酸，以保證微球的內環(huán)境相對穩(wěn)定，可以使EPO藥物在整個制備過程和治療過程保持高活性即不失活。且這種具有納米顆粒表面的微球，由于表面親水性的材料與組織相容性比疏水性的材料好，具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。實施例六例I :載有粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)水溶液的PLA-PEG微球的制備，包括如下步驟(I)將5mg GM-CSF和5mg葡聚糖溶解到O. 2ml的水中形成藥物水溶液；(2)把上述藥物水溶液和百分比濃度為12 %的PLA-PEG的二氯甲烷溶液按照重量比為I : 9比例渦旋3分鐘形成均勻的混懸液，即油包水(W/0)乳液；(3)把步驟(2)所得乳液滴加到5ml親水油相乙二醇和丙二醇混合液中(乙二醇丙二醇的體積比=3 2)并攪拌3分鐘形成油包油-油包水(W/0/0)復乳；(4)把步驟(3)的油包油-油包水(W/0/0)復乳滴加到4ml重量百分比濃度為60%羥基磷灰石納米顆?；鞈乙褐胁嚢?分鐘形成納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水(W/0/0/S)復乳；(5)把步驟(4)所得納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水(W/0/0/S)復乳滴加到濃度為3% (w/w)的IOOOml氯化鈉溶液固化3小時；(6)把步驟(5)所得樣品進行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)水溶液的PLA-PEG微球。本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為O. 60%，納米顆粒的重量百分比為44. 78 %，聚合物的重量百分比為53. 87 %，藥用輔料的重量百分比為O. 75 %。
對本例制備的微球進行形貌表征，結果顯示，制備微球形態(tài)好，表面自組裝一層羥基磷灰石納米顆粒，粒徑在20-150 μ m ;微球中GM-CSF相對于其原始投加量的包封率為89. 26%，且實驗表明其體外釋放曲線也符合要求。本實施例方法制備的GM-CSF微球可以適用于癌癥化療和在用骨髓抑制療法時所引起的白細胞減少癥，亦適用于治療骨髓衰竭患者的白細胞低下，也可預防白細胞減少時可能潛在的感染并發(fā)癥，還能使感染引起的中性粒細胞減少的恢復加快；可以減少注射的頻率和減輕病人的痛苦；這種方法制備的微球包封率高最少可以達到80%，突釋非常小和幾乎沒有不完全釋放，可以達到 零級釋放；由于納米顆粒在材料降解產生的酸可以與羥基磷灰石納米顆粒發(fā)生反應，而中和酸，以保證微球的內環(huán)境相對穩(wěn)定，可以使GM-CSF藥物在整個制備過程和治療過程保持高活性即不失活；由于表面親水性的材料與組織相容性比疏水性的材料好，且這種具有納米顆粒表面的微球具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。實施例七載有重組人生長素(GH)水溶液的PLA/PLGA殼-核微球的制備，包括如下步驟(I)將5mg GH和5mg葡聚糖溶解到O. 2ml的水中形成藥物水溶液；(2)把上述藥物水溶液和百分比濃度為12. 5%的PLGA的二氯甲烷溶液按照重量比為I : 4混合并攪拌2. 5分鐘，形成均勻的混懸液，再把PLA的有機溶液(I. 6ml，重量百分濃度12. 5% )加到上述混懸液中，再攪拌2分鐘形成均勻混懸液，即油包水(W/0)乳液；(3)把步驟(2)所得油包水(W/0)乳液滴加到5ml親水油相乙二醇中并超聲O. I分鐘形成油包油-油包水(w/0/0)復乳；(4)把步驟(3)的油包油-油包水(W/0/0)復乳滴加到2ml含60%羥基磷灰石納米顆粒和2% (w/w)的PVA表面活性劑的混懸液中并超聲O. 5分鐘形成納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水(W/0/0/S)復乳；(5)把步驟(4)所得納米顆粒混懸液包油-油包油-油包水(W/0/0/S)復乳滴加到濃度為5% (w/w)的IOOOml氯化鈉溶液固化2小時；(6)把步驟(5)所得樣品進行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有重組人生長激素(GH)水溶液的PLA/PLGA殼-核微球。本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為O. 90%，納米顆粒的重量百分比為
60.20 %，聚合物的重量百分比為39. 22 %，藥用輔料的重量百分比為O. 68 %。對本例制備的微球進行形貌表征，結果顯示，制備微球形態(tài)好，其表面自組裝有一層羥基磷灰石納米顆粒，粒徑在50-200 μ m ;微球中GH相對于其原始投加量的包封率為91.84% (計算方法為實際包封在微球的藥X 100%/投入的藥量=藥物的包封率)，且實驗表明其體外釋放曲線也符合要求。本實施例制備的重組人生長激素(GH)藥物水溶液PLA/PLGA殼-核微球藥效曲線如附圖14，其中微球組為本實施例方法制備的微球，對照組為W/0/W方法制備的微球，圖中可見，本實施例微球的藥效明顯好于對照組。本實施例方法制備的微球可以適用于兒童、成人生長激素缺乏癥，特納氏綜合癥，兒童慢性腎功能不全導致的生長障礙，手術、創(chuàng)傷后高代謝狀態(tài)(負氮平衡)，燒傷，膿毒敗血癥；可以減少注射的頻率和減輕病人的痛苦；同時表面自組裝有納米顆粒的微球，由于表面親水性的材料與組織相容性比疏水性的材料好，具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。實施例八載有血管內皮細胞生長因子(VEGF)水溶液的聚己內酯-聚乙二醇(PCL-PEG)微球的制備方法，包括如下步驟(I)將5mg VEGF和5mg葡聚糖溶解到O. 2ml的水中形成藥物水溶液；(2)把上述藥物水溶液和百分比濃度為12%的PCL-PEG的二氯甲烷溶液按照重量比為I : 9混合并超聲I. 5分鐘形成均勻混懸液，即油包水(W/0)乳液；(3)把步驟⑵所得油包水(W/0)乳液滴加到5ml親水油相乙二醇和甘油混合液中(乙二醇甘油的體積比=4 I)并攪拌5分鐘形成油包油-油包水(W/0/0)復乳；
(4)把步驟(3)的油包油-油包水(W/0/0)復乳滴加到Iml重量百分比濃度為60%羥基磷灰石納米顆?；鞈乙褐胁嚢?分鐘形成納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水(W/0/0/S)復乳；(5)把步驟(4)所得納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水(W/0/0/S)復乳滴加到濃度為5% (w/w)的IOOOml氯化鈉溶液固化2小時；(6)把步驟(5)所得樣品進行離心，收集微球，并用水洗滌5次，凍干后得到載有血管內皮細胞生長因子(VEGF)水溶液的聚己內酯-聚乙二醇(PCL-PEG)微球。本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為O. 69%，納米顆粒的重量百分比為51. 72%，聚合物的重量百分比為46. 99%，藥用輔料的重量百分比為O. 60%。對本例制備的微球進行形貌表征，結果顯示，本實施例制備的微球形態(tài)好，其表面自組裝有一層納米顆粒，粒徑在50-200 μ m ;微球中VEGF相對于其原始投加量的包封率為80. 23% (計算方法為實際包封在微球的藥X 100%/投入的藥量=藥物的包封率)，且實驗表明其體外釋放曲線也符合要求。本實施例制備的血管內皮細胞生長因子(VEGF)藥物溶液聚己內酯-聚乙二醇(PCL-PEG)微球藥效曲線如附圖15，其中微球組為本實施例方法制備的微球，對照組為W/Ο/ff方法制備的微球，圖15中可見，本實施例微球的藥用效果明顯好于對照組。這種方法制備的VEGF微球可以適用于用新生血管的形成治療促血管內皮細胞生長的療法，可以減少注射的頻率和減輕病人的痛苦；本方法制備的微球包封率高最少可以達到80%以上，突釋非常小和幾乎沒有不完全釋放，可以達到零級釋放。由于納米顆粒在材料降解產生的酸可以與羥基磷灰石納米顆粒發(fā)生反應，而中和酸，以保證微球的內環(huán)境相對穩(wěn)定，可以使VEGF藥物在整個制備過程和治療過程保持高活性即不失活。且這種表面自組裝有納米顆粒的微球，由于表面親水性的材料與組織相容性比疏水性的材料好，具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。實施例九載有血管內皮細胞生長因子(VEGF)水溶液的聚己內酯-聚乙二醇(PCL-PEG)微球的制備方法，包括如下步驟(I)將IOmg VEGF和40mg葡聚糖溶解到O. 2ml的水中形成藥物水溶液；(2)把上述藥物水溶液和百分比濃度為5%的PCL-PEG和10% (w/w)泊洛沙姆的二氯甲烷溶液按照重量比為I : I混合并超聲I. 5分鐘形成均勻混懸液，即油包水(W/0)乳液；(3)把步驟⑵所得油包水(W/0)乳液滴加到5ml親水油相乙二醇和甘油混合液中(乙二醇甘油的體積比=I 4)并渦漩2分鐘形成油包油-油包水(W/0/0)復乳；(4)把步驟(3)的油包油-油包水(W/0/0)復乳滴加到Iml重量百分比濃度為10%羥基磷灰石納米顆粒和O. 5% (w/w)的PVA表面活性劑混懸液中并攪拌5分鐘形成納米顆粒混懸液包油-油包油-油包水(W/0/0/S)復乳；(5)把步驟(4)所得納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水(W/0/0/S)復乳滴加到濃度為5% (w/w)的IOOOml氯化鈉溶液固化2小時；(6)把步驟(5)所得樣品進行離心，收集微球，并用水洗滌5次，凍干后得到載有血管內皮細胞生長因子(VEGF)水溶液的聚己內酯-聚乙二醇(PCL-PEG)微球。
本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為6. 15%，納米顆粒的重量百分比為
61.54%，聚合物的重量百分比為7. 69%，藥用輔料的重量百分比為24. 62%。對本例制備的微球進行形貌表征，結果顯示，本實施例制備的微球形態(tài)好，其表面自組裝有一層納米顆粒，粒徑在50-200 μ m ;微球中VEGF相對于其原始投加量的包封率為80% (計算方法為實際包封在微球的藥X 100% /投入的藥量=藥物的包封率)，且實驗表明其體外釋放曲線也符合要求。本實施例制備的血管內皮細胞生長因子(VEGF)藥物溶液聚己內酯-聚乙二醇(PCL-PEG)微球藥效曲線如附圖16，其中微球組為本實施例方法制備的微球，對照組為W/Ο/ff方法制備的微球，圖16中可見，本實施例微球的藥用效果明顯好于對照組。這種方法制備的VEGF微球可以適用于用新生血管的形成治療促血管內皮細胞生長的療法，可以減少注射的頻率和減輕病人的痛苦；本方法制備的微球包封率高最少可以達到80%以上，突釋非常小和幾乎沒有不完全釋放，可以達到零級釋放。由于納米顆粒在材料降解產生的酸可以與羥基磷灰石納米顆粒發(fā)生反應，而中和酸，以保證微球的內環(huán)境相對穩(wěn)定，可以使VEGF藥物在整個制備過程和治療過程保持高活性即不失活。且這種表面自組裝有納米顆粒的微球，由于表面親水性的材料與組織相容性比疏水性的材料好，具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。實施例十以阿霉素為例的小分子藥物微球具有抗菌作用和抗癌效果的載有阿霉素水溶液的聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)微球的制備，包括如下步驟(I)取450mg阿霉素溶解到O. 5ml的水中形成藥物水溶液；(2)把上述藥物水溶液和百分比濃度為20%的PLGA和20% (w/w)泊洛沙姆的二氯甲烷溶液按照重量比I : 10混合并超聲5分鐘形成均勻的混懸液，即油包水(W/0)乳液；(3)把步驟(2)所得油包水(W/0)乳液滴加到5ml親水油相乙二醇和甘油混合液中(乙二醇甘油的體積比=2 3)并超聲I分鐘形成油包油-油包水(W/0/0)復乳；(4)把步驟(3)所得油包油-油包水(W/0/0)復乳滴加到重量百分比濃度為10%的50ml銀納米顆粒和5% (w/w)的PVA表面活性劑混懸液中并攪拌5分鐘形成納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水(W/0/0/S)復乳；(5)把步驟(4)所得的納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水(W/0/0/S)復乳滴加到濃度為5% (w/w)的IOOOml氯化鈉溶液固化2小時；(6)把步驟(5)所得樣品進行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有阿霉素水溶液的聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)微球。本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為11. 34%，納米顆粒的重量百分比為60. 18%，聚合物的重量百分比為25. 32%，藥用輔料的重量百分比為3. 16%。對本例制備的微球進行形貌表征，結果顯示，本實施例制備的微球形態(tài)好，其表面自組裝有一層納米顆粒，粒徑在50-200 μ m;微球中阿霉素相對于其原始投加量的包封率為98. 90% (計算方法為實際包封在微球的藥X 100% /投入的藥量=藥物的包封率)，且實驗表明其體外釋放曲線也符合要求。以本實施例方法制備的小分子藥物微球可以用于需要長期治療的疾病，尤其是需要局部治療的疾病如腫瘤的血管栓塞微球等。這種方法制備的微球包封率高，最少可以達 到80%以上，且這種表面具有納米顆粒的微球，由于表面親水性的材料與組織相容性比疏水性的材料好，具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。實施例i^一具有抗菌作用和抗癌效果的載有阿霉素水溶液的聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)微球的制備，包括如下步驟(I)取O. 5mg阿霉素溶解到O. 5ml的水中形成藥物水溶液；(2)把上述藥物水溶液和百分比濃度為20%的PLGA和O. I % (w/w)聚乙二醇的二氯甲烷溶液按照重量比I : 9混合并超聲5分鐘形成均勻的混懸液，即油包水(W/0)乳液；(3)把步驟⑵所得油包水(W/0)乳液滴加到5ml親水油相乙二醇和甘油混合液中(乙二醇甘油的體積比=2 3)并超聲I分鐘形成油包油-油包水(W/0/0)復乳；(4)把步驟(3)所得油包油-油包水(W/0/0)復乳滴加到50ml重量百分比濃度為10%的銀納米顆?；鞈乙汉?% (w/w)的PVA表面活性劑中并攪拌5分鐘形成納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水(W/0/0/S)復乳；(5)把步驟(4)所得的納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水(W/0/0/S)復乳滴加到濃度為5% (w/w)的IOOOml氯化鈉溶液固化2小時；(6)把步驟(5)所得樣品進行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有阿霉素水溶液的聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)微球。本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為O. 01%，納米顆粒的重量百分比為35. 71%，聚合物的重量百分比為60. 12%，藥用輔料的重量百分比為4. 16%。對本例制備的微球進行形貌表征，結果顯示，本實施例制備的微球形態(tài)好，其表面自組裝有一層納米顆粒，粒徑在50-200 μ m;微球中阿霉素相對于其原始投加量的包封率為99. 90% (計算方法為實際包封在微球的藥X 100% /投入的藥量=藥物的包封率)，且實驗表明其體外釋放曲線也符合要求。以本實施例方法制備的小分子藥物微球可以用于需要長期治療的疾病，尤其是需要局部治療的疾病如腫瘤的血管栓塞微球等。這種方法制備的微球包封率高，最少可以達到80%以上，且這種表面具有納米顆粒的微球，由于表面親水性的材料與組織相容性比疏水性的材料好，具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。
實施例12具有抗菌作用和抗癌效果的載有阿霉素水溶液的聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)微球的制備，包括如下步驟(I)取O. Olmg阿霉素溶解到O. Iml的水中形成藥物水溶液；(2)把上述藥物水溶液和百分比濃度為10%的PLGA和O. I % (w/w)聚乙二醇的二氯甲烷溶液按照重量比I : 10混合并超聲5分鐘形成均勻的混懸液，即油包水(W/0)乳液；(3)把步驟⑵所得油包水(W/0)乳液滴加到5ml親水油相乙二醇和甘油混合液中(乙二醇甘油的體積比=2 3)并超聲I分鐘形成油包油-油包水(W/0/0)復乳；(4)把步驟(3)所得油包油-油包水(W/0/0)復乳滴加到重量百分比濃度為1%的O. Iml銀納米顆?；鞈乙汉?% (w/w)的PVA表面活性劑中并攪拌5分鐘形成納米顆粒 混懸液包油-油包油-油包水(W/0/0/S)復乳；(5)把步驟(4)所得的納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水(W/0/0/S)復乳滴加到濃度為5% (w/w)的IOOOml氯化鈉溶液固化2小時；(6)把步驟(5)所得樣品進行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有阿霉素水溶液的聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)微球。本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為O. 01%，納米顆粒的重量百分比為O. 01%，聚合物的重量百分比為99. 98%。以本實施例方法制備的小分子藥物微球可以用于需要長期治療的疾病，尤其是需要局部治療的疾病如腫瘤的血管栓塞微球等。這種方法制備的微球包封率高，最少可以達到80%以上，且這種表面具有納米顆粒的微球，由于表面親水性的材料與組織相容性比疏水性的材料好，具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。實施例13具有抗菌作用和抗癌效果的載有阿霉素水溶液的聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)微球的制備，包括如下步驟(I)取4mg阿霉素溶解到O. 2ml的水中形成藥物水溶液；(2)把上述藥物水溶液和百分比濃度為I %的PLGA和O. I % (w/w)聚乙二醇的二氯甲烷溶液按照重量比I : I混合并超聲5分鐘形成均勻的混懸液，即油包水(W/0)乳液；(3)把步驟(2)所得油包水(W/0)乳液滴加到5ml親水油相乙二醇和甘油混合液中(乙二醇甘油的體積比=2 3)并超聲I分鐘形成油包油-油包水(W/0/0)復乳；(4)把步驟(3)所得油包油-油包水(W/0/0)復乳滴加到重量百分比濃度為4%的O. Iml銀納米顆?；鞈乙汉?% (w/w)的PVA表面活性劑中并攪拌5分鐘形成納米顆粒混懸液包油-油包油-油包水(W/0/0/S)復乳；(5)把步驟(4)所得的納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水(W/0/0/S)復乳滴加到濃度為5% (w/w)的IOOOml氯化鈉溶液固化2小時；(6)把步驟(5)所得樣品進行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有阿霉素水溶液的聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)微球。本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為40 %，納米顆粒的重量百分比為40%，聚合物的重量百分比為20%。
以本實施例方法制備的小分子藥物微球可以用于需要長期治療的疾病，尤其是需要局部治療的疾病如腫瘤的血管栓塞微球等。這種方法制備的微球包封率高，最少可以達到80%以上，且這種表面具有納米顆粒的微球，由于表面親水性的材料與組織相容性比疏水性的材料好，具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。實施例14具有抗菌作用和抗癌效果的載有阿霉素水溶液的聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)微球的制備，包括如下步驟(I)取3mg阿霉素和3mg聚乙二醇溶解到O. 2ml的水中形成藥物水溶液；(2)把上述藥物水溶液和百分比濃度為I %的PLGA和O. I % (w/w)聚乙二醇的二氯甲烷溶液按照重量比I : I混合并超聲5分鐘形成均勻的混懸液，即油包水(W/0)乳液；(3)把步驟(2)所得油包水(W/0)乳液滴加到5ml親水油相乙二醇和甘油混合液 中(乙二醇甘油的體積比=2 3)并超聲I分鐘形成油包油-油包水(W/0/0)復乳；(4)把步驟(3)所得油包油-油包水(W/0/0)復乳滴加到O. Iml重量百分比濃度為2%的銀納米顆粒混懸液和2% (w/w)的PVA表面活性劑中并攪拌5分鐘形成納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水(W/0/0/S)復乳；(5)把步驟(4)所得的納米顆粒混懸液包油-油包油-油包水(W/0/0/S)復乳滴加到濃度為5% (w/w)的IOOOml氯化鈉溶液固化2小時；(6)把步驟(5)所得樣品進行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有阿霉素水溶液的聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)微球。本實施例中所得微球中，藥物的重量百分比為30%，納米顆粒的重量百分比為20%，聚合物的重量百分比為20%，藥用輔料為30%。以本實施例方法制備的小分子藥物微球可以用于需要長期治療的疾病，尤其是需要局部治療的疾病如腫瘤的血管栓塞微球等。這種方法制備的微球包封率高，最少可以達到80%以上，且這種表面具有納米顆粒的微球，由于表面親水性的材料與組織相容性比疏水性的材料好，具有增強細胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。
權利要求
1.一種納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水制備微球的方法，其特征在于，包括如下步驟 (1)將藥物或藥物和藥用輔料制備成藥物水溶液，所述藥物在藥物水溶液中的重量百分比為O. 1% -90%，藥用輔料在藥物水溶液中的重量百分比為0% -20% ; (2)將步驟(I)制備的藥物水溶液按照重量比為I: 1-10分散在濃度為O. 5% -80%(w/w)的聚合物有機溶液中形成均勻的混懸液，即油包水乳液； (3)將步驟(2)形成的油包水乳液加到親水油相中并乳化形成油包油-油包水復乳； (4)將步驟(3)形成的油包油-油包水復乳加入到重量百分比濃度為1%-80%的納米顆?；鞈乙褐谢蚝?% -80% (w/w)納米顆粒和O. 5% -5% (w/w)表面活性劑的混懸液中乳化，形成納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水復乳； (5)將所述納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水復乳轉移到濃度為1%-10% (w/w)無機鹽溶液固化l_4h ； (6)將步驟(5)所得樣品進行離心，收集微球，并洗滌所得微球，之后凍干，得到表面自組裝有納米顆粒的微球。
2.如權利要求I所述的納米顆粒混懸液包油-油包油-油包水制備微球的方法,其特征在于，所述藥物包括小分子藥物和大分子藥物，所述小分子藥物為化學藥物，所述大分子藥物為生物大分子藥物，所述藥用輔料為注射用藥用輔料。
3.如權利要求2所述的納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水制備微球的方法,其特征在于，所述生物大分子藥物選自蛋白大分子藥物、疫苗、抗體、核酸、或脂質體藥物中的一種或幾種。
4.如權利要求I所述的納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水制備微球的方法,其特征在于，所述步驟(2)的聚合物有機溶液中，聚合物選自聚己內酯、聚乳酸、聚乳酸-羥基乙酸、聚乳酸-聚乙二醇、聚羥基乙酸-聚乳酸-聚乙二醇或聚己內酯-聚乙二醇中的一種或幾種；有機溶劑選自二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、庚烷、氯仿、或丙酮中的一種或幾種； 所述步驟(3)中，所述親水油相選自乙二醇、甘油和丙三醇中的一種或幾種； 所述步驟(4)中，所述納米顆?；鞈乙哼x自有機納米顆粒水混懸液、無機納米顆粒水混懸液或上述兩者的混合液。
5.如權利要求I或4所述的納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水制備微球的方法，其特征在于，所述步驟(2)中，聚合物有機溶液的濃度為5%-30% (w/w);所述步驟(4)中，所述納米顆?；鞈乙旱臐舛葹?0% -70% (w/w)。
6.如權利要求I所述的納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水制備微球的方法，其特征在于，所述步驟(2)中，所述聚合物有機溶液中還添加有O. 1%-20% (w/w)聚乙二醇或泊洛沙姆。
7.如權利要求I所述的納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水制備微球的方法,其特征在于，所述步驟(4)中，所述表面活性劑選自聚乙烯醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆、聚三梨醇、乙基纖維素或吐溫的一種或幾種。
8.—種納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水制備方法制備的微球，其特征在于，所述微球的粒徑為1-500 μ m，其表面組裝有一層納米顆粒；其中 所述微球中，藥物的重量百分比為O. I % -40%,納米顆粒的重量百分比為·9.9% -96%，聚合物的重量百分比為90% -3. 65%，藥用輔料的重量百分比為0-30%。
9.如權利要求8所述的微球 ，其特征在于，所述微球的粒徑為10-200 μ m。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種制藥技術領域的納米顆?；鞈乙喊?油包油-油包水(W/O/O/S)制備微球的方法，該方法將藥物水溶液加到聚合物有機溶液中進行乳化，并將所得乳液加入親水油相攪拌混合，然后選擇納米顆?；鞈乙鹤霰砻婊钚詣┣?，最后在另一大水相中硬化，除去有機溶劑并收集微球。所制得的微球包括藥物、納米顆粒、聚合物和藥用輔料，它們的重量百分比含量分別為藥物0.1％-40％，納米顆粒9.9％-96％，聚合物90％-3.65％，藥用輔料為0-30％。本發(fā)明避免了用常規(guī)W/O，W/O/W，和S/O/O方法制備的微球引起的組織相容性問題，而且本發(fā)明方法制備的表面組裝有納米顆粒的微球具有增強細胞黏附的作用，可減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化，可以運用到各種藥物緩釋或控釋微球的制備及疾病的治療中。
文檔編號A61K47/38GK102895193SQ201210365210
公開日2013年1月30日 申請日期2012年9月26日 優(yōu)先權日2012年9月26日
發(fā)明者袁偉恩, 金拓, 吳飛, 洪曉蕓, 張奇昕, 徐建雄 申請人:上海交通大學